Az ΔFosB túlzott expresszió hatása az opioid és a kannabinoid receptor által közvetített jelátvitelre a nukleáris accumbensben (2011)

Neuropharmacology. 2011 Dec;61(8):1470-6. doi: 10.1016/j.neuropharm.2011.08.046.

Sim-Selley LJ, Cassidy MP, Sparta A, Zachariou V, Nestler EJ, Selley DE.

forrás

Farmakológiai és Toxikológiai Tanszék és Kábítószer- és Alkoholkutatási Intézet, Virginia Commonwealth Egyetem Orvostudományi Iskola, Richmond, VA 23298, USA.

Absztrakt

A stabil transzkripciós faktor ΔFosB a nukleáris accumbensben (NAc) indukálódik, többféle kábítószerrel való visszaélés hatására, és a ΔFosB transzgénikus expressziója a striatumban fokozza a morfin és a kokain jutalmazó tulajdonságait.e. Ezeknek a megfigyeléseknek a mechanikai alapja azonban nem teljesen ismert. Egy bitransgénikus egérmodellt használtunk, melyben az AFosB inaktív expressziója bekövetkezett dopamin D (1) receptor / dinamorfin tartalmú striatális neuronok, hogy meghatározzuk az ΔFosB expresszió hatását az opioid és a kannabinoid receptor jelzésére a NAc-ben. Az eredmények azt mutatták, hogy a mu opioid által közvetített G-protein aktivitás és az adenilil-cikláz gátlása fokozódott az AFosB-t expresszáló egerek NAc-ben. Hasonlóképpen az adenilil-cikláz kappa opioid gátlása fokozódott az AFosB expresszáló egerekben. Ezzel szemben a kannabinoid-receptor által közvetített jelátvitel nem különbözött az AFosB-t és a kontroll egereket túltermelő egerek között. TEzek az eredmények arra engednek következtetni, hogy az opioid és a kannabinoid receptor jelátvitel differenciáltan modulálódik az AFosB expressziójával, és jelzi, hogy az AFosB expresszió valamilyen hatását a fokozott mu és kappa opioid receptor jelzés révén okozhatja a NAc-ben.

Kulcsszavak: G-protein, adenilil-cikláz, striatum

1. Bevezetés

Opioid receptorok és kannabinoid CB1 receptorok (CB1R) két széles körben alkalmazott gyógyszerosztály neurobiológiai célpontjai, amelyek magukban foglalják a morfint, a heroint és a vényköteles opioidokat és a marihuánát (Δ9-tetrahidrokannabinol (THC)). Az opioidok és kannabinoidok akut hatásait G-fehérjéhez kapcsolt receptorok közvetítik, amelyek elsősorban G-t aktiválnaki / o fehérjéket, és az áramlás előtti effektorválaszokat, például az adenilil-cikláz gátlását (Gyerekek, 1991, Childers és munkatársai, 1992, Howlett és munkatársai, 2002). A Δ motor motoros, membráncsökkentő és pszichoaktív hatásai9-THC-t a CB gyártja1R (Huestis és munkatársai, 2001, Zimmer és munkatársai, 1999), amelyek az agyban széles körben elterjedtek, magas a bazális ganglionokban, a hippocampusban és a kisagyban (Herkenham és munkatársai, 1991). A legtöbb klinikailag releváns és bántalmazott opioid gyógyszer fájdalomcsillapító és jutalmazó hatását főként a mu opioid receptorok (MOR) közvetítik (Matthes és munkatársai, 1996), amelyek a limbikus rendszerben és az agytörzsben gazdagodtak (Mansour és munkatársai, 1994). Az opioidok és kannabinoidok jutalmazó hatásaiban fontos szerepet játszik a ventrális tegmentális terület (VTA) dopaminerg-vetületeiből (VTA) és a magvakba (NAc) tartozó mesolimbikus rendszer.Bozarth és Wise, 1984, Vaccarino és munkatársai, 1985, Zangen és munkatársai, 2006), valamint más visszaélésszerű gyógyszerek (Koob és Volkow, 2010). Ezenkívül az endogén opioid és kannabinoid rendszerek részt vesznek a pszichoaktív gyógyszerek több osztályának jutalmazó hatásaiban (Maldonado és munkatársai, 2006, Trigo és munkatársai, 2010). Ezért fontos, hogy tisztázzuk az opioid és a CB mechanizmusait1Az R jelzést a NAc szabályozza.

A kábítószerrel való visszaélés területén a központi kérdés az volt, hogy azonosítsa a pszichoaktív gyógyszerek akut és hosszú távú hatásai közötti átmenetet közvetítő fehérjéket. Az AP-1 transzkripciós faktor ΔFosB különösen érdekes, mivel ez egy stabil csonkolt splice variáns termék, fosB gén, amely a visszaélés vagy a természetes jutalmak ismételt expozíciója után halmozódik fel (McClung és munkatársai, 2004, Nestler, 2008, Nestler és munkatársai, 1999). Megállapítottuk, hogy az AFosB az agyban a morfin ismételt expozíciójával indukálódik, Δ9-THC, kokain vagy etanol, mindegyik hatóanyag egyedi ΔFosB expressziós regionális mintázatot hoz létre (Perrotti és munkatársai, 2008). A gyógyszerek közötti következetes megállapítás az volt, hogy a ΔFosB-t erősen indukálták a striatumban, ahol mind a négy gyógyszer ΔFosB-t váltott ki az NAc magban, és kivéve Δ9-THC szignifikánsan indukálta az expressziót a NAc héjban és a caudate-putamenben.

A farmakológiai vizsgálatok azt mutatták, hogy a dopamin D együttadása1 receptor (D1R) Az SCH 23390 antagonista blokkolta az AFosB indukciót az NAc-ben és a caudate-putamen-ben a szakaszos kokain vagy morfin beadása után, ami a D potenciális jelentőségére utal.1R-expresszáló neuronok (Muller és Unterwald, 2005, Nye et al., 1995). Az AFosB indukció hatását a gyógyszer által közvetített viselkedésekre olyan transz-gén egerekkel vizsgáltuk, amelyek ΔFosB-t expresszálnak az NAc és a dorsalis striatum specifikus neuronális populációiban (Chen és munkatársai, 1998). Egerek, amelyek ΔFosB-t expresszálnak dinorphin / D-ben1Az NAc és a dorzális striatumban (11A vonal) az R pozitív neuronok megváltozott válaszokat mutatnak a visszaélések gyógyszereire, különösen a kokain vagy a morfin jutalmazó hatására gyakorolt ​​fokozott érzékenységre (Colby és munkatársai, 2003, Kelz és munkatársai, 1999, Zachariou és munkatársai, 2006). Ezek a változások a MOR vagy a különböző G-fehérje alegységek szintjeiben bekövetkezett változások hiányában jelentkeztek. A dinorfin-mRNS-szinteket azonban csökkentettük az AFosB-t expresszáló egerek NAc-jében (Zachariou és munkatársai, 2006), ami arra utal, hogy az AFosB egyik célpontja egy endogén opioid peptidet kódoló gén. Az ΔFosB indukció a viselkedésbeli változásokat is előidézheti a receptor jelátvitel szabályozásával a NAc-ben, de ezt a lehetőséget nem vizsgálták. Ezért a jelen tanulmányok a bitransgénikus egérmodellt használták annak meghatározására, hogy a ΔFosB túlzott expressziója dinorphin / D-ben1Az R tartalmú striatális neuronok megváltoztatják a MOR-közvetített G-fehérje aktivitást és a MOR- és KOR-közvetített adenilil-cikláz-gátlást a NAc-ben. A ΔFosB hatása a CB-re1Az R-közvetített G-fehérje aktivitást szintén értékeltük, mert Δ9-THC beadása ΔFosB-t indukál a NAc-ben (Perrotti és munkatársai, 2008) és az endokannabinoid rendszer ismert, hogy szabályozza az agyi jutalmakat (Gardner, 2005, Maldonado és munkatársai, 2006), de az AFosB hatását az endokannabinoid rendszerre nem vizsgálták.

