Első pszichiátria. 2014; 5: 170.
Megjelent online 2014 Dec 8. doi: 10.3389 / fpsyt.2014.00170
PMCID: PMC4258993
Laurence Lalanne,1,2,† Gulebru Ayranci,1,3,† Brigitte L. Kieffer,3 és a Pierre-Eric Lutz3,*
Absztrakt
A komorbiditás a pszichiátria egyik fő problémája, amely elsősorban súlyosabb tünetekkel, hosszabb betegség időtartammal és magasabb szolgáltatási hasznosítással társult. Ezért a komorbiditás kulcsfontosságú csoportjainak azonosítása és az alapul szolgáló patofiziológiai mechanizmusok feltárása fontos lépéseket tesz a mentális egészségügyi ellátás javítása felé. A jelen felülvizsgálat során a függőség és a depresszió közötti gyakori kapcsolatra összpontosítunk. Összefoglaljuk a preklinikai modellek nagyszámú bizonyítékát, amelyek azt mutatják, hogy a kappa opioid receptor (KOR), az opioid neuromoduláló rendszer tagja, központi szerepet játszik a jutalom és a hangulati folyamatok szabályozásában. A jelenlegi adatok arra utalnak, hogy a KOR modulálja az átfedő neuronális hálózatokat, amelyek összekapcsolják az agytörzsi monoaminerg magokat az előtér limbikus szerkezeteivel. Mind a visszaélések, mind a természetes ingerek gyógyszereinek és a stresszes élmények neurobiológiai hatásainak jutalmazása erősen kölcsönhatásban áll a KOR jelzés szintjén. A függőségi modellekben a KOR aktivitását a stresszorok erősítik, és kritikusan ellenőrzik a kábítószer-keresést és a visszaesést. A depressziós paradigmákban a KOR jelzés számos stresszhatásra reagál, és a kétségbeeséshez hasonló válaszokat közvetít. Összességében a KOR a komorbiditás prototípusos szubsztrátját képezi, melynek során az élettapasztalatok a közös agyi mechanizmusokhoz kapcsolódnak, hogy a viselkedési diszregulációt kiváltják és fokozzák a különálló, de kölcsönhatásba lépő pszichopatológiák kockázatát.
Bevezetés
A függőség és a depresszió krónikus recidiváló rendellenességek, amelyek pusztító következményekkel járnak az egyénekre és a társadalmi környezetükre (1). A kábítószerekkel való visszaélés krónikus expozíciója, valamint ezeknek a gyógyszereknek a tartós tartózkodása erősen összefügg az alacsonyabb hangulattal és a negatív affektív állapotmal. Ezzel ellentétben, egyeseknél a depressziós hangulat erőteljesen vezeti az eufórikus pszichoaktív anyagok fogyasztását, amit öngyógyításnak neveznek. Ennek megfelelően a járványügyi vizsgálatok egyértelműen bizonyították a függőség és a depresszió közötti komorbiditást (2, 3). Ez a komorbiditás nagyobb funkcionális fogyatékossággal, hosszabb betegség időtartammal, kevesebb társadalmi kompetenciával és magasabb szolgáltatási hasznosítással jár. Ezért a komorbiditás mögötti patofiziológiai mechanizmusok megértése fontos terápiás következményekkel jár.
A jelen áttekintés számos olyan bizonyítéksorot tárgyal, amely felhalmozódott a kappa opioid receptor (KOR) fontos szubsztrátjának dokumentálására az addiktív és depressziós rendellenességek között. A KOR az opioid rendszerhez tartozik, amely a központi és a perifériás idegrendszerben széles körben kifejezett neuromoduláló rendszer. Az opioid rendszer három G-fehérjéhez kapcsolt opioid receptorból áll: mu (MOR), delta (DOR) és kappa (KOR), amelyek élettani körülmények között aktiválódnak az endogén peptidek családjával a neuronális aktivitás gátlására. Az opioid peptidek közül a dinorfinok (amelyeket a. \ T Pdyn gén) elsődlegesen aktiválja a KOR-t, és nagyon alacsony affinitással rendelkezik a MOR-ra vagy a DOR-ra. Ezzel szemben a többi opioid peptid (endorfin és enkefalin) rosszul kölcsönhatásba lép a KOR-val. Ezért a dynorphin / KOR jelátviteli út külön eljárást képez az opioid rendszeren belül.4, 5).
Az opioid receptorok szigorúan szabályozzák a motivációs folyamatokat, és fontos szereplőként azonosítják azokat a pszichiátriai rendellenességeket, amelyekre jutalomfunkció, például függőség és depresszió jellemez.6, 7). Számos kimerítő értékelés a közelmúltban összegezte a MOR és a DOR szerepét ezekben a betegségekben, és szükség esetén röviden megemlíti őket.6, 8-11). Célunk, hogy történelmi és neuro-anatómiai szempontból biztosítsuk az olvasó számára, hogy hol, mikor és hogyan kapják a KOR-kat a függőség és a stresszel kapcsolatos pszichopatológia rágcsáló modelljeiben (12-16). Először is összefoglaljuk, hogy a KOR fokozatosan jöjjön létre a dysphoria-t kódoló anti-jutalmazási rendszerként, és korlátozza a kábítószerek motivációs tulajdonságait. Másodszor, megmutatjuk, hogy a KOR-t a stresszes élmények során felveszik és aktiválják, ezáltal hozzájárulva a depressziós állapotok kialakulásához (10, 17, 18). Végül megvitatjuk két fő szempontját, hogy a KOR függőségében, a stresszel kapcsolatos viselkedésben és a depresszióban ezek a szerepek fontosak a komorbiditás megértéséhez. Egyrészt megmutatjuk, hogy a stressz által indukált KOR jelzés felvétele a kábítószer-kereső és a visszaeső viselkedések erős kiváltója. Másrészről összefoglaljuk a KOR funkcióval kapcsolatos adatokat a depresszív viselkedés konkrét kontextusában, amely a kábítószerrel való visszaélés krónikus expozíciója során jelentkezik, valamint a gyógyszer absztinenciája során (19-21).
A komorbiditás patofiziológiai szubsztrátaként a KOR ígéretes farmakológiai célt jelent (10, 18). A klinikai vizsgálatok jelenleg a KOR-antagonisták depresszió kezelésére történő értékelésére szolgálnak.22), különösen az addiktív depressziós állapotban szenvedő betegek összefüggésében (23, 24). A rágcsálókon végzett vizsgálatok alapján megvitatjuk a KOR-t célzó terápiás stratégiák lehetőségeit.
Kappa opioid receptor: Anti-Reward, Dysphoric System
A KOR-farmakológia iránti érdeklődés történetileg abból a reményből ered, hogy olyan fájdalomcsillapító vegyületeket alakítanak ki, amelyek nem rendelkeznek a MOR-agonisták, például a morfin klasszikus visszaélési potenciáljával. Sajnos a kor agonisták tulajdonságait feltáró korai humán tanulmányok erős dysphorikus és pszichomimetikus hatásokat jelentettek (25, 26). Bár ezek az eredmények egyértelműen csökkentették a KOR terápiás potenciálját a fájdalom kezelésében, ugyanakkor a preklinikai kutatókat is felkérték, hogy vizsgálják meg ezeket az érdekes diszforikus hatásokat.
Ismert, hogy a MOR aktiválása emberi eufóriát indukál, és állati modellekben megerősítést eredményez. Ezért a kutatók feltételezték, hogy a MOR és KOR ellentétes hatással lehet a motivációs folyamatok szabályozására, potenciálisan a közös neuronális útvonalak modulálásával. Ezt a keretrendszert először a kondicionált helypreferencia (CPP) vagy a kondicionált helymegelőzés (CPA) segítségével vizsgálták. Ebben a Pavloviai kondicionáló paradigmában a gyógyszert többször párosítják egy olyan környezeti ingerekkel, amelyek fokozatosan pozitív (CPP) vagy negatív (CPA) motivációs tulajdonságokat szereznek. Az ismétlődő kondicionálást követően az állat a környezeti ingerekre (a gyógyszer hiányában) való ismételt expozícióra, vagyis a tanulás, a motivációs és a hedonikus mechanizmusoktól függő viselkedésre utal. A Shippenberg és Hertz patkányvizsgálata (27) arról számoltak be, hogy a KOR-agonista hipotézisszerű szisztémás beadása esetén U69593 vagy morfin ellentétes hatásokat eredményezett, illetve CPA-t és CPP-t termelt. Míg a morfin által indukált CPP a megerősítő tulajdonságait tükrözi, a KOR-indukált CPA azt sugallta, hogy ez a receptor egy jutalomellenes mechanizmus, amely hozzájárul a motiváció és a hedonikus hang kétirányú szabályozásához.
