A ghrelin receptor (GHS-R1A) antagonista gyengíti a morfin előnyös tulajdonságait, és növeli az opioid peptidszinteket az egerek jutalmi területein (2015).

Az addiktív gyógyszerek akut és krónikus expozíciója nagymértékben befolyásolja a mezolimbikus dopamin rendszert, amely az agy jutalomrendszerek fontos kulcsköre (Nestler, 2005). Ezeket a hatásokat legalább részben a kábítószer-függőség kialakulásának (Wise, 2004) alapjainak javasolják. A kábítószer-függőség sokféle káros hatást okoz az egyénre, valamint a társadalomra, és új farmakológiai beavatkozásokra van szükség, amelyek ezt a nagy közegészségügyi problémát kezelik (Koob és Le Moal, 2001). Az addiktív gyógyszereknek a mesolimbikus dopamin rendszert aktiváló képességét közvetítő jelzőrendszerek tisztázásával azonosíthatók az anyaghasználat rendellenességeinek egyedi kezelési stratégiái.

A kutatások kimutatták, hogy a közös neurobiológiai mechanizmusok szabályozzák az élelmiszer- és addiktív gyógyszerek által okozott bevételt és jutalmat (Morganstern et al., 2011), javasolva, hogy az élelmiszer-szabályozó gut – agy-peptidek, például a ghrelin szerepe a jutalom közvetítést is magában foglalja. Kezdetben kimutatták, hogy a ghrelin növekedési hormon felszabadulását (Kojima et al., 1999) okozza, és patkányokban adipozitást indukál (Tschop et al., 2000). A mai napig jól ismert, hogy a ghrelin növeli az ételt, éhséget és az étvágyat keresztül hipotalamusz áramkörök (áttekintés céljából lásd Egecioglu et al. (2011)). A hipotalamus mellett a ghrelin receptorok (GHS-R1A) olyan jutalommal kapcsolatos területeken fejeződnek ki, mint az amygdala, a striatum, a prefrontális kéreg, a ventrális tegmentális terület (VTA) és a hippocampus (áttekintés céljából lásd Engel és Jerlhag (2014)), ami azt jelenti a ghrelin fiziológiai szerepe túlmutat az energia-homeosztázis szabályozásán. Az orexigén ghrelin peptid valóban bebizonyosodott, hogy aktiválja a mezolimbikus dopaminrendszert, valamint szabályozza az egerek jutalmát, motivációját és alkohol-, nikotin-, amfetamin- és kokainbevitelét (áttekintésként lásd Engel és Jerlhag (2014)).

Az opioidok, mint más addiktív gyógyszerek, aktiválják a mesolimbikus dopamin rendszert, ami dopamin dopamin felszabadulást okoz keresztül μ- és / vagy δ-opioid receptorok aktiválása a sejtmagban (NAc) (Hirose et al., 2005, Murakawa és mtsai, 2004, Yoshida és mtsai, 1999) és a VTA-ban, valószínűleg a GABA csökkenésével -dopamin neuronok gátlása (Johnson és North, 1992). Továbbá az accumbal κ-opioid receptorok szabályozzák a mezolimbikus dopamin rendszer aktivitását (Chefer et al., 2005, Spanagel és munkatársai, 1992). Az opioidok ismételt expozíciója számos neurotranszmitter, köztük az opioid peptidek adaptív változását eredményezi a jutalmazási területeken, amelyek hozzájárulnak a függőség kialakulásához (De Vries és Shippenberg, 2002). Patkányokban a GHS-R1A farmakológiai szuppressziója gyengíti a morfin által kiváltott akumbális dopamin felszabadulást, valamint a sztereotípiás viselkedést (Sustkova-Fiserova et al., 2014). A jelen kísérletsorozat első részének célja a GHS-R1A antagonista JMV2959 akut hatásának vizsgálata a morfin lokomotoros stimuláció, dumbamin dopamin felszabadulás és az egerek kondicionált hely preferenciájának okozására. A vizsgálat második részének célja az volt, hogy értékelje az ismételt JMV2959 vagy ghrelin kezelés hatását opioid peptidszintekre (Met-enkephalin-Arg⁶Phe⁷ (MEAP), B-dinorfin (DynB) és Leu-enkephalin-Arg⁶ (LeuArg)) a ​​jutalmazott területeken, beleértve az amygdala, a striatum, a prefrontális kéreg, a VTA és a hippocampus.

