A ventrális tegmentális területen a dopaminerg neuronok endogén opioid által kiváltott neuroplasticitása befolyásolja a természetes és opiát jutalmat (2014)

MEGJEGYZÉSEK: A DeltaFosB tanulmányok gyakran utalunk arra, hogy összpontosítsunk az atommag elkeveredik (jutalomközpont), és megállapította, hogy a szex nagyjából ugyanazokat az agyi mechanizmusokat bontja ki, mint a met és a kokain. Ugyanezen kutató mérföldkő tanulmányából (Természetes és drogdíjakról szóló törvény a közös neurális plaszticitási mechanizmusokról a ΔFosB-vel kulcs mediátorként (2013)):

Így a természetes és a gyógyszeres jutalmak nem csak ugyanazon az idegpályán konvergálnak, hanem ugyanazon molekuláris mediátorokon és valószínűleg a Nucleus Accumbens ugyanazon idegsejtjein keresztül, hogy befolyásolják az ösztönző nyálat és a kétféle jutalom „vágyát”.

Az elvétel: a met, a kokain és a nemek ugyanazokat az alapvető dolgokat teszik, mint az ugyanolyan idegsejtek a jutalmazási központban (nucleus accumbens), bármit másként is csinálhatnak máshol az agyban. Ez megszüntette a szokásos beszédpontot, hogy a természeti jutalmak és a kábítószerek különböznek a mechanizmusok és hatások között.

Ez az új tanulmány azt vizsgálta, hogy a nemek mit tesznek a VTA-val. A VTA-ban kezdődnek a dopamint termelő idegsejtek - és elágaznak a nucleus accumbens, a frontális kéreg és az amygdala felé. Alapvetően a VTA a dopamin legnagyobb részének forrása (kútforrása). Nézze meg ezt a 2 képet a jutalomkörről: Pic1, Pic2

A kutatók azt találták, hogy a szex (csúcspont) a VTA sejtjeinek ideiglenes zsugorodását okozza (férfiaknál). Sejtestek és dendritjeik az agy szürke anyagát tartalmazzák. Pontosan ez a heroin-függőség a VTA-hoz (nem egyszeri heroin-használat, hanem krónikus heroin-használat). Ne feledje, hogy ez a VTA-sejtek azonos zsugorodása emberi heroin-függőkben fordul elő.

A nemek által kiváltott sejtek zsugorodása legalább 7 napig tart. A nemek által kiváltott változások normalizálódtak az 30 napokban, de a kutatók csak az 1, az 7 és az 30 napokat értékelték.

A sejttestek zsugorodása a heroinfüggőségben alacsonyabb dopaminszintet eredményez a nucleus accumbensben - vagy amit úgy hívunk desensitization. A kutatók morfiumot adtak a patkányoknak, hogy értékeljék a válaszukat (nem után), de semmi sem történt. Általában a patkányok nagyon szeretik a morfiumot, de itt ideiglenesen érzéketlenné váltak. Röviden, az ejakuláció utáni patkányok jutalomköre nem reagált az alacsony heroinszintre. A kutatók feltételezték, hogy nagyobb adagokra lesz szükség a „normális” patkányreakció kiváltásához.

Összefoglalva: A szex (ideiglenesen) pontosan ugyanazt csinálja a VTA-ban, mint a heroinfüggőség: a dopamint termelő idegsejt testek zsugorodása. Ez alacsonyabb dopaminszinthez vezet a jutalomközpontban, és kevésbé reagál a kábítószerekre - és legalább 7 napra van szükség ahhoz, hogy a patkány agya helyreálljon.

 

J Neurosci. 2014 Jun 25;34(26):8825-36. doi: 10.1523 / JNEUROSCI.0133-14.2014.

kancsók KK1, Coppens CM2, Beloate LN3, Fuller J2, Van S2, Frohmader KS2, Laviolette SR2, Lehman MN4, Coolen LM5.

Absztrakt

A természetes jutalom és a visszaélés kábítószerei a mesolimbikus úton konvergálnak, és aktiválják a nukleáris plaszticitás közös mechanizmusát a magban. Az opiátok krónikus expozíciója a ventrális tegmentális terület (VTA) dopaminerg neuronjainak plaszticitását idézi elő, amely szabályozza a morfin jutalom toleranciáját.

Itt teszteljük a hipotéziseket, hogy az endogén opioidok párosodás által kiváltott felszabadulása a VTA-ban hím patkányokban a VTA dopamin sejtek morfológiai változását okozza, ami viszont a szexuális viselkedés erősödésének hosszú távú kifejeződését szabályozza.

Először is, a szexuális élmény csökkentette a VTA dopamin soma méretét 1 és 7 napokat, de nem az 30 napokat az utolsó párosodás után. Ezt a hatást blokkolták a naloxon minden párzási ülés előtt; így a VTA dopaminsejt plaszticitása az endogén opioidok hatásától függ.

A VTA plaszticitása viszont megváltozott opiát jutalommal társult, mivel a szexuálisan tapasztalt férfiak nem képeztek kondicionált hely preferenciát 0.5 mg / kg morfinra.

Ezután meghatároztuk, hogy az endogén opioid hatás közvetíti-e a szexuális jutalmat és a memóriát a naloxonnal kezelt hím patkányoknál a párzási tapasztalat során, akár szisztémásan, akár a VTA-n belül. A naloxon nem akadályozta meg a szexuális viselkedés kezdeti tapasztalat-előidézett megkönnyítését az ismétlődő párosodásokon, vagy a párosodás feltételezett hely preferenciáján. A naloxon-kezelés azonban gyengítette a szexuális viselkedés és a neurális aktiváció tapasztalat által kiváltott megkönnyítésének hosszabb távú kifejeződését a mesolimbikus területeken, amit párosodott, kondicionált jelek indukálnak.

Ezek az adatok együttesen azt mutatják, hogy az endogén opioidok párzás közben idegplaszticitást idéznek elő a VTA dopamin neuronokban, amelyek kritikusak a morfin jutalmak és a hosszú távú memória számára a természetes jutalom viselkedésért.

 

Bevezetés

A természetes jutalmak viselkedését a mezokortikolimbikus rendszer közvetíti (Meisel és Mullins, 2006; Hoebel és munkatársai, 2009; Frohmader és munkatársai, 2010a; Pitchers és munkatársai, 2010a; Young és munkatársai, 2011; Blum és munkatársai, 2012). A visszaélések kábítószerei idegváltozásokat okoznak ebben a rendszerben, ami viszont hozzájárul az anyaghasználat fejlődéséhez és kifejeződéséhez (Hyman és munkatársai, 2006; Nestler, 2012). Korábban megállapítottuk, hogy a természetes jutalmak viselkedésével, azaz a hím patkányok szexuális élményével kapcsolatos tapasztalatok neurális plaszticitást is okoznak a nukleáris accumbensben (NAc), beleértve a megnövekedett dendritikus tüskéket (Pitchers és munkatársai, 2010a) és deltaFosB (Pitchers és munkatársai, 2013). Ezzel a nemi eredetű plaszticitás kritikus fontosságú a szexuális élménynek a későbbi párzásra gyakorolt ​​hatására, amely a szexuális viselkedés megkezdésének és teljesítésének megkönnyítésében nyilvánul meg (Pitchers és munkatársai, 2010b, 2012, 2013). Ezenkívül a szexuális tapasztalatok megváltoztatják a pszichostimulánsok iránti érzékenységet, beleértve a mozgásszervi aktivitás érzékenységét és a fokozott jutalmat (Frohmader és munkatársai, 2010a; Pitchers és munkatársai, 2010a, 2013).

Az NAc a ventrális tegmentális területen (VTA) lévő dopaminerg neuronok egyik downstream célpontja. A VTA dopamin idegsejtjei aktiválódnak a párzás során, és a szexuális jutalmat előre jelző kondicionált jelek expozícióját követően (Balfour és munkatársai, 2004; Frohmader és munkatársai, 2010a) endogén opioid peptid (EOP) μ-opioid receptorokon (MOR-ok) kötődik; Matthews és német, 1984; Johnson és North, 1992; Klitenick és munkatársai, 1992; Ikemoto és munkatársai, 1997; Balfour és munkatársai, 2004). Ennélfogva a szexuális viselkedést előrejelző kondicionált jelek expozíciója az EOP és a VTA dopamin-sejtaktiváció felszabadulását eredményezi, ami megkönnyíti a szexuális motivációt (Mitchell és Stewart, 1990; van Furth és munkatársai, 1995; van Furth és van Ree, 1996) és a dopamin felszabadulása a NAc-ben (Fiorino és munkatársai, 1997).

Az exogén opiátok ismételt expozíciója morfológiai változásokat okoz a VTA-ban (Mazei-Robison és munkatársai, 2011; Mazei-Robison és Nestler, 2012), a VTA dopamin neuronok csökkent soma mérete (Sklair-Tavron és munkatársai, 1996; Spiga és munkatársai, 2003; Chu és munkatársai, 2007; Russo és munkatársai, 2007; Mazei-Robison és munkatársai, 2011), a neurofilament fehérjék csökkent szintjei (Beitner-Johnson és munkatársai, 1992), a dopamin-sejtek fokozott ingerlékenysége, valamint a csökkentett axoplazmatikus transzport és a dopamin-kimenet a NAc-nek (Beitner-Johnson és munkatársai, 1992; Mazei-Robison és munkatársai, 2011). Ezek a VTA dopamin neuronok a morfin jutalmakat okoznak, és átmenetiek, mivel egy hónapon belül eloszlanak a gyógyszer absztinenciájától (Russo és munkatársai, 2007). Jelenleg nem tisztázott, hogy a VTA dopamin neuronok plaszticitása egyedülálló-e az opiátok hatására, vagy ha az EOP felszabadulása során is termelnek természetes nyereséges viselkedés során.

Itt teszteljük azt a hipotézist, hogy a természetes jutalmi tapasztalat az opiátok által okozott neuroplasztikát idézi elő, és így az opiátok egy olyan plaszticitási mechanizmushoz közelednek, amely kritikus a természetes jutalom viselkedéshez és a memóriát jutalmazáshoz. Teszteljük, hogy a hím patkányok szexuális tapasztalata csökkenti-e a VTA dopamin neuronok nagyságát a VTA-ban az EOP-től függő folyamaton keresztül. Továbbá azt vizsgáljuk, hogy a VTA dopamin neuronok EOP által kiváltott változásai a természetes jutalmazó magatartás erősítésével és a természetes jutalommal kapcsolatos ösztönzők ösztönzésével járnak-e, miközben a morfin jutalommal szemben kereszt toleranciát okoznak.

Anyagok és módszerek

Állatok

Felnőtt hím Sprague-Dawley patkányokat (200 – 225 g) szereztünk Charles River-től, és minden kísérletben párosítottuk 12 h fény / sötét ciklusban mesterségesen megvilágított helyiségekben (10: 00 AM kivételével, kivéve a morfin tolerancia kísérletet) , 5: 00 PM) világít. Élelmiszer és víz állt rendelkezésre ad libitum kivéve a viselkedési tesztek során. A stimulus nőstényeket ovariektomizáltuk és szubkután implantáltuk 5% 17-β-ösztradiol-benzoát SILASTIC kapszulákkal (1.98 mm belső átmérő, 0.5 cm hosszúság, Dow-Corning). A progeszteron injekciót (szubkután, 500 μg szezámolajban 0.1 ml-ben) 3 – 6 h-ra adtuk be a szexuális fogékonyság kiváltása előtt. Minden eljárást a Nyugat-Ontarioi Egyetem és a Michigani Egyetem Állatgondozási Bizottsága hagyott jóvá, és a kanadai Állategészségügyi Tanácsnak és a Nemzeti Egészségügyi Intézeteknek a gerinces állatokra vonatkozó kutatási irányelveihez igazodtak.

A VTA dopamin soma méretének változása

Napi párzási ülések.

A VTA-ban a dopamin idegsejtek méretének változásának időbeli lefolyásának tanulmányozására a szexuálisan tapasztalt és naiv állatok 1, 7 vagy 31 d-ben (n = 5 – 8 csoportonként) az utolsó párzás (tapasztalt) vagy kezelés (naiv) után. A szexuálisan tapasztalt csoportokat szexuális viselkedéshez illesztették a végső párosodás során, valamint az öt ülésszakon belüli ejakulációk számát (az 5 átlaga az egyes csoportok esetében), és nem különbözött a szexuális viselkedés bármely paraméterében.

Párzási ülések.

