J Neurosci. Szerzői kézirat; elérhető a PMC Oct 27, 2009.
Végleges szerkesztett formában megjelent:
PMCID: PMC2768419
NIHMSID: NIHMS93410
Heather E. Ross,1 Sara M. Freeman,1 Lauren L. Spiegel,1 Xianghui Ren,2 Ernest F. Terwilliger,2 és a Larry J. Young1,3
A cikk kiadójának utolsó szerkesztett változata ingyenesen elérhető a címen J Neurosci
Lásd a PMC egyéb cikkeit idéz a közzétett cikket.
Absztrakt
A nukleáris accumbensben lévő oxitocin receptorokat az alloparentalis viselkedés szabályozásában és a páros kötés kialakulásában társították a társadalmilag monogamikus préri vole-ban. Az oxytocin receptor sűrűsége a magban az akumbensben pozitívan korrelál a fiatalkori és a felnőtt női préri köpenyek alloparentálásával, és az oxumocin receptor antagonista, amely a magba ágyazódik, blokkolja ezt a viselkedést. Továbbá, a préri-völgyek az oxytocin receptorok nagyobb sűrűségűek az accumbensben, mint a nem monogamikus rágcsálófajok, és az accumbal oxitocin receptorok blokkolása megakadályozza a párzás által indukált partner preferenciák kialakulását. Itt adeno-asszociált vírusvektor-génátvitelt alkalmaztunk annak vizsgálatára, hogy a préri és a rétes völgyekben az oxumbocid receptorok sűrűsége és a társadalmi magatartás közötti kapcsolat van-e. Felnőtt női préri köpenyek, amelyek az oxytocin receptor túlkifejeződését a magban az akumbensben a férfiakkal való együttélés után gyorsított partner preferenciák képződtek, de nem mutatott fokozott alloparentalis viselkedést. Ugyanakkor a nem monogamás rétek esetében a partner preferenciát nem lehetett elősegíteni az oxytocin receptor beültetésével. Ezek az adatok megerősítik az oxitocinreceptor szerepét az asszonyokban a partnerpreferenciák szabályozásában a női prérikus völgyekben, és azt sugallják, hogy az oxytocin receptor expressziója az akumbensekben nem elegendő a nem monogamikus fajokban a partner preferenciák előmozdításához. Ezek az adatok az elsőek, amelyek közvetlen kapcsolatot mutatnak az oxitocin receptor sűrűsége a magban, és a társadalmi kötődési viselkedés változásai között. Így az oxitocin receptor expressziójának egyéni változása a striatumban hozzájárulhat a társadalmi viselkedés természetes sokféleségéhez.
BEVEZETÉS
A mikrotin rágcsálók figyelemre méltó sokféleséget mutatnak a szociális viselkedésben, a nagy affilenciális és szociálisan monogámiáktól a viszonylag asszociált és szokatlan párosítási stratégiákig (Gruderadams és Getz, 1985). A társadalmilag monogámi préri vole (Microtus ochrogaster) az együttélést és párzást követően fennálló társadalmi kapcsolatokat vagy párkötéseket alakítanak ki egy ellentétes szexpartnerhez, míg a nem monogamás rétek (Microtus pennsylvanicus) általában nem. A felnőttek szexuálisan naiv női préri kölykök jelentős változatosságot mutatnak spontán tápláló magatartásukban, vagy alloparentalis viselkedésükben, és körülbelül fele mutatja az anyai-szerű viselkedést a kölykök felé, míg a fennmaradó részt figyelmen kívül hagyja vagy támadja a kölyköket.Lonstein és De Vries, 1999; Bálák és Carter, 2003; Olazabal és Young, 2005). Így a köldökek kiváló alkalmat nyújtanak a szociális kötődés és az alloparentalis ellátás alapjául szolgáló neurobiológiai mechanizmusok vizsgálatára, valamint ezeknek a viselkedések sokféleségéhez vezető mechanizmusoknak mind a fajok, mind az egyének között.
A nonapeptid-oxitocin (OT) szerepet játszott mind a partner preferenciák kialakításában, mind az alloparentalis viselkedés szabályozásában a prériai völgyekben. Egy oxitocin receptor (OTR) antagonista infúziója a nukleáris accumbensbe (NAcc), de nem a szomszédos caudate putamenbe blokkolja a párosítás által indukált partner preferenciák kialakulását, a pár kötésképződés laboratóriumi proxyját (Young és munkatársai, 2001). Az OTR antagonisták hasonló infúziói az NAcc-be szintén blokkolják az alloparentalis viselkedést a szűz nőknél (Olazabal és Young, 2006b). Így az OTR-ok aktiválása az NAcc-ben elősegíti mind a partner preferenciák kialakulását, mind az alloparentalis viselkedést a női préri kölykökben.
Az OTR-sűrűség változása a NAcc-ben feltételezhető, hogy hozzájárul a faji különbségekhez a társadalmi szervezetben és az alloparentalis viselkedésben. A Prairie-völgyek nagy sűrűségű OTR-t tartalmaznak az NAcc-ben, míg a nem-monogamás rétek, egerek és patkányok nem (Insel és Shapiro, 1992; Olazabal és Young, 2006a). A Prairie völgyek magasabb alloparentalis viselkedést mutatnak, mint a rétek, egerek vagy patkányok (Olazabal és Young, 2006a). Ezzel a fajok közötti kapcsolattal párhuzamosan az NAcc OTR-sűrűsége és a szülői viselkedés között az OTR-sűrűség pozitívan korrelál az alloparentalis viselkedéssel mind a fiatal, mind a felnőtt női préri köpenyekben (Olazabal és Young, 2006b, a). Ebben a tanulmányban adeno-asszociált vírusvektor (AAV) génátvitelt alkalmaztunk annak vizsgálatára, hogy a NAcc OTR-sűrűség változása hozzájárulhat-e a társadalmi kötődés és az alloparentalis viselkedés változásához. A prairie-OTR-gént kódoló AAV-val kétoldalú infúzióban részesültek a felnőtt prériai köpenyek, ami az OTR-kötés jelentős emelkedését eredményezte. Az állatokat ezután teszteltük az alloparentalis viselkedésre és a partner preferenciák kialakítására. Ezután teszteltük azt a hipotézist, hogy az OTR expresszió az NAcc-ben elegendő ahhoz, hogy elősegítse a partner preferenciák kialakulását azáltal, hogy ugyanazzal a vektorral infundálja a női réteket. Elõrejeleztük, hogy az ellenõrzéshez képest az OTR női prérikus köpenyek túlzottan kifejezõje fokozott alloparentalis viselkedést és gyorsított partner preferenciát eredményez. Továbbá azt jósoltuk, hogy az OTR-t kifejező rétes-nőstények a NAcc-ben partneri preferenciákat alakítanak ki.
