ΔFosB- ի գերբնակեցման ազդեցությունը կորիզների ակունբեններում (2011) օփիոիդային եւ կանկաբինոիդ վերափոխիչ միջնորդավորված ազդանշանների վրա,

Neuropharmacology. 2011 Dec;61(8):1470-6. doi: 10.1016/j.neuropharm.2011.08.046.

Սիմ-Սելլի Լ.Ջ., Cassidy պատգամավոր, Սպարտա Ա, Զաչարիո Վ, Nestler EJ- ն, Սելլի Դ.

Աղբյուր

Դեղագիտության եւ թունաբանության ամբիոն եւ թմրանյութերի եւ ալկոհոլային հետազոտությունների ինստիտուտ, Վիրջինիա Համամիութենական համալսարանի բժշկության դպրոց, Ռիչմոնդ, VA 23298, ԱՄՆ:

Վերացական

Կայուն փոխազդեցության գործակիցը ΔFosB- ն ներթափանցված է միջուկային հեծանիվներում (NAc) քրոնիկական ազդեցության ենթարկված մի շարք թմրամիջոցների չարաշահումից եւ ΔFosB- ի transgenic արտահայտությունը striatum- ում բարելավում է morfin- ի եւ cocain- ի պարգեւող հատկությունները:ե. Այնուամենայնիվ, այս դիտարկումների մեխանիկական հիմքը լիովին հասկանալի է: Մենք օգտագործեցինք կրկնակի տրոհման մկնիկի մոդելը, որը ներառում էր ΔFosB- ի ինդուկցիոն արտահայտությունը dopamine D (1) ընկալիչ / դինորֆին պարունակող ստիատալ նեյրոններ, որոնք որոշում են ΔFosB արտահայտության ազդեցությունը NAc- ում opioid եւ cannabinoid ընկալիչ ազդանշանների վրա: Արդյունքները ցույց են տվել, որ մե opioid- ի միջնորդավորված G-proteinin ակտիվությունն ու ադրենիլային ցիկլազի արգելումը ուժեղացվել են ΔFosB- ի արտահայտած մկների NAc- ում: Նմանապես, αFOSB արտահայտող մկների մեջ ավելացել է կապտա օփիոիդային արգելակումը ադրենիլային ցիկլազի. Ընդհակառակը, արյունազեղման ռեզերվատորի միջնորդավորված ազդանշանները չեն տարբերվում մկների միջեւ ΔFosB- ի եւ վերահսկիչ մկների վրա: TԱկտիվների հայտնաբերումները ենթադրում են, որ opioid եւ cannabinoid ընկալիչ ազդանշանները տարբերվում են ΔFosB- ի արտահայտությամբ եւ նշում են, որ ΔFosB արտահայտությունը կարող է որոշակի ազդեցություն թողնել NAc- ում ուժեղացված mu եւ kappa opioid receptor ազդանշանների միջոցով:

Keywords: G-proteins, adenylyl cyclase, striatum

1: ներածություն

Օփիոիդային ընկալիչները եւ կանկաբինոիդ կաբինետը₁ ընկալիչները (ԿԲ₁R) նեյրոբիոլոգիական թիրախ են երկու լայնորեն կիրառվող դեղերի դասերին, որոնք ներառում են մորֆին, հերոին եւ դեղատոմսով opioids եւ մարիխուանա (Δ⁹-թետհրդրոկնանաբինոլ (THC)) համապատասխանաբար: Օփիոիդների եւ կանկաբինոիդների սուր հետեւանքները միջնորդվում են G-proteins-coupled reseptors- ով, որոնք ակտիվացնում են հիմնականում Գ_{i / o} սպիտակուցներ եւ արտադրում են ներքեւի հեղուկի ազդեցության պատասխաններ, ինչպիսիք են adenylyl cyclase- ի արգելումը (Childers, 1991, Childers, եւ այլն, 1992, Howlett եւ այլն, 2002): Շարժիչը, հիշողությունը նվազեցնող եւ Δ⁹-ՏՀ-ն արտադրվում է ԿԲ կողմից₁R (Huestis եւ այլն, 2001, Zimmer եւ այլք, 1999), որոնք լայնորեն տարածվում են ուղեղում, բարձր մակարդակներով բազալ գանգլիա, հիպոկամպուս եւ ցերեկային (Herkenham եւ այլն, 1991): Կլինիկական առումով համապատասխան եւ չարաշահող օփիոիդային դեղերի անալոգային եւ հատուցող ազդեցությունները հիմնականում իրականացվում են mu opioid reseptors (MOR) (Matthes, եւ այլն, 1996), որոնք հարստանում են լիմիական համակարգի եւ brainstem- ի (Մանսուր եւ այլն, 1994): The mesolimbic համակարգը, որը բաղկացած է վենտրալիքային շրջանից (ՎՏԱ) մինչեւ միջուկի հոդի (NAc) դոպամիներգիկ կանխատեսումներ, կարեւոր դեր է խաղում օփիոիդների եւ քեննաբինոիդներիBozarth եւ Իմաստուն, 1984, Vaccarino եւ այլն, 1985, Զանգեն եւ այլն, 2006), ինչպես նաեւ այլ չարաշահումների (Koob եւ Volkow, 2010): Ավելին, էնդոկենոֆոնիկ եւ կանկաբինոիդային համակարգերը ներգրավված են հոգեմոկրատական դեղերի բազմաթիվ դասակարգիչների (Մալդոնադո եւ այլն, 2006, Տրիգո եւ այլն, 2010): Այսպիսով, կարեւոր է լուսաբանել այն մեխանիզմները, որոնցով օպիոիդները եւ ԿԲ-ն₁R ազդանշանները կարգավորվում են NAc- ում:

Թմրամիջոցների չարաշահման բնագավառում հիմնական խնդիրն այն է, որ հայտնաբերվի սպիտակուցներ, որոնք միջամտում են սուրից մինչեւ հոգեպես ակտիվ դեղերի երկարաժամկետ ազդեցությունները: AP-1 transkripsiyon գործակիցը ΔFosB- ը հատկապես հետաքրքիր է, քանի որ այն կայուն կոճղված է ֆոսբ գենը, որը կուտակում է չարաշահումների կամ բնական պարգեւների թմրամիջոցների կրկնակի ազդեցության (McClung եւ այլն, 2004, Nestler, 2008, Nestler եւ այլն, 1999). Մենք գտել ենք, որ ΔFosB- ն առաջանում է ուղեղի մեջ, երբ կրկնվում է մորֆին, Δ⁹-THC- ը, կոկաինը կամ էթանոլը, յուրաքանչյուր թմրամիջոցով, որը արտադրում է ΔFosB արտահայտության եզակի տարածաշրջանային օրինակPerrotti եւ այլն, 2008): Թմրամիջոցների հետեւողական հայտնաբերումն այն էր, որ ΔFosB- ն մեծապես դրսեւորվեց striatum- ում, որտեղ բոլոր չորս դեղամիջոցները առաջացրել են ΔFosB- ի NAc միջուկում եւ բոլորը, բացի Δ⁹-THC զգալիորեն արտահայտել արտահայտությունը NAc shell եւ caudate-putamen.

Դեղաբանական հետազոտությունները ցույց են տվել, որ դոֆամինի D- ի համանման վարումը₁ ընկալիչ (D₁R) հակառակորդ SCH 23390- ը արգելափակեց ΔFosB- ի ինդուկցիան NAc- ում եւ քաուդա-պուտինում `պարբերական կոկաինը կամ մորֆինային վարչարարությունից հետո, առաջարկելով D- ի պոտենցիալ նշանակությունը₁R- արտահայտող նեյրոններ (Muller եւ Unterwald, 2005, Nye, et al., 1995): ΔFosB- ի ինդուկցիայի ազդեցությունը թմրամիջոցների միջամտության վրա վարակված վարքագծի վրա ուսումնասիրվել է, օգտագործելով βFOSB- ին ցողունային բջիջները, որոնք արտահայտում են NAc եւ dorsal striatum- ի հատուկ նեյրոնային պոպուլյացիաներումChen, եւ այլն, 1998): Մկնիկները, որոնք արտահայտում են ΔFosB- ի դինֆորին / D₁R պոզիտիվ նեյրոնները NAc եւ dorsal striatum (տող 11A) ցույց են տալիս փոփոխված պատասխաններ թմրամիջոցների չարաշահման, հատկապես ուժեղացված զգայունություն է հատուցող հետեւանքների կոկաինը կամ morphine (Colby, եւ այլն, 2003, Kelz եւ այլն, 1999, Zachariou եւ այլն, 2006): Այս փոփոխությունները տեղի են ունեցել MOR կամ տարբեր G-protein ստորաբաժանումների մակարդակներում փոփոխությունների բացակայության պայմաններում: Այնուամենայնիվ, dynorphin mRNA մակարդակները կրճատվել են ΔFosB արտահայտիչ մկների (Zachariou եւ այլն, 2006, որը ենթադրում է, որ ΔFosB- ի մեկ թիրախը գեն է, որն ընդգրկում է էնդոկենտի օփիոիդ պեպտիդը: ΔFosB- ի ինդուկցիան կարող է նաեւ առաջացնել վարքային փոփոխություններ `կարգավորելով ռեցեպտորների ազդանշանը, սակայն այդ հնարավորությունը չի ուսումնասիրվել: Հետեւաբար, ներկա հետազոտությունները օգտագործվում էին bitransgenic մկնիկի մոդելի համար, պարզելու համար, թե արդյոք dynorphin / D- ի ΔFosB- ի գերբարձր արտացոլումը₁Striatal նեյրոններ պարունակող R- ը փոխում է MOR- միջնորդավորված Գ-սպիտակուցային ակտիվությունը եւ NAC- ի MOR- եւ KOR- միջնորդավորված ադրենիլային ցիկլազի արգելքը: ΔFosB- ի ազդեցությունը CB- ում₁Ռ-միջնորդավորված Գ-սպիտակուցային ակտիվությունը նույնպես գնահատվել է, քանի որ Δ⁹-THC- ի վարչակազմը ներդնում է ΔFosB- ն NAc- ում (Perrotti եւ այլն, 2008) եւ endocannabinoid համակարգը հայտնի է կարգավորել ուղեղի վարձատրության սխեմաները (Gardner, 2005, Մալդոնադո եւ այլն, 2006), սակայն endosannabinoid համակարգում ΔFosB- ի ազդեցությունը չի ուսումնասիրվել:

2. Նյութեր եւ մեթոդներ

2.1. Ռեակտիվներ

[³⁵S] GTPγS (1250 Ci / mmol), [α-³²P] ATP (800 Ci / mmol) եւ [³H] cAMP (26.4 Ci / mmol) են ձեռք բերվել PerkinElmer- ից (Shelton, CT): ATP- ի, GTP- ի, ՀՆԱ-ի, cAMP- ի, բրնձի շիճուկի albumin- ի, քրեյնին ֆոսֆոքինազի, պապավերինի, imidazole- ի եւ WIN-55212-2- ը ձեռք են բերվել Սիգմա Ալդրիխից (Սեն - Լուի, MO): GTPγS- ը ձեռք է բերվել Roche Diagnostic Corporation- ից (Չիկագո, IL): DAMGO- ը տրամադրվել է Թմրամիջոցների չարաշահումների ազգային ինստիտուտի (Rockville, MD) դեղերի մատակարարման ծրագրի կողմից: Econo-1 սինթիլային հեղուկը ձեռք է բերել Fisher Scientific- ից (Norcross, GA): Էկոլիտ սինթիլացիայի հեղուկը ձեռք է բերվել ICN- ից (Կոստա Մեսա, CA): Բոլոր մյուս քիմիական նյութերը ստացվել են Սիգմա Ալդրիխից կամ Fisher Scientific- ից:

2.2. Մկնիկներ

NSE-tTA (գծի A) × TetOp-ΔFosB (գծի 11) -ից ստացված արական բուսական փոխանցման մկաններ գեներացվել են, ինչպես նկարագրված է Kelz et al. (Kelz եւ այլն, 1999): Bitransgenic մկները բեղմնավորված են եւ բարձրացնում են դոկսսիցիկլին (խմելու ջրի մեջ 100 μg) `ճնշելու transgene արտահայտությունը: 8 շաբաթվա ընթացքում դոքսիցիլին ջրի բացթողումը բաց թողնվեց մկների կեսին `տրանսգենի արտահայտությունը թույլ տալու համար, մինչդեռ մկները մնացին դոկտիքսիլլինի վրա` ճնշելու տրանսգեն: Բարդերը հավաքվեցին 8 շաբաթ անց, երբ ΔFosB- ի transcriptional ազդեցությունները առավելագույնն էին (McClung եւ Nestler, 2003): Օգտագործվել է երկրորդ տրանսգենային մկնիկի գիծը, որտեղ Δc-Jun- ը, c-Jun- ի գերիշխող բացասական հակառակորդը, արտահայտված է D- ում₁R / դինորֆին եւ Դ₂R / encephalin բջիջները striatum, hippocampus եւ parietal cortex (Peakman եւ այլն, 2003): C-Jun- ը եւ նրա հետ առնչվող Jun ընտանիքի սպիտակուցները dimerize Fos- ի ընտանեկան սպիտակուցներով եւ կապվում են թիրախային գենների AP-1 կայքում `կարգավորելու transcription- ն: Այնուամենայնիվ, c-Jun- ի (Δc-Jun) N-terminus- ի կտրումը տալիս է բարդ transcriptionally անգործուն եւ կարող է խոչընդոտել ակտիվ AP-1 համալիրների ԴՆԹ-ի կապը: NSE-tTA (գծի A) × TetOp-FLAG-Δc-Jun (գծի E) -ից ստացված արական ցավազրկող մկները գեներացվել են, ինչպես նկարագրված է Peakman et al. (Peakman եւ այլն, 2003): Bitransgenic մկները բեղմնավորված են եւ բարձրացնում են դոկսսիցիկլին (խմելու ջրի մեջ 100 μg) `ճնշելու transgene արտահայտությունը: Քաղցրավենիքները ծծվել են 3 շաբաթում, գենոտիպավորվել եւ բաժանվել խմբերի հետ, որոնց կեսը պահպանվում է դոկտիքսիլլին պարունակող ջրի մեջ եւ կեսը պարբերաբար խմելու ջրի համար `առաջացնելով FLAG-Δc-Jun արտահայտությունը: Ուղեղները հավաքվել էին 6 շաբաթ անց, երբ չափվել է FLAG-Δc-Jun- ի առավելագույն մակարդակները (Peakman եւ այլն, 2003): Կենդանիների բոլոր ընթացակարգերը իրականացվել են «Լաբորատոր կենդանիների խնամքի եւ օգտագործման առողջության ուղեցույցի ազգային ինստիտուտների» համաձայն:

2.3. Մեմբրանի պատրաստում

Ուղեղները պահվում էին մինչեւ 80 ° C մինչեւ փորձարկման օրը: Նախքան փորձարկումը, յուրաքանչյուր ուղեղը ջերմացվեց, եւ NAc- ը բաժանվեց սառույցի վրա: Յուրաքանչյուր նմուշ homogenized է 50 մմ Tris-HCl, 3 մմ MgCl₂, 1 մմ EGTA, pH 7.4 (մեմբրանի բուֆեր) 20 հարվածներով, մի բաժակ homogenizer- ից 4 ° C- ում: Հոմոգենատը ցածրացրեց 48,000 × g 4 ° C- ին, 10 րոպե, կրկին քանդվել է մեմբրանի բուֆերի մեջ, նորից կենտրոնացնելով 48,000 × g 4 ° C- ին, 10 րոպե եւ կրկին քսել 50 մմ Tris-HCl, 3 մմ MgCl₂, 0.2 մմ EGTA, 100 մմ NaCl, pH 7.4 (թեստային բուֆեր): Սպիտակուցի մակարդակը որոշվել է Բրեդֆորդի մեթոդով (Բրեդֆորդ, 1976) օգտագործելով խոշոր եղջերավոր ալերգին (BSA) որպես ստանդարտ:

2.4. Ագոնիստ-³⁵S] GTPγS պարտադիր

Մեմբրանները նախնական ինկուբացված էին 10 րոպեում 30 րոպեում, անալիզի բուֆերում ադենոզին դենամիզով (3 մյու / մլ): 5% (w / v) BSA, 10 nM [HNUMX-2 μg սպիտակուցը] պարունակող քիմիական նյութերի (30-0.1 μg սպիտակուցը)³⁵S] GTPγS, 30 μM ՀՆԱ եւ ադենոզին դիամազան (3 մյու / մլ) DAMGO կամ WIN55,212-2- ի համապատասխան կոնցենտրացիաների հետ: Nonspecific կապումը չափվել է 20 μM GTPγS- ի հետ: Ինկուբացիան դադարեցվել է GF / B ապակյա մանրաթելային ֆիլտրերի միջոցով, այնուհետեւ 3- ը լվանում է 3 սառույցով սառույցով 50 մմ Tris-HCl, pH 7.4- ով: Սահմանված ռադիոակտիվությունը որոշվել է Econo-1 սիսեռլիլային հեղուկի ֆիլտրերի գիշերային արդյունահանման արդյունքում հեղուկ սպինտիլյացիայի սպեկտրոտոետրիայով:

2.5. Adenylyl Cyclase Test

Մեմբրանները (5-25 μg սպիտակուցը) նախադրյալ են դրվել վերոհիշյալ իդենոզինի դեամինազի հետ, այնուհետեւ 15 րոպե ինկուբացվում է 30 ° C- ում 1μM forskolin- ի առկայության կամ բացակայության դեպքում, DAMGO, U50,488H կամ WIN55,212-2- ի հետ, առանց DAMGO, U50H կամ WINXNUMX-XNUMX XNUMX μM ATP, [α-³²P] ATP (1.5 μCi), 0.2 մմ DTT, 0.1% (w / v) BSA, 50 μM ցիկլային AMP, 50 μM GTP, 0.2 մմ պապավերին, 5 մմ ֆոսֆոքրատին, 20 միավոր / մլ քրեյնին ֆոսֆոքինազով եւ ադենոզին դիամազանով (3 մյու / ml) 100 μl- ի վերջնական ծավալով: Այս պայմաններում ընդհանուր [α-³²P] cAMP- ը վերականգնվել է, ընդհանուր առմամբ ավելացված է ընդհանուր գումարի 1% -ից պակաս [α-³²P] ATP յուրաքանչյուր նմուշի մեջ: Ռեակցիան դադարեցվեց 3 րոպե եռացողով եւ [³²P] Cyclic AMP- ն մեկուսացված էր Սոլոմոնի երկակի սյունակով (Dowex եւ alumina) մեթոդովSalomon, 1979): [³H] cAMP (10,000 dpm) ավելացվել է յուրաքանչյուր խողովակի մեջ, նախքան սյունակային քրոմատագրությունը որպես ներքին ստանդարտ: Ռադիոակտիվությունը որոշվել է հեղուկ սցենարման սպեկտրոֆոտոմետրերով (45% արդյունավետության համար) ³H) ամբարտակի 4.5 մլ հետո լուծարվել է 14.5 մլ Էկոլիտ սինթիլային հեղուկով:

2.6. Տվյալների վերլուծություն

Եթե այլ կերպ նշված չէ, տվյալները ներկայացվում են որպես միջին արժեքներ ± 4-8 առանձին փորձեր, որոնցից յուրաքանչյուրը կատարվել է եռակի: Զուտ խթանված [³⁵S] GTPγS կապը հաշվարկվում է որպես agonist-stimulated պարտադիր նվազագույն բազային պարտադիր: Զուտ forskolin-stimulated adenylyl cyclase գործունեությունը սահմանվում է որպես forskolin- խթանող գործունեություն `բազային գործունեություն (pmol / մգ / րոպե): Forskolin-stimulated adenyllyl cyclase- ի գործունեության տոկոսային նվազեցումը սահմանվում է որպես (agonist-net forskolin-stimulated ակտիվության բաց ֆորսկոլինի խթանման գործողություն `ագոնիստի բացակայության դեպքում agonist / net forskolin-stimulated ակտիվության առկայության դեպքում) × 100: Բոլոր curve-fitting եւ վիճակագրական վերլուծությունները կատարվել են Prism 4.0c- ի միջոցով (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA): Համակենտրոնացման ազդեցության կորերը վերլուծվել են Itererative ոչ գծային ռեգրեսիայի միջոցով, որպեսզի ստանան EC₅₀ եւ Է_{առավելագույնը `} արժեքներ: Համակենտրոնացման արդյունքի տվյալների վիճակագրական նշանակությունը որոշվել է երկկողմանի նարնջի վերլուծությամբ (ANOVA) `օգտագործելով ագրոնիստ դոզան եւ գենային ինդուկցիան (անջատման կամ անջատման) որպես հիմնական գործոններ: Կորի կախված արժեքների վիճակագրական նշանակությունը (E_{առավելագույնը `} կամ EC- ն₅₀) որոշվել է ոչ զուգակցված երկկողմանի Student t- թեստի միջոցով, օգտագործելով Welch- ի ուղղումը կամ տվյալների քառակուսի արմատային վերափոխումը, անհրաժեշտության դեպքում, շտկելու համար EC- ում անհավասար շեղումներ (հայտնաբերված F- թեստով)₅₀ արժեքներ:

3. Արդյունքները

3.1. ΔFosB արտահայտության ազդեցությունը opioid եւ cannabinoid ընկալիչի միջնորդավորված G- սպիտակուցի ակտիվացման վրա

Որոշելու համար արդյոք MOR- ը կամ ԿԲ-ն₁R- միջնորդավորված Գ-սպիտակուցի ակտիվացումը փոխվել է NAc- ում ΔFosB- ի ինդուկտիվ տրանսգենային արտահայտությամբ, agonist-stimulated [³⁵S] GTPγS կապը հետազոտվել է մեկուսացված մեմբրաններում, որոնք պատրաստված են ΔFosB transgene- ի (ΔFosB) կամ արտահայտված (ΔFosB անջատում) պայմանականորեն արտահայտված բուսական փոխանցման մկների այս շրջանից: MOR-selective enkephalin անալոգային DAMGO- ն օգտագործվել է MOR- ին ակտիվացնելու համար եւ WIN55,212-2- ի cannabinoid aminoosilylindole օգտագործվել է ԿԲ-ի ակտիվացման համար:₁R. Այս լիգաները նախկինում ցուցադրվել էին MOR եւ CB- ում լիակատար ագրոնիստներ₁R, համապատասխանաբար (Բրիվոգել եւ այլն, 1998, Սելլի եւ այլք, 1997): Անհնար էր ուսումնասիրել KOR- ի միջնորդավորված G-protein պրոցեսը, քանի որ ազդանշանը չափազանց ցածր է կրծող ուղեղում (Childers, եւ այլն, 1998): Արդյունքները ցույց են տվել, որ DGS- ի եւ WIN55,122-2- ի G- սպիտակուցային ակտիվության համակենտրոնացումը խթանում է NAc- ում ΔFosB- ից եւ ΔFosB- ից մկների վրաՆկար 1): DAMGO- ի խթանման գործունեության համար (Նկար 1A), համակենտրոնացման էֆեկտի տվյալների երկկողմանի ANOVA- ն բացահայտեց ΔFosB կարգավիճակի (p <0.0001, F = 22.12, df = 1) և DAMGO կոնցենտրացիայի (p <0.0001, F = 29.65, df = 5) զգալի հիմնական էֆեկտները `առանց նշանակալի փոխազդեցություն (p = 0.857, F = 0.387, df = 5): Համակենտրոնացման էֆեկտի կորերի ոչ գծային ռեգրեսիայի վերլուծությունը ցույց է տվել զգալիորեն ավելի մեծ DAMGO E_{առավելագույնը `} արժեքը ΔFosB- ի վրա մկների վրա (E_{առավելագույնը `} = 73 ± 5.2% խթանումը) ΔFosB դուրս մկների նկատմամբ (E_{առավելագույնը `} = 56 ± 4.1% խթանում; p <0.05 տարբերվում է ΔFosB- ից մկների վրա Student's t-test- ով): DAMGO EC₅₀ արժեքները չեն տարբերվում ΔFosB- ի եւ ΔFosB- ի միջեւ մկների միջեւ (302 ± 72 nM- ի նկատմամբ `212 ± 56 nM, համապատասխանաբար p = 0.346):

ΔFosB արտահայտության ազդեցությունը agonist-stimulated [³⁵S] GTPγS պարտադիր է NAc- ում: ΔFosB-expression (ΔFosB on) կամ հսկողության (ΔFosB off) մկների membranes փորձարկվել են ինչպես նկարագրված մեթոդների օգտագործելով տարբեր կոնցենտրացիաների ...

Ի տարբերություն MOR agonist DAMGO- ի ստացված արդյունքների, ոչ մի ΔFosB կարգավիճակի կախվածության տարբերությունը G- սպիտակուցի ակտիվացման ընթացքում դիտարկվել է քննելունինի ագոնիստ WIN55,212-2- ով (Նկար 1B) WIN55,212-2 կոնցենտրացիայի ազդեցության տվյալների երկկողմանի ANOVA- ն բացահայտեց WIN55,212-2 կոնցենտրացիայի էական հիմնական ազդեցությունը (p <0.0001, F = 112.4, df = 7), բայց ոչ ΔFosB կարգավիճակի (p = 0.172) , F = 1.90, df = 1) և փոխազդեցություն չի եղել (p = 0.930, F = 0.346, df = 7): Նմանապես, ΔFosB կարգավիճակի ազդեցություն չի եղել WIN55,212-2 E- ի վրա_{առավելագույնը `} արժեքներ (103 ± 6% versus 108 ± 8% խթանում ΔFosB- ի վրա եւ սեղմում, համապատասխանաբար, p = 0.813- ը, Ուսանողականի t-test) կամ EC₅₀ արժեքները (103 ± 20 nM- ն ընդդեմ 170 ± 23 nM- ում ΔFosB- ի եւ անջատված մկների վրա, համապատասխանաբար, p = 0.123):