A szexuálisan naiv férfiakat két kísérleti körülmény közül választották: szexuálisan naiv vagy szexuálisan tapasztalt. A szexuálisan tapasztalt állatoknak öt egymást követő napon kellett párosulniuk a téglalap alakú vizsgálati ketrecekben (60 × 45 × 50 cm), amíg az ejakuláció meg nem jelenik, vagy akár 1 h-ig (attól függően, hogy melyik jött előbb). A ketreceket alaposan megtisztítottuk 70% etanolos oldattal, és friss ágyakat adtunk a párosodási szakaszok között. Szexuális viselkedést végeztünk a sötét fázisban (2 – 6 h sötétedés után). Kizárólag az öt párosodás során legalább négyben ejakulált állatokat szexuálisan tapasztaltnak és kísérleteknek tekintették. Minden párosodást figyeltek meg, és a szexuális viselkedést rögzítették. A tartók száma (M) intromissionek (IM), mount latencia (ML; idő a nőstény első felfüggesztésétől), intromission latency (IL; idő a női bevezetés első bevezetésétől) és az ejakuláció latenciája (EL; az első intromissiontől az ejakulációig eltelt idő) (Agmo, 1997). A naiv állatokat egy tiszta vizsgálati ketrecbe helyeztük az 1 h-hez egyidejűleg ugyanazon a szobában párosodó szexuálisan tapasztalt férfiakkal, úgy, hogy távoli női szagoknak voltak kitéve, és a tapasztalt férfiak hasonló mértékű zavaró és környezeti újdonságai voltak.

Immunfluoreszcens jelölés.

Az állatokat mélyen érzéstelenítettük nátrium-pentobarbitál (270 mg / kg, ip) alkalmazásával és intracardialisan perfundáltuk 50 ml 0.9% sóoldattal, majd 500 ml 4% paraformaldehidet 0.1 m nátrium-foszfát pufferben (PB). Az agyakat eltávolítottuk és 1 h-on szobahőmérsékleten (RT) azonos fázisban levettük, majd 20 m PB-ben 0.01% szacharózba és 0.1% nátrium-azidba merítettük 4 ° C-on való tárolás céljából. A koronális metszeteket 35 μm-en fagyasztó mikrotomon (H400R, Microm) vágtuk le, és négy párhuzamos sorozatban gyűjtöttük össze a krioprotektáns oldatban (30% szacharóz, 30% etilénglikol 0.1 m PB-ben), majd 20 ° C-on tároltuk. Minden inkubálást szobahőmérsékleten, enyhe keveréssel és bőséges öblítéssel végeztünk 0.1 m PBS-sel, pH 7.35, inkubációk között. A szekciókat 1% H-nak tettük ki2O2 10 percre az endogén peroxidázok elpusztítására, majd az 1 h-ra inkubációs oldatban (PBS +: 0.4% Triton X-100; Sigma-Aldrich) és 0.1% szarvasmarha-szérumalbuminnal (Jackson Immuno Research Laboratories) blokkoltuk. Ezután a szakaszokat egy éjszakán át szobahőmérsékleten inkubáltuk egér tirozin-hidroxiláz (TH) -antitestben (1: 20 000; Millipore). Az elsődleges antitest inkubálás után a szekciókat AlexaFluor 555-konjugált kecske anti-egér antitestben (1: 100; Invitrogen, Eugene, OR) inkubáltuk 30 min. Végül a szekciókat 0.1 m PB-vel mossuk, Superfrost Plus üveglemezekre szereltük, szárítottuk, és gelvatollal fedtük fel, amely a 1,4-diazabiciklo (2,2) oktánt (DABCO; 50 mg / ml, Sigma-Aldrich;); Lennette, 1978).

Adatelemzés: idegsejtek mérete.

A VTA-ban lévő TH-immunreaktív (IR) neuronok képeit 40 × nagyítással, három rostrális és caudalis szinten végeztük (Balfour és munkatársai, 2004). A különböző szintek sejtjei között nem volt különbség. A TH-IR neuronok soma méretét ImageJ (National Health Institute) segítségével elemeztük. Az átlagterületet, a kerületet és a körkörösséget az alábbiak szerint mértük Sklair-Tavron és mtsai. (1996). Az 25 sejtek átlagát állatonként (az összes 3 VTA-szintet kombináltuk) elemeztük, és csak a jól látható maggal rendelkező sejteket vettük figyelembe. Minden állat esetében kiszámítottuk az átlagos területet, a kerületet és a körkörösséget. Statisztikai elemzéshez kétirányú ANOVA-t alkalmaztunk [tényezők: szexuális tapasztalat (nemi tapasztalat vagy szex naiv) és idő (1, 7 vagy 31 d)] post hoc összehasonlítások a Holm-Sidak módszerrel, az 0.05 szignifikancia szintjével.

A VTA nem dopamin változik

Két hetes párosodás.

Annak tesztelésére, hogy a napi párosodás során szexuális élményre van szükség a TH-IR neuronok méretének csökkenéséhez, elemeztük az öt két hetes párosodás során párosodott állatok VTA dopamin neuronjait. A párzási ülések a fentiekben leírtak szerint voltak, de az 2.5 hetekben. Az utolsó párosodás vagy kezelés után agyakat gyűjtötték össze 7 d.

Immunoperoxidáz jelölés.

Ezenkívül azt is megvizsgáltuk, hogy az immunoperoxidáz és a kromogén kimutatással érzékeny festési technikák alkalmazása lehetővé teszi-e a TH-IR-soma méretváltozások megjelenítését. A perfúzió és a szövetfeldolgozás a fentiek szerint történt. 1% H kezelés után2O2 és PBS +, szekciókat egy éjszakán át szobahőmérsékleten inkubáltunk egy egér poliklonális tirozin-hidroxiláz (TH) -antitestben (1: 20 000; Millipore). Az elsődleges antitest-inkubálás után a szekciókat biotin-konjugált kecske anti-nyúl IgG-vel (1 h, 1: 500 PBS +; Vector Laboratories) inkubáltuk, avidin-biotin-torma peroxidázt (1 h, ABC elit; 1: 1 000 PBS-ben) Vector Laboratories) és 3,3'-diaminobenzidin-tetrahidroklorid (10 min, 0.02%, DAB; Sigma-Aldrich) nikkel-szulfáttal (0.02% -ban 0.1 m PB) hidrogén-peroxiddal (0.015%) fokozott. A szekciókat alaposan mossuk 0.1 m PB-ben, hogy a reakciót megszüntessük, és kódolt Superfrost plusz üveglemezekre (Fisher) helyeztük el, 0.3% zselatinnal ddH-ban.2O. Dehidratálás után az összes tárgylemezt DPX-szerű anyaggal (dibutil-ftalát-xilol; Sigma-Aldrich) borítottuk.

Adatelemzés: idegsejtek mérete.

A TH-IR-sejtek területét, kerületét és körkörzetét elemeztük a fent leírtak szerint. Ezenkívül elemeztük a lényeges nigra (SN) TH-IR sejteit, ugyanazon szakaszokban, amelyekben a VTA TH-IR sejteket analizáltuk. Végül, a VTA és az SN TH-IR sejtek elemzése után, a metszeteket krezol-ibolya alkalmazásával kontrasztereztük, és a nem-TH-IR sejteket a fentiekben ismertetett módszerekkel elemeztük. A naiv és a tapasztalt csoportok közötti különbségeket kétirányú hallgatókkal hasonlítottuk össze t 0.05 szignifikanciaszintű tesztek.

A naloxon hatása a tapasztalat által kiváltott dopamin-soma méretcsökkentésre

Annak megállapítására, hogy a MOR-ok szerepet játszottak-e a szexuális élmény által okozott változásokban a dopamin-neuron-soma méretében, a MOR-t a szexuális viselkedés során blokkolták. Az állatok fele szexuális élményt szerzett, míg a másik fele szexuálisan naiv volt. A szexuálisan tapasztalt állatokat 5 egymást követő napokon hagyjuk párosítani. A szexuálisan tapasztalt és naiv csoportokban az állatokat a nem szelektív MOR antagonista naloxonnal (10 mg / kg, sc; Sigma-Aldrich, 0.9% sóoldatban oldva) vagy sóoldattal (30) min. (naiv); ezáltal négy kísérleti csoportot hozunk létre: szexuálisan naiv sóoldat (Naive Sal), szexuálisan naiv naloxon (Naive NLX), szexuálisan tapasztalt sóoldat (Exp Sal) és szexuálisan tapasztalt naloxon (Exp NLX; n = 5 – 8 csoportonként). A naloxon-kezelés nem mutatott statisztikailag szignifikáns hatást a szexuális viselkedés bármely paraméterére, az 5 d bármelyikére, és a naloxon- és sóoldattal kezelt csoportok azonosak voltak a szexuális élményben. Az összes állatot intracardialis perfúzióval leöltük 7 d-vel az utolsó párosodás után. A dopamin-só méretének szekcionálását, immunhisztokémiáját és adatelemzését (kétirányú ANOVA; tényezők: nemi tapasztalat és gyógyszeres kezelés) a fentiek szerint végeztük.

Morfin kondicionált helypreferencia

Kísérleti terv.

Korábban, Russo és mtsai. (2007) krónikus morfin indukálja a morfin jutalmat. Mivel a szexuális élmény és a krónikus morfin hasonlóan csökkenti a dopamin neuronok soma méretét a VTA-ban, a nem által indukált morfológiai változások funkcionális relevanciáját morfin-jutalomra vizsgáltuk. A szexuálisan tapasztalt és naiv állatok hat különböző kísérleti csoportra oszlanak (n = 9 – 13 csoportonként) szexuális viselkedés (szexuálisan naiv vagy tapasztalt) és morfin dózis (0.5, 5.0 vagy 10.0 mg / kg, ip) alapján, és morfin által indukált, feltételezett hely preferenciára (CPP) tesztelték.

A morfin-CPP.

A kondicionálás az utolsó párosodás után 1 d-ben zajlott le, és az utolsó párosodás során a csoportokat szexuális teljesítményhez igazították. A használt CPP-paradigma egy próbatételből, kondicionáló napokból és utóvizsgálatokból állt, és a készülék alapja Tenk és mtsai. (2009). Röviden: a CPP készülék (MED Associates) három különálló kamrából állt. Az egyes munkamenetek között a készüléket alaposan megtisztítottuk 70% -os etanolos oldattal, hogy minimalizáljuk az elhúzódó szagló jeleket. Az egyéni preferenciák meghatározásához elővizsgálatot hajtottak végre, amelynek során az állatok 15 percig szabad hozzáférést kaptak a teljes készülékhez. Az állatok csoportként nem mutattak szignifikáns preferenciát egy adott kamrával szemben, de minden egyes állatnak volt enyhe kezdeti preferenciája. Azokat a patkányokat, amelyek az elõzetes vizsgálat során jelentõs preferenciát mutattak az egyik kamra számára (> 200 s különbség az egyes kamrákban eltöltött idõ között; az állatok <5% -a), kizártuk a vizsgálatból. A kondicionálás során a gyógyszert elfogulatlan paradigma alkalmazásával párosították vagy az eredetileg előnyben részesített, vagy a nem kívánt kamrához (Tzschentke, 2007) és az állatokat az 30 min. Az állatokat reggel sóoldattal (ip) injektáltuk (9: 00 AM 12: 00 PM) és a sóoldat-páros kamrába (kontroll). Délután (1: 00 – 4: 00 PM) az állatokat morfinnal (ip, 0.5 mg / kg, 5.0 mg / kg vagy 10.0 mg / kg; morfin-szulfátot oldottuk 0.9% sóoldatban, Johnson Matthey-ben) beoltottuk és a morfin párosított kamrába. Az állatokat két kondicionáló napnak vetettük alá. A következő napon (3 d az utolsó párosodás napja után) utólagos vizsgálatot végeztünk, amely eljárási szempontból megegyezik az előjellel. Statisztikai elemzéshez a morfin párosított kamrában töltött időt a vizsgálat utáni időszakban hasonlítottuk össze a sóoldat-páros kamrában eltöltött idővel a szexuálisan naiv vagy tapasztalt férfiak utóvizsgálata során, minden egyes adagban párosítva t teszt. p <0.05 statisztikailag szignifikánsnak tekintettük. A szexuálisan naiv és tapasztalt állatok további kontrollcsoportjai fiziológiás sóoldatot kaptak mind párosított, mind párosítatlan kamrában negatív kontrollként. A kamrák között eltöltött idő különbségeket egyik csoport esetében sem sikerült kimutatni.

A szisztémás naloxon hatása a szexuális viselkedés tapasztalat-előidézett megkönnyítésére

Kísérleti terv.

A szexuális élmény megkönnyíti a szexuális viselkedést, amely legalább 1 hónapig fennmarad (Pitchers és munkatársai, 2012). Annak elemzésére, hogy a MOR gátlása milyen hatással van a szexuális viselkedés tapasztalat-előidézett megkönnyítésére, a szexuálisan tapasztalt állatok öt egymást követő párosodás előtt kaptak naloxont ​​vagy sóoldatot (n = 12 mindegyik) a fentiek szerint. Egy héttel az utolsó párosodás után végső párosítási tesztet végeztünk, amelynek során minden állatnak egy ejakulációig vagy 1 h-ig tartottuk a párosodást. A naloxon vagy sóoldat kezelését nem végeztük el az utolsó vizsgálati napon a párzás előtt. A párosodás paramétereit összehasonlítottuk annak megállapítására, hogy a naloxon befolyásolta-e a nemi tapasztalat által kiváltott párosodás megkönnyítését (1 nap 5 nap), vagy ennek a megkönnyítésnek (5 nap vs teszt) fenntartása kétirányú ANOVA alkalmazásával [faktorok: kezelés (sóoldat versus naloxon) ) és nap (1 nap, 5 nap vagy teszt)] és Holm – Sidak módszer post hoc összehasonlítások. Minden statisztikai vizsgálathoz: p A <0.05 értéket statisztikailag szignifikánsnak tekintették.

