CRF-receptorok a magban az akumbolban a partnerpreferenciát modulálják a prairie voles-ban (2007)

Horm Behav. Szerzői kézirat; elérhető a PMC Dec 10, 2007.

Végleges szerkesztett formában megjelent:

PMCID: PMC2128037

NIHMSID: NIHMS22254

A kiadó ennek a cikknek a végleges szerkesztett változata elérhető a következő weboldalon: Horm Behav

Lásd a PMC egyéb cikkeit idéz a közzétett cikket.

Ugrás:

Absztrakt

A legújabb bizonyítékok arra utalnak, hogy a kortikotropin-felszabadító faktor (CRF) szerepet játszik a préri-völgyben a páros kötés szabályozásában. Korábban kimutattuk, hogy a monogamikus és nem monogámiás vole-fajok drámai módon különböznek a CRF-receptor 1-típusától (CRF).1) és 2 típusú CRF receptor (CRF2) az agyban és a CRF1 és CRF2 A receptorok sűrűsége a magban az accumbensben (NAcc) korrelál a társadalmi szervezettel. A monogámos préri és a fenyővirágok lényegesen alacsonyabb szintű CRF receptor 1 típusú (CRF)1), és lényegesen magasabb 2 típusú (CRF)2) kötődés, NAcc-ben, mint a nem monogamás rétek és a montane voles. Itt arról számolunk be, hogy a CRF mikroinjekciói közvetlenül a NAcc-be felgyorsítják a partnerpreferenciát a hím préri kövekben. A CSF-nek a NAcc-be és a CRF-be a caudate-putamen-be történő befecskendezése nem segítette elő a partner preferenciát. Hasonlóképpen, a nem monogamás rétek NAcc-be történő CRF-injekciói sem segítették elő a partner preferenciát. A prériai kövekben ezt a CRF-megkönnyítő hatást blokkolta bármelyik CRF együttes injekciója1 vagy CRF2 receptor antagonistákat a NAcc-be. CRF és Urocortin-1 (Ucn-1) immunocitokémiai festése, két endogén ligandum a CRF-hez1 vagy CRF2 Az agyi receptorok kimutatták, hogy a CRF, de nem az Ucn-1, immunreaktív szálak voltak jelen az NAcc-ben. Ez alátámasztja azt a hipotézist, hogy a helyi CRF felszabadulás NAcc-be aktiválhatja a CRF-et1 vagy CRF2 receptorok. Eredményeink együttesen újszerű szerepet játszanak az accumbal CRF rendszerek társadalmi viselkedésében.

Kulcsszavak: magvak, CRF1, CRF2, kortikotropin felszabadító faktor, kortikotropin felszabadító hormon, vole, neuropeptid receptorok, pár kötés, társadalmi viselkedés, monogámia, fajok közötti különbségek

A kortikotropin felszabadító faktor (CRF) rendszer részt vesz a stressz és a szorongás mögötti neurobiológiában, de sokkal kevésbé ismert a szerepe a társadalmi viselkedésben. A mikrotin rágcsálók különböző társadalmi szervezetekkel rendelkeznek, és így kiváló összehasonlító megközelítést kínálnak a társadalmi viselkedés neurobiológiájának tanulmányozásában (Young és Wang, 2004). Prairie (Microtus ochrogaster) és fenyőfű (Microtus pinetorum) monogám; a felnőtt társak hosszú távú szelektív párkötéseket alkotnak a területen és a laboratóriumban (Getz, Carter és Gavish, 1981; Salo, Shapiro és Dewsbury, 1993). Ezzel szemben a szorosan összefüggő rét (Microtus pennsylvanicus) és montane voles (Microtus montanus) kegyetlen és magányos (Gruder-Adams és Getz, 1985; Shapiro és Dewsbury, 1990). A korábbi kutatások azt mutatták, hogy az oxitocin és a vazopresszin neuropeptid receptorainak agyi eloszlása ​​úgy tűnik, hogy felelős a faji különbségekért a társadalmi szervezetben (Insel és Shapiro, 1992; Insel, Wang és Ferris, 1994; Lim, Wang, Olazabal, Ren, Terwilliger és Young, 2004b). Azonban újabb bizonyítékok arra utalnak, hogy egy másik neuropeptid rendszer, a CRF is úgy tűnik, hogy modulálja a páros kötést a prériai völgyekben (DeVries, Guptaa, Cardillo, Cho és Carter, 2002).

A stresszhormonok társadalmi viselkedésben betöltött szerepét viszonylag kevés tanulmány vizsgálja. Az egyik tanulmány megállapította, hogy az exogén kortikoszteron beadása a férfi préráknak megkönnyítette a pár kötést egy új nővel (DeVries, DeVries, Taymans és Carter, 1996). Egy későbbi tanulmány megállapította, hogy az intracerebroventrikulárisan (icv) beadott CRF elősegítette a férfiak préri köpenyében a partnerek preferenciáját, még akkor is, ha rendkívül alacsony dózisokban, amelyek nem hatottak a mozgásszervi aktivitásra vagy a szorongásszerű viselkedésre (DeVries és munkatársai, 2002). Továbbá a partner preferenciát blokkolta az alfa-helikális CRF icv beadása, amely nem szelektíven blokkolja a CRF receptorokat az agyban (DeVries és munkatársai, 2002). Ezek az adatok arra utalnak, hogy a CRF szerepet játszhat a páros kötés kialakulásában szorongásfüggetlen mechanizmusok útján, a központilag ható agy receptorok bevonásával. Azonban az icv-infúzióban lévő CRF potenciálisan hathat az agyi régiókra, hogy megkönnyítse a partnerek preferenciáját, és jelenleg ismeretlen, hogy mely agyi régiókra vonatkozik.

Mivel a CRF rendszer a párkötés kialakulásának szabályozásában szerepet játszott, azt jósoltuk, hogy e rendszer neurális áramkörei különböznek a monogám és a nem monogamikus fajok között. Korábban kimutattuk, hogy bár a CRF mRNS és a peptid eloszlása ​​erősen konzerválódott a vole fajok között, az 1 és az 2 CRF receptor típusok eloszlása ​​(CRF)1 és CRF2) az agyban jelentősen különbözik a különböző társadalmi szervezeteket bemutató négy zsákfajban.Lim, Nair és Young, 2005; Lim, Tsivkovskaia, Bai, Young és Ryabinin, 2006). Úgy tűnt, hogy a receptor kötődése több agyi régióban korrelál a monogamikus társadalmi struktúrával; mindazonáltal csak a magszemek (NAcc) következetesen szegregálódott mind a monogámi, mind a nem monogámiákkal. A monogámos préri és a fenyővirágok lényegesen alacsonyabb szintű CRF receptor 1 típusú (CRF) 1), és lényegesen magasabb 2 típusú (CRF)2) kötődés, NAcc-ben, mint a nem monogamás rétek és a \ tLim és munkatársai, 2005).