2. Anyagok és metódusok

2.1. reagensek

[35S] GTPyS (1250 Ci / mmol), [a-32P] ATP (800 Ci / mmol) és [3H] cAMP-t (26.4 Ci / mmol) a PerkinElmer-től (Shelton, CT) vásároltunk. ATP-t, GTP-t, GDP-t, cAMP-t, szarvasmarha-szérum albumint, kreatin-foszfokinázt, papaverint, imidazolt és WIN-55212-2-t vásároltunk a Sigma Aldrich-től (St. Louis, MO). A GTPyS-t a Roche Diagnostic Corporation-től (Chicago, IL) szereztük be. A DAMGO-t a Nemzeti Kábítószer-visszaélési Intézet (Rockville, MD) kábítószerellátási programja szolgáltatta. Az Econo-1 szcintillációs folyadékot a Fisher Scientific (Norcross, GA) cégtől szereztük be. Ecolite szcintillációs folyadékot kaptunk az ICN-től (Costa Mesa, CA). Az összes többi vegyi anyagot a Sigma Aldrich vagy a Fisher Scientific cégtől szereztük be.

2.2. egerek

Az NSE-tTA-ból (A vonal) × TetOp-AFosB-ből (11 vonal) származó hím bitransgénikus egereket állítottunk elő, amint azt Kelz és munkatársai leírják. (Kelz és munkatársai, 1999). A transzgén expressziójának elnyomása céljából a transzgenikus egereket doxiciklinen (100 µg ivóvízben) szedték és emelték. 8 hetes korban a doxiciklinet az egerek feléből kihagyottuk a transzgén expressziójának lehetővé tétele érdekében, míg a fennmaradó egereket doxiciklinen tartottuk, hogy elnyomják a transzgént. Az agyakat 8 héttel később gyűjtöttük össze, az idő, ameddig az ΔFosB transzkripciós hatásai maximálisak (McClung és Nestler, 2003). Egy második transzgenikus egérvonalat használtunk, amelyben a c-Jun domináns negatív antagonista Ac-Jun-t D-ben fejezzük ki.1R / dynorphin és D2A striatum, hippocampus és parietális kéreg R / enkefalin sejtjei (Peakman és munkatársai, 2003). A C-Jun és a hozzájuk tartozó Jun-fehérjék dimerizálódnak a Fos-család fehérjével, és a transzkripció szabályozásához a célgének AP-1-helyéhez kötődnek. A c-Jun N-terminálisának (Ac-Jun) csonkolása azonban a komplexet transzkripciósan inaktívvá teszi, és megakadályozza az aktív AP-1 komplexek DNS-kötődését. Az NSE-tTA-ból (A vonal) × TetOp-FLAG-Ac-Jun (E vonal) származó hím bitransgénikus egereket Peakman és mtsai. (Peakman és munkatársai, 2003). A transzgén expressziójának elnyomása céljából a transzgenikus egereket doxiciklinen (100 µg ivóvízben) szedték és emelték. A kölyköket 3-héten elválasztottuk, genotípusosítottuk és csoportokra szétválasztottuk, félig fenntartottuk a doxiciklin tartalmú vizet és a felét a rendszeres ivóvízzel, hogy FLAG-Δc-Jun kifejezést indukáljunk. Az agyat 6 héttel később gyűjtöttük össze, az idő, amikor a FLAG-Δc-Jun maximális szintjét mértük (Peakman és munkatársai, 2003). Valamennyi állatkísérletet a laboratóriumi állatok gondozására és használatára vonatkozó nemzeti egészségügyi intézmények útmutatójának megfelelően végeztünk.

2.3. Membránkészítés

Az agyakat -80 ° C-on tároltuk a vizsgálat napjáig. A vizsgálat előtt minden egyes agyat felolvasztottunk, és a NAc-t jégen szétválasztottuk. Minden mintát 50 mM Tris-HCl, 3 mM MgCl-ben homogenizáltunk21 mM EGTA, pH 7.4 (membránpuffer) 20 stroke-okkal az üveghomogenizátorból 4 ° C-on. A homogenizátumot 48,000-on centrifugáltuk g 4 ° C-on 10 percig, membránpufferben szuszpendáltuk, majd ismét centrifugáltuk 48,000-nél × g 4 ° C-on 10 percig, és 50 mM Tris-HCl, 3 mM MgCl-ban szuszpendáltuk.20.2 mM EGTA, 100 mM NaCl, pH 7.4 (vizsgálati puffer). A fehérje szintjét Bradford módszerével határoztuk meg.Bradford, 1976) szarvasmarha szérum albumin (BSA) alkalmazása standardként.

2.4. Agonista-stimulált [35S] GTPyS kötés

A membránokat 10 percig inkubáltuk 30 ° C hőmérsékleten adenozin-deaminázzal (3 mU / ml) a vizsgálati pufferben. A membránokat (5 – 10 µg fehérje) ezután 2 óra hosszat inkubáltuk 30 ° C-on 0.1% (w / v) BSA, 0.1 nM [35S] GTPyS, 30 µM ​​GDP és adenozin-deamináz (3 mU / ml) a DAMGO vagy WIN55,212-2 megfelelő koncentrációival és anélkül. A nemspecifikus kötést 20 µM ​​GTPyS-vel mértük. Az inkubálást GF / B üvegszálas szűrőkön végzett szűréssel, majd 3-es 3 ml jéghideg 50 mM Tris-HCl-oldattal, pH 7.4-sel végeztük. A kötött radioaktivitást folyadékszcintillációs spektrofotometriával határoztuk meg a szűrők Econo-1 szcintillációs folyadékban történő éjszakai kivonása után.

2.5. Adenilil-cikláz-vizsgálat

A membránokat (5 – 25 µg fehérje) az előzőekben ismertetett módon adenozin-deaminázzal előinkubáltuk, majd 15 percig 30 ° C-on inkubáltuk 1uM forskolin jelenlétében vagy hiányában, DAMGO, U50,488H vagy WIN55,212-2 alkalmazásával vagy anélkül. 50 µM ​​ATP, [α-32P] ATP (1.5 µCi), 0.2 mM DTT, 0.1% (w / v) BSA, 50 µM ​​ciklikus AMP, 50 µM ​​GTP, 0.2 mM papaverin, 5 mM foszfokreatin, 20 egység / ml kreatin-foszfokináz és adenozin-deamináz (3 mU / ml) az 100 µl végső térfogatában. Ilyen körülmények között összesen [α-32P] cAMP kinyerése általában kevesebb, mint 1% a hozzáadott teljes mennyiség [α-32P] ATP az egyes mintákban. A reakciót 3 min és [32P] A ciklikus AMP-t Salomon kettős oszlopos (Dowex és alumínium-oxid) módszerével izoláltuk.Salomon, 1979). [3H] cAMP-t (10,000 dpm) adtunk az egyes csövekhez, mielőtt oszlopkromatográfiát alkalmaztunk belső standardként. A radioaktivitást folyadékszcintillációs spektrofotometriával határoztuk meg (45% hatékonyság a. \ T 3H) miután az eluátum 4.5 ml-ét feloldottuk 14.5 ml-ben Ecolite szcintillációs folyadékban.

2.6. Adatelemzés

Hacsak másképp nem jelezzük, az adatokat az 4 – 8 külön kísérletek átlagértékei ± SE-ként jelentik, amelyek mindegyikét három példányban végeztük. Net-stimulált [35S] A GTPyS kötést az agonista-stimulált kötés mínusz bazális kötéssel számítjuk ki. A nettó forskolin által stimulált adenilil-cikláz aktivitást forskolin-stimulált aktivitásnak - bazális aktivitásnak (pmol / mg / perc) definiáljuk. A forskolin által stimulált adenilil-cikláz aktivitás százalékos gátlását úgy definiáljuk, mint (nettó forskolin-stimulált aktivitást agonista hiányában - nettó forskolin-stimulált aktivitást agonista / nettó forskolin-stimulált aktivitás jelenlétében agonista nélkül) × 100. Minden görbeillesztési és statisztikai elemzést Prism 4.0c-vel (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA) végeztünk. A koncentráció-hatás görbéket iteratív nemlineáris regresszióval elemeztük az EC előállításához50 és Emax értékeket. A koncentráció-hatás adatok statisztikai szignifikanciáját kétirányú varianciaanalízissel (ANOVA) határoztuk meg, fő tényezőként agonista dózist és génindukciót (be vagy ki) használtunk. A görbeillesztési értékek statisztikai szignifikanciája (Emax vagy EC50) a nem párosított kétfarkú Student t-próbájával határoztuk meg, Welch korrekciójával vagy az adatok négyzetgyöktranszformációjával, ahol szükséges az egyenlőtlen (F-teszttel detektált) variancia korrigálásához.50 értékeket.

3. Eredmények

3.1. Az AFosB expresszió hatása az opioid és a kannabinoid receptor által közvetített G-protein aktiválásra

Annak megállapításához, hogy a MOR- vagy a CB1Az R-közvetített G-fehérje aktiválódást megváltoztatta az AFosB indukálható transzgenikus expressziója az NAc-ben, agonista stimulált [35S] GTPyS kötődést vizsgáltunk izolált membránokban, amelyeket ebből a bitransgenikus egerekből készítettük, amely feltételesen expresszált (ΔFosB on) vagy nem expresszálja (AFosB off) az AFosB transzgént. A MOR aktiválásához a MOR-t aktiváltuk, és a WIN55,212-2 kannabinoid-amino-alkilindolt alkalmaztuk a MOR aktiválására.1R. Ezek a ligandumok korábban kimutatták, hogy teljes agonisták a MOR és a CB-ben1R, ill.Breivogel és munkatársai, 1998, Selley és munkatársai, 1997). Nem volt lehetséges a KOR-közvetített G-fehérje aktivitás vizsgálata, mert a jel túl alacsony a rágcsáló agyban (Childers és munkatársai, 1998). Az eredmények mind a DAMGO, mind a WIN55,122-2 G-fehérje aktivitásának koncentrációfüggő stimulációját mutatták az NAc-ban az ΔFosB-ről és az AFosB-ről egereken (ábra 1). DAMGO-stimulált aktivitás (1A ábra), a koncentráció-hatás adatok kétirányú ANOVA-ja a ΔFosB státusz (p <0.0001, F = 22.12, df = 1) és a DAMGO-koncentráció (p <0.0001, F = 29.65, df = 5) jelentős fő hatásait mutatta szignifikáns kölcsönhatás (p = 0.857, F = 0.387, df = 5). A koncentráció-hatás görbék nemlineáris regresszióanalízise szignifikánsan nagyobb DAMGO E-t mutatott kimax értéke ΔFosB-n egereken (Emax = 73 ± 5.2% stimuláció) az AFosB-nál levő egereknél (Emax = 56 ± 4.1% stimuláció; p <0.05 különbözik az egerek ΔFosB-jétől, a Student-féle t-teszttel). DAMGO EC50 az értékek nem különböztek az AFosB és az AFosB off egerek között (302 ± 72 nM versus 212 ± 56 nM, p = 0.346).

ábra 1 

Az AFosB expresszió hatása az agonista stimulált [35S] GTPγS kötődés a NAc-ben. Az AFosB-t expresszáló (AFosB on) vagy kontroll (AFosB off) egerekből származó membránokat a különböző koncentrációkat alkalmazó módszerekben leírtak szerint vizsgáltuk. ...

Ellentétben a MAM agonista DAMGO-val kapott eredményekkel, a W-55,212-2 kannabinoid agonista esetében nem volt megfigyelhető a F-BB-státuszfüggő különbség a G-fehérje aktivációban.1B ábra). A WIN55,212-2 koncentráció-hatás adatok kétirányú ANOVA-ja a WIN55,212-2 koncentráció jelentős fő hatását mutatta ki (p <0.0001, F = 112.4, df = 7), de nem ΔFosB státuszt (p = 0.172) , F = 1.90, df = 1), és nem volt interakció (p = 0.930, F = 0.346, df = 7). Hasonlóképpen, a ΔFosB státusznak nem volt hatása a WIN55,212-2 E-remax értékek (103 ± 6% versus 108 ± 8% stimuláció ΔFosB be és ki egerekben, p = 0.813 Student t-próbával) vagy EC50 értékek (103 ± 20 nM versus 170 ± 23 nM az AFosB be és ki egerekben, p = 0.123).