ANYAGOK ÉS METÓDUSOK
Állatok
A Prairie és a rétes völgyeket 2-3 korban az elválasztás időpontjától kezdődően 21-23 vulkánokkal / ketrecekkel azonos nemű csoportokban tartottuk. A ház egy szellőztetett 36 × 18 × 19cm plexi ketrecből állt, melyet 14 alatt Bed-ocobbs laboratóriumi állati ágyneművel töltöttünk: 10 hr fény / sötét ciklus 22 ° C-on, élelmiszerhez (nyúl LabDiet, Richmond, IN) és vízzel ad libitum . A préri köpenyeket laboratóriumi tenyésztő kolóniából szereztük be, amely eredetileg az Illinois-i térfogatú fogakból származik. A réti köpenyeket a Floridai Állami Egyetem tenyésztő telepéből nyert állományból nyertük. Az alanyok 2-5 hónapos intakt szexuálisan naiv nőstények voltak. A stimulus állatok szexuálisan tapasztalt felnőtt férfiak. Minden partner „partner” és „idegen” volt a partner preferencia teszt során (lásd alább). A littermate-eket különböző kezelési csoportokba rendelték, hogy ellenőrizzék az almok és a ketrecek közötti variabilitást. Minden eljárást az Emory Egyetem Intézményi Állatgondozási és Használati Bizottsága hagyott jóvá.
Adeno-társított vírus vektorok
Az OTR kódoló szekvenciát úgy alakítottuk ki, hogy az első öt transzmembrán domént kódoló préri-pólusú OTR genomi klón első exonját (Genbank csatlakozási szám) összekapcsoljuk. AF079980) és az OTR 3 ′ végét, melyet préri vole méh cDNS-ből erősítettek meg. A kódoló szekvenciát PCR-rel újra keretesítettük, hogy kiküszöböljük az UTR-eket, és új szegélyező restrikciós helyeket biztosítsunk, hogy megkönnyítsük az AAV vektor plazmidba történő klónozást. A módosított gént ezután egy AAV2 vektor plazmidba klónoztuk egy 0.6 kb citomegalovírus (CMV) promoter és egy SV40 DNS-fragmens között, amely tartalmazza az SV40 kis t intron és poliA jelet. Az AAV2-OTR-t AAV9-ben keresztmetszetbe csomagoltuk egy háromszoros plazmid transzfekcióval AAV-293 sejtekbe (Stratagene, La Jolla, CA) standard kalcium-foszfát-kicsapási módszerrel. Nem használtunk segítő vírust. Az AAV2-eGFP plazmidot AAV9-ben párhuzamosan csomagoltuk negatív kontrollvektorként. Röviden, minden AAV vektor plazmid, egy AAV2 / 9 rep / cap plazmid, amely AAV2 replikáz és AAV9 kapszid funkciókat biztosít, és egy 3rd Az adenovírus segítő funkciókat kódoló plazmidot, a pHelper-t (Stratagene), 293 sejtekbe 1: 1: 1 mólarányban transzfektáltuk. A sejteket a transzfekció utáni 48 óra elteltével gyűjtöttük össze. Ezután a sejt-pelleteket DMEM-ben szuszpendáltuk, és az intracelluláris vírusrészecskéket három egymást követő fagyasztási-olvadási körrel szabadítottuk fel, majd 13,000 fordulatszámon centrifugáltuk 10 percig asztali centrifugában a részecskék eltávolítása céljából. A vektorállományokat -80 C-ben tároltuk, és valós idejű PCR-rel titráltuk, egy PI-Primer 7700 szekvencia detektáló rendszer segítségével Perkin-Elmer Applied Biosystems-től (Foster City, CA). A titerek 10 sorrendben voltak12 DRP / ml. (DRP = Dnázrezisztens részecskék).
Vírusos vektor infúzió
A sztereotaxiás infúziókat isoflurán érzéstelenítés alatt végeztük egy Kopf sztereotaxban, amely egy Ultra Micro Pump II (World Precision Instruments, Sarasota, FL) és egy 26 gauge Hamilton fecskendővel van ellátva. A nőstényeket kétoldalúan injektáltuk a NAcc héjába (prairie voles: AP + 1.7mm, ML. 9mm, DV −4.5mm, rétek: AP + 1.6mm, ML .9mm, DV −4.3mm), ahol az AAV-t tartalmazó 750nl volt oxitocin receptor (CMV-OTR, N = 12) vagy egy kontroll eGFP expresszáló vektor (CMV-GFP, N = 16). A vírust 93.8nl / perc sebességgel infundáljuk. A fecskendőt az infúzió után az 5 min. Az álarcos állatok (N = 9) érzéstelenítettek, és a fejbőrüket metszették és varrották. A műtétet követően az állatokat csoportos elhelyezésig tartották a partner preferencia viselkedésének vizsgálatáig. Az előzetes vizsgálatok azt mutatták, hogy az OTR expresszió az injekció helyén stabil volt az 10 napok után.
Alloparental Behavior Testing
Az injekció beadása után egy hónappal a prératüzéreket tesztelték alloparenta viselkedésre. A teszt 0800:1800 és 45.5 óra között történt. A kísérleti állatokat egy nagy tiszta ketrecbe helyeztük (24x20x15cm), és 2 percig hagytuk akklimatizálódni. Két kiskutyát (5-900 napos) a ketrec egyik végére helyeztünk. Feljegyeztük a kölykök megközelítésének késését, a kölyköket megtámadó állatok számát, valamint a kölykök ápolásával, lebegtetésével és visszaszerzésével töltött időt. 15 másodperces látenciát rendeltünk azokhoz az állatokhoz, amelyek a 30 perces teszt során statisztikai elemzés céljából nem közelítették meg a kölyköket. A tesztelés azonnal leállt, ha a nőstény megtámadta a kölyköket. Az állatokat alloparentális kategóriába soroltuk, ha> XNUMX másodpercet töltöttek a kölykök nyalásával támadás nélkül. A prérabogárkákkal végzett kísérlet eredményei alapján a réti pocakokat nem vizsgálták alloparentális viselkedésre.
