Աղբյուր
Վագգոների անվան ալկոհոլիզմի և կախվածության հետազոտությունների կենտրոն, Նյարդաբանության ինստիտուտ, Տեխասի համալսարան Օսթինում, Օսթին, Տեխաս, 78712, ԱՄՆ: [ email protected]
Վերացական
Վերացական:
ՄԻՋԱՎԱՅՐԸ:
Ալկոհոլի օգտագործումը նվազեցնելու կամ կարգավորելու անկարողությունը ալկոհոլի օգտագործման խանգարումների բնորոշ ախտանիշ է: Խմելու մեջ փորձառությունից բխող փոփոխությունների նոր վարքային և գենետիկական մոդելների հետազոտությունները կամրապնդեն մեր գիտելիքները ալկոհոլի օգտագործման խանգարումների վերաբերյալ: Ալկոհոլի ինքնուրույն օգտագործման տարբեր վարքագծեր նախկինում դիտարկվել էին մկների երկու F1 հիբրիդային շտամների համեմատության ժամանակ. C57BL/6J x NZB/B1NJ (BxN)- ը ցույց է տալիս ալկոհոլի նախընտրության նվազում ալկոհոլի բարձր կոնցենտրացիաների և ձեռնպահ մնալու ժամանակահատվածներից հետո, մինչդեռ C57BL/6J x FVB/NJ ( BxF)-ը ցույց է տալիս ալկոհոլի նկատմամբ կայուն նախընտրություն: Այս ֆենոտիպերը հետաքրքիր են, քանի որ այս հիբրիդները ցույց են տալիս գենետիկական ադիտիվության (BxN) և գերբեռնվածության (BxF) առկայություն էթանոլի ընդունման մեջ՝ փորձառությունից կախված ձևով:
Մասնավորապես, BxF-ը ցուցաբերում է ալկոհոլի կայուն նախասիրություն, իսկ BxN-ը՝ նվազեցված ալկոհոլի նախասիրություն էթանոլի բարձր կոնցենտրացիաների հետ փորձից հետո։ Սակայն էթանոլի ցածր կոնցենտրացիաների հետ փորձը երկու հիբրիդների համար էլ առաջացնում է ալկոհոլի կայուն նախասիրություն ։
Սույն ուսումնասիրության մեջ մենք փորձարկեցինք այն վարկածը, որ այս ֆենոտիպերը ներկայացված են ընկճվածության գործակիցը, ΔFosB- ի դիֆերենցիալ արտադրությամբ, պարգեւատրման, զրպարտության եւ շեշտակի հետ կապված ուղեղի շրջաններում:
ԱՐԴՅՈՒՆՔՆԵՐ
Նեյրոնային պլաստիկության փոփոխությունները (չափված ΔFosB մակարդակներով) կախված էին փորձից, ինչպես նաև ուղեղի շրջանից և գենոտիպից, ինչը հետագայում հաստատում է, որ նեյրոնային սխեմաները հիմքում ընկած են էթանոլի սպառման մոտիվացիոն ասպեկտներին ։
BxN մկաններն իջեցրել են ալկոհոլային նախապատվությունները, որոնք ավելի ցածր էին ΔFosB մակարդակներում, Edinger-Westphal միջուկում, քան մկները `ցուցադրելով կայուն ալկոհոլի նախապատվությունը եւ աճել ΔFosB մակարդակները կենտրոնական միջամտության մեջ, համեմատած վերահսկվող մկների հետ:
Ալկոհոլի կայուն նախասիրություն ցուցաբերող BxN մկները ցույց տվեցին ΔFosB-ի ավելի բարձր մակարդակներ վենտրալ տեգմենտալ տարածքում, Էդինգեր-Վեստֆալ կորիզում և նշագեղձում (կենտրոնական և կողմնային բաժանմունքներ):
Ավելին, BxN մկների մոտ Էդինգեր-Վեստֆալյան կորիզում և որովայնային տեգմենտալ շրջաններում ΔFosB մակարդակները զգալիորեն դրականորեն կապված էին էթանոլի նախընտրության և ընդունման հետ : Բացի այդ, հիերարխիկ կլաստերային վերլուծությունը ցույց տվեց, որ էթանոլ չօգտագործած շատ մկներ՝ ընդհանուր առմամբ ցածր ΔFosB մակարդակներով, գտնվում են կլաստերում, մինչդեռ շատ մկներ, որոնք ցուցաբերում են կայուն ալկոհոլային նախընտրություն՝ ընդհանուր առմամբ բարձր ΔFosB մակարդակներով, գտնվում են միասին կլաստերում:
ԵԶՐԱԿԱՑՈՒԹՅՈՒՆՆԵՐ:
Համեմատելով եւ հակադրելով երկու ալկոհոլային phenotypes, այս ուսումնասիրությունը ցույց է տալիս, որ պարգեւատրման եւ սթրեսային սխեմաները (ներառյալ Edinger-Westphal միջուկը, ventral tegmental տարածքը, amygdala) անցնում զգալի ոսպնյակներ, որոնք արտահայտվում են որպես նվազեցված ալկոհոլային նախապատվություններ:
Ընդհանուր տեղեկություններ
Ալկոհոլի չարաշահման և ալկոհոլիզմի հետ կապված հայտնի են շրջակա միջավայրի և գենետիկական զգայունության գործոններ: Անհատի համար քիչ հետևանքներ ունեցող մեծ քանակությամբ ալկոհոլ օգտագործելու ունակությունը շատ ալկոհոլիկների մոտ առաջնային ախտանիշ է, ինչը ցույց է տալիս, որ ալկոհոլի նկատմամբ ցածր արձագանքը ալկոհոլիզմի զարգացման հիմնական խոցելիության գործոն է [ 1 , 2 ]: Ալկոհոլի չափավոր օգտագործմանը նպաստող նյարդակենսաբանական գործոնների սահմանումը կօգնի մեզ հասկանալ ալկոհոլի օգտագործումը և չարաշահումը, և արդյունավետ ռազմավարություն է ալկոհոլի օգտագործման խանգարումներով ախտորոշված անհատների համար բարելավված բուժումներ մշակելու համար: Մարդկային հիվանդությունը ընդօրինակելու համար կրծողների մոդելների օգտագործումը հզոր գործիք է եղել այս հիվանդության հասկացման առաջընթացի և բուժումները բարելավելու գործում: Կան մի քանի կրծողների մոդելներ, որոնք ուսումնասիրում են ալկոհոլի չարաշահման և ալկոհոլիզմի ասպեկտները, սակայն ոչ մեկը լիովին չի մոդելավորում ալկոհոլիզմը : Այն չափը, որով մուկը բերանացի ինքնուրույն կընդունի էթանոլի լուծույթներ նմանատիպ շրջակա միջավայրի պայմաններում, մեծապես կախված է նրա գենետիկական նախապատմությունից [ 3 ]:
Վերջերս մենք պարզեցինք, որ C57BL/6JxFVB/NJ (BxF) և FVB/NJxC57BL/6J (FVBxB6) F1 հիբրիդային մկները երկու շշի նախընտրության թեստերի ժամանակ ինքնուրույն ընդունում են անսովոր բարձր քանակությամբ ալկոհոլ (էգերը սպառում են 20-35 գ/կգ/օր, իսկ արուները՝ 7-25 գ/կգ/օր, կախված կոնցենտրացիայից և մոդելից) [ 4 ]: Այս նոր գենետիկական մոդելն ունի զգալի առավելություն՝ համեմատած առկա ինբրիդ շտամների հետ, ներառյալ գերբնական ֆենոտիպի և արյան մեջ ալկոհոլի բարձր մակարդակի օգտագործման ապացույցները [ 4 ]: Բացի այդ, BxF մկների կողմից ցուցաբերված էթանոլի բարձր սպառումը նկատվում է էթանոլի խմելու երկու լրացուցիչ մոդելում (մթության մեջ խմելը և էթանոլի ընդունումը հեղուկի ընդունման ժամանակացույցով) [ 4 ]: Այնուհետև մենք դիտարկեցինք ալկոհոլի ինքնուրույն օգտագործման տարբեր վարքագծեր՝ համեմատելով մկների երկու F1 հիբրիդային շտամները. C57BL/6J x NZB/B1NJ (BxN)-ը ցույց է տալիս ալկոհոլի նկատմամբ նախընտրության նվազում ալկոհոլի բարձր կոնցենտրացիաների և ժուժկալության ժամանակահատվածների հետ փորձից հետո, իսկ BxF-ը ցույց է տալիս ալկոհոլի նկատմամբ նախընտրության կայունություն [ 5 ]: Վարքային թեստերի մի շարք օգտագործելով՝ մենք ցույց տվեցինք, որ BxN-ը ավելի զգայուն է էթանոլի անբարենպաստ և հանգստացնող, բայց ոչ թե պարգևատրող ազդեցությունների նկատմամբ, քան BxF մկները [ 6 ]:
Ալկոհոլի բարձր սպառման և խմելու մեջ փորձառությունից բխող փոփոխությունների նոր վարքային և գենետիկական մոդելների վերաբերյալ հիմնարար հետազոտությունները կամրապնդեն մեր գիտելիքները ալկոհոլի չարաշահման և ալկոհոլիզմի վերաբերյալ: Ալկոհոլի նախընտրության նվազեցված ֆենոտիպը հետաքրքիր է, քանի որ BxN մկները սկզբում ցուցաբերում են էթանոլի լուծույթների բարձր նախընտրություն: Չնայած էթանոլի բարձր կոնցենտրացիաների և ձեռնպահ մնալու փորձառությունից հետո ալկոհոլի օգտագործումը նվազեցնելու մոտիվացիոն կողմը անհայտ է, BxN մկները կարելի է համեմատել չափավոր ալկոհոլ օգտագործողների հետ, քանի որ նրանք դեռևս սպառում են էթանոլի լուծույթներ, բայց ավելի ցածր մակարդակով, հավանաբար՝ տհաճ փորձառության պատճառով:
Հետաքրքրական է նաև ալկոհոլի կայուն նախընտրության մոդելը, քանի որ BxF մկները կայուն կերպով սպառում են էթանոլի չափազանց բարձր մակարդակներ՝ անկախ նախորդ փորձից: Ալկոհոլի կայուն և նվազեցված նախընտրությունը կարող է կապված լինել ալկոհոլի զրկանքի էֆեկտի հետ, մի երևույթ, երբ կենդանիները զգալիորեն ավելացնում են ալկոհոլի սպառումը հարկադիր ձեռնպահ մնալու ժամանակահատվածից հետո [ 7 ]: Ալկոհոլի զրկանքի էֆեկտը օգտակար երևույթ է ալկոհոլի օգտագործման վարքագծի ուսումնասիրման համար: Չնայած ալկոհոլի զրկանքի էֆեկտը առաջացնող փորձարարական ժամանակացույցը բավականին տարբերվում է այստեղ օգտագործված ժամանակացույցից, կայուն և նվազեցված ալկոհոլի նախընտրությունը ալկոհոլի զրկանքի էֆեկտի հետ համեմատելը այստեղ քննարկվող տարբեր վարքային ֆենոտիպերը կապում է ալկոհոլի հետազոտության կրծողների մոդելներում կարևոր երևույթի հետ: Ալկոհոլի նվազեցված նախընտրությունը կլիներ ալկոհոլի զրկանքի էֆեկտի հակառակը, իսկ կայուն ալկոհոլի նախընտրությունը կարելի է նկարագրել որպես ալկոհոլի զրկանքի էֆեկտի բացակայություն: Բազմազան գենետիկական կենդանիների մոդելների, ինչպիսիք են BxF-ը և BxN-ը, օգտագործումը մեծապես նպաստում է ոլորտի զարգացմանը, քանի որ ենթադրվում է, որ ալկոհոլի օգտագործման խանգարումները առաջանում են գենետիկայի և շրջակա միջավայրի միջև բարդ փոխազդեցություններից: Այս հիբրիդների համար դիֆերենցիալ անհապաղ վաղ գեների արտահայտման նույնականացումը հնարավորություն է տալիս պատկերացում կազմել ուղեղի շղթաների մասին, որոնք կարևոր են էթանոլի պարգևատրող և հակադարձ հատկությունների համար:
Էթանոլը և այլ դեղամիջոցներով ներգրավվող նեյրոշղթաները ուսումնասիրվել են որոշակի կրծողների մոդելներում՝ օգտագործելով նեյրոնային պլաստիկության և/կամ ակտիվության մոլեկուլային մարկերներ [ 8-15 ]: Ինքնուրույն ընդունվող և փորձարարի կողմից ընդունվող էթանոլը չի հանգեցնում ուղեղի համարժեք նյութափոխանակության քարտեզների, ինչը ենթադրում է , որ որոշակի շղթաներ են ընկած էթանոլի ուժեղացնող ազդեցության հիմքում [ 8 , 9 ] :
Ալկոհոլի հետազոտություններում դեռևս լայնորեն ուսումնասիրված չլինող հիմնական բաղադրիչներից մեկը ալկոհոլի նկատմամբ կայուն և նվազեցված նախընտրության վարքագծերի ուսումնասիրությունն է և այդ վարքագծերի ընթացքում ներգրավված նեյրոնային շղթաների նույնականացումը: Այս փորձի նպատակն էր նույնականացնել ուղեղի այն շրջանները, որոնք ներգրավված են ալկոհոլի նկատմամբ կայուն և նվազեցված նախընտրության մեջ: Քանի որ ալկոհոլի քրոնիկ ընդունումը (այլ չարաշահող դեղամիջոցների հետ միասին) ցույց է տվել, որ առաջացնում է ուղեղի տարածաշրջանային տարբերություններ ΔFosB մակարդակներում, մենք ստուգեցինք այն վարկածը, որ այս վարքային ֆենոտիպերը ներկայացված են ինդուկտիվ տրանսկրիպցիոն գործոնի՝ ΔFosB-ի դիֆերենցիալ արտադրությամբ ուղեղի այն շրջաններում, որոնք հայտնի են որպես պարգևատրման, հակակրանքի և սթրեսի հետ կապված [ 10 ]:
ΔFosB մակարդակների տարածաշրջանային տարբերություններ առաջացնող քրոնիկ խթաններից են չարաշահման թմրանյութերը (ալկոհոլ, կոկաին, ամֆետամին, նիկոտին, մորֆին և հակափսիխոտիկներ), քրոնիկ սթրեսը (զսպման սթրես, անկանխատեսելի ոտնաթաթի ցնցում, էլեկտրաշոկային նոպաներ) և հարկադրական անիվի վրա վազքը [ 11 ]: Որպես ուղեղի երկարատև ադապտացիաների պոտենցիալ միջնորդ, քրոնիկ էթանոլով բուժմանը ի պատասխան FosB-ի գերիշխող տարբերակի (FosB կամ ΔFosB) նույնականացումը կարևոր տարբերակում է:
Կան մի քանի ուսումնասիրություններ, որոնք չափել են FosB-ն և ΔFosB-ն քրոնիկ խթաններից հետո, որոնց համար չի հաստատվել, որ ΔFosB-ն գերիշխող իզոֆորմն է (ինչպես, օրինակ, ստորև նկարագրվածները): Այնուամենայնիվ, կան ուժեղ ապացույցներ, որ ΔFosB-ն, այլ ոչ թե FosB-ն, գերիշխող իզոֆորմն է քրոնիկ խթաններից հետո [ 10-12 ] : Ռյաբինինի և Վանգի ( 1998 ) ուսումնասիրությունը պարզել է, որ ցածր ալկոհոլ նախընտրող DBA/2J մկների մոտ չորս օրվա էթանոլի կրկնակի ներարկումները հանգեցրել են FosB արտահայտման զգալի աճի հետևյալ ուղեղի շրջաններում՝ առաջային կեղևային նշաձև կորիզ, կողմնային միջնապատի որովայնային մաս, կենտրոնական նշաձև, կողմնային նշաձև, կողմնային հիպոթալամուս, կորիզի ակումբենս թաղանթ, stria terminalis-ի միջուկ և թալամուսի պարավենտրիկուլյար կորիզ [ 13 ]: Նրանց արդյունքները բացահայտում են էթանոլին արձագանքող նեյրոշարժիչ: FosB արտահայտումը չափվել է նաև բարձր ալկոհոլ նախընտրող C57BL/6J մկների մոտ՝ սահմանափակ մուտքի պայմաններում էթանոլի ինքնուրույն ընդունման ձեռքբերման և պահպանման ընթացքում: Ինքնուրույն ընդունման ընթացքում FosB մակարդակի փոփոխություններ չեն եղել [ 14 ]: Այնուամենայնիվ, էթանոլի ինքնուրույն ընդունման սահմանափակ հասանելիությունից երկու շաբաթ անց, FosB մակարդակը բարձրացել է նշիկի կենտրոնական միջային կորիզում և Էդինգեր-Վեստֆալյան կորիզում [ 15 ]: Ընդհանուր առմամբ, զեկույցները բացահայտում են էթանոլի ինքնուրույն ընդունման մեջ ներգրավված նոր շրջաններ, ինչպես նաև ենթադրում են մեզոկորտիկոլիմբիկ ուղու և ընդլայնված նշիկի դերը [ 16 ]: Այնուամենայնիվ, կարևոր է նշել , որ ΔFosB մակարդակի փոփոխությունները կախված են էթանոլի ընդունման ուղուց, դեղաչափից և բուժման կամ ժամանակացույցի ազդեցության տևողությունից [ 13-15 ] :
Սույն հետազոտության մեջ օգտագործվող մկնիկի շտամները հետաքրքիր մոդելներ են տալիս կայուն եւ կրճատված ալկոհոլային նախապատվության եւ այդ հստակ ալկոհոլային պատասխանների համար պատասխանատու մեխանիզմների համեմատության համար: Այս ուսումնասիրությունը ցույց է տալիս, որ ալկոհոլի նախապատվությունը նվազեցնող մկները նույնպես զգալի զգայունություն են ցուցաբերում պարգեւատրման եւ սթրեսային սխեմաների մեջ (այդ թվում `Edinger-Westphal միջուկը, վրացական tegmental տարածքը, amygdala, միջուկի accumbens եւ cingulate cortex):
Արդյունքներ
Ալկոհոլի կոնցենտրացիաների եւ անբավարարության ժամանակների ազդեցությունը BxF եւ BxN մկների ինքնուրույն կառավարման վրա
Էթանոլի կոնցենտրացիաների և/կամ ծխելու դադարեցման ժամանակահատվածների փոփոխության հետևանքով էթանոլի հետագա սպառման վրա ազդեցության ցուցման համար մենք մշակել ենք չորս գրաֆիկ (խմբեր)՝ էթանոլի սպառումը չափելու համար (Նկար (Նկար 1 ա,բ): Յուրաքանչյուր հիբրիդի համար կար չորս փորձարարական խումբ՝ բարձր կոնցենտրացիաներ, բարձր կոնցենտրացիաներ ծխելու դադարեցման ժամանակահատվածներով, ցածր կոնցենտրացիաներ և ցածր կոնցենտրացիաներ ծխելու դադարեցման ժամանակահատվածներով: Էթանոլի նախընտրության (Նկար (Նկար 2) 2 ) և սպառման (Նկար (Նկար 3) 3 ) վերաբերյալ ամբողջական տվյալները (բոլոր խմբերի և երկու գենոտիպերի համար) ներկայացված են որպես հղում: Կայուն և նվազեցված ալկոհոլի նախընտրության վարքային ֆենոտիպերը սահմանելու և պատկերազարդելու համար 9% էթանոլի նախընտրության և սպառման տվյալները ներկայացված են նկարներ 4 , 4 և 5 : Այս վարքային ֆենոտիպերը հիմնված են բարձր կոնցենտրացիաների խմբերում առաջին, երկրորդ, երրորդ և չորրորդ ներկայացման և ցածր կոնցենտրացիաների խմբերի համապատասխան փորձարարական օրերի 9% էթանոլի նախընտրության և սպառման համեմատության վրա: Կատարվել է 9% էթանոլի նախընտրության և սպառման երկկողմանի ANOVA (գենոտիպ x ժամանակ): Բարձր կոնցենտրացիաների խմբի համար էթանոլի նախընտրությունը (Նկար (Նկար 4ա) 4 ա) և սպառումը (Նկար (Նկար 5ա) 5 ա) ավելի մեծ էին BxF-ի համար, քան BxN-ի համար, և BxF-ը ցուցաբերեց ալկոհոլի կայուն նախընտրություն և սպառում, մինչդեռ BxN-ը ցուցաբերեց ալկոհոլի նախընտրության և սպառման նվազում (ԷԹԱՆՈԼԻ ՆԱԽԸՆՏՐՈՒԹՅՈՒՆ – փոխազդեցություն F(3,54)=4.83, P < 0.01, գենոտիպ F(1,54)=24.10, P < 0.001, ժամանակ F(3,54)=9.92, P < 0.0001; ԷԹԱՆՈԼԻ ՍՊԱՌՈՒՄ – փոխազդեցություն N/S, գենոտիպ F(1,54)=50.73, P < 0.0001, ժամանակ F(3,54)=11.68, P < 0.0001): Բարձր կոնցենտրացիաների խմբի համար, որտեղ ժուժկալ էր ալկոհոլի օգտագործումը, էթանոլի նախընտրությունը ( Նկար 4բ) 4 բ) և սպառումը ( Նկար 5 բ) ավելի մեծ էին BxF-ի համար, քան BxN-ի համար, և BxF-ը ցուցաբերել է ալկոհոլի կայուն նախընտրություն և սպառում, մինչդեռ BxN-ը ցուցաբերել է ալկոհոլի նախընտրության և սպառման նվազում (ԷԹԱՆՈԼԻ ՆԱԽԸՆՏՐՈՒԹՅՈՒՆ – փոխազդեցություն F(3,132)=15.89, P < 0.0001, գենոտիպ F(1,132)=250.43, P < 0.0001, ժամանակ F(3,132)=27.48, P < 0.0001; ԷԹԱՆՈԼԻ ՍՊԱՌՈՒՄ – փոխազդեցություն F(3,132)=11.35, P < 0.0001, գենոտիպ F(1,132)=510.88, P < 0.0001, ժամանակ F(3,132)=22.42, P < 0.0001): Ցածր կոնցենտրացիաների խմբի համար էթանոլի նախընտրությունը (Նկար (Նկար 4c) 4c ) և սպառումը (Նկար (Նկար 5c )) ավելի մեծ էին BxF-ի համար, քան BxN-ի համար, և երկու հիբրիդներն էլ ցուցաբերեցին ալկոհոլի կայուն նախընտրություն և սպառում (ԷԹԱՆՈԼԻ ՆԱԽԸՆՏՐՈՒԹՅՈՒՆ – փոխազդեցություն N/S, գենոտիպ F(1,54)=12.2, P < 0.01, ժամանակ N/S; ԷԹԱՆՈԼԻ ՍՊԱՌՈՒՄ – փոխազդեցություն N/S, գենոտիպ F(1,54)=74.83, P < 0.0001, ժամանակ N/S): Ցածր կոնցենտրացիաների խմբի համար, որտեղ ալկոհոլը չէր օգտագործում, էթանոլի նախընտրությունը ( Նկար 4 դ) և սպառումը ( Նկար 5 դ) ավելի մեծ էին BxF-ի համար, քան BxN-ի համար, և երկու հիբրիդներն էլ ցուցաբերեցին ալկոհոլի նախընտրության և սպառման չափավոր նվազում (ԷԹԱՆՈԼԻ ՆԱԽԸՆՏՐՈՒԹՅՈՒՆ – փոխազդեցություն N/S, գենոտիպ F(1,132)=166.58, P < 0.0001, ժամանակ N/S; ԷԹԱՆՈԼԻ ՍՊԱՌՈՒՄ – փոխազդեցություն F(3,132)=3.61, P < 0.05, գենոտիպ F(1,132)=480.64, P < 0.0001, ժամանակ F(3,132)=7.87, P < 0.0001): Ամփոփելով՝ բարձր կոնցենտրացիաների խմբերում (առանց ձեռնպահության) BxF-ն ցուցաբերեց ալկոհոլի նկատմամբ կայուն նախընտրություն, մինչդեռ BxN-ն ցուցաբերեց ալկոհոլի նկատմամբ նվազեցված նախընտրություն, իսկ ցածր կոնցենտրացիաների խմբերում (առանց ձեռնպահության) և՛ BxF-ը, և՛ B6xN-ը ցուցաբերեցին ալկոհոլի նկատմամբ կայուն նախընտրություն: Քանի որ հետաքրքրության ֆենոտիպերը լավագույնս կարելի է արտացոլել խմբերում առանց ձեռնպահության, դրանք ուսումնասիրության մնացած մասի ուշադրության կենտրոնում են։
ΔFosB մակարդակները
Ալկոհոլի կայուն և նվազեցված նախընտրության ընթացքում քրոնիկ ակտիվացած նեյրոշղթաները բացահայտելու համար օգտագործվել է ΔFosB քանակականացումը և վերլուծությունը: Յուրաքանչյուր հիբրիդի համար կային երեք փորձարարական խմբեր՝ բարձր կոնցենտրացիաներ, ցածր կոնցենտրացիաներ և ջուր (վերահսկիչ): ΔFosB տվյալները ներկայացված են որպես ΔFosB դրական նեյրոնների տոկոս [(ΔFosB դրական նեյրոնների քանակը)/(ΔFosB դրական նեյրոնների քանակը + Nissl դրական նեյրոնների քանակը)] (աղյուսակ (աղյուսակ 1): 1 ): Նախորդ աշխատանքները ցույց են տվել, որ էթանոլի ազդեցությունը կարող է առաջացնել նեյրոդեգեներացիա [ 17 ]: Հետևաբար, մենք այս ուսումնասիրության մեջ ուսումնասիրել ենք նեյրոնների քանակը և չենք հայտնել, որ այս ուսումնասիրության մեջ քանակականացված ուղեղի շրջանների համար գենոտիպի կամ խմբի հիման վրա նշանակալի տարբերություն կա: Կատարվել են ΔFosB տվյալների հետևյալ երեք վերլուծությունները՝ 1) եռակողմ ANOVA (գենոտիպ x խումբ x ուղեղի շրջան), 2) երկկողմանի ANOVA (ուղեղի շրջան x խումբ) յուրաքանչյուր գենոտիպի համար, և 3) մշակվել են կորելացիոն մատրիցներ՝ կորելացիոն ցանցերը քարտեզագրելու համար:
Կրկնակի չափումների եռակողմ ANOVA-ն (գենոտիպ x խումբ x ուղեղի շրջան) բացահայտեց գենոտիպ x ուղեղի շրջանի փոխազդեցություն [F(15,375) = 2.01, P < .05], խումբ x ուղեղի շրջանի փոխազդեցություն [F(15.375) = 1.99, P < 0.01], և ուղեղի շրջանի հիմնական էֆեկտ [F(15,375) = 43.36, P < .000]: Յուրաքանչյուր գենոտիպի համար կրկնակի չափումների երկկողմ ANOVA-ն (ուղեղի շրջան x խումբ) ցույց տվեց, որ գոյություն ուներ խմբի և ուղեղի շրջանի հիմնական էֆեկտ և՛ BxF-ի, և՛ BxN-ի համար [BxF – F(2,374) = 11.79, P < .0001, խմբի հիմնական էֆեկտ; F(15,374) = 25.64, P < .0001, ուղեղի շրջանի հիմնական էֆեկտ; BxN – F(2,360) = 43.38, P < .0001, խմբի հիմնական ազդեցությունը; F(15,360) = 23.73, P < .0001, գենոտիպի հիմնական ազդեցությունը]: Հետհոկ վերլուծությունը բացահայտեց խմբային վեց նշանակալի տարբերություններ BxN-ի համար (Նկար (Նկար 6a-c): 6 a-c): La, CeC/CeL, EW և VTA ցուցանիշներում ΔFosB-ի տոկոսային մակարդակները ավելի բարձր էին ցածր կոնցենտրացիաների խմբում, քան ջրի խմբում: CeMPV-ում ΔFosB-ի տոկոսային մակարդակն ավելի բարձր էր բարձր կոնցենտրացիաների խմբում, քան ջրի խմբում: EW-ում ցածր կոնցենտրացիաների խմբում ΔFosB-ի տոկոսային մակարդակն ավելի բարձր էր, քան բարձր կոնցենտրացիաների խմբում: Քանակականացված ուղեղի մյուս բոլոր շրջանների ΔFosB տվյալները ներկայացված են աղյուսակ 1-ում: 1 : Պիրսոնի r կորելացիոն վերլուծությունն օգտագործվել է որոշելու համար, թե արդյոք տվյալ ուղեղի շրջանում ΔFosB դրական նեյրոնների տոկոսը կապված է էթանոլի սպառման կամ նախընտրության հետ: Էթանոլի սպառումը և նախընտրությունը BxN մկների EW-ում և VTA-ում ցույց տվեցին նշանակալի դրական կապ %ΔFosB-ի հետ (ԷԹԱՆՈԼԻ ՍՊԱՌՈՒՄ – EW r=0.85; VTA r=0.85; ԷԹԱՆՈԼԻ ՆԱԽԱՊԱՏՐԱՍՏՈՒԹՅՈՒՆ – EW r=0.83, VTA r=0.88; p < 0.05 բոլորի համար):
ΔFosB արտահայտության, գենոտիպի, ուղեղի շրջանի և էթանոլի սպառման միջև բարդ կապը հետագայում ուսումնասիրվել է սկզբունքային բաղադրիչների վերլուծության և հիերարխիկ կլաստերացման միջոցով: Հիմնական բաղադրիչների վերլուծությունը ցույց է տվել, որ տվյալների փոփոխականության մեծ մասը (~80%) ներկայացված է 5 բաղադրիչով: Այնուհետև իրականացվել է անվերահսկելի հիերարխիկ կլաստերացում (խմբավորված անհատների և ուղեղի շրջանների կողմից) և դասավորվել է առաջին հիմնական բաղադրիչի միջոցով (Նկար 7 ) : Անհատական կլաստերացումը բացահայտել է էթանոլի սպառման վրա հիմնված խմբավորման ուժեղ, բայց ոչ կատարյալ օրինաչափություններ՝ անկախ գենոտիպից: Էթանոլ չօգտագործած մկներից շատերը կլաստերացվել են միասին և ցուցաբերել են միջինից ցածր ընդհանուր ΔFosB, իսկ ալկոհոլի նկատմամբ կայուն նախասիրություն ցուցաբերած մկներից շատերը կլաստերացվել են միասին և ցուցաբերել են միջինից բարձր ընդհանուր ΔFosB: Այս երկու կլաստերներն ամենատարբերն էին: Միջանկյալ երեք կլաստերները ներկայացնում էին ΔFosB արժեքների և էթանոլի խմելու ֆենոտիպերի մեծ, փոքր և միջին խառնուրդ:
Քննարկում
Երկու F1 հիբրիդային մկների շտամների համեմատության ժամանակ նկատվել են ալկոհոլի ինքնուրույն օգտագործման տարբեր վարքագծեր. BxN-ը ցույց է տալիս ալկոհոլի նախընտրության նվազում ալկոհոլի բարձր կոնցենտրացիաների և ժուժկալության ժամանակահատվածներից հետո, մինչդեռ BxF-ը ցույց է տալիս ալկոհոլի նախընտրության կայունություն : BxF-ը մոդելավորում է կայուն, բարձր սպառում (ալկոհոլի նախընտրության կայունություն), իսկ BxN-ը՝ չափավոր խմելու (ալկոհոլի նախընտրության նվազեցում): Նեյրոնային պլաստիկությունը (կամ ակտիվությունը, որը չափվում է ΔFosB մակարդակներով) տարբեր էր՝ կախված էթանոլի փորձից, ինչը հետագայում հաստատում է որոշակի նեյրոնային շղթաների դերը ալկոհոլի նախընտրության կայունության և նվազեցման մեջ:
Բարձր ալկոհոլ օգտագործող C57BL/6 շտամի դեպքում էթանոլի նախընտրությունը և սպառումը մեծապես կախված են էթանոլի սկզբնական կոնցենտրացիայից, ձեռնպահության տևողությունից և ենթաշտամից (C57BL/6Cr կամ C57BL/6J) [ 7 , 18 ]: Մենք պարզեցինք, որ BxF մկների մոտ էթանոլի նախընտրությունը և սպառումը կայունորեն ավելի բարձր էին (և ավելի կայուն, քան BxN-ում) փորձարկված չորս տարբեր ռեժիմներում: BxN-ում էթանոլի չափավոր բարձր նախընտրությունը և սպառումը պահպանվել են քրոնիկ խմելու միայն մեկ ռեժիմի դեպքում (ցածր կոնցենտրացիաներ առանց ձեռնպահության), մինչդեռ նախընտրության և սպառման նվազումներ են նկատվել բոլոր մյուս փորձարկված քրոնիկ խմելու ռեժիմների դեպքում: BxN-ի ալկոհոլի նվազեցված նախընտրությունը առաջարկում է նորարարական կենդանական մոդել, որտեղ փորձը (էթանոլի կրկնակի ընդունումը էթանոլի բազմակի բարձր կոնցենտրացիաների և/կամ ձեռնպահության մի քանի կարճ ժամանակահատվածների փորձից հետո) զգալիորեն նվազեցնում է նրանց արձագանքը նախկինում բարձր նախընտրելի էթանոլի կոնցենտրացիային:
Ինքնուրույն և փորձարարի կողմից ընդունված էթանոլը առաջացնում է ուղեղի տարբեր նյութափոխանակության քարտեզներ, ինչը ենթադրում է, որ էթանոլի ուժեղացնող ազդեցության հիմքում ընկած են որոշակի սխեմաներ [ 8 , 9 ]: Մենք ստուգեցինք այն վարկածը, որ ալկոհոլի նկատմամբ կայուն և նվազեցված նախընտրության վարքային ֆենոտիպերը ներկայացված են ինդուկտիվ տրանսկրիպցիոն գործոնի՝ ΔFosB-ի դիֆերենցիալ արտադրությամբ ուղեղի այն շրջաններում, որոնք հայտնի են որպես պարգևատրման, հակակրանքի և սթրեսի հետ կապված: ΔFosB-ն տրանսկրիպցիոն գործոն է՝ եզակի երկարատև կայունությամբ և չի անզգայանում խթանների նկատմամբ, ինչպես c-Fos-ը, այլ կուտակվում է քրոնիկ բուժումների ընթացքում: ΔFosB-ի աճը պայմանավորված է նեյրոնային ակտիվության աճով և, ենթադրվում է, որ արտացոլում է նեյրոնային երկարատև պլաստիկությունը: Մենք պարզեցինք, որ ուղեղի շրջաններում ΔFosB դրական նեյրոնների տոկոսը կախված է գենոտիպից (BxF և BxN) և խմբից (ջրի վերահսկողություն, ցածր կոնցենտրացիաներ և բարձր կոնցենտրացիաներ):
F կամ BxN, հետհոսքային վերլուծությունը ցույց տվեց, որ էթանոլի կամավոր օգտագործումը հանգեցրել է ΔFosB-ի աճի EW կորիզում, VTA-ում և նշիկում՝ ցույց տալով նեյրոնային պլաստիկության աճ ուղեղի այն շրջաններում, որոնք հայտնի են որպես էթանոլի, պարգևատրման և սթրեսային արձագանքների մասնակից: Բարձր կոնցենտրացիաների խմբում (ալկոհոլի նկատմամբ նախընտրության նվազում) BxN մկները EW-ում նվազեցրել են նեյրոնային պլաստիկությունը, ինչը ենթադրում է, որ այս նեյրոնները արձագանքում են ալկոհոլի ընդունմանը փորձից կախված պլաստիկությամբ: Ցածր կոնցենտրացիաների խմբում (արտահայտված ալկոհոլի նկատմամբ նախընտրության կայունություն) EW-ում նեյրոնային պլաստիկությունն ավելի մեծ է, քան բարձր կոնցենտրացիաների և ջրի վերահսկիչ խմբերում: Չնայած այն իրականացվել է էթանոլի խմելու տարբեր պարադիգմաների և գենետիկ մկների մոդելների օգտագործմամբ, BxN մկների EW-ում մեր արդյունքները համընկնում են էթանոլի սպառման նախորդ ուսումնասիրությունների հետ [ 14 , 15 ]: Ոչ պրեգանգլիոնային EW-ն վերջերս բնութագրվել է որպես պերիոկուլոմոտոր ուրոկորտին (Ucn) պարունակող նեյրոններ պարունակող [ 19 ]: Ucn1-ը կորտիկոտրոպինի ազատող գործոնի (CRF) նման պեպտիդ է, որը կապվում է CRF1 և CRF2 ընկալիչների հետ: Գենետիկական, դեղաբանական և վնասվածքների մոտեցումներով նախորդ ուսումնասիրությունները ցույց են տվել, որ Ucn1-ը ներգրավված է ալկոհոլի սպառման կարգավորման մեջ [ 19-22 ] : Կրծողների մոտ ալկոհոլի բարձր օգտագործման հայտնի գենետիկ նախատրամադրվածություն կա, որը կապված է EW և LSi-ում Ucn1-ի ավելի բարձր բազալ մակարդակների հետ [ 23 ]: Այսպիսով, EW-ում BxF մկների մոտ ալկոհոլի բարձր նախընտրություն և սպառող BxF մկների մոտ հետընտրական նշանակության բացակայությունը անսպասելի էր: Հնարավոր է, որ սա պայմանավորված է BxF ջրի խմբում ΔFosB մակարդակի մի փոքր բարձր տոկոսով՝ համեմատած BxN ջրի խմբի հետ: Իրոք, ալկոհոլի կայուն նախընտրություն ցուցաբերող բոլոր մկների մոտ ΔFosB մակարդակի տոկոսները (BxF բարձր կոնցենտրացիաների խումբ, BxF ցածր կոնցենտրացիաների խումբ և BxN ցածր կոնցենտրացիաների խումբ) բավականին նման էին:
BxN-ի դեպքում, ցածր կոնցենտրացիաների խմբում էթանոլի սպառումը մեծացրել է նեյրոնային պլաստիկությունը VTA-ում (ավելի մեծ, քան բարձր կոնցենտրացիաների և ջրի վերահսկիչ խմբերում): Էթանոլի նախընտրությունը և սպառումը նույնպես ավելի մեծ էին ցածր կոնցենտրացիաների խմբում : Հետհոկ նշանակալիության բացակայությունը, որը մենք դիտարկեցինք VTA-ում բարձր ալկոհոլ նախընտրող և օգտագործող BxF մկների մոտ, անսպասելի էր և կարող է պայմանավորված լինել ջրի վերահսկիչ խմբում ΔFosB-ի մի փոքր ավելի բարձր բազային մակարդակներով: ΔFosB մակարդակների տոկոսը մի փոքր բարձր էր BxF ջրի խմբում՝ համեմատած BxN ջրի խմբի հետ, մինչդեռ ΔFosB մակարդակների տոկոսը բավականին նման էր ալկոհոլի կայուն նախընտրություն ցուցաբերող բոլոր մկների համար (BxF բարձր կոնցենտրացիաների խումբ, BxF ցածր կոնցենտրացիաների խումբ և BxN ցածր կոնցենտրացիաների խումբ): VTA դոպամինային համակարգը մեծ դեր է խաղում էթանոլի ուժեղացնող ազդեցությունների միջնորդության գործում և մասնակցում է էթանոլի և պարգևատրման հետ կապված վարքագծի համար կարևոր բազմաթիվ փոխադարձ կապերի [ 24-26 ] : Բացի այդ, VTA- ն պրոյեկտվում է նշագեղձի և EW կորիզի վրա: Առնետները ցույց են տվել, որ ինքնուրույն էթանոլ են ներարկում անմիջապես ՎՏԱ-ի մեջ [ 27 ]: Բացի այդ, էթանոլի ազդեցությունը մեծացնում է դոպամիներգիկ նեյրոնների ակտիվացման հաճախականությունը ՎՏԱ-ում [ 28 , 29 ]: Ակտիվացման հաճախականության աճը կարող է կապված լինել ՎՏԱ-ում ΔFosB ինդուկցիայի հետ, որը մենք դիտարկել ենք BxN-ում քրոնիկ կամավոր էթանոլի ընդունումից հետո:
Ալկոհոլի կախվածությունը առաջացնում է երկարաժամկետ neuroadaptations, ինչը հանգեցնում է բացասական հուզական վիճակների. բացասական ամրապնդման կարեւոր մեխանիզմը amygdala- ի շրջանակներում կորտիկոտրոպին-ազատող գործոն (CRF) ազդանշան է: [30]: CeA- ի նեյրոնների դեղագործական մանիպուլյացիաները նպատակաուղղված են GABA, CRF, opioid, serotonin, dynorphin եւ norepinephrine reseptors [25,31-34]: ԳABA- ի հակաօգտագործողները, ինչպես նաեւ CRF- ի հակադիտողները, նվազեցնում են էթանոլի սպառումը [32,33,35]. Ցեմենտի լյարդները կրճատում են վտանգավոր էթանոլի օգտագործումը [36]. Մեր բացահայտումները հետագայում նպաստում են CeA- ի դերի ալկոհոլային խմիչքի վարքագծի կանոններում: Գաբաերջիկ նեյրոնները կենտրոնական ամիրդալայում ձեւավորվում են տարասեռ բնակչության, որոնց կապերը հայտնվում են իրենց պեպտիդների պարունակության հետ: Այս GABaergic նեյրոնները ինտեգրվում են CeA- ի արտադրողական գործունեության վրա: Ինչպես վերանայվել է [Wee եւ Koob (2010]), բերբեւէ ուսումնասիրությունները դինորֆինի եւ կափփայի օփիոիդային ընկալիչների դերը որոշել են էթանոլի խթանի պահպանման եւ թուլացման ժամանակe [37]: Վերջերս Walker- ը ցույց է տվել, որ κ-opioid- ի վերափոխիչ հակադեոնտիկ, ոչ-բինալֆորֆիմին, ընդլայնված amygdala- ի շրջանակներում ընտրովիորեն նվազեցնում է էթանոլի ինքնակառավարումը կախյալ կենդանիներից [38]: Kappa opioid reseptor signaling- ը մնում է ստրեսի, պարգեւի եւ զզվելի խաչմերուկում հետազոտության հիմնական հետաքրքրությունը: Այն նաեւ ցույց է տվել, որ սթրեսից բխող էթանոլի ինքնակառավարումն իրականացվում է kappa opioid reseptor ազդանշանների միջոցով: [39]: Կենտրոնական CeA- ն կարող է բաժանվել լոտո-գլխիկով (CeL / CeC) եւ միջին միջնամասում: CeB / CeC- ի GABAergic նեյրոնները ստանում են դոպամիներգիկ innervations VTA- ից, ինչպես նշվեց նախկինում, այս նեյրոնները ակտիվանում են սուր վարակազերծման վարվելուց հետո եւ ցուցադրվում են ΔFosB մկների աճող ալկոհոլի նախապատվությունը: Բացի այդ, տեսեք Mc [Հարսը (2002]) գերազանց վերանայման համար CeA- ի եւ ալկոհոլի [40]: Մեր հետազոտության մեջ, BxN մկնիկը կայուն ալկոհոլային նախասիրությամբ (Ցածր կոնցենտրացիաների խումբ) ցուցադրեց CeC / CeL- ի եւ La եւ BxN- ի մկների աճող նեյրոնային պլաստիկությունը, որը նվազեցրեց ալկոհոլի նախապատվությունը (Բարձր կոնցենտրացիաների խումբ) ցուցադրեց CeMPV- ում ավելացված նեյրոնային պլաստիկությունը: Այս արդյունքները ցույց են տալիս, որ հատուկ էթանոլի փորձը ներառում է պլաստիկությունը ամիբդալում GABAergic neurons- ում: Այս տվյալների հետ մեկտեղ, VTA- ի եւ EW- ի նեյրոնային պլաստիկության համապատասխան փոփոխությունների հետ մեկտեղ, մենք առաջարկում ենք, որ այս օղակը ենթարկվում է զգալի զգայունության, կայուն ալկոհոլի նախապայմանների պայմաններում:
Նախորդ հետազոտությունները ցույց են տվել, որ C57BL/6J մկները կարող են հասնել արյան մեջ ալկոհոլի բարձր մակարդակի՝ երկու շշի ընտրություն խմելով, սակայն արյան մեջ ալկոհոլի այդ մակարդակը չի պահպանվում, և հաճախ խմելը չի համապատասխանում Դոլի և Ջենթրիի (1984) [ 41 , 42 ] կողմից սահմանված դեղաբանական մոտիվացիայի չափանիշներին: Ալկոհոլի նկատմամբ նվազեցված նախասիրություն ցուցաբերող BxN մկները սպառել են ավելի քիչ, քան կարելի էր ակնկալել C57BL/6J տիպիկ մկից [ 1 ]: Հետևաբար, չնայած մենք արյան մեջ ալկոհոլի նմուշներ չենք վերցրել, քիչ հավանական է, որ ալկոհոլի նկատմամբ նվազեցված նախասիրություն ցուցաբերող BxN մկները հասել են արյան մեջ դեղաբանորեն համապատասխան դեղաբանական մակարդակի, ինչը ենթադրում է, որ արյան մեջ ալկոհոլի բարձր կոնցենտրացիաները անհրաժեշտ չեն ուղեղի այս շրջաններում պլաստիկություն առաջացնելու համար: Կարևոր է նշել, որ խմբի խիստ նշանակալի ազդեցություն գոյություն ունի նաև BxF-ում, չնայած BxF ուղեղի շրջանների համար հետհոկ արդյունքները (ուղղված բազմակի համեմատությունների համար) չեն ցույց տվել ΔFosB դրական նեյրոնների տոկոսի նշանակալի փոփոխություններ որևէ շրջանի համար՝ էթանոլի քրոնիկ սպառումից հետո՝ այս տարբեր գրաֆիկներով:
Փոփոխականների միջև հնարավոր կապերը պատկերացնելու համար կատարվել է հիերարխիկ կլաստերացում: Արդյունքում ստացված վերլուծության ջերմային քարտեզը ցույց է տալիս ΔFosB մակարդակների և էթանոլի սպառման միջև ընդհանուր միտում՝ անկախ գենոտիպից: ΔFosB-ի ավելի բարձր մակարդակները կապված էին ալկոհոլի բարձր սպառման հետ, իսկ ΔFosB-ի ավելի ցածր մակարդակները՝ վերահսկիչ կենդանիների հետ. սակայն, կապի ուժը բավարար չէր խմելու ֆենոտիպերը ճշգրիտ կանխատեսելու համար՝ հիմնվելով միայն ΔFosB մակարդակների վրա:
Եզրակացություններ
Հատկապես ալկոհոլային ինքնակառավարման վարքագիծը դիտվում է մկների երկու F1 հիբրիդային շտամներով. BxN ցույց է տալիս ալկոհոլի նախապատվությունը նվազեցրած ալկոհոլի բարձր կոնցենտրացիայի փորձից հետո, իսկ BxF ցույց է տալիս ալկոհոլի նախապատվությունը: BxF մոդելները կայուն, բարձր սպառումը (կայուն ալկոհոլի նախապատվությունը) եւ BxN մոդելները չափավոր խմելու (նվազեցված ալկոհոլային նախապատվությունը): Նեյրոնային պլաստիկության փոփոխությունները (ինչպես ΔFosB մակարդակներով) փոփոխվել են փորձի կախվածությունը, ինչպես նաեւ ուղեղի տարածաշրջանը եւ գենոտիպին հատուկ, հետագայում որոշելով նեյրոնային սխեմաները `հիմնված են էթանոլի օգտագործման մոտիվացիայի վրա: Այս արդյունքները ցույց են տալիս, որ հիբրիդային մկների մեկ ծնողական շղթայի փոփոխությունը հանգեցնում է ալկոհոլի սպառման օրինակների փոփոխությանը եւ ΔFosB արտահայտության ձեւավորման մեջ նկատելի փոփոխությունների, ինչը ենթադրում է, որ տարբեր հիբրիդային մկների մեջ ներգրավված են ուղեղի տարբեր ցանցերը:
Մեթոդներ
էթիկա
Այս ուսումնասիրությունը կատարվել է խիստ համապատասխան `Առողջության ազգային ինստիտուտների լաբորատոր կենդանիների խնամքի եւ օգտագործման ուղեցույցում ներկայացված առաջարկությունների համաձայն: Արձանագրությունը հաստատվել է Օսթինում (AUP 2010-00028) Տեխասի համալսարանի կենդանիների պահպանության եւ օգտագործման կոմիտեին կողմից: Բոլոր վիրահատությունները կատարվեցին նատրիումի պենտոբարբնական անզգայացման ժամանակ, եւ բոլոր ջանքերը գործադրվեցին տառապանքը նվազեցնելու համար:
Կենդանիներ
Ուսումնասիրությունները կատարվել են C57BL/6J և FVB/NJ կամ NZB/B1NJ մկներից ստացված խաչասերված էգ F1 հիբրիդ մկների վրա (BxF F1 և BxN F1, մայրական շտամ x հայրական շտամ): C57BL/6J, FVB/NJ և NZB/B1NJ սելեկցիոներները ձեռք են բերվել The Jackson Laboratory-ից (Բար Հարբոր, Մեն) և զուգավորվել են 7-8 շաբաթականում: Ձագերը բաժանվել են յուրաքանչյուր գենոտիպից իզոսեքսուալ խմբերի (BxF F1, BxN F1): Մենք փորձարկել ենք միայն էգ մկներին՝ նախկինում հավաքված տվյալների հետ համեմատությունը հեշտացնելու համար [ 1 , 5 , 6 ]: Մկները տեղավորվել են ստանդարտ վանդակներում՝ սնունդն ու ջուրը տրամադրվելով ad libitum : Գաղութային սենյակը և փորձարկման սենյակը գտնվում էին 12-ժամյա լույս:12-ժամյա մթության ցիկլի վրա (լույսերը միանում են ժամը 07:00-ին):
Երկու շշերի ընտրություն էթանոլի նախապատվությունների փորձարկում
Երկու շշի ընտրության մեթոդը կիրառվել է էգ BxF և BxN մկների մոտ էթանոլի կամավոր ինքնուրույն ընդունման օրինաչափությունները որոշելու համար [ 1 , 6 ]: F1 հիբրիդային էգ մկները (63 օրական) առանձին տեղավորվել են ստանդարտ վանդակներում՝ մեկ շաբաթ սովորելով ջուր պարունակող խցանված խողովակներով շշերին, նախքան էթանոլի լուծույթի ներմուծումը: Սովորելուց հետո մկները հասանելիություն ունեին երկու նույնական շշերի. մեկը պարունակում էր ջուր, իսկ մյուսը՝ էթանոլի լուծույթ: Խողովակների դիրքերը փոխվում էին ամեն օր՝ դիրքի նախասիրությունները վերահսկելու համար: Հնարավոր թափվելը և գոլորշիացումը հաշվի առնելու համար, վերահսկիչ վանդակներում առանց մկների խողովակներից հանված միջին քաշը հանվում էր յուրաքանչյուր օրվա խմելու անհատական արժեքներից: Մկները կշռվում էին յուրաքանչյուր 4 օրը մեկ ամբողջ փորձի ընթացքում: Փորձի ընթացքում հեղուկի սպառումը չափվում էր ամեն օր: Սպառված էթանոլի քանակը և էթանոլի նախընտրությունը հաշվարկվել են յուրաքանչյուր մկան համար, և այդ արժեքները միջինացվել են էթանոլի յուրաքանչյուր կոնցենտրացիայի համար: Ալկոհոլի կոնցենտրացիաների և ժուժկալության ժամանակահատվածների ազդեցությունը BxF և BxN մկների ինքնաընդունման վրա ցույց է տրվել՝ նշանակելով բարձր կոնցենտրացիաների հասանելիություն ունեցող փորձարարական խումբ (3-35% էթանոլի լուծույթների հասանելիության աստիճանական աճ, որին հաջորդում են 9, 18 և 27% էթանոլի 3 կրկնվող ցիկլեր, որոնք ավարտվում են 9% էթանոլի վերջնական ընդունումով) և ցածր կոնցենտրացիաների հասանելիություն ունեցող մեկ այլ խումբ (3-9% էթանոլի հասանելիություն, իսկ փորձի մնացած մասն իրականացվել է 9% էթանոլի հասանելիությամբ): Այս խմբերից յուրաքանչյուրն ուներ ենթախումբ, որը ունեցել կամ չի ունեցել ժուժկալության երեք մեկշաբաթյա ժամանակահատված: Վերահսկիչ մկները նույն պայմաններում են ապրել, ինչ փորձարարական մկները, բայց նրանց առաջարկվել է միայն մեկ շիշ ջուր:
Ընդհանուր առմամբ, յուրաքանչյուր հիբրիդի համար կար հինգ խումբ՝ Ջուր (n=14-16), Բարձր կոնցենտրացիաներ (n=10), Բարձր կոնցենտրացիաներ՝ զսպվածության ժամանակահատվածով (n=20), Ցածր կոնցենտրացիաներ (n=10) և Ցածր կոնցենտրացիաներ՝ զսպվածության ժամանակահատվածով (n=20): Երկու շշերի ընտրության խմբերի մանրամասն գրաֆիկի համար տե՛ս նկար 1-ը :
ΔFosB Immunohistochemistry եւ քանակականացում
ΔFosB իմունահյուսվածքաքիմիան (IHC) չափվել է մկների ուղեղի 16 շրջաններում, որոնք 72 օր անընդմեջ օգտվել են կա՛մ ջրից (Վերահսկիչ խումբ), կա՛մ ջրից ու ալկոհոլից [Բարձր և ցածր կոնցենտրացիաներ]: Բարձր կոնցենտրացիաների ազդեցությունը էթանոլի նախընտրության և սպառման վրա շատ ավելի մեծ էր, քան ձեռնպահության ազդեցությունը. հետևաբար, ձեռնպահության շրջաններ ունեցած խմբերը չեն ներառվել ΔFosB IHC չափումներում: Ավելին, փորձը իրականացվել է ալկոհոլի նկատմամբ կայուն կամ նվազեցված նախընտրության առաջին դրսևորումից հետո՝ ցույց տալու համար, որ վարքային ֆենոտիպերը կայուն են էթանոլի կոնցենտրացիայի փոփոխությունների կրկնվող ցիկլերի դեպքում՝ էթանոլի քրոնիկ սպառման ազդեցությունն ուսումնասիրելու համար: Փորձի 73-րդ օրը ալկոհոլը հանելուց չորսից ութ ժամ անց մկները խորը անզգայացվեցին (175 մգ/կգ նատրիումի պենտոբարբիտալ) և սրտի ներսում պերֆուզիայի ենթարկվեցին 20 մլ 0.01 Մ ֆոսֆատային բուֆերային աղային լուծույթով (PBS), որին հաջորդեց 100 մլ 4% պարաֆորմալդեհիդ PBS-ում: Ուղեղները հեռացվել են, հետագայում ֆիքսվել են 4% պարաֆորմալդեհիդի մեջ 4°C ջերմաստիճանում, ներդրվել 3% ագարոզայի մեջ, կտրվել (50 մկմ, կորոնալ) վիբրատոմի վրա, տեղադրվել կրիոպաշտպանիչի մեջ (30% սախարոզ, 30% էթիլենգլիկոլ և 0.1% պոլիվինիլպիրոլիդոն PBS-ում) գիշերը 4°C ջերմաստիճանում և պահվել -20°C ջերմաստիճանում մինչև IHC-ի համար մշակումը: Հալեցված հատվածները լվացվել են PBS-ով, մշակվել 0.3% H2O2-ով և ինկուբացվել մեկ ժամ 3% նորմալ այծի շիճուկում՝ ոչ սպեցիֆիկ պիտակավորումը նվազագույնի հասցնելու համար: Այնուհետև հյուսվածքային հատվածները ինկուբացվել են գիշերը 4°C ջերմաստիճանում 3% նորմալ այծի շիճուկում և հակա-FosB-ում (SC-48, 1:5000 նոսրացում, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA): Կտրվածքները լվացվեցին, մեկ ժամ ինկուբացվեցին բիոտինիլացված այծի հակա-ճագարի Ig-ում (1:200 նոսրացում, Vector Laboratories, Burlingame, CA), լվացվեցին և ինկուբացվեցին ավիդին-բիոտին համալիրում (1:200 նոսրացում, Elite kit-Vector Laboratories): Պերօքսիդազային ակտիվությունը վիզուալիզացվեց 0.05% դիամինոբենզիդինի հետ ռեակցիայի միջոցով (պարունակում է 0.015% H 2 O 2 ): Հյուսվածքային կտրվածքները Nissl հականերկվեցին (օգտագործելով մեթիլեն կապույտ/լազուր II): Սահիկները կոդավորվեցին կույր հաշվարկի համար: ΔFosB-IR նեյրոնները հաշվվեցին 50X (յուղ) մեծացմամբ՝ օգտագործելով օպտիկական ֆրակցիատորի մեթոդը և StereoInvestigator համակարգչային ծրագիրը: Նմուշառման պարամետրերի տեղեկատվություն. հաշվարկման շրջանակը (50 մկմ x 50 մկմ x 10 մկմ) նույնն էր քանակապես որոշված բոլոր շրջանների համար։ սակայն, ցանցի չափը որոշվել է ուղեղի յուրաքանչյուր շրջանի համար՝ ապահովելու համար, որ երկկողմանի բջիջների ընդհանուր քանակը հավասար լինի 100-300-ի՝ 0.1-ից փոքր տատանման գործակից ստանալու համար: Տվյալները հաշվարկվել են որպես ΔFosB դրական կորիզների տոկոս (ΔFosB դրական կորիզների քանակ/նեյրոնների քանակ) յուրաքանչյուր շրջանի համար:
Այս ուսումնասիրության մեջ օգտագործված FosB հակամարմինը (SC-48, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) ստեղծվել է FosB-ի ներքին շրջանի դեմ և ճանաչում է և՛ FosB-ն, և՛ ΔFosB-ն։ Չնայած այս հակամարմինը ճանաչում է և՛ FosB-ն, և՛ ΔFosB-ն, այս ուսումնասիրության մեջ քանակապես որոշված իմունադրական նեյրոնները կանվանվեն ΔFosB դրական նեյրոններ, քանի որ ցույց է տրվել, որ չարաշահման դեղամիջոցները, այդ թվում՝ ալկոհոլը, նեյրոններում հատուկ ինդուկցում են ΔFosB, այլ ոչ թե FosB։ Պերոտի և այլք։ ([ 2008 ]) չափել են ΔFosB ինդուկցիան (ի պատասխան չարաշահող թմրամիջոցների, այդ թվում՝ ալկոհոլի քրոնիկ ընդունման)՝ օգտագործելով երկու հակամարմին՝ մեկը, որը ճանաչում է FosB-ն և ΔFosB-ն (SC-48) և մեկը՝ ΔFosB-ի համար ընտրողական (առևտրային առումով հասանելի չէ) և պարզել են, որ բոլոր ուսումնասիրված դեղամիջոցների դեպքում FosB հակամարմնի (SC-48) միջոցով դիտարկված իմունոռեակտիվությունը պայմանավորված է ΔFosB-ով, քանի որ նրանք չեն հայտնաբերել որևէ իմունոռեակտիվ նեյրոն՝ օգտագործելով FosB-ի լրիվ երկարության համար ընտրողական հակամարմին [ 10 ]: Բացի այդ, հայտնի է, որ ΔFosB-ն ինդուկցվում է ուղեղի շրջանի և բջջային տիպի-սպեցիֆիկ եղանակով՝ տարբեր քրոնիկ բուժումներով, և այս թեմայի վերաբերյալ կան գերազանց ակնարկներ [ 11 , 43 , 44 ]:
Նեյրոանատոմիկ կառուցվածքների հապավումները եւ վայրերը
Il – ինֆրալիմբիկ կեղև (+1.70 մմ); Cg1 – գանգոսկրային կեղև 1 (+1.1 մմ); Cg2 – գանգոսկրային կեղև 1 (+1.10 մմ); NAcc միջուկ – accumbens կորիզ (+1.10 մմ); NAcc թաղանթ – accumbens կորիզ (+1.10 մմ); LSi – միջանկյալ կողմնային միջնապատ (+1.10 մմ); La – կողմնային նշիկ (−1.22 մմ); Bla – բազոլատերալ նշիկ (−1.22 մմ); CeC/CeL – կենտրոնական պարկուճային և կենտրոնական կողմնային նշիկ (−1.22 մմ); CeMPV – նշիկի կենտրոնական կորիզի միջային հետին-փորոքային մասը (−1.22 մմ); PAG – պերիաակուդուկտալ մոխրագույն (−3.64 մմ); EW – Էդինգեր-Վեստֆալյան կորիզ (−3.64 մմ); VTA – որովայնային տեգմենտալ տարածք (−3.64 մմ); DR – մեջքային ռաֆե (-4.60 մմ); PBN – պարաբրախիալ կորիզ (-5.2 մմ); NTS – միջուկի տրակտուս սիլիտարիուս (-6.96 մմ): Մկնիկի ուղեղը ստերեոտաքսիկ կոորդինատներում [ 45 ] օգտագործվել է մեկից երեք հատվածներ սուբյեկտիվորեն համապատասխանեցնելու համար՝ ուղեղի յուրաքանչյուր հատվածի քանակականացման համար:
Վիճակագրական ընթացակարգեր