Felnőttek pubertás utáni korú, hím NMRI egereket (8 – 12 hetes és 25 – 40 g testtömeg; Charles River, Sulzfeld, Németország) alkalmaztunk. Röviden, minden egeret csoportosítottunk és 12 / 12 h fény / sötét ciklusban tartottunk (a lámpák hét órakor). A csapvizet és az ételt (Normal chow; Harlan Teklad, Norfolk, Anglia) szállították ad libitum, kivéve a kísérleti beállításokat. Új egereket alkalmaztunk minden egyes viselkedési vizsgálathoz, valamint az opioid peptid analízishez. A kísérleteket a svéd etikai bizottság Göteborgban hagyta jóvá. Minden erőfeszítést megtettünk az állatok szenvedésének minimalizálására és az alkalmazott állatok számának csökkentésére. Minden állatnak legalább egy héttel a kísérletek megkezdése előtt akklimatizálódtak.

A morfin-hidrokloridot (Apoteksbolaget Sahlgrenska Kórház, Göteborg, Svédország) feloldottuk a hordozóban (0.9% nátrium-klorid-oldat), és a kísérlet megkezdése előtt 20 mg / kg 10 adagban adtuk be. Ezt az adagot választottuk ki, mivel az alacsonyabb dózis (10 mg / kg, ip) nem okozott lokomotoros stimulációt egerekben (az adatokat nem mutatjuk be). Meghatároztuk a JMV6 kiválasztott dózisát (2959 mg / kg, ip) (amelyet a Biomolécules Max Mousseron (IBMM), az UMR5247, a CNRS, a Montpellier 1 és az 2 egyetemek, Franciaország) szintetizálnak, egy GHS-R1A antagonistát. nem befolyásolja a mozgásszervi aktivitást, a dumbamin dopamin felszabadulását és a kondicionált hely preferenciát egerekben (Jerlhag et al., 2009). A JMV2959-et feloldottuk vivőanyagban (0.9% nátrium-klorid-oldat), és mindig 20 perccel a morfin expozíció vagy az opioid peptidszintek elemzéséhez történő dekapitálás előtt adtuk be. A JMV2959 kiválasztott dózisa semmilyen kísérletben nem befolyásolta az egerek bruttó viselkedését. A viselkedési vizsgálatokhoz a JMV2959-ot akut módon adták be, mivel átható vizsgálatok azt mutatták, hogy a JMV2959 egyetlen injekciója gyengíti a gyógyszer által indukált jutalmat (az áttekintést lásd Engel és Jerlhag (2014)). A JMV2959-et 5 nappal később szubkronikusan adtuk be, hogy az opioid peptid elemzés növelje a robosztus hatás kimutatásának lehetőségét. Emellett ismételt injekciókkal elkerülhető az akut injekciós stressz peptidekre gyakorolt ​​esetleges zavaró hatása. Az acilezett patkány ghrelint (Bionuclear; Bromma, Svédország) 0.9% -os nátrium-kloriddal hígítottuk, és a ghrelin kiválasztott dózisát (0.33 mg / kg, ip) korábban kimutatták, hogy jutalmat okoz az egerekben (Jerlhag, 2008). Az összes kábítószer-kihívás kiegyensúlyozott kialakítása volt.

Korábbi vizsgálatok kimutatták, hogy a morfin mozgásszervi stimulációt okoz a rágcsálókban (Wise és Bozarth, 1987). A mozgásszervi aktivitást nyolc hangcsillapított, szellőztetett és elhalványított mozgó dobozban regisztrálták (420 × 420 × 200 mm, Kungsbacka mät- och reglerteknik AB; Fjärås, Svédország). Öt öt sor fotocella gerendával, a doboz padlószintjén, fotocellás detektálást eredményezett, lehetővé tette, hogy a számítógép alapú rendszer regisztrálja az egerek aktivitását. A mozgásszervi aktivitást úgy határoztuk meg, mint az 60-periódus alatt megszakított új fotocella gerendák felhalmozott számát. Minden kísérletben az egereket egy órával a gyógyszerproblémákat megelőzően megengedték, hogy a lokomotor aktivitási dobozhoz szoktassanak. A kezelési csoportok között nem volt különbség a szokásos szokások között (az adatokat nem mutatjuk be).

Az első kísérletsorozatban a JMV2959 (6 mg / kg, ip) morfin által indukált (20 mg / kg, ip) mozgásszervi stimulációra gyakorolt ​​hatásait vizsgáltuk. A JMV2959-et a morfin előtt 20-et adták be, és az aktivitás regisztrálása az utolsó injekció után 10 perccel kezdődött. Minden egér egy kezelési kombinációt kapott (hordozó / vivőanyag, JMV2959 / vivőanyag, morfin / vivőanyag vagy JMV2959 / morfin; n= 8 egy kezelési kombinációnál), és csak egy kísérleti vizsgálatnak vetették alá.