Partner preferenciák tesztelése (Prairie Vole)
Egy hónappal az alloparentalis viselkedésvizsgálat után, és két hónappal az AAV-infúzió után a nőstények 4ml szezámolaj IP-ben oldott 0.1 μg ösztradiol-benzoátot (EB; Fisher, Pittsburgh, PA) kaptak naponta 3 napokon a szexuális fogékonyság kiváltása előtt. . Az utolsó EB-injekció után az 16 órákat tiszta ketrecbe (28 × 17 × 12cm) helyeztük egy szexuálisan tapasztalt felnőtt hím 6 órákig, majd visszatértük a csoportba. A párosító viselkedést a kezdeti 6 órás együttélés során rögzítettük. Az első behatolás késleltetése és az első órában a párosodási rohamok száma került értékelésre. Az 3600 másodpercek késleltetését olyan állatokhoz rendeltük, amelyek a 1 órás időszak alatt nem párosultak statisztikai elemzés céljából. A következő reggel (14 óra az együttélés után) az állatokat a partnerek preferenciájának vizsgálatára teszteltük. Egy partner-preferencia tesztben a kísérleti nőstény egy háromkamrás készülék semleges középkamrájába kerül, amelyben a partner-hím az egyik oldalkamrába van kötve, és egy másik „idegen” férfi csatlakozik a másikhoz (Williams és munkatársai, 1992). A kísérleti állat szabadon mozoghat a kamrákban, és az egyes férfiak közelségében eltöltött időt automatizált gerenda törésrendszerrel rögzítjük (Curtis és Wang, 2005b, a; Lim és munkatársai, 2007).
Egy nappal később, a nőstényeket újra párosították ugyanazzal a partnerrel egy további 12 óra együttéléshez. A nőstényeket ezután ismételten teszteltük egy partner preferenciára (18 óra teljes érintkezési idő). Ezt a kétlépcsős paradigmát alkalmaztuk arra, hogy maximalizáljuk a partner preferencia teszt megkönnyítését, mivel a partner-preferencia kialakításához szükséges küszöbidő változó. Az állatokat úgy ítélték meg, hogy partnere preferált, ha kétszer annyi időt töltöttek a partner közelében, mint az idegen.
Partner preferenciák tesztelése (Meadow vole)
A kolóniából származó rétesek általában nem képeznek párkötést az 24hrs mate expozíció után. Ezért ennek a kísérletnek a során a partner preferencia teszteket az 24 együttélése és egy további 48 óra (72 óra) után végeztük. Minden más kezelési és vizsgálati módszer megegyezik a fentiekkel.
A szövetek gyűjtése és feldolgozása
A viselkedési kísérleteket követően az állatokat izofluoránnal végzett mély érzéstelenítés után dekapitáljuk. Ezután agyakat összegyűjtöttük, és porított szárazjégen fagyasztottuk. Az agyakat az NAcc-en keresztül 6 sorozatban, 20μm-en, kriosztáton, Fisher Frost-plusz lemezre osztottuk. A lemezeket -80C-n tároltuk, amíg az autoradiográfiában nem használták.
OTR Autoradiográfia
OTR-receptor autoradiográfiát alkalmaztunk az OTR-kötődés vizsgálatára az AAV-ban beadott állatokban. Az autoradiográfiát a korábban leírtak szerint, kis módosításokkal végeztükInsel és munkatársai, 1991; Wang és Young, 1997). A szakaszokat eltávolítottuk a -80C tárolóból, hagyjuk levegőn hagyni, 0.1% paraformaldehidbe mártottuk foszfát-pufferolt sóoldatban (pH 7.4), és kétszer öblítettük 50 mM Tris pufferben (pH 7.4) az endogén OT eltávolítása céljából. Ezután a szövetet 50 pM-ben inkubáltuk 125I-OVTA (NEX 254050UC PerkinElmer, Waltham, MA) egy órán keresztül. A nem kötött radioligandumot négy mosással eltávolítottuk 50mM Tris-ben és 2% MgCl-ban2 (pH = 7.4), majd dH-ba merítjük20 és levegőn szárított hűvös levegő alatt. Szárítás után a tárgylemezeket BioMax MR filmmel (Kodak, Rochester, NY) tettük ki 72 órákban. Két CMV-OTR és egy CMV-GFP állatot kizártuk a viselkedési analízisből az injekcióhiány miatt.
GFP immunhisztokémia
A CMV-GFP-vel injektált állatok egy részhalmazát (N = 5) transzkardiálisan perfundáltuk 50 ml PBS-sel, majd 50% 4% paraformaldehidet 0.1 M foszfát pufferben, amely 2.5% akroleint tartalmaz (Polysciences, Warrington, PA). Közvetlenül a perfúzió után az agyakat eltávolítottuk és 4 ° C-on 30% -os szacharózoldatban tároltuk szétválasztásig. Az agyakat 25μm koronális szakaszokra vágtuk le fagyasztó mikrotomával, és szabadon úszó krómvédő oldatban tároltuk -20 ° C-on, immunhisztokémiai feldolgozásig.
Az egyes agyok rostrocaudális tengelyén keresztül egy 1: 6 sorozat került feldolgozásra GFP-re. Röviden, a szekciókat eltávolítottuk a krioprotektáló oldatból, nagy mértékben öblítettük kálium-foszfát-pufferolt sóoldattal (pH 7.4), majd 15 percig 1% nátrium-bór-hidridben reagáltattuk az aldehid felesleg eltávolítására. A szekciókat ezután a GFP elleni primer antitest oldatban 0.1% Triton-X-et tartalmazó kálium-foszfát-pufferolt sóoldatban (KPBS) szobahőmérsékleten inkubáltuk, majd 1 órán keresztül 48 ° C-on. A GFP-t tartalmazó sejteket poliklonális nyúl anti-GFP antitest (Cat. No. A4, Invitrogen, Carlsbad, CA) alkalmazásával azonosítottuk 6455: 1 koncentrációban. Az elsődleges antitest-inkubálás után a szövetet KPBS-ben öblítettük, 100,000 órára inkubáltuk biotinilált kecske anti-nyúl IgG-ben (Jackson Immunoresearch, West Grove, PA) 1: 1 koncentrációban, és KPBS-ben öblítettük, majd 600- az avidin-biotin-peroxidáz komplexben (ABC Elite Kit PK-1 Vector, Burlingame, CA) óránként inkubáljuk 6100 koncentrációban: 1. KPBS-ben és Tris-pufferben (pH 200) való öblítés után a GFP-t barna reakciótermékként vizualizáltuk 7.2'-diaminobenzidin felhasználásával, amely 3,3% hidrogén-peroxidot tartalmaz Tris-pufferben. A reakcióterméket körülbelül 0.08 perc elteltével leállítjuk Tris-pufferben. A szekciókat sóoldatból zselatintartalmú csúszdákra szereltük, levegőn szárítottuk, desztillált alkoholok sorozatában dehidratáltuk, a Histoclear-ben (National Diagnostics, Atlanta, GA) tisztítottuk és Krystalon (EMD Chemicals, Gibbstown, NJ) alkalmazásával lefedtük.