A görbék alakja és a korábbi vizsgálatok alapján kétfázisú WIN55,212-2 koncentráció-hatás görbéket mutatnak az agyban (Breivogel és munkatársai, 1999, Breivogel és munkatársai, 1998), a WIN55,212-2 görbéket két helyszínen is elemeztük. Az átlagolt adatok elemzése az illeszkedés jóságának enyhe javulását mutatta a két helyszín modelljével (R2 = 0.933 és 0.914, a négyzetek összege = 3644 és 5463 az ΔFosB be- és kikapcsolt egerekben, az egy helyszínhez képest (R2 = 0.891 és 0.879, a négyzetek összege = 6561 és 6628 az AFosB be és ki egerekben). Ugyanakkor nem találtunk szignifikáns különbséget az AFosB és az egerek között az E-benmax vagy EC50 a nagy vagy alacsony potenciálú helyek értékei (Kiegészítő táblázat 1), bár az alacsonyabb EC irányába mutatott50 ΔFosB on (EC50nagy = 28.0 ± 10.6 nM), összehasonlítva az ΔFosB-vel (EC50nagy = 71.5 ± 20.2 nM; p = 0.094). Ezen túlmenően az ΔFosB státusz nem volt hatással a bazálisra [35S] GTPyS kötődés NAc membránokban (253 ± 14 vs. 226 ± 14 fmol / mg az AFosB be és ki egerekben, p = 0.188). Ezek az adatok azt mutatják, hogy az AFosB indukálható transzgenikus expressziója az egerek NAc-ben növelte a MOR-közvetített G-fehérje aktiválást anélkül, hogy jelentősen befolyásolná a CB-t1R-közvetített vagy bazális G-fehérje aktivitás.

3.2. AFosB hatása az adenilil-cikláz opioid- és kannabinoid-receptor által közvetített gátlására

Az AFosB indukálható transzgenikus expressziójának hatásának értékelése a MOR és CB downstream effektor aktivitásának modulálására1R, 1 µM ​​forskolin által stimulált adenilil-cikláz aktivitás gátlását NAc membránokban vizsgáltuk. A MOR és a CB mellett1Az adenilil-cikláz aktivitás R-közvetített gátlását, a KOR-aktivitás hatásait is vizsgáltuk a KOR-szelektív teljes agonista U50,488 alkalmazásával (Zhu és munkatársai, 1997), mivel a korábbi eredmények azt mutatták, hogy a dinorfin mRNS a ΔFosB célpontja a bitransgénikus modellben (Zachariou és munkatársai, 2006). Az eredmények azt mutatták, hogy a DAMGO, az U50,488 és a WIN55,212-2 mindegyike az adenilil-cikláz aktivitás koncentrációfüggő gátlását eredményezte mind az AFosB, mind az AFosB-nél egereken (ábra 2). DAMGO koncentráció-hatás adatok kétirányú ANOVA (2A ábra) a ΔFosB státusz (p = 0.0012, F = 11.34, df = 1) és a DAMGO-koncentráció (p <0.0001, F = 29.61, df = 6) jelentős fő hatásait mutatta ki, de nem volt szignifikáns kölcsönhatás (p = 0.441, F = 0.986 , df = 6). A DAMGO koncentráció-hatás görbék nemlineáris regressziós elemzése szignifikánsan alacsonyabb DAMGO EC-t mutatott ki50 egereken a ΔFosB érték (101 ± 11 nM), összehasonlítva a off-egerek ΔFosB-vel (510 ± 182 nM, p <0.05 a hallgató t-próbájával). A DAMGO E-ben azonban nem volt szignifikáns különbségmax értékek (20.9 ± 1.26% versus 19.8 ± 1.27% gátlás az AFosB be és ki egerekben, p = 0.534).

ábra 2 

Az AFosB expresszió hatása az adenilil-cikláz aktivitás gátlására a NAc-ben. Az AFosB-t expresszáló (AFosB on) vagy kontroll (AFosB off) egerekből származó membránokat a módszerek 1 µM ​​jelenlétében leírt módon vizsgáltuk. ...

A KOR-közvetített adenilil-cikláz-gátlás is különbözött az AFosB indukálható transzgenikus expressziójának függvényében (2B ábra). Az U50,488 koncentráció-hatás adatok kétirányú ANOVA-ja a ΔFosB státusz (p = 0.0006, F = 14.53, df = 1) és az U50,488 0.0001 koncentráció (p <26.48, F = 3, df = 0.833) jelentős fő hatásait mutatta. , szignifikáns kölcsönhatás nélkül (p = 0.289, F = 3, df = 50,488). A koncentráció-hatás görbék nemlineáris regresszióanalízise nagyobb UXNUMX XNUMX E-t mutatott kimax egereken a ΔFosB értéke (18.3 ± 1.14% gátlás) a ΔFosB kiirtott egerekhez képest (12.5 ± 2.03% gátlás; p <0.05 különbözik a ΔFosB-től a Student t-tesztjénél), szignifikáns különbség nincs az U50,488 XNUMX EC-ben50 értékek (310 ± 172 nM versus 225 ± 48 nM az AFosB be és ki egerekben, p = 0.324).

A MOR és KOR esetén megfigyelt hatásokkal ellentétben a kannabinoid agonista WIN55212-2 által az adenilil-cikláz gátlására nem volt szignifikáns hatása az indukálható transzgenikus AFosB expresszióra.2C ábra). A WIN55,212-2 koncentráció-hatás adatok kétirányú ANOVA-ja a gyógyszerkoncentráció szignifikáns hatását mutatta (p <0.0001, F = 23.6, df = 2), de nem ΔFosB státuszt (p = 0.735, F = 0.118, df = 1), és nem volt szignifikáns kölcsönhatás sem (p = 0.714, F = 0.343, df = 2). Továbbá, a ΔFosB státus nem volt hatással a bazális vagy forskolin által stimulált adenil-cikláz aktivitásra agonista hiányában. A bazális adenilil-cikláz aktivitás 491 ± 35 pmol / mg / perc volt az egereken végzett AFosB-ban, míg az AFosB-n kívüli egereknél 546 ± 44 volt az érték (p = 0.346 a Student t-tesztjével). Hasonlóképpen, az adenilil-cikláz aktivitás 1 µM forskolin jelenlétében 2244 ± 163 pmol / mg / perc volt az egerek ΔFosB-jában, míg 2372 ± 138 pmol / mg / perc volt az AFosB-n kívüli egerekben (p = 0.555).

3.3. Az ΔcJun hatása az adenilil-cikláz opioid- és kannabinoid-receptor által közvetített gátlására

Mivel az AFosB által indukálható transzgenikus expresszió MOR-ról és KOR-ról az adenilil-ciklázra a NAc-ben megnövekedett gátló jelátvitelt váltott ki, érdemes volt meghatározni, hogy az AFosB által közvetített transzkripció domináns negatív inhibitora ellentétes módon modulálja az opioid receptor jelátvitelt. E kérdés megoldása érdekében a forskolin által stimulált adenilil-cikláz-aktivitás gátlását DAMGO és U50,488 segítségével vizsgáltuk membránokban, amelyeket a transzgenikus egerek NAc-jéből állítottak elő, feltételesen expresszálva ΔJJun-t. Az eredmények nem mutattak szignifikáns hatást az ΔcJun expresszióra az MNR vagy KOR adenilil-cikláz aktivitásának gátlására (ábra 3). A DAMGO koncentráció-hatás görbék kétirányú ANOVA-ja a DAMGO-koncentráció jelentős fő hatását mutatta (p <0.0001, F = 20.26, df = 6), de nem ΔcJun státuszt (p = 0.840, F = 0.041, df = 1) és nem volt szignifikáns kölcsönhatás (p = 0.982, F = 0.176, df = 6). Ehhez hasonlóan nem volt szignifikáns különbség E-benmax vagy EC50 az egerek közötti értékek ΔcJun on (Emax = 23.6 ± 2.6%; EK50 = 304 ± 43 nM) vagy ΔcJun ki (Emax = 26.1 ± 2.5%, p = 0.508; EK50 = 611 ± 176 nM, p = 0.129). Hasonló eredményeket tapasztaltunk az U50,488 esetében, így a koncentráció-hatás görbék kétirányú ANOVA-ja a koncentráció szignifikáns hatását mutatta (p <0.0001, F = 11.94, df = 6), de nem ΔcJun státusz (p = 0.127) , F = 2.391, df = 1), és nem volt szignifikáns kölcsönhatás (p = 0.978, F = 0.190, df = 6). Hasonlóképpen nem voltak szignifikáns különbségek E-benmax vagy EC50 az egerek közötti értékek ΔcJun on (Emax = 14.8 ± 2.9%; EK50 = 211 ± 81 nM) vagy ki (Emax = 16.7 ± 1.8%, p = 0.597; EK50 = 360 ± 151 nM, p = 0.411).