A CRF-ben a fajok közötti különbségeket igazoló neuroanatómiai vizsgálataink alapján1 és CRF2 sűrűségét a NAcc-ben, feltételeztük, hogy különösen a NAcc-ben a CRF-cselekvés kritikus volt a prérikus völgyekben a monogamikus társadalmi viselkedés szempontjából. Először meghatároztuk, hogy a közvetlenül a NAcc-be beadott CRF elősegítheti-e a partner preferenciák kialakulását rövidített együttélési idő után a partnerrel. Ezután elvégeztük az azonos kísérletet a nem monogamás rétekkel. Ezután manipuláltuk a CRF-et1 és CRF2 a NAcc-ben, farmakológiai antagonisták alkalmazásával, hogy meghatározzuk a CRF-rel elősegített partneri preferenciák kialakulásának relatív hozzájárulását. Végül bizonyíték van arra, hogy két endogén ligandum CRF-re immunreaktív festést kap1 és CRF2 az agyban, a CRF- és az Urocortin-1-ban (Ucn-1) lévő receptorok a NAcc-ben prériai völgyekben. E vizsgálatok eredményei azt mutatják, hogy a CRF, amely a NAcc-ben működik, először előmozdítja a társadalmi kötődést, továbbá, hogy mindkét CRF1 és CRF2 receptorok részt vesznek ebben a folyamatban.

MÓD

Tantárgyak

Az állatok felnőtt, szexuálisan naiv, férfi és női préri (70 – 100 napok) a Floridai Állami Egyetem laboratóriumi tenyésztő kolóniájából, amelyek eredetileg az USA-ban Illinoisban elfoglalt térfogatokból származnak. A felnőtt szexuálisan naiv rétek az Emory Egyetem laboratóriumi tenyésztő kolóniájából származnak. Az 21-napos elválasztás után az alanyokat azonos nemű testvérpárokban vagy triókban, valamint vízben és Purina nyúl-chow-ban adnibitum adták. Az összes ketrecet 14: 10 fényen tartottuk: sötét ciklusban 20 ° C hőmérsékleten. Az 87 hím préri köpenyek adatait a CRF farmakológiai kísérletei tartalmazzák, valamint azonos számú stimulus női préri köpenyét a páros kötési vizsgálathoz. Az 10 férfi réti mocsarakból származó adatokat is használtak, valamint azonos számú stimulus női rétes. A CRF immunocitokémiai vizsgálatokban nyolc préraszövényt használtunk (n = 4 minden nem esetében).

CRF elősegíti a partnerek preferenciáját

Felnőtt férfi préri köpenyeket (n = 31) bilaterálisan kanülelünk NAcc-be sztereotaxikus módszerekkel, amint azt korábban leírtuk (Aragona, Liu, Curtis, Stephan és Wang, 2003a; Liu és Wang, 2003). Az alanyokat nátrium-pentobarbitállal (2.5 mg / 40 gm testtömeg) érzéstelenítettük, és az NAcc-re szánt 26 kétoldalú vezető kanüleket (Plastics One, Roanoke, VA) implantáltuk sztereotaxikusan (elülső 1.7 mm, kétoldalú ± 1 mm, Ventral −4.0 mm bregma). A kontroll injekciókat (n = 6) a caudate-putamen (Anterior 1.7 mm, kétoldalú ± 1 mm, Ventral-2.5 mm és bregma között) célozták. 3 – 5 napok helyreállítása után az alanyok mikro-injekciókat (200 nl per oldalt) kaptak mesterséges CSF vagy CSF-ben oldott gyógyszer. Az injekciókat egy 33 mérő tűvel végeztük, amely 1 mm-t hosszabbított a vezető kanül alatt a célterületre. A tű egy Hamilton fecskendőhöz (Hamilton, Reno, NV) csatlakozott polietilén-20 csövön keresztül, amelyen keresztül az oldatot lassan pumpáltuk (MasterFlex L / S standard hajtás, 7016-21 modell) 200 nl sebességgel. / perc, oldalanként. A humán / patkány CRF-t a Sigma (St. Louis, MO) cégtől szereztük be.

Az állatokat négy csoportra osztottuk: CSF kontroll (n = 7), 0.01 pg CRF NAcc-be (n = 9), 0.1 pg CRF NAcc-be (n = 15) és 0.1 pg CRF caudate-putamenbe (n = 6). A caudate-putamen (CP) egy agyi régió, amely csak a NAcc-re dorzális, és CRF-et is tartalmaz2 így a CRF hatásainak anatómiai kontroll régiójaként szolgál. Mindegyik állat kétoldali 200 nl térfogatú injekciót kapott egy rövidített 6 óra együttélés előtt egy új nővel. 0.01 nL-ben az 200 pg CRF koncentrációja 10 nM, míg az 0.1 pg CRF koncentrációja 200 nL-ben 100 nM. A számított Ki CRF esetében1 11 nM, míg a számított Ki a CRF esetében2 az 25 nM értéke 125I-sauvagine (Primus, Jevics, Baltazar és Gallager, 1997). Az 6-órák közötti együttélés párosítás nélkül következetesen nem indukálja a partnerek preferenciáját, amint azt a korábbi tanulmányok is bizonyították (Aragona és munkatársai, 2003a; Aragona, Liu, Yu, Curtis, Detwiler, Insel és Wang, 2006). Az együttélést követően a résztvevőket a partner preferenciáinak tesztelésére tesztelték.

A partner preferenciák tesztelése az volt, hogy a hím egy 3-kamrájú készülékbe helyezi a készüléket, amelyben a női partner egy ketrecbe volt kötve, és egy új korosztályt („idegen”) azonos korú és szociózis tapasztalattal kötöztek össze egy második ketrecben, mint korábban leírtak (Carter, DeVries és Getz, 1995). Minden stimulus nőt két különálló partner-preferencia tesztben alkalmaztak, egyszer partnerként és ismét egy másik személy idegenként, és ezért minden nőnek azonos társadalmi és szexuális expozíciója volt az 20 óra együttélés során. Az alanyok szabadon barangolhatnak az egész készülékben, és a partnerrel és idegennel érintkezve töltött idő mennyiségét a 3 órás vizsgálat során számszerűsítettük.

A lokomotoros aktivitást a partner preferencia teszt során mértük annak meghatározására, hogy a CRF-kezelés kiválasztott dózisai befolyásolták-e az általános mozgásszervi aktivitást vagy a szorongásszerű viselkedést, amint azt korábban leírtuk (Hotta, Shibasaki, Arai és Demura, 1999). A partner preferencia készülék mindkét alagútján áthaladó ketrec átjárók számát infravörös detektorokkal értékeltük. A partner preferencia készülék három ketrecében négy infravörös fénysugár van, mindkét alagút mellett két gerendát összekötő két gerendák. A háromórás periódus alatt minden állat esetében összeadtuk a fotósugár-megszakítások teljes számát. A viselkedésvizsgálat után az alanyokat leöltük, és az injekciós helyeket szövettanilag igazoltuk.

Felnőtt férfi rétek (n = 10) is teszteltek a partnerek preferenciájának CRF-megkönnyítésére. Az állatokat a fentiekben leírtak szerint kétoldalúan NAcc-be kanüleltük, és véletlenszerűen két csoportba soroltuk: CSF kontroll (n = 4) vagy CRF 0.1 pg (n = 6). Az együttélés és a partner preferenciák tesztjeit pontosan úgy hajtottuk végre, ahogyan azt a fentiekben leírtuk a préri kövek esetében. A kolóniából származó felnőtt férfi rétek általában nem képeznek partneri preferenciákat, amikor egy nővel együtt élnek.Lim és munkatársai, 2004b).

