PSMC5, 19S પ્રોટોસોમલ એટીપીઝ, ન્યુક્લિયસ એક્ક્મ્બન્સમાં કોકેઈન એક્શનને નિયંત્રિત કરે છે (2015)

પ્લોસ વન. 2015 મે 11; 10 (5): e0126710. ડોઇ: 10.1371 / journal.pone.0126710. ઇકોલેક્શન 2015.

ઓહનીશી વાય1, ઓહનીશી વાય.એન.2, નાકુમુરા ટી3, ઓહનો એમ4, કેનેડી પીજે5, યાસુયુકી ઓ6, નિશી એ7, ક્યારેય8, સુઝુકી ટી4, નેસ્લેર ઇજે5.

અમૂર્ત

Osફોસબી એક સ્થિર ટ્રાંસ્ક્રિપ્શન પરિબળ છે જે ન્યુક્લિયસ એક્મ્બમ્બન્સ (એનએસી) માં સંચિત થાય છે, મગજના ઇનામ સર્કિટરીનો મુખ્ય ભાગ, કોકેઇન અથવા દુરુપયોગની અન્ય દવાઓના ક્રોનિક સંપર્કમાં જવા માટે. જ્યારે એફઓએસબી જૂન પરિવારના સભ્ય સાથે સક્રિય ટ્રાંસ્ક્રિપ્શન ફેક્ટર સંકુલ બનાવવા માટે વિશિષ્ટ રીતે જાણીતું છે, ત્યાં મગજમાં osફોસબી માટે અન્ય સંભવિત બંધનકર્તા ભાગીદારોની ખુલ્લી શોધખોળ થઈ નથી. અહીં, યીસ્ટ ટુ-હાઇબ્રિડ એસેઝના ઉપયોગ દ્વારા, અમે PSMC5 ને ઓળખીએ છીએ - જેને એસયુજી 1 તરીકે પણ ઓળખવામાં આવે છે, જે 19S પ્રોટીસોમલ કોમ્પ્લેક્સની એટીપીઝ ધરાવતી સબ્યુનિટ છે - osફોસબી સાથે પ્રોટીકનો સંપર્ક કરતી નવલકથા તરીકે. અમે એનએસીમાં એન્ડોજેનસ Δફોસબી અને પીએસએમસી 5 વચ્ચેની આવી ક્રિયાપ્રતિક્રિયાઓને ચકાસીએ છીએ અને દર્શાવે છે કે બંને પ્રોટીન જનીન સક્રિયકરણ સાથે સંકળાયેલ અન્ય ક્રોમેટિન રેગ્યુલેટરી પ્રોટીન સાથે સંકુલ પણ બનાવે છે. અમે બતાવવાનું ચાલુ રાખીએ છીએ કે ક્રોનિક કોકેન પરમાણુ વધે છે, પરંતુ સાયટોપ્લાસ્મિક નહીં, એનએસીમાં પીએસએમસી 5 નું સ્તર અને આ મગજના પ્રદેશમાં પીએસએમસી 5 નું વધુપડતું અભિવ્યક્તિ, કોકેઇન પ્રત્યેના લોકમોટર પ્રતિસાદને પ્રોત્સાહન આપે છે. એકસાથે, આ તારણો એક નવીન પદ્ધતિનો વર્ણન કરે છે જે Δ ફોસબીની ક્રિયાઓમાં ફાળો આપે છે અને, પ્રથમ વખત, પીએસએમસી 5 ને કોકેન-પ્રેરિત પરમાણુ અને વર્તણૂક પ્લાસ્ટિસિટીમાં ગર્ભિત કરે છે.

પ્રશસ્તિ: ઓહનીશી વાય, ઓહનીશી વાય, નાકુમુરા ટી, ઓહનો એમ, કેનેડી પીજે, યાસુયુકી ઓ, એટ અલ. (2015) PSMC5, 19S પ્રોટોસોમલ એટીપીઝ, ન્યુક્લિયસ એક્ક્મ્બન્સમાં કોકેઈન એક્શનને નિયંત્રિત કરે છે. PLOS એક 10 (5): E0126710. ડોઇ: 10.1371 / journal.pone.0126710

શૈક્ષણિક સંપાદક: જેમ્સ એડગર મેકક્યુચેન, યુનિવર્સિટી ઓફ લીસેસ્ટર, યુનાઈટેડ કિંગડમ

પ્રાપ્ત: ડિસેમ્બર 10, 2014; સ્વીકાર્યું: એપ્રિલ 7, 2015; પ્રકાશિત: 11 શકે છે, 2015

કૉપિરાઇટ: © 2015 Ohnishi એટ અલ. આની શરતો હેઠળ વિતરિત એક ખુલ્લી ઍક્સેસ લેખ છે ક્રિએટીવ કોમન્સ એટ્રિબ્યુશન લાયસન્સ, જે મૂળ લેખક અને સ્રોતને આપવામાં આવે છે, તે કોઈપણ માધ્યમમાં પ્રતિબંધિત ઉપયોગ, વિતરણ અને પ્રજનનની પરવાનગી આપે છે

ડેટા ઉપલબ્ધતા: બધા સંબંધિત ડેટા કાગળની અંદર છે.

ભંડોળ: આ કાર્યને નેશનલ ઇન્સ્ટિટયૂટ ઓફ હેલ્થ, નેશનલ ઇન્સ્ટિટયૂટ ઓન ડ્રગ એબ્યુઝ, અને ઈશિબાશી ફાઉન્ડેશન અને જાપાન સોસાયટી ફોર ધ પ્રમોશન ઓફ સાયન્સ (કાકેન્શી ક્રમાંક: 24591735, 26290064, 25116010) દ્વારા અનુદાન દ્વારા સમર્થિત હતું. અભ્યાસ ડિઝાઇન, ડેટા સંગ્રહ અને વિશ્લેષણ, પ્રકાશિત કરવાના નિર્ણય અથવા હસ્તપ્રતની તૈયારીમાં ફંડર્સની કોઈ ભૂમિકા નથી.

સ્પર્ધાત્મક હિતો: લેખકોએ જાહેર કર્યું છે કે કોઈ સ્પર્ધાત્મક હિતો અસ્તિત્વમાં નથી.

પરિચય

Δ FosB, એક કાપી નાંખ્યું ઉત્પાદન FOSB જનીન, ટ્રાન્સક્રિપ્શન પરિબળોના ફૉસ કુટુંબ સાથે સંકળાયેલ છે, જેમાં સી-ફોસ, પૂર્ણ-લંબાઈ FOSB, ફ્રે-એક્સ્યુએક્સએક્સ અને ફ્રે-એક્સ્યુએક્સએક્સનો પણ સમાવેશ થાય છે. OtherFOSB, અન્ય ફોસ પ્રોટીનની જેમ, સક્રિય કુટુંબ એપી-એક્સ્યુએનએક્સ (એક્ટિએટર પ્રોટીન-એક્સ્યુએનએક્સએક્સ) ટ્રાંસ્ક્રિપ્શન ફેક્ટર કૉમ્પ્લેક્સ બનાવવા માટે જૂન કુટુંબ પ્રોટીન-સી-જૂન, જૂનબ, અથવા જુનડ સાથે હેટરોડિમેરિઝ કરે છે, જે ચોક્કસ લક્ષિત જીનની અભિવ્યક્તિને પ્રેરિત કરે છે અથવા દબાવે છે [1,2].

Δએફએસબી ડ્રગની વ્યસનમાં મહત્ત્વની ભૂમિકા ભજવવાનું દર્શાવવામાં આવ્યું છે [2]. ફૉસ પારિવારિક પ્રોટીન વચ્ચે વિશિષ્ટ રીતે, તે ઉચ્ચ સ્તરની સ્થિરતાને લીધે ડ્રગ એડમિનિસ્ટ્રેશનને કારણે ન્યુક્લિયસ ઍક્યુમ્બન્સ (એનએસી) અને અન્ય પુરસ્કાર-સંબંધિત મગજ પ્રદેશોમાં સંચયિત થાય છે [3,4], જે સી-ટર્મિનલ ડિગ્રૉન ડોમેન્સની ગેરહાજરીમાં મધ્યસ્થી થાય છે અને કેટલાક પ્રોટીન કિનેસ દ્વારા ફોસ્ફોરીલેશન દ્વારા મધ્યસ્થી થાય છે [5-7]. એનએસી મધ્યસ્થીમાં ΔFOSB ના આ પ્રકારના ઇન્ડક્શનથી દુરુપયોગની દવાઓ પર વર્તણૂકલક્ષી પ્રતિભાવો વધારો થયો છે. આમ, પુખ્ત પ્રાણીઓના આ મગજના પ્રદેશમાં ΔFosB નું ઑવરએક્સપ્રેસન, કાં તો વાયરલ વેક્ટર અથવા ઇન્સ્યુસિબલ બીટ્ર્રેજેજેનિક ઉંદરનો ઉપયોગ કરીને, પ્રાણીઓની સંવેદનશીલતાને લોકેમોટર-સક્રિયકરણ અને કોકેન અને અફીણના લાભદાયી અસરો તેમજ સ્વ સંચાલકને પ્રોત્સાહિત કરવા માટેના પ્રાણીની સંવેદનશીલતા વધારે છે. કોકેન [7-11]. તેનાથી વિપરીત, ΔFosB ના પ્રભાવશાળી નેગેટિવ એન્ટિગોનિસ્ટ્સનું ઓવરવેરક્સિપશન વિપરીત વર્તણૂંક ફેનોટાઇપ્સનું કારણ બને છે [10-12].

અમે અને અન્ય લોકોએ અગાઉ જેલ શિફ્ટ એસેઝનો ઉપયોગ કરીને પુષ્ટિ કરી છે, કે જુન અને સંભવતઃ અન્ય જૂન કુટુંબ પ્રોટીન મગજમાં ΔFOSB ના મુખ્ય બંધનકર્તા ભાગીદાર છે. [13-15]. જો કે, આજે, મગજમાં ΔFOSB ના બંધનકર્તા ભાગીદારોનું ઓપન-એન્ડેડ, નિષ્પક્ષ મૂલ્યાંકન કરવામાં આવ્યું નથી. અહીં, અમે yeફોસબી માટે યીસ્ટ બે-હાઇબ્રિડ અૅસના ઉપયોગ દ્વારા નવલકથા બંધનકર્તા ભાગીદારોને ઓળખવાની માંગ કરી [16,17]. અમારા ડેટા પરથી જાણવા મળ્યું છે કે, PSGXXX, જેને SUG5 તરીકે પણ ઓળખાય છે, તે બંને ઇન વિટ્રો અને વિવૉમાં એનએસીમાં ΔFOSB નો એક મજબૂત ભાગીદાર છે, જ્યાં તે કોકેઇન પ્રેરિત ટ્રાંસ્ક્રિપ્શન સક્રિયકરણ સંકુલના ભાગરૂપે ΔFOSB માં જોડાય છે, જેમાં સીબીપી (CREB બાઇન્ડિંગ પ્રોટીન ) અને P1- બંને હિસ્ટોન એસિટિટ્રાન્સફેરેસિસ (એચએટીએસ) - તેમજ BRG300 (ક્રોમેટીન રિમોડેલિંગ પ્રોટીન). અમે બતાવવાનું ચાલુ રાખીએ છીએ કે કોકેનનું ક્રોનિક એક્સ્પોઝર એનએસીમાં એક્સએમએક્સએક્સએસ પ્રોટીસોમલ કૉમ્પ્લેક્સનું એટીએપીએસ ધરાવતું સબ્યુનિટ, PSMC1 ના પરમાણુ સ્તરોને બદલી દે છે અને તે પીએસએમએક્સએક્સએક્સએક્સ બદલામાં કોકેઈનને વર્તણૂકલક્ષી પ્રતિસાદોને નિયંત્રિત કરે છે.