A következő lépés a mögöttes neurokémiai szubsztrátok vizsgálata volt, a korai tanulmányok segítségével feltárva, hogy a KOR hogyan szabályozhatja a mezolimbikus útvonalat (ábra). (Figure1) .1). Ez az út dopaminerg (DA) neuronokból áll, amelyek a középső agyi ventrális tegmentális területen (VTA) találhatók, és az előtér-limbikus struktúrákra, köztük a ventrális striatumra [vagy a nucleus accumbens (NAc)] és a prefrontális kéregre (PFC). Az állati és emberi adatok egyértelműen kimutatták, hogy a kábítószer-függőség (és a hangulati rendellenességek, lásd 2 rész) az agy DA jutalmi áramkörének jelentős zavaraihoz kapcsolódnak (28), amely általában a környezeti ingerek és a természeti jutalmak jelentőségének előrejelzésére és kódolására szolgál. A mostani klasszikus „egységes” elmélet a függőségben azt feltételezi, hogy a visszaélések fokozatosan fokozzák a DA átvitelét a NAc-ben, ami a nyereséges tulajdonságaik központi eleme.29). Ezen a vonalon belül számos tanulmány következetesen kimutatta, hogy a morfin akut erősítő hatásai a dezinhibálásra, azaz a DA neuronok aktiválására támaszkodnak. Ezt a gátlást a GABAerg interneuronok által kifejezett MOR aktiválása jelenti, amely főként a VTA [VTA vagy RMTg, lásd a Ref. (30, 31)], hanem a VTA és a NAc (32). Ezzel ellentétben a csökkentett DA jelátvitel feltételezhető, hogy felelős a KOR-közvetített averzió kódolásáért. A mikrodialízis, a Spanagel és a kollégák (33) kimutatták, hogy a DA felszabadulást a NAc-ben csökkentette egy KOR agonista infúziója a NAc-be, de nem a VTA-ba (a jelen áttekintésben tárgyalt minden vizsgálatban alkalmazott farmakológiai szerek a táblázatban vannak összefoglalva) Tables11-3). Ezen túlmenően, egy KOR-antagonista (nem-BNI) infúziója a NAc-hez fokozta a DA felszabadulást, ami arra utal, hogy a dinorfinok tonikusan csökkentik a DA neurotranszmissziót ebben a régióban. A leginkább kényszerítő bizonyíték, amely a DA-idegsejteket a KOR-indukált elszántságra utalta, nemrégiben jött létre (12) a géntechnológiával módosított egerek használatából a Cre-lox rekombinációs rendszer \ t34). Bals-Kubik és mtsai. kihasználta a Cre-rekombinázt expresszáló knockin egeret a DA transzporter endogén promoterének [DAT, a DA neuronok specifikus markerei] transzkripciós kontrollja alatt.35)]. Ezeket az egereket egy másik knockin egérrel tenyésztettük, amely feltételes „floxed” KOR allélt tartalmazott, és így elérte a KOR specifikus delécióját DA neuronokban (DAT KOR-cKO). Viselkedési szinten a KOR-indukált CPA eltűnt a DAT KOR-cKO egerekben, és a VTA-ban vírusilag közvetített KOR-expresszióval visszaállt.12).
Ezzel párhuzamosan a kutatók elkezdték az agyra kiterjedő elemzést azokról a régiókról, ahol a KOR felvétele potenciálisan kódolhatja az ellenséget. A helyi KOR aktiváció hatását több területen értékelték a CPA paradigmával (49). Az U50,488H KOR agonista infúziója az NAc-ben elegendő volt egy robusztus CPA indukálásához, összhangban azzal a meggyőződéssel, hogy a KOR aktiválása ebben a régióban csökkenti a DA felszabadulást. Meglepő módon a PFC-ben, az oldalsó hipotalamuszban és a VTA-ban (de nem a nigra és dorsalis striatumban) az infúziók hasonló hatással voltak, ami arra utal, hogy több KOR-medence szabályozhatja a motivációt és a hedonikus hangot. Ezek az eredmények azt is jelzik, hogy a VTA KOR aktiválása a NAA DA felszabadulásában bekövetkező változás hiányában CPA-t vált ki [lásd a fent említett neurokémiai adatokat (33)], ami azt jelenti, hogy egy másik, a DA beidegződésben részesülő agyrégió (azaz a PFC, lásd alább) vesz részt. A DA transzmisszió szabályozása mellett a KOR-expresszió és -funkció jelenleg számos más agyi régióban van vizsgálva, a juttatás és a hangulat szempontjából releváns rágcsáló-vizsgálatokat alkalmazva [pl. A stria terminalis ágymagja, BNST, amygdala, locus coeruleus (LC), lásd lentebb].
A következő fontos cél az volt, hogy azonosítsuk, hogy melyik neuronális sejttípusokat szabályozza a KOR. Elektronmikroszkópos megközelítések (50, 51) megállapította, hogy a NAc-ben a KOR-immunreaktív axonok fele is kifejezte a DAT-t. Érdekes, hogy ez a tanulmány megállapította, hogy ezeknek a KOR-immunreaktív axonoknak csaknem egyharmada (29%) volt DAT-negatív, de kapcsolatba lépett a DAT-pozitív neuronok pre-szinaptikus termináljaival, ami arra utal, hogy a mezolimbikus útvonalat a NAc szintjén szabályozzák a KOR-t expresszáló afferens neuronok. A legfrissebb bizonyítékok alapján (16) valószínű, hogy a nem-DAergiai KOR-pozitív neuronok legalább részben szerotoninergek (5-HT). Lehetséges, hogy az 5-HT neuronok által expresszált KOR-ok közvetíthetik a DA / 5-HT áthidalását a NAc-ben, és olyan mechanizmust képviselnek, amely hozzájárul a hangulat és a jutalom, valamint a függőség és a depresszió közötti kölcsönhatásokhoz (lásd alább). Az NAc szintjén (52) is bizonyíték van a glutamát felszabadulás KOR-függő modulációjára, ami arra utal, hogy ezt a receptort a glutamatergikus kortikális neuronok szinaptikusan expresszálhatják, amelyek sűrűen beidegzik a NAc-t. Tudomásunk szerint az utóbbi KOR-pool viselkedési jelentősége nem foglalkozik. Végül a PFC-ben (53), a KOR elsősorban szinaptikus terminálokon található, amelyek valószínűleg megfelelnek a DAerg-bemeneteknek, bár ezen neuronok neurokémiai identitását nem értékelték.
Más kutatók elektrofiziológiát és immunhisztokémiát alkalmaztak a KOR-t expresszáló neuronok azonosítására. KOR-szelektív agonista alkalmazása a VTA-ban a neuronok egy alcsoportjának spontán tüzelési aktivitásának csökkenése (54). Ez a KOR-közvetített gátlás csak DA-sejtekben jelentkezett, amint azt a tirozin-hidroxiláz immunreaktivitása (a DA-szintézis sebességkorlátozó enzimje és a DA neuronok egy másik markerje) jelzi. Ezután az elektrofiziológiát, a retrográd nyomkövetést és a mikrodialízist kombináltuk annak megállapítására, hogy a NA-ra vagy a PFC-re vetítendő DA neuronok differenciálisan szabályozódnak-e a KOR által (55). Ezek az elegáns kísérletek azt mutatták, hogy a helyi KOR aktiváció a VTA hiperpolarizált PFC-célzó DA neuronokban, de nem befolyásolta a NAc-célzó DA neuronokat. Ennek megfelelően a DA felszabadulást csökkentettük a PFC-ben, de nem a NAc-ben, VTA KOR aktiválása után.
Összességében ezek az eredmények összhangban vannak a korábbi CPA- és mikrodialízis-vizsgálatokkal, és olyan modellt javasolnak, amely szerint a VTA KOR-k nem szabályozzák a NAc DA-tónust, hanem modulálják a DA-felszabadulást a PFC-ben, hogy CPA-t állítsanak elő. A korábban leírt DAT KOR-cKO egerek az utóbbi hipotézisre vonatkozóan erős bizonyítékot szolgáltattak. Tejeda és mtsai. megállapította, hogy a KOR-agonista infúziója a PFC-ben csökkent DA-túlcsordulásnál vad típusú (WT), de nem a DAT KOR-cKO egerekben (13), megerősítve a PFC-ben a DA-átvitel KOR-közvetített vezérlését. Fontos, hogy a szerzők ezt követően közvetlenül tesztelték a PFC KORs viselkedési jelentőségét a patkányok dysphoria esetében. A KOR-antagonista infúziója a PFC-be elegendő volt a KOR-agonista által kiváltott CPA-nak megakadályozására, egyértelműen azonosítva a limbikus kéreget, mint a viselkedési hatás szükséges szubsztrátját.
Ezekből a különböző módszertani megközelítésekből származó eredmények azt is sugallják, hogy a NAc-kivetítő DA neuronok KOR-t expresszálnak a szinaptikus terminálokban, de nem a soma és a dendritek esetében.33), míg a PFC-vetítő DA neuronok KOR-t fejeznek ki mindkét rekeszben (13, 54, 55) (1. ábra) (Figure1) .1). Molekuláris szinten jelenleg nem ismert, hogy a DA neuronok hogyan befolyásolhatják a KOR-emberkereskedelmet a különálló sejtrészekre vetítési céljuk függvényében. Feltételezzük, hogy az elektrofiziológiai visszacsatolás típusa (az agykéreg ingerlése a striatum közepes tüskés neuronoktól), amelyet az egyes régiók a VTA-nak biztosítanak. Alternatív megoldásként a sejt-autonóm folyamatok is részt vehetnek, a NAc- és PFC-vetítő DA-neuronokban különböző transzkriptomikus profilok vezetnek, amelyek megkülönböztethető KOR-poszt-transzlációs módosításokat és kereskedelmet eredményeznek. Az utóbbi hipotézis kísérletezésére a technológiai fejlődés lehetővé teszi a kutatók számára, hogy megkülönböztessék a transzkriptomokat a közös sejttestet megosztó neuronális populációktól, de különféle vetületekkel (56). Alternatív módon, a retrográd nyomkövetés összekapcsolható az opioid receptorokat expresszáló knockin riporter egerekkel fluoreszcens fehérjékkel való fúzióban [ilyen egerek jelenleg rendelkezésre állnak mu és delta, de nem kappa, opioid receptorok számára (57, 58)].