CRF1- és CRF2-szelektív farmakológia és partner preferencia

A felnőtt préri köpenyeket a fentiekben leírtak szerint kétoldalúan NAcc-be kanüleltük, és három csoportba osztottuk: 0.1 pg CRF (n = 10), 0.1 pg CRF és 10 pg CRF1 antagonista (CP-154,526) (n = 25) és 0.1 pg CRF plusz 10 pg CRF2 antagonista (anti-sauvagine-30) (n = 15). Az anti-sauvagine-30-t a Sigma (St. Louis, MO) cégtől és a CP-154,526-ot Michael Owens, Ph.D. (Emory Egyetem, Atlanta, GA). Az 10 pg CRF koncentrációja1 Az 154,526 nL oldatban az antagonista (CP-200) 100 nM, míg az 10 pg CRF koncentrációja2 Az 30 nL oldatban az antagonista (anti-sauvagine-200) 10 nM. Mindegyik állat 200 nl térfogatú kétoldali injekciót kapott közvetlenül a NAcc-be, mielőtt egy új nőstény rövidített 6 órás együttélést végezne. Az együttélést követően az alanyokat a fentiekben leírtak szerint teszteltük a partner preferenciáira. A viselkedésvizsgálat után az alanyokat leöltük, és az injekciós helyeket szövettanilag igazoltuk. Azokat az állatokat, amelyek kanülési helyeit az NAcc-n kívül helyeztük el, kizártuk az adatelemzésből, és nem tükröződtek a felhasznált állatok teljes számában.

Az adatok elemzése

Az egyes kísérletekhez tartozó partner-preferencia-vizsgálat adatait 2-ANOVA-módszerrel elemeztük, amelyben az inger (partner vagy idegen) és a kezelés tényező volt. Ezen túlmenően, a Student-féle t-próbákat a partnerrel és az idegennel érintkező idő összehasonlítására használták az egyes kezelési csoportokban. Minden kísérlethez Bonferroni-korrekciókat végeztünk a szignifikancia szintre annak érdekében, hogy minimalizáljuk az I-es típusú hibakockázat kockázatát a többszörös összehasonlítások miatt. A férfiakat úgy ítélték meg, hogy partnerüket preferálták, ha több mint kétszer annyi időt töltöttek a partnerrel, mint az idegen.

A mozgásszervi aktivitásra összegyűjtött adatok összege az egyes állatokra vonatkozó infravörös sugárszakadások száma, és az egyes kezelési csoportok átlaga. Az eredményeket egyirányú ANOVA alkalmazásával elemeztük, amely független faktorként kezelt.

CRF és Urocortin-1 immunhisztokémia

Az 10: 00 és 14 közötti órákban a felnőtt préri köpenyeket mélyen érzéstelenítették: 00 izofluránnal és sóoldattal perfundáltuk, majd 2% paraformaldehidet 10 mM (pH 7.4) foszfát-pufferolt sóoldatban (PBS). A leválasztott agyakat egy éjszakán át a 2% paraformaldehid / PBS oldatban rögzítettük, majd 30% -os szacharóz / PBS-ben védettük. Harminc μm vastag, szabadon úszó koronális metszeteket szeleteltünk egy kriosztáton, és standard protokollok szerint feldolgoztuk immunhisztokémiai módszerrel (Ryabinin, Criado, Henriksen, Bloom és Wilson, 1997; Weitemier, Tsivkovskaia és Ryabinin, 2005) a korábbi kísérletekben elvégzett kúpos szövetek korrekciójával \ tLim és munkatársai, 2006). Röviden, az endogén peroxidáz aktivitást 15-perc inkubálással leállítjuk 0.3% hidrogén-peroxiddal. Az Urocortin-1-specifikus antitest esetében a blokkolást 5 órás inkubálással végeztük 2% Bovine Serum Albumin, 0.1% heparin, 0.01% Triton X-100 PBS-ben. A CRF-specifikus antitest esetében a blokkolást egy 5 órás inkubálással végeztük 4.5% kecske szérummal, 0.3% Triton X-100-sel PBS-ben. Az urocortin-1-et felismerő primer nyúl antitesteket (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) 1: 5,000 hígításban használtuk. A CRF-et felismerő primer antitesteket (Peninsula Laboratories, San Carlos, CA) 1: 15,000 hígításban használtuk. A primer antitestek kimutatására biotípusos anti-nyúl szekunder antitesteket (Vector Laboratory Inc., Burlingame, CA) alkalmaztunk. A szekunder antitestek kimutatása Vectastain ABC kit (Vector) alkalmazásával történt, és az enzimatikus fejlődést a Metal Enhanced DAB kit (Pierce, Rockford, IL, USA) segítségével végeztük. Az immunfestés specifitását az immunreaktivitás teljes hiányával határoztuk meg olyan területeken, amelyekről nem ismert, hogy CRF-et vagy Urocortin-1-t expresszálnak. Ezen túlmenően ezeknek az antitesteknek a kontroll preabsorpciós kísérleteit korábban elvégeztük (Bachtell, Weitemier, Galvan-Rosas, Tsivkovskaia, Risinger, Phillips, Grahame és Ryabinin, 2003).

A kvalitatív képelemzést Olympus BX40 mikroszkóppal és nagy felbontású digitális videokamerával (Olympus Qcolor3) végeztük, amely egy OS-X rendszert futtató Macintosh személyi számítógéphez kapcsolódik. Az egyes agyi területeken az állatokból legjobban illeszkedő képeket digitálisan gyűjtöttük össze ugyanolyan fényintenzitás mellett. Mivel az NAcc sejtekben nem tapasztaltunk immunopozitív festést, az immunreaktív neuronok számát nem számoltuk kvantitatívan.

EREDMÉNYEK

A CRF receptorok farmakológiai manipulációja NAcc-ben

Korábban bebizonyosodott, hogy a CRF icv infúziója elősegíti a partnerpreferenciát a prérikus völgyekben (DeVries és munkatársai, 2002). Neuroanatómiai adataink alapján a CRF fajok közötti különbségeket igazoltuk1 és CRF2 a NAcc-ben feltételeztük, hogy a NAcc a partner preferenciáinak CRF-megkönnyítését célzó cselekvési hely volt. A korábbi tanulmány kimutatta, hogy a CRF dózisfüggő icv-kezelése megkönnyítheti a férfiak prérikus völgyében a partneri preferenciákat, miután egy rövidített együttélést végeztek egy nővel (DeVries és munkatársai, 2002). A tanulmány alapján CRF-dózisokat terveztünk helyspecifikus injekciókra NAcc-be. Az 0.1 nL izotóniás oldatában (vagy 0.01 nM és 200 nM) feloldott 100 pg és 10 pg CRF dózisai jóval az 0.1 ng és 1 ng CRF minimális hatásos icv-dózisai alatt voltak (vagy 1 nM és 210 μM) (DeVries és munkatársai, 2002). Bár a CRF-nek bizonyítottan kötődik a CRF-hez1, szintén kötődik a CRF-hez2 jelentős affinitással (Ki 11 és 25 értékkel)Primus és munkatársai, 1997).