Հիման վրա կորի կորպուսի ձեւը եւ այն փաստը, որ մեր նախորդ ուսումնասիրությունները ցույց են տվել, որ գլխուղեղի բիֆազային WIN55,212-2 համակենտրոնացում-ուժի կորերըԲրիվոգել եւ այլն, 1999, Բրիվոգել եւ այլն, 1998), WIN55,212-2 կորերը նույնպես վերլուծվել են երկու տեղամասային մոդելի միջոցով: Միջինացված տվյալների վերլուծությունը ցույց է տվել, որ երկու տեղամասի մոդելի (R² = 0.933 եւ 0.914, քառակուսիների քանակը = 3644 եւ 5463- ը, ΔFosB- ի վրա եւ համապատասխանաբար, մկների վրա), միակողմանի մոդելի համեմատ (R² = 0.891 եւ 0.879, քառակուսիների քանակը = 6561- ը եւ 6628- ը, ΔFosB- ի վրա, եւ համապատասխանաբար, մկների վրա): Այնուամենայնիվ, ΔFosB- ի միջեւ ոչ մի զգալի տարբերություն չի հայտնաբերվել կամ էլ E- ում մկների վրա_{առավելագույնը `} կամ EC- ն₅₀ բարձր կամ ցածր ազդեցության վայրերի արժեքները (Լրացուցիչ աղյուսակ 1), չնայած որ մի փոքր ցածր ցուցանիշ էր EC- ի նկատմամբ₅₀ ΔFosB- ի հետ մկների բարձր հզորության տեղում (EC₅₀բարձր = 28.0 ± 10.6 nM), համեմատած ΔFosB- ի հետ (EC₅₀բարձր = 71.5 ± 20.2 nM; p = 0.094): Ավելին, ΔFosB կարգավիճակի վրա որեւէ ազդեցություն չի եղել բազային [³⁵S] GTPγS պարտադիր NAc մեմբրաններում (253 ± 14 versus 226 ± 14 ֆմոլ / մգ մեջ ΔFosB- ի վրա եւ անջատված մկաններում համապատասխանաբար, p = 0.188): Այս տվյալները ցույց են տալիս, որ ΔFosB- ի սիբիրյան տիպային արտահայտությունը մկների NAc- ում ավելացրել են MOR-միջնորդավորված G-proteinin ակտիվացումը, առանց զգալիորեն ազդելու ԿԲ-ի₁R-միջնորդավորված կամ բազալ G-protein ակտիվություն:

3.2. ΔFosB- ի ազդեցությունը ադեիլիլային ցիկլազի opioid եւ cannabinoid ընկալիչ միջնորդավորված արգելման վրա

Գնահատելու համար ΔFosB- ի ինդուկտիվ տրանսգենային արտահայտության ազդեցությունը MOR- ի եւ ԿԲ-ի կողմից ստորգետնյա ազդեցության գործունեության մոդուլացման վրա₁R, 1 μM forskolin-stimulated adenylyl cyclase գործունեության արգելումը հետազոտվել է NAc թաղանթերում: Բացի MOR- ից եւ ԿԲ-ից₁R-միջնորդությամբ արգանդի ածխաջրածինների ակտիվացման արգելումը, ԿՈՐ գործողության հետեւանքները նույնպես ուսումնասիրվել են KOR- ընտրովի լիակատար ագրոնիստ U50,488 (Zhu եւ այլն, 1997), քանի որ նախորդ արդյունքները ցույց են տվել, որ դինորֆինային mRNA- ն ΔFosB- ի թիրախն է կրկնակի փոխանցման մոդելում (Zachariou եւ այլն, 2006): Արդյունքները ցույց են տվել, որ DAMGO- ը, U50,488- ը եւ WIN55,212-2- ը արտադրում են ածանցյալ ցիկլազային ակտիվության համակենտրոնացման խանգարում, ինչպես ΔFosB- ի եւ ΔFosB- ի մկների վրաՆկար 2): DAMGO- ի համակենտրոնացման ազդեցության տվյալների երկկողմանի ANOVA (Նկար 2A) բացահայտեց ΔFosB կարգավիճակի (p = 0.0012, F = 11.34, df = 1) և DAMGO կոնցենտրացիայի (p <0.0001, F = 29.61, df = 6) էական հիմնական էֆեկտները, բայց ոչ մի նշանակալի փոխազդեցություն (p = 0.441, F = 0.986 , df = 6): DAMGO- ի կոնցենտրացիայի ազդեցության կորերի ոչ գծային ռեգրեսիայի վերլուծությունը ցույց է տվել զգալիորեն ցածր DAMGO EC₅₀ արժեքը ΔFosB- ի մկների վրա (101 ± 11 նմ) `ΔFosB անջատ մկների համեմատ (510 ± 182 նմ, p <0.05 ուսանողի t- թեստի միջոցով): Այնուամենայնիվ, DAMGO E- ի մեջ էական տարբերություն չկար_{առավելագույնը `} արժեքները (20.9 ± 1.26% - ն ընդդեմ 19.8 ± 1.27% inhibition- ում ΔFosB- ի եւ սեղմված մկների համապատասխանաբար, p = 0.534):

ΔFosB արտահայտության ազդեցությունը NAc- ում adenylyl cyclase գործունեության արգելման վրա: ΔFosB-expression- ի (ΔFosB on) կամ հսկողության (ΔFosB off) մկների membranes են փորձարկվել որպես մեթոդների 1 μM ներկայությամբ ...

KOR- ի միջնորդավորված adenylyl ցիկլազի արգելումը նույնպես տարբերվում է որպես ΔFosB- ի ինդուկտիվ տրանսգենային արտահայտության ֆունկցիաՆկար 2B) U50,488 կոնցենտրացիայի ազդեցության տվյալների երկկողմանի ANOVA- ն ցույց տվեց ΔFosB կարգավիճակի (p = 0.0006, F = 14.53, df = 1) և U50,488 կոնցենտրացիայի (p <0.0001, F = 26.48, df = 3) հիմնական հիմնական էֆեկտները , առանց էական փոխազդեցության (p = 0.833, F = 0.289, df = 3): Համակենտրոնացման ազդեցության կորերի ոչ գծային ռեգրեսիայի վերլուծության արդյունքում հայտնաբերվել է ավելի մեծ U50,488 E_{առավելագույնը `} ΔFosB- ի մկների վրա արժեքը (18.3 ± 1.14% արգելակումը) ΔFosB- ի մկների համեմատ (12.5 ± 2.03% արգելակումը. p <0.05 տարբերվում է ΔFosB- ից ՝ Ուսանողի t- թեստով), U50,488 EC- ում էական տարբերություն₅₀ արժեքները (310 ± 172 nM- ն ընդդեմ 225 ± 48 nM- ում ΔFosB- ի եւ անջատված մկների վրա, համապատասխանաբար, p = 0.324):

Ի տարբերություն MOR- ի եւ KOR- ի դիտարկված ազդեցությունների, անգին transgenic ΔFosB արտահայտությունը զգալի ազդեցություն չի ունեցել ադրենիլյան ցիկլազի արգելակման վրա, WINNNXX-55212 (Նկար 2C) WIN55,212-2 համակենտրոնացման ազդեցության տվյալների երկկողմանի ANOVA- ն ցույց տվեց թմրամիջոցների կոնցենտրացիայի էական ազդեցություն (p <0.0001, F = 23.6, df = 2), բայց ոչ ΔFosB կարգավիճակի (p = 0.735, F = 0.118, df = 1) և ոչ էլ նշանակալի փոխազդեցություն (p = 0.714, F = 0.343, df = 2): Ավելին, ΔFosB կարգավիճակի ոչ մի ազդեցություն չի եղել բազալ կամ ֆորսկոլինով խթանված ադենիլիլ ցիկլազային ակտիվության վրա `ցանկացած ագոնիստի բացակայության պայմաններում: Ադենիլիլ ցիկլազայի հիմնական ակտիվությունը ΔFosB մկների վրա 491 ± 35 pmol / մգ / րոպե էր, ΔFosB մկների վրա 546 ± 44-ի համեմատ (Student- ի t- թեստով p = 0.346): Նմանապես, ադենիլիլ ցիկլազի ակտիվությունը 1 μM ֆորսկոլինի առկայության դեպքում կազմել է 2244 ± 163 պրմոլ / մգ / րոպե ΔFosB- ի մկների վրա `2372 ± 138 pmol / մգ / րոպե ΔFosB անջատ մկների դիմաց (p = 0.555):

3.3. ΔcJun- ի ազդեցությունը ադիոիլիկ ցիկլազի opioid եւ cannabinoid receptor-mediated inhibition- ին