A JMV2959 hatásának értékelésére a morfin hatásos hatásaira az új egerekben a kondicionált hely preferencia teszteket egerekben hajtottuk végre, mint korábban leírtuk (Jerlhag, 2008). Röviden, egy kétkamrás CPP készüléket használtunk 45 lx megvilágítással és különféle vizuális és tapintási jelekkel. Az egyik rekeszet fekete-fehér csíkos falak és sötét laminált padló határozta meg, míg a másik fehér festett fa padló és fa textúra. Az eljárás előkészítésből állt (1 nap), kondicionálás (2 – 5 nap) és utókezelés (6 nap). Előkezeléskor az egereket ip-vel injektáltuk járművel, és a kamrába helyeztük szabadon mindkét rekeszbe 20 perc alatt, hogy meghatározzuk a kezdeti hely (vagy oldalsó) preferenciát. A kondicionálást (20 perc per munkamenet) egy elfogult eljárással végeztük, amelyben a morfint (20 mg / kg) párosítottuk a legkevésbé előnyös rekeszrel és járművel az előnyös rekeszrel. Minden egeret egy morfin injekciót kaptunk, valamint a vivőanyagot minden nap, és az injekciókat a reggeli és délutáni idő között egyensúlyi kialakításban változtattuk. Az egerek utókezelésénél (n= 16) JMV2959 (6 mg / kg, ip) vagy egyenlő térfogatú hordozóoldatot adtunk be, és 20 min később helyeztük a középvonalba a két rekesz között, szabadon hozzáféréssel mindkét rekeszhez 20 min (a következő kezelési csoportok létrehozásával); Morph-Veh és Morph-JMV2959).

A feltétel helyének preferenciáját úgy számítottuk ki, hogy a különbség a kábítószer-párosított összes idő% -ában van.azaz. a legkevésbé előnyben részesített rekesz a kondicionálás utáni és az előkészítő munkamenet során.

Tekintettel arra, hogy a JMV2959 gyengíti a morfin által indukált-mozgás-stimulációt és a kondicionált hely preferenciát egerekben, a JMV2959 (6 mg / kg, ip) morfin-indukált (20 mg / kg, ip) dumbamin felszabadulásának hatását vizsgáltuk. in vivo mikrodialízis szabadon mozgó egerekben. Az extracelluláris dopamin-szintek méréséhez az egereket egyoldalúan beültettük egy mikrodialízis-szondával, amely a magmagban helyezkedik el. Ezért az egereket izofluránnal (Isofluran Baxter, Univentor 400 Anesthesia Unit, Univentor Ldt., Zejtun, Málta) érzéstelenítettük, sztereotaxikus keretbe (David Kopf Instruments; Tujunga, CA, USA) helyeztük, és fűtőpadon tartottuk, hogy megakadályozzuk hypothermia. Helyi érzéstelenítőként és karprofenként (Rimadyl, 5 mg / kg ip) (Astra Zeneca; Göteborg, Svédország) alkalmazták a lehetséges fájdalom enyhítésére Xylocain adrenalint (5 μg / ml; Pfizer Inic; New York, USA). A koponyacsontot kinyitottuk, és egy lyukat fúrtunk a szondához és az egyiket a rögzítőcsavarhoz. A szondát véletlenszerűen váltották az agy bal vagy jobb oldalára. Az 1.5 mm koordinátáit a bregma előtt, ± 0.7 oldalirányban a középvonalhoz és az 4.7 mm-t az agy felszíne alatt használtuk az accumbens (Franklin és Paxinos, 1997) számára. A dialízis membránjának kitett csúcsa (20,000 kDa levágott 310 / 220 μm, HOSPAL, Gambro, Lund, Svédország) 1 mm. Minden próbát sebészeti úton két nappal a kísérlet előtt implantáltunk. A műtét után az egereket az egyes ketrecekben tartottuk a vizsgálati napig (Macrolon III).

A próba napján a próbát egy mikropfúziós szivattyúhoz (U-864 fecskendő szivattyú; AgnThós AB) csatlakoztattuk, és Ringer-oldattal 1.5 μl / perc sebességgel perfundáltuk. A mikrodialízisbe állítás után egy óra elteltével minden 20 min. Az alapszintű dopamin szintet az első hatóanyag / vivőanyag kihívás előtti három egymást követő minta átlagaként határoztuk meg, és az accumbal dopamin növekedését az alapvonalhoz viszonyított százalékos növekedés alapján számítottuk ki. A kiindulási minták után (-40 min 0 percig) az egereket JMV2959 vagy hordozóval (0 min) adtuk be, amelyet morfin vagy vivőanyag injekció követett (20 min.). Ezeket a gyógyszeradagolásokat követően további nyolc 20 min-mintát vettünk. A következő kezelési csoportok együttesen (n= 8 minden csoportban): jármű-jármű (Veh – Veh), jármű-morfin (Veh – Morph), JMV2959-jármű (JMV2959-Veh) és JMV2959-morfin (JMV2959-Morph).