A teljes adatsor elemzése kétutas ANOVA alkalmazásával az ingerállatok jelentős fő hatását mutatta ki (F (2) = 1,66, p <6.77), de más fő hatást vagy kölcsönhatást nem észleltek. Annak megállapítására, hogy mely csoportok részesültek előnyben a partnerekkel az idegenekkel szemben, Student-féle t-teszteket végeztek a p-érték Bonferroni-korrekcióival. A kontroll préraboglyák mesterséges CSF kétoldali injekcióival az NAcc septumoszlopba vagy 0.05 pg CRF a caudate-putamenbe nem töltöttek lényegesen több időt a partnerrel való érintkezésben, mint az idegen ingerállat (p> 0.1, Student t-tesztje) , Bonferroni-szint p <0.3-re állítva) (1A ábra). Az alacsonyabb, 0.01 pg CRF-dózissal injektált préraboglyák arra törekedtek, hogy több időt töltsenek a partnerrel való érintkezésben, mint az idegen (p> 0.08, Student t-próbája, Bonferroni-szint p <0.01). Ezzel szemben a tízszer nagyobb CRF-dózisú, 10 pg-os NAcc-s septális pólusba bilaterális injekciókat kapó prérmolyok jelentősen több időt töltöttek a partnerrel való érintkezésben, mint az idegen (p <0.1, Student t-próbája, Bonferroni szint beállítása p <0.01) (1A ábra). Továbbá, míg az 6 kontroll állatok csak 13-je mutatott partner preferenciát, amelyet úgy definiáltak, hogy az idegenhez képest kétszer annyi időt töltöttek a partnerrel érintkezésben, az 12 állatok 15-je, amely 0.1 pg-t kapott CRF-ből, partner preferenciát mutatott (1B ábra). Azok a 3-állatok, amelyek nem rendelkeztek partner-preferenciával, erős idegen preferenciákkal rendelkeztek, amelyek valószínűleg hozzájárultak a kezelés fő hatásának hiányához vagy az interakciós hatáshoz az 2-irányú ANOVA-ban. Így, míg a CRF infúzió az NAcc-be jelentősen megnövelte a partnerrel való érintkezés idejét az idegenhez viszonyítva, nem eredményezett a partnerrel való érintkezési idő általános növekedését.

ábra 1 

A CRF kétoldalú mikro-injekciói a NAcc-be megkönnyítik a partnerpreferenciát a férfi préri kölykökben. (A) Azok a kontroll állatok, amelyek mesterséges CSF-et kaptak a NAcc-be, vagy az 0.1 pg CRF-et a caudate-putamenbe (CP), nem szignifikánsan előnyben részesítették a partneret ...

A CRF drámai faji különbségei miatt1 és CRF2 A NAcc sűrűségében feltételeztük, hogy a NAcc-en belüli CRF-akció csak a préraboglyákban segíti elő a partnerpreferenciák kialakulását, a nem monogám réti pelyhekben pedig nem. Valóban, a CSF-vel injektált réti pelyhek vagy a magas dózisú 0.1 pg CRF nem töltöttek lényegesen több időt a partnerrel való kapcsolattartásban, mint az idegen (p> 0.5, Student's t-teszt) (ábra 2).

ábra 2 

A CRF-nek a NAcc-be történő kétoldalú mikro-injekciói nem segítik elő a partner-preferenciát a nem monogamikus hím réteken. A mesterséges CSF-sel vagy a CRF 0.1 pg-jével NAcc-be befecskendezett felnőtt rétesek nem töltöttek több időt a partnerrel való kapcsolatban, mint ...

A CRF faji különbségei alapján1 és CRF2 eloszlása ​​NAcc-ben, feltételeztük, hogy mindkét CRF1 és CRF2 modulálná a partner preferencia viselkedését, talán ellentétes irányba. A teljes adatkészlet elemzése kétutas ANOVA alkalmazásával az ingerállatok jelentős fő hatását mutatta ki (F (2) = 1,94, p <7.52), de egyéb fő hatást vagy kölcsönhatást nem észleltek. A prériboglyákba 0.05 pg CRF és 0.1 pg szelektív CRF koktélt injektáltunk2 antagonista anti-sauvagine-30, nem töltött jelentősen több időt a partnerrel vagy az idegennel (p> 0.3, Student t-próbája, Bonferroni-szint p <0.016-ra állítva) (3A ábra). Érdekes, hogy a prérikus köpenyek a CRF 0.1 pg-jével, valamint 10 pg szelektív CRF-szel vannak befecskendezve1 a CP-154,526-1 antagonista szintén blokkolta a partner preferenciáját (p> 0.5, Student t-próbája, Bonferroni-szint p <0.016-ra állítva) (3A ábra). A NAcc-be 0.1 pg CRF-be injektált kontroll prératüzéreket egyszerre teszteltük, és megállapítottuk, hogy megismétlik a partnerpreferálás megkönnyítésének eredeti eredményeit (p <0.01, Student t-teszt, Bonferroni-szint p <0.016-ra állítva) (3A ábra). Ezen túlmenően, míg az 8 az 10 CRF-kezelt préri kövekből partner-preferenciát mutatott, csak az 11 állatok 25-je kapott CRF-et.1 és 6-t az 15 állatokból CRF-et kapó állatokból2 antagonista, partner preferenciát mutatott (3B ábra). Eredményeink arra utalnak, hogy mindkét CRF aktiválódik1 és CRF2 A NAcc receptorai szükségesek a CRF által indukált, a préri-völgyben a partner preferenciák megkönnyítéséhez.

ábra 3 

Mindkét CRF1 és CRF2 A NAcc-receptorok szükségesek a CRF-elősegített partnerpreferencia-kialakuláshoz a préraboglyákban. (A) Az állatok, amelyekbe 0.1 pg CRF-et injektáltak NAcc-be, több időt töltöttek a partnerrel való érintkezésben, mint az idegen (p <0.01, Student's ...

A mozgásszervi aktivitás nem különbözött szignifikánsan a kezelési csoportok között (F (1,80) = 1.37, p> 0.05, egyirányú ANOVA), bár a mozgásszervi aktivitás általában alacsonyabb volt azoknál az állatoknál, akik CRF-t kaptak az NAcc-be. Az eredmények itt láthatók Táblázat 1. A NAcc kanülési helyét bemutató reprezentatív szövettani szakaszt mutatjuk be ábra 4.

ábra 4 

A kanül elhelyezésének szövettani ellenőrzése. (a) A bal oldalon lévő receptor-autoradiogram a CRF helyét mutatja2 a préri vole NAcc-ben. (b) A Nissl-festett agyszelvény reprezentatív fényképe, amely a kanül elhelyezését mutatja be ...
Táblázat 1 

Mozgásszervi aktivitás, amelyet az infravörös sugártörések vagy a ketrec keresztezések teljes száma képvisel, az egyes kezelési csoportok átlagában. Nincs szignifikáns különbség a kezelési csoportok között (F = 1.37, p> 0.05, egyirányú ANOVA).