A dinorphin / KOR útvonalának a DA neurotranszmisszió és a CPA aktivitása nyilvánvaló következményekkel jár a függőséggel kapcsolatos viselkedésekre, amint azt az önadagolási paradigmákkal való visszaélés különböző gyógyszereiben megfigyelték [lásd a Ref. (59) kimerítő felülvizsgálatra]. A KOR agonisták dózisfüggő mértékben csökkentik a morfin önadagolását patkányokban és egerekben (60, 61). A KOR-aktiváció hasonló gátló hatását találtuk az etanolra (62-64), kokain (61, 65-68), nikotin (69) és a kannabisz (70), és ezek a csökkentett gyógyszer által kiváltott DA-felszabaduláshoz kapcsolódtak (például a kokain, lásd a \ t71); etanol, lásd a Ref. (72)). Globálisan ezek az eredmények megbízható bizonyítékot szolgáltatnak a KOR gátló hatására a kábítószerrel való visszaélések gyógyító hatásaira, és a közelmúltbeli eredmények arra utalnak, hogy a természetes jutalmak, mint például a társadalmi kölcsönhatások is érintettek lehetnek. A prérikus kövekben, egy monogámos rágcsálófajban a páros kötések fenntartása az agresszív viselkedés kifejeződésére támaszkodik az új konspektusok felé. Érdekes, hogy a „társadalmi elképzelések” ilyen formáját a KOR jelzéssel közvetítették a NAc-n belül (73). A rágcsálókban a társadalmi játék egy olyan nagymértékben tanulmányozott, természetben előforduló viselkedést jelent, amely DA neuronokat toboroz és erős megerősítést vált ki. A KOR szisztémás aktiválása mindkét patkányban csökkentette a társadalmi játékot (74, 75) és egerek (76). Ezek az eredmények a humán depresszió megértése szempontjából fontosak, vagy a mindennapi élet ingerének (beleértve a társadalmi interakciókat) jutalmazó tulajdonságainak megváltozott megítélése is. Ezért, míg a DA és a jutalmak KOR-függő modulációja kezdetben a függőség paradigmákban fogalmazták meg és feltárták, most már nyilvánvalóvá válik, hogy erősen befolyásolja a hangulati zavarokat is.17, 18). A CPA számos neurobiológiai mechanizmus kölcsönhatását tükrözi, amely három pszichológiai konstrukciónak felel meg: tanulás, motiváció és hedónia. Az intra-cranialis önstimuláció (ICSS) egy másik paradigma, amely ezeket a három szempontot értékeli: ebben az operáns kondicionálásban az állatok megtanulják, hogy önállóan adjanak be rövid elektromos impulzusokat meghatározott agyi régiókba (általában a mediális előtér-köteg (77)). A KOR szisztémás aktiválását úgy találtuk, hogy az ICSS-ben anhedonikus állapotot indukál, amint azt a megnövekedett stimulációs küszöb jelzi (78). Az utóbbi munkában a stimulációs elektródát az oldalsó hipotalamuszba helyeztük, ami megerősítette a korai, a NA-n kívül előforduló, a KOR-függő szabályozást.49). Továbbá Potter és munkatársai tanulmányozták a KOR agonista által indukált ICSS moduláció kinetikáját akut és ismételt injekciók után (79). A KOR-agonista Salvinorin-A megnövelte a stimulációs küszöböt, és ez az akut hatás 8-napi periódus alatt napi injekciókkal fennmaradt. Érdekes, hogy az ismételt injekciók késleltetett és ellentétes hatást váltottak ki, amint azt az ICN-stimuláció küszöbértéke az injekció utáni 24 h csökkenése is mutatja, ami arra utal, hogy az ellenfél folyamatai (80, 81) kifejlesztett.
A hipotalamusz KOR aktivitását DA átvitellel és jutalommal összekapcsoló neuronális útvonalat rosszul vizsgálták. Legutóbbi elegáns adatok elektronmikroszkóppal, elektrofiziológiával, ICSS-vel és kokain önadagolással (47, 48) az orexin és a dinamorfin peptiderg rendszerek közötti antagonista kölcsönhatást sugallja. A hypocretin / orexin rendszer az oldalsó hipotalamuszból származó neuronokból áll, és több mesolimbikus struktúrára vetül ki (82). Fontos megjegyezni, hogy az orexin és a dynorphin együttes adóként hatnak a hypothalamus neuronjaiban (47): a két peptid együttesen lokalizálódik a szinaptikus vezikulákban, és együtt jön létre az elektromos hypothalamikus stimuláció során. A szerzők azt is kimutatták, hogy az orexin és a dynorphin a VTA-ban hat, hogy stimulálják és gátolják a DA neuronok ingerlékenységét, ezáltal két irányban modulálják a jutalmat (az ICSS kísérletekben) és a kokain önadagolását (és potenciálisan más visszaélésszerű gyógyszereket). ). A VTA-ban a legtöbb sejt (65%) mind az orexin, mind a dynorphin közös célpontja volt. Korábbi bizonyítékok alapján a jövőbeni kísérletek tesztelhetik azt a hipotézist, hogy a VTA DA neuronok mind a KOR, mind az orexin receptorokat kifejezően inkább a PFC-re, mint a NAc-re mutatnak.
Összességében a jutalom szabályozásában a KOR-függvényre vonatkozó adatok rávilágítanak a peptidek és a neurotranszmitterek teljes spektrumának értékelésére a mezolimbikus út és a kapcsolódó neuronális áramkörök mentén. Izgalmas törekvés lesz annak meghatározása, hogy ez a hálózat dinamikusan fejlődjön a krónikus kóros körülmények között.
Kappa Opioid Receptor: A depresszió patofiziológiájához kapcsolódó stresszrendszer
A jutalmakkal végzett vizsgálatokkal párhuzamosan a legfrissebb adatok azt mutatták, hogy a KOR ellenőrzi az érzelmi válaszokat is, különösen a stresszes tapasztalatok során. A rágcsálókkal végzett farmakológiai vizsgálatok azt mutatják, hogy a dynorphin / KOR rendszer szabályozza a hangulattal kapcsolatos viselkedést. Patkányokban a KOR-agonisták és antagonisták szisztémás beadása pro- és antidepresszáns-szerű hatásokat mutatott a kényszer úszás (FS) és a tanult tehetetlenség (LH) tesztekben [lásd Ref. (10, 41-45) felülvizsgálatra]. A CPA-vizsgálatokkal összhangban a szisztémás KOR-aktiváció csökkent a DA-felszabadulást ventrálisan (44, 83), dorzális (84, 85) és striatális régiók, míg egy KOR agonista helyi NAc injekciója a szisztémás kezelés prodepresszáns jellegű hatását imitálja (86). Ezek az adatok azt is megerősítik, hogy a KOR-függő DA-moduláció a hangulat- és a függőséggel kapcsolatos magatartásokban is szerepet játszik (28). Érdekes módon a KOR-tól függő prodepresszáns jellegű hatások nemek szerint módosíthatók (87) fontos szempont, mivel a depresszió prevalenciája magasabb a nőknél. Az ICSS használatával a szerzők megállapították, hogy a KOR agonista által kiváltott ICSS stimulációs küszöb magasabb volt a hímnél, mint a patkányoknál. Ez a hatás független volt a gonadális hormonok keringő szintjétől, és nem számolt be az agonista farmakokinetikájának nemi különbségéből. Inkább a KOR-agonista által kiváltott neuronális aktivációban a c-fos festéssel kimutatott nemek közötti különbségeket a BNST-ben és a PVN-ban találtuk, de nem az NAc-ben vagy az amygdala-ban. Ezért a mezolimbikus pályán kívül a hedonikus hang szex-specifikus KOR-függő szabályozása is előfordulhat a BNST és a PVN szintjén, két struktúrán, amely a stressz-válaszokat és az érzelmeket szabályozza.
A KOR-t célzó farmakológiai vizsgálatokkal együtt bizonyíték van arra is, hogy a dinamorfinok endogén tonikus szabályozást adnak a hangulattal kapcsolatos jellemzőknek (43, 88). A NAc-ben a DA D1-receptort expresszáló közepes tüskés neuronok ismertek, hogy a cAMP-válaszelem-kötő fehérje (CREB) szabályozása alatt szintetizálnak és szabadítanak fel dinorfint. Ennek megfelelően a prodinorfin szinteket csökkentettük a CREB domináns negatív formáját túlnyomó transzgenikus egerek NAc-ben. Ez a hatás az LH paradigmában a csökkent viselkedési kétségbeeséshez kapcsolódik. Következetesen egy közelmúltbeli tanulmány arról számolt be Pdyn leütés (vírusos expresszióval az anti-Pdyn rövid hajtű RNS) csökkentette a depresszív jellegű viselkedést az FS tesztben (46).