A dializátokban a dopamin szinteket HPLC-vel határoztuk meg elektrokémiai kimutatással. Egy szivattyú (Gyncotec P580A; Kovalent AB; V. Frölunda, Svédország), ioncserélő oszlop (2.0 × 100 mm, Prodigy 3 μm SA; Skandinaviska GeneTec AB; Kungsbacka, Svédország) és egy detektor (Antec Decade; Antec Leyden; Zoeterwoude , Hollandia) VT-03 áramlási cellával (Antec Leyden) felszerelték. A mobil fázist (pH 5.6), amely 10 mM szulfonsavat, 200 mM citromsavat, 200 mM nátrium-citrátot, 10% EDTA-t, 30% MeOH-t tartalmaz, vákuumszűréssel végeztünk 0.2 μm membránszűrővel (GH Polypro; PALL Gelman Laboratory; Lund, Svédország). A mozgófázist 0.2 ml / perc áramlási sebességgel szállítjuk egy gázmentesítőszerrel (Kovalent AB), és az analitot 0.4 V-on oxidáljuk.

Miután befejeztük a mikrodialízis kísérleteket, az egereket dekapitáltuk, és a próbák lokalizációjának megkönnyítése érdekében a próbákat pontamin ég kék 6BX-el perfundáltuk. Az agyat egy vibroszáró eszközre (752 M Vibroslice; Campden Instruments Ltd., Loughborough, UK) szereltük, és 50 μm-es szakaszokban vágtuk. A próba helyét a fénymikroszkópos vizsgálat segítségével határozzuk meg. A szonda pontos helyzetét igazoltuk (Franklin és Paxinos, 1997), és csak a helyes elhelyezésű egereket használtuk a statisztikai elemzéshez.

Megvizsgáltuk a JMV2959 hatását a MEAP, a DynB és a LeuArg szintjein a jutalomhoz kapcsolódó területeken. Az egereket JMV2959 (6 mg / kg, ip, n= 8) vagy egyenlő mennyiségű jármű (ip, n= 8) öt egymást követő napon. Az utolsó injekciót követő 20-et az egereket leöltük, és ezekből az egerekből származó agyakat összegyűjtöttük. A különálló egereket ghrelinnel (0.33 mg / kg, ip, \ t n= 8) vagy egyenlő mennyiségű jármű (ip, n= 8) öt egymást követő napon. Öt perccel az utolsó injekció után az egereket leöljük, és ezekből az egerekből származó agyakat összegyűjtjük. Az amygdala, a striatum, a prefrontális kéreg, a VTA és a hippocampus gyorsan kivágásra került, és azonnal szárazjégre helyeztük, majd -80 ° C-on tároltuk a további feldolgozásig.

A homogenizálási és peptid extrakciós eljárások egy standard eljárást követnek, amelyet korábban részletesen ismertettek (Nylander és munkatársai, 1997). Röviden, forró (95 ° C) ecetsavat (1 M) adtunk a fagyasztott mintákhoz. A mintákat vízfürdőben (95 ° C) 5 percig melegítettük, jégen hűtöttük, majd Branson Sonifier-vel (Danbury, CT, USA) homogenizáltuk. A homogenizátumot 95 ° C-on 5 percig melegítettük, majd jégen hűtöttük, mielőtt 15 percig 4 ° C-on és 12,074-nél centrifugáltuk.g egy Beckman GS-15R centrifugában (Fullerton, CA, USA). Az extraktumokat tovább tisztítottuk egy korábban leírt eljárás szerint (Nylander és munkatársai, 1997). Két frakciót gyűjtöttünk össze: III frakciót (Leu-Arg és MEAP) és V frakciót (DynB). A mintákat vákuum centrifugában (Savant SpeedVac Plus SC210A; Thermo Scientific Inc., Waltham, MA USA) szárítottuk és a fagyasztóban (−20 ° C) tároltuk peptidelemzésig.

A DynB, LeuArg és MEAP immunreaktív (ir) szintjeit jól bevált radioimmun vizsgálattal elemeztük, és a protokollokat máshol részletesen leírták (Nylander et al., 1997). A DynB vizsgálatban kecske anti-nyúl IgG-t (GARGG; Bachem, Bubendorf, Svájc) használtunk a szabad és antitesthez kötött peptid elkülönítésére. Az 113: 1 végső hígításában a Dyn antiszérumot (600000 +) használtuk. A nagy dinamikus keresztreakció 100% és DynB (1 – 29) 1%. Nem tapasztaltunk keresztreakciót más opioid peptidekkel. A LeuArg és MEAP vizsgálatokban egy szénszuszpenziót alkalmaztunk a szabad és antitesthez kötött peptid elválasztására. A LeuArg antiszérum (91: 6D +, végső hígítás 1: 60000) esetében a keresztreaktivitás kevesebb, mint 0.01% Leu-enkefalin és MEAP esetében, 0.02% a DynB esetében, 0.04% a DynA esetében, és 0.08% az alfa-neoendorfin esetében. A 90 3 1 végső hígításában az 160: 000D (II) MEAP antiszérumot használtuk. Keresztreaktivitás Met-enkefalin, Met-enkefalin-Arg⁶, Met-enkephalin-Arg⁶Gly⁷Leu⁸Leu-enkefalin és Leu-enkefalin-Arg⁶ <0.1% volt