સામગ્રી અને પદ્ધતિઓ

યીસ્ટ બે હાઇબ્રિડ સ્ક્રીનીંગ

MaV203 યીસ્ટ કોષો (ઇન્વિટ્રોજન લાઇફ ટેક્નોલોજિસ) પીડીબીએલયુ દ્વારા ΔFosB પ્રોટીનના વિવિધ ટુકડાઓ ચલાવવા સાથે સહ-સંક્રમિત કરવામાં આવી હતી, અને માઉસ મગજ લાઇબ્રેરી પી.પી.સી.એક્સ.ટી.એક્સ.એક્સએક્સ (ઇન્વિટ્રોજન લાઇફ ટેક્નોલૉજીસ) માં છૂટી પડી હતી. રૂપાંતરિત કોશિકાઓ એસસી-માધ્યમમાં લ્યુસીન, ટ્રિપ્ટોફાન અને હિસ્ટિડિનની અભાવમાં ઉગાડવામાં આવી હતી, અને 86-aminotriazole 10 એમએમ ધરાવતી હતી. ફોસબી ટુકડાઓ અને ઉમેદવાર ભાગીદાર વચ્ચે બંધનકર્તા ત્રણ રિપોર્ટર જનીનોને પ્રેરિત કરે છે (His3, યુરેએક્સએનએમએક્સ, અને લેસઝેડ), અને ઇન્ડક્શનથી ઉપયોગમાં લેવાતી સંસ્કારી સ્થિતિઓ હેઠળ ટકી રહેવા માટે ટ્રાન્સફોર્મન્ટ્સને સક્ષમ બનાવે છે. પોઝિટિવ ક્લોન્સને તાજી પીડીબીએલયુ-Δફોસબી ટુકડાઓથી ફરીથી મૅકવેક્સ્યુએક્સ સેલ્સમાં પુનઃસંપાદનની સહાય દ્વારા ફરીથી કરવામાં આવ્યા હતા.

સેલ રેખાઓ

માઉસ ન્યુરો 2 એ ન્યુરોબ્લાસ્ટોમા સેલ્સ (એટીસીસી) ની જાળવણી ઇગલના લઘુત્તમ આવશ્યક માધ્યમ (ઇએમઇએમ) (એટીસીસી) માં કરવામાં આવી હતી, જે 10% ડિગ્રી સેલ્સિયસ અને 37% ગર્ભના બોવાઇન સીરમ (એફબીએસ) સાથે પૂરક છે.2. રાત 1A કોષો Yusaku Nakabeppu (ફુકુકા, જાપાન) ના ભેટ હતા [18] અને ડુલબેકોના એમઇએમ (ડીએમઇએમ) (લાઇફ ટેક્નોલોજિસ) માં જાળવી રાખ્યું છે, 10% FBS સાથે 37 ° C અને 5% CO પર પૂરક2. પ્લાઝિમિડ ડીએનએ સાથે કોશિકાઓના ચેપને ઉત્પાદકની સૂચનાઓ અનુસાર અસરકારક (કિયાજેન) નો ઉપયોગ કરીને પરિપૂર્ણ કરવામાં આવી હતી.

PSMC5 અને Δ FOSB રચનાઓ

PSMC5 ના કેટલાક મ્યુટન્ટ સ્વરૂપો, તેમના એન-ટર્મિનસ પર દરેક ફ્લેગ-ટૅગ કરેલા, ઇમ્યુનોપ્રાયઇરે અથવા વાયરલ-મધ્યસ્થ જીન સ્થાનાંતરણ પ્રયોગો માટે ઉપયોગમાં લેવાય છે. આમાં શામેલ છે: PSMC5-K196M, PSMC5-Δcoiled-coil ડોમેન (PSMC5-ΔCC, એમિનો એસિડ 27-68 ની અભાવ), પીએસએમએક્સએક્સએક્સએક્સ-એનટી (પ્રોટીનનું એન-ટર્મિનલ ફ્રેગમેન્ટ, એમિનો એસિડ 5-1) અને PSMC151 -સીટી (પ્રોટીનની સી-ટર્મિનલ ટુકડો, 5 એમિનો એસિડ્સ ધરાવે છે) (જુઓ ફિગ 1). અમે તેના લ્યુસિન-ઝિપર ડોમેનમાં પરિવર્તન સાથે વ wildનટાઇપ Δફોસબી તેમજ એનફોર્મB એમ-સી-ટ tagગ કરેલા સ્વરૂપોનો ઉપયોગ કર્યો (એમિનો એસિડ્સનું પરિવર્તન 182 થી 205 જે જૂન કુટુંબના પ્રોટીનથી વિજાતીયતાને નાબૂદ કરવા માટે જાણીતું છે [6].

થંબનેલ
ફિગ 1. Vit ફોસબી ઇન વિટ્રોમાં PSMC5 સાથે જોડાય છે.

 

એ. Osફોસબી, Δફોસબી-એલઝેડએમની યોજનાકીય જેમાં લ્યુસિન ઝિપર ડોમેનને જુન પ્રોટીન સાથે Δફોસબી હેટરોોડાઇમરાઇઝેશનને કાΔી નાખવા માટે પરિવર્તિત કરવામાં આવે છે, અને Δ2ΔFosB જેમાં osફોસ એન-ટર્મિનસના પ્રથમ 78 એમિનો એસિડનો અભાવ છે. બી. સ્કેમેટિક, PSMC5-NT જેમાં PSMC5 ના પ્રથમ 151 એમિનો એસિડનો સમાવેશ થાય છે, PSMC5-CT જેમાં PSMC5 ના પ્રથમ 235 એમિનો એસિડનો સમાવેશ નથી, અને PSMC5-ΔCC જેમાં કોઇલ-કોઇલ ડોમેન (એમિનો એસિડ્સ 5-28) નો અભાવ છે. . એએએ ડોમેન ઘણા બધા એટીપીસમાં હાજર, વિવિધ સેલ્યુલર પ્રવૃત્તિઓ સાથે સંકળાયેલ, એટીપીસ, પ્રેરકને અનુરૂપ છે. સીસી 68 UMg of pcDNA2.4-osFosB (લેન 3.1 – 1) અથવા osFosB-LZM (લેન 4) એ 5 Fg FLAG- ટેગવાળા PSMC2.4 અથવા વિવિધ ડિલીશન મ્યુટન્ટ્સને ન્યૂરોએક્સએક્સએક્સએક્સમાં સહ-ટ્રાન્સફેક્ટ કર્યું હતું. રક્તસ્રાવના બે દિવસ પછી, કોષોને એન્ટી-એફએલએજી એન્ટિબોડી સાથે લ્યુઝ કરવામાં આવ્યા હતા અને રોગપ્રતિકારક શક્તિનો શિકાર બનાવવામાં આવ્યા હતા અને તે પછી એન્ટિ-osફોસબી અથવા એન્ટી-એફએલજી એન્ટીબોડીથી પશ્ચિમી ડાઘ ધારણ કરવામાં આવ્યા હતા. નોંધ લો કે osફોસબી, પરંતુ osફોસબી-એલઝેડએમ, PSMC5 અથવા PSMC2-NT ને મજબૂત રીતે જોડે છે, પરંતુ PSMC5-CT અથવા PSMC5-ΔCC ને નથી. આકૃતિમાં બતાવેલ ડેટા ત્રણ અલગ અલગ પ્રયોગોમાંથી દરેકમાં ત્રિપુટીમાં નકલ કરવામાં આવી.

ડોઇ: 10.1371 / journal.pone.0126710.g001

પ્રાણીઓ

નવ થી 11- અઠવાડિયા જૂનાં C57BL / 6J પુરુષ ઉંદર (જેક્સન લેબોરેટરી) નો ઉપયોગ બધા પ્રયોગો માટે કરવામાં આવ્યો હતો. પ્રાણીઓને 12-h પ્રકાશ-ઘેરા ચક્ર પર ખોરાક અને પાણીની withક્સેસ સાથે રાખવામાં આવ્યા હતા જાહેરાત જાહેરાત અને 1 અઠવાડિયા પ્રયોગના પહેલા હતા. બે કોકેઇન ટ્રીટમેન્ટ રેઝમિનનો ઉપયોગ કરવામાં આવ્યો હતો. કોકેનની બાયોકેમિકલ અસરોનો અભ્યાસ કરવા માટે, પ્રાણીઓને દરરોજ 7 કોકેન (20 મિલિગ્રામ / કિગ્રા) અથવા ખારા આપવામાં આવ્યા હતા, અને છેલ્લા ઈન્જેક્શન પછી શિરચ્છેદ 24 કલાક દ્વારા માર્યા ગયા હતા. આ એક સ્ટાન્ડર્ડ પ્રોટોકોલ છે, જે દવાની અસંખ્ય પરમાણુ અને સેલ્યુલર પ્રતિક્રિયાઓ દર્શાવતો બતાવવામાં આવ્યો છે [7]. ન્યુક્લિયસમાં પીએસએમસીએક્સએનયુએમએક્સના પ્રભાવનો અભ્યાસ કરવા માટે, કોકેન પ્રત્યેના વર્તણૂકીય પ્રતિભાવો પર આધાર રાખે છે, અમે ડ્રગની સબથેરહોલ્ડ ડોઝનો ઉપયોગ કર્યો હતો (5 મિલિગ્રામ / કિલો; નીચે લોકોમોટર સંવેદના જુઓ) કે PSMC7.5, animal ફોસબી જેવા પ્રાણીની સંવેદનશીલતામાં વધારો કરે છે. કોકેન [8]. બધા પશુ પ્રયોગોને સિનાઈ પર્વત ખાતેની સંસ્થાકીય પશુ સંભાળ અને ઉપયોગ સમિતિ દ્વારા મંજૂરી આપવામાં આવી હતી.