CRF- és Ucn-1 immunreaktivitás NAcc-ben

A fotomikrográfok bemutatásához, amelyek endogén CRF receptor ligandumait jelenítik meg a NAcc-ben, CRF- és Urocortin-1 (Ucn-1) immunreaktivitást végeztünk felnőtt préri kövekben. A CRF immunocitokémia szempontjából feldolgozott reprezentatív agyszakaszokat mutatjuk be ábra 5. A CRF-immunreaktív szálak mindkét nem esetében NAcc-ben voltak megfigyelhetők, a szálak eloszlásában vagy sűrűségében nyilvánvaló különbségek nélkül.5b). Az Ucn-1 szálak nem voltak kimutathatók NAcc-ben sem a férfiak, sem a női prérikus völgyekben (5c). Így lehetséges, hogy a CRF az endogén ligandumok egyike, amelyek fiziológiásán kötődhetnek a CRF-hez1 és CRF2 receptorok a NAcc aljzatban, hogy megkönnyítsék a partnerek preferenciáját. Megjegyezzük, hogy a CRF-nek mindkét CRF-hez kötődik1 és CRF2- körülbelül két-tízszeres affinitással nagyobb affinitás a CRF-hez1 (Primus és munkatársai, 1997). Ugyanakkor nem zárhatjuk ki azt a lehetőséget, hogy más endogén ligandumok, mint például az Urocortin-2 vagy az Urocortin-3 is hozzájárulhatnak a pár kötés kialakulásának neurális szabályozásához.

ábra 5 

CRF és Ucn-1 immunreaktivitás préri-völgyekben. (a) A patkány atlasz vázlatosan mutatja az NAcc 10x nagyításának területét (lásd a téglalapot)Paxinos és Watson, 1998). (b) Prairie-vole-szakasz CRF-immunreaktív szálakat mutat a NAcc-ben (lásd a nyilakat). c) Prairie ...

VITA

Az előző vizsgálatokban a fajok közötti különbségeket azonosítottuk az akrális CRF-ben1- és CRF2 kifejezést, amely összefüggésben állt a négy szervetlen faj társadalmi szervezettel. A monogámi préri és a fenyővirágok magasabb CRF-szintet mutatnak2 NAcc-ben és alacsonyabb CRF-szintekben1 a NAcc-ben, a nem monogamás rétek és a montane-vole fajokhoz képest (Lim és munkatársai, 2005). Ezen adatok alapján feltételeztük, hogy a NAcc-ben a CRF-aktivitás kritikus volt a prérikus völgyekben a monogamikus társadalmi viselkedés szempontjából. Jelen tanulmányunkban először mutatjuk be, hogy a CRF mikro-injekciói közvetlenül a NAcc-be valóban megkönnyítik a partnerpreferenciát a hím prérákban. A kétirányú ANOVA-analízis az ingerállat fő hatását észlelte, azaz a partnerrel való érintkezés során több időt töltöttünk, mint az idegen, de a kezelés vagy az interakció fő hatása nem volt kimutatható. Az 3 pg CRF NAXc csoportjának erős idegen preferenciái az 0.1 állatokban felfújták a varianciát, megakadályozva az interakciós hatás kimutatását. A partner versekkel töltött idő elkülönült összehasonlítása azonban az 0.1 pg CRF NAcc csoportban jelentős partneri preferenciákat tárt fel. Ezt a hatást az antagonista vizsgálatban replikálták, ami igazolta a hatás robusztusságát. A partner preferenciákban bekövetkezett eltolódás nem társult a partnerrel töltött idő statisztikailag szignifikáns növekedésével vagy az idegennel töltött idő csökkenésével, hanem inkább a partnerhez képest az idegenhez képest általánosan növekvő preferencia eredménye. Ezzel ellentétben a CRF nem befolyásolja a nem monogamás réteken a partnerek preferenciáját. Ezenkívül megmutatjuk, hogy ezt a megkönnyítő hatást a CRF mindkét CRF hatására moduláljuk1 és CRF2 receptorokhoz. Végül bemutatjuk a fotomikrográfiás bizonyítékokat arra vonatkozóan, hogy a CRF-immunreaktív szálak a NAcc prérialyukban jelennek meg, jelezve, hogy a CRF a CRF-et befolyásoló endogén ligandumok egyike lehet.1 és CRF2 receptorok kialakítása során. Összességében ezek az adatok újfajta szerepet játszanak a NAF-ben működő CRF rendszerek társadalmi viselkedésében.

Adataink azt mutatják, hogy a CRF a NAcc-ben elősegíti a partnerek preferenciáját, és alátámasztja azt a hipotézist, hogy a CRF-rendszerek a páros kötés kialakításában részt vesznek a prériai kövekben. Továbbá feltételeztük, hogy a CRF2 különösen a CRF mennyisége miatt kritikusak voltak a receptorok2 receptorok a két monogámi kockafajban, de nem a két nem monogámiás \ tLim és munkatársai, 2005). A réti üreges kísérlet eredményei alátámasztják ezt a hipotézist, mivel a CRF infúzió nem befolyásolja a partner preferenciáját egy olyan fajban, amely hatékonyan hiányzik a CRF-ről2 receptorok. Ráadásul azt találtuk, hogy egy CRF együttes alkalmazása2-szelektív antagonisták blokkolják a partnerpreferenciát a prérikus völgyekben. Ezek az adatok feltárják a CRF potenciálisan kritikus szerepét2 páros kötés kialakulásában.

Ugyanakkor azt is megállapítottuk, hogy egy CRF együttes alkalmazása1-szelektív antagonisták blokkolták a partnerpreferenciát a prérikus völgyekben. Ez az eredmény meglepőbb volt, mivel a CRF1 a nem-monogamikus és monogamikus fajokban NAcc-ben expresszálódnak a receptorok. Összességében ezek az adatok hangsúlyozzák a mindkét receptor-altípusok a partner-preferencia kifejezésére, és rámutatnak arra a lehetőségre, hogy a receptor specifitás komplex kérdés, amely előnyös lehet a további kutatások során. Lehetséges, hogy a páros kötési viselkedés során dinamikus kölcsönhatás alakulhat ki a NAcc két receptor altípusa között, és érdekes lehet a CRF sejtfenotípusainak további vizsgálata.1- és CRF2- kifejező neuronok, vagy látni, hogy CRF1 és CRF2 A receptorok ugyanazon neuronokba is kolokalizálódhatnak. Az is lehetséges, hogy egyéb szerek, mint például a CRF-kötő fehérje, amely az endogén CRF-ek tartályaként működhet, lehetnek.Jahn, Eckart, Brauns, Tezval és Spiess, 2002).

A partner-preferenciát elősegítő NAcc helyspecifikus injekcióinak hatékony CRF-dózisai nem eredményeztek szignifikáns hatást a kábítószer-kezelésre a mozgásszervi aktivitásra, amelyet gyakran szorongásszerű viselkedésként értelmeznek. DeVries és Carter (2002) az 0.1 és 1.0 ng (210 nM és 2.1 μM) partnerek preferált CRF icv-dózisait találták hatékonyan, és nem észleltek különbségeket a lokomotoros aktivitás között a kezelési csoportok között (DeVries és munkatársai, 2002). Dózisaik 1000 és 10,000 között nagyobbak és legalább kétszer-húszszor nagyobbak voltak a koncentrációnál, mint a helyspecifikusan NAcc-hez (10 nM és 100 nM). Vizsgálatunkban, bár nem észleltünk szignifikáns különbségeket a lokomotoros aktivitásban a kezelési csoportok között, a CRF-et önmagukban NAcc-be szedő állatokban azonban kismértékű ketrec átkelés alakult ki. Bár lehetséges, hogy a CRF finom hatást fejthet ki a szorongásszerű viselkedésre, és ezért a mozgás, amely viszont befolyásolhatja a partner preferenciák kialakulását, úgy véljük, hogy a valóságosabb magyarázat az, hogy a CRF egyedüli csoportban a csökkent ketrec átkelések a megnövekedett melléktermék. partner-preferencia, azaz csak a partner ketrecében töltött idő. Ez alátámasztja azt a hipotézist, hogy a CRF új, különálló szerepet játszhat a társadalmi viselkedés szabályozásában, esetleg független a HPA tengelyektől a szorongásra gyakorolt ​​hatásától.