A morfin (20 mg / kg) és a JMV2959 (6 mg / kg) (F (3,27) = 7.409) szisztémás beadását követően a kezelés általános hatását találtuk az egerek lokomotoros aktivitására. P= 0.0009; n= 8 járművekhez, JMV2959-Veh, JMV2959-Morph és n= 7 a Veh-Morph számára). Ahogy látható ábra 1A, posthoc analízis kimutatta, hogy az előkezelés egyetlen JMV2959 injekcióval (P<0.001) szignifikánsan gyengítette a morfin által kiváltott mozgásstimulációt (P<0.01 Jármű – jármű vs Veh-Morph). A JMV2959 kiválasztott dózisa nem befolyásolta a mozgásszervi aktivitást a gépjármű-kezeléshez képest (P> 0.05). A hordozóval kezelt egerekben és a JMV2959-morpinnal kezelt egerekben nem volt különbség a mozgásaktivitás válaszában (P> 0.05).

  

ábra 1

A GHS-R1A antagonista JMV2959 enyhíti a morfin által indukált mozgásstimulációt, a dumbamin dopamin felszabadulását és a kondicionált hely preferenciát egerekben. (A) A morfin által kiváltott (20 mg / kg ip) mozgásszervi stimulációt egy JMV2959 injekció (6 mg / kg ip) enyhítette.n= 7 – 8 minden csoportban; **P<0.01, ***P<0.001 egyirányú ANOVA, majd Bonferroni post-hoc teszt). (B) A morfin által kiváltott (20 mg / kg ip) állapotpreferenciát (CPP) a JMV2959 (6 mg / kg ip) akut egyszeri injekcióval csillapítottuk egerekben (n= 8 minden csoportban, *P<0.05, párosítatlan t-teszt). (C) Először a morfin (20 mg / kg ip) jelentős hatását mutattuk ki a dopamin felszabadulásának növelésére a vivőanyag-kezeléshez képest (időintervallum 40–180 perc (P<0.001), jármű – jármű vs Veh-Morph). Amint azt a (C) előkezelésben a JMV2959-nel (6 mg / kg ip) előkezeltük, az 40 – 100 és az 140 – 180 min.^##P<0.01, ^###P <0.001, JMV2959-Morph a Veh – Morph kezeléshez képest). A JMV2959 kiválasztott adagjának semmilyen időintervallumban nem volt szignifikáns hatása az accumbalis dopamin felszabadulásra a vivőanyag-kezeléshez képestP> 0.05, Jármű – Jármű vs JMV2959-Veh). A JMV2959 csökkentette, de nem teljesen blokkolta a morfin által kiváltott akumbális dopamin felszabadulást 60-140 időintervallumban (*P<0.05, **P<0.01, ***P <0.001, JMV2959-Morph a Veh – Morph kezeléshez képest). A nyilak a JMV2959, a vivőanyag és a morfin injekciójának időpontját jelentik. Kétirányú ANOVA-val elemzett adatok, majd Bonferroni post-hoc teszt (n= 8 minden csoportban). Veh-veh (Square), Veh-Morph (rombusz), JMV2959-Veh (Háromszög), JMV2959-Morph (kör). Minden érték átlag ± SEM.

Nagy kép megtekintése | A Hi-Res kép megtekintése | Töltse le a PowerPoint Slide programot

A morfin által kiváltott (20 mg / kg) (Morph – Veh) kondicionált hely preferenciát szignifikánsan gyengítette a JMV2959 (6 mg / kg) (Morph-JMV2959) akut egyszeri injekciója a kondicionálás utáni napon (P= 0.025, n= 8 minden csoportban; ábra 1B).