A kiindulási érzelmi válaszokon túl az adatok azt mutatják, hogy a dinamor / KOR rendszer aktivitását a stressz erősíti. Kimutatták, hogy az akut, de nem krónikus korlátozó stressz érzékenyíti a KOR-függő CPA-t (89). Továbbá, az FS stressz ismételt kitettsége prodepresszáns jellegű hatást váltott ki, amelyet a KOR antagonista és BNI blokkolt, és hiányzott Pdyn KO egerek (90). Kimutatták továbbá, hogy a dinamorfinok módosítják az ismétlődő stresszfüggő averzív kondicionálást (37). Azok az egerek, akik egy adott szagot FS-feszültséggel társítanak, erőteljesen elkerülték ezt a szagot. Ezt az elkerülő viselkedést nem figyelték meg Pdyn KO egereket, és WT egerekben blokkoltuk KOR-antagonistával történő előkezeléssel. Hasonlóképpen a WT egerekben a fotshocks-val párhuzamosan ismételten összefüggő környezet volt; de ismét ez a hatás hiányzott Pdyn KO egerek, és KOR antagonista előkezeléssel megakadályozták. Fontos, hogy a szerzők kimutatták, hogy a központi idegrendszerben a kortikotropin felszabadító faktor (CRF) felszabadulása valószínűleg az elsődleges esemény, amely a dinamor / KOR rendszer stressz által kiváltott toborzásáért felelős. Az eredmények azt mutatták, hogy a CRF szisztémás injekciója a foszfo-KOR-antitest segítségével kiderült, hogy a KOR-foszforiláció lépett fel. Továbbá a stressz által indukált CPA (a CRF vagy a CRF szisztémás vagy intracerebroventrikuláris injekciója utánozva)2-receptor agonista Urocortin III) hiányzott Pdyn KO egerek, és nem-BNI előkezeléssel blokkolták. A stressz-expozíció után több agyi struktúrában, köztük a bazolaterális amygdala, a hippocampus, a dorsalis raphe, a VTA és a NAc-ban azonosították a KOR-aktivációt és a foszforilációt. Összességében ezek az adatok azt mutatják, hogy a stressz viselkedésében tapasztalható diszforikus szempontok akkor mutatkoznak meg, amikor a CRF stimulálja a dinamorfin felszabadulását, ami KOR aktiválást eredményez (37).
A stressz egy komplex fiziológiai folyamat, amelynek elsődlegesen adaptív értéke van, de amely hosszantartó és túlzott stresszes tapasztalatok során kóros eseményeket okozhat. Nemrégiben a stressz és a KOR közötti kölcsönhatásokat vizsgálták kifinomultabb és etológiai szempontból releváns depressziós modellek alkalmazásával. A jellegzetes állatok közötti konfrontáció potenciálisan jelentős következményekkel járhat az erőforrások ellenőrzése, a társakhoz való hozzáférés és a társadalmi pozíciók tekintetében. Például a rezidens-behatoló társadalmi vereség paradigma (91) olyan naturalista modell, amelyre jellemző, hogy előre nem látható és elkerülhetetlen erőteljes agresszív kölcsönhatásokkal jár, ezáltal számos anhedonia-szerű tünetet okoz, mint például a szexuális törekvés csökkenése és a csökkent szacharóz-preferencia (52). McLaughlin és munkatársai elsőként mutatták be a dynorphins és KOR szerepét a társadalmi stressz hatásainak átültetésében (92). Az 3 napokon ismételt társadalmi vereségnek kitett egerek jellegzetes legyőzött posztális választ, valamint megnövekedett nociceptív küszöböt vagy stressz által kiváltott fájdalomcsillapítást mutattak (SIA, a farok visszavonási késleltetési vizsgálatban megfigyelt). Mindkét szempontot megakadályoztuk KOR-antagonistával előkezelt egerekben, vagy azok hiányában Pdyn gén. A társadalmi vereség modell másik fontos jellemzője, hogy hatásai magas egyénközi variabilitást mutatnak mind a patkányok, mind a beltenyésztett egerek között, így az állatok tipikusan érzékeny és rugalmas csoportokba oszthatók (93). Ezen a vonalon Bérubé et al. (94), a dinorfinok expressziós szintjei a NAc-ben különböznek a fogékony és rugalmas Sprague – Dawley patkányok között. Megnövekedett dinamorfin-mRNS-szinteket (qPCR-vel mérve) találtunk a fogékony patkányok ventrális striatumában (NAc héj, koherens a korábbi egéradatokkal), míg meglepően megnövekedett szinteket figyeltünk meg a rugalmas egyének dorsalis striatumában, ami arra utal, hogy a DA és A dynorphin és KOR hangulata a vártnál bonyolultabb lehet. A hipotézis további igazolásához további vizsgálatok szükségesek. Ezzel ellentétben, egy másik vizsgálat szerint a társadalomban legyőzött Long – Evans patkányok VTA-ban vagy NAc-ben nem változott a dinamorfinszintek.95). A két vizsgálat közötti eltérést az alkalmazott különböző törzsek magyarázhatják, vagy az utóbbi vizsgálatban a rugalmas és érzékeny Long-Evans patkányok közötti különbségtétel hiánya. Figyelemre méltó, Nocjar et al. (95) a legyőzött patkányok hypothalamusában a csökkent dinorfin-A, valamint az A és B orexinok csökkenését találtuk. Ezért a két antagonista peptid VTA DA neuronok aktivitásának kombinált szabályozása közvetítheti a vereség által kiváltott KOR-függő társadalmi elszenvedést, és károsodhat a társadalmi vereség után.
Korábban megvitattuk (1 rész), hogy a KOR hogyan jelenhet meg differenciális sejt lokalizációt a VTA DA neuronok két populációjában, amelyek a NAc-re vagy a PFC-re vetítenek. Egy újabb jelentés azt sugallja, hogy ez az anatómiai disszociáció releváns lehet a krónikus társadalmi vereség hatásainak megértéséhez. Chaudhury és munkatársai (96) kimutatta, hogy a VTA DA neuronok szelektív gátlása a NAc-hez vagy a PFC-hez viszonyítva kiváltotta a rugalmasságot vagy az ismételt társadalmi vereségre való hajlamot. Szelektív celluláris lokalizációjának köszönhetően kísértő, hogy feltételezzük, hogy a KOR közvetítheti a prodepresszáns-szerű tüneteket, amelyeket a VTA-PFC DA útvonal gátlása okoz.
A DAerg jelzés mellett az új eredmények arra utalnak, hogy az 5-HT transzmissziót a KOR is módosíthatja a depresszió stressz- és társadalmi vereség alapú modelljein. Elektrofiziológiai kísérletek (97, 98) kezdetben kimutatták, hogy a KOR szabályozza az 5-HT neuronokat a dorzális raphe mag (DRN) szintjén, amely egy fő 5-HT agy mag. Fontos, hogy a mentési kísérletek azt mutatták, hogy a KOR KO KOR-egerek DRN-jében a KOR szelektív újra-expressziója elegendő ahhoz, hogy helyreállítsa a NA-ban lévő KOR-agonista infúziójával indukált CPA-t (38). A korábbi eredményekkel együtt ezek az eredmények azt mutatják, hogy a PFC-ben lévő KOR és a DRN-ben jelenlévő neuronok által kifejezett KOR, amelyek a NAc-re irányulnak (amelyek valószínűleg 5-HT neuronok), szükségesek és elegendőek az expresszióhoz. a KOR agonista által kiváltott ellenérzés. Molekuláris szinten kimutatták, hogy az akut társadalmi vereség a KOR és a p38α kináz foszforilációját váltja ki a DRN-ben (14). A p38α felvétele az 5-HT neuronokban elengedhetetlen, mivel a vereség által kiváltott társadalmi elkerülés megszűnt a cKO egerekben, amelyekben a p38α-t kifejezetten törlik a szerotonin transzporter (SERT) expresszáló neuronokból (p38α-cKOSERT). A foszforilált p38α viszont elősegíti a SERT transzlokációját a plazmamembránba, ezáltal növelve az 5-HT újrafelvételt és valószínűleg közvetíti a társadalmi elkerülést. Elektrofiziológiai felvételek az agyszeletekben (40) azt is kimutatta, hogy a KOR-aktiválás két mechanizmuson keresztül csillapítja a DRN 5-HT neuronok ingerlékenységét: a glutamáterg bemenetek pre-szinaptikus gátlását és a G-fehérje által beágyazott káliumcsatornák (GIRK) posztszinaptikus stimulációját. Az FS-stressz ismételt expozíciója károsítja a KOR-aktiváció szinaptikus, de nem pre-szinaptikus hatását. Fontos, hogy a KOR-közvetített GIRK-áramok stressz által kiváltott gátlása megszűnt a p38α-cKO-banSERT egerekben. Végül a legfrissebb bizonyítékok arra utalnak, hogy a DA és az 5-HT neuronok KOR szabályozása az NAc szintjén konvergálódhat, hogy diszforikus és depresszív hatásokat hozzon létre. Az ismételt FS stressz szelektíven növelte a SERT sejtfelszíni expresszióját a ventrális striatumban, de nem más vizsgált régiókban (dorsalis striatum, hippocampus, PFC, amygdala vagy DRN). Ezt a stresszhatást a SERT-re a KOR jelzés farmakológiai blokádja akadályozta meg a NAc-ben, de nem a DRN-ben (16). Összességében úgy tűnik, hogy a stresszes élmények CRF-dinamor-KOR-p38α-GIRK jelátviteli kaszkádot hoznak létre a DRN 5-HT neuronokban, valamint a KOR-aktivációt a NAc-ben. Ezek a molekuláris adaptációk viszont a SERT-függvény felfelé történő szabályozásához vezetnek a NAc-ben, és végső soron a DA-funkciót befolyásolják, hogy viselkedési tüneteket hozzanak létre. Meg kell határozni, hogy hasonló DRN-jelzés is szerepet játszik-e a hosszabb ideig tartó hangulattal kapcsolatos hiányosságokban, különösen a visszaélésszerű kábítószer-expozíció összefüggésében (3 rész).