Azt is bemutatjuk, hogy a CRF-immunreaktivitás fotomikrográfiai bizonyítéka van a CRF-ben lévő NAcc-ben.2 receptorok monogámos prérikus völgyében. Ez arra utal, hogy a CRF lehet az egyik endogén ligandum, amely a CRF-re hat1 és CRF2 receptorok. Bár a CRF-nek bizonyítottan kötődik a CRF-hez1, szintén kötődik a CRF-hez2 jelentős affinitással (Primus és munkatársai, 1997). Az Ucn-1-immunreaktív szálakat nem észlelték az NAcc-ben, de az agy más területein, mint például az Edinger-Westphal magban megfigyelték (Lim és munkatársai, 2006). Nem tudtuk az Urocortin-2 vagy az Urocortin-3 szálakat feltérképezni a korai agyban a specifikus immunfestés hiánya miatt; érdekes lenne azonban meghatározni, hogy ezek a potenciális ligandumok, amelyek szintén kötődnek-e a CRF-hez2 nagy affinitású receptorok is jelen vannak az NAcc-ben a CRF-szel együtt2 receptorok.

A ventrális előtér, és különösen a NAcc, többször azonosították a préri völgyekben a párkötések kialakulásának kritikus agyi régiójává. Tekintettel az NAcc szerepére a mezolimbikus dopamin jutalomútban, feltételezhető, hogy a természetes jutalom és megerősítő mechanizmusok a párkötés kialakulását szolgálják, így a partner szelektíven kapcsolódik a jutalomhoz (Aragona és munkatársai, 2003a; Lim, Murphy és Young, 2004a). Korábban farmakológiai és genetikai manipulációkon keresztül kimutattuk, hogy a ventrális előcsúcs vazopresszin V1a receptorok szükségesek a hímpár kötés kialakulásához, még akkor is, ha a nem-monogamákban kifejezett túlzottan expresszálódnak (Lim és munkatársai, 2004b; Lim és Young, 2004). Az NAcc-ben az oxitocin receptorok szükségesek a partneri preferenciákhoz a női prérikus völgyekben (Fiatal, Lim, Gingrich és Insel, 2001). Az Accumbal dopamin D1 és D2 receptorok kimutatták, hogy mind a férfiak, mind a nők esetében modulálják a partner preferenciák kialakulását és fenntartását, és a dopamin ezen viselkedési folyamat során kölcsönhatásba lép az oxitocinnal.Aragona és munkatársai, 2003a; Aragona és munkatársai, 2006; Aragona, Liu, Yu, Damron, Perlman és Wang, 2003b; Liu és Wang, 2003). Így a CRF-receptor aktiválása valószínűleg hozzájárul egy nagyobb áramkörhöz, amely az NAcc-ben konvergál, hogy ezt a komplex társadalmi viselkedést hozza létre. Ezzel a hipotézissel összhangban bizonyíték van arra, hogy az NAcc-ben lévő CRF-receptorok módosíthatják a dopamin felszabadulását a striatumba (Lu, Liu, Huang és Zhang, 2003), és a közelmúltbeli előzetes bizonyítékok arra utalnak, hogy a NAcc CRF receptor aktiválás stimulálhatja a sávnyomást a természetes megerősítéshez (Berridge, Pecine és Schulkin, 2004). Egy másik tanulmány kimutatta, hogy a CRF2 a ventrális tegmentális területen lévő receptorok, amelyek dopaminerg vetületeket küldenek NAcc-re, hosszú távú potencírozást okozhatnak, a viselkedési tanulás és a jutalomszövetség fiziológiás korrelációja (Ungless, Singh, Crowder, Yaka, Ron és Bonci, 2003). Mivel a partnerpreferencia a természetes jutalmak tanulásának egyik formája, a NAcc-ben lévő CRF-receptorok hasonló szerepet játszhatnak a szinaptikus potencírozás során a páros kötés kialakulása során a préri-völgyekben.

A páros kötés kialakítása a természetben egy összetett kognitív folyamat, amely számos külső inger és belső állapot integrációját igényli. A páros kötésképzés több viselkedési folyamat szintéziséből ered, beleértve a társadalmi elismerést, a megközelítést és a társadalmi motivációt, és magában foglalja a tanulást és a memóriát. Az oxitocin és a vazopresszin integráltan részt vesznek a szociális ingerek neurális feldolgozásában és a társadalmi emlékek kialakulásában (Bielsky, Hu, Szegda, Westphal és Young, 2004; Ferguson, Young, Hearn, Matzuk, Insel és Winslow, 2000). A dopamin részt vehet a megnövekedett motivációs állapotban, amely a társaival való társadalmi interakciót hajtja végre, és a partner preferenciájának megteremtéséhez szükséges megerősítést. A CRF olyan mechanizmust biztosíthat, amellyel a belső feszültségállapot modulálja a partner preferenciát. A CRF jelzés lehetővé tenné a neurális plaszticitás hosszú távú változását is a pár kötés kialakulásakor. Minden neurotranszmitter rendszer más, de döntő szerepet játszik a páros kötés komplex viselkedésében, és bármelyik rendszer blokádja megzavarja a párkötés kialakulását.

A CRF szerepét a társadalmi viselkedés szabályozásában minimálisan tanulmányozták, annak ellenére, hogy a CRF-et a stressz és a szorongás viselkedése miatt bőségesen tanulmányozták. Erős bizonyíték van arra, hogy a CRF2 receptor aktiválás funkciók a szorongás és a depressziószerű viselkedés csökkentésére egerekben (Bale, Contarino, Smith, Chan, Gold, Sawchenko, Koob, Vale és Lee, 2000; Bale és Vale, 2003). A társadalmi viselkedés, a stressz és a szorongás erősen összefügg egymással, különösen a szociális támogatással vagy a társadalmi elszigeteltséggel való megbirkózással kapcsolatos magatartásokban. A páros kötvényeket képező Prairie-köpenyek a partnerek közötti társadalmi elválasztás során emelkedett kortikoszteronszinteket mutatnak, és a partnerrel való egyesülés visszaadja ezeket a szinteket az alapvonalhoz (Carter, DeVries, Taymans, Roberts, Williams és Getz, 1997). Az erőszakos úszáson átesett férfi préri pszichológiai stressz a páros kötés kialakulását megkönnyíti a partnerrel való rövidített együttélés után (DeVries és munkatársai, 1996). Végül, páros kötésű férfiak, akiket a partnerüktől elválasztottak, a passzív úszási tesztben passzívabb kezelési stratégiákat mutatnak, mint a testvér-elválasztott társaik, és az ilyen viselkedési változások kísérik a CRF mRNS növekedését az NAcc-ben (Bosch, Nair, Neumann és Young, 2005).