Az egerekben a dopamin mérsékelt mikrodialízis mérése a kezelés általános fő hatását tárta fel (F(3,33) = 24.15, P<0.0001), idő F(11,308) = 7.05, P<0.0001) és a kezelés × idő interakció (F(11,308) = 8.63, P<0.0001) (ábra 1C; n= 8 minden csoportban). A morfin fokozott dombamin felszabadulást mutatott a jármű kezeléséhez képest 40 – 180 min.P<0.001). Ahogy látható ábra 1C ezt a hatást az 2959 – 40 időintervallummal végzett előkezeléssel csökkentettük (P<0.01), 100 (P<0.001), 140 (P<0.01) és 160–180 perc (P<0.001). A JMV2959 csökkentette, de nem teljesen blokkolta a morfin által előidézett accumbalis dopamin felszabadulást, mivel a hordozókezelés és a JMV2959-morfinkezelés között különbség volt a 60–80.P<0.01), 100 (P<0.001), 140 (P<0.01) és 160 perc (P<0.05). A JMV2959 kiválasztott dózisának semmilyen időintervallumban nem volt szignifikáns hatása az accumbalis dopamin felszabadulására a vivőanyag-kezeléshez képestP> 0.05).

A jelen tanulmány azt is alátámasztja, hogy az orexigén peptid fiziológiai szerepe magában foglalja a jutalomszabályozást. Sőt, kimutattuk, hogy a GHS-R1A antagonista perifériás beadása gyengíti a morfin lokomotoros stimuláció kialakulásának képességét, növeli a dopaminszinteket NAc-ben és indukál egy kondicionált hely preferenciát egerekben. Azt is megállapítottuk, hogy a szubkrónikus JMV2959, de nem ghrelin, a kezelés növelte a MEAP szöveti szintjét a VTA-ban, a DynB-ben a hippocampusban és a LeuArg-ban a striatumban, az első bizonyítékot szolgáltatva arra, hogy a ghrelin jelátviteli képessége megerősíti az opioid peptideket. .

Az itt bemutatott adatok azt mutatják, hogy a GHS-R1A antagonizmus befolyásolja a morfin azon képességét, hogy egerekben aktiválja a mezolimbikus dopamin rendszert. Összhangban vannak azok a megállapítások, amelyek azt mutatják, hogy a JMV2959 blokkolja a morfin azon képességét, hogy növelje az accumbális dopamin extracelluláris szintjét és sztereotip viselkedést idézzen elő patkányokban (Sustkova-Fiserova és mtsai, 2014). Támogató módon a központi ghrelin beadása növeli a töréspontot, de nem az aktív karnyomások számát, a progresszív arány megerősítési ütemezésében az önadagoló heroint tartalmazó patkányokban (Maric et al., 2012). Azt az állítást, miszerint a ghrelin jelátvitel a kábítószer-függőség alapja, megerősítik azok az eredmények, amelyek azt mutatják, hogy a JMV2959 csökkenti a patkányok bevitelét és az alkoholfogyasztás motivációját, valamint hogy az amfetamin, kokain és nikotin által kiváltott jutalmat gátolja a rágcsálók GHS-R1A antagonizmusa ( áttekintés céljából lásd Engel és Jerlhag (2014), és hogy a ghrelinhez kapcsolódó gének polimorfizmusai összefüggenek az alkohol, a dohányzás és az amfetamin bevitelével (áttekintésként lásd Engel és Jerlhag (2014)).

A szubkrónikus JMV2959-kezelés után a striatumban, a VTA-ban és a hippocampusban az opioid-peptidek megnövekedett szintjeivel kapcsolatos eredmények azt mutatják, hogy az opioid-peptidek és a ghrelin-jelátvitel között először kölcsönhatás van. Az endogén opioidok nemcsak az opioidok által kiváltott hatások, hanem a visszaélés és a természetes jutalmak egyéb gyógyszerei, valamint az ismételt hatóanyag-expozíció után tapasztalt adaptív folyamatok (Trigo és munkatársai, 2010, Van Ree et al., 2000). Valójában a mezolimbikus dopamin rendszer aktivitását endogén opioidok szabályozzák mind a VTA, mind a NAc szintjén (Hirose et al., 2005, Spanagel és mtsai, 1992), és a hatások közvetlen vagy közvetettnek bizonyultak más távadók modulálásával (Charbogne et al., 2014).

