Metamfetamin djeluje na subpopulacije neurona koji reguliraju seksualno ponašanje u mužjaka štakora (2010)

Neuroscience. 2010 Mar 31; 166 (3): 771-84. doi: 10.1016 / j.neuroscience.2009.12.070. Epub 2010 siječanj 4.

Frohmader KS, Wiskerke J, Mudro RA, Lehman MN, Coolen LM.

izvor

Zavod za anatomiju i biologiju stanica, Schulichova škola za medicinu i stomatologiju, Sveučilište zapadnog Ontarija, London, ON, Kanada, N6A 5C1.

Sažetak

Metamfetamin (Meth) je vrlo ovisnički stimulans. Meth zlostavljanje se obično povezuje s praksom seksualnog rizičnog ponašanja i povećane prevalencije virusa humane imunodeficijencije, a korisnici Meth-a navode pojačanu seksualnu želju, uzbuđenje i seksualno zadovoljstvo. Biološka osnova za ovu vezu između spolnog odnosa nije poznata. Ova studija pokazuje da primjena Metha kod mužjaka štakora aktivira neurone u područjima mozga mezolimbičkog sustava koji su uključeni u regulaciju seksualnog ponašanja. Naime, Meth i sparivanje ko-aktiviraju stanice u jezgri i ljusci nucleus accumbens, bazolateralnu amigdalu i prednji cingulate korteks. Ovi rezultati ilustriraju da, za razliku od sadašnjeg uvjerenja, droge zlostavljanja mogu aktivirati iste stanice kao prirodni pojačivač, to jest seksualno ponašanje, a zauzvrat može utjecati na prinudno traženje ove prirodne nagrade.

ključne riječi: nucleus accumbens, bazolateralna amigdala, prefrontalni korteks, zlouporaba tvari, reprodukcija, ovisnost

Motivacija i nagrada regulirani su mezolimbičkim sustavom, međusobno povezanom mrežom područja mozga koju čine ventralna tegmentalna područja (VTA) nucleus accumbens (NAc), bazolateralna amigdala i medialni prefrontalni korteks (mPFC) (Kelley, 2004, Kalivas i Volkow, 2005). Postoji dovoljno dokaza da je mezolimbički sustav aktiviran kao odgovor na obje supstance zlostavljanja (Di Chiara i Imperato, 1988, Chang i sur., 1997, Ranaldi i sur., 1999) i prirodno nagrađivanje ponašanja kao što je seksualno ponašanje (Fiorino et al., 1997, Balfour i sur., 2004). Seksualno ponašanje muškaraca, a posebno ejakulacija, vrlo je korisno i pojačano u modelima životinja (Pfaus i sur., 2001). Muški glodavci razvijaju uvjetovano mjesto (CPP) prema kopulaciji (Agmo i Berenfeld, 1990, Martinez i Paredes, 2001, Tenk, 2008), te će obavljati operantske zadatke za pristup seksualno osjetljivoj ženki (Everitt i sur., 1987, Everitt i Stacey, 1987). Zlouporaba droga također nagrađuje i pojačava, a životinje će naučiti samoupravljati supstance zlostavljanja, uključujući opijate, nikotin, alkohol i psihostimulanse (Wise, 1996, Pierce i Kumaresan, 2006, Feltenstein i See, 2008). Iako je poznato da i lijekovi zlostavljanja i seksualno ponašanje aktiviraju mezolimbička područja mozga, trenutno je nejasno da li zlouporaba droga utječe na iste neurone koji posreduju u seksualnom ponašanju.

Elektrofiziološke studije su pokazale da hrana i kokain aktiviraju neurone u NAc. Međutim, dva pojačivača ne aktiviraju iste stanice unutar NAc (Carelli i sur., 2000, Carelli i Wondolowski, 2003). Štoviše, hrana i samouprava saharoze ne uzrokuju dugotrajne promjene elektrofizioloških svojstava kao što su inducirani kokainom (Chen i sur., 2008). Nasuprot tome, zbirka dokaza upućuje na to da bi muško seksualno ponašanje i droge mogli djelovati na iste mezolimbičke neurone. Psihostimulansi i opioidi mijenjaju izražavanje seksualnog ponašanja kod mužjaka štakora (Mitchell i Stewart, 1990, Fiorino i Phillips, 1999a, Fiorino i Phillips, 1999b). Nedavni podaci iz našeg laboratorija pokazali su da seksualno iskustvo mijenja brzinu reagiranja na psihostimulanse, što je vidljivo iz osjetljivih lokomotornih odgovora i senzibilizirane percepcije nagrađivanja za d-amfetamine kod seksualno iskusnih životinja (Pitchers et al., 2009). Sličan odgovor prethodno je primijećen kod ponovljenog izlaganja amfetaminu ili drugim zlouporabama droga (Lett, 1989, Shippenberg i Heidbreder, 1995, Shippenberg i sur., 1996, Vanderschuren i Kalivas, 2000). Zajedno, ovi nalazi sugeriraju da seksualno ponašanje i reakcije na zlouporabe droga posreduju isti neuroni u mezolimbičkom sustavu. Stoga je prvi cilj ove studije istražiti neuralnu aktivaciju mezolimbičkog sustava spolnim ponašanjem i primjenom lijeka u istoj životinji. Posebno smo testirali hipotezu da psihostimulans, metamfetamin (Meth) djeluje izravno na neurone koji normalno posreduju u seksualnom ponašanju.

Meth je jedna od najzastupljenijih nedopuštenih droga na svijetu (NIDA, 2006, Ellkashef i sur., 2008) ičesto se povezuje s promijenjenim seksualnim ponašanjem. Zanimljivo je da korisnici Meth-a navode pojačanu seksualnu želju i uzbuđenje, kao i pojačano seksualno zadovoljstvo (Semple i sur., 2002, Schilder i sur., 2005). Osim toga, Zlouporaba meta obično je povezana s seksualno kompulzivnim ponašanjem (Rawson i sur., 2002). Korisnici često prijavljuju da imaju brojne seksualne partnere i manje je vjerojatno da će koristiti zaštitu od drugih zlouporaba droga (Somlai i sur., 2003, Springer et al., 2007). Nažalost, studije koje ukazuju na Meth kao prediktor seksualnog rizičnog ponašanja su ograničene jer se oslanjaju na nepotvrđene samoprocjene (Elifson i sur., 2006). Stoga je potrebno istraživanje stanične osnove Meth-induciranih promjena u seksualnom ponašanju u životinjskom modelu kako bi se razumjelo ovo složeno povezivanje između droge i spola.

S obzirom na gore navedene dokaze koji upućuju na to da lijekovi zlostavljanja, a posebno Meth, mogu djelovati na neurone koji su normalno uključeni u posredovanje seksualnog ponašanja, cilj ove studije bio je istražiti neuronsku aktivaciju seksualnim ponašanjem i primjenom psihostimulanta Meth, Ova studija provela je neuroanatomsku tehniku, koristeći imunohistokemijsku vizualizaciju neposrednih ranih gena Fos i fosforilirane Map Kinase (pERK) kako bi se detektirala istodobna neuralna aktivacija spolnim ponašanjem i Meth. Fos se izražava samo unutar jezgre stanica, s maksimalnom razinom ekspresije 30 – 90 minuta nakon aktivacije neurona. Postoji dovoljno dokaza da seksualna aktivnost izaziva Fosovu ekspresiju u mozgu (Pfaus i Heeb, 1997, Veening i Coolen, 1998), uključujući mezokortikolimbički sustav (Robertson i sur., 1991, Balfour i sur., 2004). Također postoje dokazi da lijekovi zlostavljanja izazivaju pERK ekspresiju unutar mezokortikolimbičkog sustava (Valjent i sur., 2000, Valjent i sur., 2004, Valjent i sur., 2005). Za razliku od ekspresije Fos, fosforilacija ERK je vrlo dinamičan proces i javlja se samo 5-20 minuta nakon aktivacije neurona. Različiti vremenski profili Fos i pERK čine ih idealnim skupom markera za daljnju aktivaciju neurona pomoću dva različita podražaja.

EKSPERIMENTALNE PROCEDURE

Teme

Odrasli mužjaci štakora Sprague Dawley (210-225 g) dobiveni od Charles River Laboratories (Montreal, QC, Kanada) bili su smješteni dva po kavezu u standardnim kavezima od pleksiglasa (kućni kavezi). Prostorija za životinje održavana je u ciklusu obrnutog svjetla 12 / 12 h (svjetla su isključena u 10.00 h). Hrana i voda su bili dostupni ad libitum. Sva ispitivanja provedena su tijekom prve polovice tamne faze pod slabim crvenim osvjetljenjem. Ženke poticaja korištene za seksualno ponašanje bile su bilateralno ovarijektomirane pod dubokom anestezijom (13 mg / kg ketamina i 87 mg / kg ksilazina) i primile su subkutani implantat koji sadrži 5% estradiol benzoat (EB) i 95% kolesterola. Seksualna receptivnost je inducirana subkutanom (sc) primjenom 500 μg progesterona u 0.1 ml sezamovom ulju 4 h prije testiranja. Sve postupke odobrio je Odbor za njegu životinja na Sveučilištu Zapadnog Ontarija i udovoljio smjernicama kanadskog Vijeća za njegu životinja.