રોગપ્રતિકારક શક્તિ અને વેસ્ટર્ન બ્લtingટિંગ

ન્યુરો 2A કોષો વાઇલ્ડ ટાઇપ અથવા PSMC5 ના મ્યુટન્ટ સ્વરૂપો સાથે સંક્રમિત થયા હતા. સંક્રમણ પછી બે દિવસ, પી.બી.એસ.માં કોશિકાઓ ધોવાઈ હતી, આરઆઇપીએ બફર (50 એમએમ ટ્રીસ પીએચ 7.4, 150 એમએમ NaCl, 1 એમએમ ઇડીટીએ, 1% એનપી-એક્સ્યુએનએક્સ, 40% સોડિયમ ડિક્સિકોલેટ, 0.25 એમએમ સોડિયમ બ્યુટેરેટ, પ્રોટીઝ ઇન્હિબિટર કોકટેલ) . XYUMX split C પર 10 કલાક માટે લાઇસેટ્સને વિભાજિત કરવામાં આવી હતી અને ક્યાં તો નોનિમ્યુન આઇજીજી (સિગ્મા) અથવા એન્ટી-એફએલજી એન્ટિબોડીઝ (સિગ્મા) સાથે સેંકવામાં આવી હતી. વર્ણવેલ પ્રમાણે પ્રોટીન જી મણકા (ઇન્વિટ્રોજન) સાથે ઇમ્યુનોપ્રિસીપિટેશન કરવામાં આવ્યું હતું [19]. સંક્ષિપ્તમાં, ઇમ્યુનોપ્રિસીપેટેડ પ્રોટીનને એસડીએસ-પેજને આધિન કરવામાં આવ્યા હતા અને પ્રકાશિત પ્રોટોકોલ્સ પર આધારિત એન્ટી-ફોસબી / osફોસબી એન્ટીબોડી (સેલ સિગ્નલિંગ ટેકનોલોજી) નો ઉપયોગ કરીને પશ્ચિમી બ્લ blટિંગ દ્વારા વિશ્લેષણ કરવામાં આવ્યું હતું [7]. વિવો પ્રોટીન બંધનકર્તા સહાય માટે, અમે ક્રોનિક કોકેન ટ્રીટમેન્ટ પછી ઉંદરના પંચ-ડિસેક્ટેડ એનએસીમાંથી શુદ્ધ અણુ અપૂર્ણાંકનો ઉપયોગ કર્યો (છેલ્લાં ઇંજેક્શન પછી ઉંદરનો ઉપયોગ 20 કલાક પછી 7 દિવસ માટે 24 મિલિગ્રામ / કિલો આઈપી). ઉત્પાદકની સૂચનાને અનુસરીને ન્યુક્લિયર કોમ્પ્લેક્સ કો-આઇપી કીટ (એક્ટિવ મોટિફ) નો ઉપયોગ કરીને પરમાણુ અપૂર્ણાંકથી સહ-ઇમ્યુનોપ્રિસિપેશન કરવામાં આવ્યું હતું. નીચે આપેલા એન્ટિબોડીઝનો ઉપયોગ કરવામાં આવ્યો હતો: એમવાયસી અથવા ß-એક્ટિન, સેલ સિગ્નલિંગ ટેક્નોલ (જી (ડેનવર્સ, એમએ), પીએસએમસીએક્સએનએમએક્સ અને હિસ્ટોન એચએક્સએનએમએક્સ, અબકામ (કેમ્બ્રિજ, એમએ), સીબીપી, પીએક્સએનયુએમએક્સ અને બીઆરજીએક્સયુએનએમએક્સ, સાન્ટા ક્રુઝ બાયોટેકનોલોજી (સાન્ટા ક્રુઝ, સીએ) અને ફ્લેગ એમએક્સએનએમએક્સ, સિગ્મા.

ઇમ્યુનોહિસ્ટોકેમિસ્ટ્રી

ઇમ્યુનોહિસ્ટોકેમિસ્ટ્રી પ્રકાશિત પ્રક્રિયાઓ અનુસાર કરવામાં આવી [20]. ઉંદરોને એનેસ્થેથીટીઝ કરવામાં આવ્યો હતો અને પીબીએસમાં 4% પેરાફોર્મફિલ્ડિહાઇડ સાથે ઇન્ટ્રાકાર્ડિઆલીય રીતે પરફેઝ કરવામાં આવ્યું હતું. મગજ 30% સુક્રોઝથી ક્રિઓપ્રોટેક્ટેડ હતો, અને પછી સ્થિર અને ઉપયોગ થાય ત્યાં સુધી -80 ° C પર સંગ્રહિત. કોરોનલ વિભાગો (40 μm) એક ક્રિઓસ્ટાટ પર કાપવામાં આવ્યા હતા અને ઇમ્યુનોહિસ્ટોકેમિસ્ટ્રી માટે પ્રક્રિયા કરવામાં આવી હતી. ફ્રી-ફ્લોટિંગ વિભાગો 0.3% ટ્રાઇટોન અને 3% નોર્મલ ગધેડો સીરમ ધરાવતા બ્લોકીંગ બફરમાં પૂર્વ-ઇન્ક્યુબેટેડ હતા. પ્રોટીનના એન-ટર્મિનલ ભાગ (1 / 1000 સાન્ટા ક્રુઝ બાયોટેકનોલોજી) ની સામે ઉછરેલા બકરીના બહુકોણ એન્ટિબોડીનો ઉપયોગ કરીને Δફોસબીની શોધ કરવામાં આવી. PSMC5 એ સસલાના બહુકોણ એન્ટિબોડી (1 / 100 Abcam, કેમ્બ્રિજ, એમએ) નો ઉપયોગ કરીને શોધી કા .્યું હતું. છબીઓ એક કોન્ફોકલ માઇક્રોસ્કોપ (60x વિસ્તૃતિકરણ; ઝીસ) સાથે લેવામાં આવી હતી.

લોકમોટર સંવેદનશીલતા

ઇન્જેક્શનના તણાવમાં રહેવા માટે, બધા ઉંદરોને 3 દિવસ માટે દરરોજ ખારાના આઇ.પી. બીજા દિવસે, ઉંદરને ખારા અથવા કોકેઇનની સબટ્રેસહોલ્ડ ડોઝ (7.5 મિલિગ્રામ / કિગ્રા; ઉપરના પ્રાણીઓ હેઠળ જુઓ) સાથે આઇ.પી. ઇન્જેક્ટ કરવામાં આવ્યા હતા અને તાત્કાલિક નવલકથાના લોકમોટર બ intoક્સમાં મૂકવામાં આવ્યા હતા. 30 મિનિટ માટે એમ્બ્યુલરી બીમ તૂટી જતા ઉંદરની લોકોમોટર પ્રવૃત્તિ ફોટોબેમ સિસ્ટમનો ઉપયોગ કરીને રેકોર્ડ કરવામાં આવી હતી. 3 દિવસો માટે આ ઉપચાર દરરોજ પુનરાવર્તિત કરવામાં આવે છે.

વાયરલ-મધ્યસ્થ જીન ટ્રાન્સફર

અમે વાયરલ-મધ્યસ્થ જીન ટ્રાન્સફર માટે વ્યાપક પ્રકાશિત પદ્ધતિઓનો ઉપયોગ કર્યો [7,8,11,19]. સંક્ષિપ્તમાં, પીએસએમસીએક્સએનએમએક્સ અથવા તેના કેટલાક મ્યુટન્ટ્સ (ઉપરના પીએસએમસીએક્સએનએમએક્સ અને osફોસબી કન્સ્ટ્રક્શન્સ જુઓ) માટે અભિવ્યક્તિ પ્લાઝમિડ્સ, સીએમવી પ્રમોટરના નિયંત્રણ હેઠળ જીએફપી વ્યક્ત કરતી એચએસવી પ્લાઝમિડ, અને પીએસએમસીએક્સએનએમએક્સ અથવા તેના મ્યુટન્ટ્સ હેઠળ IE5 / 5 પ્રમોટર. કેટામાઇન (1005 મિલિગ્રામ / કિગ્રા) / ઝાયલાઝિન (5 મિલિગ્રામ / કિલો) એનેસ્થેસિયા હેઠળ, ઉંદર નાના પ્રાણીના સ્ટીરિઓટેક્સિક ઇન્સ્ટ્રુમેન્ટમાં સ્થિત હતા, અને ક્રેનિયલ સપાટી ખુલ્લી પડી હતી. 4 °l / મિનિટના દરે 5 ° કોણ (એપી + 100; એમએલ + 10; ડીવી-એક્સએનએમએક્સ) પર એનએસીમાં એચએસવી વેક્ટરના 0.5 μlને દ્વિપક્ષીય રીતે રેડવાની માટે ત્રીસ ગેજ સિરીંજ સોયનો ઉપયોગ કરવામાં આવ્યો હતો. એચએસવી ઇન્જેક્શન પ્રાપ્ત કરનારા પ્રાણીઓને પ્રયોગ પહેલાં શસ્ત્રક્રિયા પછીના 10 દિવસો સુધી પુન recoverપ્રાપ્ત કરવાની મંજૂરી આપવામાં આવી હતી.

આંકડા

એનોવા અને વિદ્યાર્થીની ટી-પરીક્ષણોનો ઉપયોગ, બહુવિધ તુલના માટે સુધારવામાં આવ્યો હતો, જેનું મહત્વ પી <0.05 પર રાખવામાં આવ્યું છે.

પરિણામો

પીએસએમએક્સએક્સએક્સએક્સ: ΔFOSB નો નવલકથા બંધનકર્તા ભાગીદાર

અમે સિસ્ટમને સ્વચાલિત કર્યા વિના ye ફોસબીના યોગ્ય ટુકડાને ઓળખવા માટે પ્રારંભિક પ્રયોગો કર્યા હતા જેણે યીસ્ટ ટુ-હાઇબ્રિડ એસેમાં બાઈટ તરીકે સેવા આપી હતી. હોલો-Δફોસબી પ્રેરિત રિપોર્ટર જનીન પ્રવૃત્તિ જાતે કરે છે, જેમ કે પ્રોટીનના એન-ટર્મિનલ 1 – 78 એમિનો એસિડ ટુકડા. જો કે, એન-ટર્મિનલ કાપાયેલ - ફોસબી (ફિગ 1A), Δ2ΔFosB તરીકે ઓળખાય છે, જેમાં પ્રોટીનના પ્રથમ 78 એમિનો એસિડનો અભાવ છે, આ અસર કરી નથી. તેથી, અમે બાઈટ પ્રોટીન તરીકે N2ΔFosB નો ઉપયોગ કર્યો.

સંભવિત બંધનકર્તા ભાગીદારોને તપાસવા માટે, અમે pPC86 માં સબક્લોન થયેલ માઉસ બ્રેઇન લાઇબ્રેરીનો ઉપયોગ કર્યો. બંધનકર્તા ભાગીદારો માટે અમે 11 ઉમેદવારોની ઓળખ કરી. જોકે આ પ્રોટીનમાં Δફોસબીના જાણીતા હેટરોોડિમેરાઇઝેશન ભાગીદારો, સી-જૂન અને જુનડ શામેલ છે (કોષ્ટક 1), અત્યાર સુધીનો સૌથી પ્રચલિત ઉમેદવાર PSMC5 હતો. આશ્ચર્યજનક હોવા છતાં, આ એક રસપ્રદ શોધ હતી, કારણ કે પી.એસ.એમ.સી.એક્સ.એન.એમ.એક્સ.ને વિટ્રોમાં સી-ફોસ સાથે જોડવા માટે વર્ષો પહેલા એક જ અહેવાલમાં બતાવવામાં આવ્યું હતું [21]. જો કે, કોકેનની કાર્યવાહીમાં પીએસએમસીએક્સએનએમએક્સના સમાવિષ્ટના કોઈ અગાઉના અહેવાલો નથી. તેમ છતાં, આથોના બે-વર્ણસંકર ખંડમાં PSMC5 સિગ્નલની મજબૂતાઈને કારણે, અમે શક્ય Δફોસબી-પીએસએમસીએક્સએમએએમએક્સ ક્રિયાપ્રતિક્રિયાઓનો વધુ અભ્યાસ કરવાનું નક્કી કર્યું.

થંબનેલ
કોષ્ટક 1. Δ2ΔFosB સાથે યીસ્ટ ટુ-હાઇબ્રિડ સ્ક્રિનિંગનાં પરિણામો.