Megállapítottuk, hogy a szubkronikus JMV2959 kezelés növelte a MEAP szintjét a VTA-ban. A MEAP kizárólag proenkephalinból származik, és a proenkephalin peptidek markereként használták, amelyek főként a δ-opioid receptorokat aktiválják. Feltételezzük, hogy a JMV2959-kezelés után a VTA-ban az endogén MEAP megnövekedett szintje megakadályozhatja a morfin képességét a mesoaccumbal dopamin neuronok GABA-gátlásának csökkentésére (Johnson és North, 1992), ami hozzájárulhat a csökkent morfinindukált hatásokhoz JMV2959. Támogató módon a GHS-R1A a VTA-ban található GABAerg interneuronokon található (Abizaid et al., 2006). Ezen túlmenően a korábbi vizsgálatok azt mutatták, hogy a JMV2959 intravénás intravénás \ t keresztül ismeretlen mechanizmusok, gyengíti a ghrelin által indukált jutalmat (Jerlhag és munkatársai, 2011), valamint a ghrelin által közvetített szacharóz bevitel rágcsálókban (Skibicka és mtsai, 2011), arra utalnak, hogy a Ventral tegmental GHS-R1A fontos a jutalom szabályozásában. Egy ilyen állítás alátámasztására a megállapítások azt mutatják, hogy a morfin jutalmazó tulajdonságait a többi éhségszabályozó peptid, például a galanin és az orexin közvetíti. keresztül helyi mechanizmusok a VTA-n belül (Narita et al., 2006, Richardson és Aston-Jones, 2012).

A striatumban azt találtuk, hogy a szubkrónikus JMV2959 megnövelte a LeuArg ir szintjét, ami arra utal, hogy a JMV2959 képessége a morfin által kiváltott, feltételezett hely preferenciának, a dopamin felszabadulásának és a mozgásszervi stimulációnak legalább részben a fokozott α- \ t opioid receptor aktivitás. A megnövekedett LeuArg-szintek a dinamorfin-peptidek enkefalinokká történő fokozott enzimatikus átalakulásából vagy a fokozott dinamin felszabadulásból adódhatnak a megnövekedett dopaminra adott válaszként, majd LeuArg-ba történő bomlást követően. Bár a korábbi vizsgálatok kimutatták, hogy a mesolimbikus dopamin rendszer aktivitása szabályozott keresztül A NAc (Spanagel et al., 1992) és endogén κ-opioid receptorok κ-opioid receptorai a mesoaccumbal dopamin neurotranszmisszió tónusos gátlását biztosítják, és gyengítik a kokain által kiváltott dopamin felszabadulást a NAc-ben (Chefer et al., 2005), nem azt mutatják, hogy a JMV2959 megváltoztatja a striatum ir DynB szintjét. Ezért további vizsgálatok szükségesek a prodinorfin-peptidekre, hogy tisztázzuk a GHS-R1A antagonizmus és a dinamorfinok közötti kölcsönhatásokat.

A jelen tanulmányban azt is kimutattuk, hogy a JMV2959 kezelés jelentősen növeli a hippocampal DynB szintjét. A Ghrelin növeli a memóriakonszolidációt és a dendritikus gerincképződést, hosszú távú potencírozást generál, és a memóriát megkönnyíti keresztül hippokampális GHS-R1A rágcsálókban (Carlini és munkatársai, 2010, Diano és munkatársai, 2006). Továbbá, a GHS-R1A knockout egerek javított térbeli memóriát mutatnak a Morris víz labirintus vizsgálatában és a meghibásodott kontextus memóriát a félelem-kondicionáló paradigmában a vad típusú egerekhez képest (Albarran-Zeckler et al., 2012). A Dynorphin-peptidek, beleértve a DynB-t is, bőségesek a hippocampusban, és gyengítik a hosszú távú potenciációt (Chavkin és munkatársai, 1985, Wagner és mtsai, 1993), valamint a patkányok térbeli tanulását (Sandin és munkatársai, 1998). Ezért feltételezzük, hogy a GHR-R1A antagonista gyengítheti a jutalom memóriáját a hippocampus hosszú távú potenciáljának gátlásával keresztül a DynB aktiválása. Ezek az adatok együttesen új potenciális mechanizmust biztosítanak, amellyel a JMV2959 keresztül az opioid peptidek megváltoztathatják a megerősítést. Azonban az opioid receptorok széles körben eloszlanak az agyban, ami arra utal, hogy más, a jelen vizsgálatban nem szereplő területek is részt vehetnek a GHS-R1A szabályozott morfin által kiváltott jutalomban. Például a ghrelin által indukált táplálékfelvételt, valamint a szacharózra ható nyomást csökkentik a κ-opioid receptor antagonista központi vagy intra-hypothalamikus beadása (Romero-Pico et al., 2013). Azonban az opioid peptidek más területeken betöltött szerepét meg kell tisztázni a közelgő tanulmányokban.