Eksperimentalni modeli

Eksperimenti 1 i 2: Muškim štakorima (n = 37) bilo je dopušteno da se pare s receptivnom ženkom na jednu ejakulaciju (E) ili za 30 min, koja je ikada bila prva u čistim testnim kavezima (60 × 45 × 50 cm) tijekom pet puta - tjedna predtestna sjednica za parenje, kako bi stekli seksualno iskustvo. Tijekom posljednje dvije sesije zabilježeni su svi standardni parametri za seksualnu izvedbu, uključujući: latenciju montiranja (ML; vrijeme od uvođenja ženke do prvog uspona), latenciju intromisije (IL; vrijeme od uvođenja ženke do prvog hvata) vaginalna penetracija), latencija ejakulacije (EL; vrijeme od prve intromicije do ejakulacije), interval poslije ejakulacije (PEI; vrijeme od ejakulacije do prvog naknadnog unošenja), broj izdanaka (M) i broj intromisija (IM) (Agmo, 1997). Svi mužjaci su uzimali 1 ml / kg dnevne injekcije 0.9% NaCl (fiziološka otopina; sc) 3 uzastopno dana prije dana ispitivanja, za navikavanje na rukovanje i injekcije. Dan prije dana testiranja, svi mužjaci su bili smješteni pojedinačno. Kod iskusnih muškaraca, Fos može biti induciran uvjetovanim kontekstualnim znakovima povezanim s prethodnim seksualnim iskustvom (Balfour i sur., 2004). Stoga, sve manipulacije parenja i kontrole tijekom završnih testova provedene su u kućnom kavezu (izbjegavanje prediktivnih uvjetovanih znakova) kako bi se spriječila kondicionirana inducirana aktivacija kod nepotvrđenih kontrolnih mužjaka. Mužjaci su podijeljeni u osam eksperimentalnih skupina koje se nisu razlikovale u bilo kojoj mjeri seksualne izvedbe tijekom posljednje dvije sjednice parenja (podaci nisu prikazani). Tijekom završnog testa, mužjacima je bilo dopušteno da se pare u kavezu dok nisu pokazali ejakulaciju (spol) ili nisu primili ženskog partnera (bez seksa). Svi parjeni mužjaci su perfundirani 60 minuta nakon početka parenja kako bi se omogućila analiza Fos-ekspresije izazvane parenjem. Mužjaci su primili injekciju 4 mg / kg Meth ili 1 ml / kg fiziološke otopine (sc) (n = 4 svaki), bilo 10 (eksperiment 1) ili 15 (eksperiment 2) min prije perfuzije, za analizu fosforilacije izazvane lijekom MAP kinaze. Doziranje i vrijeme prije perfuzije temelje se na prethodnim izvješćima (Choe et al., 2002, Choe i Wang, 2002, Chen i Chen, 2004, Mizoguchi et al., 2004, Ishikawa i sur., 2006). Kontrolne skupine uključivale su muškarce koji se nisu parili, ali su primili Meth 10 (n = 7) ili 15 (n = 5) min prije žrtvovanja, ili injekcije 10 (n = 5) ili 15 (n = 4) min. , Nakon žrtvovanja, mozak je obrađen za imunohistokemiju.

Eksperiment 3: Budući da je u eksperimentu 1 i 2 korištena visoka doza Meth, proveden je dodatni neuroanatomski eksperiment kako bi se istražilo da li seksualno ponašanje i niža doza Meth induciraju doze ovisne obrasce preklapanja neuronske aktivacije. Ovo istraživanje je provedeno na identičan način kao eksperimenti 1 i 2. Međutim, na konačnom testu, parovane i nepokrivene skupine (n = 6 svaka) primile su 1 mg / kg Meth (sc) 15 min prije žrtvovanja.

Eksperiment 4: Da bi se testiralo je li neuronska aktivacija uzrokovana spolom i Meth specifična za Meth, ovaj eksperiment je istraživao da li se slični obrasci preklapanja neuronske aktivacije mogu vidjeti s psihostimulantom d-amfetaminom (Amph). Ovaj pokus je proveden na identičan način kao eksperimenti 1 i 2. Međutim, na konačnom testu, mužjacima su davani ili Amph (5 mg / kg) ili fiziološka otopina (1 mg / kg) (sc) 15 min prije žrtvovanja (n = 5 svaki). Kontrolni nesmrtni mužjaci primili su slanu otopinu ili Amph 15 minuta prije žrtvovanja. Pregled eksperimentalnih skupina korištenih u eksperimentima 1-4 nalazi se u Tablica 1.

Tablica 1      

Pregled eksperimentalnih skupina uključenih u eksperimente 1 – 4.

Priprema tkiva

Životinje su anestezirane pentobarbitalom (270 mg / kg; ip) i perfundirane transkardijalno s 5 ml slane otopine, a zatim 500 ml 4% paraformaldehida u 0.1 M fosfatnom puferu (PB). Mozgovi su uklonjeni i post-fiksirani za 1 h na sobnoj temperaturi u istom fiksativu, zatim uronjeni u 20% sukrozu i 0.01% natrij azid u 0.1 M PB i pohranjeni na 4 ° C. Koronalne sekcije (35 μm) izrezane su na mikrotom zamrzavanja (H400R, Micron, Njemačka), sakupljene u četiri paralelne serije u otopini krioprotektora (30% saharoza i 30% etilen glikola u 0.1 M PB) i pohranjeni na obrada.

imunohistokemija

Sve inkubacije provedene su na sobnoj temperaturi uz lagano miješanje. Slobodni plutajući dijelovi su oprani s 0.1 M fosfatnim puferom (PBS) između inkubacija. Sekcije su inkubirane u 1% H2O2 za 10 min, zatim se blokira u otopini za inkubaciju (PBS koji sadrži 0.1% albumina goveđeg seruma i 0.4% Triton X-100) za 1 h.

izvorna pERK / Fos

Tkivo je inkubirano preko noći sa zečjim poliklonskim antitijelom protiv p42 i p44 map kinaza ERK1 i ERK2 (pERK; 1: 400 eksperiment 1 i 19 lot 1; Cell Signal Cat # 4.000;), nakon čega slijedi 2 h inkubacije s biotiniliranim magarećim anti-zečjim IgG (3: 21; Jackson Immunoresearch Laboratories, West Grove, PA) i kompleks avidin-hren peroksidaze (ABC Elite; 9101: 1; Vector Laboratories, Burlingame, CA). Zatim je tkivo inkubirano za 1 min s biotiniliranim tiramidom (BT; 500: 1 u PBS + 1000% H2O2; Komplet pojačanja signala tiramida, NEN Life Sciences, Boston, MA) i za 30 min s konjugiranim strepavidinom Alexa 488 (1: 100; Jackson Immunoresearch Laboratories, West Grove, PA). Zatim je tkivo inkubirano preko noći sa zečjim poliklonskim antitijelima protiv c-Fos (1: 500; SC-52; Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA), nakon čega slijedi inkubacija 30 min s kozjim anti-zečjim Alexa 555 (1: Jackson Immunoresearch Laboratories, West Grove, PA). Nakon bojenja, sekcije su temeljito isprane u 200 M PB, postavljene na staklene pločice s 0.1% želatinom u ddH20 i pokriven vodenim medijom za postavljanje (Gelvatol) koji sadrži sredstvo protiv fading 1,4-diazabiciklo (2,2) oktan (DABCO; 50 mg / ml, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO). Imunohistokemijske kontrole uključivale su izostavljanje bilo kojeg ili oba primarna antitijela, što je rezultiralo odsustvom obilježavanja u odgovarajućoj valnoj duljini.

Analiza podataka

Seksualno ponašanje

Za sva četiri eksperimenta, standardni parametri za seksualni učinak su zabilježeni kao što je gore opisano i analizirani pomoću analize varijance (ANOVA). Analiza podataka o seksualnom ponašanju tijekom posljednjeg dana testa nije pokazala značajne razlike između skupina u bilo kojem od parametara seksualne izvedbe.