A 5-HT és DA áramkörök mellett a KOR-függő hangulatszabályozás egyéb lehetséges helyszínei közé tartozik többek között a hippokampális neurogenezis és a noradrenerg (NA) átvitel. Az egyik jelentés szerint a patkányokban a KOR antagonista és BNI antidepresszáns-szerű hatása (99) a hippocampusban, valamint más struktúrákban (pl. frontális kéreg, amygdala, hippocampus és endopiriform kéreg) társult, a BDNF mRNS szintjének növekedésével, a szinaptikus plaszticitást és neurogenezist szabályozó neurotróf faktorral. További tanulmányok szükségesek ahhoz, hogy jobban megértsük a KOR / BDNF kölcsönhatás relevanciáját.
Kappa opioid receptor a depresszió és a függőség felületén
Összefoglaljuk a KOR szerepét a jutalmazási folyamatok szabályozásában (1 rész), valamint a stressz-válaszok és az affektív állapotok (2 rész) modulációjában. Ezen adatok alapján számos csoport a közelmúltban feltárta, hogyan közvetítheti a KOR a függőség és a depresszió közötti kölcsönhatást. A két rendellenesség közötti kapcsolat valószínűleg kétirányú: a szenvedélybetegek szorongás vagy depressziós rendellenességek erős életveszélyt mutatnak, míg a depressziós betegek gyakran visszaélnek a gyógyszerekkel a depressziós tüneteik öngyógyítására. Mindkét szempontot jelenleg állatmodellekben kezelik.
A stresszérzékenység, a visszaesés és a depressziós tünetek kialakulása a rabszolgákban
A stressz által kiváltott visszaesés a függőség során
A CPP és a gyógyszer önadagolásának rágcsáló modelljeit széles körben alkalmazták a visszaesés különböző kiváltóinak vizsgálatára vagy a kábítószer-kereső viselkedés újraindítására. Az ismétlődő állapotok vagy a stabil gyógyszer önadagolás után az állatokat ismételten ismételten érintkeztetjük CPP vagy operáns kamrákkal gyógyszer nélkül, így a kábítószer-kereső és instrumentális válaszok már nem erősödnek és fokozatosan eltűnnek, egy folyamat, amelyet kihalásnak. Fontos megjegyezni, hogy a kihalás után a visszaesés a visszaélés (azaz „alapozás”) hatására bekövetkezhet a kábítószerrel való visszaélés (kábítószer-indukált visszaállítás), vagy egy akut stresszor hatására (stressz által kiváltott visszaállítás). Klasszikusan a stresszes élmények a depresszív megjelenés főbb kockázati tényezői.100) és addiktív (101) rendellenességek. Ezenkívül a visszaélés gyógyszerei fokozzák a stresszhatások neurobiológiai és viselkedési hatásait, amelyek viszont a rosszindulatú gyógyszerek hatását egy ördögi körben fokozhatják (lásd a CPP stressz által indukált visszaállítását) (102). Ezért a függőség és a stressz szorosan kölcsönhatásba lép, és a mögöttes neurobiológiai mechanizmusok olyan tényezőket képviselnek, amelyek hozzájárulnak a függőség és a stresszhez kapcsolódó pszichopatológia között.
A stresszhatásokban a KOR-t érintő rendelkezésre álló bizonyítékok alapján (2 rész) a kutatók tovább vizsgálták a receptor szerepét a stressz által indukált visszaállításban. Összességében az eredmények azt mutatják, hogy a KOR jelzés kritikusan közvetíti a stressz által kiváltott visszaállítást a különböző visszaélésekre. Patkányokban a KOR-antagonistával történő előkezelés (vagy JDTic vagy nor-BNI) szignifikánsan csökkentette a stressz által kiváltott (lábfej), de nem a kokain által kiváltott, a kokain önadagolását.41). Egerekben hasonló eredményeket kaptunk mind a stressz-, mind a hatóanyag-indukálta kokainkeresés visszaállítására egy CPP-vizsgálatban [egy új, szisztémásan aktív KOR-peptiderg antagonistával, rövid hatástartammal (103)]. Továbbá az akut vagy ismételt stressz expozíciója visszaállította a kokain CPP-t WT-ben, de nem KOR-ben vagy Pdyn KO egerek, vagy a farmakológiai KOR blokád (\ t104). A stressz és a KOR is kölcsönhatásba lép a kokain-kontextus asszociatív állapotok szintjén: a stressz klasszikusan ismert, hogy erősíti a kokain-CPP-t, és ezt a hatást a rendszer szisztémás KOR-aktiválása utánozza (105). Ezért a KOR a stressz / kokain interakciókat közvetíti a kezdeti gyógyszer expozíció során, valamint a kihalás után.
A kokainadatokkal összhangban a genetikai és farmakológiai megközelítések azt mutatták, hogy a stressz által indukált etanol-fogyasztás visszaállítása hasonlóan a dinamorfinra és KOR-re támaszkodik mind a CPP, mind az önadagolási paradigmákban (106). Ezek az eredmények alátámasztják azt az elképzelést, hogy a KOR egy addiktív szer a stressz expozíció során, ellentétben azzal, hogy gátló hatással van a kábítószerek hatóanyagainak akut erősítő tulajdonságaira (lásd 1). Amint azt az alábbiakban tárgyaljuk, ennek a nyilvánvaló paradoxonnak a tisztázásához szisztematikusan meg kell határozni, hogy mely stressz-események után (és a központi CRH és a szisztémás kortikoszteroidok felszabadulása után) a teljes agyban felvett KOR-populációk kerülnek felvételre, és hogy ez a stressz által indukált jelzés eltér a KOR-aktiválástól endogén dinamorfinok vagy szisztémás farmakológiai szerek által) naiv, nem hangsúlyozott állatokban.
A neuro-anatómiai szinten a visszaélések és a stresszes módszerek több gyógyszerének megállapításai arra utalnak, hogy a kábítószer-kereső stressz által kiváltott visszaállítása a KOR és a monoaminerg rendszerek többszörös kölcsönhatására támaszkodik, valamint számos előjáték limbikus szerkezete. A DRN-ben az eredmények összhangban vannak a Kor-függő CPA-ról korábban említett adatokkal. A kokain-CPP társadalmi stressz által indukált visszaállítását a p38α feltételes deléciója után megszüntették az 5-HT neuronokban, a p38α-cKO használatával.SERT egerek (14). A nikotin-függőség összefüggésében kimutatták, hogy az FS stressz által indukált dinamorfin / KOR jelzés aktiválása erősíti a nikotin CPP-t (20) olyan hatás, amelyet az amygdala-ban nem-BNI infúziója megakadályozhat. Az utóbbi agyi struktúrában a közelmúltban végzett vizsgálatok elkezdték bontani, mely neuronok expresszálják a KOR-t (lásd alább). További vizsgálatokra lesz szükség annak megállapításához, hogy a KOR-pozitív amygdala neuronok előrejelzéseket adnak-e, és hogy a nikotinreceptorok diszregulációja, a közvetlen nikotin célpontok ebben a vagy más agyi régióban jelentkeznek-e a stressz expozíciót követően.
A NA-átvitel és a dynorphin / KOR-rendszer közötti funkcionális kölcsönhatások szintén hozzájárulnak a kábítószer-keresés stressz által indukált visszaállításához. Az anatómiai vizsgálatok kezdetben azt mutatták, hogy a KOR több sejtrészben expresszálódik az LC-ben, a fő NA-agyi magban. A fény- és elektronmikroszkópos vizsgálatok azt mutatták, hogy a KOR láthatóan együtt lokalizálódik a vezikuláris glutamát transzporterrel és a CRF-sel (107), valamint a preprodynorphin (108) az LC axon termináljaiban. A KOR-t LC NA neuronok is expresszálják, mivel a KOR-immunreaktivitást TH-pozitív szomatodendritikus folyamatokban találtuk meg.108). Az elektrofiziológiai felvételek azt mutatták, hogy a LC aktiválása az LC-ben stabilan gyengíti az ingerlő vagy CRF-pozitív bemenetek toborzásával elért neuronális aktivációt. Ezzel ellentétben a KOR-aktiválás nem befolyásolta a spontán LC-neuronok aktivitását (107), ami azt sugallja, hogy a KOR agonisták túlnyomórészt pre-szinaptikus KOR-t alkalmaznak a bazális körülmények között. A viselkedési szinten a KOR / NA interakciókat a közelmúltban vizsgálták a heroin önadagolásának összefüggésében (109). Szisztémás Yohimbine injekciót alkalmaztunk a relapszus kiváltására, ennek a vegyületnek a tulajdonsága alapján, a HPA-tengely és az NA-neuronok aktiválására (antagonistaként a α-ban).2 NA-gátló autoreceptorok). Az eredmények azt mutatták, hogy a Yohimbine szignifikáns visszaállítást eredményezett a kontroll patkányokban, de nem a KOR antagonistával és BNI-vel előkezelt patkányokban. Mivel ez a vizsgálat a Yohimbine és a nor-BNI szisztémás beadását alkalmazta, nehéz megállapítani, hogy a megfigyelt hatások az LC-ben keletkezett KOR-blokádból vagy egy másik agyi régióból erednek-e a stresszrendszer Yohimbine-indukálta aktiválódását követően (ami potenciálisan elterjedt CRF és dinorfin felszabadulás). Egy másik nemrégiben készített jelentés jobban anatómiai felbontással szétválasztotta ezeket a mechanizmusokat, kihasználva a KOR agonista által kiváltott, a kokain-CPP-re visszahelyezés egyszerűbb viselkedési modelljét (39). A KOR blokkolása az LC-ben szelektíven megakadályozta a KOR-indukált visszaállítást. A KOR-k egerek LC-ben való megmentése következetesen részben helyreállította a KOR-függő CPP visszaállítást. Mint más monoaminerg áramkörök (110, 111), az NA neuronok fiziológiai aktivitása több receptor altípusra támaszkodik, beleértve az inhibitor α-t is2-autoreceptorok és poszt-szinaptikus β1- és β2-heteroreceptors. Szelektív farmakológiai hatóanyagokat alkalmaztunk annak bizonyítására, hogy az NA neuronok gátlása (α2-receptor agonista), vagy a NA szindrómás blokkolása a szinaptikus β-ben1-receptorok (β1-antagonista), mindkét potencírozott KOR-indukált visszaállítás. Ezek az eredmények azt mutatják, hogy a NA neuronok stressz- és KOR-közvetített gátlása hozzájárul a visszaeséshez, és összhangban vannak a korábbi adatokkal, amelyek azt mutatják, hogy az LC KOR aktiváció lokálisan csökkenti a neuronális aktivitást. Érdekes módon mind a kokain-indukált kokain-CPP visszaállítása, mind a KOR-indukált CPA nem befolyásolta az NA-jelzés manipulációit, ami arra utal, hogy a KOR / NA interplay szelektíven közvetíti a kábítószer-keresés stresszel kapcsolatos aspektusait. A korábban említett vizsgálatban a Yohimbine visszaesést okozott, miközben mind a HPA tengely, mind az NA neuronok aktivátorának tekinthető. Mindkét tanulmány összeegyeztetésével elmondható, hogy ezek a kezdeti stimuláló hatások követhetők, és végül ellensúlyozhatók az LC NA neuronok CRF- és KOR-indukált gátlása, ami visszaeséshez vezet. Végül ezek az adatok több kérdést vetnek fel a jövőbeni vizsgálatokhoz: hogyan hatnak a CRF-receptorok és a KOR az LC-ben? Mely molekuláris jelátviteli utakat veszik fel az LC neuronokba a KOR aktiválása után, és hasonlóak a DRN-ben leírtakhoz? Milyen elülső struktúrákat érintenek az LC KOR aktiválás?
