Չնայած երկու սթրեսը, չարաշահման թմրանյութերը եւ որոշակի բնական պարգեւները հանգեցնում են DeltaFosB- ի կուտակմանը, սթրեսը ակտիվացնում է տարբեր ստորերկրյա բջիջները եւ հետագայում տարբեր ընկալիչների եւ գեների մասին: Այլ կերպ ասած, հակումներ եւ սթրեսների դիմադրությունը հիմնված են տարբեր մեխանիզմների վրա
J Neurosci. 2010 Oct 27; 30 (43): 14585-92:
Vialou V, Maze I, Renthal W, LaPlant QC, Watts EL, Mouzon E, Ghose S, Tamminga CA, Nestler EJ:
Աղբյուր
Նյու-Յորքի Fishberg բժշկության բաժինը, Սինայի բժշկական դպրոց, Նյու Յորք, Նյու Յորք 10029, ԱՄՆ:
Վերացական
Սթրեսային եւ թմրամիջոցների ներթափանցած նեյրոնային ներդաշնակությունների հիմքում ընկած մոլեկուլային մեխանիզմները լիովին հասկանալի են: Նման հարմարվողականության մեջ ներգրավված մեկ մոլեկուլ է, ΔFosB- ը, որը transcription գործոն է, որը կուտակվում է կրծող միջուկի ականջակալներում (NAc), առանցքային ուղեղի վարձատրության տարածաշրջանում `ի պատասխան քրոնիկական սթրեսի կամ կրկնվող շեղումների թմրանյութերի: Տայդ շրջակա միջավայրի խթանման միջոցով ΔFosB- ի ինդուկցիան վերահսկող վերափոխման transcriptional մեխանիզմները շարունակում են խուսափել: Այստեղ մենք բացահայտում ենք գործողության կախված փոխանցման գործոնը, շիճուկի արձագանքման գործոնը (SRF), որպես սթրեսի վեպի առաջատար միջնորդ, բայց ոչ կոկաինը-, induced ΔFosB. SRF- ն իջեցվում է ինչպես դեպրեսիվ մարդկային հիվանդների, այնպես էլ մկների վրա: SRF- ի այս անկարգությունները բացակայում են կենդանի կենդանիների վրա: Արդյունաբերական մուտագենեզի կիրառմամբ մենք ցույց ենք տալիս, որ ΔFosB- ի սթրես-միջնորդական ներադրումը, որը հիմնականում տեղի է ունենում կայուն մկների մեջ, կախված է այս ուղեղի շրջանում SRF- ի արտահայտությունից. Բացի այդ, SRF- ի NAc- ի հատուկ գենետիկ ջնջումը նպաստում է մի շարք պրոդեպեպտանտների եւ պրոանհամետության նման ֆենոտիպների եւ կենդանիներին ավելի զգայուն է քրոնիկական սթրեսի վնասակար հետեւանքների նկատմամբ: Ի հակադրություն, մենք ցույց ենք տալիս, որ SRF- ն դեր չի խաղում ΔFOSB- ի կուտակումին NAC- ում `խրոնիկական կոկաինը ենթարկվելու համար: Բացի այդ, SRF- ի NAc- նակի բախումը ոչ մի ազդեցություն չի ունենում կոկաինը ենթարկված վարքագծի վրա, նշելով, որ քրոնիկ սոցիալական պարտվածության սթրեսը եւ կրկնակի կոկաինը ենթարկվում են ΔFOSB կուտակման եւ վարքային զգայունության միջոցով անկախ մեխանիզմների միջոցով:
ներածություն
Հիմնական ուղեղի վարձատրության տարածաշրջանը (NAc) կարեւոր է զգայական եւ ճանաչողական միջոցների ինտեգրման համար, որոնք խթանող մոտիվացիան վարում են բնապահպանական խթաններին (Nestler եւ Carlezon, 2006, Sesack եւ Grace, 2010): ԱԱ-ն նույնպես ներգրավված է թմրամոլության եւ դեպրեսիայի հետ կապված վարքային անբավարարության մեջ: Ըստ այդմ, ԱՀԿ-ին ուղղված ուղեղի ուղեղի խթանումը ցույց է տվել, որ թեթեւացնում են դեպրեսիան եւ կախվածությունը նման մարդկանց եւ կրծողների դեմ (Schlaepfer et al., 2008, Vassoler et al., 2008; Heinze et al., 2009; Kuhn et ալ., 2009):
Խախտման կամ սթրեսի թմրամիջոցների կրկնակի ազդեցությունը ենթադրում է NAc- ում գենի արտահայտման փոփոխված ձեւեր, որոնք կարող են ենթարկվել կախվածության եւ դեպրեսիայի խրոնիկությանը (Berton et al., 2006; Krishnan et al., 2007; Maze et al., 2010; Vialou et al ., 2010): Հետաքրքիր է, որ fosB- ի գեների միկրոօրգանիզմը ΔFosB- ի արտանետիչ գործակիցը NAc- ում կուտակվում է կրկնակի թմրանյութերի կամ սթրեսի ազդեցության (Nestler, 2008, Perrotti եւ այլն, 2008, Vialou եւ այլն, 2010): ΔFosB- ն առաջարկվել է որպես պոտենցիալ մոլեկուլային անջատիչ, որը հանգեցնում է հանգստյան թմրամիջոցների օգտագործման `քրոնիկ կերպով կախված վիճակի անցմանը (Nestler եւ այլն, 1999; McClung et al., 2004; Renthal et al., 2009), քանի որ NAc- ի կուտակումն ուժեղացնում է խրախուսելով պատասխանները մի շարք թմրամիջոցների չարաշահման: Վերջերս պարզվեց, որ ΔFosB- ի ինդուկցիան ԱՀՀ-ում դառնում է քրոնիկական սոցիալական պարտվածության սթրեսից հետո (Nikulina et al., 2008, Vialou et al., 2010): ΔFosB- ն ակտիվացնում է սթրեսային խթանների ակտիվ պատասխանն ու բարձրացնում է ճկունությունը. Չնայած ΔFosB- ի զորակոչը տեղի է ունենում խթանիչ կախվածությամբ, թմրամիջոցների եւ սթրեսային ազդեցության ΔFosB կուտակման համար պատասխանատու մեխանիզմները դեռեւս անհայտ են:
Շիճուկի արձագանքի գործոնը (SRF) արտագրման գործոն է, որն անհրաժեշտ է ակտիվությունից կախված արտագրման ակտիվացման համար մի քանի անմիջական վաղ գեների, ներառյալ c-fos, fosb, Egr1 և Arc (Knöll and Nordheim, 2009): Վերջին ուսումնասիրությունները ցույց են տվել, որ SRF- ի ազդեցությունը նեյրոնների մորֆոլոգիական և ցիտարաքիթաքարային հատկությունների վրա, ներառյալ մեծահասակների ուղեղում սինապսային ակտիվության կարգավորումը և շղթաների ձևավորումը (Knöll and Nordheim, 2009): Այս հայտնագործությունները հուշեցին մեզ ուսումնասիրել, թե արդյոք SRF- ն ֆունկցիոնալորեն կարգավորվում է չարաշահման կամ սթրեսի թմրանյութերի քրոնիկ ազդեցությամբ, ինչպես նաև այդ կարգի ΔFosB զորակոչի վրա այդ կարգի հնարավոր ազդեցությունը:
Այստեղ մենք նկարագրում ենք մի նոր մեխանիզմ, որի միջոցով NAc- ում SRF- ի անկարգացումը խթանում է պրոդեպրեսանտ և տագնապածին ֆենոտիպերը `ի վերջո բարձրացնելով կենդանու խոցելիությունը քրոնիկական սթրեսի վնասակար ազդեցությունների նկատմամբ:, Այս ազդեցությունները մասամբ միջնորդվում են սթրեսային կենդանիների NAc- ում ΔFosB ինդուկցիայի կորստով: Դեպրեսիվ հիվանդներից ստացված հետմահու NAc հյուսվածքի մեջ SRF և ΔFosB արտահայտվածության նկատվող նվազումները նպաստում են մեր հայտնագործությունների արդիականությանը մարդկային դեպրեսիայի հետ: Հետաքրքիր է, որ ΔFosB- ի կուտակումը վերահսկող այս մեխանիզմը կարծես թե հատուկ է սթրեսի համար. Կոկայինի քրոնիկական ազդեցությունը ազդեցություն չունի SRF- ի արտահայտման վրա, SRF- ի վերացումը NAc- ից չի ազդում ΔFosB- ի կուտակման վրա քրոնիկ կոկաինի ազդեցությունից հետո, և նման SRF- ի վերացումը ոչ մի ազդեցություն չունի կոկաինի վրա- դրդված վարք: SRF- ի և ΔFosB- ի այս նոր փոխազդեցությունը սթրեսի համատեքստում կարող է ներկայացնել կարևոր հոմեոստատիկ մեխանիզմ, որը կարգավորում է անհատի քրոնիկական սթրեսի նկատմամբ զգայունությունը:
Նյութեր եւ մեթոդներ
Կենդանիներ
Ութ շաբաթական C57BL / 6J տղամարդկանց մկաններ (Jackson Laboratory) օգտագործվել են բոլոր վարքագծային եւ կենսաքիմիական փորձերում: Բոլոր կենդանիները տնկվեցին կենդանական կայան առնվազն 1 շաբաթ առաջ փորձարարական մանիպուլյացիաներից եւ պահպանվեցին 23-25 ° C- ում 12 ժամյա լույսի / մութ ցիկլով (լույսերը 7- ից `00 AM- ից մինչեւ 7: 00 PM), ինչպես նաեւ ad libitum հասանելիություն սննդի եւ ջրի համար: Փորձերը կատարվել են Նեյմոլոգիայի Հասարակության եւ ինդուստրիալ կենդանիների խնամքի եւ օգտագործման կոմիտեի ուղեցույցներով, որոնք գործում են Սինայի բժշկական դպրոցում:
Կոկաին փորձարկումների համար [Western blotting եւ quantitative chromatin immunoprecipitation (ChIP)] օգտագործվել են 8- ից մինչեւ 10-ների տարեկան C57BL / 6J մկները: Կենդանիները ստացել են կամ աղի կամ կոկաինի յոթ օրվա ներերակային ներարկում (20 մգ / կգ կոկաին-HCl, Սիգմա): Վերջնական բուժումից հետո մկները օգտագործվել են 24 ժամ: Զգայական փորձերի համար մկները միմյանց հետ էին պահում բուժման եւ բուժվում էին 10 մգ / կգ (լոկոմորատոր հստակեցում) կամ 7.5 մգ / կգ (պայմանավորված տեղ նախընտրում) կոկաին-HCl ներծծող, ստորեւ նկարագրված:
Srffl / fl մկները գեներացվել էին նախկինում նկարագրված (Ramanan et al., 2005): Srf- ի NAc- ի բջիջները ձեռք են բերվել ստերեոտաքսիկ ներարկումով եւ հետագայում կրեմ recombinase- ի (Cre) վիրուսային գերբնակեցման միջոցով, որը կապվում է կանաչ ֆլուորեսցենտային սպիտակուցի (GFP) `օգտագործելով adeno- ի հետ կապված վիրուսի (AAV) վեկտորները: Օգտագործվում է ոչնչացնող Cre- ը: AAV-GFP- ն ներարկվել է որպես AAV-Cre-GFP- ի Srffl / fl մկների մեջ որպես վերահսկողություն: Կարճ ասած, մկները անզգայացվում էին, օգտագործելով ketamine (10 մգ / կգ) եւ xylazine (10 մգ / կգ) խառնուրդը, որոնք օգտագործվում են հետեւյալ ստերեոտաքսիկ կոորդինատների համար, որոնք օգտագործվում են վիրուսային առաքման համար `+ 1.6 (նախորդ / հետերային), + 1.5 (կողային) 4.4 (dorsal / ventral) միջին գծից 10 ° անկյան տակ (համեմատած bregma): Ընդհանուր 0.5 μl մաքրված վիրուսը երկակիորեն փոխանցվել է 5 րոպե ժամանակահատվածում (0.1 μl / րոպե), այնուհետեւ `5 րոպե հանգստությամբ: Մկները փորձարկվել են 2 շաբաթ վիրահատությունից հետո, երբ վիրուսային արտահայտությունը առավելագույնն էր, եւ վիրուսային ներարկման վայրերը հաստատվել են բոլոր կենդանիների համար, օգտագործելով ստանդարտ հիստոլոգիական մեթոդներ: Վիրուսային միջնորդավորված Քրե արտահայտության արդյունավետությունը հաստատվել է immunohistochemistry- ի կողմից եւ ACE-Cre-GFP եւ AAV-GFP- ին տրված ACE-Cre-GFP- ի կենդանիներից ստացված միկրոֆունկցիոնալ NAc թրթուրների վրա Srf- ի հակադարձ թեքկտրտազի PCR- ի միջոցով: AAV-GFP- ը եւ AAV-Cre-GFP վիրուսները գեներացվել էին նախկինում նկարագրված (Maze et al., 2010):
Վարքագծային ընթացակարգեր
Սոցիալական պարտություն սթրեսը:
C57BL / 6J մկները ենթարկվեցին 10 օրացուցային օրվա ընթացքում քրոնիկ սոցիալական պարտության սթրեսին, ինչպես նախկինում նկարագրված էր (Berton et al., 2006, Krishnan et al., 2007, Vialou et al., 2010): Ընդհանուր առմամբ, յուրաքանչյուր մկնիկ ենթարկվում էր անծանոթ եւ ագրեսիվ արական սեռի CD1- ի արտոնյալ սերմացուի մկնիկին `օրական 5 րոպե: CD1 ագրեսորին հետ անմիջական փոխազդեցության հետեւում, կենդանիները տեղադրվեցին նույն վանդակի հարեւանությամբ, հաջորդ 24 ժամվա ընթացքում, զգայական, բայց ոչ ֆիզիկական շփումով: Վերահսկողության կենդանիները տեղադրվեցին համարժեք պատյաններում, բայց նույն լարվածության անդամների հետ: Սոցիալական փոխազդեցության թեստերը կատարվել են 24 ժամ հետո `պարտության վերջնական օրվա ընթացքում:
Անծանոթ CD1 արական մկնիկի սոցիալական խուսափումը գնահատվել է հրապարակված արձանագրությունների համաձայն (Berton et al., 2006; Krishnan et al., 2007; Vialou et al., 2010): Փորձարարական մկնիկը նախ մտցվեց բաց դաշտ, որը պարունակում էր 2.5 րոպե դատարկ մետաղական ցանցի վանդակ: Երկրորդ նստաշրջանի ընթացքում լարային վանդակի մեջ մտավ անծանոթ CD1 արական մուկ: Չափվել է փոխազդեցության գոտում անցկացրած ժամանակը (վանդակը շրջապատող 8 սմ լայնությամբ միջանցք): Պարտված մկների տարանջատումը ենթակա և դիմացկուն ենթաբազմության մեջ կատարվել է ինչպես նկարագրված է նախկինում (Krishnan et al., 2007; Vialou et al., 2010): Քանի որ վերահսկիչ մկների մեծամասնությունն ավելի շատ ժամանակ էր ծախսում սոցիալական թիրախի հետ փոխազդեցության մեջ, քան դատարկ թիրախային պարիսպի հետ, 100-ի փոխազդեցության գործակիցը (փոխազդեցության գոտում անցկացրած հավասար ժամանակը սոցիալական սոցիալական թիրախի բացակայության դեպքում) սահմանվեց որպես կտրվածք: <100 միավորներ ունեցող մկները պիտակավորված էին որպես ենթակա, իսկ նրանք, ովքեր sc100 միավոր ունեին, պիտակավորված էին որպես դիմացկուն: Վարքային, կենսաքիմիական և էլեկտրոֆիզիոլոգիական լայնածավալ վերլուծությունները հաստատում են այս հստակ զգայուն և դիմացկուն ենթաբազմությունների վավերությունը (Krishnan et al., 2007; Wilkinson et al., 2009; Vialou et al., 2010):
Srffl / fl mice- ի խոցելիությունը քննելու համար սոցիալական բախման սթրեսը, AAV-GFP- ով կամ AAV-Cre-GFP- ով միմյանց հետ ներարկված մկները նույն օրվա ընթացքում ենթարկվել են երեք զինվորական պարտության, իսկ հետո փորձարկվել է 24 ժամերի սոցիալական փոխազդեցության համար: Այս ենթամեկուսային պարտության կարգը հաստատվել է նախկինում `գենետիկական մանիպուլյացիաներից հետո (Krishnan et al., 2007; Vialou et al., 2010) բացահայտելու համար պրոցեսեսսնդայնության ֆենոտիպների հայտնաբերման համար:
Սովորում է անօգնականություն:
AAV-GFP- ի կամ AAV-Cre-GFP- ին գերազանցող սերմնացուի մկները ենթարկվել են նախկինում նկարագրված սովորական անօգնականության ընթացակարգին (Berton et al., 2007): Ընդհանուր առմամբ, մկները ենթարկվում էին 1 ժամի անընդմեջ, անխուսափելի ոտքերի ցնցումների `2 օրվա ընթացքում (0.45 mA, 5- ի տեւողությունը): Թեստի օրը մկները վերահեռարձակվեցին 15- ի հետեւողական փախուստի փորձարկումների համար: Յուրաքանչյուր դատավարության ընթացքում շարունակական ցնցում է առաջացել, եւ մկներին հնարավորություն տրվեց խուսափել հարեւանությամբ, nonelectrified բաժակ մտնելուց: Հաջող փախուստի արդյունքում դուռը ինքնաբերաբար փակվեց եւ արձանագրվեց փախուստի գաղտնիությունը: Երբ մկները չփրկվեցին 25- ի սահմաններում, դատավարությունը դադարեցվեց եւ գրանցվեց որպես ձախողում: Նախորդ ուսումնասիրությունները ցույց են տվել, որ NAc- ի եւ այլ շրջաններում վիրուսային արտահայտությունը որեւէ ազդեցություն չի ունենում բազային փախստական վարքագծի վրա սթրեսի բացակայության դեպքում (Newton et al., 2002; Berton et al., 2007):
Locomotor sensitization.
AAV-GFP- ի կամ AAV-Cre-GFP- ի ներ-NAc ներարկումներից հետո երկու շաբաթ անց Srffl / fl մկները ենթարկվեցին շարժողական զգայունության: Մկները սովորություն ունեին շարժիչային ասպարեզում օրական 30 րոպե 4 օրվա ընթացքում: Սովորական սովորույթներից հետո կենդանիներին ներմաշկային ներարկեցին 10 մգ / կգ կոկաին-HCl և դրեցին շարժիչային տուփերի մեջ: Կենդանիների շարժողական գործունեությունը գրանցվել է photobeam համակարգի (San Diego Instruments) միջոցով ՝ որպես ամբուլատոր ճառագայթ, ընդհատվում է օրական 30 րոպե: Շարժիչային զգայունացումը գրանցվել է 6 դ ժամանակահատվածում:
Պայմանավորված տեղադրության նախապատվություն:
Տեղի օդափոխման կարգը կատարվել է ինչպես նախկինում նկարագրված էր (Maze et al., 2010), հետևյալ փոփոխություններով. Կարճ ասած, Srffl / fl մկների մեջ AAV-GFP կամ AAV-Cre-GFP ներ-NAc ներարկումներից հետո, կենդանիները տեղադրվեցին կոնդիցիոներների պալատներում, որոնք բաղկացած էին երեք ենթատեքստային տարբեր միջավայրերից: Հետազոտությունից բացառվել են երկու կոնդիցիոներական պալատներից որևէ մեկի համար զգալի նախապատվություն ցուցաբերած մկները (բոլոր կենդանիների <18% -ը): Կոնդիցիոներների խմբերը հետագայում հավասարակշռված էին `հարմարվելու համար, որ պալատի ցանկացած կողմնակալություն դեռ գոյություն ունի: Հաջորդ օրերին կենդանիներին աղաջրում էին ներարկում և ցերեկը պահում էին մեկ խցիկ 10 րոպե, իսկ հետո ներարկում էին կոկաին (30 մգ / կգ, IP) և հաջորդ 7.5 օրվա ընթացքում պահում մյուս խցիկ, ինչը հավասար էր ընդհանուր Ասոցիացիայի ուսուցման երկու փուլ `յուրաքանչյուր բուժման համար (երկու աղի և երկու կոկաինի զուգավորում): Թեստի օրը մկները կրկին տեղադրվեցին ապարատ ՝ առանց բուժման 30 րոպե և փորձարկվեցին կողմնակի նախապատվությունը գնահատելու համար: Կոկաինի նկատմամբ շարժողական արձագանքները գնահատվել են կոկային զուգակցված պալատներում ճառագայթների ընդմիջումների միջոցով `թմրամիջոցների բուժման արդյունավետությունն ապահովելու համար: Բոլոր խմբերի համար գնահատվել է ելակետային շարժումը `ի պատասխան աղաջրերի, ապահովելու համար, որ տեղաշարժը չի ազդել վիրուսային բուժումից:
Այլ վարքային թեստեր:
Srffl / fl մկները փորձարկվել են բաց դաշտում, թեթեւ / մութ եւ ստիպված լողալու փորձարկումներ, որոնք հիմնված են հրապարակված արձանագրությունների վրա (Vialou et al., 2010): Բաց դաշտում մկների գործունեությունը արձանագրվել է 5 րոպե `կարմիր լույսի պայմաններում վիդեո հսկողության համակարգով (Ethovision): Լույսի / մութ փորձության համար մկները թույլատրվեցին ազատորեն ուսումնասիրել մի փոքր լուսավորված արկղ `բաղկացած մեկ փոքր լուսավոր արենա, որը մի փոքր փակ դաշտում էր: Մկնիկները փորձարկվել են 5 րոպե ժամանակահատվածի համար, որպեսզի գնահատեն կամ պարունակվող ժամանակի չափը: Բաց դաշտում եւ թեթեւ / մութ փորձարկումներում, կենտրոնում եւ լույսի դաշտում անցկացրած ժամանակը համապատասխանաբար գնահատվել են որպես անհանգստության առնչվող պատասխանների հակառակ ցուցանիշ: 1 դ հարկի լող փորձարկումն անցկացվել է 5 րոպեի ընթացքում: Ձգվող լողալ փորձարկման ժամանակ անընդունակության ժամանակահատվածը մեկնաբանվում է որպես պրոդեպպրեսենտային նման վարքագիծ: The 1 d ստիպված լող թեստը լայնորեն օգտագործվում է մկների մեջ եւ հաստատվել է որպես կանխատեսելի վավերականության միջոց, քանի որ այդ հակադեպրեսանտ բուժումը նվազեցնում է շարժունակության ժամանակները:
Իմունխիստոկիմիա
Srffl / fl մկները անեսթեզի եւ perfused intracardially հետ 4% paraformaldehyde / PBS. Brains հանվել եւ cryoprotected է 30% sucrose / PBS. Կորոնային հատվածները (30 μմ) կտրվել են սառեցման microtome- ի վրա եւ մշակվել է իմունոգեւոր քիմիական անալիզների համար: Srffl / fl- ի թռիչքի վալիդացումը կատարվել է SRF- ի դեմ ուղղված պոլիկլոնալ հակամարմինների օգտագործմամբ (1 / 2000, Santa Cruz Biotechnology): Cre արտահայտությունը հաստատվել է GFP- ի միջոցով (հավի պոլիկլոնալ, 1 / 8000, Aves Labs) արտահայտված տարբերակված ուղեղներում, քանի որ Cre- ը միաձուլվում է GFP- ին: ΔFosB- ի ինդուկցիայի քանակական գնահատման համար, Srffl / fl- ի թաթթվող մկների մեջ սոցիալական պարտվածության սթրեսից հետո, ΔFosB- ը հայտնաբերվել է սպիտակուցի N-տերմինալ շրջանի դեմ (1 / 1000, Santa Cruz Biotechnology) դեմ հարուցված նապաստանի պոլիկլոնային հակամարմինը: Պատկերները ստացան գաղտնի մանրադիտակով (20 × խոշորացում, Zeiss): Յուրաքանչյուր կենդանու համար բազմակի պատկերներում թվանշված է ΔFosB իմունորակտիվության համար բացասական եւ դրական համարվող GFP-immunopositive բջիջների քանակը, յուրաքանչյուր կենդանու համար հաշվարկված միջին արժեքները: Յուրաքանչյուր կենդանատեսակ համարվում է անհատական դիտողություն `վիճակագրական վերլուծության համար:
Human postmortem NAc հյուսվածք
Մարդու հետմահու ուղեղի հյուսվածքը ձեռք է բերվել Dallas Brain Collection- ից, որտեղ հյուսվածքը հավաքվում է Dallas Medical Examiner Office- ից և Տեխասի համալսարանից (UT) Southwestern- ի հյուսվածքների փոխպատվաստման ծրագրից `հարազատների համաձայնությունը ստանալուց հետո: Հյուսվածքների վերլուծությունը կատարվել է ինչպես արու, այնպես էլ իգական սեռի ներկայացուցիչներից, որոնք համապատասխանում են տարիքի, հետմահու ընդմիջման, RNA ամբողջականության համարի (RIN) և pH- ի: Հատուկ ագոնալ գործոնները, ներառյալ կոման, հիպոքսիան, պիրեքսիան, նոպաները, ջրազրկելը, հիպոգլիկեմիան, բազմակի օրգանների անբավարարությունը և մահվան պահին նեյրոթոքսային նյութերի կլանումը ազդում են ուղեղի հետմահու հյուսվածքներում ՌՆԹ-ի ամբողջականության վրա (Tomita et al., 2004): Այս ութ պայմաններից յուրաքանչյուրի համար հյուսվածքների նմուշները բնութագրելու համար մենք օգտագործեցինք ագոնալ գործոնի սանդղակ (AFS): Ագոնալ գործոնի բացակայությանը տրվել է 0 միավոր և դրա առկայությունը գնահատվել է 1-ով `0-ից մինչև 8-ը ընդհանուր ԱՖՍ միավոր ապահովելու համար: Հյուսվածքները 0 կամ 1 ագոնալ միավորներով արտացոլում են լավ որակի նմուշներ. դեպքի ժողովրդագրությունը բերված է Աղյուսակ 1-ում. Հյուսվածքների ակնառու որակը հաստատվել է RIN բարձր արժեքներով: Դեպքերը ենթարկվել են ստանդարտ հերձման նախքան ap40 ° C իզոպենտանում արտահերթ սառեցումը և պահպանումը −80 ° C ջերմաստիճանում: NAc- ի հետագա մասնահատումը կատարվել է սառեցված հյուսվածքի վրա: UT Southwestern ինստիտուցիոնալ վերանայման խորհուրդը վերանայել և հաստատել է այս հյուսվածքի հավաքածուն հետազոտական օգտագործման համար: Հետագայում յուրաքանչյուր դեպրեսիայի դեպքի համար կատարվել է տեղեկատուի ուղղակի հարցազրույց, որտեղ փաստաթղթավորվել են դեպքի հիվանդության վերաբերյալ տեղեկությունները. երկու հետազոտական հոգեբույժների կողմից կատարվել է խոշոր դեպրեսիվ խանգարման կոնսենսուսային ախտորոշում `օգտագործելով DSM-IV չափանիշներ: Այս ուսումնասիրության մեջ ընդգրկված դեպքերից ոչ մեկում արյան թունաբանության էկրանները դրական չեն եղել չարաշահման, ալկոհոլի կամ նշանակված դեղամիջոցների համար, բացի հակադեպրեսանտներից: Չնայած հակադեպրեսանտ բուժմանը, բոլոր առարկաները մահվան պահին կլինիկական ճնշված վիճակում էին: Հյուսվածքների նմուշները կուրացված ձևով բաժանվեցին վերլուծության համար:
Աղյուսակ 1.
Ժողովրդագրական տվյալներ մարդկային հետընտրական ուսումնասիրության համար
Western blotting
Մարդու եւ մկնիկի NAc նմուշները մշակվել են նախկինում նկարագրված (Maze et al., 2010): Սառեցված հյուսվածքները sonicated է 5 mM HEPES լիզի բուֆեր պարունակող 1% SDS հետ protease (Roche) եւ ֆոսֆատազ inhibitors (Sigma). Սպիտակուցի կոնցենտրացիաները որոշվել են Dc սպիտակուցի անալիզով (Bio-Rad): Սպիտակուցի նմուշների հավասար քանակները ենթարկվել են SDS-PAGE եւ արեւմտյան blotting: Արեւմտյան բլոտները փորձարկվել են SRF- ի (1 / 2000, Santa Cruz Biotechnology) կամ GAPDH- ի (1 / 1500, Abcam) հակամարմինների միջոցով եւ այնուհետեւ սկանավորվել եւ քանակականացվել են `օգտագործելով Odyssey պատկերավորման համակարգը (Licor):
RNA մեկուսացում եւ քանակական PCR
RNA մեկուսացումը, քանակական PCR (qPCR) եւ տվյալների վերլուծությունը կատարվել են նախկինում նկարագրված (Maze et al., 2010; Vialou et al., 2010): Կարճ ասած, ՌՆԹ-ն մեկուսացվել է TriZol- ի ռեագենտով (Invitrogen) եւ հետագայում մաքրվել է Qiagen- ից RNAeasy միկրո փաթեթներով: Բոլոր RNA նմուշները որոշվել են ունենալ 260 / 280 եւ 260 / 230 արժեքները ≥ 1.8: Reverse transcription- ը կատարվել է iScript- ի միջոցով (Bio-Rad): qPCR օգտագործելով SYBR կանաչ (Quanta) կիրառվել է Applied Biosystems 7900HT RT PCR համակարգով հետեւյալ ցիկլի պարամետրերով `2 րոպե 95 ° C; 40 ցիկլ 95 ° C- ի համար 15 ս, 59 ° C 30- ի համար, 72 ° C 33- ի համար; եւ աստիճանաբար ջեռուցում է 95 ° C, դիսոցացիա կորեր առաջացնելու համար, միասնական PCR արտադրանքի հաստատման համար: Տվյալները վերլուծվել են բուժման վիճակի C (t) արժեքների համեմատությամբ (վերահսկողության ենթարկվող կամ ճկուն մկները կամ մարդկային վերահսկողությունը ցրված հիվանդներին) ΔΔC (t) մեթոդով (Tsankova et al., 2006): ΔFosB qPCR primers: foward, AGGCAGAGGGGAGTCGGAGAT եւ հակադարձ, GCCGAGGACTTGAACTTCACTCG:
ՉԻՊ
CHIP- ը կատարվել է նախկինում նկարագրված (Maze et al., 2010) զուգահեռ երկկողմանի NAc ճնշման վրա, վերջին պարտվածության փորձից հետո եւ հսկողության, զգայուն եւ ճկուն մկների (չորս 14-gauge punches / մուկ) 1 ժամից եւ աղի- եւ կոկաինը- բուժված կենդանիներին 24 ժամ հետո վերջնական բուժում: Հյուսվածքները խառնված էին 1% formaldehyde- ով: Հաստատումը հետագայում ընդմիջվում էր գլիկինային դիմումի միջոցով, եւ հյուսվածքը լվանում եւ պահվում էր մինչեւ 80 ° C- ում: Խեցած քրոմատինը գիշերը inkubated է anti-SRF հակամարմին (Santa Cruz Biotechnology) նախկինում կապված է մագնիսական beads (Dynabeads M-280, Invitrogen). Հետադարձ խաչաձեւ կապակցման եւ ԴՆԹ-ի մաքրման արդյունքում SRF- ի ֆոսբի խթանողին կապելը որոշվել է QPCR- ի միջոցով `օգտագործելով երկու պրոտոկոլի պարունակող ֆոսբ-խթանող տարածքի տարածքը, որոնք պարունակում են երկու շիճուկ արձագանքի տարրեր: SRF- ի բացթողումները զգալիորեն հարստացել են, համեմատած ոչ հակաբիոտիկների հետ: Մկնիկի ֆոսբի գենային առաջխաղացման պրեմիերաներ. Առաջ, CCCTCTGACGTAATTGCTAGG եւ հակադարձ, ACCTCCCAAACTCTCCCTTC:
Վիճակագրական վերլուծություններ