PERK / Fos brojanje stanica

Jedinstvene i dvostruko obilježene stanice za Fos i pERK izbrojane su na kaudalnim razinama NAc jezgre i subregija ljuske, bazolateralna amigdala (BLA), posterodorsalna medijska amigdala (MEApd), središnja amigdala (CeA), medijska preoptična jezgra (MPN), posteromedijalna posterolateralna posteljna jezgra stria terminalis (BNSTpm i BNSTpl) i prednja cingulirana područja (ACA), prelimbna (PL) i infralimbička (IL) podregija mPFC. Slike su snimljene pomoću hladne CCD kamere (Microfire, Optronics) priključene na Leica mikroskop (DM500B, Leica Microsystems, Wetzlar, Njemačka) i Neurolucida softvera (MicroBrightfield Inc) s fiksnim postavkama kamere za sve subjekte (koristeći 10x ciljeve). Koristeći softver neurolucida, područja analize definirana su na temelju orijentira (Swanson, 1998) jedinstven za svako područje mozga (vidi Slika 1). Standardna područja analize korištena su u svim područjima osim NAc jezgre i ljuske. U potonjim područjima pERK i Fos izraz nisu bili homogeni i pojavili su se u uzorcima nalik na patch. Prema tome, cijela jezgra i ljuska prikazani su na temelju znamenitosti (lateralna komora, prednji dio i otoci Calleja). Područja analize nisu se razlikovala između eksperimentalnih skupina i bila su 1.3 mm2 u NAc jezgri i ljusci. Standardna područja analize za preostala područja bila su: 1.6 mm2 u BLA, 2.5 i 2.25 mm2 u MEApd i CeA, 1.0 mm2 u MPN, 1.25 mm2 u podregijama BNST i mPFC i 3.15 mm2 u VTA. Dva dijela su brojana bilateralno za svaku moždanu regiju po životinji, a broj pojedinačnih i dvostruko označenih stanica za pERK i Fos, kao i postoci pERK stanica koje su eksprimirale Fos marker su izračunate. Za eksperimente 1, 2 i 4, uspoređeni su prosjek skupina pomoću dvosmjerne ANOVA (faktori: parenje i lijek) i Fisherov LSD za post hoc usporedbe na razini značajnosti 0.05-a. Za eksperiment 3, uspoređeni su prosječni skupovi upotrebom nesparenih t-testova na razini značajnosti 0.05.

Slika 1      

Shematski crteži i slike koje prikazuju područja analize mozga. Navedena područja analize temeljila su se na orijentirima jedinstvenim za svaku regiju mozga, nisu se razlikovala između eksperimentalnih skupina i bila su 1.25 mm2 u mPFC podregijama (a), 1.3 mm2 u ...

Slike

Digitalne slike za Slika 3 su snimljene pomoću CCD kamere (DFC 340FX, Leica) pričvršćene na Leica mikroskop (DM500B) i uvezene su u Adobe Photoshop 9.0 softver (Adobe Systems, San Jose, CA). Slike nisu izmijenjene na bilo koji način osim za podešavanje svjetline.

Slika 3      

Reprezentativne slike NAc sekcija imunološki obojene za Fos (crvene; a, d, g, j) i pERK (zelene; b, e, h, k) životinja svake pokusne skupine: Ne Spol + Sal (a, b, c) , Sex + Sal (d, e, f), No Sex + Meth (g, h, i), i Sex + Meth (j, k, l). Desni paneli su ...

REZULTATI

Neuralna aktivacija limbičkog sustava spolnim ponašanjem i upravljanjem metama

Eksperiment 1: Analiza pojedinačnih i dvostruko obilježenih stanica za FES i Met-inducirani pERK kod parenja kod muškaraca koji su primili Meth 10 minuta prije žrtvovanja otkrili su Fos u MPS, BNSTpm, NAc jezgru i ljusci, BLA, VTA, i sve podregije mPFC-a, u skladu s prethodnim istraživanjima koja pokazuju ekspresiju Fos-a induciranog parenjem u tim područjima (Baum i Everitt, 1992, Pfaus i Heeb, 1997, Veening i Coolen, 1998, Hull i sur., 1999). Meth primjena 10 minuta prije žrtvovanja induciranog pERK u NAc jezgri i ljusci, BLA, MeApd, CeA, BNSTpl i regijama mPFC, u skladu s aktivacijskim obrascima induciranim drugim psihostimulansima (Valjent i sur., 2000, Valjent i sur., 2004, Valjent i sur., 2005).

Nadalje, primijećena su tri obrasca ko-ekspresije neuronske aktivacije spolnim ponašanjem i Meth: Prvo, područja mozga su identificirana gdje su spol i lijekovi aktivirali ne-preklapajuće neuronske populacije (Tablica 2). Točnije, u CeA, MEApd, BNSTpl i mPFC, značajan porast pERK-a izazvanog lijekom (F (1,16) = 7.39-48.8; p = 0.015- <0.001) i Fos-a izazvanog spolom (F (1,16, 16.53) = 158.83–0.001; p <1,16). Međutim, u tim regijama nije bilo značajnog povećanja dvostruko obilježenih neurona u parenih muškaraca liječenih Methom. Jedina iznimka bio je MEApd, gdje je utvrđen učinak parenja na broj dvostruko obilježenih stanica (F (9.991) = 0.006; p = XNUMX). Međutim, nije bilo ukupnog učinka liječenja lijekovima, a dvostruko obilježavanje u skupinama liječenim metom nije bilo značajno veće nego u skupinama liječenim fiziološkom otopinom, pa lijek nije uzrokovao (Tablica 2). Drugo, identificirana su područja mozga gdje je živčana aktivacija inducirana samo parenjem (Tablica 3). Konkretno, MPN, BNSTpm i VTA su aktivirani samo parenjem i sadržavali su značajna povećanja u Fos (F (1,16) = 14.99-248.99; p <0.001) induciranog parenja, ali ne i Met-inducirani pERK.

Tablica 2      

Pregled pECK-a izazvanog parenjem Fos i Meth u područjima mozga gdje seks i droge aktiviraju nepreklapajuće neuronske populacije.
Tablica 3      

Pregled pECK-a izazvanog parenjem Fos i Meth u područjima mozga gdje je živčana aktivacija inducirana samo parenjem.

Konačno, pronađena su područja mozga gdje su spol i droge aktivirali preklapajuće populacije neurona (Slika 2 i and3) .3). U jezgri i ljusci NAc, BLA i ACA zabilježeni su ukupni učinci parenja (F (1,16) = 7.87-48.43; p = 0.013- <0.001) i liječenja lijekovima (F (1,16) = 6.39– 52.68; p = 0.022- <0.001), kao i interakcija između ova dva čimbenika (F (1,16) = 5.082–47.27; p = 0.04- <0.001; nema značajne interakcije u ACA) na broju stanica koje izražavaju oba pare-inducirani Fos i MET-inducirani pERK. Post hoc analiza otkrila je da je broj dvostruko obilježenih neurona bio značajno veći u muškaraca kojima je ubrizgan met-injektiran u usporedbi s muškarcima koji nisu liječeni Meth-om (p = 0.027- <0.001) ili u parnim muškarcima liječenim fiziološkom otopinom (p = 0.001- <0.001)Slika 2 i and3) .3). Kada su podaci izraženi kao postoci neurona aktiviranih lijekom, 39.2 ± 5.3% u NAc jezgri, 39.2 ± 5.8% u NAc ljusci, 40.9 ± 6.3% u BLA i 50.0 ± 5.3% ACA neurona su aktivirani i parenje i Meth.

Slika 2      

Ekspresija FOS i Meth inducirane spolom u NAC, BLA i ACA neuronima 10 min nakon primjene 4 mg / kg Meth. Srednje vrijednosti ± sem od Fos (a, d, g, j), pERK (b, e, h, k) i dvostruke (c, f, i, l) označene stanice u NAc jezgri (a, ...

Neočekivano opažanje je da je seksualno ponašanje utjecalo na metak induciran Methom. Iako je Meth značajno inducirao razine pERK-a u grupama koje su bile parjene i nedijeljene Meth-om, u NAc, BLA i ACA, obilježavanje pERK-om bilo je značajno niže kod mužjaka s injektiranim Meth-om u usporedbi s mužjacima koji su injektirani Meth-om. (Slika 2b, e, h, k; p = 0.017- <0.001). Ovo otkriće može dodatno podržati hipotezu da spol i lijekovi djeluju na iste neurone, ali također može ukazivati ​​na promjene uzrokovane parenjem u unosu ili metabolizmu lijeka, što pak uzrokuje promijenjene neuronske odgovore na Meth. Da bi se istražilo da li seksualno ponašanje uzrokuje drugačiji vremenski obrazac aktivacije lijekom, dijelovi NAc, BLA i ACA su obojeni za muškarce žrtvovane u kasnijoj točki (15 min) nakon primjene lijeka (eksperiment 2).

Eksperiment 2: Analiza pojedinačnih i dvostruko obilježenih stanica potvrdila je gore opisane nalaze da je seksualno ponašanje i naknadno izlaganje Meth 15 minuta prije žrtvovanja rezultiralo značajnim povećanjem Fos i pERK imunološkog obilježavanja u NAc jezgri i ljusci, BLA i ACA. Nadalje, značajna ko-ekspresija pERK-a induciranih parenjem Fos i Meth ponovno je pronađena u tim područjima (Slika 4; učinak parenja: F (1,12) = 15.93–76.62; p = 0.002- <0.001; učinak lijeka: F (1,12) = 14.11-54.41; p = 0.003- <0.001). Broj dvostruko obilježenih neurona u parenih muškaraca koji su ubrizgavani met-om bio je značajno veći u usporedbi s ne-uparenim muškarcima liječenim met-om (p <0.001) ili parnim fiziološkim otopinama (p <0.001). Kada su podaci izraženi u postocima neurona aktiviranih lijekom, 47.2 ± 5.4% (jezgra NAc), 42.7 ± 7.6% (ljuska NAc), 36.7 ± 3.7% (BLA) i 59.5 ± 5.1% (ACA) aktiviranih neurona parenjem također aktivirao Meth. Štoviše, pERK izazvan lijekovima nije se razlikovao između parenih i nepariranih životinja (Slika 4b, e, h, k), u svim područjima, osim za ACA (p <0.001). Ovi podaci ukazuju da seksualno ponašanje doista uzrokuje promjenu vremenskog obrasca indukcije pERK od strane Metha.