Statisztikai elemzés
Az adatokat az átlag ± az átlag standard hibájaként (SEM) mutatjuk be. Kétirányú RM ANOVA-t futtattunk, az egyes ingerekkel töltött idő függő változójaként, az alanyon belüli tényező partner vagy idegen, és a kezelési csoport az alanyi tényező között. Holm-Sidak tesztet alkalmaztunk post hoc páros összehasonlításokhoz, amikor szignifikáns interakciós hatást észleltünk. Az ANOVA-k egyik módja a préraboglyák alloparentális és párzási viselkedése volt. Azokat a viselkedéseket, amelyek nem feleltek meg a normalitás kritériumainak, a Kruskal-Wallis egyirányú varianciaanalízissel elemeztük. Fisher Exact teszttel határoztuk meg az alloparenta viselkedést mutató állatok arányának csoportbeli különbségeit. A rét vole párzási viselkedését t-teszt és Mann-Whitney Rank Sum teszt segítségével elemeztük, amikor a normalitási teszt nem sikerült.
EREDMÉNYEK
Alloparental viselkedés Prairie Volesben
Az alloparentális viselkedést mutató CMV-OTR injekcióval ellátott női préraboglyák aránya (3/9) nem különbözött a kontroll (4/15) vagy a színlelt pocakoktól (3/10) (p> 0.5; 1A ábra). Két CMV-OTR, négy CMV-GFP kontroll, és két álarcos nő, akik nem alloparentalisnak minősültek, megtámadták a kölyköket. A kölykök közeledésének késése (1B ábra) és a nyalogatással / ápolással töltött idő szintén nem különbözött szignifikánsan a csoportok között (H = 0.31, P> 0.8 a késés, H = 0.40, P> 0.8 az ápolás esetében). Amikor csak azokat az állatokat hasonlítottuk össze, amelyek elérték az alloparentális kritériumokat, a kölykök megközelítésének késleltetése a CMV-OTR nőstényeknél (140.2 ± 65.2 másodperc) nem különbözött a CMV-GFP-től (62.5 ± 39.3 másodperc) vagy a színleltől (169.4 ± 51.7 másodperc) ) nőstények (F (2,7) = 1.27, p> 0.3). Nem volt különbség abban sem, hogy az alloparentális CMV-OTR nőstények kölyköket nyalogattak-e az alloparentális CMV-GFP vagy álszülőkhöz képest (F (2,7) = 1.94, p> 0.2; 1C ábra). Az egyes csoportok kölykök nyalogatásával / ápolásával, lebegtetésével és hordozásával töltött összes idő sem különbözött az alloparentális CMV-OTR (695.2 ± 77.1 másodperc) CMV-GFP (387.5 ± 132.7 másodperc) vagy a színlelt (503.8 ± 82.8 másodperc) között ) állatok (F (2,7) = 1.98, p> 0.2).
Párzás viselkedése Prairie Volesben
A párzási viselkedést a nők korábbi műtéti kezelése nem befolyásolta jelentősen. Az első intromisszió késleltetése nem különbözött szignifikánsan a CMV-OTR nőstényekkel párosított férfiaknál a CMV-GFP-hez párosodott férfiaknál vagy az álszülőknél (H = 5.043, p = 08; 2A ábra). Habár a CMV-OTR csoport hajlamos volt hamarabb párzani, mint a többi csoport, nem gyakrabban párosodtak. Az első órában a párzási ütemek száma nem különbözött a CMV-OTR nőstényeket tartalmazó pároktól a CMV-GFP-t vagy színlelt nőstényeket tartalmazó pároktól (F (2,31) = 0.46, p> 0.6; 2B ábra).
Partnerpreferencia-viselkedés Prairie Voles-ben
Az 6 hr együttélési időszak után egyik csoport sem mutatott jelentős partner preferenciát (2C ábra). A kezelésnek (F (2,31) = 0.56, p> 0.5) vagy a partnerrel töltött időnek az idegenrel szemben nem volt fő hatása (F (1,31) = 0.46, p> 0.5). További 12 órás együttélés után nem volt a kezelés fő hatása (F (2,29) =, 78, p = 0.5), sem a partnerrel töltött idő összege idegenekkel szemben (F (1,29) = 3.71) p = 0.06). Jelentős interakciós hatás volt azonban (F (2,29) = 5.56, p = 0.009). A post-hoc tesztből kiderült, hogy a CMV-OTR nőstények lényegesen több időt töltöttek a partner közvetlen közelében, mint az idegennél (p <0.001; 2D). A CMV-GFP és a látszat nőstények azonban ezen idő után nem mutattak partnerpreferenciát (p> 0.05; 2D). Ezen túlmenően a CMV-OTR 80% -ának a befecskendezett ömledékei elérték a partner preferenciák kritériumait, vagyis kétszer annyi időt töltöttek a partnerrel, mint az idegen, míg a CMV-GFP injekcióban csak 31% -kal és a hamis állatok 44% -ával (2E, F).
OTR és GFP expresszió a Prairie Voles NAcc-ben
Az autoradiográfiát úgy végeztük, hogy meghatározzuk az AAV injekció elhelyezését, és ellenőrizzük, hogy a CMV-OTR vektor megnövekedett OTR kötést eredményezett-e a kontrollokhoz képest. Amint azt korábban jeleztük, az OTR-kötés szignifikáns egyéni változása volt a kontroll CMV-GFP prairie voles-ban (3A, B). Az OTR-kötődés megkülönböztetett emelkedését kimutatták a CMV-OTR injektált prairie voles NAcc-ben (3C ábra). Ezenkívül a CMF-GFP állatok agyi szakaszain GFP immunhisztokémiai vizsgálatokat végeztünk, hogy meghatározzuk az NAcc neuronjainak expressziójának mértékét. Kimutattuk a neuronális jellemzőkkel rendelkező sejtek egyértelmű címkézését, ami megerősítette, hogy a CMV AAV vektorok a neuronokban expresszálódtak (3E, F).