Կենսաքիմիական և վարքագծային վերլուծություններում միակողմանի ANOVA- ն օգտագործվում էր վերահսկելու, ընկալունակ և դիմացկուն մկների միջինը համեմատելու համար: Երկկողմանի ANOVA- ն օգտագործվել է Sf- ի տեղական նոկաուտի մկների սոցիալական պարտության միջոցով ΔFosB ինդուկցիան համեմատելու, ինչպես նաև Srf նոկաուտի ազդեցությունը սովորած անօգնականության և շարժողական զգայունության արձանագրություններում համեմատելու համար: Ուսանողների t թեստերը օգտագործվել են SF- ի նոկաուտի ազդեցության ΔFosB ինդուկցիայի և մարդկանց հետմահու հյուսվածքի և մկների ChIP վերլուծության խմբերի միջև համեմատելու համար: Փորձարարական պայմանների միջև տարբերությունները վիճակագրորեն նշանակալի են համարվել, երբ p ≤ 0.05:
Արդյունքներ
SRF եւ ΔFosB արտահայտությունը մարդու դեպրեսիայի եւ սոցիալապես պարտված մկների մեջ
Որպեսզի ուսումնասիրենք SRF- ի հնարավոր դերը դեպրեսիվ նման վարքագծի զարգացման մեջ, մենք նախ գնահատեցինք SRF սպիտակուցի արտահայտությունը հետմահու ընկճված հիվանդ հիվանդների NAc- ում: Դեպրեսիայի ենթարկվածները զգալիորեն նվազեցրեցին SRF մակարդակները NAc- ում `համեմատած իրենց տարիքին համապատասխանող հսկողության հետ (t (19) = 1.9; p <0.05) (նկ. 1A): Հաշվի առնելով SRF- ի դերը ակտիվությունից կախված անմիջական վաղ գենի արտահայտությունը կարգավորելու գործում (Ramanan et al., 2005), մենք ենթադրեցինք, որ SRF- ը կարող է ներգրավվել այս ուղեղի տարածաշրջանում ΔFosB արտահայտության վերահսկման գործում: Ի պաշտպանություն այս վարկածի, մենք նկատեցինք, որ Δfosb mRNA մակարդակները նույնպես զգալիորեն կրճատվել են ճնշված մարդկանց NAc- ում (t (16) = 1.8; p <0.05) (նկ. 1B): Սա համահունչ է նաև այս պայմաններում ΔFosB սպիտակուցի մակարդակի իջեցված վերջին բացահայտումներին (Vialou et al., 2010):
Նկար 1.
SRF- ի քրոնիկական սթրեսային ռեպրեսիան փոխկապակցված է NAc- ում ΔFosB արտագրության նվազման հետ: A, B, Postmortem մարդու մոտ ընկճված հիվանդները ցուցադրում են SRF սպիտակուցի (n = 10 / խումբ; A) և Δfosb mRNA- ի արտահայտվածության մակարդակները NAc- ում (n = 8 / խումբ; B): C, քրոնիկ (10 դ) սոցիալական պարտության սթրեսի ենթարկված մկները խմբավորվել են ընկալունակ և դիմացկուն ենթաբնակեցումների մեջ: D, Քրոնիկական սոցիալական պարտության սթրեսը նվազեցնում է SRF սպիտակուցի մակարդակը ենթակա մկների NAc- ում, բայց ոչ դիմացկուն մկների, համեմատած հսկողության հետ 24 ժամ C- ում ցույց տրված սոցիալական փոխազդեցության փորձից հետո: E, ΔfosB mRNA մակարդակները NAc- ում անփոփոխ են զգայուն մկների մեջ, բայց զգալիորեն կարգավորված է առաձգական կենդանիների մոտ (n = 7–15 / խումբ): F, SRF սպիտակուցը ցուցադրում է աճող կապը fosb գենի խթանողին խրոնիկական սոցիալական պարտության սթրեսից հետո միայն կայուն, և ոչ թե ենթակա մկների մեջ (n = 5 / խումբ): Displayedուցադրված տվյալներն արտահայտվում են որպես միջին ± SEM (ներկայացված են որպես սխալի գծեր): Con., Վերահսկում; Դեպ., Ընկճված; Կաս., Ենթակա; Res., Դիմացկուն: * p <0.05 ընդդեմ կառավարման; *** p <0.001 ընդդեմ կառավարման; #p <0.05 ընդդեմ զգայուն; ## p <0.01 ընդդեմ զգայուն; ### p <0.001 ընդդեմ ենթակա:
Այս բացահայտումներն ընդլայնելու համար մենք օգտագործեցինք խրոնիկական սոցիալական պարտության սթրեսի արձանագրությունը մկների մոտ: Պարտված մկների երկու տարբերակիչ խմբերը ՝ զգայուն և դիմացկուն, ակնհայտ էին (Krishnan et al., 2007 թ.) Հիմնված սոցիալական խուսափման միջոցի վրա, որի դեպքում զգայուն կենդանիները զգալիորեն նվազեցնում էին սոցիալական փոխազդեցությունը և՛ վերահսկող, և՛ դիմացկուն կենդանիների համեմատ (F (2,23, 157.2) = 0.001; p <0.001; t թեստեր Bonferroni- ի շտկմամբ, զգայուն ընդդեմ հսկողության, p <0.05; դիմացկուն vs հսկողություն, p <0.01; դիմացկուն vs զգայուն, p <1) (նկ. 2,32C): Վերջին պարտության դրվագից երկու օր անց զգայուն, դիմացկուն և չպարտված հսկիչ մկները վերլուծվել են NAc- ում SRF- ի արտահայտման համար: Մարդկային դեպրեսիայի հայտնաբերման նման, SRF սպիտակուցի մակարդակը զգալիորեն կրճատվել է NAc զգայուն մկների մոտ, համեմատած հսկողության հետ, մինչդեռ SRF մակարդակն անխոցելի է դիմացկուն մկների NAc- ում (F (4.7) = 0.05; p <0.05; t թեստերով a Bonferroni- ի ուղղում, զգայուն ընդդեմ հսկողության, p <0.05; դիմացկուն vs զգայուն, p <1) (նկ. XNUMXD):
Հաջորդը, մենք ուսումնասիրեցինք կենդանիների այս երեք խմբերի NAc- ում Δfosb mRNA- ի արտահայտությունը և նկատեցինք Δfosb- ի արտահայտման զգալի աճ միայն դիմացկուն կենդանիների մոտ, միտումով, բայց զգայուն մկների մոտ նկատվեց մի զգալի աճ (t (14) = 2.1; p <0.05 ) (Նկ. 1E): SRF մակարդակների և Δfosb արտագրության միջև հնարավոր փոխազդեցությունները հետագա ուսումնասիրելու համար մենք օգտագործեցինք ChIP ՝ ուսումնասիրելու համար, թե արդյոք fosb գենի խթանիչին կապող SRF- ն փոխվել է խոցելի սոցիալական պարտության սթրեսից հետո ՝ զգայուն և դիմացկուն մկների առանձին խմբերի մեջ: Դիմացկուն կենդանիները ցուցադրել են զգալիորեն ուժեղացված SRF կապակցում NAc- ում fosb խթանիչին `համեմատած հսկողության հետ (t (8) = 2.1; p <0.05), ինչպես նաև համեմատած զգայուն մկների հետ (t (8) = 2.0; p <0.05): Կառավարիչների և զգայուն մկների միջև տարբերություն չի նկատվել, հավանաբար, արտացոլելով զգայուն մկների մեջ SRF ինդուկցիայի բացակայությունը (նկ. 1F):
Խրոնիկական սոցիալական պարտության ստրեսից հետո ΔFosB- ի կարգավորման գործում SRF- ի դերը հաստատելու համար Srffl / fl մկները օգտագործվել են `ուսումնասիրելու համար NA- ից SRF- ի ընտրովի ջնջման ազդեցությունը ΔFosB- ի սթրեսի ինդուկցիայի վրա: Srffl / fl մկներին ստերեոտաքսորեն ներարկել են NA-NAc ՝ AAF վեկտորներ, որոնք արտահայտում են GFP կամ Cre-GFP: AAV-Cre-GFP- ի կողմից հարուցված SRF- ի հատուկ նոկաուտը հաստատվեց իմունոհիստոքիմիական եղանակով (նկ. 2 Ա): Իրոք, SRF ներկման և Cre արտահայտության միջև որևէ համընկնում չի եղել, ինչը ցույց է տալիս նոկաուտի արդյունավետությունը: Միկրոդիսեկցիոն NAc բռունցքներում մենք հայտնաբերեցինք SRF սպիտակուցի մակարդակի 50% -ի զգալի նվազում (t (11) = 4.3; p <0.001): Մագնիտուդն, ամենայն հավանականությամբ, արտացոլում է այն փաստը, որ նման միկրոդիսեկցիաներում հյուսվածքի մի մասը վիրուսային վարակված չէ:
Նկար 2.