ડોઇ: 10.1371 / journal.pone.0126710.t001

પ્રથમ, os ફોસબી અને પીએસએમસીએક્સએમયુએમએક્સ વચ્ચે શારીરિક ક્રિયાપ્રતિક્રિયાની પુષ્ટિ કરવા માટે, અમે વિટ્રો સહ-પ્રતિરક્ષા પ્રયોગોમાં પ્રદર્શન કર્યું. અમે જોયું કે ફ્લેગ-ટ -ગ કરેલા PSMC5 (ફિગ 1B), ન્યૂરો 2A કોષોમાં સ્થાનાંતરિત, અસરકારક રીતે નીચે ખેંચીને - ફોસબી (ફિગ 1C). બીજું, PSMC5 માં તે ક્ષેત્રને ઓળખવા માટે કે જે તેને osફોસબી પર બંધનકર્તા બનાવવા માટે જવાબદાર છે, અમે ઘણાં FLAG- ટેગવાળા PSMC5 મ્યુટન્ટ્સ બનાવ્યાં છે (ફિગ 1B) અને સહ-પ્રતિરક્ષા પ્રયોગનું પુનરાવર્તન કર્યું. PS PSMC151 (PSMC5-NT) ના એન-ટર્મિનલ 5 એમિનો એસિડ્સથી ફોસબીને અસરકારક રીતે નીચે ખેંચવામાં આવ્યું, પરંતુ સી-ટર્મિનલ 172 એમિનો એસિડ ફ્રેગમેન્ટ (PSMC5-CT) સાથે નહીં (ફિગ 1C). PSMC5 તેના કોઇલ કોઇલ ડોમેન (PSMC5-ΔCC) નો અભાવ પણ ipફોસબીને અવક્ષેપિત કરવામાં બિનઅસરકારક હતો. આ તારણો સૂચવે છે કે PSMC5 તેના કોઇલ-કોઇલ ડોમેન (એમિનો એસિડ્સ 27 – 68) દ્વારા -FosB ને જોડે છે. તદુપરાંત, ફ્લેગ-ટ tagગ કરેલા PSMC5 એ પરિવર્તિત લ્યુસીન ઝિપર ડોમેન (os ફોસબી-એલઝેડએમ) સાથે Δફોસબીના પરિવર્તનીય સ્વરૂપને આગળ ધપાવી શક્યું નથી.ફિગ 1C), જે સૂચવે છે કે osફોસબી કાં તો આ ડોમેન દ્વારા પીએસએમસીએક્સએનએમએક્સને જોડે છે અથવા, સંભવત, કે પીએસએમસીએક્સએનએમએક્સ બંધનકર્તા માટે osફોસબી હેટરોડિમેરાઇઝેશન આવશ્યક છે.

ક્રોનિક કોકેન વહીવટ પછી એનએસીમાં PSMC5-osFosB બંધનકર્તા

વિટ્રોના આ તારણોના આધારે, અમે અભ્યાસ કર્યો કે ક્રોનિક કોકેન વહીવટની પ્રતિક્રિયામાં એનએસીમાં પીએસએમસીએક્સએનએમએક્સ સ્તર બદલાયા છે કે કેમ. અમને સબસેલ્યુલર અપૂર્ણાંક અને પશ્ચિમી બ્લોટિંગ દ્વારા જાણવા મળ્યું છે કે ક્રોનિક કોકેન આ મગજના પ્રદેશમાં પી.એસ.એમ.સી.એક્સ.એન.એમ.એક્સ.ના પરમાણુ સ્તરમાં સાયટોપ્લાઝમિક સ્તરોમાં ફેરફાર કર્યા વિના વધારે છે (ફિગ 2A). આ અસર કોકેઇનના એક ડોઝ પછી જોવા મળી ન હતી (ડેટા બતાવેલ નથી). અમે પછી કોન્ફોકલ ઇમ્યુનોફ્લોરોસેન્સ માઇક્રોસ્કોપી દ્વારા એનએસીમાં પીએસએમસીએક્સએનએમએક્સ અને Δફોસબીના સ્થાનિકીકરણની તપાસ કરી. કોકેનની છેલ્લી પુનરાવર્તિત માત્રા પછી અમે ઉંદરના 5 કલાકનું વિશ્લેષણ કર્યું, તે સમય બિંદુ જ્યારે osફોસબી એકમાત્ર શોધી શકાય તેવું છે FOSB જીન પ્રોડક્ટ (નેસ્ટલર 2008 જુઓ). અમને એનએસીમાં એક મજબૂત પરમાણુ સંકેત સહિત મજબૂત PSMC5 રોગપ્રતિકારક શક્તિ મળી. PS PSMC85 (osફોસબી + ન્યુક્લી) ના 5% સહ-સ્ટેઇન્ડ (ફિગ 2B). આ ઉપરાંત, અમે એનએએસીના અર્ક પર સહ-ઇમ્યુનોપ્રિસીપિટેશન પ્રયોગો કર્યા અને શોધી કા that્યું કે, ક્રોનિક કોકેઇન સારવાર પછી, PS ફોસબીને એન્ટી-પીએસએમસીએક્સએનએમએક્સ એન્ટીબોડી દ્વારા અસરકારક રીતે નીચે ખેંચી લેવામાં આવ્યા હતા (ફિગ 2C). તેનાથી વિપરિત, ડ્રગ-નિષ્કપટ એનએસી (વારંવાર ક્ષારના ઇન્જેક્શન પછી) ના વિશ્લેષણમાં કોઈ શોધી શકાય તેવું osફોસબી પુલ ડાઉન (ડેટા બતાવેલ નથી) બહાર આવ્યું. આ ડેટા સેલ સંસ્કૃતિના અમારા તારણો સાથે સુસંગત છે અને પુષ્ટિ કરે છે કે vફોસબી અને PSMC5 વિવોમાં એનએસીમાં ક્રિયાપ્રતિક્રિયા કરે છે.

થંબનેલ
ફિગ 2. માઉસ એનએસી માં PSMC5 નિયમન.

 

એ. ઉંદરના એનએસીના ન્યુક્લિયર અને સાયટોસોલિક અપૂર્ણાંકનું પશ્ચિમી બ્લોટીંગ, દરરોજ ખારા અથવા કોકેઇન (20 મિલિગ્રામ / કિગ્રા) સાથે 7 દિવસ સુધી સારવાર આપવામાં આવે છે, પ્રાણીઓના છેલ્લા ઇન્જેક્શન પછી 24 કલાક પછી વિશ્લેષણ કરવામાં આવે છે. કોકેઇન પીએસએમસી 5 ના પરમાણુ પરંતુ સાયટોસોલિક સ્તરમાં વધારો કરે છે. હિસ્ટોન એચ 3 અને ß-inક્ટિન, જે કોકેઇનથી પ્રભાવિત નહોતા, લોડિંગ કંટ્રોલ તરીકે ઉપયોગમાં લેવાય છે. ડેટા સરેરાશ ± SEM (n = 8–10 / જૂથ, * પી <0.05) છે. બી. ઉંદરોની એનએસીમાં એન્ડોજેનસ પીએસએમસી 5 (ગ્રીન) અને osફોસબી (વાદળી) નું સહ-સ્થાનિકીકરણ, માઉસના એનસી ન્યુક્લિયર લાઇસેટ્સ પછી ક્રોનિક કોકેન સારવાર પછી એન્ટી-પીએસએમસી 5 એન્ટીબોડી અથવા માઉસ આઇજીજીને નિયંત્રણ હેઠળ રોગપ્રતિકારક શક્તિનો વિષય બન્યો હતો. , અને તે પછી એન્ટી-ફોસબી / osફોસબી એન્ટીબોડીથી પશ્ચિમી બ્લોટેડ. આકૃતિ વિવોમાં એનએસીમાં PSMC5-osFosB ક્રિયાપ્રતિક્રિયા દર્શાવે છે. બી અને સીમાં ડેટા ત્રણ અલગ અલગ પ્રયોગોમાંથી દરેકમાં ત્રિપુટીમાં નકલ કરવામાં આવ્યા હતા.

ડોઇ: 10.1371 / journal.pone.0126710.g002

PSMC5 વિટ્રોમાં FOSB અભિવ્યક્તિને વધારે છે

PSMC5 એ પ્રોટીઝોમ સંકુલના જાણીતા સભ્ય છે, તેથી અમે પરીક્ષણ કર્યું છે કે તે રેટ 1A કોષોનો ઉપયોગ કરીને Δફોસબી સ્તરને નિયંત્રિત કરે છે કે કેમ. પીએસએમસીએક્સએનએમએક્સએક્સ ઓવરએક્સપ્રેસન Δ ફોસબીના મૂળભૂત સ્તર પર કોઈ અસર કરી નથી, પરંતુ કોષોના સીરમ ઉત્તેજના પર ફોસબ ઇન્ડક્શનના નાના પરંતુ નોંધપાત્ર વૃદ્ધિને લીધે છે (ફિગ 3A). સંપૂર્ણ લંબાઈના એફઓએસબી માટે સમાન વલણ જોવામાં આવ્યું હતું પરંતુ અસર આંકડાકીય મહત્વ પ્રાપ્ત કરી શકી નથી. તેનાથી વિપરીત, રેટ રેટ 5A કોષોમાં અંતર્જાત પીએસએમસીએક્સએનએમએક્સ અભિવ્યક્તિનું દમન, પીએસએમસીએક્સએનએમએક્સને લક્ષ્ય આપતા સીઆઈઆરએનએના ઉપયોગ દ્વારા પ્રાપ્ત, બેસલ Δફોસબી સ્તરને અસર કરતું નથી, પરંતુ સીરમ સ્ટીમ્યુલેશન દ્વારા ફોસબ ઇન્ડક્શનને ભારપૂર્વક અટકાવે છે (ફિગ 3B). સમાન અસરો પૂર્ણ લંબાઈના FosB માટે જોવા મળી હતી. આ ડેટા સૂચવે છે કે પીએસએમસીએક્સએનએમએક્સએક્સ os ફોસબીના પ્રોટિસોમmalલ અધોગતિને પ્રોત્સાહન આપતું નથી, જેમ કે પ્રોટીસોમના મુખ્ય સબ્યુનિટ તરીકે અપેક્ષા કરી શકાય, પરંતુ તેનાથી મહત્તમ સંચય માટે જરૂરી છે. FOSB વિટ્રોમાં જનીન ઉત્પાદનો, કદાચ પ્રોટીનને સ્થિર કરીને.

થંબનેલ
ફિગ 3. ર Ratટ 5A કોષોમાં ફોસબી / osફોસબી અભિવ્યક્તિનું PSMC1 નિયમન.

 

A. ઉંદર 1A કોષોને PSMC4 ના 5 μg અથવા નિયંત્રણ ડીએનએ સાથે સંક્રમિત કરવામાં આવ્યા હતા. પશ્ચિમ બ્લોટિંગ દ્વારા નક્કી કરવામાં આવેલા ફોસબી અથવા osફોસબી પ્રોટીનના બેસલ અભિવ્યક્તિના સ્તરો પર પીએસએમસી 5 ઓવરએક્સપ્રેશનની કોઈ અસર નહોતી, પરંતુ સીરમ સ્ટીમ્યુલેશન (એફ (2,21) = 9.75, પી = 0.001) દ્વારા os ફોસબીના ઇન્ડક્શનમાં એક નાનો પણ નોંધપાત્ર વધારો થયો છે. બી. ઉંદર 1 એ કોષોને બે સીઆરએનએ અથવા સ્ક્રbledમ્બલડ આરએનએ (નિયંત્રણ) માંથી 5 ના સાંજે 5 વારા સાથે સ્થાનાંતરિત કરવામાં આવ્યા હતા. નિયંત્રણની પરિસ્થિતિઓની તુલનામાં બંને સીઆરએનએ અસરકારક રીતે પીએસએમસી 1 પ્રોટીન સ્તરમાં ઘટાડો કર્યો છે (સીઆરએનએ # 23, 5 control 2% નિયંત્રણ; સીઆરએનએ # 18, 6 ± 0.05%; પી <4; એન = 5). PSMC2,6 નોકડાઉનનો FosB અથવા ΔFosB ના બેસલ સ્તર પર કોઈ અસર નહોતી પણ સીરમ સ્ટીમ્યુલેશન (FosB: F (20.99) = 0.002, p = 2,6; FosB: F (22.83) = 0.002) બંનેના FosB અને ΔFosB ના સમાવેશને સંતુલિત કરી. , પી = XNUMX).