ábra 3 

Az ΔcJun expresszió hatása az adenilil-cikláz aktivitás gátlására a NAc-ben. Az AJJun expresszáló (ΔcJun on) vagy kontroll (ΔcJun off) egerekből származó membránokat DAMGO (A), U50,488H (B) vagy WIN55,212-2 jelenlétében inkubáltuk. ...

A ΔcJun expresszió szintén nem befolyásolta szignifikánsan az adenilil-cikláz gátlását a NAc-ben a kannabinoid agonista által. A WIN55,212-2 koncentrációeffektus görbék kétirányú ANOVA-ja a WIN55,212-2 koncentráció szignifikáns fő hatását mutatta (p <0.0001, F = 15.53, df = 6), a genotípus azonban nem (p = 0.066, F = 3.472, df = 1), és nem volt szignifikáns kölcsönhatás (p = 0.973, F = 0.208, df = 6). Hasonlóképpen nem voltak szignifikáns különbségek a WIN55,212-2 E-benmax értékek (13.0 ± 2.3% és 13.6 ± 0.9% gátlás az ΔcJun-ban az egerekkel szemben, p = 0.821) és vagy EC50 értékek (208 ± 120 nM és 417 ± 130 nM ΔcJun-ban, az egerekkel szemben, p = 0.270). Tehát, bár a WIN55,212-2 csökkent hatásossága az AJJun-t expresszáló egerekben enyhe irányú volt, a transzgén nem befolyásolta szignifikánsan az adenilil-cikláz kanabinoid gátlását. Ezen túlmenően az ΔcJun státusz nem volt hatással a bazális vagy forskolin által stimulált adenilil-cikláz aktivitásra. A bazális adenilil-cikláz aktivitás 1095 ± 71 pmol / mg / perc és 1007 ± 77 pmol / mg / min (p = 0.403) volt az egerekben, a ΔcJun be- vagy kikapcsolásával. Az 1 µM ​​forskolin által stimulált adenilil-cikláz aktivitás 4185 ± 293 pmol / mg / perc, szemben az 4032 ± 273 pmol / mg / perc (p = 0.706) értékével egerekben, a ΔcJun be- vagy kikapcsolásával.

3.4. Vita

A vizsgálat eredményei megerősített MOR-közvetített G-fehérje aktiválódást és az adenilil-cikláz gátlását mutatták az AFosB indukálható transzgenikus expressziójával rendelkező egerekben a dinorphin / D-ben.1A neuronokat tartalmazó R. Az adenilil-cikláz aktivitás KOR-közvetített gátlása szintén fokozódott az AFosB expresszáló egerek NAc-ben, ami arra utal, hogy az AFosB szabályozza az endogén opioid rendszert az NAc-ben. A DAMGO Emax nagyobb érték volt a MOR-stimulált [35S] GTPγS kötés és EC50 az érték alacsonyabb volt az adenilil-cikláz-gátlásnál, az AFosB túl expresszáló egerekben a kontroll egerekhez képest. Ezek az eredmények arra utalnak, hogy a vizsgált körülmények között a receptor-tartalék az effektormodulációra, de nem a G-fehérje aktivációra vonatkozik. Az a megállapítás, hogy a KOR agonista által az adenilil-cikláz maximális gátlását befolyásolta az AFosB expresszió, alacsony receptor tartalékot jelent a KOR-közvetített válaszra, ami összhangban van a KOR kötőhelyek alacsony szintjével az egér agyában (Unterwald és munkatársai, 1991). Ezzel szemben a CB1Az R-közvetített G-fehérje aktivitást és az adenilil-cikláz gátlását nem befolyásolta az AFosB expresszió, arra utal, hogy az opioid- és kannabinoid-rendszerek ezekben az NAc neuronokban különböznek az AFosB-re adott válaszukban.

Az ΔFosB hatása az opioid receptor által közvetített jelátvitelre összhangban van az előző jelentésünkkel, hogy ΔFosB expresszió a striatumban megváltozott morfin akut és krónikus hatásaiban (Zachariou és munkatársai, 2006). Ennek a vizsgálatnak az egyik megállapítása az volt, hogy az AFosB transzgenikus expressziójával rendelkező egerek dinamorfin / D-ben1Az R striatális neuronok érzékenyebbek voltak a morfinra, mint a kontrollok. Ezenkívül ezt a hatást az AFosB vírus által közvetített expressziója utánozza a helyspecifikus injekcióval a NAc-be. Ezek a megfigyelések összhangban vannak a jelenlegi eredményekkel, amelyek a MOR fokozott jelátvitelt mutatják.

Korábban azonosítottuk a gén kódolását dinorphin, mint az AFosB célpontja, és azt javasolta, hogy a csökkentett dinamorfin megfeleljen a morfin fokozott előnyös tulajdonságainak az AFosB bitransgenikus egerekben (Zachariou és munkatársai, 2006). A jelen eredmények azt mutatják, hogy a NA-ban az adenilil-cikláz KOR-közvetített gátlása fokozódik az AFosB-t expresszáló egerekben, ami a KOR-érzékenység kompenzáló növekedését tükrözheti a csökkentett dinamorfin után. Korábbi tanulmányok kimutatták, hogy a KOR-t a prodynorphin knockout egerek bizonyos agyterületeiben, beleértve a NAc-t is, szabályozták.Clarke és munkatársai, 2003).

Ellentétben az AFosB-vel, az AJJun indukálható transzgénikus expressziója, az AFosB kötőpartner domináns negatív csonkított mutánsa nem változtatta meg az adenilil-cikláz-gátlást MOR vagy KOR agonistákkal. Ezek az eredmények arra utalnak, hogy az AFosB expresszió alapszintjei, amelyek viszonylag alacsonyak, nem játszanak jelentős szerepet az opioid receptor jelzésének fenntartásában az NAc ezen jelátviteli szintjén. Az a tény, hogy a morfin kondicionált jutalmazó hatását ΔcJun expresszióval csökkentettük a korábbi vizsgálatunkban (Zachariou és munkatársai, 2006) azt sugallja, hogy az AFosB morfinindukciója a kondicionálási eljárás során fontos a gyógyszer viselkedési reakcióinak szabályozásában, vagy hogy az AFosB transzkripciós hatásai, amelyek nem befolyásolják az opioid receptorok proximális jelzését, befolyásolhatják az opioid jutalmat. A jelen tanulmány eredményei mindenesetre világosan mutatják, hogy \ t amikor a ΔFosB expresszió a bazális szint fölött emelkedik a striatális dinamorin / D-ben1Az R-expresszáló neuronok erőteljesen növekednek a MOR és KOR kapcsolásában az adenilil-cikláz gátlásával a NAc-ben.