Քանի որ ΔFosB- ի ինդուկտիվ տրանսգենային արտահայտությունը ΔFosB- ի միջնորդավորված transcription- ի գերիշխող բացասական կանխարգելիչը կկազմի հակառակ ձեւով օփիոիդային ռեցեպտորների ազդանշանային ազդանշանների ձեւավորումը: Այս հարցին պատասխանելու համար DAMGO- ի եւ U50,488- ի կողմից forskolin-stimulated adenylyl cyclase- ի արգելումը հետազոտվել է §cJun- ը պայմանականորեն արտահայտող ցավազրկող մկների NAc- ից պատրաստված մեմբրաններում: Արդյունքները ցույց են տվել, որ MOR կամ KOR- ի կողմից adenylyl cyclase ակտիվության արգելման վրա ΔcJun արտահայտությունը նշանակալի ազդեցություն չի ունենաՆկար 3) DAMGO- ի համակենտրոնացման ազդեցության կորերի ANOVA երկկողմանի ցույց տվեց DAMGO- ի կոնցենտրացիայի էական հիմնական ազդեցությունը (p <0.0001, F = 20.26, df = 6), բայց ոչ ΔcJun կարգավիճակի (p = 0.840, F = 0.041, df = 1) և զգալի փոխազդեցություն չի եղել (p = 0.982, F = 0.176, df = 6): Նմանապես, E- ի մեջ էական տարբերություն չկար_{առավելագույնը `} կամ EC- ն₅₀ արժեքները միջեւ ΔcJun- ի վրա (E_{առավելագույնը `} = 23.6 ± 2.6%; EC- ը₅₀ = 304 ± 43 nM) կամ ΔcJun off (E_{առավելագույնը `} = 26.1 ± 2.5%, p = 0.508; EC- ը₅₀ = 611 ± 176 նմ, p = 0.129): Նման արդյունքներ տեսան U50,488- ի դեպքում, այնպես, որ համակենտրոնացման ազդեցության կորերի ANOVA- ն ցույց տվեց համակենտրոնացման էական ազդեցություն (p <0.0001, F = 11.94, df = 6), բայց ոչ ΔcJun կարգավիճակի (p = 0.127 , F = 2.391, df = 1) և էական փոխազդեցություն չի եղել (p = 0.978, F = 0.190, df = 6): Նմանապես, E– ի մեջ էական տարբերություններ չեն եղել_{առավելագույնը `} կամ EC- ն₅₀ արժեքները միջեւ ΔcJun- ի վրա (E_{առավելագույնը `} = 14.8 ± 2.9%; EC- ը₅₀ = 211 ± 81 nM) կամ անջատված (E_{առավելագույնը `} = 16.7 ± 1.8%, p = 0.597; EC- ը₅₀ = 360 ± 151 nM, p = 0.411):

ԱԴՋ-ի արտահայտության ազդեցությունը NAc- ում adenylyl cyclase գործունեության արգելման վրա: ΔcJun-expressing (ΔcJun on) կամ հսկողության (ΔcJun off) մկաններից ներդիրները ներկառնվել են DAMGO (A), U50,488H (B) կամ WIN55,212-2- ի ներկայությամբ: ...

ΔcJun արտահայտությունը նույնպես էապես չի ազդել կանաբինոիդային ագոնիստի կողմից NAc- ում ադենիլիլ ցիկլազի արգելակման վրա: WIN55,212-2 կոնցենտրացիայի ազդեցության կորերի ANOVA երկկողմանի ցույց տվեց WIN55,212-2 կոնցենտրացիայի էական հիմնական ազդեցությունը (p <0.0001, F = 15.53, df = 6), բայց ոչ գենոտիպի (p = 0.066, F = 3.472, df = 1) և նշանակալի փոխազդեցություն չի եղել (p = 0.973, F = 0.208, df = 6): Նմանապես, WIN55,212-2 E- ի մեջ էական տարբերություններ չկային_{առավելագույնը `} արժեքները (13.0 ± 2.3% եւ 13.6 ± 0.9% inhibisyon ΔcJun- ում, հակառակ դեպքում, p = 0.821) կամ EC- ով₅₀ արժեքները (208 ± 120 nM եւ 417 ± 130 nM- ում ΔcJun- ում, հակառակ դեպքում, մկների վրա, համապատասխանաբար, p = 0.270): Այսպիսով, չնայած այն հանգամանքին, որ ջինջուն արտահայտող մկների WIN55,212-2- ի ուժգնությունը նվազեցրեց, տրանսգենը զգալիորեն չի փոխում ասենիլլի ցիկլազի արգելումը: Ավելին, ΔcJun- ի կարգավիճակի վրա որեւէ ազդեցություն չի եղել բազալային կամ forskolin-stimulated adenylyl cyclase գործունեության վրա: Բազալային ադրենիլային ցիկլազային ակտիվությունը 1095 ± 71 pmol / մգ / դյույմ եւ 1007 ± 77 պրեմոլ / մգ / դմ (p = 0.403), ΔcJun- ով մկների վրա, համապատասխանաբար, անջատվել կամ անջատվել է: 1 μM forskolin- ի կողմից խթանվող ադենիլյան ցիկլազային ակտիվությունը 4185 ± 293 պրեմոլ / մգ / դյույմն է 4032 ± 273 պրեմոլ / մգ / րոպե (p = 0.706), համապատասխանաբար ΔcJun- ի հետ մկների վրա:

3.4. Քննարկում

Այս հետազոտության արդյունքները ցույց են տվել, որ MOR- ի միջոցով միջնորդավորված G- սպիտակուցի ակտիվացումը եւ մկների NAc- ում adenylyl cyclase- ի արգելումը դենորֆինի / D- ի մեջ ΔFosB- ի սեռական տրանսգենային արտահայտությամբ₁R պարունակող նեյրոններ: KOR- ի միջնորդությամբ adenylyl cyclase- ի ակտիվացման արգելքը նույնպես ամրապնդվեց ΔFosB- ի մկների արտացոլման ակտում `նշելով, որ ΔFosB- ն կարգավորում է էնդոկրին օփիոիդային համակարգը NAc- ում: ԴԱՄԳՈ Ե_{առավելագույնը `} արժեքը մեծ էր MOR-stimulated [³⁵S] GTPγS պարտադիր եւ նրա EC- ն₅₀ արժեքը ցածր էր ադրենիլյան ցիկլազի արգելման համար, ΔFosB- ի նկատմամբ արտանետվող մկների համեմատ `վերահսկվող մկների համեմատ: Այս բացահայտումները ենթադրում են ռեզերվուարների ռեզերվու- թյուն հնարավոր ազդեցության մոդուլյացիայի համար, այլ ոչ թե G- սպիտակուցի ակտիվացումը `հետազոտված փորձարկման պայմաններում: Այն հայտնաբերումը, որ KOR agonist- ի կողմից ադրենիլային ցիկլազի առավելագույն արգելակումը ազդել է ΔFosB արտահայտության մեջ, ցույց է տալիս, որ KOR- ի միջնորդավորված արձագանքը ցածր ընկալիչի պահուստ է, որը համապատասխանում է մկնիկի ուղեղի KOR- ի ցածր մակարդակներինUnterwald եւ այլն, 1991): Ի տարբերություն ԿԲ-ի₁R- միջնորդավորված G- սպիտակուցային ակտիվությունը եւ ադրենիլյան ցիկլազի արգելումը անթույլատրելի են ΔFosB արտահայտությամբ, որ opioid եւ cannabinoid համակարգերը տարբերվում են այս NAc նեյրոնների մեջ ΔFosB- ին պատկանող արձագանքներից:

ΔFosB- ի օփիոիդային ընկալիչ միջնորդավորված ազդանշանների ազդեցությունը համապատասխանում է մեր նախորդ զեկույցին, որ ΔFosB արտահայտությունը striatum- ում փոփոխվել է մորֆինի սուր եւ քրոնիկ հետեւանքներըZachariou եւ այլն, 2006): Այդ ուսումնասիրության մեկ հայտնագործությունն այն էր, որ մկները ΔFosB- ի transgenic արտահայտությամբ դինորֆինի / D- ում₁R striatal նեյրոնները ավելի զգայուն էին մորֆինի նկատմամբ, քան վերահսկողները: Բացի այդ, այս ազդեցությունը ΔFosB- ի վիրուսային միջնորդավորված արտահայտությամբ զուգորդվել է NAc- ում տեղամասային հատուկ ներարկումով: Այս դիտարկումները համապատասխանում են ընթացիկ արդյունքներին, որոնք ցույց են տալիս NAC- ի ընդլայնված MOR ազդանշան:

Մենք նախկինում բացահայտել ենք գենի կոդավորումը դինորֆին որպես ΔFosB թիրախ եւ առաջարկեց, որ կրճատված դինորֆինը կհամապատասխանի ΔFosB bitransgenic mice- ում մորֆինի ուժեղացված պարգեւատրման հատկություններին (Zachariou եւ այլն, 2006): Ներկայիս արդյունքները ցույց են տալիս, որ ԱԿ-ում Ադենիլլի ցիկլազի KOR-ի միջամտության արգելակումը մեծանում է ΔFosB- ի արտահայտիչ մկների մեջ, ինչը կարող է արտացոլել ԿՈՐ զգայունության փոխհատուցումը `նվազեցվող դինորֆինից հետո: Նախորդ ուսումնասիրությունները ցույց են տվել, որ KOR- ը upregulated է որոշակի ուղեղի շրջաններում prodynorphin նոկաուտի մկների, այդ թվում `NAc (Քլարկ, եւ այլն, 2003).