A közelmúltban a szinaptikus plaszticitás újabb elemzési szintnek bizonyult, hogy jobban megértse a kábítószer-keresés KOR-közvetített visszaállítását. A korábbi bizonyítékok alapján: (i) a stressz rontja a hosszú távú potencírozást (LTP, a két neuron közötti szinaptikus transzmisszió hosszú távú javulásának formája) a VTA-ban, és (ii) KOR szabályozza a mezolimbikus útvonalat (2 rész) , egy nemrégiben készült jelentés feltárta az LTP KOR modulációját a VTA-ban a stressz függvényében.112). Az eredmények azt mutatták, hogy a KOR szisztémás farmakológiai blokádja megakadályozta az LTP stressz által kiváltott gátlását a GABAerg szinapszisokban (LTPGABA), de nem a stressz által kiváltott ingerléses szinapszisok erősödése a VTA-ban. A KOR-aktiválás a VTA-ban elegendő ahhoz, hogy utánozza a stressz hatását, és blokkolja az LTP-tGABA DA neuronokban. Fontos, hogy a VTA-n belüli és a BNI-infúzió, előzetes Az FS-stresszhez igazolták, hogy megakadályozza a kokain önadagolásának a stressz által indukált visszaállítását. Ugyanez a vizsgálók csoportja tovább jellemezte a stressz / KOR kölcsönhatás kinetikáját (113) a KOR-re és a glükokortikoid receptorra (GR), amely a stresszes tapasztalatok és a kortikoszteroidok szisztémás endogén felszabadulása során aktiválódik. Az FS stressz után a GR-t átmenetileg felvették (1 nap alatt), míg a KOR-nak a stressz hosszú távú hatásainak közvetítéséhez legalább 4 nap volt szükség a KOR tonikus aktiválására.GABA DA neuronokban. Következetesen blokkolja a KOR jelzést után Az FS stressz megakadályozta a kokain önadagolását. Globálisan ezek a két tanulmány határozottan arra utalnak, hogy a GR- és KOR-függő LTP blokádGABA a DA neuronokban a kábítószer-keresés stressz által kiváltott visszaállítása döntő mértékben közvetíti. Ezen adatok alapján valószínűsíthető, hogy a stresszválasz és a függőség modelljeiben különböző aktivitású agyi régiókban különböző plaszticitási folyamatok is előfordulhatnak.
Összességében elmondható, hogy a dinamorfin / KOR rendszer kritikusan szerepet játszik a visszaélésekben számos állati paradigmában és kábítószerrel való visszaélésben, az 5-HT, DA és NA jelátvitellel való komplex kölcsönhatások révén. A kiindulási körülmények között a KOR akut aktiválása gátolja a visszaélésszerű gyógyszerek megerősítő tulajdonságait (1 rész). Ezzel szemben a rágcsálók adatai azt sugallják, hogy az embereknél a KOR felvétele a stresszes élet tapasztalatai között közvetítheti a kábítószer-keresést a függő betegeknél, akik megpróbálják elérni a kábítószer absztinenciáját, és így hozzájárulhatnak a függőség fenntartásához.
Depressziós tünetek kialakulása a rabszolgákban
A fokozott stressz-reaktivitás a visszaélések gyógyszereinek hosszantartó expozíciója és absztinenciája miatt hozzájárul a depresszív tünetek kialakulásához, amelyek az addiktív zavaroktól függetlenül válhatnak krónikus állapotokká.
Kimutatták, hogy a kábítószerekkel való krónikus expozíció erősíti az endogén jelátvitelt a KOR-n keresztül. A kokain ismételt expozíciója a patkányokban a striatum és a materia nigra dinorfin-koncentrációját növelte (114). Hasonlóképpen, a meghosszabbított heroin önadagolás is növekedett Pdyn expressziója az NAc héjában és az amygdala központi magjában, nincs hatással Penk, az enkefalin-opioid peptideket kódoló gén, előnyösen MOR és DOR (115). A krónikus alkohollal szintén összefüggésbe hozható a fokozott dinamorfin expresszió és a felszabadulás a NAc-ben (116, 117) és az amygdala (118). Amint már említettük, a NAc-ben a fokozott dinamofin felszabadulás valószínűleg egy cAMP – CREB jelátviteli útvonalon (119). Ennek megfelelően a visszaélés gyógyszerei fokozzák a DA felszabadulást a NAc-ben, ami a DA D1-receptor, a stimuláló G-hez kapcsolódó receptor fokozott és hosszantartó aktiválódásához vezet.sproteinek,. Ez viszont növeli a sejten belüli cAMP-képződést, és növeli a CREB-kötődését a genomiális válaszelemekhez, ami fokozott expressziójához vezet. Pdyn gén. Ezeket az eredményeket az embereknél a frontális kérgi régiókban igazolták, amelyek a NAc-hez hasonlóan sűrű DA beidegződést kapnak. Az 14 alkoholistáknak a mortalitás utáni szöveteket vizsgáló vizsgálatban az 14 egészséges kontrolljaival összehasonlítva nőtt Pdyn Az A és B mRNS és a dinorphin peptideket a dorsolaterális PFC-ben, valamint az orbito-frontális kéregben növekvő KOR mRNS-t figyeltük meg, míg más opioid peptidek és receptorok esetében nem találtunk változást (120) ezekben a régiókban.