Párzási viselkedés Meadow Voles-ben
A párosítási viselkedésben nem figyeltek meg szignifikáns különbségeket a réti pelyhek kezelési csoportjai között. Az első intromisszió késleltetése nem különbözött a CMV-OTR (1245.1 ± 1465.9 másodperc) nőstényekkel párosított férfiaknál a CMV-GFP (566.6 ± 989.8 másodperc) nőstényekhez párosodott hímekhez képest (T = 128.0, p> 0.2). Az első órában a párzási rohamok száma sem különbözött a CMV-OTR (6.8 ± 5.1) nőstényeket tartalmazó párokban és a CMV-GFP (9.5 ± 4.4) nőstényeket tartalmazó párokban (t = 1.42, p> 0.1).
Partner preferencia a Meadow Voles-ben
Egy 24hr együttélési időszak után egyik csoport sem mutatott jelentős partner preferenciát (4A ábra). Nem volt a kezelés fő hatása (F (1,20) = 0.19, p> 0.6), sem a partnerrel töltött idő versus idegen (F (1,20) = 0.09, p> 0.7). További 48 órás együttélés után ismét nem volt szignifikáns főhatás a kezelésnél (F (1,19) =. 65, p> 0.4) vagy a nőstényekkel töltött idő (F (1,19) = 0.62, p> .4; 4B ábra).
OTR kifejezés a Meadow Voles NAcc-ben
A CMV-GFP-vel injektált rétek kevéssé vagy egyáltalán nem rendelkeztek OTR-vel a NAcc-ben (Figure5A). Ezzel ellentétben a CMV-OTR befecskendezett rétek köpenyei jelentősen kötődtek a NAcc-hez, hasonlóan a prérikus völgyekhez.5B ábra).
VITA
A NAcc-ben az OTR-sűrűség fajbeli különbségeit társították a párosítási stratégiában (társadalmi monogámia és poligámia) és az alloparentalis viselkedésben mutatkozó különbségekkel, ami arra utal, hogy az OTR receptor expressziójának változása a társadalmi szervezet és a viselkedés fajbeli különbségeinek alapjául szolgálhat.Insel és munkatársai, 1991; Young és Wang, 2004; Olazabal és Young, 2006b). A társadalmilag monogámos préri köpenyek nagyobb sűrűségű OTR-t tartalmaznak az NAcc-ben, mint a nem monogamás rétek és a montane voles, és ezeknek a receptoroknak a farmakológiai blokádja megakadályozza a párosodást okozó partner preferenciák kialakulását (Young és munkatársai, 2001; Olazabal és Young, 2006b). Szintén jelentős egyéni eltérések tapasztalhatók az OTR sűrűségében a prairie vulkánokban (3A, B). Az OTR-sűrűség ebben a régióban pozitívan korrelál a felnőtt szexuálisan naiv női préri köpenyek alloparentalis viselkedésének egyedi változásával (Fiatal, 1999; Az Olazabal 2006) és az OTR antagonista beadása az NAcc-be kiküszöböli ezt a viselkedést (Olazabal és Young, 2006a). Ezért ebben a vizsgálatban az AAV génátvitel segítségével közvetlenül teszteltük a NAcc receptor sűrűségének és a vulkánok affiliatív viselkedésének kapcsolatát.
Eredményeink azt mutatják, hogy az előrejelzések szerint a NAcc-ben megnövekedett OTR-szintekkel rendelkező női préri köpenyek felgyorsították a partner preferenciák kialakulását az alacsonyabb OTR-sűrűségű nőknél (CMV-GFP vagy shams). Celőrejelzésünkhöz képest nem volt különbség a csoportok közötti alloparentalis viselkedésben, ami arra utal, hogy az accumbal OTR szabályozza a partner preferenciák kialakulását és az alloparentalis viselkedést. Eredményeink alátámasztják azt a hipotézist, hogy az OTR expresszió egyes különbségei hozzájárulnak a fajok közötti változáshoz az affiliatív viselkedés egyes aspektusaiban. Azonban a NAcc-ben a növekvő OTR-expresszió nem volt elegendő ahhoz, hogy a XIX. preferenciák. Fontos megjegyezni, hogy a vizsgált paraméterek egyikében sem volt különbség a párzási viselkedésben. Ennélfogva a kísérleti préri köpenyekben a fokozott partnerpreferencia nem tulajdonítható a megnövekedett szexuális aktivitásnak a kezdeti együttélési időszak alatt.
A felnőtt női préri köpenyek egyedülálló változatosságot mutatnak az alloparentalis ellátásban. A szexuálisan naiv nők 50% -a spontán fog kinyerni, nyalogatni / vőlegényt venni, és a nála bemutatott kölykök felett lebegni (Lonstein és De Vries, 1999; Bálák és Carter, 2003; Olazabal és Young, 2005). Szintén jelentős változások vannak az OTR-sűrűségben a NAcc-ben a préri kövek között (Fiatal, 1999). A NAcc-ben magasabb OTR sűrűségű nőknél nagyobb a valószínűsége, hogy alloparentális reakciót mutatnak, mint az alacsonyabb OTR értékű állatok ezen a területen. Így meglepő volt, hogy az OTR-sűrűség növelése a prériai kövek NAcc-ben nem fokozta az alloparentalis viselkedést. Az a tény, hogy ezek az állatok gyorsított partner preferenciák kialakulását mutatták, arra utalnak, hogy a vírusvektor transzgénéből származó OTR funkcionálisan kapcsolódik az NAcc jelátviteli útvonalaihoz.
Feltételezzük, hogy az NAcc-ben az OTR aktiváció egyéni változása a fejlődés során fontosabb szerepet játszhat a fajon belüli variáció kialakulásában az alloparentalis viselkedésben. A pozitív korrelációt az OTR-sűrűségben az NAcc-ben és az alloparentalis viselkedést a fiatalkori préri-völgyekben és a felnőttekben is kimutatták.Olazabal és Young, 2006b, a). Úgy tűnik, hogy a prairie völgyekben az alloparentalis viselkedés különösen érzékeny a fejlődés során fellépő zavarokra. Például az OT-vel való perinatális expozíció megváltoztatja az alloparental viselkedést a női prérikus völgyekben (Bales és munkatársai, 2007). Ezért az OTR nagyobb sűrűségűek a fejlesztés során megnövekedett OTR jelátvitelt tapasztalhatnak az NAcc-ben, ami hosszú távú neurokémiai változásokat eredményez, amelyek növelik az alloparentalis viselkedés megjelenésének valószínűségét, amikor felnőttekké válnak. Ha ez a hipotézis helyes, akkor megjósoljuk, hogy a NAcc neonatálisan növekvő OTR expressziója növelné az alloparentalis viselkedés gyakoriságát.