Ezek az adatok arra utalnak, hogy a társadalmi és stressz viselkedésnek kölcsönös viszonya van, továbbá a stresszben és a szorongásban szerepet játszó ugyanazok a molekulák is fontos szerepet játszanak a társadalmi viselkedésben. Valójában bizonyíték van arra, hogy a „szociális” neuropeptidek vazopresszin és oxitocin módosíthatják a stressz és a szorongás viselkedését (Bielsky és munkatársai, 2004; Landgraf, Gerstberger, Montkowski, Probst, Wotjak, Holsboer és Engelmann, 1995; Liebsch, Wotjak, Landgraf és Engelmann, 1996; Mantella, Vollmer, Li és Amico, 2003; Ring, Malberg, Potestio, Ping, Boikess, Luo, Schechter, Rizzo, Rahman és Rosenzweig-Lipson, 2006; Windle, Shanks, Lightman és Ingram, 1997). Tehát ugyanazok a molekulák, amelyek modulálják a belső stresszállapotot, hozzájárulhatnak a szociális viselkedés szabályozásához, mint például a párkötés kialakulása, és hogy az egyik viselkedés céljából kialakult molekulák és áramkörök valójában dinamikusan vezérelhetik a másikat.

Köszönetnyilvánítás

Emory Egyetemen szeretnénk köszönetet mondani Dr. Michael J. Owensnek a CP-154,526 vegyülettel való hálával. Szeretnénk köszönetet mondani Lorra Millernek és Meera Modinak is, akik segítséget nyújtottak a rétes-kísérletben. Végül szeretnénk köszönetet mondani dr. A. Courtney DeVries az Ohio Állami Egyetemen és C. Sue Carter az Illinois-i Egyetemen, Chicagóban az úttörő munkájukért a CRF-ben a prérikus vulkánokban és Dr. DeVries levelezésében a farmakológiai kísérletekről.

Támogatás támogatása: Ezt a kutatást az NIH támogatta az MH65050 MML-nek, AA13738-nak az AER-nek, az MH58616-nak a ZXW-nek, az MH64692-nek az LJY-nek és az NSF STC IBN-9876754-nek és a Yerkes Center Grant RR00165-nek.

Lábjegyzetek

Kiadói nyilatkozat: Ez egy PDF-fájl egy nem szerkesztett kéziratból, amelyet közzétételre fogadtak el. Ügyfeleink szolgálataként a kézirat korai változatát nyújtjuk. A kéziratot másolják, megírják és felülvizsgálják a kapott bizonyítékot, mielőtt a végleges idézhető formában közzéteszik. Kérjük, vegye figyelembe, hogy a gyártási folyamat során hibák észlelhetők, amelyek hatással lehetnek a tartalomra, és minden, a naplóra vonatkozó jogi nyilatkozat vonatkozik.