SRF- ը միջնորդում է ΔFosB- ի ինդուկցիան խրոնիկական սոցիալական պարտության սթրեսի միջոցով: A, Srffl / fl մկների NAc- ում AAV-Cre-GFP- ի ներարկումն առաջացնում է Cre- արտահայտող նեյրոնների SRF սպիտակուցի նոկաուտ: AAV-GFP- ի ներարկումն անհասկանալի ազդեցություն ունեցավ: B, NAc- ից SRF- ի նման ընտրովի նոկաուտը ամբողջովին արգելափակում է ΔFosB- ի հարուցումը NAc- ում `խրոնիկական սոցիալական պարտության սթրեսից հետո (n = 4 / խումբ): Displayedուցադրված տվյալներն արտահայտվում են որպես միջին ± SEM (ներկայացված են որպես սխալի գծեր): * p <0.05 ընդդեմ AAV-GFP հսկողության; ** p <0.01 ընդդեմ AAV-GFP պարտության:
Հաջորդը մենք կատարեցինք ΔFosB- ի համար քանակական իմունոհիստոքիմիա քաջածանոթ Srffl / fl մկների ներսում NAC ներարկված AAV-Cre-GFP կամ AAV-GFP մկների մեջ: Խրոնիկական սոցիալական պարտության սթրեսից հետո ΔFosB արտահայտությունը զգալիորեն առաջացվեց AAc-GFP ներարկվող կենդանիների NAc- ում (վիրուսի բուժման փոխազդեցություն, F (1,12) = 6.4; տ թեստեր Bonferroni- ի ուղղմամբ, վերահսկողություն ընդդեմ պարտության, p <0.05; AAV-Cre vs AAV-GFP, p <0.01): Այնուամենայնիվ, այս ինդուկցիան չի դիտվել Srffl / fl մկների մեջ, որոնք ստանում են AAV-Cre-GFP (նկ. 2B), ինչը ցույց է տալիս, որ քրոնիկ սթրեսով ΔfosB- ի արտածումը NAc- ում պահանջում է SRF:
ԱՀ-ում թմրամիջոցի դանդաղումը նպաստում է prodepression- եւ proanxiety-like phenotypes- ի
Քանի որ նախկինում ցույց տրվեց, որ ΔFosB- ի խրոնիկական սոցիալական պարտության սթրեսը խթանում է դիմադրողականությունը (Vialou et al., 2010), մենք ենթադրեցինք, որ ենթակայության տակ գտնվող SRF- ի և դրա արդյունքում կորած ΔFosB- ի զորակոչի կորուստը կարող է լինել բացասական հարմարվողականություն, որը, ի վերջո, տալիս է կենդանիները ավելի խոցելի են սթրեսի վնասակար հետևանքներից: Այս վարկածը փորձարկելու համար մենք վերը նկարագրված մեծահասակ Srffl / fl մկների մոտ առաջացրեցինք Srf գենի տեղական NAc ջնջում, և արդյունքում ստացված մկները և նրանց հսկողությունը փորձարկվել են վարքային պարադիգմների մարտկոցում ՝ ելակետային ընկճվածությունը և անհանգստությունը գնահատելու համար: ինչպես վարքը: SRF- ի տեղական NAc ջնջումը նպաստում է պրոդեպրեսիայի նման ազդեցությանը, որը չափվում է հարկադիր լողի փորձարկման միջոցով (t (30) = 2.5; p <0.05), ինչպես նաև անհանգստացնող ազդեցություն, որը չափվում է բաց դաշտում (t (38) = 1.9; p <0.05) և լուսային / մութ թեստեր (t (8) = 1.9; p <0.05): Այսպիսով, Srffl / fl մկները, որոնք AAV-Cre-GFP են ստանում NAc- ում, հարկադիր լողի փորձարկումում նվազել են անշարժության հետաձգումը, ավելի քիչ ժամանակ բաց դաշտի կենտրոնում և պակաս ժամանակ լուսային / մութ տուփի լուսային խցիկում: համեմատած AAV-GFP ներարկված կենդանիների հետ (նկ. 3A – C): Այնուամենայնիվ, SRF- ի ներ-NAc ջնջումը չի փոխել շարժման ելակետային մակարդակը, ինչը ենթադրում է, որ SRF նոկաուտի ենթարկված կենդանիների վարքի վարքի հետևանքները չեն պայմանավորված ընդհանուր շարժողական գործունեության աննորմալություններով (նկ. 3D): Այս տվյալները հետաքրքիր են նախորդ զեկույցների լույսի ներքո, որոնք ենթադրում են, որ չնայած ΔFosB- ը NAc- ում կարգավորում է դեպրեսիվության նման վարքագիծը, այն կարծես չի ներգրավվում անհանգստության հետ կապված պատասխանների մեջ (Vialou et al., 2010): Մեր ներկայիս բացահայտումները, որ SRF- ի կորուստը տագնապալի պատասխաններ է առաջացնում, ենթադրում է, որ դա անում է ΔFosB- ից բացի այլ թիրախների միջոցով:
Նկար 3.