Տվյալները ներկայացվում են որպես միջին ± SEM, բացառությամբ այն դեպքերի, երբ այլ բան նշված չէ: Տվյալները սովորաբար բաժանվում են: Վիճակագրությունը կատարվել է 6 վիճակագրական տարբերակի (StatSoft, Tulsa, OK, ԱՄՆ) եւ GraphPad Prism- ի 4.00 տարբերակի (GraphPad Software, San Diego, CA, ԱՄՆ) օգտագործմամբ: Կրկնվող միջոցառումները երկկողմանի ANOVA- ները իրականացվել են էթանոլի սպառման եւ նախասահմանման տվյալների համար, որպեսզի գնահատեն խմբերի միջեւ եղած տարբերությունները: ΔFosB- ի տվյալները կատարվել են երկու եւ երեք ձեւով ANOVA- ների համար, որոնք գնահատելու են խմբի (բարձր կոնցենտրացիաների, ցածր կոնցենտրացիաների եւ ջրի), ուղեղի տարածաշրջանի եւ գենոտիպի փոխազդեցությունները եւ հիմնական ազդեցությունները: Bonferroni- ի բազմակողմանի համեմատությունը եւ Bonferroni- ի հետընտրական շտկումները կատարվել են համապատասխան դեպքերում: Մասնավորապես, մենք ենթադրում էինք, որ սթրեսը եւ պարգեւատրման սխեմաները կբարձրացնեին FosB- ը մկների մեջ, ցույց տալով ալկոհոլի նախապատվությունը: Յուրաքանչյուր հիբրիդ խաչի համար Pearson- ն օգտագործվել է ΔFosB մակարդակների եւ էթանոլի փորձառու մկների մեջ էթանոլի նախասիրության եւ սպառման միջեւ զգալի փոխկապակցվածության հայտնաբերման համար:
Հիերարխիկ կլաստերները կատարվել են, որպեսզի պատկերացնեն, թե ինչպես են տվյալները փոխում եւ գնահատում, թե ինչպես են տվյալների խումբը միասին: Տպագրված միջին արժեքները փոխարինվել են անհայտ կորած տոկոսների ΔFosB տվյալներից, որոնք չեն գերազանցում տվյալների 15% -ը: Թեեւ ավելի մեծ աստիճանի անորոշություն կա, քան, եթե, ըստ էության, դիտարկված արժեքները դիտարկվեն, հիերարխիկ կլաստերների վերլուծությունը պահանջում է ամբողջական անդամակցություն կամ լրիվ վերացում, ըստ գործի իմաստների համեմատության: Հիերարխիկ կլաստերների կատարումը կատարվել էր Ward- ի մեթոդով եւ արդյունքում առաջացնող կլաստերները պատվիրվել էին հիմնական բաղադրիչ վերլուծության առաջին սկզբունքային բաղադրիչով (JMP®, Version 8, SAS Institute Inc., Cary, NC): Ջրի եւ էթանոլի փորձառու խմբերի համար յուրաքանչյուր ուղեղի համար ΔFosB տվյալները z-score փոխակերպվել եւ հիմնական բաղադրիչները վերլուծություն է իրականացվել, որոշելու համար կլաստերների քանակը: Տվյալները, այնուհետեւ, կլաստեր էին ուղեղի շրջանների եւ անհատների կողմից, վերահսկվող հիերարխիկ կլաստերների վերլուծության միջոցով:
Հեղինակների ներդրումները
ARO, YAB, RAH, TAJ- ն նպաստեց հետազոտության նախագծմանը: ARO- ն ձեռք է բերել տվյալներ: ARO, IP, RDM վերլուծել են տվյալները: Ձեռնարկի ստեղծման եւ վերանայման մեջ ընդգրկված էին ԱՀԿ, ՌԴԿ, ԱՊ, ՏԱ, ԵԲ եւ ՌՀՀ: Բոլոր հեղինակները կարդացել եւ հաստատել են վերջնական ձեռագիրը:
Լրացուցիչ
Մենք ցանկանում ենք շնորհակալություն հայտնել Drs- ին: Ջոի Մեյֆիլդը եւ Քոլին ՄքՔլունգը, օգտակար քննարկումների համար եւ Մարնիի Մարտինեսը, Ջենիֆեր Սթոքսը, Միշել Ֆոշատը, Խոսե Կիենֆյուգոսը, Ջեյմեյ Սեյմուրը եւ Դարշան Պանդիան: Այս հետազոտությունը աջակցել է Ալկոհոլիզմի կոնսորցիումի դրամաշնորհի AA13520- ի ինտեգրալային նեյրոնագիտության նախաձեռնությանը եւ Ալկոհոլի չարաշահման եւ ալկոհոլիզմի դրամաշնորհների ազգային ինստիտուտ AA06399-S- ի եւ AA16424- ի կողմից:
Սայլակ
- Գարսիա-Անդրեաս C, Wall TL, Ehlers CL- ը: Հրդեհային առասպելն ու պատասխանը Առաքելական հնդկացիների ալկոհոլի նկատմամբ: Am J հոգեբուժության. 1997;154: 983-988: [PubMed]
- Schuckit MA- ը, Smith TL, Kalmijn J. Ալկոհոլի պատասխանատման մակարդակի վերաբերյալ ենթախմբերում հայտնաբերված արդյունքները `որպես ալկոհոլի օգտագործման խանգարումների ռիսկի գործոն` քոլեջի կանանց եւ լատինամիկ բնակչություն: Ալկոհոլի հիվանդանոց 2004;10: 1499-1508: [PubMed]
- Բելկապ Ջ.Կ., Crabbe JC, Young ER. 15 inbred մկնիկի շտամների էթանոլի կամավոր սպառումը: Հոգեբրոֆարմոլոգիա: 1993;112: 503-510: doi: 10.1007 / BF02244901: [PubMed] [Խաչ]
- Բլեդնով Յա, Մետտեն Պ, Ֆինն Դ DA, Ռոդոս Ջ.Ս., Բերզեսոն Ս.Ն., Հարրիս Ռ., Քրաբբե Ջ. Հիբրիդային C57BL / 6J x FVB / NJ մկները ավելի շատ ալկոհոլ են խմում, քան C57BL / 6J մկները: Ալկոհոլի հիվանդանոց 2005;29:1949–1958. doi: 10.1097/01.alc.0000187605.91468.17. [PMC անվճար հոդվածը] [PubMed] [Խաչ]
- Բլեդնով Յա, Օզբերն AR, Walker D, Ահմեդ Ս, Բելկապ Փ. եւ այլն: Հիբրիդ մկները որպես ալկոհոլի սպառման գենետիկական մոդելներ: Բեվավ Գենետ: 2010;40:93–110. doi: 10.1007/s10519-009-9298-4. [PMC անվճար հոդվածը] [PubMed] [Խաչ]
- Օզբերն AR, Հարրիս Ռ., Բլեդնով Յ. C57BL / 6JxFVB / NJ- ի եւ C57BL / 6JxNZB / B1NJ F1 հիբրիդային մկների միջեւ վարքային տարբերությունները `կապված էթանոլի ընդունման վերահսկողության հետ: Բեվավ Գենետ: 2010;40:551–563. doi: 10.1007/s10519-010-9357-x. [PMC անվճար հոդվածը] [PubMed] [Խաչ]
- Melendez RI, Middaugh LD, Kalivas PW. C57BL / 6J- ում ալկոհոլի չարաշահման եւ ուժեղացում ազդեցություն: Ալկոհոլի հիվանդանոց 2006;30:2017–2025. doi: 10.1111/j.1530-0277.2006.00248.x. [PubMed] [Խաչ]
- Porrino LJ, Whitlow CT, Սամսոն Հ. Էթանոլի եւ էթանոլի / սակրոլի ինքնակառավարման ազդեցությունը առնետների տեղական ուղեղային գլյուկոզայի օգտագործման վրա: Brain Res. 1998;791(1-2): 18-26: [PubMed]
- Williams-Hemby L, Porrino LJ- ն: Էթանոլի ցածր եւ միջին չափաքանակները առնետների ճարպային մետաբոլիկ փոփոխությունների հստակ ձեւավորում են: Ալկոհոլի հիվանդանոց 1994;18(4):982–988. doi: 10.1111/j.1530-0277.1994.tb00070.x. [PubMed] [Խաչ]
- Perrotti LI, Weaver RR, Robison B, Renthal W, Maze I, Yazdani S, Elmore RG, Knapp DJ, Selley DE, Martin BR, Sim-Selley L, Bachtell RK, Self DW, Nestler EJ: DeltaFosB- ի ուղեղի հագեցված տարբերակները չարաշահման թմրամիջոցներով: Synapse- ը: 2008;62(5):358–369. doi: 10.1002/syn.20500. [PMC անվճար հոդվածը] [PubMed] [Խաչ]
- McClung CA, Ulery PG, Perrotti LI, Zachariou V, Berton O, Nestler EJ: DeltaFosB- ը ուղեղի երկարաժամկետ հարմարվողության համար մոլեկուլային անջատիչ է: Brain Res Մոլ Brain Res. 2004;132: 146-154: [PubMed]
- Պերոտտի Լի, Բոլանոս CA, Choi KH, Russo SJ, Edwards S, Ulery PG, Wallace DL, Self DW, Nestler EJ, Barrot M. DeltaFosB- ն կուտակվում է հոգեբուժական բուժումից հետո վրացական tegmental տարածքի հետի պոչի մեջ գտնվող GABAergic բջիջների բնակչության մեջ: Eur J Neurosci: 2005;21:2817–2824. doi: 10.1111/j.1460-9568.2005.04110.x. [PubMed] [Խաչ]
- Ռյաբինի Ա.Է., Վան Յ. Կրկնվող ալկոհոլային խմիչքը տարբեր կերպ է ազդում C-Fos- ի եւ FosB- ի սպիտակուցների immunoreactivity- ին DBA / 2J մկների վրա: Ալկոհոլի հիվանդանոց 1998;22:1646–1654. doi: 10.1111/j.1530-0277.1998.tb03962.x. [PubMed] [Խաչ]
- Ռյաբինի Ա.Է., Բախտել Ռ., Ֆրիման Պ, Ռայներեր Ֆ. ITF արտահայտությունը մկնիկի ուղեղում ալկոհոլային ինքնազբաղման ձեռքբերման ժամանակ: Brain Res. 2001;890:192–195. doi: 10.1016/S0006-8993(00)03251-0. [PubMed] [Խաչ]
- Bachtell RK, Wang YM, Freeman P, Risinger FO, Ryabinin AE: Ալկոհոլային խմիչքը առաջացնում է ուղեղի տարածաշրջան `սինդրոմ փոփոխություններ` ճնշման ազդանշանի գործոնների արտահայտման համար: Brain Res. 1999;847(2):157–165. doi: 10.1016/S0006-8993(99)02019-3. [PubMed] [Խաչ]
- Kalivas PW. Ինչպես ենք որոշում, թե որն է թմրամիջոցների առաջացման պատճառը: Նատ Նեուրոսցի: 2005;8:1440–1441. doi: 10.1038/nn1105-1440. [PubMed] [Խաչ]
- Crews FT, Nixon K. Ալկոհոլիզմի նյարդահեգեներացիայի եւ վերականգնման մեխանիզմներ: Ալկոհոլը: 2009;44: 115-127: doi: 10.1093 / alcalc / agn079: [Խաչ]