Egy másik magyarázat arra, hogy az NAcc-ben nem fokozta az OTR-expressziót az alloparentalis viselkedés növelése érdekében, az OTR-expresszió változása több agyi régióban szükséges lehet a viselkedés várható sokféleségének kialakításához. Például az OTR expresszió az oldalsó septumban negatívan korrelál az alloparentalis viselkedéssel (Olazabal és Young, 2006a). Végül az is lehetséges, hogy a hormon expozíció vagy a társadalmi tapasztalat változása befolyásolja az OTR sűrűségét az NAcc-ben az alloparentalis viselkedés megváltoztatása mellett. Például az apa jelenléte vagy hiánya a szteroid hormonok fejlődése vagy perinatális manipulációja során befolyásolhatja az alloparentalis válaszreakció megjelenését a női prérikus völgyekben (Roberts és munkatársai, 1996; Roberts és munkatársai, 1998; Lonstein és De Vries, 2000).
A férfiak préri kölykeiben a vazopresszin kritikus szerepet játszik az apai viselkedés megjelenítésében, valamint a partner preferenciák kialakulásában, párhuzamosan az oxitocin szerepével a nőkben (Winslow és munkatársai, 1993; Wang és munkatársai, 1994). A helyspecifikus farmakológiai vizsgálatok azt mutatják, hogy a VcNUMXaR a ventrális pallidumban, amely az NAcc egyik fő kimenete, kritikus a pár kötés kialakulásához (Lim és Young, 2004). A V1aR növelése a ventrális pallidumban a vírusvektor által közvetített génátvitel segítségével felgyorsítja a hím prérikus völgyek partner preferenciák kialakulását (Pitkow és munkatársai, 2001), amely a jelenlegi tanulmányhoz hasonló. Habár a férfi rétek ventrális pallidumában a V1aR túlzott kifejezése nem volt elégséges az apai viselkedés előidézésére, előmozdította a partner preferenciát (Lim és munkatársai, 2004); ezzel szemben a jelen tanulmányban az OTR túlexpressziója a NaCC-ben nem ösztönözte a partner preferenciák kialakulását a női rétek völgyében.
A NAcc-ben a megnövekedett OTR-os női rétek számos lehetséges magyarázata partneri preferenciák kialakítására. Először is, a párosodás során a NAcc-n belüli OT-kibocsátás fajbeli különbségei különböznek a női préri köpenyek és a rétek közt. Bár az OTR lokalizáció a fajok között különbözik, mind a prériai kövek, mind a rétek köpenyei OT-immunreaktív szálakat tartalmaznak az NAcc-ben (Ross és Young, nem publikált adatok). In vivo A mikrodialízis kísérletek kimutatták, hogy a párosodás stimulálja az OT felszabadulását a női préri köpenyek NAcc-ben, de párhuzamos vizsgálatokat nem végeztek a rétes völgyekben (CD Cole és Young, nem publikált adatok). Lehetséges, hogy az OT infúziója a CMV-OTR kezelt állatokba elősegítené a partner preferenciák kialakulását rétes völgyekben. Meg kell azonban jegyezni, hogy patkányok és juhok esetében a vaginocervikális stimuláció növeli a központi OT felszabadulást (Kendrick et al., 1986; Sansone és munkatársai, 2002). Ezért valószínű, hogy a rétek köpenye már a párosodás során emelkedik az OT-ben. Egy másik magyarázat a NAcc OTR expressziójának sikertelenségére a partneri preferenciák kialakulásának elősegítésére a női rétekben, hogy az OTR expresszió más fajok közötti különbségei szintén szükségesek a páros kötéshez. Például az OTR-sűrűség magasabb is a prefrontális kéregben és a prériai völgyekben az oldalsó amygdala-ban, mint a nemmonogamákban.Insel és munkatársai, 1991; Young és munkatársai, 1996; Smeltzer és munkatársai, 2006). Ezért az OTR expressziójának növelése több helyen is szükséges lehet a párosodás által indukált partner preferenciák stimulálásához a rétesben. Végül lehetséges, hogy a fajok közötti többszörös neurokémiai különbségek felelősek a fajok eltérő viselkedésbeli különbségeiért (pl. Dopamin, kortikotropin felszabadító faktor).Gingrich és munkatársai, 2000; Liu és Wang, 2003; Smeltzer és munkatársai, 2006; Lim és munkatársai, 2007).
Kísérleti megközelítésünknek számos fontos vitája van, ami vitát igényel. Először is, a CMV-OTR valószínűleg megnövelte az OTR expressziót az injekciózott területen lévő valamennyi sejttípusban, beleértve a neuronális populációkat is, amelyek általában nem reagálnak az OT-re. Lehetséges azonban, hogy a transzgenikus OTR nagyobb jelátvitelhez vezetett az idegsejtekben, amelyek normálisan expresszálják az endogén OTR-t, mivel az OT-re fokozott szenzibilizáció jön létre, vagy a megfelelő downstream jelző molekulák jelenléte. Másodszor, a vírusvektor-infúzió által termelt transzgén expresszió területe nem egyenletesen fejeződött ki az NAcc teljes rostralis-caudalis vagy medio-laterális szintjén. A CMV-OTR nőstényekben az OTR expresszió következetesen emelkedett az NAcc héj és szomszédos magrégióiban. Meg kell azonban jegyezni, hogy az NAcc héját leginkább a partner preferenciák kialakításában szabályozták, és az OTR sűrűség ebben a régióban jobban korrelál az alloparental viselkedéssel, mint a mag régió.