A robusztus prodepresszáns-szerű aktivitás (2 rész) miatt a dinorphin / KOR rendszer fokozott expressziója a kábítószerrel való hosszan tartó expozíció után bekövetkezett az akut megvonás averzív tüneteihez, valamint a depressziós tünetek megjelenéséhez hosszú ideig elvonási fázisok vagy absztinencia. A negatív hatás befolyásolja a drogfogyasztást (az „öngyógyítás” hipotézist), ezáltal erősítve a kábítószer-keresést és hozzájárulva a függőség súlyosságához. Emellett a gyógyszer által kiváltott érzelmi zavarok a sérülékeny egyénekben is előidézhetik a kezdeti hatóanyag-visszaéléstől függetlenül kialakuló depressziós rendellenességeket. A rágcsálómodellekben a krónikus etanolos expozíció akut megvonása negatív érzelmi állapotokhoz kapcsolódik [lásd a Ref. (121-124), beleértve a viselkedési jellemzőket, amelyeket általában szorongásnak \ t125) vagy depresszióval összefüggő (126)]. Valószínű, hogy az érzelmi válaszok mindkét dimenziója kölcsönhatásba lép (127-129), és hogy a megvonás által kiváltott szorongásszerű viselkedés fokozhatja a depressziós tüneteket. Patkányokban az etanol-függőség megállapítható krónikus és passzív etanolos folyékony táplálkozással (125) vagy etanolgőzökre (130). Wistar patkányokban (125), a függőség kimutatták, hogy az akut megvonás során fokozott szorongásszerű viselkedésként jelentkezik (ahogyan azt a megemelt plusz labirintus tesztben értékelték), és ezt a hatást blokkolta a KOR antagonista és BNI szisztémás kezelés. Kissler és mtsai. (130) azt is megfigyelte, hogy az etanol-függőség akut megvonása társult a fokozott alkoholoperáns önadagoláshoz, és az 22-kHz ultrahangos hangosítások növekedése, ami „egy etológiailag érvényes viselkedés, amely könnyen megkülönbözteti a negatív affektív állapotokat"(131). Ezek a viselkedési változások, amelyek a fokozott Dynorphin-A immunreaktivitással kapcsolatosak a központi amygdala (CeA) kapszulájában és a KOR [fokozott agonista-stimulált G-fehérje kapcsolása (a klasszikus [[35S] -GTPγS módszer (132)]. Kimutatták, hogy a CeA-ban a KOR-blokád megakadályozza a fokozott etanol önadagolását függő patkányokban. Ennek a helyi manipulációnak az ultrahangos hangosításokra gyakorolt hatását nem értékelték; azonban valószínű, hogy a CeA KOR jelzés hozzájárulhat a krónikus etanol expozíciót követő negatív hatáshoz. Az áramkör szintjén a KOR lokalizációja az amygdala-ban és annak fiziológiai jelentősége csak elkezdett értékelni, és a legújabb eredmények azt mutatják, hogy a receptor elsősorban a GABAerg neuronok szinaptikus termináljain helyezkedik el (133). Egy KOR agonista és egy antagonista amigdala patkányszövet szeletekre történő adagolása következetesen csökkent, és a GABAerg transzmisszió [miniatűr IPSC-k, (21)]. Meglepő módon azt tapasztaltuk, hogy ezek a két vegyület fordított hatással rendelkezett a kokain önadagolásának napi szekciói után, és indukálta a fokozott és csökkent GABAerg aktivitást. Ezeket a hatásokat csak olyan patkányoknál figyelték meg, amelyek a kokainfogyasztást az önadagolás hosszú (6 h) periódusai során fokozták, de a rövid (1 h) szekciókban stabil kokainfogyasztást mutató patkányokban nem. Ezért, bár a krónikus expozíció a kábítószerekkel szemben fokozza a dinamorfin / KOR jelátvitelt, az is lehetséges, hogy a kábítószer-fogyasztás elleni védekezés specifikusan módosíthatja a KOR aktiválásának nettó hatását bizonyos neuronális áramkörökre (amint azt itt a CeA példában mutatjuk be) esetleg a KOR-t expresszáló sejttípusok változásai, vagy a KOR celluláris lokalizációja miatt. A viselkedési szinten a nor-BNI CeA mikro-infúziója gyengítette a megnövekedett szorongásszerű viselkedést (a védekező temetkezési paradigmában), amelyet a krónikus, kísérleti úton előállított kokaininjekciók során visszavonult. Bár a KOR-blokád ezt a hatást az önkéntes kokainfogyasztás után is meg kell vizsgálni, ezek az eredmények egyértelműen arra utalnak, hogy az amygdala KOR-k kontrollálják az érzelmi reakciókat a kokain visszavonásakor.
Az addikcióra jellemző ismétlődő mérgezési és visszavonási ciklusok során bizonyos környezeti jelek fokozatosan társulnak a negatív affektív állapotokhoz, és ezután a kábítószer-expozíciótól függetlenül averzív hatást fejtenek ki (még a visszavonásszerű tüneteket is beleértve).134)]. Berger és mtsai. (19) kimutatta, hogy az 22-kHz-es ultrahangos hangsugárzásokat fokozzák az etanol-függésből való kivonás során (2-hetes kényszer expozícióval indukálva etanolgőzökkel), és ezt a hatást dózisfüggően blokkolta a szisztémás KOR antagonizmus. Egy másik kísérletsorozatban a szerzők semleges szagot (mandula illat) társítottak a rendszeres KOR-aktiválás averzív tulajdonságával. Érdekes módon ez a kondicionált szag ismételt expozíciója kimutatta, hogy a nem függő patkányokban az etanol operáns önadagolását erősíti, és ezt a hatást a KOR szisztémás blokádja blokkolta. Hasonlóképpen, az emberekben a visszavonás által kiváltott negatív hatással ismételten összekapcsolt kontextusos jelek ismételt expozíciója KOR-függő diszforikus állapotot eredményezhet, és erősítheti a kábítószer-keresést, ezáltal hozzájárulva a függőség fenntartásához és a depressziós tünetek megjelenéséhez.
A kábítószerek emocionális következményei messze túlmutatnak az akut megvonási fázison, amely az a periódus, amely alatt a gyógyszer a testből kiürül. Egy nemrégiben készült tanulmány megvizsgálta a hosszú távú KOR-függő változásokat, amelyek az etanolból való elhúzódással jártak (135). A patkányokat folyékony alkoholtartalmú táplálékkal táplálták 25 – 30 napokra, orális önadagolással, kétpalackos választási paradigmában. Hat héttel az etanol eltávolítása után a szorongásszerű viselkedés (közvetlenül a 20-min-re korlátozott stressz után mérve, a megemelt plusz labirintusban) erősödött az etanol-absztinens patkányokban. Ezt a hatást a tesztelés előtt blokkolta a 24 előtti XNUMX-kezelés, ami arra utal, hogy a dinamorfin / KOR-rendszer fokozott stressz-reaktivitása nagyon hosszú ideig fennállhat az etanol kezdeti expozícióját követően. A mi csoportunk nemrégiben bővítette ezt a növekvő bizonyítékot az opiátákkal való visszaéléshez, és a KOR-t érzelmi hiányosságokba szorította az egerekben a hosszú távú kábítószer-absztinencia során. Először azt mutattuk, hogy a morfin absztinencia fokozatosan a megnövekedett viselkedési kétségbeeséshez vezet (a farok felfüggesztési tesztben) és a társadalmi kivonás (136, 137). Mindkét hiányt 4 héten, de nem 1 héten észleltük, a krónikus, kísérletesen leadott magas morfin adagok után. Krónikus per os az antidepresszáns Fluoxetin (szelektív szerotonin újrafelvétel-gátló) kezelése az 4 hetes absztinencia időszak alatt megfordította a morfin által kiváltott hiányt. Továbbá az 5-HT anyagcsere (136) és 5-HT1A-receptor funkció (138) a morfin absztinenciája során, különösen a DRN-ben, diszreguláltak, ami az 5-HT mechanizmusok fontos hozzájárulását sugallja. Ezt a modellt erősítve heroint használva kissé eltérő kinetikai mintát jellemeztünk (139): 4 hetekben az absztinenciánál csak a heroin-előkezelt egerekben találtunk társadalmi kivonást; az 7 hetekben az absztinencia idején ez a kezdeti tünet a viselkedési kétségbeesés (FS teszt) növekedésével járt. Fontos, hogy megmutattuk, hogy a társadalmi kölcsönhatások erős csökkenése (mind a morfin, mind a heroin absztinenciája során) mind a MOR, mind a KOR aktiválásán alapul (139): ez a fenotípus hiányzott: (i) cKO egerekben, ahol a MOR-t kifejezetten törölték a DRN-ben a heroin kezelés előtt; és (ii) konstitutív KOR KO egerekben. Az 5-HT és DA interakcióra vonatkozó korábbi adatok alapján a KOR-függő CPA és a kokain-CPP modellekben az érdekes lehetőség az, hogy a hasonló monoamin kölcsönhatások hozzájárulhatnak az opiát absztinencia során fellépő érzelmi zavarokhoz, potenciálisan hasonló molekuláris kaszkádokon keresztül .
A jövőbeni kutatások egyik fontos feladata az érzelmi jellegű válaszok feltárása az addiktív jellegű viselkedésmódok kifinomultabb modelljei összefüggésében. Filogenikus és transzlációs szempontból, és önadminisztrációs paradigmák alkalmazásával számos csoport képes volt átültetni a DSM-IV függőségi kritériumokat a reprodukálható, kábítószer-indukált viselkedési rendellenességekbe, beleértve a kényszeres kábítószer-keresést és a kábítószer-fogyasztást a kedvezőtlen következmények ellenére (140, 141). Feltételezzük, hogy a kábítószer-fogyasztás ilyen rendellenes mintái a rágcsálókban is erősebb és hosszabb ideig tartó érzelmi hiányhoz vezethetnek, és jobb modelleket jelenthetnek a függőséggel kapcsolatos érzelmi komorbiditásnak. Az ilyen megközelítéseknek lehetőségük van arra is, hogy dimenziós megközelítésben feltárják azokat a viselkedési jellemzőket, amelyek nemcsak a kompulzív kábítószer-használatra való áttérést (például magas impulzivitást) jelzik, hanem az érzelmi komorbiditás kockázatát is.
Együttesen a gyorsan bővülő KOR-irodalom nagy érdeklődést váltott ki a KOR-antagonisták kifejlesztésében, mint a depresszió és a szorongásos zavarok gyógyászati terápiája, valamint a stresszszabályozás javítása és a diszfória csökkentése a függőség összefüggésében. Bár néhány KOR-ligandum nem mutatott optimális farmakológiai tulajdonságokat, mások bizonyítottan életképes gyógyszerjelöltek (142). Összefoglalva, a KOR antagonisták (i) blokkolhatják a stressz által kiváltott drogfogyasztás erősödését, (ii) megakadályozzák a stressz által kiváltott visszaesést az absztinencia időszakokban, és (iii) korlátozzák a negatív érzelmi állapotokat az akut megvonás és a hosszabb ideig tartó absztinencia időszakok során. Bár a hosszú távú nyomon követés és a jól kontrollált vizsgálatok módszertani szempontból kihívást jelentenek a kábítószer-függőkben, ezek az eredmények összhangban vannak a depressziós opiát-visszaélők klinikai jelentésével a buprenorfin, a kettős MOR-agonista / KOR-antagonista előnyös hatásairól (a metadonhoz képest). tiszta MOR agonista) (23); egy másik tanulmány azonban nem talált különbséget a két vegyület között (143). A KOR-farmakológia intenzív kutatása már rengeteg rövid- [Zyklophin (103), LY-2456302 (144, 145)] és hosszú hatású (nor-BNI, GNTI, JDTic) antagonisták (146). A jövőbeni tanulmányoknak gondosan meg kell vizsgálniuk a megfelelő jelzőtulajdonságokat attól függően, hogy milyen strukturális konformációt értek el a KOR-val, vagyis az elfogult agonizmus ígéretes mezőjével [lásd például a Ref. (147-150)]. További sajátosságok keletkezhetnek a KOR jelzésének összehasonlítása során a rágcsáló és az emberi fajok között (151), vagy a genetikai polimorfizmusok függvényében (152-154). Továbbá, a közelmúltbeli lehetőség az emberi KOR tanulmányozására in vivo, a PET-Scans használatával az 11C-LY2795050 rádiófrekvenciával (155), ígéretes. Hosszú távon a farmakogenomikus megközelítések potenciálisan megjósolhatják a KOR-t célzó, egyénre szabott kezelési módokat, és ezért a hatékony klinikai előírások kulcsa lehetnek.