Referenciák

  1. Aragona BJ, Liu Y, Curtis JT, Stephan FK, Wang Z. A nukleáris accumbens dopamin kritikus szerepe a férfiak préri köpenyeinek partner-preferenciák kialakításában. J Neurosci. 2003a; 23 (8): 3483-90. [PubMed]
  2. Aragona BJ, Liu Y, Yu YJ, Curtis JT, Detwiler JM, Insel TR, Wang Z. Nucleus accumbens dopamin differenciálisan közvetíti a monogám pár kötések kialakulását és fenntartását. Nat Neurosci. 2006; 9 (1): 133-9. [PubMed]
  3. Aragona BJ, Liu Y, Yu YJ, Damron A, Perlman G, Wang ZX. A D1- és D2-típusú dopaminreceptor aktivációval szembeni társadalmi kötődés ellentétes modulációja a nucleus accumbens héjában. Horm Behav. 2003b; 44: 37.
  4. Bachtell RK, Weitemier AZ, Galvan-Rosas A, Tsivkovskaia NO, Risinger FO, Phillips TJ, Grahame NJ, Ryabinin AE. Az Edinger-Westphal-oldalsó septum urocortin útvonal és az alkoholfogyasztáshoz való viszonya. J Neurosci. 2003; 23 (6): 2477-87. [PubMed]
  5. Bale TL, Contarino A, Smith GW, Chan R, Gold LH, Sawchenko PE, Koob GF, Vale WW, Lee KF. A kortikotropin felszabadító hormon receptor-2 hiányos egerek szorongásos viselkedést mutatnak, és túlérzékenyek a stresszre. Nat Genet. 2000; 24 (4): 410-4. [PubMed]
  6. Bale TL, Vale WW. Fokozott depresszió-szerű viselkedés a kortikotropin felszabadító faktor-2-hiányos egerekben: szexuálisan kettős válaszok. J Neurosci. 2003; 23 (12): 5295-301. [PubMed]
  7. Berridge KK, Pecine S, Schulkin J. A CRF érzékeny hatása az accumbens-héjban a szacharóz-jutalom kondicionált megközelítésében. Neurotudományi társadalom absztrakt néző / útvonaltervező. 2004: 437.12.
  8. Bielsky IF, Hu SB, KLG Szegda, Westphal H, Young LJ. A vazopresszin V1a receptor knockout egerekben a társadalmi felismerés és a szorongásszerű viselkedés csökkenése jelentős. Neuropsychop. 2004; 29 (3): 483-93. [PubMed]
  9. Bosch HL, Nair HP, Neumann ID, Young LJ. A női partnertől való elkülönítést követő depressziós jellegű viselkedés megváltozott agyi CRF mRNS és HPA tengely aktivitással rendelkezik a hím préri vole-ban. Társadalom Neurotudományi Absztrakt Megtekintő / Útvonaltervező; 2005. (420.4 programszám)
  10. Carter CS, DeVries AC, Getz LL. Az emlős monogámiájának fiziológiai szubsztrátjai: a préri vole modell. Neurosci Biobehav Rev. 1995, 19 (2): 303 – 14. [PubMed]
  11. Carter CS, DeVries AC, Taymans SE, Roberts RL, Williams JR, Getz LL. Peptidek, szteroidok és páros kötés. Ann NY Acad Sci. 1997; 807: 260-72. [PubMed]
  12. DeVries AC, DeVries MB, Taymans SE, Carter CS. A stressz társadalmi preferenciákra gyakorolt ​​hatásai szexuálisan dimorfikusak a prérikus völgyekben. Proc Natl Acad Sci US A. 1996, 93 (21): 11980 – 4. [PMC ingyenes cikk] [PubMed]
  13. DeVries AC, Guptaa T, Cardillo S, Cho M, Carter CS. A kortikotropin felszabadító tényező társadalmi preferenciákat vált ki a hím préri köpenyekben. Psychoneuroendocrinology. 2002; 27 (6): 705-14. [PubMed]
  14. Ferguson JN, Young LJ, Hearn EF, Matzuk MM, Insel TR, Winslow JT. Szociális amnézia az oxitocin gént nem tartalmazó egerekben. Nat Genet. 2000; 25 (3): 284-8. [PubMed]
  15. Getz LL, Carter CS, Gavish L. A préri vole párosító rendszere Microtus ochragaster: Terepi és laboratóriumi bizonyítékok a páros kötéshez. Viselkedési ökológia és társadalombiológia. 1981; 8: 189-194.
  16. Gruder-Adams S, Getz LL. A párosítási rendszer és az apai viselkedés összehasonlítása a Microtus ochragaster és M. pennsylvanicus-ban. Journal of Mammalogy. 1985; 66 (1): 165-167.
  17. Hotta M, Shibasaki T, Arai K, Demura H. 1 típusú kortikotropin-felszabadító faktor receptor közvetíti az emocionális stressz által indukált gátlást az étkezés és a viselkedési változások tekintetében patkányokban. Brain Res. 1999; 823 (1-2): 221-5. [PubMed]
  18. Insel TR, Shapiro LE. Az oxitocinreceptor eloszlása ​​tükrözi a monogamás és poligámos vulkánok társadalmi szervezetét. Proc Natl Acad Sci US A. 1992, 89 (13): 5981 – 5. [PMC ingyenes cikk] [PubMed]
  19. Insel TR, Wang ZX, Ferris CF. Az agy vazopresszin receptor eloszlásának mintái, amelyek társultak a mikrotin rágcsálókban. J Neurosci. 1994; 14 (9): 5381-92. [PubMed]
  20. Jahn O, Eckart K, Brauns O, Tezval H, Spiess J. A kortikotropin-felszabadító faktor kötőfehérje: ligandumkötő hely és alegység-szerkezet. Proc Natl Acad Sci US A. 2002, 99 (19): 12055 – 60. [PMC ingyenes cikk] [PubMed]
  21. Landgraf R, Gerstberger R, Montkowski A, Probst JC, Wotjak CT, Holsboer F, Engelmann M. V1 vazopresszin receptor antiszensz oligodeoxinukleotid a szeptumba csökkenti a vazopresszin kötődését, a társadalmi diszkriminációs képességeket és a szorongással kapcsolatos viselkedést patkányokban. J Neurosci. 1995; 15 (6): 4250-8. [PubMed]
  22. Liebsch G, Wotjak CT, Landgraf R, Engelmann M. A szeptális vazopresszin modulálja a szorongással kapcsolatos viselkedést patkányokban. Neurosci Lett. 1996; 217 (2-3): 101-4. [PubMed]
  23. Lim MM, Murphy AZ, Fiatal LJ. Ventrális striatopallidikus oxitocin és vazopresszin V1a receptorok a monogámi préri vole (Microtus ochrogaster) J Comp Neurol. 2004a; 468 (4): 555-70. [PubMed]
  24. Lim MM, Nair HP, Young LJ. Fajok és nemek közötti különbségek a 1 és 2 kortikotropin-felszabadító faktor receptorok agyi eloszlásában monogámos és véletlenszerű fajokban. J Comp Neurol. 2005; 487 (1): 75-92. [PMC ingyenes cikk] [PubMed]
  25. Lim MM, Tsivkovskaia NO, Bai Y, Young LJ, Ryabinin AE. A kortikotropin felszabadító faktor és az urocortin 1 eloszlása ​​a Vole Agyban. Behav Evol agy. 2006; 68 (4): 229-240. [PMC ingyenes cikk] [PubMed]
  26. Lim MM, Wang Z, Olazabal DE, Ren X, Terwilliger EF, Young LJ. Az egyik gén expressziójának manipulálásával fokozott partner preferenciát jelenthet egy szokatlan fajban. Természet. 2004b; 429 (6993): 754-7. [PubMed]
  27. Lim MM, Fiatal LJ. Vasopresszin-függő neurális áramkörök, amelyek a párkötés kialakulását képezik a monogámi préri vole-ban. Neuroscience. 2004; 125 (1): 35-45. [PubMed]
  28. Liu Y, Wang ZX. A Nucleus accumbens oxitocin és a dopamin kölcsönhatásba lép a páros kötésképzés szabályozásában a női prérikus völgyekben. Neuroscience. 2003; 121 (3): 537-44. [PubMed]
  29. Lu L, Liu Z, Huang M, Zhang Z. A kokainra adott dopamin-függő válaszok a kortikotropin felszabadító faktor receptor altípusoktól függenek. J Neurochem. 2003; 84 (6): 1378-86. [PubMed]
  30. Mantella RC, Vollmer RR, Li X, Amico JA. A nőstény oxitocin-hiányos egerek fokozott szorongással kapcsolatos viselkedést mutatnak. Endokrinológia. 2003; 144 (6): 2291-6. [PubMed]
  31. Paxinos G, Watson C. A patkány agya sztereotaxikus koordinátákban. 4. Academic Press; 1998.
  32. Primus RJ, Yevich E, Baltazar C, Gallager DW. CRF1 és CRF2 kötőhelyek autoradiográfiás lokalizációja felnőtt patkány agyban. Neuropsychop. 1997; 17 (5): 308-16. [PubMed]
  33. Ring RH, Malberg JE, Potestio L, Ping J, Boikess S, Luo B, Schechter LE, Rizzo S, Rahman Z, Rosenzweig-Lipson S. Az oxitocin szorongás-szerű aktivitása férfi egerekben: viselkedési és autonóm bizonyítékok, terápiás hatások. Pszichofarmakológia (Berl) 2006: 1 – 8. [PubMed]
  34. Ryabinin AE, Criado JR, Henriksen SJ, Bloom FE, Wilson MC. A c-Fos-expresszió differenciális érzékenysége a hippocampusban és más agyi régiókban a mérsékelt és alacsony alkoholtartalmakra. Mol Psychiatry. 1997; 2 (1): 32-43. [PubMed]
  35. Salo AL, Shapiro LE, Dewsbury DA. Affiliatív viselkedés a különböző fajok (Microtus) Psychol Rep. 1993; 72 (1): 316 – 8. [PubMed]
  36. Shapiro LE, Dewsbury DA. Az affiliatív viselkedés, a páros kötés és a hüvelyi citológia különbségei két fajban (Microtus ochrogaster és M. montanus) J Comp Psychol. 1990; 104 (3): 268-74. [PubMed]
  37. Korticotropin-felszabadító faktor a CRF-kötő fehérjét fokozza az NMDA-receptorok fokozására CRF-receptor 2-en keresztül a dopamin-neuronokban. Idegsejt. 2003; 39 (3): 401-7. [PubMed]
  38. Weitemier AZ, Tsivkovskaia NO, Ryabinin AE. Az urocortin 1 eloszlása ​​egér agyban törzsfüggő. Neuroscience. 2005; 132 (3): 729-40. [PubMed]
  39. Windle RJ, Shanks N, Lightman SL, Ingram CD. A központi oxitocin adagolás csökkenti a stressz által kiváltott kortikoszteron felszabadulási és szorongásos viselkedést patkányokban. Endokrinológia. 1997; 138 (7): 2829-34. [PubMed]
  40. Fiatal LJ, Lim MM, Gingrich B, Insel TR. A társadalmi kötődés sejtes mechanizmusai. Horm Behav. 2001; 40 (2): 133-8. [PubMed]
  41. Fiatal LJ, Wang Z. A páros kötés neurobiológiája. Nat Neurosci. 2004; 7 (10): 1048-54. [PubMed]