További kontroll kísérletek

Szisztémás naloxon a vizsgálati napon.

Annak igazolására, hogy a végső párzási teszt napján a megváltozott szexuális viselkedés nem a naloxon hiányából származott, a naloxont ​​vagy a sóoldatot a végső párosítási napon adtuk olyan állatoknak, amelyek naloxonnal párosodtak, miközben szexuális élményt szereztek. Konkrétan, minden állat naloxon injekciót (10 mg / kg, sc) kapott 30 percben, mielőtt az 5 egymást követő napjaiban egy ejakulációhoz kapcsolódna. Az 7 d tesztnapon később az állatok körülbelül fele kapott naloxon injekciót (10 mg / kg, \ t n = 7) vagy sóoldat (n = 6) 30 min. Egy befogadó nő bevitele előtt. A szexuális viselkedést megfigyelték és rögzítették. A párosodás paramétereit összehasonlítottuk annak megállapítására, hogy a naloxon befolyásolta-e a nemi tapasztalat által kiváltott párosodás megkönnyítését (1 nap 5 nap), vagy ennek a megkönnyítésnek (5 nap vs teszt) fenntartása kétirányú ANOVA alkalmazásával [faktorok: kezelés (sóoldat versus naloxon) ) és nap (1 nap, 5 nap vagy teszt)] és Holm-Sidak módszer post hoc összehasonlítások. Minden statisztikai vizsgálathoz: p <5% -ot statisztikailag szignifikánsnak tekintettek.

A naloxon hatása a megkönnyített szexuális viselkedés rövid távú kifejeződésére.

A naloxon (10 mg / kg, sc) kezelés hatása a párosodás során a következő szexuális viselkedést vizsgálták egy utolsó párosítási nap során, amelyet csak az utolsó párosodás után végeztünk (1 d), n = 5; naloxon, n = 4).

Rendszeres naloxon előkezelés.

Annak megállapításához, hogy a naloxon ismételt kezelése önmagában is okoz-e a szexuális viselkedés károsodását 7 d az utolsó kezelés után, a szexuálisan naiv állatok öt naloxon (10 mg / kg, sc) vagy sóoldat injekciót kaptak egymást követő napokon a 7 d végső naloxon után. vagy sóoldat injekció. Ezen az utolsó tesztnapon az állatok nem kaptak semmilyen injekciót. A szexuális viselkedést megfigyeltük és rögzítettük a fent leírtak szerint. A párosodás paramétereit összehasonlítottuk a csoportok között, párosítatlanul t tesztek. Minden statisztikai vizsgálathoz: p <5% -ot statisztikailag szignifikánsnak tekintettek.

Szisztémás naloxon és nemi jutalom.

Az a lehetőség, hogy a naloxon enyhítő hatást gyakoroljon az elősegített szexuális viselkedés fenntartására, az, hogy a naloxon blokkolja a szexuális viselkedés kedvező hatásait. Ennek a lehetőségnek a kipróbálására a CPP paradigmáját a naloxon vagy sóoldat injekciót követően közvetlenül a naloxon vagy sóoldat injekciót követően, a korábbi szexuális tapasztalat nélküli férfiak esetében végezték el a szexuális viselkedésre. A CPP eljárás hasonló volt a fentiekben leírt morfin-CPP-hez, ideértve az előtesztet, a kondicionálási napokat és a tesztet.

A szexuális viselkedést párosították az eredetileg nem kért kamarával. Kiegyensúlyozott módon minden állat naloxon injekciót kapott (n = 12) vagy sóoldat (n = 11) 30 min a befogadó nőhez való hozzáférés előtt. A párosodás átlagos időtartama ∼13 min. Egy perccel az ejakuláció után az állatot a párosított kamrába helyeztük 30 min. A másik kondicionálási napon az állatok naloxon vagy sóoldat injekciót kaptak (attól függően, hogy melyiket kapták a párzás előtt), és a páratlan kamrába helyeztük 30 min. Ezután egy utóvizsgálatot végeztünk, amely megegyezik az előjellel. A kamra preferenciájának meghatározásához összehasonlítottuk a párosított kamrában a próbatest és a teszt utáni időt. Statisztikai elemzéshez párosítva t teszteket használtunk a preferencia és a különbségi pontszámok összehasonlítására, valamint a párosított kamrában az idő előtti és utóvizsgálat ideje alatt, hogy megállapítsuk, hogy egy szexuális viselkedés szempontjából jelentős CPP alakult ki. p <0.05 szignifikánsnak tekintették.

Az intra-VTA naloxon hatása a szexuális viselkedés tapasztalat-előidézett megkönnyítésére

Kísérleti terv.

Annak megállapításához, hogy az EOP akció kifejezetten a VTA-ban volt-e felelős a szexuális élmény által okozott változások szexuális viselkedés hatásáért, az állatoknak öt napos párosodás előtt helyi infúzióban részesültek naloxon vagy sóoldat a VTA-ban. A viselkedési paradigma hasonló volt a szisztémás naloxon kísérlethez. A szexuálisan tapasztalt állatokat 5 egymást követő napok alatt egy ejakulációig vagy 1 h-ig tartottuk. Tizenöt perccel a befogadó nő bevitelét megelőzően a hím patkányok kétoldali infúziót kaptak naloxonból (10 μg / μl félgömbön; 0.5 μl térfogat, 0.9% sóoldatban oldva) vagy sóoldatban (0.5 μl féltekénként). A kétoldalú mikroinjekciókat 0.5 μl / perc áramlási sebességgel adtuk be 1 min. Intervallumban, majd további 1 min-t, a befecskendező kanül pedig a diffúzió helyén maradt. Az injekciós kanület ezután helyettesítettük a dohányos kanüllel és a porvédő sapkával. Egy héttel a párosodás utolsó napja után (a vizsgálati nap), minden állat még egyszer egybeolvadt az ejakulációra naloxon vagy sóoldat infúzió nélkül. ábra 3A felvázolja a kísérleti tervet. Az adatok elemzését a szisztémás naloxon kísérletben leírtak szerint végeztük.

Kannulációs műtét.

A hím patkányokat intraperitoneális injekcióval (0.1 ml / kg) ketaminnal (0.87 mg / ml) és xilazinnal (0.13 mg / ml) érzéstelenítettük, és sztereotaxikus készülékbe (Kopf Instruments) helyeztük. A kétoldalú 21-szelvényvezető kanüleket (Plastics One) a koponya kis fúrólyukain keresztül az agyba csökkentették az A4.8 mm AP-n belüli VTA felé, ± 0.75 mm ML-t a bregma-tól és -7.8 mm DV-től a koponya tetejétől a következők szerint: Paxinos és Watson (2013). A kanüleket fogászati ​​akrilával rögzítették, amelyek a koponyába helyezett három csavarhoz kapcsolódtak. Az állatokat 2-hetes helyreállítási periódust kaptuk, és naponta kezeltük a viselkedési tesztek során alkalmazott kezelési és befecskendezési eljárásokhoz.

Cannula elhelyezési ellenőrzés.

A kanülek elhelyezését TH-immunfestéssel ellenőriztük, hogy a VTA-t pontosan megcélozzuk. Az elemzésekbe csak a megfelelő elhelyezésű állatokat vettük figyelembe (végső csoportméretek: tapasztalt sóoldat) n = 8; tapasztalt naloxont n = 6). Három további, a VTA-n kívüli VTA-n belüli naloxon injekciót kapott állatot egy „nem fogadott” injekciós csoportba csoportosítottunk. A kihagyott csoportot külön elemeztük anatómiai kontrollként és Mann – Whitney-t U tesztet alkalmaztunk a viselkedés összehasonlítására a végső tesztnapon a naloxon és a sóoldattal kezelt tapasztalt férfiak között.

Párosítással összefüggő kontextusos cue-indukált pERK-expresszió

Kísérleti terv.

Kimutatták, hogy a ketrecbe való expozíció, amelyben a férfiak szerzett párzási élményt, a VTA-ban és a VTA-ban és a NAc-ben a neurális aktivitás MOR-aktiválódását okozzák.Balfour és munkatársai, 2004). Ennélfogva a párzási környezet a szexuális jutalom előrejelzésére szolgáló feltételes köveként szolgál. A jelenlegi vizsgálat azt vizsgálta, hogy a szexuális élmény során bekövetkező MOR-aktiválás szükséges-e a következő kondicionált cue-indukált neurális aktiváláshoz. Naloxont ​​vagy sóoldatot adtunk szisztémásan (ip) 30 perccel az elhelyezés előtt, és egy befogadó nő bevitelét a párosodásra (tapasztalt), vagy a kontroll manipuláció előtt, amely a kezelő ketrecbe történő behelyezésből állt, anélkül, hogy a nő (semleges) környezet, naiv). Így négy kísérleti csoport jött létre: Naive Sal, Naive NLX, Exp Sal ​​és Exp NLX. Egy héttel az utolsó párosodás után az egyes csoportok állatainak fele ki volt téve a páros ketrecnek (Exp férfiak: nemhez kapcsolódó kondicionált jelek) vagy kezelő ketrecnek (naiv férfiak: nem megfelelő / semleges jelek), míg a másik fele nem volt kitéve minden jelet és helyett az otthoni ketrecekben maradt (a pERK kiindulási értékének meghatározásához). Ez a kísérleti paradigma 8 csoportokat eredményezett: Naive Sal-No Cue, Naive Sal + Cue, Naive NLX-No Cue, Naive NLX + Cue, Exp Sal-No Cue, Exp Sal ​​+ Cue, Exp NLX-No Cue, Exp NLX + Cue (n = 4, kivéve Naive NLX-No Cue, n = 3). Az állatok az 10 – 15 min. A kontrollállatokat eltávolítottuk otthonukból, és párhuzamosan perfundáltuk.

Immunhisztokémia.

A szekcionálást és az immunhisztokémiát a fentiek szerint végeztük. Itt egy nyúl poliklonális ellenanyagot használtunk p42 és p44 MAP kinázok ERK1 és ERK2 (pERK; 1: 4 000; sejtjelző technológia) ellen. Az elsődleges antitestet az irodalomban széles körben jellemezték (Roux és Blenis, 2004; Murphy és Blenis, 2006; Frohmader és munkatársai, 2010b). Továbbá az elsődleges antitest elhagyása megakadályozta a patkány agyszövet összes immunreaktivitását és Western blot analízisét, és két megfelelő sávot tárt fel a megfelelő molekulatömegeken.

Adatelemzés.

A pERK-immunreaktív (-IR) sejteket számos agyrégióban számoltuk fel egy kamera lucida-csővel, amely egy Leica DMRD mikroszkóp: NAc [mag (C) és héj (S); 400 × 600 μm; mediális prefrontális kéreg; mPFC; elülső cingulációs terület (ACA); prelimbikus kéreg (PL); infralimbikus kéreg (IL); 600 × 800 μm mindegyik], caudate – putamen (CP; 800 × 800 μm) és bazolaterális amygdala (BLA; 900 × 1200 μm; Balfour és munkatársai, 2004; Frohmader és munkatársai, 2010b; Pitchers és munkatársai, 2010b). Az agyterületre két szekciót számoltunk, és a sejtek számát a standard elemzési területeken a sejtek száma mm-ben számítottuk2. A két számot átlagoltuk egy állatra a csoporteszközök kiszámításához. A szexuálisan tapasztalt vagy naiv csoportokban a csoport átlagokat kétirányú ANOVA-val hasonlítottuk össze [faktorok: drogkezelés (NLX vagy Sal) és cue (cue vagy no cue)], majd post hoc összehasonlítások a Holm-Sidak vagy a Mann – Whitney összegvizsgálatok alkalmazásával, ahol szükséges, a szignifikancia szinttel p <0.05. A szexuálisan tapasztalt állatok NAc-héjában erőteljes tendencia mutatkozott a tényezők jelentősége felé, ezért páros összehasonlításokat végeztek csak a sóoldatok (Sal-No Cue) és a sóoldatok (Sal + Cue) csoportok összehasonlítására.

Képek.

A digitális képeket egy CCD-kamerával (Macrofire, Optronics) rögzítettük, amelyhez az a Leica mikroszkóp (DM5000B) rögzített kamera beállításokkal. A képeket az Adobe Photoshop 9.0 szoftverbe importálták. A képek nem változtak semmilyen módon, kivéve a fényerő és a kontraszt beállítását.