Slika 4      

Ekspresija FOS i Meth inducirane spolom u NAC, BLA i ACA neuronima 15 min nakon primjene 4 mg / kg Meth. Srednje vrijednosti ± sem od Fos (a, d, g, j), pERK (b, e, h, k) i dvostruke (c, f, i, l) označene stanice u NAc jezgri (a, ...

Neuralna aktivacija nakon seksualnog ponašanja i 1 mg / kg Meth

Do sada su rezultati pokazali da seksualno ponašanje i 4 mg / kg Meth aktiviraju preklapajuće populacije neurona u NAc jezgri i ljusci, BLA i ACA. Tistražiti utjecaj doziranja lijeka na ovo preklapanje u aktivaciji, uzorci neuralne aktivacije također su proučavani korištenjem niže doze Meth. NAc jezgra i ljuska, BLA i ACA su analizirani na aktivaciju induciranu spolom i Meth. Doista, seksualno ponašanje i kasnije izlaganje Methu rezultiralo je značajnim povećanjem Fos i pERK imunološkog obilježavanja u NAc jezgri i subregijama ljuske, BLA, kao i neuronima u ACA regiji mPFC (Slika 5). Zanimljivo, niža doza Meth rezultirala je sličnim brojem pERK obilježenih neurona kao što je inducirano 4 mg / kg Meth u četiri analizirana područja mozga. Još važnije, NAc jezgra i ljuska, BLA i ACA pokazali su značajno povećanje broja stanica s dvostrukom oznakom (Slika 5c, f, i, l) u usporedbi s muškarcima kojima nije ubrizgan metam (p = 0.003- <0.001). Kada su podaci izraženi u postotcima neurona aktiviranih lijekom, 21.1 ± 0.9% i 20.4 ± 1.8% u jezgri i ljusci NAc, 41.9 ± 3.9% u BLA i 49.8 ± 0.8% ACA neurona aktivirano je spolom i Met.

Slika 5      

Ekspresija FOS i Meth inducirane spolom u NAC, BLA i ACA neuronima 15 min nakon primjene 1 mg / kg Meth. Srednje vrijednosti ± sem od Fos (a, d, g, j), pERK (b, e, h, k) i dvostruke (c, f, i, l) označene stanice u NAc jezgri (a, ...

Neuralna aktivacija nakon seksualnog ponašanja i davanja d-amfetamina

Da bi se testiralo jesu li gornji rezultati specifični za Meth, proveden je dodatni eksperiment za proučavanje neuralne aktivacije izazvane parenjem i Amph. Analiza pojedinačnih i dvostruko obilježenih stanica za pERK i Fos pokazala je da je seksualno ponašanje i naknadna izloženost Amph rezultiralo značajnim povećanjem Fos i pERK imunološkog obilježavanja u NAc jezgri i ljusci i BLA (Slika 6; učinak parenja: F (1,15) = 7.38–69.71; p = 0.016- <0.001; učinak lijeka: F (1,15) = 4.70-46.01; p = 0.047- <0.001). Štoviše, broj dvostruko obilježenih neurona bio je značajno veći u parenih liječenih Amph-om u usporedbi s nepariranim Amph-liječenim (p = 0.009- <0.001) ili uparenih fiziološkom otopinom (p = 0.015- <0.001) muškaraca (Slika 6c, f, i). Kada su podaci izraženi kao postotci neurona aktiviranih lijekom, 25.7 ± 2.8% i 18.0 ± 3.2% u NAc jezgri i ljusci, odnosno 31.4 ± 2.0% BLA neurona aktivirani su parenjem i Amph. ACA regija mPFC-a pokazala je značajne razine Fos-a induciranih parenjem (Slika 6j; F (1,15) = 168.51; p <0.001). Međutim, za razliku od Metha, Amph nije rezultirao značajnim povećanjem razine pERK-a izazvane lijekovima u ACA (Slika 6k) ili broj dvojno obilježenih neurona u ACA (Slika 6l) u usporedbi s mužjacima koji su injektirani fiziološkom otopinom.

Slika 6      

Ekspresija FOS i Amph-inducirane spolne indukcije pERK-a u NAc, BLA i ACA neuronima 15 min nakon primjene 5 mg / kg Amph. Srednje vrijednosti ± sem od Fos (a, d, g, j), pERK (b, e, h, k) i dvostruke (c, f, i, l) označene stanice u NAc jezgri (a, ...

RASPRAVA

Trenutna studija pokazuje na staničnoj razini preklapanje između neuronske aktivacije prirodnim pojačavajućim seksualnim ponašanjem i psihostimulantom Meth. Prema tome, ovi podaci pokazuju da lijekovi ne djeluju samo na iste regije mozga koje reguliraju prirodnu nagradu, nego zapravo lijekovi aktiviraju iste stanice uključene u regulaciju prirodne nagrade. Naime, ovdje je pokazano da seksualno ponašanje i Meth ko-aktiviraju populaciju neurona u NAc jezgri i ljusci, BLA i ACA regiji mPFC-a, identificirajući potencijalna mjesta gdje Meth može utjecati na seksualno ponašanje.

Trenutni nalaz da seksualno ponašanje i primjena Metha aktiviraju preklapajuće populacije neurona u NAc, BLA i ACA je u suprotnosti s nalazima drugih studija koje pokazuju da različite populacije NAc neurona kodiraju lijekove i prirodnu nagradu.

Konkretno, elektrofiziološke studije koje su uspoređivale živčanu aktivaciju tijekom samo-primjene prirodnih nagrada (hrana i voda) i intravenski kokain pokazale su da je samouprava kokaina aktivirala diferencijalnu, ne-preklapajuću populaciju neurona koja općenito nije reagirala tijekom operantne reakcije na vodu i pojačanje hrane (92%). Samo 8% pratećih neurona pokazalo je aktivaciju i kokainom i prirodnom nagradom (Carelli i sur., 2000).

Nasuprot tome, većina (65%) stanica u NAc pokazala je aktivaciju različitim prirodnim nagradama (hrana i voda), čak i ako je jedan pojačivač bio ukusniji (saharoza) (Roop i sur., 2002).

Nekoliko je čimbenika moglo pridonijeti neusklađenosti s trenutnim rezultatima. Prvo, korišteni su različiti tehnički pristupi za istraživanje neuronske aktivnosti. Sadašnja studija koristila je neuroanatomsku metodu za otkrivanje istodobne neuralne aktivacije pomoću dva različita stimulusa koristeći dvostruku fluorescencijsku imunocitokemiju za Fos i pERK, omogućujući istraživanje aktivacije pojedinačnih stanica preko velikih raspona područja mozga. Nasuprot tome, studije koje je proveo Carelli i suradnici koristile su elektrofiziološke snimke ograničene na NAc ponašanja životinja kako bi se odgovorilo je li samouprava lijekova za zlostavljanje aktivirala isti živčani sustav koji se koristi prirodnim nagradama.

Drugo, trenutna studija istraživala je različitu prirodnu nagradu tj. Seksualno ponašanje u odnosu na prethodne studije, koje su koristile hranu i vodu u ograničenim štakorima (Carelli, 2000). Hrana i voda mogu imati manju vrijednost od parenja. Seksualno ponašanje je vrlo korisno i štakori lako oblikuju CPP na kopulaciju (Agmo i Berenfeld, 1990, Martinez i Paredes, 2001, Tenk, 2008). Premda štakori s ograničenom prehranom stvaraju CPP za vodu (Agmo i sur., 1993, Perks i Clifton, 1997) i hranu (Perks i Clifton, 1997), dAko neograničeni štakori poželjno konzumiraju i oblikuju CPP za ukusniju hranu (Jarosz i sur., 2006, Jarosz i sur., 2007).

Treće, naša su istraživanja uključila različite lijekove zlouporabe u usporedbi s prethodnim studijama, koristeći metamfetamin i amfetamin umjesto kokaina. Ovi rezultati pokazuju da je specifično Meth, iu manjoj mjeri amfetamin, rezultirao aktivacijom neurona koji su također aktivirani seksualnim ponašanjem. Iskustvo s lijekovima moglo je također utjecati na naše nalaze. Trenutne studije koristile su životinje koje su bile seksualno iskusne, ali nisu bile liječne. Nasuprot tome, elektrofiziološke studije Carellija i suradnika koristile su "dobro obučene" životinje koje su opetovano izlagane kokainu.

