A metamfetamin aktivált Fos-expresszáló neuronok molekuláris változásainak detektálása egyetlen patkány dorsalis striatumból fluoreszcencia-aktivált sejttípusok (FACS) alkalmazásával (2013)

A metamfetamin és más gyógyszerek az agy összes neuronjának egy kis részét aktiválják. Korábban kifejlesztettünk egy fluoreszcencia-aktivált sejtválogató (FACS) alapú módszert a molekuláris változások jellemzésére, amelyek szelektíven indukálódtak a Fos neurális aktivitási markert expresszáló aktivált neuronokban. Ez a módszer azonban sok patkányból álló minták összegyűjtését teszi szükségessé. Most egy módosított FACS-alapú módszert írunk le a Fos-expresszáló dorsalis striatális neuronok molekuláris változásainak jellemzésére egyetlen patkányból, multiplex pre-amplifikációs stratégiával.

A Fos és a NeuN (neuronális marker) immunhisztokémia azt jelzi, hogy az 5-6% -át a dorzális striatum neuronok aktiválták 90 min.

FACS-t alkalmaztunk a NeuN-jelzett neuronok Fos-pozitív és Fos-negatív neuronok elválasztására és az mRNS expresszióját RT-qPCR alkalmazásával mindössze öt Fos-pozitív neuronból. A metamfetamin indukálta az 3-20-szer szoros növekedését azonnali korai gének, homer-2, c-fos, fosB és izoformái (AfosB és egy új ΔfosB-2 izoform) Fos-pozitív, de nem Fos-negatív neuronokban. Azonnali korai gén mRNS indukciója 10-szeres volt alacsonyabb vagy hiányzott, ha egyetlen dorsalis striatum homogenizátumban nem sorolt ​​mintákban értékeltük. Módosított módszerünk lehetővé teszi, hogy a kábítószerek által aktivált neuronok egyedi molekuláris változásait tanulmányozzuk, vagy a kábítószerrel összefüggő jeleket komplex függőségi modellekben.

A metamfetamin és más gyógyszerek az agy összes neuronjának egy kis részét aktiválják. Itt bemutatunk egy olyan javított módszert, amely jellemzi a molekuláris változásokat, amelyek szelektíven indukálódnak a Fos neurális aktivitási markert expresszáló aktivált neuronokban. FACS-t használtunk a célzott PCR előerősítéssel együtt, hogy megvizsgáljuk az akut metamfetamin által indukált génexpressziót mindössze 5 Fos-expresszáló neuronokból egyetlen patkány dorsalis striatumból. A metamfetamin az 3-20-szer szoros növekedését okozza azonnali korai gének (IEG) növekedésében Fos-pozitív, de nem Fos-negatív neuronokban. A célzott PCR előerősítés lehetővé teszi, hogy a kábítószerek által aktivált neuronok egyedi molekuláris változásait tanulmányozzák, illetve a komplex addíciós modellekben a kábítószerrel összefüggő jeleket aktiválják.

Megjelent 2013. Ez a cikk egy amerikai kormányzati munkát végez, és az USA-ban nyilvános.