Azok a mechanizmusok, amelyekkel a MOR- és KOR-közvetített jelátvitel fokozódik az ΔFosB túlexpresszióval, nem világosak, de korábban kimutattuk, hogy a MOR-szintek, amelyeket [3H] naloxonkötés, nem különböznek az ΔFosB NAc-jében az egerekkel szemben (Zachariou és munkatársai, 2006). Ugyanez a tanulmány megállapította, hogy GαiAz 1 és az 2 fehérje szintjeit ez a régió nem befolyásolta az AFosB expresszió. Azonban a korábbi génexpressziós tömbelemzések azt mutatták, hogy Gαo Az mRNS-t ΔFosB NAc-ben egereken szabályozták (McClung és Nestler, 2003). Érdekes lesz a jövőbeni vizsgálatokban, hogy átfogóan megvizsgáljuk a transzgenikus AFosB expresszió G-fehérje alegység expressziójára gyakorolt ​​hatását, valamint számos G-protein moduláló fehérje expresszióját.

Érdekes, hogy az AFosB expresszió nem fokozta a CB-t1R-közvetített jelzés a NAc-ben. Lehetséges, hogy a CB-ben bekövetkezett változások1Az R jelzés a neuronok diszkrét populációjában fordul elő, amely a teljes NAc készítményben elfedve van. Például az A beadása9- A THC szignifikánsan indukálta a ΔFosB-t az NAc magjában, de nem a héjában (Perrotti és munkatársai, 2008). énndeed, azt mutatták ki, hogy ez a kihívás Δ-vel9-THC a Δ ismételt beadása után9-THC fokozta a dopamin felszabadulását az NAc magban, de csökkent a felszabadulás a héjban (Cadoni és munkatársai, 2008). Fontos továbbá megjegyezni, hogy a bitransgenikus egerek 11A sora ΔFosB-t expresszál csak a dinorphin / D-ben.1R pozitív közepes tüskés neuronok a striatumban, de a CB1R mindkét dinorphin / D-ben expresszálódik1R és enkephalin / D2R pozitív striatális neuronok (Hohmann és Herkenham, 2000), valamint a kortikális afferensek termináljain (Robbe et al., 2001). Az ΔFJB-t ΔFJB által közvetített osFosB-közvetített transzkripció domináns negatív szabályozójának kifejeződése szintén nem befolyásolta jelentősen a kannabinoid receptor jelátvitelét, bár a ΔcJun indukálhatóan kifejeződik mindkét D-ben.1 és D2- ezekben az egerekben közepes tüskés neuronok populációi (Peakman és munkatársai, 2003). Lehetséges azonban, hogy a bazális ΔFosB expresszió elég alacsony ahhoz, hogy a ΔcJun nem befolyásolja a receptor jelátvitelt, amint azt a MOR és KOR eredményei is alátámasztják. Az is lehetséges, hogy a CB1Az R jelátvitel mérsékelten fokozódik a bazális ΔFosB expresszióval, úgyhogy a ΔFosB expresszió további növelése vagy az ΔcJun-val végzett műveleteinek blokkolása csak enyhe hatást fejtett ki, ami nem érte el a statisztikai szignifikancia szintet. Ezen értelmezés közvetett támogatása a WIN55,212-2 EC összehasonlításával látható50 A ΔcJun-t és az AFosB-t expresszáló egerek közötti értékek. A WIN55,212-2 EC aránya50 az adenilil-cikláz-gátlás értéke egerekben az ΔcJun indukált expressziójával az EC-hez50 Az AFosB indukált expressziójával rendelkező egerekben a G-fehérje aktiválás értéke 4.0 volt, míg az egerekben ugyanazt az arányt az egyik transzgén indukciója nélkül 1.2.

Alternatív megoldásként a kannabinoidok ΔFosB expressziót indukálhatnak a CB-re való közvetlen hatás nélkül1R jelzés. Ebben a forgatókönyvben a kannabinoidok képesek módosítani a más gyógyszerek pszichoaktív hatásaira való reagálást az AFosB által közvetített transzkripciós szabályozás révén. énn tény, Δ beadása9-THC keresztérzékenységet okoz az opioidokra és az amfetaminra (Cadoni és munkatársai, 2001, Lamarque és munkatársai, 2001), összhangban ezzel a hipotézissel. Ezen túlmenően a kannabinoid agonista CP55,940 ismételt beadása a MOR-mediált G-fehérje aktiválódást növeli a NAc-ben, hasonlóan a jelen vizsgálatban az AFosB-t indukálhatóan expresszáló egerekhez (Vigano és munkatársai, 2005). Az ΔFosB expresszió hatása a Δ-re9-THC-közvetített viselkedések nem kerültek értékelésre, de a jelen eredmények nem zárják ki az interakciót. Ennek és az előző tanulmányunk eredményeinek (Zachariou és munkatársai, 2006) mutatják az AFosB által kiváltott MOR és KOR / dynorphin változásokat a striatumban. A Δ előnyös hatásai9-THC, helymeghatározással mérve, eltörlik a MOR null egerekben, míg a KOR törlése ated9-THC helymegtérülés és kiderült Δ9-THC helybeállítás (Ghozland és munkatársai, 2002). Hasonlóképpen, az Δ-hez való kondicionált helymegtérülés9-THC hiányzik a dinorphin knockout-ban a vad típusú egerekhez képest (Zimmer és munkatársai, 2001). Ezek az adatok arra utalnak, hogy Δ9A THC-t az AFosB indukciója után előnyösebb lehet, és a MOR jelátvitel következményes indukciója a dinamorfin expresszió csökkenésével.

Összefoglalvay, a vizsgálat eredményei azt mutatták, hogy a ΔFosB expressziója D-ben1R / dinamorfin pozitív striatális neuronok fokozták a MOR- és KOR-közvetített jelátvitelt az adenilil-cikláz aktivitás G-fehérje által közvetített gátlásának szintjén a NAc-ben. Ez a megállapítás összhangban van azokkal a vizsgálatokkal, amelyek bizonyították az endogén opioid rendszer szerepét a \ tTrigo és munkatársai, 2010), és egy lehetséges mechanizmust biztosítanak az osFosB által közvetített hatásoknak a jutalomra. Ezzel szemben a CB1Az R-közvetített jelátvitelt az NAc-ben nem befolyásolta szignifikánsan a striatális AFosB expresszió a vizsgált körülmények között, bár további tanulmányok indokoltak az AFosB indukció endokannabinoid rendszerre gyakorolt ​​hatásának meghatározására.