Eredmények

A szexuális élmény által okozott változások a VTA dopamin sejtekben

A szexuális élmény a VTA dopamin soma méretének csökkenését eredményezte (Ábra 1A-C). A szexuális élmény jelentősen csökkentette a VTA TH-IR sejtek soma területét és kerületét (terület: F(1,31) = 23.068, p <0.001; kerülete, F(1,31) = 18.225, p <0.001). Az időnek (terület: F(2,31) = 6.377, p = 0.005; kerülete, F(2,31) = 4.389, p = 0.021) és a tapasztalat és az idő közötti jelentős kölcsönhatás (terület: F(2,31) = 5.284, p = 0.011; kerülete, F(2,31) = 4.347, p = 0.022). A páros összehasonlítások azt mutatták, hogy a szexuálisan tapasztalt állatokban a szexuális viselkedés utáni utolsó nap után a TH-IR sejtek területét és kerületét jelentősen csökkentették az 1 és az 7 d.Ábra 1B, terület: p = 0.002 (1 d), p <0.001 (7 d); C, kerület: p = 0.009 (1 d), p <0.001 (7 d)]. A szexuális magatartás hatása eloszlott, amikor a jutalommegtartóztatás időszaka következett, amikor a TH-IR idegsejtek soma mérete visszatért a kiindulási értékre 31 napra az utolsó párzási munkamenet után (Ábra 1B, terület: p = 0.798; C, kerület: p = 0.785). A szexuális élmény által okozott változtatásokat nem észlelték körkörösségben bármelyik időpontban (Ábra 1D). A VTA dopamin soma méretcsökkentése nem függött a napi párosodástól, mivel az öt két hetes párosodás során a párosodási tapasztalat csökkent VTA dopamin-soma méretet is eredményezett (Ábra 2A,B, E-H, terület: p = 0.004; kerülete: p <0.001). Ezzel szemben a nemi tapasztalat nem befolyásolta a TH-IR szóma méretét a substantia nigra-ban (Ábra 2C, I-J, terület: p = 0.13; kerülete: p = 0.16) és a közeli VTA nem TH-IR neuronok változott soma-mérete (Ábra 2D, E-H, terület: p = 0.46; kerülete: p = 0.45).

Ábra 1. 

Ábra 1. 

A VTA dopamin neuronok endogén opioid által kiváltott soma méretváltozása. AA szexuálisan naiv és tapasztalt állatokból származó VTA dopamin neuronok reprezentatív képei, amelyek az 7 doma nagyságának csökkenését mutatják az utolsó párosodás után. Méretarány, 5 μm. Mennyiségi adatok, amelyek azt mutatják, hogy a szexuális élmény (Exp, black bars) jelentősen csökkentette a területet (B; μm-ben2) és kerület (C; μm-ben) VTA dopamin sejtek, 1 d (Naive, Exp; n = 6) és 7 d (Naive, n = 5; Profi, n = 6), de nem 31 d (Naiv, n = 6; Profi, n = 8) a végső párzás után, a szexuálisan naiv kontrollokhoz képest (Naiv, fehér sáv). A tapasztalt férfiaknál a területet 84% -ra csökkentették, az 1 vagy 7 d naiv kontrollokhoz viszonyítva. A kerület 91.6-re és 90% -ra csökkent a tapasztalt csoportokban az 1 és az 7 d resp. Nem volt hatással a körkörösségre (D). Ez a dopamin sejt plaszticitás a területen (E) és kerület (F) a naloxon (NLX, n = 8), de nem sóoldat (Sal, n = 7) kezelés a párzás során, 7 d a végső párosodás után a szexuálisan naiv kontrollokhoz képest (Sal, n = 5; NLX, n = 6). Az adatok átlag ± SEM; * szignifikáns különbséget jelez ugyanazon a napon végzett szexuálisan naiv ellenőrzésekhez képest (B, C) vagy összehasonlítva a sóoldattal kezelt szexuálisan naiv kontrollokkal és a naloxonnal kezelt nemi \ tE, F).

Ábra 2. 

Ábra 2. 

A szexuális élmény nem csökkentette a soma méretét a materia nigra dopamin neuronokban vagy a VTA nondopamin neuronokban. VTA TH-IR neuron soma terület (A; μm-ben2) és kerület (B; μm-ben) szexuálisan naiv (fehér) és tapasztalt (fekete) állatokban, akik hetente kétszer párosodtak, nem pedig egymást követő napokon. Substantia nigra TH-IR soma terület (C) és VTA nem TH-IR soma terület (D) szexuálisan naiv (fehér) és tapasztalt (fekete) állatokban. Az adatok átlag ± SEM; * a szignifikáns különbséget a szexuálisan naiv kontrollokhoz képest jelzi. Reprezentatív képek a szexuálisan naivok VTA-ban lévő TH-IR (barna) neuronokról (E) és tapasztalt (F) férfiak. G, H, Egy nagyobb nagyítású kép a neuronról, amelyet a nyíl jelez E és a F illetőleg. A Nissl-festett neuronok ezekben a képeken kék színnel jelennek meg. Reprezentatív képek a szexuálisan naivek SN-IR-neuronjairól (I) és tapasztalt (J) férfiak. Mérlegrudak: E-J, 20 μm.

A VTA dopamin neuronok szexuális élmény által indukált soma méretének csökkentése az opioid receptor aktivációjától függ

A szexuális élmény által okozott VTA dopamin neuronok méretének csökkenését a nem-szelektív MOR antagonista naloxon blokkolta, amelyet minden párosodás előtt adtak be. A naloxon kezelés a párosodás előtt jelentős hatást gyakorolt ​​a területre (F(1,22) = 4.738, p = 0.041) és a kerületre gyakorolt ​​szignifikáns \ tF(1,22) = 2.892, p = 0.052). A tapasztalat és a naloxon-kezelés között jelentős kölcsönhatás volt megfigyelhető a \ tF(1,22) = 5.578, p = 0.027) és kerülete (F(1,22) = 8.167, p = 0.009). A páros összehasonlítások azt mutatták, hogy a sóoldattal kezelt állatokban a szexuális élmény jelentősen csökkentette a VTA dopamin neuronok 7 d területét és kerületét az utolsó párosodás után a sóoldattal kezelt szexuálisan naiv férfiakhoz képest (Ábra 1E, terület: p = 0.018; F, kerület: p = 0.007). Ezzel ellentétben a szexuálisan tapasztalt naloxon-kezelt állatok nem különböztek a naloxonnal kezelt naiv férfiaktól (Ábra 1E, terület: p = 0.483; F, kerület: p = 0.330). Ezenkívül a tapasztalt sóoldatok soma mérete jelentősen csökkent a tapasztalt naloxon állatokhoz képest (Ábra 1E, terület: p = 0.002; F, kerület: p = 0.002). A naloxon hatása a szexuális tapasztalatokra specifikus volt, mivel a naloxon-kezelés önmagában nem befolyásolta a szexuálisan naiv naloxonnal kezelt férfiak TH-IR sejtmagasságát a sóoldattal kezelt kontrollokhoz képest.Ábra 1E,F). Ezenkívül a naloxonnak a tapasztalat által kiváltott soma méretcsökkentésre gyakorolt ​​hatása nem a naloxon szexuális viselkedésre gyakorolt ​​hatásának volt köszönhető, mivel a párosító magatartás nem különbözött szignifikánsan a naloxon- és sóoldattal kezelt férfiak között, kivéve, ha hosszabb ideig kezdett el párosodni az ejakuláció után (az ejakulációs intervallum után) az első és az ötödik párzási ciklus során (\ tp = 0.03 és p = 0.004). Mind a sóoldat, mind a naloxon-kezelt férfiak az öt párosodás során az ejakulációra kerültek.

A szexuális élmény által indukált morfin jutalom tolerancia

A szexuális élmény hatása a VTA dopamin soma méretére az EOP hatására a VTA-ban hasonlít az exogén opiátok esetében (Sklair-Tavron és munkatársai, 1996; Russo és munkatársai, 2007). Ezért azt vizsgáltuk, hogy a természetes jutalom által indukált VTA dopamin sejt plaszticitása befolyásolja-e az opiát morfin jutalmát. Sőt, a szexuális élmény morfin jutalmi toleranciát okozott, hasonlóan a krónikus opiátok hatásához (Russo és munkatársai, 2007). A szexuálisan tapasztalt férfiak nem tudtak kifejleszteni egy CPP-t 0.5 mg / kg morfin adagra; mivel a szexuálisan naiv férfiak CPP-t képeztek erre a dózisra, amint azt a morfin-páros kamrában nagyobb mennyiségben töltötték a sóoldat-páros kamrához képest a poszt-teszt alatt (Ábra 3; p = 0.039). Mind a szexuálisan naiv, mind a tapasztalt csoportok szignifikánsan nagyobb időt töltöttek a morfin-páros kamrában, összehasonlítva a sóoldattal párosított kamrával, nagyobb morfin dózisokkal: 5.0 mg / kg (Ábra 3; Naiv: p = 0.029; Felhasználható: p 0.012) és 10.0 mg / kg (Ábra 3; Naiv: p <0.001; Lejárat: p = 0.002).

Ábra 3. 

Ábra 3. 

A szexuális élmény hatása a morfin jutalmára. A sóoldatban (Sal) vagy a morfin párosított (Mor; 0.5, 5 vagy 10 mg / kg testtömeg) kamrákban töltött idők a szexuálisan naivok utáni vizsgálat során (Naive, n = 10 – 13) vagy tapasztalt (Exp, n = 9 – 13) férfiak. Az adatok átlag ± SEM; * A szignifikáns különbséget az azonos állatokban lévő Sal-páros kamrához képest jelzi. NS, Nem jelentős.

A szexuális élmény által indukált párosító viselkedés megkönnyítése az opioid receptor aktivációjától függ

Az eddigi eredmények azt mutatják, hogy a VTA-ban a 5 napi rövid párzási ciklusai során fellépő EOP a VTA dopamin neuronok plaszticitását okozza, amely hasonló a krónikus morfin vagy heroin önadagolásának hatásaihoz.Russo és munkatársai, 2007; Mazei-Robison és munkatársai, 2011). Feltételeztük, hogy a VTA dopamin-soma-méretcsökkentés elengedhetetlen a jutalom-tanuláshoz, és különösen a szexuális élmény által indukált szexuális viselkedés megkönnyítéséhez a motiváció és a teljesítmény szempontjából. Ezt a hipotézist a naloxonnal történő MOR blokkolásával tesztelték a párzás során, és megvizsgálta a szexuális élmény által az öt napi párosodás során kiváltott szexuális viselkedés megkönnyítésének hatásait. Az adatokat az alábbiakban mutatjuk be ábra 4 csak az első és az ötödik párosodás számára, mivel ezek az adatok, amelyek a legjobban szemléltetik a párosítás viselkedésének megkönnyítését. Ezenkívül a naloxon kezelés hosszabb távú hatásait a párosodás során tesztelik a párosodási magatartás megkönnyítése érdekében, a végső párosítási teszt során 1 héten belül. ábra 4A a kísérleti tervet mutatja. A párosodás jelentős hatása volt a nemi viselkedés minden paraméterére (mount latencia: F(2,55) = 11.286, p <0.001; intromissziós késés: F(2,55) = 8.767, p <0.001; magömlés késése: F(2,55) = 10.368, p <0.001) és a naloxon-kezelés késleltetési időkig (F(1,55) = 6.585, p = 0.013) és az intromission (F(1,55) = 7.863, p = 0.007). A páros összehasonlítások azt mutatták, hogy a naloxon-kezelés az első párosodás során befolyásolta a szexuális viselkedést, mivel a naloxon állatok jelentősen hosszabb késleltetéssel rendelkeztek az első felfüggesztéshez (p = 0.002) és az intromission (p = 0.002) a párosodás első napján végzett sóoldatokkal összehasonlítva. Ezt a naloxon hatását a kezdeti szexuális viselkedésre csökkentette a szexuális élmény, és a későbbi párosodás során nem figyelték meg (Táblázat 1). Ezen túlmenően, a naloxon beadása az öt párzási ülés előtt nem akadályozta meg a szexuális viselkedés kezdeti megkönnyítését szexuális élményekkel. A szexuális élmény erősítő hatásával összhangban a sóoldattal kezelt férfiak csökkent késleltetést mutattak be (Ábra 4B; p = 0.032) intromission (Ábra 4C; p = 0.033) és az ejakuláció (Ábra 4D; p <0.001) az ötödik párzási munkamenet során az első párzási munkamenethez képest, ami a szexuális viselkedés megkönnyítését jelezte. Hasonlóképpen, a naloxonnal kezelt férfiaknál lényegesen rövidebb késleltetési idő mutatkozott (Ábra 4B; p <0.001), intromisszió (Ábra 4C; p <0.001) és a magömlés (Ábra 4D; p = 0.017) az ötödik napon az első naphoz képest. Ezenkívül a naloxonmal kezelt férfiak nem különböztek a sóoldat-kontrolloktól az ötödik párzás során a latenciák egyikében sem.

Ábra 4. 

Ábra 4. 

Az endogén opioidok kulcsszerepet játszanak a szexuális viselkedés tapasztalat-előidézett megkönnyítésében. A, Kísérleti terv. B-D, Sóoldattal kezelt férfiak szexuális viselkedési paraméterei (Sal, fehér sávok, n = 11) vagy naloxon (NLX; fekete sávok, n = 12) szisztémás alkalmazással. A megjelenített adatok késleltetése a csatoláshoz (B; másodperc), a behatolás (C; másodperc) és az ejakuláció (D; másodperc) az 1 és az 5 napokon öt egymást követő napon. Ezen túlmenően az utolsó párosítási teszt adatai az ötödik párosítás után 7 d jelennek meg. Az adatokat átlag ± SEM-ként mutatjuk be; + a 1 és az 5 napok közötti szignifikáns különbséget jelzi a kezelésben; * a teszt nap és az 5 nap közötti szignifikáns különbséget jelzi a kezelés során; A # nap jelentős különbséget mutat a naloxon és a sóoldatok között.