Stoga je moguće da je Meth-inducirana aktivacija neurona aktivirana seksualnim ponašanjem izmijenjena u štakorima koji su iskusili lijek. Međutim, preliminarne studije iz našeg laboratorija upućuju na to da je malo vjerojatno da će iskustvo droge biti glavni čimbenik kao što je seksualno ponašanje i Meth liječenje kod muškaraca koji su kronično liječeni Methom ko-aktivirali sličan postotak neurona koji su aktivirani lijekovima kao što je objavljeno u trenutnoj studiji. (20.3 ± 2.5% u NAc jezgri i 27.8 ± 1.3% u NAc ljusci; Frohmader i Coolen, neobjavljena opažanja).

Konačno, trenutna studija istražila je "izravno" djelovanje lijekova koji koriste pasivnu administraciju. Prema tome, trenutna analiza ne otkriva informacije o neuronskim krugovima koji su uključeni u traženje lijekova ili znakove koji su povezani s nagradom za lijek, već otkriva neuralnu aktivnost uzrokovanu farmakološkim djelovanjem lijeka, U prethodnim elektrofiziološkim studijama, neuronska aktivnost NAc koja se pojavila unutar sekundi pojačanog odgovora nije rezultat farmakološkog djelovanja kokaina, već uvelike ovisi o asocijativnim čimbenicima unutar paradigme samouprave (Carelli, 2000, Carelli, 2002). Naime, na živčanu aktivnost NAc utječu prezentacije podražaja neovisne o odgovoru koje su povezane s intravenskom isporukom kokaina, kao i instrumentalne nepredviđene situacije (tj. Pritiska poluge) svojstvene ovoj paradigmi ponašanja (Carelli, 2000, Carelli i Ijames, 2001, Carelli, 2002, Carelli i Wightman, 2004). Ukratko, naši nalazi ko-aktivacije prirodnom i nagradom za lijekove mogu biti specifični za aktivaciju seksualnim ponašanjem i pasivno davanje Meth i Amph.

Meth i seks su aktivirali preklapajuće populacije neurona u NAc jezgri i ljusci na način ovisan o dozi. Ko-aktivirani neuroni u NAc mogu posredovati potencijalne učinke Metha na motivaciju i nagrađivanje svojstava seksualnog ponašanja, jer lezije NAc-a narušavaju seksualno ponašanje (Liu i sur., 1998, Kippin i sur., 2004). Osim toga, ovi neuroni su potencijalno lokus za doza ovisne učinke lijeka na parenje, budući da niža Meth doza (1 mg / kg) smanjuje broj dvostruko obilježenih stanica pomoću 50% u usporedbi s višom dozom Meth (4 mg / kg). Iako ova studija ne identificira kemijski fenotip ko-aktiviranih neurona, prethodna istraživanja su pokazala da pERK i Fos ekspresija izazvana lijekom u NAc ovisi i o dopaminskim (DA) i glutamatnim receptorima (Valjent i sur., 2000, Ferguson i sur., 2003, Valjent i sur., 2005, Sun i sur., 2008). Iako nije jasno je li neuronska aktivacija u NAc ovisna o tim receptorima, to je dokazano na drugim regijama mozga, osobito u medijalnom predoptičkom području (Lumley i Hull, 1999, Dominguez i sur., 2007). TMet, može djelovati na neurone koji se također aktiviraju tijekom seksualnog ponašanja aktiviranjem dopaminskih i glutamatnih receptora. Uloga NAc glutamata u seksualnom ponašanju je trenutno nejasna, ali je dobro utvrđeno da DA igra ključnu ulogu u motivaciji za seksualno ponašanje. (Hull i sur., 2002, Hull i sur., 2004, Pfaus, 2009. (monografija).). Istraživanja mikrodijalize prijavila su povećanje izlijevanja NAc DA tijekom privlačnih i konzumirajućih faza muškog seksualnog ponašanja (Fiorino i Phillips, 1999a, Lorrain i sur., 1999) i mezolimbički efluks koreliran je s olakšavanjem inicijacije i održavanja spolnog ponašanja štakora (Pfaus i Everitt, 1995). Nadalje, DA manipulacijske studije pokazuju DA antagoniste u NAc inhibiraju seksualno ponašanje, dok agonisti olakšavaju inicijaciju seksualnog ponašanja.r (Everitt i sur., 1989, Pfaus i Phillips, 1989). Stoga, Meth može utjecati na motivaciju za seksualno ponašanje putem aktivacije DA receptora.

Za razliku od NAc, broj dvostruko obilježenih stanica u BLA i ACA ostao je relativno nepromijenjen bez obzira na Meth dozu. BLA je kritična za diskretno asocijativno učenje i snažno je uključena u uvjetovano jačanje i vrednovanje nagrađivanja tijekom instrumentalnog odgovora (Everitt i sur., 1999, Cardinal i sur., 2002, Vidi, 2002). Štakori s oštećenjem BLA pokazuju smanjenu polugu pritiska za uvjetovane stimulanse uparene s hranom (Everitt i sur., 1989) ili seksualno pojačanje (Everitt i sur., 1989, Everitt, 1990). Nasuprot tome, ova manipulacija ne utječe na konzumacijsku fazu hranjenja i seksualnog ponašanja (Cardinal i sur., 2002). BLA također igra ključnu ulogu u pamćenju uvjetovanih podražaja povezanih s podražajima lijekova (Grace i Rosenkranz, 2002, Laviolette i Grace, 2006). Lezije ili farmakološke inaktivacije BLA blokiraju stjecanje (Whitelaw i sur., 1996) i izraz (Grimm i See, 2000) uvjetovan povratak kokaina, ali ne utječe na proces davanja lijeka. Osim toga, Amph infundiran izravno u BLA dovodi do pojačanog vraćanja lijeka u prisutnost uvjetovanih znakova (Vidi i sur., 2003). Stoga je moguće da prijenos DA DA pojačan psihostimulansom rezultira pojačanom emocionalnom istaknutošću i traženjem (Ledford i sur., 2003) seksualne nagrade, pridonoseći tako povećanom seksualnom nagonu i želji koju su prijavili zlotvori Meth (Semple i sur., 2002, Green i Halkitis, 2006).

U ACA, neuronska aktivacija spolno aktiviranih neurona bila je neovisna o dozi i specifična za Meth, kao što nije bila uočena kod Amph. Iako Meth i Amph imaju slična strukturna i farmakološka svojstva, Meth je snažniji psihostimulant od Amph s dugotrajnim učincima (NIDA, 2006). Istraživanja Goodwin i sur. pokazali su da Meth generira veći izljev DA i djelotvornije inhibira klirens lokalno primijenjenog DA u NAc štakora nego u Amph. Ove karakteristike mogu doprinijeti ovisnosti o Methu u usporedbi s Amph (Goodwin i sur., 2009), a možda i razlike u neuralnoj aktivaciji između dva lijeka. Međutim, nije jasno jesu li različiti obrasci rezultata uzrokovani razlikama u učinkovitosti između lijekova ili problema potencije koji se odnose na upotrijebljene doze i potrebna su daljnja istraživanja.

Ko-aktivacija pomoću Metha i spola nije uočena u drugim podregijama mPFC (IL i PL). Kod štakora je ACA opsežno proučavana pomoću zadataka apetita, podupirući ulogu u asocijacijama stimulans-pojačivač (Everitt i sur., 1999, Vidi, 2002, Cardinal i sur., 2003). Postoji mnogo dokaza da je mPFC uključen u žudnju za drogom i povratak u potragu za drogom i ponašanje lijekova kod ljudi i štakora. (Grant i sur., 1996, Childress et al., 1999, Capriles i sur., 2003, McLaughlin i See, 2003, Shaham i sur., 2003, Kalivas i Volkow, 2005). jaU skladu s tim, predloženo je da disfunkcija mPFC-a uzrokovana ponavljanim izlaganjem lijekovima zlouporabe može biti odgovorna za smanjenu kontrolu impulsa i povećano ponašanje usmjereno na lijekove kao što je to uočeno kod mnogih ovisnika (Jentsch i Taylor, 1999). Nedavni podaci iz našeg laboratorija pokazali su da lezije mPFC-a rezultiraju kontinuiranim traženjem seksualnog ponašanja kada je to povezano s averzivnim stimulusom (Davis i sur., 2003). Iako ova studija nije istraživala ACA, ona podupire hipotezu da mPFC (i ACA specifično) posreduju učinke Metha na gubitak inhibitorne kontrole nad seksualnim ponašanjem kao što su izvijestili zlostavljači Meth (Salo i sur., 2007).

Zaključno, ove studije čine ključni prvi korak prema boljem razumijevanju načina na koji droge djeluju na neuronske putove koji obično posreduju prirodne nagrade. Štoviše, ovi rezultati pokazuju da, za razliku od sadašnjeg uvjerenja da droge zlostavljanja ne aktiviraju iste stanice u mezolimbičkom sustavu kao prirodnu nagradu, Meth, iu manjoj mjeri Amph, aktiviraju iste stanice kao seksualno ponašanje. Zauzvrat, ove ko-aktivirane neuralne populacije mogu utjecati na traženje prirodne nagrade nakon izlaganja lijeku. Konačno, rezultati ove studije mogu značajno pridonijeti našem razumijevanju opće ovisnosti. Usporedbe sličnosti i razlika, kao i promjene u neuronskoj aktivaciji mezolimbičkog sustava izazvane seksualnim ponašanjem u odnosu na lijekove zlouporabe, mogu dovesti do boljeg razumijevanja zlouporabe tvari i povezanih promjena u prirodnoj nagradi.