ડોઇ: 10.1371 / journal.pone.0126710.g003

NAફોસબી અને PSMC5 એનએસીમાં સીબીપી, પીએક્સએનયુએમએક્સ, અને બીઆરજીએક્સએનએમએક્સ સાથે સંકુલ બનાવે છે.

ટ્રાંસક્રિપ્શનલ મિકેનિઝમ્સને સારી રીતે સમજવા માટે કે જેના દ્વારા PSMC5 Δ ફોસબ ફંક્શનને પ્રભાવિત કરી શકે છે, અમે ક્રોનિક કોકેન-સારવારની સ્થિતિમાં એનએસીમાં બે પ્રોટીન માટે શક્ય વધારાના બંધનકર્તા ભાગીદારોની તપાસ કરી. એક અહેવાલ છે કે પીએસએમસીએક્સએન્યુએમએક્સ સીબીપી to એએચએટી to સાથે જોડાય છે અને હેલા સેલ્સમાં એમએચસી-II પ્રોક્સિમલ પ્રમોટર પર હિસ્ટોન એચએક્સએનએમએક્સ એસીટીલેશન વધે છે [22]. તદુપરાંત, સીબીપીની ઉણપવાળા ઉંદરો, કોકેન પ્રત્યેની વર્તણૂકની સંવેદનશીલતા તેમજ હિસ્ટોન એસીટીલેશનમાં ઘટાડો દર્શાવે છે. FOSB પ્રમોટર [23]. અમે આમ પરીક્ષણ કર્યું છે કે પીએસએમસીએક્સએનએમએક્સએક્સ સંકુલના ભાગ રૂપે Δ ફોસબી સાથે બાંધી શકે છે કે જેમાં સીબીપી અને કદાચ અન્ય ટ્રાંસ્ક્રિપ્શનલ એક્ટિવેટર્સ પણ છે.

અમે પ્રથમ દર્શાવ્યું કે Δફોસબીએ ન્યુરોએક્સએન્યુએમએક્સએ સેલ્સમાં સીબીપી અને પીએક્સએનયુએમએક્સ, સંબંધિત એચએટી બંનેને અસરકારક રીતે નીચે ખેંચી લીધાં છે (ફિગ 4A). તેનાથી વિપરિત, expectedફોસબીનું લ્યુસિન ઝિપર મ્યુટન્ટ ફોર્મ, જેમ કે અપેક્ષા છે, આ પ્રવૃત્તિ પ્રદર્શિત કરતું નથી. એ જ રીતે, PSMC5 એ સીબીપી અને પીએક્સએનયુએમએક્સને અસરકારક રીતે નીચે ખેંચ્યું (ફિગ 4B). રસપ્રદ વાત એ છે કે, આ અસર PSMC5-ΔCC માટે પણ જોવા મળી હતી, જેણે Δફોસબીને નીચે ખેંચ્યું ન હતું, જે સૂચવે છે કે PSMC5 પ્રોટીનના અન્ય ડોમેન્સ દ્વારા સીબીપી અને પીએક્સએનયુએમએક્સ સાથે સંપર્ક કરે છે અને સ્વતંત્ર રીતે os ફોસબી સાથે તેના બંધનકર્તા છે.

થંબનેલ
ફિગ 4. Osફોસબી અને PSMC5 વિટ્રોમાં અને વીવોમાં સીબીપી, પીએક્સએનએમએક્સ, અને બીઆરજીએક્સએનયુએમએક્સ સાથે ક્રિયાપ્રતિક્રિયા કરે છે.

 

એ. ન્યુરોએક્સએનયુએમએક્સએ કોષો, એમવાયસી-ટ tagગ કરેલા osફોસબી અથવા એમવાયસી-ટgedગ કરેલા -ફોસબી-એલઝેડએમના 2 μg સાથે સ્થાનાંતરિત થયા હતા. સેલના અર્કને એન્ટિ-સીબીપી અથવા એન્ટી-પીએક્સએનયુએમએક્સ એન્ટિબોડીથી પ્રતિરક્ષા આપવામાં આવી હતી, અને તે જ એન્ટિબોડીથી અથવા એન્ટી-એમવાયસી એન્ટિબોડીથી અવલોકન કરાયું હતું. સીબીપી અને પીએક્સએનયુએમએક્સ બંને os ફોસબી સાથે ક્રિયાપ્રતિક્રિયા કરે છે અને આવી ક્રિયાપ્રતિક્રિયાઓને અખંડ લ્યુસીન ઝિપરની જરૂર હોય છે. બી. ન્યુરોએક્સએનયુએમએક્સએ કોષો ફ્લGગ-ટ .ગ કરેલા પીએસએમસીએક્સએનએમએક્સ અથવા FLAG- ટGગ કરેલા PSMC2.4-ΔCC ના 300 μg સાથે સ્થાનાંતરિત થયા હતા. સેલના અર્કને એન્ટિ-સીબીપી અથવા એન્ટી-પીએક્સએનયુએમએક્સ એન્ટિબોડીથી પ્રતિરક્ષા આપવામાં આવી હતી, અને પૂર્વ એ જ એન્ટિબોડીથી અથવા એન્ટી-ફ્લેગ એન્ટિબોડીથી વેસ્ટર્ન બ્લ blટેડ હતા. સીબીપી અને પીએક્સએનએમએક્સ બંને PSMC300 સાથે ક્રિયાપ્રતિક્રિયા કરે છે અને આવી ક્રિયાપ્રતિક્રિયાઓને સીસી ડોમેનની જરૂર હોતી નથી. સી. ક્રોનિક કોકિનની સારવાર પછી માઉસ એનએસીના ન્યુક્લિયર લિસીટ્સને એન્ટિ-સીબીપી અથવા એન્ટી-પીએક્સએનયુએમએક્સ એન્ટીબોડી સાથે પ્રતિરક્ષા આપવામાં આવી હતી. પરિણામી વેસ્ટર્ન બ્લોટિંગ એન્ટી-ફોસબી / ΔFOSB એંટિબોડી સાથેના ઉપદ્રવને કારણે એફઓએસબી અને સીબીપી / પીએક્સNUMએક્સ વચ્ચે અંતર્ગત ક્રિયાપ્રતિક્રિયાઓ દર્શાવે છે. ડી. સમાન ન્યુક્લિયર લાઇસેટ્સના એલિકotsટ્સને એન્ટી-બીઆરજીએક્સએનયુએમએક્સ અથવા એન્ટી-પીએસએમસીએક્સએમએનએમએક્સ એન્ટિબોડી સાથે પ્રતિરક્ષા આપવામાં આવી હતી, ત્યારબાદ એન્ટિ-ફોસબી / osફોસબી અથવા એન્ટી-બીઆરજીએક્સએનએમએક્સ એન્ટિબોડી સાથે પશ્ચિમના બ્લોટીંગ દ્વારા. પરિણામો osફોસબી અને બીઆરજીએક્સએનએમએક્સ, અને બીઆરજીએક્સએનયુએમએક્સ અને પીએસએમસીએક્સએમયુએમએક્સ વચ્ચે અંતર્ગત આંતરક્રિયાઓ બતાવે છે. ઇ. ટ્રાન્સક્રિપ્શનલ એક્ટિવેશન કોમ્પ્લેક્સનું યોજનાકીય ચિત્ર - ફોસબી દ્વારા બનેલું: સીબીપી / પીએક્સએનએમએક્સ, બીઆરજીએક્સએનએમએક્સ, અને પીએસએમસીએક્સએમયુએમએક્સ સાથે ક્રિયાપ્રતિક્રિયા કરનાર જુનડી હેટરોડિમિર્સ.

ડોઇ: 10.1371 / journal.pone.0126710.g004

વિવોમાં પણ આ ક્રિયાપ્રતિક્રિયાઓ થાય છે તેની પુષ્ટિ કરવા માટે, અમે Δફોસબી અને અણુ PSMC5 સ્તરને પ્રેરિત કરવા માટે ક્રોનિક ધોરણે કોકેઇન વહીવટ કર્યું, પછી એન્ટિ-સીબીપી અથવા એન્ટિ-પીએક્સએનયુએમએક્સ એન્ટિબોડીઝ સાથે ઇમ્યુનપ્રોસિપ્ટિએટેડ એનએએસી અર્ક. અમારા સેલ સંસ્કૃતિ ડેટા સાથે સુસંગત, સીબીપી અથવા પીએક્સએનયુએમએક્સની પ્રતિરક્ષાને અસરકારક રીતે નીચે ખેંચી - ફોસબી (ફિગ 4C). બીઆરજીએક્સએનએમએક્સએક્સ, એસડબ્લ્યુઆઈ-એસએનએફ ક્રોમેટિન રિમોડેલિંગ કોમ્પ્લેક્સના મુખ્ય સબૂનિટ, કે જેઓ ક્રોનિક કોકેન પછી એનએસીમાં તેમની સક્રિયતા સાથે જોડાણમાં બીઆરજીએક્સએનએમએક્સ ચોક્કસ Δફોસબી લક્ષ્ય જનીનોમાં ભરતી થાય છે તેના આધારે, અમે અગાઉના શોધના આધારે, પરીક્ષણ કર્યું છે કે કેમ તેની તપાસ કરી [24]. અમે જોયું કે બીઆરજીએક્સએનયુએમએક્સની ઇમ્યુનોપ્રીપિટેશનએ એનએસી અર્કમાં osફોસબીને નીચે ખેંચ્યું છે, અને પીએસએમસીએક્સએમયુએમએક્સની ઇમ્યુનોપ્રિસિપેશન એ જ રીતે કોન્ટ્રેસિપિટેટેડ એન્ડોજેનસ બીઆરજીએક્સએનએમએક્સ (ફિગ 4D). સાથે મળીને, આ પરિણામો સૂચવે છે કે એનએસીમાં ફોસબી-પીએસએમસીએક્સયુનએમએક્સ સંકુલ બનાવે છે જેમાં સીબીપી / પીએક્સએનએમએક્સ અને બીઆરજીએક્સયુએનએમએક્સ પણ શામેલ છે (ફિગ 4E).

પીએસએમસીએક્સએનએમએક્સએક્સ ઓવરએક્સપ્રેસન, કોકેનમાં લોકમોટર પ્રતિસાદમાં વધારો કરે છે

એનએસીમાં પીએસએમસીએક્સએનયુએમએક્સના UMફોસબી સાથેના અગ્રણી બંધનકર્તા અમને મગજના આ ક્ષેત્રમાં પીએસએમસીએક્સએનએમએક્સનું સ્તર વધારીને કોકેઇન પ્રત્યેના વર્તણૂકીય પ્રતિભાવોને નિયંત્રિત કરે છે કે કેમ તેની તપાસ કરવા પૂછવામાં. અમે હર્પીસ સિમ્પ્લેક્સ વાયરસ (એચએસવી) વેક્ટર બનાવ્યું છે જે કાં તો વાઇલ્ડટાઇપ પીએસએમસીએક્સએનએમએક્સ અથવા તેના મ્યુટન્ટ્સને વધારે પડતું અસર કરે છે અને વીવોમાં એનએસીમાં વેક્ટરને માન્ય કર્યું છે (ફિગ 5A). PSMC5 ની વાઈરલ-મધ્યસ્થી અભિવ્યક્તિ સેલ ન્યુક્લિયસમાં પ્રબળ છે (ફિગ 5B). ઉંદરો વાઇલ્ડ-પ્રકારનાં પીએસએમસીએક્સએનએમએક્સએક્સએક્સરેક્સિંગના પ્રારંભિક ડોઝની બદલાતી પ્રતિક્રિયાઓ બતાવી ન હતી, પરંતુ જીએફપી-એક્સપ્રેસિંગ કંટ્રોલ ઉંદરોની તુલનામાં વારંવાર કોકેઇન ડોઝના જવાબમાં વધેલા લોકોમોટર એક્ટિવેશન દર્શાવ્યા હતા. તેનાથી વિપરિત, ઉંદરો PSMC5 ના મ્યુટન્ટ ફોર્મને વધારે પ્રમાણમાં બતાવે છે જેમાં તેના કોઇલ-કોઇલ ડોમેન (PSMC5-ΔCC) નો અભાવ છે (આ અસર પ્રદર્શિત કરી નથી).ફિગ 5B). રસપ્રદ વાત એ છે કે, પીએસએમએક્સએક્સએક્સએક્સ-કેક્સ્યુએક્સએક્સએમનું ઓવરવેરપ્રેસન, જેમાં જંગલી પ્રકાર પ્રોટીનની એટીપીઝ પ્રવૃત્તિની અભાવ છે, તેણે કોકેનના લોનોમોટર પ્રત્યુત્તરોને પણ સમર્થન આપ્યું છે.