Az endogén μ-receptor ligandumokat, az endomorfinokat és a béta-endorfint nem vizsgáltuk itt, így nem zárhatjuk ki a JMV2959 lehetséges hatását ezekre a peptidekre. Valóban, a morfin jutalmazó tulajdonságai μ-opioid receptorokat tartalmaznak a VTA-ban, valamint a NAc-ben (Hirose és munkatársai, 2005, Johnson és North, 1992, Murakawa és munkatársai, 2004, Yoshida és munkatársai, 1999). A μ-receptor antagonista azonban nem gyengítette a ghrelin által indukált táplálékfelvételt (Naleid és mtsai., 2005), sem a ghrelin által indukált mozgási stimulációt és a dumbamin dopamin felszabadulását (Jerlhag et al., 2011), ami azt jelenti, hogy a GHSR- Az 1A antagonistája a megerősítés szabályozására nem tartalmazza a μ-receptorokat. Másrészről a JMV2959 hatással volt a proenkephalinból és prodinorphinból származó opioid peptidekre, amelyek azt mutatják, hogy részt vehetnek a GHSR-1A antagonisták által indukált hatásokban.

Míg a korábbi tanulmányok kimutatták, hogy a szisztémás ghrelin-kezelés jutalmazást eredményez (Jerlhag, 2008), valamint növeli a függőséget okozó gyógyszerek jutalmazó tulajdonságait (áttekintésre lásd Engel és Jerlhag (2014)), itt megmutatjuk, hogy a szubkrónikus ghrelin-kezelés nem változott az opioid-peptidek szövettani szintje bármely vizsgált jutalomhoz kapcsolódó területen. A szisztémás ghrelin beadás hatására a c-fos expresszió hipotalamikus területeken, de nem a mezolimbikus és hippocampális területeken történik (Pirnik és mtsai, 2011), és a fluoreszcensen jelzett ghrelin kötődése a hipotalamusz élelmiszer-szabályozó neuronjaira korlátozódik (Schaeffer et al., 2013 ). Azokkal a megállapításokkal együtt, amelyek azt mutatják, hogy a ghrelin, a hipotalamuszban lévő nyomokban, a perifériás ghrelin beadását követően nem detektálható mélyebb agyterületeken [Furness és munkatársai, 2011, Grouselle és munkatársai, 2008, Sakata és munkatársai, 2009 ), felveti annak a lehetőségét, hogy a szisztémás ghrelin aktiválja a jutalmazási rendszert keresztül az endogén opioidoktól független közvetett mechanizmusok. A ghrelin által indukált accumbal dopamin felszabadulása az orexigén hypothalamikus jelátvitelt igényli (Cone és mtsai, 2014), a perifériás ghrelin adagolás nem változtatja meg az alkoholfogyasztást egerekben (Lyons és mtsai, 2008), és hogy a perifériás ghrelin semlegesítése nem csillapítja az alkoholt - az egerekben vagy az alkoholfogyasztásban szenvedő patkányok által fizetett jutalom (Jerlhag et al., a sajtóban). Figyelembe kell venni azt a lehetőséget, hogy a ghrelin szubkronikus beadása növeli az opioid peptidek szöveti szintjét, de ezt részletesen meg kell vizsgálni a következő vizsgálatokban.

A függőséget okozó gyógyszerek stimulálásának, dopamin felszabadulásának és kondicionált hely preferenciájának kiváltására való képessége szorosan kapcsolódik az addiktív gyógyszerek erősítő tulajdonságaihoz, és ezek a paraméterek a függőségi folyamat részét képezik (Wise, 2004). Tekintettel arra, hogy itt találtuk meg, hogy a JMV2959 enyhíti ezeket a jutalomparamétereket egerekben, azt feltételezzük, hogy a GHS-R1A fontos szerepet játszhat a függőségi folyamatokban, és hogy az endogén opioidok részt vesznek ezekben a folyamatokban. Ezek az adatok együttesen azt mutatják, hogy a GHS-R1A antagonistákat a kábítószer-függőség kezelésére kell kifejteni.

A JE-t és az EJ-t a Sahlgrenska Egyetemi Kórház, a Sahlgrenska Egyetemi Kórház svéd agyi alapítványa, a svéd agyi alapítvány, a svéd agy alapítvány, az 2011-4646, az 2009-2782 és az 2011-4819 támogatja. a svéd alkohol-kiskereskedelmi monopólium kutatási tanácsa és Adlerbertska, Fredrik és Ingrid Thuring alapítványai, Tore Nilsson, Längmanska, Torsten és Ragnar Söderberg, Wilhelm és Martina Lundgren, NovoNordisk, Knut és Alice Wallenberg, Magnus Bergvall, Anérs, Jeansons, Åke Wiberg , a Svéd Orvostudományi Társaság, a Svéd Orvostudományi Társaság és a Göteborgi Pszichiátriai Kutatási Alapítvány. A Svéd Alkohol Kiskereskedelmi Monopólium Alkoholkutató Tanácsa és a Svéd Kutatási Tanács (K148251-2012X-61-22090-01) támogatott. A finanszírozási források nem játszottak szerepet a tanulmánytervben, az adatok gyűjtésében, elemzésében és értelmezésében, a jelentés elkészítésében és az adatok közzétételére vonatkozó határozatban.