Zahvale

Ovo je istraživanje podržano grantovima Nacionalnog instituta za zdravlje R01 DA014591 i kanadskim institutima za istraživanje zdravlja RN 014705 za LMC.

KRATICE

  • abeceda
  • kompleks avidin-biotin – peroksidaza hrena
  • ACA
  • prednje područje cingulacije
  • Amph
  • d-amfetamin
  • BLA
  • bazolateralna amigdala
  • BNSTpl
  • posterolateralna jezgra strie terminalis
  • BNSTpm
  • posteromedijalna jezgra strie terminalis
  • BT
  • biotinilirani tiramid
  • CEA
  • cental amygdala
  • CPP
  • uvjetovanog mjesta
  • E
  • ejakulacija
  • EL
  • latencija ejakulacije
  • IF
  • infralimbičko područje
  • IL
  • latencija intromisije
  • IM
  • puštanje unutra
  • M
  • montirati
  • MAP kinaza
  • protein-aktivirana protein kinaza
  • MEApd
  • posterodorsalna medijska amigdala
  • Meth
  • metamfetamin
  • ML
  • latencija montiranja
  • mPFC
  • srednji prefrontalni korteks
  • MPN
  • medijska preoptična jezgra
  • Nac
  • nucleus Accumbens
  • PB
  • fosfatni pufer
  • PBS
  • fosfatno puferirana slana otopina
  • PEI
  • interval nakon ejakulacije
  • povlastica
  • fosforilirani MAP kinaza
  • PL
  • predlimično područje
  • VTA
  • ventralno tegmentalno područje

fusnote

Izjava izdavača: Ovo je PDF datoteka neobjavljenog rukopisa koji je prihvaćen za objavljivanje. Kao uslugu našim klijentima pružamo ovu ranu verziju rukopisa. Rukopis će biti podvrgnut kopiranju, slaganju i pregledu rezultirajućeg dokaza prije nego što bude objavljen u konačnom obliku. Imajte na umu da se tijekom proizvodnog procesa mogu otkriti pogreške koje mogu utjecati na sadržaj, a sve pravne izjave koje se odnose na časopis pripadaju.