થંબનેલ
ફિગ 5. એનએસીમાં પીએસએમસીએક્સએનએમએક્સએક્સ ઓવરએક્સપ્રેસન, કોકેઇન પ્રત્યેના લોકોમોટર પ્રતિસાદમાં વધારો કરે છે.

 

એ.મેડિએલ એનએસીમાં પ્રતિનિધિ એચએસવી-મધ્યસ્થી ટ્રાન્સજેન અભિવ્યક્તિ. એસી, અગ્રવર્તી કમિશર એનએસી કોર અને શેલ ઉપનગરો આકૃતિ પર નોંધાયેલા છે. બી. એચએસવી-પીએસએમસી 60 ઇન્જેક્શન પછી એનએસી ન્યુરોન્સમાં પીએસએમસી 5 ના ઇમ્યુનોહિસ્તોસાયિકલ સ્ટેનિંગના પ્રતિનિધિ ઉચ્ચ મેગ્નિફિકેશન (5 એક્સ) દર્શાવે છે કે પ્રોટીન મુખ્યત્વે પરમાણુ છે જે ડીએપીઆઈ સ્ટેનિંગ દ્વારા ચિહ્નિત થયેલ છે. સી. ઉંદરોને એનએસીમાં દ્વિપક્ષીય એચએસવી ઇંજેક્શન્સ પ્રાપ્ત થયા, ત્યારબાદ કોકેનની સબથ્રેશોલ્ડ ડોઝ (7.5 મિલિગ્રામ / કિગ્રા) ના દૈનિક આઇપી ઇંજેક્શન. ડ્રગના પ્રથમ અને છેલ્લા 3 દૈનિક ડોઝના જવાબમાં લોકોમોટર પ્રતિસાદ બતાવવામાં આવે છે. પીએસએમસી 5 અથવા પીએસએમસી 5-કે 196 એમનું ઓવરએક્સપ્રેસન પુનરાવર્તિત કોકેઇન માટે લોમમોટર પ્રતિસાદમાં વધારો કરે છે, જે અસર PSMC5-ΔCC સાથે જોવા મળતી નથી. પ્રારંભિક કોકેન ડોઝના લોકમોટર પ્રતિસાદ પર ટ્રાન્સજેન્સની કોઈ નોંધપાત્ર અસર જોવા મળી નથી. ડૂનેટની પોસ્ટહોક પરીક્ષણ દ્વારા એનોવા એફ (3,125) = 4.163, * પી <0.05.

ડોઇ: 10.1371 / journal.pone.0126710.g005

ચર્ચા

હાલના અધ્યયનનાં પરિણામો એક નવી પદ્ધતિ જાહેર કરે છે જેના દ્વારા - ફોસબી મગજમાં તેની અસરો અને કોકેન ક્રિયામાં સામેલ એક નવી પદ્ધતિની મધ્યસ્થી કરે છે. એક યીસ્ટબાઇડ અભિગમના ઉપયોગ દ્વારા, આથોવાળી બે-વર્ણસંકર ખ્યાલ, અમે PSMC5 ને novelફોસબી માટે નવલકથા બંધનકર્તા ભાગીદાર તરીકે ઓળખાવી. અમે આ શોધને વિટ્રોમાં અને વિવોમાં એનએએસીમાં બંનેમાં પીએસએમસીએક્સએનએમએક્સ-osફોસબી બંધનકર્તા દર્શાવીને માન્યતા આપી છે. અગત્યનું, પીએસએમસીએક્સએનએમએક્સના પરમાણુ સ્તરો ક્રોનિક કોકેન વહીવટ દ્વારા એનએસીમાં પ્રેરિત છે. અમે આગળ દર્શાવ્યું કે PSMC5-osFOSB બંધનકર્તા ઘણા અન્ય ટ્રાંસ્ક્રિપ્શનલ એક્ટિવેટર પ્રોટીન, સીબીપી અને પીએક્સએનયુએમએક્સ (બે હેટ) અને બીઆરજીએક્સયુએનએમએક્સ (એસડબલ્યુઆઈ-એસએનએફ ક્રોમેટિન રિમોડેલિંગ કોમ્પ્લેક્સનો મુખ્ય ઘટક) સાથે કોન્સર્ટમાં થાય છે. સાથે, અમારા તારણો એ પૂર્વધારણાને સમર્થન આપે છે કે પીએસએમસીએક્સએનએમએક્સ, ટ્રાંસ્ક્રિપ્શનલ એક્ટિવેશન કોમ્પ્લેક્સનો એક ભાગ છે, જે ક્રોનિક કોકેન એડમિનિસ્ટ્રેશન દરમિયાન ઓછામાં ઓછા કેટલાક Δફોસ-પ્રેરિત જનીનોમાં ભરતી થાય છે (ફિગ 4E). આ પૂર્વધારણા સાથે સુસંગત એ વધારાની શોધ છે કે એનએસીમાં પીએસએમસીએક્સએનએમએક્સનું અતિરેક, જેમ કે Δફોસબીના ઓવરએક્સપ્રેશનની જેમ, કોકેઇન પ્રત્યેના વર્તણૂકીય પ્રતિસાદને પ્રોત્સાહન આપે છે. વીટ્રો રિપોર્ટર એસેઝના ઉપયોગ દ્વારા PSMC5-osFosB-HAT-BRG5 ક્રિયાપ્રતિક્રિયાના લક્ષણ સાથે વિવો અવલોકનોમાં આને અનુસરવાનું ભવિષ્યના અભ્યાસમાં રસપ્રદ રહેશે.

કોકેઇન ક્રિયામાં PSMC5 ની સંડોવણી સંપૂર્ણપણે નવલકથા છે. પ્રોટીઓસોમનો સમાવેશ કરતા એટીપીસના વિશાળ પરિવારના સભ્ય તરીકે શરૂઆતમાં ઓળખાયેલ, પીએસએમસીએક્સએનએમએક્સ, વર્ષોથી સી-ફોસ, પીએક્સએનયુએમએક્સ, પરમાણુ હોર્મોન રીસેપ્ટર્સ અને બેસલ ટ્રાન્સક્રિપ્શન સંકુલના ઘટકો સહિતના ઘણા ટ્રાંસ્ક્રિપ્શન પરિબળો સાથે વાતચીત કરવા બતાવવામાં આવી છે.25], જોકે, ઘણા વર્ષોથી થોડા કાર્યાત્મક અભ્યાસ કરવામાં આવ્યા છે [26]. તેની શ્રેષ્ઠ સ્થાપિત ક્રિયા એ સંસ્કારી કોષોમાં એમવાયસી ટ્રાંસ્ક્રિપ્શન પરિબળોની પ્રવૃત્તિને પ્રોત્સાહન આપવાની છે [27]. ટ્રાંસ્ક્રિપ્શનલ મિકેનિઝમ્સમાં પીએસએમસીએક્સએનયુએમએક્સના પ્રભાવથી જીન ટ્રાંસ્ક્રિપ્શનના નિયમનમાં સર્વવ્યાપક-પ્રોટીસોમલ પ્રવૃત્તિ માટે સંભવિત ભૂમિકા સૂચવવામાં આવી છે, પરંતુ આવા નિયમનમાં પીએસએમસીએક્સએનએમએક્સની સંડોવણી આજની તારીખે વર્ચ્યુઅલ રીતે અનડેટેડ રહી છે [28,29].

મગજમાં PSMC5 ફંક્શન વિશે બહુ ઓછું જાણીતું છે. અગાઉના અધ્યયનમાં સમગ્ર મગજમાં પીએસએમસીએક્સએનએમએક્સ એમઆરએનએની વ્યાપક અભિવ્યક્તિ દર્શાવે છે [30], પરંતુ તેની કાર્યાત્મક પ્રવૃત્તિ બિનસલાહભર્યા રહી છે. અમારા તારણો હવે આ રસિક પ્રોટીનની વધુ તપાસ માટે પૂછે છે કે જીન ટ્રાંસ્ક્રિપ્શનને નિયમન કરવામાં તેની ભૂમિકા અને મગજમાં સર્વવ્યાપક-પ્રોટીસોમલ કાર્ય સાથેના તેના સંબંધને વધુ સારી રીતે સમજવા. PSMC5 નું indingFosB ને બંધનકર્તા PSMC5 ના કોઇલ-કોઇલ ડોમેન દ્વારા મધ્યસ્થી છે. વધુમાં, કોકેઈનને લોમોમોટર પ્રત્યુત્તરોને પ્રોત્સાહન આપવા માટે PSMC5 ની ક્ષમતા, જ્યારે કોઇલ-કોઇલ ડોમેનની આવશ્યકતા છે, તેને પ્રોટીનની અંદરના એટીપીઝ પ્રવૃત્તિની જરૂર નથી. આ પરિણામો એવી સંભાવનાને વધારે છે કે, ઓછામાં ઓછી આપણા સિસ્ટમમાં, પીએસએમસીએક્સએનએમએક્સની મુખ્ય પ્રવૃત્તિ and ફોસબી અને અન્ય ટ્રાંસ્ક્રિપ્શનલ રેગ્યુલેટરી પ્રોટીનને બંધનકર્તા દ્વારા મધ્યસ્થી કરવામાં આવી શકે છે અને સે દીઠ તેની પ્રોટીસોમલ સંબંધિત પ્રવૃત્તિ દ્વારા નહીં. આ અને વૈકલ્પિક શક્યતાઓના સીધા પરીક્ષણ માટે આગળના કામની જરૂર છે. પીએસએમસીએક્સએનએમએક્સના વાયરલ-મધ્યસ્થી ઓવરએક્સપ્રેસનથી Δફોસબી સાથેની ક્રિયાપ્રતિક્રિયા દ્વારા લોકેમોટર પ્રતિસાદમાં વધારો થયો તે પૂર્વધારણા એક બુદ્ધિગમ્ય છે, 5 દિવસના કોકેઇન સારવાર પદ્ધતિનો ઉપયોગ હોવા છતાં, તે જાણીતું છે કે આ સમયગાળાની અંદર મગજમાં osફોસબીના પ્રશંસનીય સ્તર એકઠા થાય છે [3].