Ez az első tanulmány, amely meggyőzően bizonyítja, hogy az ATR expressziójának változása az agyban hozzájárulhat a társadalmi viselkedés változásához. Az OT-t számos magatartás szabályozásában széles körben érintették, beleértve a társadalmi információfeldolgozást és a memóriát, a páros választást, az anyai ápolást és a kötődést (Dantzer és munkatársai, 1987; Kendrick, 2000; Ferguson és munkatársai, 2001; Kavaliers és munkatársai, 2003). Nyilvánvaló bizonyíték van arra, hogy az OT modulálja az emberi társadalmi megismerést is, beleértve az interperszonális bizalmat, a tekintetét, az arcmemóriát és az érzelmi felfogást (Kosfeld és munkatársai, 2005; Domes és munkatársai, 2007; Guastella és munkatársai, 2008; Savaskan és munkatársai, 2008). Az OT adminisztráció növeli a társadalmi megismerés megtartását a hang intonációs feladatban az autista témákban (Hollander és munkatársai, 2007), és számos genetikai vizsgálat szerény összefüggést jelentett az OTR gén nem kódoló polimorfizmusai és az autizmus spektrum zavarai között (Wu és munkatársai, 2005; Jacob és munkatársai, 2007; Lerer és munkatársai, 2007; Yrigollen és munkatársai, 2008). Az OTR eloszlásáról korlátozott információ áll rendelkezésre, és az emberi agyban az OTR-sűrűség egyéni változásairól semmi sem ismert. Eredményeink arra utalnak, hogy az OTR-sűrűség változása bizonyos agyi régiókban hozzájárulhat az emberek társadalmi kognitív funkcióinak egyedi különbségeihez.
Köszönetnyilvánítás
A szerzők szeretnék köszönetet mondani Lorra Mathewsnak a kitűnő munkájáért, amellyel irányíttattuk a kocka kolóniát. Ezt a tanulmányt az NIH támogatta az MH064692-nak az LJY-nek, az RR00165-nak a Yerkes Nemzeti Primátumok Kutatóközpontjának és az NSF STC IBN-9876754-nek.
REFERENCIÁK
- Bálák KL, Carter CS. Az oxitocin szexuális különbségei és fejlődési hatásai a prérikus völgyek agressziójára és társadalmi viselkedésére (Microtus ochrogaster) Horm Behav. 2003; 44: 178-184. [PubMed]
- KL bálák, van Westerhuyzen JA, Lewis-Reese AD, Grotte ND, Lanter JA, Carter CS. Az oxitocin dózisfüggő fejlődési hatást fejt ki a páros kötésen és az alloparentalis gondozáson a női prérikus völgyekben. Horm Behav. 2007; 52: 274-279. [PMC ingyenes cikk] [PubMed]
- Curtis JT, Wang Z. Ventral tegmental terület bevonása páros kötésbe a férfi préri köpenyekben. Physiol Behav. 2005a; 86: 338-346. [PubMed]
- Curtis JT, Wang Z. Glükokortikoid receptor részvétele a páros kötésben női prériai köpenyekben: az akut blokád és a központi dopamin jutalmakkal való kölcsönhatások hatása. Neuroscience. 2005b; 134: 369-376. [PubMed]
- Dantzer R, Bluthe RM, Koob GF, Le Moal M. A szociális memória modulálása a patkányok patkányaiban neurohypophyseal peptidekkel. Pszichofarmakológia (Berl) 1987: 91: 363 – 368. [PubMed]
- Domes G, Heinrichs M, Michel A, Berger C, Herpertz SC. Az oxitocin javítja az „elme-olvasást” az emberekben. Biol Psychiatry. 2007; 61: 731-733. [PubMed]
- Ferguson JN, Aldag JM, Insel TR, Young LJ. Az oxitocin a mediális amygdala-ban elengedhetetlen az egér társadalmi felismeréséhez. J Neurosci. 2001; 21: 8278-8285. [PubMed]
- Gingrich B, Liu Y, Cascio C, Wang Z, Insel TR. A dopamin D2 receptorok a nukleáris accumbensben fontosak a női prérikus völgyek társadalmi kötődéséhez (Microtus ochrogaster) Behav Neurosci. 2000; 114: 173-183. [PubMed]
- Gruderadams S, Getz LL. A párosító rendszer és az apai viselkedés összehasonlítása Microtus ochrogaster és a Microtus pennsylvanicus. Journal of Mammalogy. 1985; 66: 165-167.
- Guastella AJ, Mitchell PB, Dadds MR. Az oxitocin növeli a tekintetet az emberi arcok szemterületére. Biol Psychiatry. 2008; 63: 3-5. [PubMed]
- Hollander E, Bartz J, Chaplin W, Phillips A, Sumner J, Soorya L, Anagnostou E, Wasserman S. Oxytocin növeli a társadalmi megismerés autizmusban való megtartását. Biol Psychiatry. 2007; 61: 498-503. [PubMed]
- Insel TR, Shapiro LE. Az oxitocinreceptor eloszlása tükrözi a monogamás és poligámos vulkánok társadalmi szervezetét. Proc Natl Acad Sci US A. 1992, 89: 5981 – 5985. [PMC ingyenes cikk] [PubMed]
- Insel TR, Gelhard R, Shapiro LE. A neurohypophysealis peptidek előtér előtti receptorainak összehasonlító eloszlása monogamikus és poligámos egerekben. Neuroscience. 1991; 43: 623-630. [PubMed]
- Jacob S, Brune CW, Carter CS, Leventhal BL, Lord C, Cook EH., Jr Association az oxitocin receptor gén (OXTR) a kaukázusi gyermekek és autizmusos serdülők számára. Neurosci Lett. 2007; 417: 6-9. [PMC ingyenes cikk] [PubMed]
- Kavaliers M, Colwell DD, Choleris E, Agmo A, Muglia LJ, Ogawa S, Pfaff DW. A parazitizált hím szagok diszkriminációjának és elriasztásának csökkentése női oxitocin knockout egerekkel. Gének Behav. 2003; 2: 220-230. [PubMed]
- Kendrick KM. Oxitocin, anyaság és kötés. Exp Physiol. 2000; 85 (Spec No.): 111S – 124S. [PubMed]
- Kendrick KM, Keverne EB, Baldwin BA, Sharman DF. Az acetilkolinészteráz, a monoaminok és az oxitocin cerebrospinális folyadékszintje a munka, a szülés, a vaginocervikális stimuláció, a bárány szétválasztása és a juhok szoptatása során. Neuroendokrinológia. 1986; 44: 149-156. [PubMed]
- Kosfeld M, Heinrichs M, Zak PJ, Fischbacher U, Fehr E. Az oxitocin növeli az emberek iránti bizalmat. Természet. 2005; 435: 673-676. [PubMed]