A táblázat megtekintése: 

Táblázat 1. 

A naloxon beadása a megnövekedett latenciák párosítása és a behatolás előtt csak a párzás első napján

Ezzel ellentétben a szexuális élményszakasz során a naloxon-kezelés megzavarta a szexuális viselkedés tapasztalat által kiváltott megkönnyítését a végső párosítási napon. A vizsgálati napot 7 d-vel végeztük a végső párosodás után naloxon injekció nélkül. A fiziológiás sóoldattal kezelt kontroll férfiak a szexuális viselkedés várható élmény-előmozdítását mutatják. Pontosabban, a csatolás, a behatolás és az ejakuláció késleltetése nem különbözött az ötödik párzási és a végső tesztnap között (Ábra 4B-D). Míg a naloxonmal kezelt férfiak szignifikáns növekedést mutattak a \ tÁbra 4B; p = 0.033), behatolás (Ábra 4C; p = 0.036) és az ejakuláció (Ábra 4D; p = 0.049) a vizsgálati napon az ötödik párosodáshoz képest. A teszt napján a naloxon állatokat szignifikánsan lassabbnak találták, mint a sóoldattal kezelt férfiaknál, amint azt a hosszabb késleltetési idővel jelöltük.Ábra 4B; p = 0.017) és az intromission (Ábra 4C; p = 0.043). Tehát a naloxon-kezelés megakadályozta a szexuális viselkedés megkönnyítésének tapasztalatait, de nem a kezdeti fejlődést. Ezek az eredmények azt jelzik, hogy az EOP által kiváltott VTA dopamin neuronok plaszticitása kritikus szerepet játszik a természetes jutalmak viselkedésének megerősítésében.

Számos további ellenőrzési kísérletet végeztünk annak megállapítására, hogy az opioid receptor blokád hatása a szexuális viselkedés hosszú távú megerősödésének elvesztésére a naloxon beadásának hiányától független-e az utolsó párosítási napon (Ábra 5A,B), a hosszú távú, de nem rövid távú karbantartás a párosítás megkönnyítésére vonatkoztak (Ábra 5E,F), nem a napi naloxon-expozíció okozta (Ábra 5C,D), és nem a szexuális jutalom elvesztése okozta a naloxonnal kezelt \ tÁbra 5G,H). Először is, annak igazolására, hogy a végső párosítási vizsgálatban a megváltozott szexuális viselkedés nem a naloxon hiányából származott, a naloxon vagy a sóoldat a végső párosítási napon adódott olyan állatoknak, amelyek naloxonnal párosodtak, miközben szexuális élményt szereztek (Ábra 5A). A párosítási nap jelentősebb fő hatása volt a csatolás késleltetésére (Ábra 5B; F(2,27) = 30.031, p = 0.038) és az intromission (Táblázat 2; F(2,27) = 10.686, p = 0.048). A párzási nap fő hatása nem volt az ejakuláció késleltetésére (Táblázat 2; F(2,27) = 2.388, p = 0.109) A fentiekhez hasonlóan a naloxon kezelés a párzás során nem befolyásolta a szexuális viselkedés megkönnyítését az első öt szexuális tapasztalat során. Mindkét csoport (fiziológiás só- és naloxon-kezelt csoportok a végső párosítási vizsgálat során kapott kezelés alapján; mindkettő naloxont ​​kapott a párzás során) az 5-nál kedvezőbb szexuális viselkedést mutatott az 1-hoz képest, és szignifikánsan rövidebb késleltetést mutatott az első kötéshez (Ábra 5B; sós: p = 0.033; naloxon: p = 0.014) és az intromission (Táblázat 2; sós: p = 0.034; naloxon: p = 0.026). Azoknak a állatoknak, amelyek naloxont ​​vagy fiziológiás sóoldatot kaptak az utolsó párosítási napon, hosszabb késleltetési idő áll rendelkezésre (Ábra 5B; sós: p = 0.018; naloxon: p = 0.029) és az intromission (Táblázat 2; sós: p = 0.019; naloxon: p = 0.020) a párosítási élmény ötödik napjához képest. Ezért a naloxon vagy fiziológiás sóoldat beadása közvetlenül a párosítást megelőző tesztnapon nem befolyásolta a naloxon kezelés szexuális élmény-kezelés során kifejtett hatását, és a szexuális viselkedés hosszú távú megkönnyítésének csillapítása megegyezett azokkal, amelyeket nem kaptak injekcióban. az utolsó párosítási napon (Ábra 4).

Ábra 5. 

Ábra 5. 

Az endogén opioidok fontosak a szexuális viselkedés megkönnyítése hosszú távú kifejeződésében. A, Kísérleti tervezés az NLX kezelés hatására a vizsgálati napon. BA késleltetés az 1 és 5 napokon a párosodás és a végső párzási teszt nap (teszt) öt egymást követő napján, a sóoldat (szürke) vagy a naloxon (fekete) injekció után. Az adatok átlag ± SEM. * az 1 és a 5 nap közötti szignifikáns különbséget jelzi a kezelés során. # jelzi a teszt nap és az 5 nap közötti szignifikáns különbséget a kezelés során. C, Kísérleti kísérlet a naloxon előkezelés hatásának tesztelésére a párosító magatartás szexuális élménye nélkül. D, A késleltetés végleges párzási tesztnapján, 7 napokon az 5 napok után, sóoldat vagy naloxon injekció beadása párosítás hiányában. Az adatok átlag ± SEM. E, Kísérleti tervezés kísérletre annak megállapítására, hogy a naloxon kezelés befolyásolta-e a szexuálisan tapasztalt állatokban a megkönnyített szexuális viselkedés rövid távú megjelenését. F, Az 1 és 5 napokon a párosodás és a végső párzási teszt napjának 1 napján, 5 naponta 1 napján, a fiziológiás sóoldat (szürke) vagy naloxon (fekete) injekció jelenlétében. Az adatok átlag ± SEM. * az 5 és a XNUMX nap közötti szignifikáns különbséget jelzi a kezelés során. G, Kísérleti tervezés a kísérlethez annak vizsgálatára, hogy a naloxon-kezelés gátolta-e a szexuális viselkedés előnyös hatásait. HA párosított páros kamrában töltött idő (másodpercben) a preest (fehér) és a teszt után (fekete) a naloxont ​​vagy a sóoldatot a párzást megelőzően kapott állatok esetében. Az adatok átlag ± SEM; * jelentős különbséget jelez a próbával összehasonlítva.

A táblázat megtekintése: 

Táblázat 2. 

A bemutatott adatok késleltetése az intromission és az ejakuláció (másodpercek) a kontroll kísérletekből annak megállapítása érdekében, hogy a MOR blokád hatása a szexuális viselkedés hosszú távú megerősödésének elvesztésére független volt a naloxon beadásának hiányától a végső párosítási napon

Annak megállapítása érdekében, hogy a naloxon kezelés szexuális tapasztalat párosítása és nem önmagában megismétlődött-e naloxonnal, az utolsó kezelés után 7 d okozta a szexuális viselkedés károsodását, a szexuálisan naiv állatok öt napos injekciót kaptak naloxon vagy sóoldat injekció előtt a végső párosítási vizsgálat előtt 7 d később (Ábra 5C). Nem találtunk szignifikáns különbséget a sóoldat és a naloxon előkezelt csoportok közötti párosítási paraméterek között (Ábra 5D; csatolási késleltetés; intromission latency: sóoldat 139.7 ± 40.3 vs naloxon 121.83 ± 42.55; ejakuláció késleltetése: sóoldat 887.9 ± 70.0 vs naloxon 1050.8 ± 327.31). Ezek az eredmények azt mutatják, hogy a naloxon önmagában nem elegendő a későbbi szexuális viselkedés megváltoztatásához, hasonlóan a naloxon egyedül a VTA dopamin neuron plaszticitására gyakorolt ​​hatásának hiányához.

Feltételezzük, hogy a szexuális élmény megszerzése során a naloxon kezelés megzavarja a szexuális viselkedés megkönnyítésének a szexuális élmény által okozott hosszú távú kifejeződését. Ennek további vizsgálatához a naloxon-kezelés párosítása során kifejtett hatásait a következő szexuális viselkedésen teszteltük egy utolsó párosodás során, amelyet csak az utolsó párosodás után végeztek (kísérleti tervezés; Ábra 5E). A párosítási nap jelentős hatása volt a hegyre (Ábra 5F; F(2,20) = 19.780, p <0.001) és az intromissziós késések (Táblázat 2; F(2,20) = 19.041, p <0.001). A napnak nem volt szignifikáns fő hatása az ejakuláció késleltetésére (Táblázat 2; F(2,20) = 3.042, p = 0.070). A fent leírtakhoz hasonlóan a férfiak (a sóoldat vagy a naloxon kezelés ellenére) a szexuális viselkedés megkönnyítését mutatták az öt szexuális élmény során, melyeket szignifikánsan rövidebb latenciák jeleztek (Ábra 5F; sós: p = 0.002; naloxon: p = 0.018) és az intromission (Táblázat 2; sós: p = 0.006; naloxon: p = 0.009) az 5-nál az 1 naphoz képest. Hasonlóképpen, a megkönnyített szexuális viselkedést tesztnapon is igazolták az 1 naphoz képest, amelyet a rövidebb latenciák jeleztek a szereléshez (Ábra 5F; sós: p = 0.001; naloxon: p = 0.020) és az intromission (Táblázat 2; sós: p = 0.004; naloxon: p = 0.009). Ennél is fontosabb, hogy a naloxon-kezelés a párzás során nem befolyásolta szignifikánsan a nemi tapasztalat által előidézett szexuális viselkedés megkönnyítését, miután a nemi tapasztalat után 1 d-et teszteltek, függetlenül a naloxon-kezeléstől ebben a végső párosítási napban.

Végül megvizsgáltuk annak lehetőségét, hogy a naloxon enyhítő hatásai a megkönnyített szexuális magatartás hosszú távú kifejeződésére annak következményei, hogy a naloxon blokkolja a szexuális viselkedés jutalmazó tulajdonságait. A közvetlenül a párzás előtt beadott naloxon azonban nem változtatta meg a CPP képződését a párzáskor (Ábra 5G), ami arra utal, hogy a naloxon kezelés nem változtatta meg a szexuális jutalmat. Mind a sóoldat, mind a naloxon kezelt csoportok szignifikáns CPP-t képeztek a szexuális viselkedés szempontjából, amint azt a nemi párosított kamrában eltöltött idő jelentősen megnövelte (Ábra 5H; sós: p = 0.038; naloxon: p = 0.002) a próba utáni vizsgálat során az elővizsgálathoz képest. Ezért a naloxon nem gyakorolja káros hatását a szexuális viselkedéshez kapcsolódó jutalom blokkolásával.

A szexuális viselkedés megkönnyítése a VTA-n belüli EOP-cselekvéstől függ

Annak megerősítése érdekében, hogy az EOP kifejezetten a VTA-ban jár el, hogy a szexuális viselkedés hosszú távú megkönnyítését indítsa el, ábra 3A a szisztémás injekciók helyett a VAL-n belüli naloxon infúzióval megismételtük. Az eredmények megegyeztek a fent leírt szisztémás adagolással. A párosítási nap jelentős hatása volt a nemi viselkedés minden paraméterére (Ábra 6A, csatolási késleltetés: F(2,33) = 4.494, p = 0.019; B, intromission latency: F(2,33) = 4.042, p = 0.027; C, ejakuláció késleltetése: F(2,33) = 5.309, p = 0.010) és a VTA-n belüli naloxon kezelés a késleltetésre \ tF(1,33) = 7.345, p = 0.011) és az intromission (F(1,33) = 6.126, p = 0.019). Az intra-VTA naloxon nem akadályozta meg a szexuális viselkedés kezdeti tapasztalat-előmozdítását a párosodás 5 d alatt, mivel a naloxon-kezelt férfiak csökkent késleltetést mutattak be (Ábra 6A; p = 0.001), behatolás (Ábra 6B; p <0.001) és a magömlés (Ábra 6C; p = 0.001) az 5-nál az 1 naphoz képest. A naloxonmal kezelt férfiak nem különböztek a sóoldattal kezelt férfiaktól a latencia ötödik napján. Az intra-VTA naloxon kezelés, mint a szisztémás adagolás, jelentősen megnövelte a szerelvényt (Ábra 6A; p <0.001) és az intromissziós késések (Ábra 6B; p <0.001) az első párzási napon a sóoldattal kezelt hímekhez képest, amelyet a következő párzási ülések során nem figyeltek meg (amelyek során a naloxonnal és a sóoldattal kezelt hímek nem különböztek). Az egyik váratlan megfigyelés az volt, hogy ebben a kísérletben a sóoldattal kezelt férfiak nem mutattak statisztikailag szignifikáns megkönnyebbülést a szerelési vagy intromissziós késésekben (amint az az összes fent leírt kísérletben megmutatkozott), és csak az ejakuláció késleltetése volt rövid az ötödik napon az első naphoz képest (sóoldat: p = 0.001).