Amikor a depresszió megelőzi a függőséget
A depresszió és a függőség közötti comorbiditás neurobiológiai mechanizmusainak kezelése érdekében az állatmodellek egy másik kiegészítő megközelítése az, hogy tanulmányozzuk, hogy a depresszív állapotok hogyan erősíthetik a visszaélésszerű gyógyszerek viselkedési hatásait és fogyasztási szokásait (36, 156). A komorbiditásban szerepet játszó fordított ok-okozati viszonyhoz képest a későbbi szempontot rosszul tanulmányozták, és nagyon kevés tanulmány vizsgálta a KOR potenciális szerepét.
Ebben a keretrendszerben a rendelkezésre álló rágcsálók bizonyítéka következetlen, és a depresszió krónikus stressz alapú modelljei a kábítószerek fokozott hatásaihoz kapcsolódnak (a jutalmazási útvonalak érzékenyítése, amely összhangban lenne az emberi komorbiditással) vagy csökkent hatások. Krishnan és mtsai. (93) kimutatta, hogy a krónikus társadalmi vereség hatására érzékeny egerek, akiknek hosszú ideig tartó depressziós jellegű tulajdonságai vannak, beleértve a csökkent szacharóz-preferenciát és a társadalmi elkerülést, szintén jelentős CPP-t mutatnak a kokain dózisoknál, amelyek nem erősítik meg a vereséget nem szenvedő egerekben, vagy vereséget szenvedtek de rugalmas egerek.
A krónikus enyhe stressz egy másik modellje a depressziónak, amely a rágcsálók kiszámíthatatlan expozícióján alapul többféle enyhe stresszorra, jellemzően az 4 – 8 héten. Ezt a modellt széles körben használják arc-, konstrukciós és prediktív érvényességük miatt (157-159). A krónikus enyhe stressz (CMS) kísérletekben a leggyakoribb viselkedési kimenet a szacharózoldat vagy az anhedonia csökkent preferenciája (víz felett). Úgy tűnik, hogy ez az anhedonikus fenotípus kiterjed a kábítószerek erősítő tulajdonságaira is, mivel az amfetaminra csökkent CPP (160) és morfin (161) a patkányok CMS-jét követően jelentették. Meglepő módon nincs tudomásunk szerint rendelkezésre álló tanulmány a KOR KO egerek CMS-hatásairól: a stressz WT egerekben a KOR-expresszió erősödött? Melyik agyi régiókban? A KOR KO egereket védeni kell a krónikus stressz hatásai ellen? Ennek a szakadéknak a kezelése az irodalomban, Al-Hasani et al. a közelmúltban megvizsgálta a CPP három új stresszszerű módja: CMS, „szubkronikus társadalmi vereség” (a szociális vereség rövidebb 5-napos formája) és egy akut FS-stressz hatását;162). Az eredmények azt mutatták, hogy az előzőekben leírtak szerint az akut stressz fokozza a kokain-CPP-k által közvetített KOR-közvetítést. Ezzel szemben mind a CMS, mind a szubkrónikus társadalmi vereséget a kokain és a nikotin CPP visszaesése a KOR-agonista függvényében. Amint az várható volt, a CMS nem befolyásolta a kokain vagy a nikotin CPP gyógyszerindukált visszaállítását, ami a korai specifikus implikációra utaló bizonyítékokat adta a stressz által kiváltott visszaeséshez. Ezek az ellenintézkedések arra utalnak, hogy legalább a rágcsáló modellekben a CMS-nek védő vagy adaptív hatása lehet a kábítószer-relapszus ellen, ami olyan értelemben, amely rosszul illeszkedik az emberek epidemiológiai és klinikai eredményeihez.
Összességében elmondhatjuk, hogy a CMS-t vagy a hosszabb ideig tartó társadalmi vereséget követő anhedonia-szerű viselkedés csökkentheti a kábítószer-fogyasztás akut erősítő tulajdonságait (a kábítószer-kondicionálás, kihalás és visszaesés helyspecifikus paradigmái alapján), esetleg egy KOR-függő mechanizmust . Ugyanakkor a stressz által kiváltott anhedonia is erősítheti a kényszeres kábítószer-fogyasztás megjelenését a kábítószer-fogyasztás krónikus önkéntes fogyasztása során, ezáltal előnyben részesítve a függőségbe való belépést. Ennek a lehetőségnek a feltárása érdekében a jövőbeni tanulmányok ideális esetben két fejlett viselkedési paradigma-csoportot fognak össze: először a CMS-t vagy a krónikus társadalmi vereséget, majd ezt követően kiterjesztett operáns kábítószer-önigazgatást. A jelenleg rendelkezésre álló cKO egerek sokasága hasznosnak bizonyulhat a KOR szerepének jobb megértésében ezekben a kombinált preklinikai megközelítésekben.
Jövőbeli irányok és következtetések
A jövőben az egyik legnagyobb kihívás az endogén dinamorfin / KOR rendszer dinamikus adaptációinak lebontása, mivel a hangulat és a jutalom megszakadása keletkezik és fejlődik. Ez a kérdés jelentős klinikai jelentőséggel bír, figyelembe véve e két feltétel krónikusságát. Különösen a rendelkezésre álló bizonyítékok azt mutatják, hogy a KOR több ellenőrzést gyakorol a rágcsálók fő monoaminjai felett. Érdekes, hogy a függőség-kutatás azt sugallja, hogy a kábítószerrel való ismételt expozíció megzavarja a kölcsönös gátló visszacsatolási mechanizmusokat a monoaminerg magok között, amelyek közvetíthetik a hosszú távú viselkedési zavarokat (163, 164). Az, hogy az ilyen mechanizmusok károsítják-e a KOR-függő hangulatszabályozást, egy érdekes hipotézis a comorbiditás összefüggésében.
A KOR-területen a bizonyítékok összegyűjtése a közelmúltban arra késztette a klinikusokat, hogy végezzenek agyi képalkotó tanulmányokat és klinikai vizsgálatokat (22). Az utóbbi időben a radioaktív KOR-antagonistát alkalmazó első PET-Scan-vizsgálat képes volt kimutatni a KOR jelentős és széles körű zavarát. in vivo a súlyos traumás expozíciót követő félelem és diszforikus tünetekkel küzdő betegek \ t165). Míg az eredmények jól illeszkednek a KOR és a mezolimbikus útvonal állati adataihoz, azt is sugallják, hogy más, jelenleg a preklinikai beállításoknál gyengén vizsgált agyi régiók egyaránt fontosak lehetnek (pl. Thalamus és szigetelt kéreg). További vizsgálatokra lesz szükség a KOR rendelkezésre állásának további értékelésére jól jellemzett, depressziós, addiktív és comorbid alanyokban. Végül farmakológiai szempontból az elfogult agonizmus (vagy a ligandum irányított jelzés) gyorsan fejlődő területe nagy reményeket vet fel a KOR-célzású gyógyszerek számára (149). A G-fehérje-kapcsolt receptorok területén a fő cél a különböző jelátviteli utak azonosítására szolgál, amelyek a specifikus viselkedési válaszok szabályozására működhetnek. A közeljövőben az ilyen megközelítések valószínűleg elősegítik a KOR antagonistaként ható antidepresszánsok kialakulását, és nem rendelkeznek potenciálisan kapcsolódó mellékhatásokkal (pl. Hiperalgézia).
Összefoglalva, a jelen áttekintésben összegeztük a KOR-nak a jutalom és a hangulat szabályozásában betöltött szerepét alátámasztó nagy bizonyítékot. Azt is leírtuk, hogy ez a receptor ideális helyzetben van a két gyakori és súlyos pszichiátriai rendellenesség, a függőség és a depresszió közötti erős kölcsönhatások közvetítésére. Összességében a KOR preklinikai kutatása azt mutatja be, hogy a több állatmodellben végzett transzverzális vizsgálatok képesek azonosítani az agyi mechanizmusokat, amelyek hozzájárulnak a transzdiagnosztikai patofiziológiai folyamatokhoz, és ezért kulcsfontosságú terápiás célokat jelentenek a komorbiditás kezeléséhez, amely a mentális Egészség.
Érdekütközési nyilatkozat
A szerzők kijelentik, hogy a kutatást olyan kereskedelmi vagy pénzügyi kapcsolatok hiányában hajtották végre, amelyek potenciális összeférhetetlenségnek tekinthetők.
Köszönetnyilvánítás
A szerzők köszönetet mondanak Dr. Laura Fiorinak a kézirat kritikus olvasásáért. Ezt a munkát az Agence Nationale de la Recherche (ANR-Abstinence) támogatta.
Referenciák
;