- Lerer E, Levi S, Salomon S, Darvasi A, Yirmiya N, Ebstein RP. Az oxitocin receptor (OXTR) gén és az autizmus közötti kapcsolat: kapcsolat a Vineland adaptív viselkedési skálaival és a kognícióval. Mol Psychiatry. 2007 [PubMed]
- Lim MM, Fiatal LJ. Vasopresszin-függő neurális áramkörök, amelyek a párkötés kialakulását képezik a monogámi préri vole-ban. Neuroscience. 2004; 125: 35-45. [PubMed]
- Lim MM, Wang Z, Olazabal DE, Ren X, Terwilliger EF, Young LJ. Az egyik gén expressziójának manipulálásával fokozott partner preferenciát jelenthet egy szokatlan fajban. Természet. 2004; 429: 754-757. [PubMed]
- Lim MM, Liu Y, Ryabinin AE, Bai Y, Wang Z, Young LJ. A CRF receptorok a nukleáris sejtekben a partneri preferenciát modulálják a prériai völgyekben. Horm Behav. 2007; 51: 508-515. [PMC ingyenes cikk] [PubMed]
- Liu Y, Wang ZX. A Nucleus accumbens oxitocin és a dopamin kölcsönhatásba lép a páros kötésképzés szabályozásában a női prérikus völgyekben. Neuroscience. 2003; 121: 537-544. [PubMed]
- Lonstein JS, De Vries GJ. A nemi különbségek a felnőtt szűz préri-szülők szülői viselkedésében: a nemi hormonoktól és a vazopresszintól való függetlenség. J Neuroendocrinol. 1999; 11: 441-449. [PubMed]
- Lonstein JS, De Vries GJ. A nemi hormonok hatása a szülői viselkedés kialakulására felnőtt szűz prérikus völgyekben (Microtus ochrogaster) Behav Brain Res. 2000; 114: 79-87. [PubMed]
- Olazabal DE, Young LJ. A „spontán” anyai viselkedés változékonysága szorongásszerű viselkedéssel és a naiv fiatalok és a felnőtt női préri köpenyekkel való kapcsolatban áll (Microtus ochrogaster) Dev Psychobiol. 2005; 47: 166-178. [PubMed]
- Olazabal DE, Young LJ. A fajta és az egyedülálló különbségek a fiatalkori alloparentalis ellátásban oxitocin receptor sűrűséggel járnak a striatumban és az oldalsó septumban. Horm Behav. 2006a; 49: 681-687. [PubMed]
- Olazabal DE, Young LJ. A nukleáris accumbensben lévő oxitocin receptorok elősegítik a „spontán” anyai viselkedést a felnőtt női préri völgyekben. Neuroscience. 2006b; 141: 559-568. [PubMed]
- Paxinos G, Watson C. A patkány agya sztereotaxikus koordinátákban. negyedik kiadás Academic Press; San Diego, CA: 1998.
- Pitkow LJ, Sharer CA, Ren X, Insel TR, Terwilliger EF, Young LJ. Az asszociáció megkönnyítése és a páros kötés kialakítása a vazopresszin receptor gén transzferjével egy monogámió üregének ventrális előtérébe. J Neurosci. 2001; 21: 7392-7396. [PubMed]
- Roberts RL, Zullo A, Gustafson EA, Carter CS. A perinatális szteroid kezelések megváltoztatják a prairie völgyekben az alloparentalis és affiliatív viselkedést. Horm Behav. 1996; 30: 576-582. [PubMed]
- Roberts RL, Williams JR, Wang AK, Carter CS. Szövetkezeti tenyésztés és monogámia a prériai kövekben: A testvér és a földrajzi változás hatása. Anim Behav. 1998; 55: 1131-1140. [PubMed]
- Sansone GR, Gerdes CA, Steinman JL, Winslow JT, Ottenweller JE, Komisaruk BR, Insel TR. A vaginocervikális stimuláció patkányokban felszabadítja az oxitocint a gerincvelőben. Neuroendokrinológia. 2002; 75: 306-315. [PubMed]
- Savaskan E, Ehrhardt R, Schulz A, Walter M, Schachinger H. A tanulás utáni intranazális oxitocin modulálja az emberi emléket az arcazonosságra. Psychoneuroendocrinology. 2008; 33: 368-374. [PubMed]
- Smeltzer MD, Curtis JT, Aragona BJ, Wang Z. Dopamin, oxitocin és vazopresszin receptor kötődés a monogámos és a nemkívánatos kövek mediális prefrontális kéregében. Neurosci Lett. 2006; 394: 146-151. [PubMed]
- Wang Z, Young LJ. Az oxitocin és a vazopresszin receptorok kötődése a préri és a montane voles oldalsó septumjában. Brain Res Dev Brain Res. 1997; 104: 191-195. [PubMed]
- Wang Z, Ferris CF, De Vries GJ. A szeptális vazopresszin-beidegzés szerepe az apai viselkedésben préri-völgyekben (Microtus ochrogaster) Proc Natl Acad Sci US A. 1994, 91: 400 – 404. [PMC ingyenes cikk] [PubMed]
- Williams JR, Catania KC, Carter CS. A partneri preferenciák fejlesztése a női prérikus völgyekben (Microtus ochrogaster): a társadalmi és szexuális élmény szerepe. Horm Behav. 1992; 26: 339-349. [PubMed]
- Winslow JT, Hastings N, Carter CS, Harbaugh CR, Insel TR. A központi vazopresszin szerepe a monogámos préri köpenyek páros kötésében. Természet. 1993; 365: 545-548. [PubMed]
- Wu S, Jia M, Ruan Y, Liu J, Guo Y, Shuang M, Gong X, Zhang Y, Yang X, Zhang D. Az oxitocin receptor gén (OXTR) pozitív összefüggése az autizmussal a kínai Han populációban. Biol Psychiatry. 2005; 58: 74-77. [PubMed]
- Fiatal LJ. Frank A. Beach díj. Oxitocin és vazopresszin receptorok és faj-tipikus társadalmi viselkedés. Horm Behav. 1999; 36: 212-221. [PubMed]
- Fiatal LJ, Wang Z. A páros kötés neurobiológiája. Nat Neurosci. 2004; 7: 1048-1054. [PubMed]
- Fiatal LJ, Lim MM, Gingrich B, Insel TR. A társadalmi kötődés sejtes mechanizmusai. Horm Behav. 2001; 40: 133-138. [PubMed]
- Fiatal LJ, Huot B, Nilsen R, Wang Z, Insel TR. A központi oxitocin receptor gén expressziójának fajtaválasztása: a promoter szekvenciák összehasonlító elemzése. J Neuroendocrinol. 1996; 8: 777-783. [PubMed]
- Yrigollen CM, Han SS, Kochetkova A, Babitz T, Chang JT, Volkmar FR, Leckman JF, Grigorenko EL. Az autizmus jelöltgéneként affiliatív viselkedést szabályozó gének. Biol Psychiatry. 2008; 63: 911-916. [PMC ingyenes cikk] [PubMed]