હાલના તારણો મગજના નિયમનના પરમાણુ આધારનો અભ્યાસ કરવામાં નિષ્પક્ષ, ઓપન-એન્ડ પ્રાયોગિક અભિગમોનો ઉપયોગ કરવાની ઉપયોગિતાને વધુ પ્રમાણિત કરે છે. પીએસએમસીએક્સએનએમએક્સ તરફનું અમારું પ્રારંભિક ધ્યાન ફક્ત આથો બે-વર્ણસંકર ખંડમાં Δ ફોસબીને તેના અગ્રણી બંધનકર્તા પર આધારિત હતું, તેમ છતાં, તે ટ્રાંસ્ક્રિપ્શનલ ફેરફારોનો એક મહત્વપૂર્ણ ઘટક હોવાનું જણાય છે જે એનએસીમાં વારંવાર કોકેઇન વહીવટ દ્વારા ભરતી કરવામાં આવે છે. વિગતવાર મિકેનિઝમ્સની વધુ સારી સમજ, જેના દ્વારા પીએસએમસીએક્સએનએમએક્સના પરમાણુ સ્તરો કોકેન દ્વારા પ્રેરિત થાય છે અને, બદલામાં, પીએસએમસીએક્સએન્યુએમએક્સ પછી કોકેન-પ્રેરિત ટ્રાંસ્ક્રિપ્શન સક્રિયકરણ સંકુલમાં ફાળો આપે છે તે વર્તમાન તપાસનું કેન્દ્ર છે. દરમિયાન, અમારા યીસ્ટના બે-વર્ણસંકર પર્યાએ os ફોસબી (ના ઘણા વધારાના પુટિટેજ બંધનકર્તા ભાગીદારો જાહેર કર્યા)કોષ્ટક 1) જે હવે કોકેન મ modelsડેલોમાં સીધી પરીક્ષાની પણ ખાતરી આપે છે. એકસાથે, આ કાર્ય જટિલ પરમાણુ મિકેનિઝમ્સની વધતી સમજમાં ફાળો આપી રહ્યું છે, જેના દ્વારા કોકેન એનએએસી ફંક્શનમાં ફેરફાર કરે છે.

સમર્થન

આ કાર્યને ડ્રગ એબ્યુઝ પર નેશનલ ઇન્સ્ટિટ્યૂટની ગ્રાન્ટ અને ઇશીબાશી ફાઉન્ડેશન અને જાપાન સોસાયટી દ્વારા પ્રોત્સાહન વિજ્ .ાન દ્વારા આપવામાં આવ્યું હતું (કાકેંઠી નંબર્સ: 24591735, 26290064, 25116010)

લેખક ફાળો

કલ્પના અને પ્રયોગોની રચના: YHO YNO EJN. પ્રયોગો કર્યા: YHO YNO PJK RN. ડેટાનું વિશ્લેષણ: YHO YNO EJN. ફાળો આપેલ રીએજન્ટ્સ / સામગ્રી / વિશ્લેષણ સાધનો: TN MO OY AN RN TT. કાગળ લખ્યું: YHO EJN.