Kutatási eredmények

  • A MOR jelátvitel fokozódik az AFosB-t expresszáló egerekben
  • Az adenilil-cikláz KOR-t gátolja az AFosB-t expresszáló egerekben is
  • Az ΔFosB kifejezése nem változtatja meg a CB-t1R jelzést ad a magban az accumbensben

Kiegészítő anyag

Köszönetnyilvánítás

A szerzők köszönetet mondanak Hengjun He-nak, Jordan Cox-nak és Aaron Tomarchio-nak a technikai segítségért a [35S] GTPyS kötési vizsgálatok. Ezt a tanulmányt a DA014277 (LJS), a DA10770 (DES) és a P01 DA08227 (EJN) USPHS támogatásai támogatták.

Lábjegyzetek

Kiadói nyilatkozat: Ez egy PDF-fájl egy nem szerkesztett kéziratból, amelyet közzétételre fogadtak el. Ügyfeleink szolgálataként a kézirat korai változatát nyújtjuk. A kéziratot másolják, megírják és felülvizsgálják a kapott bizonyítékot, mielőtt a végleges idézhető formában közzéteszik. Kérjük, vegye figyelembe, hogy a gyártási folyamat során hibák észlelhetők, amelyek hatással lehetnek a tartalomra, és minden, a naplóra vonatkozó jogi nyilatkozat vonatkozik.