Ի տարբերություն ΔFJB- ի, ΔcJun- ի ինդուկտիվ տրանսգենային արտահայտությունը, ΔFosB- ի պարտադիր գործընկեր CJun- ի գերիշխող բացասական կրճատված մուտանտը չի փոխել MOR կամ KOR agonists- ի adenylyl cyclase- ի արգելումը: Այս արդյունքները ցույց են տալիս, որ ΔFosB արտահայտության բազային մակարդակները, որոնք համեմատաբար ցածր են, զգալի դեր չեն խաղում ԱՀ-ում ազդանշանային փոխանցման այս մակարդակում օփիոիդային ռեցեպտորների ազդանշանների պահպանման գործում: Այն փաստը, որ մորֆինի պայմանավորված հատվածային ազդեցությունը նվազել է ΔcJun արտահայտությամբ, նախորդ ուսումնասիրության մեջ (Zachariou եւ այլն, 2006) առաջարկում է, թե ΔFosB- ի մորֆինային ներդիրը պայմանական եղանակի ընթացքում կարեւոր է դեղերի նկատմամբ վարքագծային արձագանքների կարգավորումը կամ ΔFosB- ի transcriptional ազդեցությունները բացառությամբ opioid- ի ռեզերվիստների կողմից կանխարգելման ազդանշանների վրա ազդող օպիոիդ պարգեւի վրա ազդելու համար: Ամեն դեպքում, ներկա ուսումնասիրության արդյունքները ցույց են տալիս, որ, երբ ΔFosB արտահայտությունը բարձր է բարձր ստերիլային դինորֆինի / D- ի բազային մակարդակներից₁R- արտահայտիչ նեյրոններ, կա ուժեղ աճ MOR եւ KOR- ի կապակցումը NAc- ում adenylyl cyclase- ի արգելման համար:

Այն մեխանիզմները, որոնցով MOR- եւ KOR- միջնորդավորված ազդանշանները ամրապնդվում են ΔFosB overexpression- ի կողմից, պարզ չէ, սակայն մենք նախկինում ցույց տվեցինք, որ MOR մակարդակները,³H] naloxone պարտադիր է, չեն տարբերվում ΔFosB- ի NAc- ի վրա, որոնք հակառակ դեպքում սինթեզում ենZachariou եւ այլն, 2006): Նույն ուսումնասիրությունը ցույց է տվել, որ Գա_i1 եւ 2 սպիտակուցների մակարդակները չեն ազդում այս տարածաշրջանում ΔFosB արտահայտությամբ: Այնուամենայնիվ, նախորդ գենային արտահայտությունների զանգվածային վերլուծությունները ցույց են տվել, որ Gα_o mRNA- ն վերափոխվել է ΔFosB- ի NAc- ում մկների վրա (McClung եւ Nestler, 2003): Հետաքրքիր կլինի ուսումնասիրել հետագա ուսումնասիրությունները, ուսումնասիրել transgenic ΔFosB արտահայտությունը սպիտակուցի մակարդակի G- սպիտակուցային ենթաբաժնի արտահայտման վրա, ինչպես նաեւ G- սպիտակուցի մոդուլային սպիտակուցների արտահայտման վրա:

Հետաքրքիր է, որ ΔFosB արտահայտությունը չի նպաստում CB- ին₁R- միջնորդավորված ազդանշան `ԱՀ-ում: Հնարավոր է, որ ԿԲ-ում փոփոխություններ լինեն₁Ռ ազդանշանը տեղի է ունենում նեյրոնների առանձին բնակչությունում, որը ամբողջովին NAc- ի նախապատրաստման ընթացքում անտեսված է: Օրինակ, Ա⁹- THC- ն զգալիորեն դրդեց ΔFosB- ին NAc- ի միջուկում, բայց ոչ կեղևում (Perrotti եւ այլն, 2008): ԵսՆիդի, ցույց տվեց, որ այդ մարտահրավերը Δ⁹Ա⁹-ԹՀ-ն դոպամինի ավելացումն ավելացրեց NAc- ի միջուկում, սակայն նվազեցրեց ռեցեսիայում (Cadoni, et al., 2008): Կարեւոր է նաեւ նշել, որ 11A- ն կրկնակի փոխանցման մկների գծով արտահայտում է ΔFosB- ն միայն դինորֆինի / D- ի₁R դրական միջին շնչառական նեյրոններ, սակայն ԿԲ-ն₁R արտահայտվում են երկու դինորֆին / D- ում₁R եւ enkephalin / D₂R դրական ստիատալ նեյրոններ (Hohmann եւ Herkenham, 2000), ինչպես նաեւ կորտական օղակների տերմինալների վրա (Robbe եւ այլն, 2001): ΔFosB- միջնորդավորված transcription- ի, ΔcJun- ի գերիշխող բացասական կարգավորիչի արտահայտումը նույնպես չի ունեցել էական ազդեցություն քննելունինի ռեցեպտորների ազդանշանների վրա, չնայած ΔcJun- ը հստակ արտահայտվում է ինչպես D- ում, այնպես էլ D- ում₁ եւ Դ₂- այդ մկների մեջ միջին ցողունային նեյրոնների պարունակությունըPeakman եւ այլն, 2003): Հնարավոր է, սակայն, որ բազային ΔFosB արտահայտությունը բավականաչափ ցածր է, քանի որ ΔcJun- ը չի ազդի ընկալիչների ազդանշանների վրա, ինչպես առաջարկվում է MOR եւ KOR- ի հետ: Հնարավոր է նաեւ, որ ԿԲ-ն₁R ազդանշանը համեստորեն ուժեղացված է բազային ΔFosB արտահայտությամբ, այնպիսին, որ հետագա ΔFosB արտահայտությունը կամ ΔcJun- ի հետ իր գործողությունները արգելափակում են միայն փոքր ազդեցությունները, որոնք չեն հասել վիճակագրական նշանակության մակարդակ: Այս մեկնաբանության անուղղակի աջակցությունը կարելի է տեսնել WIN55,212-2 EC- ի համեմատությամբ₅₀ արժեքները միջեւ մկների արտահայտելով ΔcJun ընդդեմ ΔFosB. WIN55,212-2 EC- ի հարաբերակցությունը₅₀ արժեքը adenylyl ցիկլազի արգելակման մեջ մկների մեջ, որի հետեւանքով ΔcJun- ը դրսեւորվում է EC- ի₅₀ ΔFosB- ի դրսեւորած արտահայտությամբ մկների մեջ G- սպիտակուցի ակտիվացման արժեքը 4.0- ն էր, մինչդեռ մկների նույն հարաբերակցությունը առանց տրանսգենի իննեկուցման 1.2 էր:

Alternatively, cannabinoids կարող են առաջացնել ΔFosB արտահայտությունը առանց որեւէ ազդեցության ԿԲ-ի վրա₁R ազդանշան: Այս սցենարում, կարագինոիդները կարող են ձեւափոխել այլ դեղերի հոգեվերլուծական ազդեցությունները `ΔFosB- միջնորդավորված transcriptional regulation- ի միջոցով: Եսn փաստ, administration of Δ⁹-THC- ն արտադրում է խաչաձեւ սենսիտիզացիան opioids եւ amfetamine (Cadoni, et al., 2001, Lamarque, et al., 2001), համահունչ այս վարկածին: Ավելին, կրկնօրինակի քրոնիկ ածխածնային CP55,940- ի կրկնօրինակը հայտնաբերվել է NAC- ում MOR- միջնորդավորված G- սպիտակուցի ակտիվացումը, ինչպես նաեւ սույն հետազոտության մեջ ΔFosB- ի հստակ արտահայտված մկներըՎիգանո եւ այլն, 2005): ΔFosB արտահայտության ազդեցությունը Δ⁹- ՏՄ-ի միջնորդավորված վարքագիծը չի գնահատվել, սակայն ներկա արդյունքները չեն խանգարում փոխգործակցությանը: Այս եւ մեր նախորդ ուսումնասիրության արդյունքները (Zachariou եւ այլն, 2006) ցույց են տալիս ΔFosB- ի փոփոխությունները MOR եւ KOR / dynorphin- ում striatum- ում: Ա⁹-THC- ը, որը չափվում է ըստ տեղադրության նախապատվության, մոռացվում է MOR null մկների մեջ, մինչդեռ KOR- ն ջնջվել է Δ⁹-THC տեղը զայրույթ եւ հայտնաբերել Δ⁹-THC տեղադրության նախապատվությունը (Ghozland եւ այլք, 2002): Նմանապես, պայմանավորված տեղը զիջում է Δ⁹-THC- ը բացակայում է պրոդենդերֆինային նոկաուտում վայրի բնության մկների համեմատ (Zimmer եւ այլք, 2001): Այս տվյալները ցույց են տալիս, որ Δ⁹-THC- ը կարող է ավելի պարգեւատրվել ΔFosB- ի ինդուկցիայի եւ MOR ազդանշանների հաջորդական ներդնելուց հետո դինորֆինի արտահայտման նվազեցմամբ:

Ամփոփելովy, այս ուսումնասիրության արդյունքները ցույց են տվել, որ DF- ի արտահայտությունը D- ում₁R / դինորֆինի դրական ստիատալային նեյրոնները ուժեղացրել են MOR- եւ KOR- միջնորդավորված ազդանշանները NAc- ում adenylyl cyclase ակտիվության G- սպիտակուցի միջնորդավորված արգելման մակարդակում: Այս եզրակացությունը համապատասխանում է այն ուսումնասիրություններին, որոնք դրսեւորել են ներգաղթային օփիոիդային համակարգի վարձատրությունըՏրիգո եւ այլն, 2010), եւ ապահովել պոտենցիալ մեխանիզմ ΔFosB միջնորդավորված ազդեցությունների համար. Ի տարբերություն ԿԲ-ի₁Հետազոտված պայմաններում ՌՀ-ի միջնորդավորված ազդանշանները զգալիորեն չեն ազդում ստերիալալ ΔFosB արտահայտության վրա, թեեւ հետագա ուսումնասիրությունները երաշխավորված են ΔFosB- ի ինդուկցիայի ազդեցությունը эндоканнибиноид համակարգի վրա:

Հետազոտության ուշադրության կենտրոնում

MOR ազդանշանն ուժեղանում է ΔFosB- ի արտահայտած մկների միջուկի հոնքերի մեջ
KOR inhibition- ը adenylyl cyclase- ի ավելացումն է նաեւ ΔFosB- ի արտահայտած մկների մեջ
ΔFosB- ի արտահայտումը չի փոխում ԿԲ-ն₁R- ի ազդանշանային միջավայրում

Լրացուցիչ նյութեր

01

Սեղմեք այստեղ դիտելու համար:^{(45K, pdf)}

Լրացուցիչ

Հեղինակները շնորհակալություն են հայտնել Hengjun He, Jordan Cox եւ Aaron Tomarchio տեխնիկական աջակցության համար [³⁵S] GTPγS պարտադիր փորձեր: Այս ուսումնասիրությունը իրականացվել է USPHS Grants DA014277 (LJS), DA10770 (DES) եւ P01 DA08227 (EJN) կողմից:

Հղումներ

Հրատարակչի հրաժարումը Սա հրատարակման համար ընդունված չհրապարակված ձեռագրի PDF ֆայլ է: Որպես ծառայություն մեր հաճախորդներին, մենք տրամադրում ենք ձեռագրի այս վաղ տարբերակը: Ձեռագիրը ենթարկվում է պատճենահանման, տպագրության եւ վերանայման արդյունքների, մինչեւ դրանց հրապարակման վերջնական ձեւը: Խնդրում ենք նկատի ունենալ, որ արտադրության ընթացքում հնարավոր է հայտնաբերել սխալներ, որոնք կարող են ազդել բովանդակության վրա, եւ բոլոր իրավական խոստումները, որոնք վերաբերում են ամսագրին:

Սայլակ

Բո Bozarth MA, Իմաստուն ՀՀ: Անատոմիապես տարբեր օփիատ ընկալիչի դաշտերը միջնորդում են վարձատրության եւ ֆիզիկական կախվածության: Գիտություն. 1984;224: 516-517: [PubMed]
Բրեդֆորդ Մ. Սպիտակուցային-ներկային կապող սկզբունքի օգտագործման սպիտակուցի քանակի քանակի որոշման արագ եւ զգայուն մեթոդ: Անալ Biochem. 1976;72: 248-254: [PubMed]
Բրիվոգել CS, Childers SR, Deadwyler SA, Hampson RE, Vogt LJ, Sim-Selley LJ: Քրոնիկ դելտա⁹-թետխոկրոկաննանաբինոլի բուժումը արտադրում է ուղեղի կանկաբինոիդ վերափոխիչ-ակտիվացված G-սպիտակուցների ժամանակային կախվածությունը: Ժ. Նեուրոկեմ: 1999;73: 2447-2459: [PubMed]
Breivogel CS, Selley DE, Childers SR- ն: Cannabinoid receptor agonist- ի արդյունավետությունը խթանելու համար [³⁵S] GTPγS- ի հետ կապակցված առնետների ցերեկային մեմբրանները փոխկապակցված են ՀՆԱ-ի հարստացման ազդեցության տակ գտնվող ագրոնիստների նվազման հետ: J. Biol. Chem. 1998;273: 16865-16873: [PubMed]
Կադոնի Ք, Պիզանու Ա, Սոլինաս Մ, Աքցաս Է, Դի Չիարա Գ. Դելտա 9-tetrahydrocannabinol- ի կրկնակի ազդեցությունից հետո եւ մորֆինի հետ խաչմերուկումից հետո վարվելակերպի զգայունությունը: Psychopharmacology (Բեռլին) 2001;158: 259-266: [PubMed]
Cadoni C, Valentini V, Di Chiara G. Դելտա 9-tetrahydrocannabinol- ի վարքային սենսիտիզացիան եւ մորֆինի հետ խաչմերուկում: Դիֆերենցիալ փոփոխություններ, ակտուալ շերտում եւ հիմնական դոպամինային փոխանցում: Ժ. Նեուրոկեմ: 2008;106: 1586-1593: [PubMed]
Chen J, Kelz MB, Zeng G, Sakai N, Steffen C, Shockett PE, Picciotto MR, Duman RS, Nestler EJ: Տրանսգենային կենդանիներ, որոնք ուղեկցվում են ընկճված, նպատակային գենային արտահայտությամբ: Մոլ. Ֆարմոլոլ. 1998;54: 495-503: [PubMed]
Childers SR- ն: Օփիոիդային ընկալիչը զուգորդված երկրորդ սուրհանդակների միջոցով: Կյանքի գիտություն: 1991;48: 1991-2003: [PubMed]
Մանկապղծողներ SR, Fleming L, Konkoy C, Marckel D, Pacheco M, Sexton T, Ward S. Opioid եւ cannabinoid reseptor արգելակում adenylyl cyclase է ուղեղի. Աննան NY Acad. Sci. 1992;654: 33-51: [PubMed]
Childers SR, Xiao R, Vogt LJ, Sim-Selley LJ- ը: Kappa opioid ընկալիչի խթանումը [³⁵S] GTPγS պարտադիր գինու խոզերի ուղեղում. Ապացույցների բացակայություն Kappa- ի համար₂G- սպիտակուցների որոշակի ակտիվացում: Biochem. Ֆարմոլոլ. 1998;56: 113-120: [PubMed]
Կլկկե Ս, Զիմեր Ա, Զիմեր Ա.Մ., Hill RG, Խոհանոց I. Տարածաշրջանային ընտրանքային կարգավորումը միկրո, դելտա եւ կափփա-օփիոիդային ընկալիչների, բայց ոչ opioid- ի վերափոխիչ նման 1 ընդունիչները `enkephalin- ի եւ դինորֆինի նոկաուտի մկների ուղեղներում: Neuroscience. 2003;122: 479-489: [PubMed]
Colby CR, Whisler K, Steffen C, Nestler EJ, Self DW- ն: DeltaFosB- ի ստերիլալ բջջային տիպի հատուկ գերբնակեցումը նպաստում է կոկաինի խթանմանը: J. Neurosci. 2003;23: 2488-2493: [PubMed]
Gardner EL. Endocannabinoid ազդանշանային համակարգը եւ ուղեղի պարգեւատրումը. Շեշտը դոպամինին: Ֆարմոլոլ. Biochem. Ահա. 2005;81: 263-284: [PubMed]
Քոննունինիդների մոտիվացիոն ազդեցությունները միջնորդվում են mu-opioid եւ kappa-opioid ընկալիչների կողմից: J. Neurosci. 2002;22: 1146-1154: [PubMed]
Herkenham M, Lynn AB, Ջոնսոն Մ.Ռ., Մելվին LS, դե Կոստա BR, Ռայս Կ. Ռնգային ուղեղի մեջ կաննաբինոիդ ընկալիչների բնութագրումը եւ տեղայնացումը. Քանակական in vitro autoradiographic ուսումնասիրության մեջ: J. Neurosci. 1991;11: 563-583: [PubMed]
Hohmann AG, Herkenham M. Կաննաբինոկի CB (1) ռեցեպտորների mRNA- ի տեղայնացում, առնետների նեֆրոլոգիայի նեվոնալ ենթաբազմություններում `երկակի պիտակի in situ հիբրիդիզացիայի ուսումնասիրության մեջ: Synapse- ը: 2000;37: 71-80: [PubMed]
«Howlett AC», «Barth F», «Bonner TI», Cabral G, Casellas P, Devane WA, Felder CC, Herkenham M, Mackie K, Martin BR, Mechoulam R, Pertwee RG: Ֆարմակոլոգիայի Միջազգային Միություն: XXVII. Կաննաբինոիդային ընկալիչների դասակարգում: Դեղաբանական հետազոտություն: 2002;54: 161-202:
Huestis MA- ի, Gorelick DA- ի, Heishman SJ- ի, Preston KL- ի, Nelson RA- ի, Moolchan ET- ի, Ֆրանկ Ռաու. Կպչուն մարիխուանայի ազդեցության արգելափակումը CB1-selective cannabinoid receptor antagonist SR141716- ի կողմից: Arch. Ընդհանուր հոգեբուժություն: 2001;58: 322-328: [PubMed]
Քել Ջի, Քեն Ջ, Կառլիզոն Վ.Ա., Ջր, Ուիսլեր Ք, Գիլդեն Լ, Բեքման AM, Steffen C, Zhang YJ, Marotti L, Self DW, Tkatch T, Baranauskas G, Surmeier DJ, Neve RL, Duman RS, Picciotto MR, Nestler EJ- ն: ԴելտաՖոսԲ-ի փոխանցման գործոնի արտահայտումը ուղեղում վերահսկում է կոկաինի զգայունությունը: Բնությունը. 1999;401: 272-276: [PubMed]
Koob GF, Volkow ND: Կախվածության նյարդավիրաբուժություն: Neuropsychopharmacology. 2010;35: 217-238: [PMC անվճար հոդվածը] [PubMed]
Lamarque S, Taghzouti K, Simon H. Քրոնիկ բուժումը Delta (9) -tetrahydrocannabinol- ի հետ նպաստում է ամպետամինի եւ հերոինի շարժիչային արձագանքը: Թմրամոլության խոցելիության հետեւանքները: Neuropharmacology. 2001;41: 118-129: [PubMed]
Մալդոնադո R, Valverde O, Berrendero F. Թնդուկային կախվածության մեջ ներգրավված էնդոկմանաբինոիդային համակարգի ներգրավումը: Թրենդներ Նյարդաբան: 2006;29: 225-232: [PubMed]
Mansour A, Fox CA, Thompson RC, Akil H, Watson SJ- ը: mu-Opioid- ի ընկալիչ mRNA արտահայտությունը առնետների CNS- ում `համեմատած mu-receptor պարտադիր: Brain Res. 1994;643: 245-265: [PubMed]
Matthes HWD, Maldonado R, Simonin F, Valverde O, Slowe S, Խոհանոց I, Befort K, Dierich A, LeMeur M, Dolle P, Tzavara E, Hanoune J, Roques BP, Kieffer BL: Մորֆինի իջեցված անալգիզիայի կորուստ, պարգեւատրման ազդեցություն եւ հեռացման ախտանիշեր մկների մեջ, որոնք չունեն μ-opioid- ի վերափոխիչ գեն: Բնությունը. 1996;383: 819-823: [PubMed]
McClung CA, Nestler EJ- ն: CREB եւ DeltaFosB- ի կողմից գենային արտահայտման եւ կոկաինի պարգեւի կարգավորումը: Նատ. Neurosci. 2003;6: 1208-1215: [PubMed]
McClung CA, Ulery PG, Perrotti LI, Zachariou V, Berton O, Nestler EJ: DeltaFosB- ը ուղեղի երկարաժամկետ հարմարվողության համար մոլեկուլային անջատիչ է: Brain Res. Մոլ. Brain Res. 2004;132: 146-154: [PubMed]
Մյուլլեր DL, Unterwald EM: D1- ի դոպամինային ընկալիչները մոդատում են deltaFosB- ի ներարկումն առնետի ստրիաթում `պարբերաբար մորֆինային կառավարման արդյունքում: J. Pharmacol. Exp. Ther. 2005;314: 148-154: [PubMed]
Nestler EJ- ն: Վերանայում. ԴՆԹ-ի դերակատարումը. Փիլոս. Տրանս. R. Soc. Լոնդ. Բ. Բիոլ. Sci. 2008;363: 3245-3255: [PMC անվճար հոդվածը] [PubMed]
Nestler EJ, Kelz MB, Chen J. DeltaFosB: երկարատեւ նյարդային եւ վարքային պլաստիկության մոլեկուլային միջնորդ: Brain Res. 1999;835: 10-17: [PubMed]
Nye HE, Հույս BT, Kelz MB, Iadarola M, Nestler EJ: Կոդի քրոնիկ FOS- ի հետ կապված հակագենի ներդիրի կարգավորման վերաբերյալ դեղագործական ուսումնասիրությունները ստիաթում եւ միջուկի ակամենսներում: J. Pharmacol. Exp. Ther. 1995;275: 1671-1680: [PubMed]
Peakman MC, Colby C, Perrotti LI, Tekumalla P, Carle T, Ulery P, Chao J, Duman C, Steffen C, Monteggia L, Allen MR, Stock JL, Duman RS, McNeish JD, Barrot M, Self DW, Nestler EJ , Սաեֆֆեր E. Էնդրեմենտ, ուղեղային տարածքի հատուկ արտահայտություն, տրանսգենային մկների C-Jun- ի գերիշխող բացասական մուտանտի նվազեցում է կոկաինի զգայունությունը: Brain Res. 2003;970: 73-86: [PubMed]
Perrotti LI, Weaver RR, Robison B, Renthal W, Maze I, Yazdani S, Elmore RG, Knapp DJ, Selley DE, Martin BR, Sim-Selley L, Bachtell RK, Self DW, Nestler EJ: DeltaFosB- ի ուղեղի հագեցված տարբերակները չարաշահման թմրամիջոցներով: Synapse- ը: 2008;62: 358-369: [PMC անվճար հոդվածը] [PubMed]
Robbe D, Alonso G, Duchamp F, Bockaert J, Manzoni OJ: Մանրաթելային միջուկի accumbens- ի glutamatergic synapses- ում կանկաբինոիդային ընկալիչների տեղայնացումը եւ գործողության մեխանիզմները: J. Neurosci. 2001;21: 109-116: [PubMed]
Salomon Y. Adenylate ցիկլազի փորձառություն: Խորհուրդ. Ցիկլիկ Nucleotide Res. 1979;10: 35-55: [PubMed]
Selley DE, Sim LJ, Xiao R, Liu Q, Childers SR- ն: Mu opioid receptor-stimulated [³⁵S] GTPγS պարտադիր է առնետների թալամուսում եւ մշակված բջիջների գծերում. Ազդանշանային փոխանցման մեխանիզմներ, որոնք հիմքում ընկած են ագրոիստական արդյունավետության մասին: Մոլ. Ֆարմոլոլ. 1997;51: 87-96: [PubMed]
Trigo JM, Martin-Garcia E, Berrendero F, Robledo P, Maldonado R. Էնդոգեն օփիոիդային համակարգ. Թմրանյութի ալկոհոլը կախված է: 2010;108: 183-194: [PubMed]
Unterwald EM, Knapp C, Zukin RS: Κ1- ի եւ κ2 օփիոիդային ընկալիչների նեյրոանատոմիկական տեղայնացումը `առնետների եւ գինու խոզերի ուղեղներում: Brain Res. 1991;562: 57-65: [PubMed]
Vaccarino FJ, Bloom FE, Koob GF- ն: Կրծքագեղձի արգելակման օփիատ ընկալիչները արգելակում են ագռավը ներերակային հերոինի պարգեւը: Psychopharmacology (Բեռլին) 1985;86: 37-42: [PubMed]
Vigano D, Rubino T, Vaccani A, Bianchessi S, Marmorato P, Castiglioni C, Parolaro D. Մոլեկուլյար մեխանիզմները, որոնք ներգրավված են քնաբերին եւ օփիոիդային համակարգերի ասիմետրիկ փոխազդեցության մեջ: Psychopharmacology (Բեռլին) 2005;182: 527-536: [PubMed]
Զաչարիո Վ, Բոլանոս CA, Selley DE, Theobald D, Cassidy MP, Kelz MB, Shaw-Lutchman T, Berton O, Sim-Selley LJ, Dileone RJ, Kumar A, Nestler EJ: ԴելտաՖոսԲ-ի համար կարեւոր դեր է մորֆինային ակցիայի միջուկի հագուկապի մեջ: Նատ. Neurosci. 2006;9: 205-211: [PubMed]
Զանգեն Ա, Սոլինաս Մ, Իկեմոտո Ս, Գոլդբերգ Ս.Ռ., Իմաստուն ՀՀ: Երկու գլխապտույտ վայրեր կաննաբինոի պարգեւի համար: J. Neurosci. 2006;26: 4901-4907: [PubMed]
Zhu J, Luo LY, Li JG, Chen C, Liu-Chen LY- ը: Կլոնավորված մարդու kappa opioid reseptor- ի ակտիվացումը ագրոնիստների կողմից խթանում է [35S] GTPγS կապը մեմբրաններին. Լիգաների եւ պտղերի որոշման արդյունավետությունը: J. Pharmacol. Exp. Ther. 1997;282: 676-684: [PubMed]
Zimmer A, Valjent E, Konig M, Zimmer AM, Robledo P, Hahn H, Valverde O, Maldonado R. Դելտա-9-tetrahydrocannabinol dysphoric հետեւանքների բացակայությունը դինորֆինի բացակայող մկների մեջ: J. Neurosci. 2001;21: 9499-9505: [PubMed]
Zimmer A, Zimmer AM, Hohmann AG, Herkenham M, Bonner TI. Կինբոյինիդ CB1 ընդունիչի նոկաուտի մկների աճող մահացությունը, հիպոակտիվությունը եւ հիպոալգեզիան: Proc. Նատլ. Acad. Sci. ԱՄՆ 1999;96: 5780-5785: [PMC անվճար հոդվածը] [PubMed]