Reference

  1. Agmo A. Spolno ponašanje mužjaka štakora. Mozak Res Brain Res Protoc. 1997; 1: 203-209. [PubMed]
  2. Agmo A, Berenfeld R. Jačanje svojstava ejakulacije kod mužjaka štakora: uloga opioida i dopamina. Behav Neurosci. 1990; 104: 177-182. [PubMed]
  3. Agmo A, Federman I, Navarro V, Padova M, Velazquez G. Nagrada i pojačanje proizvedeno vodom za piće: Uloga opioida i podtipova dopaminskih receptora. Pharmacol Biochem Behav. 1993; 46 [PubMed]
  4. Balfour ME, Yu L, Coolen LM. Seksualno ponašanje i spolni aspekti okoliša aktiviraju mezolimbički sustav kod mužjaka štakora. Neuropsvchopharmacologv. 2004; 29: 718-730. [PubMed]
  5. Baum MJ, Everitt BJ. Povećana ekspresija c-fos u medijalnom predoptičkom području nakon parenja kod mužjaka štakora: Uloga aferentnih ulaza iz medijalne amigdale i središnjeg središnjeg polja srednjeg mozga. Neuroscience. 1992; 50: 627-646. [PubMed]
  6. Capriles N, Rodaros D, Sorge RE, Stewart J. Uloga prefrontalnog korteksa u vraćanju kokaina u stres i kokain u potrazi za kokainom u štakora. Psihofarmakologija (Berl) 2003; 168: 66 – 74. [PubMed]
  7. Kardinal RN, Parkinson JA, Dvorana J, Everitt BJ. Emocije i motivacija: uloga amigdale, ventralnog striatuma i prefrontalnog korteksa. Neuroznanost i bio-bihevioralni pregledi. 2002; 26: 321–352. [PubMed]
  8. Kardinal RN, Parkinson JA, Marbini HD, Toner AJ, Bussey TJ, Robbins TW, Everitt BJ. Uloga prednjeg cingularnog korteksa u kontroli ponašanja Pavlovovim uvjetovanim stimulusima kod štakora. Bihevioralna neuroznanost. 2003; 117: 566-587. [PubMed]
  9. Carelli RM. Aktivacija akumbensovog okidanja stanica stimulansima povezanim s isporukom kokaina tijekom samouprave. Sinapsa. 2000; 35: 238-242. [PubMed]
  10. Carelli RM. Nucleus accumbens puca iz stanica tijekom ciljno usmjerenog ponašanja kokaina naspram 'prirodnog' pojačanja. Fiziologija i ponašanje. 2002; 76: 379–387. [PubMed]
  11. Carelli RM, Ijames SG. Selektivna aktivacija neurona akumbensa pomoću podražaja povezanih s kokainom tijekom višestrukog rasporeda vode / kokaina. Istraživanje mozga. 2001; 907: 156-161. [PubMed]
  12. Carelli RM, Ijames SG, Crumling AJ. Dokazi da odvojeni neuronski krugovi u nucleus accumbens kodiraju kokain protiv "prirodne" (vode i hrane) nagrade. J Neurosci. 2000; 20: 4255-4266. [PubMed]
  13. Carelli RM, Wightman RM. Funkcionalna mikrocirkuriranja u akumbensima koji su u podlozi ovisnosti o drogama: uvidi iz signaliziranja u stvarnom vremenu tijekom ponašanja. Aktualno mišljenje u neurobiologiji. 2004; 14: 763-768. [PubMed]
  14. Carelli RM, Wondolowski J. Selektivno kodiranje kokaina nasuprot prirodnih nagrada od strane neurona nucleus accumbens nije povezano s kroničnom izloženošću lijekovima. J Neurosci. 2003; 23: 11214-11223. [PubMed]
  15. Chang JY, Zhang L, Janak PH, Woodward DJ. Neuronski odgovori u prefrontalnom korteksu i nucleus accumbens tijekom samouprave heroinom u slobodno pokretnih štakora. Brain Res. 1997; 754: 12-20. [PubMed]
  16. Chen BT, Bowers MS, Martin M, Hopf FW, Guillory AM, Carelli RM, Chou JK, Bonci A. Kokain, ali ne i prirodna nagrada Samoupravljanje i pasivna infuzija kokaina stvara trajni LTP u VTA. Neuron. 2008; 59: 288-297. [PMC slobodan članak] [PubMed]
  17. Chen PC, Chen JC. Poboljšana aktivnost Cdk5 i P35 translokacija u Ventral Striatum akutnih i kroničnih metamfetamina tretiranih štakora. Neuropsvchopharmacologv. 2004; 30: 538-549. [PubMed]
  18. Childress AR, Mozley PD, McElgin W, Fitzgerald J, Reivich M, O'Brien CP. Limbička aktivacija tijekom kokainske žudnje uzrokovane migom. Am J Psihijatrija. 1999; 156: 11-18. [PMC slobodan članak] [PubMed]
  19. Choe ES, Chung KT, Mao L, Wang JQ. Amfetamin povećava fosforilaciju izvanstaničnih signalno-reguliranih kinaza i transkripcijskih faktora u striatumu štakora preko metabotropnih glutamatnih receptora skupine I. Neuropsvchopharmacologv. 2002; 27: 565-575. [PubMed]
  20. Choe ES, Wang JQ. CaMKII regulira fosforilaciju uzrokovanu amfetaminom ERK1 / 2 u striatnim neuronima. Neiirorepoii. 2002; 13: 1013-1016. [PubMed]
  21. Davis JF, Loos M, Coolen LM. Društvo za bihevioralnu neuroendokrinologiju. Vol. 44. Cincinnati, Ohio: Hormoni i ponašanje; 2003. Lezije medijalnog prefrontalnog korteksa ne ometaju seksualno ponašanje kod mužjaka štakora; str. 45.
  22. Di Chiara G, Imperato A. Lijekovi koje ljudi zloupotrebljavaju preferencijalno povećavaju koncentracije sinaptičkog dopamina u mezolimbičkom sustavu slobodno pokretnih štakora. Proc Natl Acad Sci US A. 1988, 85: 5274-5278. [PMC slobodan članak] [PubMed]
  23. Dominguez JM, Balfour ME, Lee HS, Brown HJ, Davis BA, Coolen LM. Parenje aktivira NMDA receptore u medijalnom predoptičkom području mužjaka štakora. Bihevioralna neuroznanost. 2007; 121: 1023-1031. [PubMed]
  24. Elifson KW, Klein H, Sterk CE. Prediktori seksualnog rizika kod novih korisnika droga. Časopis istraživanja seksa. 2006; 43: 318-327. [PubMed]
  25. Ellkashef A, Vocci F, Hanson G, White J, Wickes W, Tiihonen J. Farmakoterapija ovisnosti o metamfetaminu: ažuriranje. Zlouporaba tvari. 2008; 29: 31-49. [PMC slobodan članak] [PubMed]
  26. Everitt BJ. Seksualna motivacija: neuronska i bihevioralna analiza mehanizama koji podupiru apetitne i kopulatorne odgovore muških štakora. Neurosci Biobehav Rev. 1990; 14: 217 – 232. [PubMed]
  27. Everitt BJ, Cador M, Robbins TW. Interakcije između amigdale i trbušnog striatuma u asocijacijama stimulus-nagrada: Studije pomoću rasporeda seksualnog pojačanja drugog reda. Neuroscience. 1989; 30: 63-75. [PubMed]
  28. Everitt BJ, Fray P, Kostarczyk E, Taylor S, Stacey P. Istraživanja o instrumentalnom ponašanju kod seksualnog pojačanja kod mužjaka štakora (Rattus norvegicus): I. Kontrola kratkim vizualnim podražajima u kombinaciji s receptivnom ženkom. J Comp Psychol. 1987; 101: 395-406. [PubMed]
  29. Everitt BJ, Parkinson JA, Olmstead MC, Arroyo M, Robledo P, Robbins TW. Asocijativni procesi u ovisnosti i nagradi Uloga amigdala-ventralnih stratatalnih podsustava. Anali Akademije znanosti u New Yorku. 1999; 877: 412-438. [PubMed]
  30. Everitt BJ, Stacey P. Studije instrumentalnog ponašanja kod seksualnog pojačanja kod mužjaka štakora (Rattus norvegicus): II. Učinci lezija preoptičkog područja, kastracija i testosteron. J Comp Psychol. 1987; 101: 407-419. [PubMed]
  31. Feltenstein MW, Vidi RE. The neurocircuitry od ovisnosti: pregled. Br J Pharmacol. 2008; 154: 261-274. [PMC slobodan članak] [PubMed]
  32. Ferguson SM, Norton CS, Watson SJ, Akil H, Robinson TE. Ekspresija c-fos mRNA izazvane amfetaminom u kaudat-putamenu: učinci antagonista DA i NMDA receptora variraju kao funkcija neuronskog fenotipa i konteksta okoliša. Journal of Neurochemistry. 2003; 86: 33-44. [PubMed]
  33. Fiorino DF, Coury A, Phillips AG. Dinamičke promjene u izlučivanju nukleusa accumbens dopamina tijekom Coolidge efekta kod mužjaka štakora. J Neurosci. 1997; 17: 4849-4855. [PubMed]
  34. Fiorino DF, Phillips AG. Olakšavanje seksualnog ponašanja i poboljšanog dopaminskog izlijevanja u nuklearnim udarcima muških štakora nakon senzitivizacije ponašanja izazvane D-amfetaminom. J Neurosci. 1999a; 19: 456-463. [PubMed]
  35. Fiorino DF, Phillips AG. Olakšavanje seksualnog ponašanja kod mužjaka štakora nakon d-amfetamin-inducirane senzibilizacije ponašanja. Psihofarmakologija. 1999b; 142: 200-208. [PubMed]
  36. Goodwin JS, Larson GA, Swant J, Sen N, Javitch JA, Zahniser NR, De Felice LJ, Khoshbouei H. Amfetamin i metamfetamin različito utječu na dopaminske transportere in vitro i in vivo. J Biol Chem. 2009; 284: 2978-2989. [PMC slobodan članak] [PubMed]
  37. Grace AA, Rosenkranz JA. Regulacija uvjetovanih odgovora neurona bazolateralne amigdale. Fiziologija i ponašanje. 2002; 77: 489–493. [PubMed]
  38. Grant S, London ED, Newlin DB, Villemagne VL, Liu X, Contoreggi C, Phillips RL, Kimes AS, Margolin A. Aktiviranje memorijskih krugova tijekom žudnje za kokainom izazvanog cue-om. Proc Natl Acad Sci US A. 1996, 93: 12040-12045. [PMC slobodan članak] [PubMed]
  39. Zelena AI, Halkitis PN. Kristalni metamfetamin i seksualna društvenost u urbanoj homoseksualnoj supkulturi: izborni afinitet. Kultura, zdravlje i seksualnost. 2006; 8: 317–333. [PubMed]
  40. Grimm JW, vidi RE. Disocijacija primarnih i sekundarnih limbičkih jezgara relevantnih za nagrađivanje u životinjskom modelu relapsa. Neuropsvchopharmacologv. 2000; 22: 473-479. [PubMed]
  41. Hull EM, Lorrain DS, Du J, Matuszewich L, Lumley LA, Putnam SK, Moses J. Interakcije hormon-neurotransmitera u kontroli seksualnog ponašanja. Istraživanje bihevioralnog mozga. 1999; 105: 105-116. [PubMed]
  42. Trup EM, Meisel RL, Sachs BD. Muško seksualno ponašanje. U: Pfaff DW, i sur., Urednici. Hormoni u mozgu i ponašanju. San Diego, CA: Elsevier Science (SAD); 2002. 1-138.
  43. Hull EM, Muschamp JW, Sato S. Dopamin i serotonin: utjecaji na muško spolno ponašanje. Fiziologija i ponašanje. 2004; 83: 291–307. [PubMed]
  44. Ishikawa K, Nitta A, Mizoguchi H, Mohri A, Murai R, Miyamoto Y, Noda Y, Kitaichi K, Yamada K, Nabeshima T. Učinci jednostruke i ponovljene primjene metamfetamina ili morfina na ekspresiju gena neuroglikana u mozgu štakora. International Journal of Neuropsychopharmacology. 2006; 9: 407-415. [PubMed]