Ábra 6. 

Ábra 6. 

Az endogén opioidok a VTA-ban közvetítik a szexuális viselkedés megkönnyítését és hosszú távú karbantartását. A sóoldattal kezelt férfiak szexuális viselkedési paraméterei (Sal, fehér sávok, n = 8) vagy NLX (fekete sáv, n = 6) az intravénás VTA beadásakor. A megjelenített adatok késleltetése a csatoláshoz (A), behatolás (B) és ejakuláció (C) az 1 és az 5 napokon öt egymást követő napos párzáskor. Ezen túlmenően, az 7 napot követő 5 d végső párosítási napra vonatkozó adatok sóoldat vagy naloxon injekció nélkül állnak rendelkezésre. Az adatok átlag ± SEM; + a 1 és az 5 napok közötti szignifikáns különbséget jelzi a kezelésben; * a teszt nap és az 5 nap közötti szignifikáns különbséget jelzi a kezelés során; # a naloxon és a Sal csoportok közötti jelentős különbséget jelzi a nap folyamán. Koronás VTA szakaszok (H, -4.60; I, -5.00; J, -5.25 a bregma-tól) vázlatos rajza, amely az 5 kísérletben az összes állat intravénás VTA injekciós helyét jelzi (sóoldat, fehér; naloxon, fekete; nem fogadott, szürke) a Swanson Brain Maps sablonrajzainak használatával (Swanson, 2004). A kannák kétoldalúak voltak, de az injekciós helyeket egyoldalúan ábrázolják a bemutatás megkönnyítése érdekében. fr, Fasciculus retroflexus; ML, Medial lemniscus; SN, materia nigra.

Az intra-VTA naxolone kezelés megakadályozta a szexuálisan tapasztalt férfiaknál megfigyelt megkönnyített szexuális viselkedés fenntartását, hasonlóan a szisztémás naloxon hatásához. Pontosabban, a végső tesztnapon a naloxon-kezelt férfiak hosszabb késleltetéssel rendelkeztek (Ábra 6A; p = 0.011), behatolás (Ábra 6B; p = 0.010) és az ejakuláció (Ábra 6C; p = 0.015) az ötödik párzáshoz képest, és összehasonlítva a sóoldattal kezelt férfiakkal az utolsó \ tÁbra 6A, p = 0.006; B, p = 0.008). Ezzel ellentétben, a sóoldattal kezelt állatok nem különböztek latenciánként az utolsó vizsgálati nap és az 5 közötti párosodás és behatolás között. Ezek a hatások specifikusak voltak a naloxonnak a VTA-ra történő szállítására, mivel a közeli, de a VTA-t nem célzó kanülökkel rendelkező férfiak (Ábra 6D; n = 3) a sóoldattal kezelt kontrollokhoz hasonló szexuális viselkedés hosszú távú megkönnyítése (ML, IL = 53 ± 6.245, EL = 389 ± 299.5 és szignifikánsan különbözik a VTA-naloxon állatokhoz képest a végső párosítási tesztnapon (ML, IL: p = 0.029; EL: p = 0.0395).

EOP-művelet szükséges a nemhez kapcsolódó kondicionált cue-indukált neurális aktiváláshoz

Az eddigi megállapítások alapján feltételeztük, hogy az EOP aktiválás a VTA-ban párosodási tapasztalat és az azt követő VTA dopamin-só méretcsökkentés szempontjából kritikus fontosságú az ösztönző érzékenységnek a párosítási jutalmakhoz kapcsolódó stimulusok és ennek következtében a megkönnyített szexuális viselkedés fenntartásához. A hipotézis teszteléséhez megvizsgáltuk az opioidreceptorok blokkolásának hatását a párosodási tapasztalat során a szexuális jutalmat előrejelző, feltételezett kontextusos jelek által előidézett neurális aktivitásra (nemi összefüggéses összefüggések). Szexuálisan naiv állatok is ki vannak téve a környezeti jelzéseknek, de ezek nem kapcsolódtak a korábbi párzási élményhez, így semleges jelek voltak. Végül a pERK alapszinteket szexuálisan tapasztalt és naiv kontroll csoportokban határoztuk meg, amelyek az otthoni ketrecekben maradtak és nem voltak kitéve semmilyen jelnek (-No Cue). Korábbi megállapítások megerősítése és bővítése (Balfour és munkatársai, 2004), a korábbi nemi jutalmakkal összefüggő kontextusos jelek expozíciója jelentősen megnövelte a pERK kifejezést a nemi tapasztalatokkal rendelkező férfiaknál a NAc-ben (Ábra 7) és mPFC (Ábra 8A-C), de nem okozott idegsejt aktivációt a BLA-ban (Ábra 8D) vagy CPu (adatok nem jelennek meg). A cue expozíció fő hatásai voltak az NAc magban (F(1,12) = 12.1941, p = 0.004), ACA (F(1,12) = 5.541, p = 0.038) és PL (F(1,12) = 5.241, p = 0.041) és a naloxon kezelés az NAc magban (F(1,12) = 6.511, p = 0.025), ACA (F(1,12) = 15.242, p = 0.002) és PL (F(1,12) = 7.336, p = 0.019). Jelentős kölcsönhatás volt az NAc magjában (F(1,12) = 10.107, p = 0.008), ACA (F(1,12) = 16.060, p = 0.002), PL (F(1,12) = 8.235, p = 0.014) és IL ((F(1,12) = 6.965, p = 0.022). Először is, a párzással összefüggő Cue-expozíció jelentősen megnövelte a pERK-t a sóoldattal kezelt szexuálisan tapasztalt állatokban (Exp Sal ​​+ Cue), összehasonlítva azokkal a kontrollokkal, amelyek nem voltak kitéve semmilyen jelnek, és amelyeket az otthoni ketrecből (Exp Sal-No Cue) vettek be NAc magban (Ábra 7A; p <0.001), és az ACA mPFC alrégiók (Ábra 8A; p = 0.001), PL (Ábra 8B; p = 0.003) és IL (Ábra 8C; p = 0.029). Ezzel ellentétben a sóoldattal kezelt szexuálisan naiv állatokban a szexuális jutalommal nem összefüggő kontextusos jelek expozíciója nem indukált a pERK-t egyetlen agyterületen sem (Naive Sal + Cue a naiv Sal-No Cue-hoz képest); Ábrákon. 7, 8), amely bizonyítja, hogy a pERK indukciója specifikus a szexuális tapasztalatokkal kapcsolatos jelzések expozíciójára. Továbbá, a szexuális tapasztalatok önmagukban nem változtatták meg a pERK kiindulási expresszióját az agy régióiban, mivel nem voltak különbségek az otthoni ketrecekből vett csoportok között, akár szexuálisan naivok, akár tapasztalatok, és sóoldattal vagy naloxonnal kezeltek.

Ábra 7. 

Ábra 7. 

Az endogén opioid hatás szükséges a nemi aktivációhoz a NAc-ben, amelyet a nemhez kapcsolódó kondicionált jelek indukálnak. A pERK-IR sejtek száma mm-enként2 az accumbens magban (A) és héj (B) szexuálisan naiv (fehér) és tapasztalt (Exp; black) állatokban, amelyeket szisztémás NLX-sel vagy sóoldattal (Sal) kezeltek a párosodás során (Exp férfiak) vagy kezelési szekciókban (Naive férfiak). A csoportokat vagy a kontextusos cue-oknak (Cue) tették ki, amelyek az Exp férfiakban párosodó jelek voltak, és a naiv állatokban semleges jelek, vagy az otthoni ketrecekből (No Cue; a Cue-cím hiánya miatt). Az adatokat átlag ± SEM-ként mutatjuk be; * szignifikáns különbséget jelez a sóoldattal előkezelt, cue-exponált kontrollokhoz képest (Naive Sal-No Cue és Exp Sal-No Cue); A szignifikáns különbség a Sal-kezelt Cue-expozíciós Exp csoporthoz képest (Exp Sal ​​+ Cue). A pERK-IR sejtek mm-enkénti reprezentatív képei2 a szexuálisan tapasztalt férfiak NA-magjában (Sal (C, D) vagy NLX (E, F), amelyeket vagy az otthoni ketrecből (No Cue, C, E) vettünk, vagy ki voltak téve a párosítással összefüggő kontextusos jeleknek (Cue; D, F). N = 4 minden csoport, kivéve a Naive NLX (No Cue), n = 3. ac, elülső commissure. Méretarány, 100 μm.

Ábra 8. 

Ábra 8. 

A naloxon hatása a párosító cue-indukált pERK expresszióra más VTA célterületeken. A pERK-IR sejtek száma mm-enként2 szexuálisan naiv (fehér) és tapasztalt (Exp; black) állatokban, amelyeket szisztémás NLX-sel vagy sóoldattal (Sal) kezeltek a párosodás során, és az ACA-ban (Cue) vagy otthoni ketrecben (nem cues) voltak kitéve (A), PL (B), IL (C) és a BLA (D). Az adatok átlag ± SEM; * szignifikáns különbséget jelez a sóoldattal előkezelt, cue-exponált kontrollokhoz képest (Naive Sal-No Cue és Exp Sal-No Cue); A szignifikáns különbség a Sal-kezelt cue-exponált szexuálisan naiv kontrollokhoz képest (Naive Sal + Cue).

Hipotézisünk alátámasztására a szexuális tapasztalat során a naloxon-kezelés jelentősen csökkentette a pERK-indukciót a nemhez kapcsolódó kondicionált jelekkel. A pERK-expresszió ezekben a naloxon-kezelt cue-expozíciós tapasztalatokkal rendelkező férfiakban (Exp NLX + Cue) nem különbözött az alapszintű pERK-expressziótól az otthoni ketrecekből vett szexuálisan naiv vagy tapasztalt kontrollcsoportokban (Naive Sal-No Cue vagy Naive NLX- Nincs cue). Ezenkívül a naloxon-kezelt cue-expozíciós tapasztalatokkal rendelkező férfiak (Exp NLX + Cue) pERK expressziója szignifikánsan alacsonyabb volt, mint a sóoldattal kezelt cue-expozíciós tapasztalattal rendelkező állatok (Exp Sal ​​+ Cue) a NAc magban (Ábra 7A; p = 0.002) és mPFC alrégiók (Ábra 8A, ACA: p <0.001; B, PL: p = 0.002; C, IL: p = 0.015).

A NAc-héjban a kétirányú ANOVA-analízis nem eredményezett statisztikailag szignifikáns hatást a faktorok és a naloxon kezelés hatására. Azonban a páros összehasonlítás azt mutatta, hogy a cue expozíció a sóoldattal kezelt, szexuálisan tapasztalt csoportban (Exp SAL + Cue) a pERK-t indukálta, összehasonlítva a cue-exponált Saline naiv kontroll csoporttal (Ábra 7B; Naive SAL-No Cue: p = 0.0163).

Megbeszélés

A jelenlegi vizsgálat azt mutatja, hogy a VTA-ban a szexuális viselkedés során fellépő EOP, természetes jutalom viselkedés, a VTA dopamin sejtek soma méretének robusztus, de átmeneti csökkenését okozza. A soma méretének csökkenését nem figyelték meg a VTA nem-dopamin neuronjaiban, sem a közeli materia nigra dopamin neuronjaiban, ami arra utal, hogy ez a változás specifikus a VTA dopamin sejtekre. Ez a VTA dopamin-plaszticitás hasonló a krónikus opiát expozíció által kiváltottnak (Sklair-Tavron és munkatársai, 1996; Russo és munkatársai, 2007; Mazei-Robison és munkatársai, 2011), és hasonló toleranciát okozott az exogén opiát (morfin) jutalommal szemben. Kimutattuk, hogy a VTA dopamin plaszticitása kritikus a hosszú távú (fenntartó), de nem rövid távú (fejlődés), a szexuális viselkedés megerősítése és a jutalomhoz kapcsolódó cue-indukált neurális aktivitás (pERK) szempontjából a VTA célterületeken: NAc és mPFC. Ezek az eredmények arra utalnak, hogy a VTA dopamin-plaszticitásnak szerepe van a természetes jutalmak előrejelző jeleinek vagy jutalmának emlékezetének ösztönző hosszú távú kifejeződésében.