સંદર્ભ

  1. 1. મોર્ગન જેઆઈ, ક્યુરન ટી (એક્સએનએમએક્સ) તાત્કાલિક-પ્રારંભિક જનીનો: દસ વર્ષ. વલણો ન્યુરોસિએ 1995: 18 – 66. સાંસદ: 67 doi: 7537412 / 10.1016-0166 (2236) 95-t
  2. 2. નેસ્ટલર ઇજે (એક્સએનએમએક્સ) વ્યસનની ટ્રાંસ્ક્રિપ્શનલ મિકેનિઝમ્સ: ડેલ્ટાફોસબીની ભૂમિકા. ફિલોસ ટ્રાન્સ આર સોક લંડન બી બાયલ સાયન્સ એક્સએન્યુએમએક્સ: 2008 – 363. doi: 3245 / rstb.3255. બપોરે: 10.1098
  3. લેખ જુઓ
  4. પબમેડ / એનસીબીઆઈ
  5. ગૂગલ વિદ્વાનની
  6. લેખ જુઓ
  7. પબમેડ / એનસીબીઆઈ
  8. ગૂગલ વિદ્વાનની
  9. લેખ જુઓ
  10. પબમેડ / એનસીબીઆઈ
  11. ગૂગલ વિદ્વાનની
  12. લેખ જુઓ
  13. પબમેડ / એનસીબીઆઈ
  14. ગૂગલ વિદ્વાનની
  15. લેખ જુઓ
  16. પબમેડ / એનસીબીઆઈ
  17. ગૂગલ વિદ્વાનની
  18. લેખ જુઓ
  19. પબમેડ / એનસીબીઆઈ
  20. ગૂગલ વિદ્વાનની
  21. લેખ જુઓ
  22. પબમેડ / એનસીબીઆઈ
  23. ગૂગલ વિદ્વાનની
  24. લેખ જુઓ
  25. પબમેડ / એનસીબીઆઈ
  26. ગૂગલ વિદ્વાનની
  27. લેખ જુઓ
  28. પબમેડ / એનસીબીઆઈ
  29. ગૂગલ વિદ્વાનની
  30. લેખ જુઓ
  31. પબમેડ / એનસીબીઆઈ
  32. ગૂગલ વિદ્વાનની
  33. લેખ જુઓ
  34. પબમેડ / એનસીબીઆઈ
  35. ગૂગલ વિદ્વાનની
  36. લેખ જુઓ
  37. પબમેડ / એનસીબીઆઈ
  38. ગૂગલ વિદ્વાનની
  39. લેખ જુઓ
  40. પબમેડ / એનસીબીઆઈ
  41. ગૂગલ વિદ્વાનની
  42. લેખ જુઓ
  43. પબમેડ / એનસીબીઆઈ
  44. ગૂગલ વિદ્વાનની
  45. લેખ જુઓ
  46. પબમેડ / એનસીબીઆઈ
  47. ગૂગલ વિદ્વાનની
  48. લેખ જુઓ
  49. પબમેડ / એનસીબીઆઈ
  50. ગૂગલ વિદ્વાનની
  51. લેખ જુઓ
  52. પબમેડ / એનસીબીઆઈ
  53. ગૂગલ વિદ્વાનની
  54. લેખ જુઓ
  55. પબમેડ / એનસીબીઆઈ
  56. ગૂગલ વિદ્વાનની
  57. લેખ જુઓ
  58. પબમેડ / એનસીબીઆઈ
  59. ગૂગલ વિદ્વાનની
  60. લેખ જુઓ
  61. પબમેડ / એનસીબીઆઈ
  62. ગૂગલ વિદ્વાનની
  63. લેખ જુઓ
  64. પબમેડ / એનસીબીઆઈ
  65. ગૂગલ વિદ્વાનની
  66. લેખ જુઓ
  67. પબમેડ / એનસીબીઆઈ
  68. ગૂગલ વિદ્વાનની
  69. લેખ જુઓ
  70. પબમેડ / એનસીબીઆઈ
  71. ગૂગલ વિદ્વાનની
  72. લેખ જુઓ
  73. પબમેડ / એનસીબીઆઈ
  74. ગૂગલ વિદ્વાનની
  75. લેખ જુઓ
  76. પબમેડ / એનસીબીઆઈ
  77. ગૂગલ વિદ્વાનની
  78. લેખ જુઓ
  79. પબમેડ / એનસીબીઆઈ
  80. ગૂગલ વિદ્વાનની
  81. લેખ જુઓ
  82. પબમેડ / એનસીબીઆઈ
  83. ગૂગલ વિદ્વાનની
  84. લેખ જુઓ
  85. પબમેડ / એનસીબીઆઈ
  86. ગૂગલ વિદ્વાનની
  87. લેખ જુઓ
  88. પબમેડ / એનસીબીઆઈ
  89. ગૂગલ વિદ્વાનની
  90. 3. હોપ બીટી, નાય હે, કેલ્ઝ એમબી, સેલ્ફ ડીડબ્લ્યુ, ઇડરારોલા એમજે, નાકાબેપ્પુ વાય, એટ અલ. (એક્સએનએમએક્સ) ક્રોનિક કોકેન અને અન્ય ક્રોનિક ઉપચાર દ્વારા મગજમાં બદલાયેલા ફોસ જેવા પ્રોટીનથી બનેલા લાંબા સમયથી ચાલતા એપી-એક્સએનએમએક્સ સંકુલનો સમાવેશ. ન્યુરોન 1994: 1 – 13. સાંજ: 1235 doi: 1244 / 7946359-10.1016 (0896) 6273-94
  91. H. હિરોઇ એન, બ્રાઉન જે, હેઇલ સી, યે એચ, ગ્રીનબર્ગ એમ.ઇ., નેસ્ટલર ઇજે (4) ફોસબી મ્યુટન્ટ ઉંદર: ફોસ-સંબંધિત પ્રોટીનના ક્રોનિક કોકેઇન ઇન્ડક્શનનું નુકસાન અને કોકેનની સાયકોમોટર અને લાભદાયી અસરોની સંવેદનશીલતામાં વધારો. પ્રોક નેટલ એકડ સાયની યુએસએ 1997: 94–10397. સાંજના સમયે: 10402 doi: 9294222 / pnas.10.1073
  92. 5. યુલેરી પીજી, રુડેન્કો જી, નેસ્લર ઇજે (એક્સએનએમએક્સ) ફોસ્ફોરીલેશન દ્વારા osફોસબી સ્થિરતાનું નિયમન. જે ન્યુરોસી એક્સએન્યુએમએક્સ: 2006 – 26. સાંજવાળું: 5131 doi: 5142 / jneurosci.16687504-10.1523
  93. 6. કાર્લે ટી.એલ., ઓહનીશી વાય.એન., ઓહનીશી વાય.એચ., અલીભાઇ આઈ.એન., વિલ્કિન્સન એમ.બી., કુમાર એ, એટ અલ. (2007) સંરક્ષિત સી-ટર્મિનલ ડિગ્રોન ડોમેનની ગેરહાજરી os ફોસબીની અનન્ય સ્થિરતામાં ફાળો આપે છે. યુર જે ન્યુરોસિએ એક્સએન્યુએમએક્સ: 25 – 3009. બપોરે: 3019
  94. 7. રોબિસન એજે, વિઆલો વી, મેઝેઇ-રોબિસન એમ, ફેંગ જે, કોરીચ એસ, કોલિન્સ એમ, એટ અલ. (2013) ક્રોનિક કોકેઈન માટે વર્તણૂકલક્ષી અને માળખાગત પ્રતિસાદમાં ફીડ-ફોરવર્ડ લૂપની જરૂર છે જેમાં ન્યુક્લસ એસેમ્બન્સ શેલમાં ΔFOSB અને CaMKII શામેલ છે. જે ન્યુરોસી એક્સએન્યુએમએક્સ: 33 – 4295 ડોઇ: 4307 / JNEUROSCI.10.1523-5192. બપોરે: 12.2013
  95. 8. કેલ્ઝ એમબી, ચેન જે, કાર્લેઝન ડબલ્યુએ જુનિયર, વ્હિસ્લર કે, ગિલ્ડેન એલ, બેકમેન એએમ, એટ અલ. (1999) ટ્રાંસ્ક્રિપ્શન ફેક્ટરનું અભિવ્યક્તિ - મગજમાં ફોસબી કોકેનની સંવેદનશીલતાને નિયંત્રિત કરે છે. પ્રકૃતિ 401: 272 – 276. બપોરે: 10499584
  96. 9. કોલબી સીઆર, વ્હિસ્લર કે, સ્ટેફન સી, નેસ્ટલર ઇજે, સેલ્ફ ડીડબ્લ્યુ (એક્સએનએમએક્સ) - ફોસબી કોકેન માટે પ્રોત્સાહન વધારશે. જે ન્યુરોસી એક્સએન્યુએમએક્સ: 2003 – 23. બપોરે: 2488
  97. 10. મેકક્લંગ સીએ, નેસ્ટલર ઇજે (એક્સએનએમએક્સ) સીઇઆરબી અને ડીએફઓએસબી દ્વારા જનીન અભિવ્યક્તિનું નિયમન અને કોકેઇન ઇનામ. નાટ ન્યુરોસી એક્સએન્યુએમએક્સ: એક્સએન્યુએમએક્સ – એક્સએન્યુએમએક્સ. સાંજ: 2003 doi: 11 / nn1208
  98. 11. ઝકરીઓ વી, બોલાનોસ સીએ, સેલી ડીઇ, થિયોબાલ્ડ ડી, કેસિડી એમપી, કેલ્ઝ એમબી, એટ અલ. (2006) Δફોસબી: મોર્ફિન ક્રિયામાં ન્યુક્લિયસમાં osફોસબી માટે આવશ્યક ભૂમિકા. પ્રકૃતિ ન્યુરોસિએ 9: 205 – 211. સાંજ: 16415864 doi: 10.1038 / nn1636
  99. 12. પીકમેન એમસી, કોલ્બી સી, ​​પેરોટી એલઆઈ, ટેકુમાલા પી, કાર્લે ટી, યુલેરી પી, એટ અલ. (એક્સએનએમએક્સ) ટ્રાન્સજેનિક ઉંદરમાં સી-જૂનના પ્રભાવશાળી નકારાત્મક મ્યુટન્ટની ઇન્દ્રિય, મગજ ક્ષેત્રની વિશિષ્ટ અભિવ્યક્તિ કોકેનની સંવેદનશીલતામાં ઘટાડો કરે છે. મગજનું પરિણામ 2003: 970 – 73. સાંજ: 86 doi: 12706249 / s10.1016-0006 (8993) 03-02230
  100. 13. ચેન જે, નાયે હે, કેલ્ઝ એમબી, હીરોઇ એન, નાકાબેપ્પુ વાય, એટ અલ. (એક્સએનયુએમએક્સ) ઇલેક્ટ્રોકonન્યુલ્સીવ જપ્તી અને કોકેઇન સારવાર દ્વારા ડેલ્ટા ફોસબી અને ફોસબી જેવા પ્રોટીનનું નિયમન. મોલ ફાર્માકોલ 1995: 48 – 880. બપોરે: 889
  101. 14. હીરોઇ એન, મેરેક જીજે, બ્રાઉન જે, યે એચ, સudદોઉ એફ, વૈદ્ય વીએ, એટ અલ. (1998) ઇલેક્ટ્રોકonન્યુલ્સીવ હુમલાની પરમાણુ, સેલ્યુલર અને વર્તણૂકીય ક્રિયાઓમાં ફોસબ જનીનની આવશ્યક ભૂમિકા. જે ન્યુરોસી એક્સએન્યુએમએક્સ: 18 – 6952. બપોરે: 6962
  102. 15. પેરેઝ-ઓટોનો આઇ, મેન્ડેલ્ઝિસ એ, મોર્ગન જેઆઈ (એક્સએનએમએક્સ) એમપીટીપી પાર્કિન્સનિઝમ ડોપામિનર્જિક માર્ગોમાં ડી-ફોસબી જેવા પ્રોટીનની સતત અભિવ્યક્તિ સાથે છે. મોલ બ્રેઇન રેઝ એક્સએન્યુએમએક્સ: એક્સએન્યુએમએક્સ – એક્સએન્યુએમએક્સ. સાંજ: 1998 doi: 53 / s41-52x (9473580) 10.1016-0169
  103. 16. મા જે, પેટાશને એમ (એક્સએનયુએમએક્સ) યુકેરિઓટિક ટ્રાંસ્ક્રિપ્શન ઇન્હિબિટરને એક્ટિવેટરમાં ફેરવી રહ્યું છે. સેલ 1988: 55 – 443. સાંસદ: 446 doi: 3180218 / 10.1016-0092 (8674) 88-x
  104. 17. ચાયન સીટી, બાર્ટેલ પીએલ, સ્ટર્ંગલાન્ઝ આર, ફીલ્ડ્સ એસ (એક્સએનએમએક્સ) દ્વિ-વર્ણસંકર સિસ્ટમ: પ્રોટિન માટેના જનીનોને ઓળખવા અને ક્લોન કરવાની એક પદ્ધતિ જે રુચિના પ્રોટીન સાથે સંપર્ક કરે છે. પ્રોક નેટલ એકેડ સાયન્સ યુએસએ એક્સએન્યુએમએક્સ: એક્સએન્યુએમએક્સ – એક્સએન્યુએમએક્સ. સાંજના સમયે: 1991 doi: 88 / pnas.9578
  105. 18. નકાબેપુ વાય 1, ઓડા એસ, સેકીગુચી એમ (1993) ડેલ્ટા ફોસબી દ્વારા ક્વિઝન્ટ રાઈટ-એક્સ્યુએનએક્સએક્સ કોશિકાઓની પ્રજનનક્ષમ સક્રિયકરણ. મોલ સેલ બાયોલ એક્સએન્યુએમએક્સ: 1 – 13. બપોરે: 4157
  106. 19. સ્કobબી કે.એન., ડામેઝ-વર્નો ડી, સન એચ, શાઓ એન, ગાંકાર્ઝ એ, પંગાનીબન સીએચ, એટ અલ. (એક્સએનયુએમએક્સ) કોકેનની ક્રિયામાં પોલી (એડીપી-રાયબોસિલ) એશનની આવશ્યક ભૂમિકા. પ્રોક નેટલ એકેડ સાયન્સ યુએસએ એક્સએન્યુએમએક્સ: એક્સએન્યુએમએક્સ – એક્સએન્યુએમએક્સ. doi: 2014 / pnas.111. બપોરે: 2005
  107. 20. પેરોટી એલઆઈ, વીવર આરઆર, રોબિસન બી, રેન્ટલ ડબલ્યુ, મેઝ આઇ, યઝદાની એસ, એટ અલ. (2008) દુરૂપયોગની દવાઓ દ્વારા મગજમાં ફોસબ ઇન્ડક્શનની વિશિષ્ટ પેટર્ન. સિનેપ્સ 62: 358 – 369. doi: 10.1002 / syn.20500. બપોરે: 18293355
  108. 21. વાંગ ડબલ્યુએલ, ચેવરે પીએમ, નાથન્સ ડી (એક્સએનએમએક્સ) સસ્તન સુગએક્સએનએમએક્સ અને સી-ફોસ પરમાણુ 1996S પ્રોટીઓસોમમાં. પ્રોક નેટલ એકેડ સાયન્સ યુએસએ એક્સએન્યુએમએક્સ: એક્સએન્યુએમએક્સ – એક્સએન્યુએમએક્સ. સાંજના સમયે: 1 doi: 26 / pnas.93
  109. 22. કુઇસ ઓઆઈ એક્સએન્યુએમએક્સ, ડડલી આરકે, ટ્રુક્સ એડી, ગેર્હર્ટ ડી, ભટ કેપી, મNકનીલ એસ, એટ અલ. (1) 2008S પ્રોટીસોમલ એટીપીઝ સુગએક્સએમયુએમએક્સ દ્વારા મુખ્ય હિસ્ટોકોમ્પેટીબિલીટી કોમ્પ્લેક્સ ક્લાસ II પ્રોક્સિમલ પ્રમોટર ખાતે એસિટિલેશનનું નિયમન. મોલ સેલ બાયોલ એક્સએન્યુએમએક્સ: 19 – 1. doi: 28 / MCB.5837-5850. બપોરે: 10.1128
  110. 23. લેવિન એએ, ગુઆન ઝેડ, બાર્કો એ, ઝુ એસ, કંડેલ ઇઆર, શ્વાર્ટઝ જેએચ (એક્સએનએમએક્સ) સીઆરઇબી-બંધનકર્તા પ્રોટીન માઉસ સ્ટ્રાઇટમમાં ફોસબી પ્રમોટર ખાતે એસીટીલેટીંગ હિસ્ટોન્સ દ્વારા કોકેન પરના પ્રતિભાવને નિયંત્રિત કરે છે. પ્રોક નેટલ એકેડ સાયન્સ યુએસએ એક્સએન્યુએમએક્સ: એક્સએન્યુએમએક્સ – એક્સએન્યુએમએક્સ. સાંજના સમયે: 2005 doi: 102 / pnas.19186
  111. 24. કુમાર એ, ચોઈ કે.એચ., રાંથલ ડબ્લ્યુ, તાંકોવા એનએમ, થિયોબલ ડીઇએચ, ટ્રૂંગ એચટી, એટ અલ. (2005) Chromatin રિમોડેલિંગ એ સ્ટ્રેટમમાં કોકેન-પ્રેરિત પ્લાસ્ટિસિટીની અંતર્ગત એક મુખ્ય મિકેનિઝમ છે. ન્યુરોન 48: 303-314. pmid: 16242410 doi: 10.1016 / j.neuron.2005.09.023
  112. 25. સેંટ-આર્નાઉડ આર (1999) ટ્રાંસ્ક્રિપ્શનલ નિયમનકારો માટે દ્વિ કાર્યો: દંતકથા અથવા વાસ્તવિકતા. જે સેલ બાયોકેમ સlલ 32/33: 32-40. doi: 10.1002 / (sici) 1097-4644 (1999) 75: 32+ <32 :: સહાય-જેસીબી 5> 3.0.co; 2-x
  113. 26. ફેરેલ કે, વિલ્કિન્સન સીઆરએમ, ડ્યુબિલ ડબ્લ્યુ, ગોર્ડન સી (2000) 26S પ્રોટિસોમનું નિયમનકારી સબ્યુનિટ ક્રિયાપ્રતિક્રિયા, એક જટિલ સમસ્યા. વલણો બાયોકેમ વિજ્ઞાન 25: 83-88. pmid: 10664589 ડૂઇ: 10.1016 / s0968-0004 (99) 01529-7
  114. 27. વોન ડેર લેહર એન, જોહાન્સસન એસ, લાર્સન એલજી (2003) માઇક-રેગ્યુલેટેડ ટ્રાન્સક્રિપ્શનમાં યુબિકિટિન / પ્રોટીસોમ સિસ્ટમનો અમલ. સેલ સાયકલ 2-5: 403-407. ડોઇ: 10.4161 / cc.2.5.484
  115. 28. ગેંગ એફક્યુ, વેનઝેલ એસ, ટાન્ન્સી વેપ (2012) યુબિક્વિટીન અને ટ્રાંસિસ્સાઇઝમાં પ્રોટીસોમ. એન્યુ રેવ બાયોકેમ 81: 177-201. ડોઇ: 10.1146 / એન્યુરેવ-બાયોકેમ-એક્સ્યુએનએક્સ-એક્સ્યુએનએક્સ. pmid: 052110
  116. 29. કોલિન્સ જીએ, ટેનસી WP (2006) પ્રોટીસોમ: ટ્રાન્સક્રિપ્શન માટે ઉપયોગિતા સાધન? ક્યુર ઑપ જિનેટ દેવ 16: 197-202. pmid: 16503126
  117. 30. સન ડી.એચ., સ્વેફિલ્ડ જે.સી., જોહન્સ્ટન એસ.એ., મિલિગન સી.ઇ., ઝૂએલર આર.ટી., શ્વાર્ટઝ એલ.એમ. (1997) માયસ નર્વસ સિસ્ટમમાં વિભિન્ન રીતે વ્યક્ત કરવામાં આવતા ફાયલોજેનેટિકલી કન્ઝર્વેડ સુગ 1 સીએડી કુટુંબના સભ્યની ઓળખ. દેવ ન્યુરોબિઓલ 33: 877–890. doi: 10.1002 / (sici) 1097-4695 (199712) 33: 7 <877 :: સહાય- neu2> 3.0.co; 2-5