Referenciák

  • Bozarth MA, Wise RA. Az anatómiailag elkülönülő opiát receptor mezők közvetítik a jutalmat és a fizikai függőséget. Science. 1984;224: 516-517. [PubMed]
  • Bradford MM. Gyors és érzékeny módszer a fehérje-festék kötődésének elvét alkalmazó fehérje mikrogramm mennyiségének mennyiségi meghatározására. Anális. Biochem. 1976;72: 248-254. [PubMed]
  • Breivogel CS, Childers SR, Deadwyler SA, Hampson RE, Vogt LJ, Sim-Selley LJ. Krónikus delta9-tetrahidrokannabinol-kezelés az agyban a kannabinoid receptor aktivált G-fehérjék időfüggő veszteségét eredményezi. J. Neurochem. 1999;73: 2447-2459. [PubMed]
  • Breivogel CS, Selley DE, Childers SR. A kannabinoid receptor agonista hatásossága [35S] GTPyS kötődés patkányagyi membránokhoz korrelál az agonista által kiváltott GDP-affinitás csökkenéssel. J. Biol. Chem. 1998;273: 16865-16873. [PubMed]
  • Cadoni C, Pisanu A, Solinas M, Acquas E, Di Chiara G. Viselkedési szenzibilizáció a Delta 9-tetrahidrokannabinol ismételt expozíciója után és keresztérzékenyítés morfinnal. Pszichofarmakológia (Berl) 2001;158: 259-266. [PubMed]
  • Cadoni C, Valentini V, Di Chiara G. A delta 9-tetrahidrokannabinollal szembeni viselkedési szenzibilizáció és a morfinnal való keresztérzékenység: differenciális változások az aknális héjban és a mag dopamin átvitelében. J. Neurochem. 2008;106: 1586-1593. [PubMed]
  • Chen J, Kelz MB, Zeng G, Sakai N, Steffen C, Shockett PE, Picciotto MR, Duman RS, Nestler EJ. Az agyban indukálható, célzott génexpresszióval rendelkező transzgenikus állatok. Mol. Pharmacol. 1998;54: 495-503. [PubMed]
  • Childers SR. Opioid receptor-kapcsolt második hírvivő. Life Sci. 1991;48: 1991-2003. [PubMed]
  • Childers SR, Fleming L, Konkoy C, Marckel D, Pacheco M, Sexton T, Ward S. Opioid és kannabinoid receptor gátlás az adenilil-ciklázban az agyban. Ann. NY Acad. Sci. 1992;654: 33-51. [PubMed]
  • Childers SR, Xiao R, Vogt LJ, Sim-Selley LJ. Kappa opioid receptor stimulációja [35S] GTPyS kötődés tengerimalac agyban: A kappa esetében nincs bizonyíték2-G-fehérjék szelektív aktiválása. Biochem. Pharmacol. 1998;56: 113-120. [PubMed]
  • Clarke S, Zimmer A, Zimmer AM, Hill RG, Kitchen I. Mikro-, delta- és kappa-opioid receptorok régió szelektív fel-szabályozása, de nem opioid receptorszerű 1 receptorok az enkefalin és a dinorfin kiütéses egerekben. Neuroscience. 2003;122: 479-489. [PubMed]
  • Colby CR, Whisler K, Steffen C, Nestler EJ, Self DW. A DeltaFosB striatális sejttípus-specifikus túlexpressziója fokozza a kokain ösztönzését. J. Neurosci. 2003;23: 2488-2493. [PubMed]
  • Gardner EL. Endokannabinoid-jelzőrendszer és agyi jutalom: hangsúly a dopaminra. Pharmacol. Biochem. Behav. 2005;81: 263-284. [PubMed]
  • Ghozland S, Matthes HW, Simonin F, Filliol D, Kieffer BL, Maldonado R. A kannabinoidok motivációs hatását a mu-opioid és a kappa-opioid receptorok közvetítik. J. Neurosci. 2002;22: 1146-1154. [PubMed]
  • Herkenham M, Lynn AB, Johnson MR, Melvin LS, de Costa BR, Rice KC. A kannabinoid receptorok jellemzése és lokalizációja patkány agyban: kvantitatív in vitro autoradiográfiás vizsgálat. J. Neurosci. 1991;11: 563-583. [PubMed]
  • Hohmann AG, Herkenham M. A kannabinoid CB (1) receptor mRNS lokalizációja patkány striatum neuronális alpopulációiban: kettős címkével ellátott in situ hibridizációs vizsgálat. Szinapszis. 2000;37: 71-80. [PubMed]
  • Howlett AC, Barth F, Bonner TI, Cabral G, Casellas P, Devane WA, Felder CC, Herkenham M, Mackie K, Martin BR, Mechoulam R, Pertwee RG. Nemzetközi farmakológiai unió. XXVII. A kannabinoid receptorok osztályozása. Farmakológiai felülvizsgálat. 2002;54: 161-202.
  • Huestis MA, Gorelick DA, Heishman SJ, Preston KL, Nelson RA, Moolchan ET, Frank RA. A CB1 szelektív kannabinoid receptor antagonista SR141716 által elszívott marihuána hatásainak blokádja. Boltív. Pszichiátria. 2001;58: 322-328. [PubMed]
  • Kelz MB, Chen J, Carlezon WA, Jr, Whisler K, Gilden L, Beckmann AM, Steffen C, Zhang YJ, Marotti L, Self DW, Tkatch T, Baranauskas G, Surmeier DJ, Neve RL, Duman RS, Picciotto MR, Duman RS Nestler EJ. A deltaFosB transzkripciós faktor expressziója az agyban szabályozza a kokain érzékenységét. Nature. 1999;401: 272-276. [PubMed]
  • Koob GF, Volkow ND. A függőség neurokeringése. Neuropsychop. 2010;35: 217-238. [PMC ingyenes cikk] [PubMed]
  • Lamarque S, Taghzouti K, Simon H. Delta (9) -tetrahidrokannabinol krónikus kezelése fokozza az amfetaminra és a heroinra adott lokomotoros választ. A kábítószer-függőség sérülékenységére gyakorolt ​​hatások. Neuropharmacology. 2001;41: 118-129. [PubMed]
  • Maldonado R, Valverde O, Berrendero F. Az endokannabinoid rendszer bevonása a kábítószer-függőségbe. Trendek Neurosci. 2006;29: 225-232. [PubMed]
  • Mansour A, Fox CA, Thompson RC, Akil H, Watson SJ. mu-opioid receptor mRNS expresszió a patkány CNS-ben: összehasonlítás a mu-receptor kötődéssel. Brain Res. 1994;643: 245-265. [PubMed]
  • Matthes HWD, Maldonado R, Simonin F, Valverde O, Slowe S, Kitchen I, Befort K, Dierich A, LeMeur M, Dolle P, Tzavara E, Hanoune J, Roques BP, Kieffer BL. A morfin által kiváltott fájdalomcsillapítás, a jutalomhatás és az elvonási tünetek elvesztése a µ-opioid receptor gén nélkül. Nature. 1996;383: 819-823. [PubMed]
  • McClung CA, Nestler EJ. A génexpresszió és a kokain jutalom szabályozása a CREB és a DeltaFosB által. Nat. Neurosci. 2003;6: 1208-1215. [PubMed]
  • McClung CA, Ulery PG, Perrotti LI, Zachariou V, Berton O, Nestler EJ. DeltaFosB: molekuláris kapcsoló az agy hosszú távú alkalmazkodásához. Brain Res. Mol. Brain Res. 2004;132: 146-154. [PubMed]
  • Muller DL, Unterwald EM. A D1 dopamin receptorok az intermittáló morfin beadását követően patkány striatumban modulálják a deltaFosB indukciót. J. Pharmacol. Exp. Ther. 2005;314: 148-154. [PubMed]
  • Nestler EJ. Felülvizsgálat. A függőség transzkripciós mechanizmusai: a DeltaFosB szerepe. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 2008;363: 3245-3255. [PMC ingyenes cikk] [PubMed]
  • Nestler EJ, Kelz MB, Chen J. DeltaFosB: a hosszú távú neurális és viselkedési plaszticitás molekuláris közvetítője. Brain Res. 1999;835: 10-17. [PubMed]
  • Nye HE, Hope BT, Kelz MB, Iadarola M, Nestler EJ. Farmakológiai tanulmányok a kokain okozta krónikus FOS-hoz kapcsolódó antigén indukció szabályozására a striatumban és a nucleus accumbensben. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1995;275: 1671-1680. [PubMed]
  • Peakman MC, Colby C, Perrotti LI, Tekumalla P, Carle T, Ulery P, Chao J, Duman C, Steffen C, Monteggia L, Allen MR, Stock JL, Duman RS, McNeish JD, Barrot M, Self DW, Nestler EJ Schaeffer E. Inducible, a c-Jun domináns negatív mutánsának agyi régióspecifikus expressziója a transzgenikus egerekben csökkenti a kokain érzékenységét. Brain Res. 2003;970: 73-86. [PubMed]
  • Perrotti LI, Weaver RR, Robison B, Renthal W, Maze I, Yazdani S, Elmore RG, Knapp DJ, Selley DE, Martin BR, Sim-Selley L, Bachtell RK, Self DW, Nestler EJ. A DeltaFosB indukciójának megkülönböztető mintái az agyban a visszaélésszerű gyógyszerek által. Szinapszis. 2008;62: 358-369. [PMC ingyenes cikk] [PubMed]
  • Robbe D, Alonso G, Duchamp F, Bockaert J, Manzoni HL. A kannabinoid receptorok lokalizációja és hatásmechanizmusai az egérmagok glutamatergikus szinapszisaiban. J. Neurosci. 2001;21: 109-116. [PubMed]
  • Y. Salomon Adenilát-cikláz vizsgálat. Adv. Ciklikus Nukleotid Res. 1979;10: 35-55. [PubMed]
  • Selley DE, Sim LJ, Xiao R, Liu Q, Childers SR. Mu opioid receptor stimulált [35S] GTPyS kötődés patkány thalamusban és tenyésztett sejtvonalakban: jelátviteli mechanizmusok, amelyek az agonista hatásosságot szolgálják. Mol. Pharmacol. 1997;51: 87-96. [PubMed]
  • Trigo JM, Martin-Garcia E, Berrendero F, Robledo P, Maldonado R. Az endogén opioid rendszer: a kábítószer-függőség közös hordozója. A kábítószer-alkohol függ. 2010;108: 183-194. [PubMed]
  • Unterwald EM, Knapp C, Zukin RS. A κ1 és κ2 opioid receptorok neuroanatómiai lokalizációja patkány és tengerimalac agyában. Brain Res. 1991;562: 57-65. [PubMed]
  • Vaccarino FJ, Bloom FE, Koob GF. A nukleinság elzáródása opiát receptorok gyengítik az intravénás heroin jutalmat patkányokban. Pszichofarmakológia (Berl) 1985;86: 37-42. [PubMed]
  • Vigano D, Rubino T, Vaccani A, Bianchessi S, Marmorato P, Castiglioni C, Parolaro D. A kannabinoid és az opioid rendszerek aszimmetrikus kölcsönhatásában részt vevő molekuláris mechanizmusok. Pszichofarmakológia (Berl) 2005;182: 527-536. [PubMed]
  • Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, Cassidy MP, Kelz MB, Shaw-Lutchman T, Berton O, Sim-Selley LJ, Dileone RJ, Kumar A, Nestler EJ. A DeltaFosB lényeges szerepe a morfin hatású magban. Nat. Neurosci. 2006;9: 205-211. [PubMed]
  • Zangen A, Solinas M, Ikemoto S, Goldberg SR, Wise RA. Két agyi hely a kannabinoid-jutalomért. J. Neurosci. 2006;26: 4901-4907. [PubMed]
  • Zhu J, Luo LY, Li JG, Chen C, Liu-Chen LY. A klónozott humán kappa opioid receptor aktiválása agonistákkal fokozza a [35S] GTPyS kötődését a membránokhoz: meghatározza a ligandumok potenciálját és hatékonyságát. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1997;282: 676-684. [PubMed]
  • Zimmer A, Valjent E, Konig M, Zimmer AM, Robledo P, Hahn H, Valverde O, Maldonado R. A delta-9-tetrahidrokannabinol diszfórikus hatásainak hiánya a dinamorfin hiányos egerekben. J. Neurosci. 2001;21: 9499-9505. [PubMed]
  • Zimmer A, Zimmer AM, Hohmann AG, Herkenham M, Bonner TI. A kannabinoid CB1 receptor knockout egerekben megnövekedett halálozás, hipoaktivitás és hypoalgesia. Proc. Nati. Acad. Sci. USA 1999;96: 5780-5785. [PMC ingyenes cikk] [PubMed]