  45. Jarosz PA, Kessler JT, Sekhon P, Coscina DV. Uređene preferencije mjesta (CPP) prema visoko kaloričnim “snack hranom” u sojevima štakora genetski su izložene otpornosti na pretilost uzrokovanu dijetom: rezistencija na naltreksonsku blokadu. Biokemija i ponašanje u farmakologiji. 2007; 86: 699-704. [PubMed]
  46. Jarosz PA, Sekhon P, Coscina DV. Utjecaj antagonizma opioida na uvjetovane preferencije mjesta za užinu. Biokemija i ponašanje u farmakologiji. 2006; 83: 257-264. [PubMed]
  47. Jentsch JD, Taylor JR. Impulzivnost koja je posljedica frontostriatalne disfunkcije u zlouporabi droga: implikacije za kontrolu ponašanja podražajima povezanih s nagradom. Psihofarmakologija (Berl) 1999; 146: 373 – 390. [PubMed]
  48. Kalivas PW, Volkow ND. Neuralna osnova ovisnosti: patologija motivacije i izbora. Am J Psihijatrija. 2005; 162: 1403-1413. [PubMed]
  49. Kelley AE. Memorija i ovisnost: zajednički neuronski sklopovi i molekularni mehanizmi. Neuron. 2004; 44: 161-179. [PubMed]
  50. Kippin TE, Sotiropoulos V, Badih J, Pfaus JG. Suprotstavljene su uloge nukleusa accumbens i prednjeg bočnog područja hipotalamusa u kontroli seksualnog ponašanja kod mužjaka štakora. European Journal of Neuroscience. 2004; 19: 698-704. [PubMed]
  51. Laviolette SR, Grace AA. Kanabinoidi potenciraju emocionalno učenje plastičnosti u neuronima medijalnog prefrontalnog korteksa kroz bazolateralne amigdalne ulaze. J Neurosci. 2006; 26: 6458-6468. [PubMed]
  52. Ledford CC, Fuchs RA, vidi RE. Pojačano ponovno uspostavljanje ponašanja koje traži kokain nakon infuzije D-amfetamina u bazolateralnu amigdalu. Neuropsvchopharmacologv. 2003; 28: 1721-1729. [PubMed]
  53. Lett BT. Ponavljano izlaganje se pojačava, a ne umanjuje učinak amfetamina, morfina i kokaina. Psihofarmakologija (Berl) 1989; 98: 357 – 362. [PubMed]
  54. Liu YC, Sachs BD, Salamone JD. Seksualno ponašanje kod mužjaka štakora nakon radiofrekventnih ili dopaminskih oštećenja u nucleus accumbens. Pharmacol Biochem Behav. 1998; 60: 585-592. [PubMed]
  55. Lorrain DS, Riolo JV, Matuszewich L, Hull EM. Lateralni hipotalamični serotonin inhibira nukleusne akne Dopamin: implikacije za seksualnu zbunjenost. J Neurosci. 1999; 19: 7648-7652. [PubMed]
  56. Lumley LA, Hull EM. Učinci antagonista D1-a i seksualnog iskustva na kopulacijsko-induciranu Fos-sličnu imunoreaktivnost u medijalnom preoptičkom jezgru. Istraživanje mozga. 1999; 829: 55-68. [PubMed]
  57. Martinez I, Paredes RG. Samo se parenje u vlastitom ritmu nagrađuje u štakora oba spola. Horm Behav. 2001; 40: 510-517. [PubMed]
  58. McLaughlin J, vidi RE. Selektivna inaktivacija dorsomedijalnog prefrontalnog korteksa i bazolateralne amigdale slabi uvjetovano povratno uspostavljanje ponašanja potlačenog kokaina u štakora. Psihofarmakologija (Berl) 2003; 168: 57 – 65. [PubMed]
  59. Mitchell JB, Stewart J. Olakšavanje seksualnog ponašanja kod mužjaka štakora u prisutnosti podražaja prethodno uparenih sa sistemskim injekcijama morfija. Biokemija i ponašanje u farmakologiji. 1990; 35: 367-372. [PubMed]
  60. Mizoguchi H, Yamada K, Mizuno M, Mizuno T, Nitta A, Noda Y, Nabeshima T. Propisi za nagrađivanje metamfetamina putem izvanstanične signalno-regulirane kinaze 1 / 2 / ets-like gene-1 signalne staze aktivacijom dopamin NIDA ( Serija izvješća o istraživanju: Zlouporaba metamfetamina i dodatak 2006 NIH Broj izdanja 06-4210.PubMed]
  61. Perks SM, Clifton PG. Revalorizacija pojačala i uvjetovana prednost mjesta. Fiziologija i ponašanje. 1997; 61: 1-5. [PubMed]
  62. Pfaus JG. Putovi seksualne želje. Časopis seksualne medicine. 2009; 6: 1506-1533. [PubMed]
  63. Pfaus JG, Everitt BJ. Psihofarmakologija seksualnog ponašanja. U: Bloom FE, Kupfer DJ, urednici. Psihofarmakologija: četvrta generacija napretka. New York: Raven; 1995. 743-758.
  64. Pfaus JG, Heeb MM. Implikacije neposredne i rane indukcije gena u mozgu nakon seksualne stimulacije ženskih i muških glodavaca. Bilten o istraživanju mozga. 1997; 44: 397-407. [PubMed]
  65. Pfaus JG, Kippin TE, Centeno S. Kondicioniranje i seksualno ponašanje: pregled. Horm Behav. 2001; 40: 291-321. [PubMed]
  66. Pfaus JG, Phillips AG. Diferencijalni učinci antagonista dopaminskih receptora na seksualno ponašanje mužjaka štakora. Psihofarmakologija. 1989; 98: 363-368. [PubMed]
  67. Pierce RC, Kumaresan V. Mezolimbički dopaminski sustav: konačni zajednički put za pojačavanje učinka zlouporabe droga? Neuroznanost i bio-bihevioralni pregledi. 2006; 30: 215-238. [PubMed]
  68. Pitcher KK, Balfour ME, Lehman MN, Richtand NM, Yu L, Coolen LM. Seksualno iskustvo inducira funkcionalnu i strukturalnu plastičnost mezolimbičkog sustava. Biološka psihijatrija. 2009 U tisku.
  69. Ranaldi R, Pocock D, Zereik R, Wise RA. Fluktuacije dopamina u nukleusu accumbens tijekom održavanja, izumiranja i ponovnog uspostavljanja intravenske samouprave D-amfetamina. J Neurosci. 1999; 19: 4102-4109. [PubMed]
  70. Rawson RA, Washton A, Domier CP, Reiber C. Lijekovi i spolni učinci: uloga vrste droge i spol. Časopis za liječenje zlouporabe droga. 2002; 22: 103-108. [PubMed]
  71. Robertson GS, Pfaus JG, Atkinson LJ, Matsumura H, Phillips AG, Fibiger HC. Seksualno ponašanje povećava ekspresiju c-fos u prednjem mozgu mužjaka štakora. Brain Res. 1991; 564: 352-357. [PubMed]
  72. Roop RG, Hollander RJ, Carelli RM. Aktivnost aktivira tijekom višestrukog rasporeda za pojačanje vode i saharoze kod štakora. Sinapsa. 2002; 43: 223-226. [PubMed]
  73. Salo R, Nordahl TE, Natsuaki Y, Leamon MH, Galloway GP, Waters C, Moore CD, Buonocore MH. Kontrola pozornosti i razine metabolita mozga u zlorabiteljima metamfetamina. Biološka psihijatrija. 2007; 61: 1272-1280. [PubMed]
  74. Schilder AJ, Lampinen TM, Miller ML, Hogg RS. Kristalni metamfetamin i ekstazi razlikuju se u odnosu na nesiguran seks među mladim gej muškarcima. Kanadski časopis javnog zdravlja. 2005; 96: 340-343. [PubMed]
  75. Pogledajte RE. Neuralni supstrati uvjetovanog povratka na ponašanje koje traži lijek. Biokemija i ponašanje u farmakologiji. 2002; 71: 517-529. [PubMed]
  76. Vidi RE, Fuchs RA, Ledford CC, McLaughlin J. ovisnost o drogama, relaps i amigdala. Anali Akademije znanosti u New Yorku. 2003; 985: 294-307. [PubMed]
  77. Semple SJ, Patterson TL, Grant I. Motivacije povezane s upotrebom metamfetamina među HIV-om muškaraca koji imaju seksualne odnose s muškarcima. Časopis za liječenje zlouporabe droga. 2002; 22: 149-156. [PubMed]
  78. Shaham Y, Shalev U, Lu L, De Wit H, Stewart J. Model povratka lijeka u povrate: povijest, metodologija i glavni nalazi. Psihofarmakologija (Berl) 2003; 168: 3 – 20. [PubMed]
  79. Shippenberg TS, Heidbreder C. Senzibilizacija na uvjetovane učinke kokaina: farmakološke i vremenske značajke. J Pharmacol Exp Ther. 1995; 273: 808-815. [PubMed]
  80. Shippenberg TS, Heidbreder C, Lefevour A. Senzibilizacija na uvjetovane učinke morfija: farmakologija i vremenske značajke. Eur J Pharmacol. 1996; 299: 33-39. [PubMed]
  81. Somlai AM, Kelly JA, McAuliffe TL, Ksobiech K, Hackl KL. Prediktori rizika seksualnog ponašanja na HIV u uzorku zajednice injekcija muškaraca i žena koje koriste droge. AIDS i ponašanje. 2003; 7: 383-393. [PubMed]
  82. Springer A, Peters R, Shegog R, White D, Kelder S. Metamfetamin i ponašanje seksualnog rizika u američkim srednjoškolcima: Nalazi iz Nacionalnog istraživanja o rizicima. Preventivna znanost. 2007; 8: 103-113. [PubMed]
  83. Sun WL, Zhou L, Hazim R, Quinones-Jenab V, Jenab S. Efekti dopaminskih i NMDA receptora na kokainom induciranu Fos ekspresiju u striatumu Fischer štakora. Istraživanje mozga. 2008-1243: 1-9. [PMC slobodan članak] [PubMed]
  84. Swanson LW, urednik. Karte mozga: struktura mozga štakora. Amsterdam: Elsevier znanost; 1998.
  85. Tenk CM, Wilson H, Zhang Q, Pitchers KK, Coolen LM. Seksualna nagrada kod mužjaka štakora: Učinci seksualnog iskustva na uvjetovanoj preferenciji mjesta povezanom s ejakulacijama i intromisijama. Horm Behav. 2008 [PMC slobodan članak] [PubMed]
  86. Valjent E, Corvol JC, stranice C, Besson MJ, Maldonado R, Caboche J. Uključivanje kaskadne kinaze izvanstaničnog signala za svojstva koja nagrađuju kokain. J Neurosci. 2000; 20: 8701-8709. [PubMed]
  87. Valjent E, stranice C, Herve D, Girault JA, Caboche J. Lijekovi koji izazivaju ovisnost i koji ne izazivaju ovisnost izazivaju jasne i specifične obrasce aktivacije ERK u mozgu miša. Eur J Neurosci. 2004; 19: 1826-1836. [PubMed]
  88. Valjent E, Pascoli V, Svenningsson P, Paul S, Enslen H, Corvol JC, Stipanovich A, Caboche J, Lombroso PJ, Nairn AC, Greengard P, Herve D, Girault JA. Regulacija kaskade proteinske fosfataze omogućuje konvergentne dopaminske i glutamatne signale da aktiviraju ERK u striatumu. Proc Natl Acad Sci US A. 2005, 102: 491-496. [PMC slobodan članak] [PubMed]
  89. Vanderschuren LJ, Kalivas PW. Promjene u dopaminergičkom i glutamatergičkom prijenosu u indukciji i izražavanju senzibilizacije ponašanja: kritički pregled predkliničkih studija. Psihofarmakologija (Berl) 2000; 151: 99 – 120. [PubMed]
  90. Veening JG, Coolen LM. Neuralna aktivacija nakon seksualnog ponašanja u mozgu muškog i ženskog štakora. Istraživanje bihevioralnog mozga. 1998; 92: 181-193. [PubMed]
  91. Whitelaw RB, Markou A, Robbins TW, Everitt BJ. Eksitotoksične lezije bazolateralne amigdale ometaju stjecanje ponašanja koje traži kokain prema rasporedu pojačanja drugog reda. Psihofarmakologija. 1996; 127: 213-224. [PubMed]
  92. Mudro RA. Neurobiologija ovisnosti. Aktualno mišljenje u neurobiologiji. 1996; 6: 243-251. [PubMed]