Jól dokumentálták, hogy a szexuális élmény megkönnyíti a későbbi szexuális viselkedést, beleértve a párosodás megkezdésének gyorsabb megjelenését és a nagyobb teljesítményt (Balfour és munkatársai, 2004; Pitchers és munkatársai, 2010a,b, 2012). A szexuális viselkedés megkönnyítése vagy megerősítése a párosodás után legalább 28 d-ig fennmarad (Pitchers és munkatársai, 2012). Továbbá azt is kimutatták, hogy a nemi viselkedés és a nemi jutalmat előidéző ​​kondicionált jelek MOR internalizálódást okoznak a VTA-ban, és idegsejt-aktiválást váltanak ki a mesolimbikus rendszerben, beleértve a VTA (dopamin és nondopamin neuronok), NAc, PFC és BLA (Balfour és munkatársai, 2004, 2006). Jól ismert VTA dopamin neuronok kulcsszerepet játszanak a jutalomhoz kapcsolódó stimulusok ösztönzésének megismerésében és megítélésében (Berridge és Robinson, 1998; Berridge és munkatársai, 2009; Flagel és munkatársai, 2011) és kritikusak a jutalom előrejelzéséhez (Schultz, 2010). A jelenlegi eredmények a jelenlegi tudásunkra is kiterjednek, kimutatva, hogy a jutalmak által indukált VTA neuroplaszticitás kritikus fontosságú ezeknek a funkcióknak, és függ az EOP által a VTA aktiválódásától. Jelenleg nem ismert, hogy az EOP a MOR ligandum, amely a szexuális viselkedés során hat a VTA-ban. Bár mind a β-endorfin, mind az enkefalin szerepet játszott az élelmiszer-erősítők ösztönző motivációjában (Hayward és munkatársai, 2002), ez még a férfiak szexuális viselkedéséhez szükséges. Korábban kimutattuk, hogy a β-endorfin neuronok nem aktiválódnak a párzás során, és nem emelkedik a POMC mRNS; így azt sugallják, hogy a β-endorfin nem lehet a kritikus EOP, amely a párzás során a VTA-ban hat.Davis és munkatársai, 2007). Ez a VTA dopamin-plaszticitás elengedhetetlen volt a neurális aktivitáshoz az mPFC-ben, a NAc-ben és a VTA-ban a szexuális jutalom-előrejelző környezeti jelzéseknek való kitettség után. Továbbá, a VTA dopamin plaszticitása kritikus volt a szexuális viselkedés fokozott iniciációjának és teljesítményének hosszú távú kifejeződése szempontjából. Ezzel ellentétben a szexuális élmény által okozott VTA neuroplaszticitás nem volt szükséges a hedonikus válaszhoz, mivel a szexuális jutalom (amelyet a CPP határozott meg) és a szexuális motiváció és a teljesítmény rövid távú megkönnyítése (szexuális élmény vagy 1 d később) változatlan maradt a MOR blokkolás ellenére (Mehrara és Baum, 1990). Ehelyett az adatok arra utalnak, hogy a VTA dopamin neuroplasticitás közvetíti a hosszabb távot (7 d az utolsó szexuális élmény után; Pitchers és munkatársai, 2012) a nemek jutalmának „kívánságának” kifejezése és a párosító jelzésekre adott motiváltabb válaszok \ tMiller és Baum, 1987; Berridge és Robinson, 1998).

A szexuálisan tapasztalt állatok a morfin jutalommal szemben mutatnak kereszt-toleranciát, hasonlóan az egerekben futó kerék hatásaihoz, egy másik természetes nyereséges viselkedéshez, a naloxon kezeléssel blokkolt hatáshoz (Lett és munkatársai, 2001, 2002) és megállapították, hogy függ a VTA dopamin sejtek plaszticitásától (aktuális eredmények). A természetes jutalmakhoz hasonlóan a morfin vagy a heroin ismételt expozíciója a VTA dopamin soma méretének átmeneti csökkenését eredményezi (Sklair-Tavron és munkatársai, 1996; Spiga és munkatársai, 2003; Russo és munkatársai, 2007; Mazei-Robison és munkatársai, 2011). Ezen túlmenően, az opiát expozíció rövid megvonási idővel jutalmazási toleranciát okoz, amint azt a magasabb dózisú gyógyszer is igényli a jutalmi szövetségek létrehozásához (Shippenberg és munkatársai, 1987; Russo és munkatársai, 2007), és az önadagoló állatokat a kábítószer-bevitel fokozására \ tAhmed és munkatársai, 2000; Walker és munkatársai, 2003). Ennélfogva az EOP és az opiátok közös idegi szubsztrátokra hatnak, hogy a korai visszavonás során jutalmazási toleranciát indukáljanak, ami egy kompenzáló homeosztatikus mechanizmust tükrözhet az ismételt expozíciós stimuláció ellen (Koob és Le Moal, 2005). Ezzel ellentétben, a hosszú távú opiát-kábítószer-absztinencia idején a tolerancia megfordul a hatóanyag jutalmazó tulajdonságai iránt (Harris és Aston-Jones, 2003; Aston-Jones és Harris, 2004; Harris és Gewirtz, 2004). Érdekes, hogy az 7 – 28 d nemi absztinenciájával járó szexuális élményt a pszichostimuláns jutalmak esetében kereszt-szenzibilizációt okoznak (Pitchers és munkatársai, 2010a), amely a párosodás által indukált deltaFosB expressziótól és a dopamin receptor 1 aktiválódásától függ \ tPitchers és munkatársai, 2013). Ezért a szexuális jutalmak tapasztalata egyidejűleg opiát jutalom toleranciát és pszichostimuláns jutalomérzékenységet okoz, bár a morfin jutalmi tűrésnél hosszabb nemi absztinencia időszakot kell még vizsgálni. Fontosnak tartjuk, hogy a kábítószer-jutalom ellentétes hatásai a neurotoxicitás különböző formái közvetítsék a mesolimbikus rendszer különböző területein: VTA EOP hatás és dopamin plaszticitás közvetíti az opiát jutalmak toleranciáját (jelenlegi vizsgálat), míg a NAc deltaFosB expresszió szabályozza a pszichostimuláns szenzitizációt (Pitchers és munkatársai, 2013). Mindkét esemény hozzájárulhat a kábítószer-fogyasztás eszkalációjához (Ahmed és Koob, 1998, 1999; Ahmed és munkatársai, 2000, 2002, 2003; Walker és munkatársai, 2003).

A molekuláris mechanizmusok, amelyek révén az EOP befolyásolja a VTA dopamin neuronjait a természetes jutalom viselkedése során, ismeretlenek. Az IRS2-Akt-mTORC2 útvonal az ismételt morfin által okozott VTA-ban a csökkent Soma-méret egyik fő közvetítője (Jaworski és munkatársai, 2005; Russo és munkatársai, 2007; Mazei-Robison és munkatársai, 2011). Az ismételt morfin beadás indukált változása a dopamin neuronok méretében a VTA-ban megelőzhető az agy-eredetű neurotrofikus faktor (BDNF; VTA) infúzióival; Sklair-Tavron és Nestler, 1995). A BDNF aktiválja ezt az utat a TrkB jelzéssel (Russo és munkatársai, 2007), egy nagyfokú affinitással rendelkező receptor kináz a BDNF-hez és az IRS2-Akt \ tSeroógia és Gall, 1993; Numan és Seroogy, 1999), és a VTA-ban a dopamin és GABA neuronokon expresszálták. Az IRS2-Akt útvonala különböző komponenseinek a vírus vektor génátviteli technológiával történő csökkentése utánozza a krónikus opiát expozíció hatásait. Továbbá, az opiát expozíció hatásai megmenthetők a jelzési útvonal visszaállításával (Russo és munkatársai, 2007) és az mTORC2 egy komponensének túlzott expressziója megakadályozza a morfin által kiváltott VTA dopamin szoma csökkentését (Mazei-Robison és munkatársai, 2011). Ezért a krónikus opiátok VTA dopamin-soma méretére gyakorolt ​​hatását vizsgáló korábbi munka azt mutatja, hogy az IRS2-Akt-mTOR útvonal morfin által kiváltott csökkenése elegendő és szükséges ahhoz, hogy ezt a hatást (Mazei-Robison és Nestler, 2012). Így kísértés, hogy spekuláljunk, hogy a szexuális élmény hatása a VTA dopamin neuroplasticitásra hasonló módon közvetül a BDNF és az IRS2-Akt-mTORC2 útvonalon.

Összefoglalva, a jelenlegi vizsgálat kimutatta, hogy a VTA neuroplasticitást a természetes jutalmazó magatartás, különösen az ismétlődő férfi szexuális viselkedés tapasztalja. Pontosabban, az EOP a VTA-ban hat a dopamin-soma méretének csökkentésére, amely feltételezhető, hogy fokozott neurális ingerlékenységgel és kevésbé dopamin-kimenettel jár, ami egy hipodopaminerg rendszert eredményez, és megváltoztatja a mesolimbikus rendszert a szexuális jutalmat előrejelző jelekre válaszul. Továbbá a VTA neuroplasticitás kritikus fontosságú az ösztönző motiváció és a jutalom emlékezetében, de nem a szexuális viselkedés hedonikus hatására. Végül a természetes jutalmak viselkedése által okozott VTA neuroplaszticitás, amelyet rövid jutalék absztinencia követ, az opiát jutalmat befolyásolja, és így befolyásolhatja a kábítószer-függőség kialakulásának sérülékenységét.

Lábjegyzetek

  • Kapott január 12, 2014.
  • A felülvizsgálat május 17, 2014.
  • Elfogadott május 20, 2014.

  • Ezt a kutatást támogatta a kanadai Egészségügyi Kutatóintézet támogatása az LMC és a Természettudományi és Mérnöki Kutatási Tanács részére a KKP-nek

  • A szerzők nem hirdetnek versengő pénzügyi érdekeket.

  • A levelezést dr. Lique M. Coolennek, a Mississippi Egyetem Orvostudományi Egyetemének, a fiziológiai és biofizikai osztálynak, az 2500 North State Streetnek, Jacksonnak, az MS 39216-4505-nek kell címezni. [e-mail védett]

Referenciák

  1. ↵
    1. Agmo A

    (1997) Férfi patkány szexuális viselkedése. Brain Res Brain Res Protoc 1: 203-209.

  2. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Koob GF

    (1998) Átmenet a mérsékelt és a túlzott kábítószer-bevitel között: változás a hedonikus alapértékben. Tudomány 282: 298-300.

  3. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Koob GF

    (1999) A kokain önadagolásának beállított értékének tartós növekedése patkányokon történt eszkaláció után. Psychopharmacology 146: 303-312.

  4. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Walker JR,
    3. Koob GF

    (2000) A heroin szedésének tartós növekedése patkányokban a kábítószer-eszkaláció történetében. Neuropsychop 22: 413-421.

  5. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Kenny PJ,
    3. Koob GF,
    4. Markou A

    (2002) Neurobiológiai bizonyítékok a hedonikus allosztázisra, amely a kokainhasználat fokozódásával jár együtt. Nat Neurosci 5: 625-626.

  6. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Lin D,
    3. Koob GF,
    4. Parsons LH

    (2003) A kokain önadagolásának elmozdulása nem függ a megváltozott kokain által kiváltott magok dombamin szintjétől. J Neurochem 86: 102-113.

  7. ↵
    1. Aston-Jones G,
    2. Harris GC

    (2004) Agyi szubsztrátok a megnövekedett drogkereséshez az elhúzódó kivonás során. Neuropharmacology 47: 167-179.

  8. ↵
    1. Balfour ME
    2. Yu L,
    3. Coolen LM

    (2004) A szexuális viselkedés és a nemekkel kapcsolatos környezeti jelek aktiválják a mesolimbikus rendszert hím patkányokban. Neuropsychop 29: 718-730.

  9. ↵
    1. Balfour ME
    2. Brown JL,
    3. Yu L,
    4. Coolen LM

    (2006) Az efferensek potenciális hozzájárulása a mediális prefrontális kéregből a hím patkányok szexuális viselkedését követő neurális aktiváláshoz. Neuroscience 137: 1259-1276.

  10. ↵
    1. Beitner-Johnson D
    2. X Guitart
    3. Nestler EJ

    (1992) Neurofilamentes fehérjék és a mezolimbikus dopamin rendszer: a krónikus morfin és a krónikus kokain közös szabályozása a patkány ventrális tegmentális területén. J Neurosci 12: 2165-2176.

  11. ↵
    1. Berridge KC
    2. Robinson TE

    (1998) Milyen szerepet játszik a dopamin a jutalomban: a hedonikus hatás, a tanulás jutalma, vagy az ösztönző érdeklődés? Brain Res Brain Res Rev 28: 309-369.

  12. ↵
    1. Berridge KC
    2. Robinson TE
    3. Aldridge JW

    (2009) A jutalom összetevőinek szétválasztása: „szeretet”, „akar” és tanulás. Curr Opin Pharmacol 9: 65-73.

  13. ↵
    1. Blum K,
    2. Werner T
    3. Carnes S
    4. Carnes P
    5. Bowirrat A,
    6. Giordano J,
    7. Oscar-Berman M,
    8. Arany M

    (2012) Szex, drogok és rock 'n' roll: hipotézis a közös mesolimbikus aktiválásra, mint a jutalomgén polimorfizmusainak függvénye. J Pszichoaktív gyógyszerek 44: 38-55.

  14. ↵
    1. Chu NN,
    2. Zuo YF,
    3. Meng L
    4. Lee DY
    5. Han JS,
    6. Cui CL

    (2007) A perifériás elektromos stimuláció megfordította a sejtméret csökkentését és a fokozott BDNF-szintet a ventrális tegmentalis területen krónikus morfin-kezelt patkányokban. Brain Res 1182: 90-98.