- Խիստի ՌՏ, Wolstenholme J, Shelton KL, Miles MF- ը: C57BL / 6 մկների ենթաշերտերում էթանոլային զրկման ազդեցության բնութագրումը: Ալկոհոլը: 2006;40: 119-126: doi: 10.1016 / j.alcohol.2006.12.003: [PMC անվճար հոդվածը] [PubMed] [Խաչ]
- Weitemier AZ, Tsivkovskaia NO, Ryabinin AE: Urocortin 1- ի բջիջները մկնիկի ուղեղում լարվածություն են: Neuroscience. 2005;132: 729-740: doi: 10.1016 / j.neuroscience.2004.12.047: [PubMed] [Խաչ]
- Ռիաբինի Ա. C57BL / 6J մկների Edinger-Westphal միջուկի լորձերը խանգարում են էթանոլի հիպոթերմային եւ էթանոլի օգտագործմանը: Eur J Neurosci: 2004;20:1613–1623. doi: 10.1111/j.1460-9568.2004.03594.x. [PubMed] [Խաչ]
- Ryabinin AE, Yoneyama N, Tanchuck MA, Mark GP, Finn DA- ն: Urocortin 1 microinjection մկնիկի կողային հատվածում կարգավորում է ալկոհոլի սպառման ստացումը եւ արտահայտումը: Neuroscience. 2008;151: 780-790: doi: 10.1016 / j.neuroscience.2007.11.014: [PMC անվճար հոդվածը] [PubMed] [Խաչ]
- Տյուրեք VF, Tsivkovskaia NO, Hyytia P, Harding S, Lê AD, Ryabinin AE: Urocortin 1- ի արտահայտությունը հինգ զույգ շառի գծում ընտրվածորեն սնվել է ալկոհոլային խմիչքի տարբերությունների համար: Հոգեբրոֆարմոլոգիա: 2005;181:511–517. doi: 10.1007/s00213-005-0011-x. [PubMed] [Խաչ]
- Ryabinin AE, Weitemier AZ: The urocortin 1 neurocircuit: էթանոլային զգայունություն եւ պոտենցիալ ներգրավում ալկոհոլի սպառման մեջ: Brain Res Rev. 2006;52: 368-380: doi: 10.1016 / j.brainresrev.2006.04.007: [PubMed] [Խաչ]
- Սամսոն Հ.Հ., Տոլլիվեր Գ.Ա., Հարակուի Մ, Հոդ Ք. Ալկոհոլի ինքնակառավարումը `մեսոլիբիկ դոպամինի դերը: Ann NY Acad Sci. 1992;654:242–253. doi: 10.1111/j.1749-6632.1992.tb25971.x. [PubMed] [Խաչ]
- McBride WJ, Li TK: Ալկոհոլիզմի կենդանիների մոդելներ. Կրծողների մեջ բարձր ալկոհոլային խմիչքի վարքի նյարդաբանություն: Քրիտ Rev Neurobiol. 1998;12:339–369. doi: 10.1615/CritRevNeurobiol.v12.i4.40. [PubMed] [Խաչ]
- Coob GF, Roberts AJ, Schulteis G, Parsons LH, Heyser CJ, Hyytiä P, Merlo-Pich E, Weiss F. Neurocircuitry թիրախ է էթանոլի պարգեւատրման եւ կախվածության մեջ: Ալկոհոլի հիվանդանոց 1998;22:3–9. doi: 10.1111/j.1530-0277.1998.tb03611.x. [PubMed] [Խաչ]
- Ռոդդ Զա, Melendez RI, Bell RL, Kuc KA, Zhang Y, Murphy JM, McBride WJ: Էստոնիայի ինքնակառավարման ինքնավարացում, տղամարդկանց Wistar առնետների վրացական ազդեցության շրջանում, դոպամինային նեյրոնների ներգրավման ապացույց: J Neurosci. 2004;24:1050–1057. doi: 10.1523/JNEUROSCI.1319-03.2004. [PubMed] [Խաչ]
- Gessa GL, Muntoni F, Collu M, Vargiu L, Mereu G. Էթանոլի ցածր դոզանները ակտիվացնում են դոպամիներգիկ նեյրոնները `վրացական ներկրող տարածքում: Brain Res. 1985;348:201–203. doi: 10.1016/0006-8993(85)90381-6. [PubMed] [Խաչ]
- Brodie MS, Shefner SA, Dunwiddie հեռուստատեսություն: Էթանոլն ավելացնում է ռոմանտիկ վրացական իշեմիալ տարածքի դոպամինային նեյրոնների կրակումը: Brain Res. 1990;508:65–69. doi: 10.1016/0006-8993(90)91118-Z. [PubMed] [Խաչ]
- Հեիլիգ Մ, Կոոբ Գ. Ալկոհոլային կախվածության մեջ կորտիկոտրոպինային ազատման գործոնի համար կարեւոր դեր է խաղում: Թրենդներ Նյարդաբան: 2007;30(8):399–406. doi: 10.1016/j.tins.2007.06.006. [PMC անվճար հոդվածը] [PubMed] [Խաչ]
- Dyr W, Kostowski W. Այն փաստը, որ amygdala ներգրավվում է 5-HT3 ընդունիչ հակագոնիստների արգելակում է առնետների մեջ ալկոհոլային խմիչքի վրա: Ալկոհոլը: 1995;12:387–391. doi: 10.1016/0741-8329(95)00023-K. [PubMed] [Խաչ]
- Գիլպին Ն.Վ., Ռիչարդսոն Հ.Ն., Կոոբ Գ.Ֆ. CRF1-receptor- ի եւ opioid- ընկալիչների հակաօգտագործիչների ազդեցությունը ալկոհոլի նախընտրելի (P) առնետների ալկոհոլային խմիչքի կախվածության աճի վրա: Ալկոհոլի հիվանդանոց 2008;32:1535–1542. doi: 10.1111/j.1530-0277.2008.00745.x. [PMC անվճար հոդվածը] [PubMed] [Խաչ]
- Hyytiä P, Koob GF- ն: GABAA- ի ընկալիչի հակասությունը ընդլայնված amigdala- ում նվազեցնում է առնետների ինքնավարացումը: Eur J Pharmacol. 1995;283:151–159. doi: 10.1016/0014-2999(95)00314-B. [PubMed] [Խաչ]
- Roberto M, Madamba SG, Moore SD, Tallent MK, Siggins GR. Էթանոլը մեծացնում է GABAergic փոխանցումը առաջացնող եւ կենտրոնական ամիրդդալա նեյրոնների առաջացնող եւ postsynaptic վայրերում: Proc Natl Acad Sci. 2003;100: 2053-2058: doi: 10.1073 / pnas.0437926100: [PMC անվճար հոդվածը] [PubMed] [Խաչ]
- Roberts AJ, Cole M, Koob GF- ն: Intra-amygdala muscimol- ը նվազեցնում է գործոն էթանոլի ինքնակառավարումը կախյալ առնետներից: Ալկոհոլի հիվանդանոց 1996;20:1289–1298. doi: 10.1111/j.1530-0277.1996.tb01125.x. [PubMed] [Խաչ]
- Möller C, Wiklund L, Sommer W, Thorsell A, Heilig M. Կրճատվել է փորձարարական անհանգստություն եւ կամավոր էթանոլ սպառումը առնետների կենտրոնական, բայց ոչ basolateral amygdala վնասվածքներից հետո: Brain Res. 1997;760:94–101. doi: 10.1016/S0006-8993(97)00308-9. [PubMed] [Խաչ]
- Վի Ս, Կոոբ Գ. Դինֆորին-կափփա օփիոիդային համակարգի դերը չարաշահման թմրամիջոցների ուժեղացման հետեւանքների մեջ: Psychopharmacology (Բեռլին) 2010;210:121–135. doi: 10.1007/s00213-010-1825-8. [PMC անվճար հոդվածը] [PubMed] [Խաչ]
- Walker BM- ի, Valdez GR- ի, McLaughlin JP- ի, Bakalkin G.- ը: Դինֆորինը / կաբփա օփիոիդային ռեցեպտորների համակարգերը, որոնք օգտագործում են ալկոհոլի չարաշահումը եւ կախվածությունը: Ալկոհոլը: 2012;46: 359-370: doi: 10.1016 / j.alcohol.2011.10.006: [PMC անվճար հոդվածը] [PubMed] [Խաչ]
- Sperling RE, Gomes SM, Sypek EI, Carey AN, McLaughlin JP- ն: Էթանոլի պայմանավորված տեղանքի նախապատվության եւ ինքնակարգավորման սթրեսային ազդեցության ներթափանցման endogenous kappa-opioid միջնորդությունը: Psychopharmacology (Բեռլին) 2010;210:199–209. doi: 10.1007/s00213-010-1844-5. [PubMed] [Խաչ]
- McBride WJ- ն: Ամիրդալայի կենտրոնական միջուկը եւ ալկոհոլի եւ ալկոհոլային խմիչքի վարքագծի հետեւանքները կրծողների մեջ: Pharmacol Biochem Behav- ը: 2002;71:509–515. doi: 10.1016/S0091-3057(01)00680-3. [PubMed] [Խաչ]
- Dole VP- ը, Gentry RT- ը: Մկների ալկոհոլիզմի անալոգային մոտեցումը. Մոդելի մասշտաբային գործոնները: Proc Natl Acad Sci. 1984;81: 3543-3546: doi: 10.1073 / pnas.81.11.3543: [PMC անվճար հոդվածը] [PubMed] [Խաչ]
- Dole VP- ը, Gentry RT- ը: Մկների մեջ ալկոհոլիզմի անալոգային դիմանալը. Դեղագործորեն խթանող խմիչքի ճանաչման չափանիշները: Proc Natl Acad Sci. 1985;82: 3469-3471: doi: 10.1073 / pnas.82.10.3469: [PMC անվճար հոդվածը] [PubMed] [Խաչ]
- Nestler EJ- ն: Կախվածության մոլեկուլային նյարդաբիոլոգիա: Am J Addict. 2001;10: 201-217: doi: 10.1080 / 105504901750532094: [PubMed] [Խաչ]
- Nestler EJ, Kelz MB, Chen J. DeltaFosB: երկարատեւ նյարդային եւ վարքային պլաստիկության մոլեկուլային միջնորդ: Brain Res. 1999;835:10–17. doi: 10.1016/S0006-8993(98)01191-3. [PubMed] [Խաչ]
- Franklin KJ, Paxinos G. Մկնիկի ուղեղը ստերեոտաքսիկ կոորդինատներում: 2. Սան Դիեգո, Կալիֆոռնիա. 2001.