  15. ↵
    1. Davis BA
    2. Fitzgerald ME
    3. Brown JL,
    4. Amstalden KA,
    5. Coolen LM

    (2007) A POMC idegsejtek aktiválása általános érzékenység esetén, de nem szexuális viselkedés a hím patkányokban. Behav Neurosci 121: 1012-1022.

  16. ↵
    1. Fiorino DF,
    2. Coury A,
    3. Phillips AG

    (1997) Dinamikus változások a magban a dopamin kiáramlása során a Coolidge hatás alatt hím patkányokban. J Neurosci 17: 4849-4855.

  17. ↵
    1. Flagel SB,
    2. Clark JJ,
    3. Robinson TE
    4. Mayo L
    5. Czuj A
    6. Willuhn I,
    7. Akers CA,
    8. Clinton SM
    9. Phillips PE,
    10. Akil H

    (2011) A dopamin szelektív szerepe az inger-jutalom tanulásban. Természet 469: 53-57.

  18. ↵
    1. Frohmader KS,
    2. KK kancsók,
    3. Balfour ME
    4. Coolen LM

    (2010a) Örömök keverése: a kábítószerek szexuális viselkedésre gyakorolt ​​hatásának áttekintése az emberekben és az állati modellekben. Horm Behav 58: 149-162.

  19. ↵
    1. Frohmader KS,
    2. Wiskerke J,
    3. Bölcs RA
    4. Lehman MN,
    5. Coolen LM

    (2010b) A metamfetamin a hím patkányok szexuális viselkedését szabályozó neuronok alpopulációira hat. Neuroscience 166: 771-784.

  20. ↵
    1. Harris AC
    2. Gewirtz JC

    (2004) Emelkedett meglepetés az akut morfin kivonása során: az opiát elvonásának és a szorongásnak a modellje. Psychopharmacology 171: 140-147.

  21. ↵
    1. Harris GC
    2. Aston-Jones G

    (2003) Változott motiváció és tanulás az opiát kivonása után: bizonyíték a jutalom feldolgozásának hosszabb ideig tartó szabályozására. Neuropsychop 28: 865-871.

  22. ↵
    1. Hayward MD
    2. Pintar JE,
    3. Alacsony MJ

    (2002) Szelektív jutalmi hiány az egerekben, amelyekben nincs béta-endorfin és enkefalin. J Neurosci 22: 8251-8258.

  23. ↵
    1. Hoebel BG,
    2. Avena NM
    3. Bocarsly ME,
    4. Rada P

    (2009) Természetes függőség: a cukorfüggőségen alapuló viselkedési és áramköri modell. J Addict Med 3: 33-41.

  24. ↵
    1. Hyman SE,
    2. Malenka RC,
    3. Nestler EJ

    (2006) A függőség neurális mechanizmusai: a jutalomhoz kapcsolódó tanulás és memória szerepe. Annu Rev Neurosci 29: 565-598.

  25. ↵
    1. Ikemoto S
    2. Kohl RR,
    3. McBride WJ

    (1997) A GABA (A) receptor blokkolása az elülső ventrális tegmentalis területen növeli a dopamin extracelluláris szintjét a patkányok magvakban. J Neurochem 69: 137-143.

  26. ↵
    1. Jaworski J,
    2. Spangler S
    3. Seeburg DP,
    4. Hoogenraad CC,
    5. Sheng M

    (2005) A dendritikus arborizáció ellenőrzése a rapamicin-útvonal foszfoinozit-3'-kináz-Akt-emlősökkel. J Neurosci 25: 11300-11312.

  27. ↵
    1. Johnson SW
    2. Észak-RA

    (1992) Az opioidok a helyi interneuronok hiperpolarizációjával gerjesztik a dopamin neuronokat. J Neurosci 12: 483-488.

  28. ↵
    1. Klitenick MA
    2. DeWitte P,
    3. Kalivas PW

    (1992) Szomatodendritikus dopamin felszabadulás szabályozása a ventrális tegmentális területen opioidok és GABA által: in vivo mikrodialízis vizsgálat. J Neurosci 12: 2623-2632.

  29. ↵
    1. Koob GF,
    2. Le Moal M

    (2005) A jutalom neurocircuit és a drogfüggőség „sötét oldalának” plaszticitása. Nat Neurosci 8: 1442-1444.

  30. ↵
    1. Lennette DA

    (1978) Az immunfluoreszcens mikroszkópia javított szerelőközege. Am J Clin Pathol 69: 647-648.

  31. ↵
    1. BT Lett
    2. GL VL
    3. Koh MT

    (2001) A naloxon gyengíti a patkányokon futó kerék által kiváltott feltételes hely preferenciát. Physiol Behav 72: 355-358.

  32. ↵
    1. BT Lett
    2. GL VL
    3. Koh MT,
    4. Flynn G

    (2002) A kerékpározás előzetes tapasztalata keresztműrést eredményez a morfin jótékony hatásával szemben. Pharmacol Biochem Behav 72: 101-105.

  33. ↵
    1. Matthews RT
    2. Német DC

    (1984) Elektrofiziológiai bizonyíték a patkány ventrális tegmentális területének dopamin neuronjainak gerjesztésére morfinnal. Neuroscience 11: 617-625.

  34. ↵
    1. Mazei-Robison MS
    2. Koo JW,
    3. Friedman AK,
    4. Lansink CS,
    5. Robison AJ,
    6. Vinish M,
    7. Krishnan V
    8. Kim S,
    9. Siuta MA,
    10. Galli A
    11. Niswender KD,
    12. Appasani R
    13. Horvath MC,
    14. Neve RL,
    15. Worley PF,
    16. Snyder SH,
    17. Hurd YL
    18. JF Jó
    19. Han MH,
    20. Russo SJ,
    21. és mtsai.

    (2011) Az mTOR jelátvitel és a neuronális aktivitás szerepe a morfin által indukált adaptációkban a ventrális tegmentális terület dopamin neuronjaiban. Neuron 72: 977-990.

  35. ↵
    1. Mazei-Robison MS
    2. Nestler EJ

    (2012) Opiát által indukált molekuláris és celluláris plaszticitás a ventrális tegmentális területen és a locus coeruleus katekolamin neuronoknál. Cold Spring Harb Perspect Med 2: a012070.

  36. ↵
    1. Mehrara BJ
    2. Baum MJ

    (1990) A naloxon megzavarja a hímnemű patkányok kifejeződését, de nem egy kondicionált hely preferencia-választ egy estélyes nő számára. Psychopharmacology 101: 118-125.

  37. ↵
    1. Meisel RL
    2. Mullins AJ

    (2006) Szexuális élmény a női rágcsálókban: celluláris mechanizmusok és funkcionális következmények. Brain Res 1126: 56-65.

  38. ↵
    1. Miller RL,
    2. Baum MJ

    (1987) A naloxon gátolja a párosodást és a kondicionált hely preferenciát egy hímivarú nőstény hím patkányokban a kasztrálás után. Pharmacol Biochem Behav 26: 781-789.

  39. ↵
    1. Mitchell JB,
    2. Stewart J

    (1990) A hím patkányok szexuális viselkedésének megkönnyítése az opiátok bel-VTA injekciójával összefüggésben. Pharmacol Biochem Behav 35: 643-650.

  40. ↵
    1. Murphy LO,
    2. Blenis J

    (2006) MAPK jelspecifitás: a megfelelő helyen a megfelelő időben. Trends Biochem Sci 31: 268-275.

  41. ↵
    1. Nestler EJ

    (2012) A kábítószer-függőség transzkripciós mechanizmusai. Clin Psychopharmacol Neurosci 10: 136-143.

  42. ↵
  • ↵
    1. Paxinos G,
    2. Watson C

    (2013) A patkány agya sztereotaxikus koordinátákban (Academic, Boston), Ed 7.

  • ↵
    1. KK kancsók,
    2. Balfour ME
    3. Lehman MN,
    4. Richtand NM,
    5. Yu L,
    6. Coolen LM

    (2010a) Neuroplaszticitás a mesolimbikus rendszerben, amelyet természetes jutalom és az azt követő jutalom absztinencia okoz. Biol Psychiatry 67: 872-879.

  • ↵
    1. KK kancsók,
    2. Frohmader KS,
    3. Vialou V
    4. Mouzon E,
    5. Nestler EJ
    6. Lehman MN,
    7. Coolen LM

    (2010b) A DeltaFosB a nukleáris accumbensben kritikus fontosságú a szexuális jutalom erősítésében. Genes Behav Brain 9: 831-840.

  • ↵
    1. KK kancsók,
    2. Schmid S,
    3. Di Sebastiano AR
    4. Wang X
    5. Laviolette SR,
    6. Lehman MN,
    7. Coolen LM

    (2012) A természetes jutalmak tapasztalata megváltoztatja az AMPA és az NMDA receptor eloszlását és működését a sejtmagban. PLoS One 7: e34700.

  • ↵
    1. KK kancsók,
    2. Vialou V
    3. Nestler EJ
    4. Laviolette SR,
    5. Lehman MN,
    6. Coolen LM

    (2013) A természetes és kábítószer-jutalmak közös neurális plaszticitási mechanizmusokra hatnak, a DeltaFosB pedig kulcsfontosságú közvetítő. J Neurosci 33: 3434-3442.

  • ↵
    1. A Roux PP
    2. Blenis J

    (2004) ERK és p38 MAPK-aktivált protein kinázok: a különböző biológiai funkciókkal rendelkező protein kinázok családja. Microbiol Mol Biol Rev 68: 320-344.

  • ↵
    1. Russo SJ,
    2. Bolanos CA
    3. Theobald DE,
    4. A DeCarolis NA,
    5. Renthal W,
    6. Kumar A
    7. Winstanley CA
    8. Renthal NE,
    9. Wiley MD
    10. Önálló DW,
    11. Russell DS,
    12. Neve RL,
    13. Eisch AJ,
    14. Nestler EJ

    (2007) Az IRS2-Akt útvonal az agyi dopamin neuronokban szabályozza az opiátokra adott viselkedési és celluláris válaszokat. Nat Neurosci 10: 93-99.

  • ↵
    1. Schultz W

    (2010) A dopamin neuronok több funkciója. F1000 Biol Rep 2: 2.

  • ↵
    1. Seroógia KB,
    2. Gall CM

    (1993) A neurotrofinok expressziója a középső dopaminerg neuronok által. Exp Neurol 124: 119-128.

  • ↵
    1. Shippenberg TS
    2. Bals-Kubik R
    3. Herz A

    (1987) Az opioidok motivációs tulajdonságai: bizonyíték arra, hogy a delta-receptorok aktiválása erősítő folyamatokat közvetít. Brain Res 436: 234-239.

  • ↵
    1. Sklair-Tavron L
    2. Nestler EJ

    (1995) A morfin és a neurotrofinok, az NT-3, az NT-4 és a BDNF ellentétes hatásai a lokusz coeruleus neuronokra in vitro. Brain Res 702: 117-125.

  • ↵
    1. Sklair-Tavron L
    2. Shi WX,
    3. SB sáv,
    4. Harris HW
    5. Bunney BS,
    6. Nestler EJ

    (1996) A krónikus morfin a mesolimbikus dopamin neuronok morfológiájában látható változásokat vált ki. Proc Natl Acad Sci USA 93: 11202-11207.

  • ↵
    1. Spiga S
    2. Serra GP
    3. Puddu MC,
    4. A Foddai M
    5. Diana M

    (2003) A VTA morfinkivonás által kiváltott rendellenességei: konfokális lézeres szkennelési mikroszkópia. Eur J Neurosci 17: 605-612.

  • ↵
    1. Swanson LW

    (2004) Agyi térképek: a patkány agy szerkezete (Academic, San Diego), Ed 3.

  • ↵
    1. Tenk CM,
    2. Wilson H
    3. Zhang Q
    4. KK kancsók,
    5. Coolen LM

    (2009) Szexuális jutalom hím patkányokban: a szexuális élmény hatása az ejakulációval és a behatolásokkal kapcsolatos feltételes hely preferenciákra. Horm Behav 55: 93-97.

  • ↵
    1. Tzschentke TM

    (2007) Jutalom mérése a feltételes hely preferencia (CPP) paradigmával: az elmúlt évtized frissítése. Addict Biol 12: 227-462.

  • ↵
    1. van Furth WR,
    2. van Ree JM

    (1996) Szexuális motiváció: az endogén opioidok bevonása a ventrális tegmentális területbe. Brain Res 729: 20-28.

  • ↵
    1. van Furth WR,
    2. A Wolterink G
    3. van Ree JM

    (1995) A férfias szexuális viselkedés szabályozása: agyi opioidok és dopamin bevonása. Brain Res Brain Res Rev 21: 162-184.

  • ↵
    1. Walker JR,
    2. Chen SA,
    3. Moffitt H
    4. Inturrisi CE,
    5. Koob GF

    (2003) A krónikus opioid expozíció növeli a heroin önadagolását patkányokban. Pharmacol Biochem Behav 75: 349-354.

  • ↵
    1. Fiatal KA,
    2. Gobrogge KL,
    3. Liu Y
    4. Wang Z

    (2011) A páros kötés neurobiológiája: egy társadalmilag monogámos rágcsáló betekintése. Első Neuroendocrinol 32: 53-69.

    •