SRF- ի նոկաուտը NAc- ից խթանում է պրոդեպրեսիայի և անհանգստության նման ֆենոտիպերը: A-C, Srf- ի ընտրովի նոկաուտ NAc- ից, որը ձեռք է բերվում AAV-Cre-GFP ներարկման միջոցով Srffl / fl մկների NAc- ով, նվազեցնում է լատենտությունը անշարժությանը հարկադիր լողի փորձարկումում (n = 14–18 / խումբ; Ա) և նվազեցնում է կենտրոնում անցկացրած ժամանակը և համապատասխանաբար բաց դաշտի (B) և լուսավոր / մութ (C) փորձարկումներում լուսային խցիկում անցկացրած ժամանակը (n = 5-15 / խումբ): D, բազալ շարժողական գործունեության մեջ որևէ տարբերություն չի նկատվել մկների բաց դաշտում, որոնք ստացել են AAV-GFP կամ AAV-Cre-GFP ներ-NAc ներարկումներ: E, F, սովորելի անօգնականության նկատմամբ զգայունության բարձրացում (n = 7-8 / խումբ; E) և սոցիալական պարտության սթրես (n = 5-6 / խումբ; F), ըստ չափման, համապատասխանաբար, փախուստի ուշացման և սոցիալական փոխազդեցության ժամանակի միջոցով , Displayedուցադրված տվյալներն արտահայտվում են որպես միջին ± SEM (ներկայացված են որպես սխալի գծեր): * p <0.05 ընդդեմ GFP կամ թիրախի բացակայության; ** p <0.01 ընդդեմ GFP; *** p <0.001 ընդդեմ GFP- ի:
Մենք հետագայում ուսումնասիրեցինք, թե արդյոք NAc- ում SRF- ի ջնջումը նույնպես մեծացնում է կենդանու խոցելիությունը կրկնվող սթրեսի վնասակար ազդեցությունների նկատմամբ: Srffl / fl մկները, որոնց ներարկվել է կամ AAV-Cre-GFP կամ AAV-GFP NAc, ուսումնասիրվել են դեպրեսիայի երկու մոդելներում, սովորել անօգնականություն և խրոնիկական սոցիալական պարտության սթրես: Սովորված անօգնական վիճակում, AAF-Cre-GFP ստացող Srffl / fl կենդանիները ցույց տվեցին աճի ուշացում ՝ խուսափելու ոտնաթաթից ցնցումից հետո ՝ անխուսափելի ոտնաթաթի սթրեսից հետո (բուժման և փորձարկումների փոխազդեցություն, F (14,180) = 10.2; t փորձարկումներ Bonferroni- ի ուղղմամբ) p <0.001; AAV-Cre vs AAV-GFP, p <0.01), ինչը ցույց է տալիս սթրեսի պատճառած վարքային դեֆիցիտների նկատմամբ զգայունության բարձրացում (նկ. 3E): Նմանապես, NAc- ից տեղական SRF- ի ջնջումը նաև ավելացրեց սոցիալական զզվանքը (t (10) = 1.8; p <0.05) `համեմատած AAV-GFP- ներարկված հսկիչ կենդանիների հետ` խրոնիկական սոցիալական պարտության սթրեսից հետո (նկ. 3F), որը ճնշման նման ազդեցություն է:
ԱՖՖ-ի ներգրավվածության եւ կոկաինի վարքագծային արձագանքներում SRF- ի ներգրավվածության բացակայությունը
Հաշվի առնելով, որ ΔFosB- ն առաջանում է նաև NAc- ում `ի պատասխան կոկաինի նման չարաշահման թմրանյութերի, հետաքրքրություն էր առաջացնում ուսումնասիրել SRF- ի հնարավոր դերը կոկաինի գործողություններում: Ի տարբերություն խրոնիկական սոցիալական պարտության սթրեսի, կոկաինի կրկնվող ազդեցությունը չի փոխել SRF սպիտակուցի արտահայտությունը NAc- ում (t (14) = 0.8; p> 0.05) (նկ. 4 Ա) և ազդեցություն չի ունեցել այս ուղեղի շրջանում fosB գենի խթանողին SRF- ի կապման վրա: (t (4) = 0.7; p> 0.05) (նկ. 4B): Սա ենթադրում է, որ, հակառակ սթրեսի, քրոնիկ կոկաինից հետո ΔFosB- ի հարուցումը չի միջնորդվում SRF- ի միջոցով: Մենք դա փորձարկել ենք ուղղակիորեն ՝ ստուգելով, արդյոք քրոնիկ կոկաինից հետո ΔFosB- ի կուտակումը փոխվում է Srffl / fl կենդանիներում AAV-Cre-GFP ստացվող AAV-GFP- ի դիմաց NAV- ում: Մենք հայտնաբերեցինք, որ SRF- ի ջնջումը ազդեցություն չունի ուղեղի այս շրջանում կոկաինի հարուցած ΔFosB կուտակման վրա (նկ. 4C):
Նկար 4.
SRF- ի կորուստը չի ազդել ΔFosB- ի կամ կոկաինի կարգավորվող վարքագծի կոկաինը: A, B, Կրկնելի կոկաինի ազդեցությունը (7 դ, 20 մգ / կգ կոկաին-HCl) NAc- ում (A) կամ SRF- ի վրա ազդում են SRF- ի սպիտակուցի արտահայտման վրա, այս բջիջներում (B) 24 ժամ հետո թմրանյութերի ազդեցությունը (n = 5 / խումբ): C, ΔFOSB կուտակումը, չափվում է իմունոոթոքիմիական տեսքով, քրոնիկ կոկաինը ենթարկվելուց հետո չի անդրադարձել SRF- ի կոնկրետ թակոցից: D, E, ԱԱ-ից տեղային ջնջումը նույնպես չի ազդել քաղցկեղի ներարկիչի (d 1) աղեղնային ներարկումից հետո (դ 8-1, D), կամ կոկաինի պայմանավորված տեղում նախապատվությունը (n = 7 / խումբ, E): Ցուցադրված տվյալները արտահայտվում են որպես միջին ± SEM (ներկայացված որպես սխալի պարույրներ):
Այս զարմանալի հայտնագործությանը հետևելու համար մենք ուսումնասիրեցինք, թե արդյոք NAc- ի ընտրովի SRF նոկաուտը փոխո՞ւմ է կոկաինի վարքային պատասխանները: Համապատասխանելով SRF- ի `կոկաինի կողմից ΔFosB ինդուկցիայի կարգավորման բացակայությանը, NAc- ի հատուկ նոկաուտը SRF- ից ոչ մի ազդեցություն չուներ սուր կոկաինի կամ շարժողական զգայունության հետեւանքով առաջացած շարժողական գործունեության վրա, որը նկատվում է կոկաինի կրկնվող ազդեցություններից հետո (բուժման ժամանակային փոխազդեցություն, F (4,80) = 0.3; p> 0.05) (նկ. 4D): Նմանապես, SRF– ի համար հատուկ NAc նոկաուտը ազդեցություն չուներ կոկաինով պայմանավորված վայրի նախապատվության վրա (t (14) = 0.1; p> 0.05) (նկ. 4E), որն ապահովում է կոկաինի պարգևի անուղղակի չափում:
Քննարկում
Այս ուսումնասիրությունը ցույց է տվել, որ SRF- ը որպես ագրեսիվ եւ անհանգստության նման վարքագծի զարգացման մեջ SRF- ն որպես խրոնիկական սոցիալական պարտություն սթրեսից հետո NAF- ում ΔFosB- ի առաջատար միջնորդն է: Մենք ապահովում ենք անմիջական ապացույցներ, որ քրոնիկական սոցիալական պարտվածության սթրեսը նվազեցնում է SRF- ի մակարդակները ԱՀՀ-ում զգայուն, բայց ոչ դիմացկուն, կենդանիների եւ այդ անկատարությունը խոչընդոտում է այս ուղեղի տարածաշրջանում ΔFosB- ի ինդուկցիան, որը մենք ցույց տվեցինք, անհրաժեշտ է արդյունավետ քրոնիկական սթրեսների հաղթահարման համար, այսինքն, կայունություն (Vialou et al., 2010): SRF- ի արտահայտման նմանատիպ նվազեցումը հայտնաբերվել է տագնապված մարդկանց NAc- ում, որտեղ նույնպես նվազել է ΔFosB mRNA- ն եւ սպիտակուցային արտահայտությունը. Ի հակադրություն, ΔFosB մակարդակները չեն նվազեցվում ենթակա Մկների NAc- ում, չնայած SRF- ի նվազեցմանը, որը ենթադրում է այլ transcriptional մեխանիզմներ, դեռ հայտնի չէ, ΔFosB- ի վերահսկողության մեջ: Սեռական դրդապատճառները SRF- ի համար ΔFosB- ի միջամտության ժամանակ, NAC- ում քրոնիկական սթրեսից հետո, ստեղծվել է SRF- ի սինթեզվող գենային զետեղման այս ուղեղի տարածաշրջանից: Այս NAc- ի հատուկ SRF- ի թակման հետ մկների վարքագծային վերլուծությունը հետագայում ազդում է SRF- ի վրա `որպես հիմնական դերակատարություն ինչպես բազային, այնպես էլ սթրեսային դեպրեսիայի եւ անհանգստության նման վարքագծի զարգացման մեջ: Ակնհայտ հակադրությունով, SRF- ի ջնջումը որեւէ ազդեցություն չի ունեցել ΔFosB ինդուկցիայի վրա `ի պատասխան քրոնիկ կոկաինի վարման կամ կոկաինի վարքային ազդեցության: Այս արդյունքները օժանդակում են ΔFosB ներդիրի կարգավորմանը եւ շրջակա միջավայրի անհեթեթությունների նկատմամբ վարքագծային արձագանքների վրա SRF- ի համար նոր խթանման հատուկ դերակատարություն:
SRF-mediated transcription- ը նախկինում ցուցադրվել է արձագանքել սինթաստիկ ակտիվությանը, որը մեծապես ազդում է կալցիումի ավելացման վրա, ինչպես նաեւ ուժեղացված նյարդոտոֆիկ ակտիվության վրա, մասնավորապես, ուղեղի ծագման նեյրոտրոֆիկ գործոնի (BDNF) դեպքում (Bading et al., 1993; Xia եւ այլն, 1996; Johnson et al., 1997; Chang եւ այլն, 2004, Kalita եւ այլն, 2006, Knöll եւ Nordheim, 2009): Սա հանգեցնում է հետաքրքիր հարցի, թե ինչու SRF- ն իջեցնում է խոցելի սոցիալական բախման սթրեսից հետո զգայուն, բայց ոչ դիմացկուն, մկների մեջ: Այս դիֆերենցիալ կարգավորումը հնարավոր է դոպամինային կամ BDNF ազդանշանների միջոցով, քանի որ զգայուն մկների ցուցադրումը ավելացրել է BDNF սպիտակուցի մակարդակը եւ աճել է ներքեւում գտնվող BDNF ազդանշանային համակարգը, ինչպես նաեւ վակոլային թմբուկային տարածքի (VTA) դոպամինային նեյրոնների ուժեղացված պայթյունի կրակումը, որոնք innervate the NAc, մինչդեռ դիմացկուն կենդանիները ցուցադրում են BDNF ազդանշանների եւ VTA կրակումների նորմերը (Krishnan et al., 2007): Այլընտրանքային հնարավորությունն այն է, որ NAC- ում ճնշում է SRF արտահայտությունը `ի պատասխան այս ուղեղի շրջանի փոփոխված glutamatergic innervation- ին, որը մենք ցույց տվեցինք տարբեր կերպով կարգավորվում են զգայուն հակառակ սինթետիկ մկների (Vialou et al., 2010): Հետագա աշխատանքը պետք է ուղղակիորեն ուսումնասիրել այս եւ այլ հնարավոր մեխանիզմները:
Վերջին ուսումնասիրությունները, օգտագործելով գենոմի լայն եւ այլ մեթոդներ, ենթադրում են, որ նեյրոնների SRF թիրախային գենի ~ 5-10% անմիջապես վաղ գեները (Philippar et al., 2004; Ramanan et al., 2005; Enact et al., 2006; Knöll եւ Nordheim, 2009): Սա համապատասխանում է մեր տվյալները, որոնք ցույց են տալիս, որ SRF- ի համար կարեւոր դեր է կատարվում ΔFosB- ի, ֆոսբ անմիջական վաղ գենի կրճատված արտադրանքում `քրոնիկ սթրեսով: Հետաքրքիր է, որ այս տարբեր հետազոտություններում հայտնաբերված բազմաթիվ SRF թիրախային գենները նաեւ ներկայացնում են ΔFosB- ի հայտնի թիրախները NAc- ում (Kumar et al., 2005, Renthal et al., 2008, 2009, Maze et al., 2010): Այդ ընդհանուր կարգավորվող գեների շարքում են մի քանի, որոնք հայտնի են կարգավորելու նեյրոնային բջջանյութը (օրինակ, Cdk5, Arc եւ Actb): Սա, իր հերթին, համապատասխանում է այն զեկույցներին, որ SRF- ն ազդում է մի շարք նեյրոնային բջիջների վրա (Alberti et al., 2005; Ramanan եւ այլն, 2005, Knöll et al. ազդում է NAc նեյրոնների դենդրիտային ողնաշարի արտանետումների վրա (Maze et al., 2006): Նման ընդհանուր ֆունկցիոնալ վերջնական կետերը կարող են արտացոլել SRF- ի համակցված ազդեցությունները, զուգորդվելով ΔFosB- ի ներդիրով, գործելով մի շարք ընդհանուր թիրախ գեների վրա `ազդելու նեյրոնային մորֆոլոգիայի եւ, ի վերջո, բարդ ընթացքի վրա:
SRF- ին նաեւ ցուցադրվել է կրծքային պլաստիկության եւ նեյրոնային ակտիվության կարգավորիչ գեների արտահայտման եւ վարքի կարգավորման գործում կարեւոր դերեր: Օրինակ, անմիջապես վաղ գեների վաղ հայտնաբերման կորուստը, ի պատասխան էլեկտրոնային կոնցենտրացիայի կամ նեյրոնային ակտիվացման էլեկտրակոնֆուլսային բռնկումների կամավոր ուսումնասիրության, կապված է Srf mutants- ի հիպոկամպուսի (Ramanan et al. , 2005; ակտիվ եւ այլն, 2006): Բացի դրանից, Հիպոկամպում SRF- ի կորուստը ցույց է տվել երկարատեւ սինապտիկ դեպրեսիայի դեֆիցիտներ, անմիջապես վաղ գենի արտացոլում, որը ազդում է վեպի համատեքստում եւ արժեզրկվում է նոր միջավայրի ուսումնասիրության ընթացքում (Enact et al., 2006): Այս տվյալները հաստատում են SRF- ի կարևորությունը կենդանու `շրջակա միջավայրի աղավաղումներին համապատասխանորեն հարմարվելու ունակության մեջ, ինչպես նոր միջավայրում սովորել սովորելու վերոհիշյալ դեպքում կամ բացասական սթրեսային գրգռիչներին հարմարվելու դեպքում` կանխել սթրեսի տարածումը: - վարվելակերպի դեֆիցիտներ, ինչպես մեր ներկա ուսումնասիրության մեջ, Այսպիսով, մենք նկատում ենք, որ կենդանիները, որոնք արտահայտում են SRF- ի արտահայտման պակասորդներ, կամ ի պատասխան զգայուն անհատների սոցիալական պարտության ստրեսի, կամ SRF- ի ուղղակի նոկդաունի միջոցով, ցուցադրում են դեպրեսիվ և անհանգստության նման վարքագիծ: Հաշվի առնելով, որ ընկճված մարդկային առարկաները նույնպես ունեն ՆՀ-ում SRF մակարդակի իջեցում, կարելի է պատկերացնել, որ SRF- ը հիմնարար դեր է խաղում կարգավորելու անհատի `շրջակա միջավայրի բացասական ազդակներին դրականորեն հարմարվելու ունակությունը, մասամբ` NAc- ում ΔFosB արտահայտության կարգավորման միջոցով:
Տարբեր մեխանիզմներ
Սույն հետազոտության զարմանալի հայտնագործությունն այն է, որ չնայած, որ ԱՀՀ-ի համար անհրաժեշտ է ԱՀՀ-ի կուտակման համար, քրոնիկ սթրեսի դեպքում, չի պահանջվում ΔFosB ներդիրը նույն ուղեղի շրջանում, ի պատասխան քրոնիկ կոկաինի: Նմանապես, SRF- ն չի պահանջվում դեղի նորմալ վարքային պատասխանների համար: Այս տվյալները ցույց են տալիս, որ չնայած այն հանգամանքին, որ ΔFosB- ն ներգրավված է NAc- ում `արձագանքների բազմաթիվ տեսակների (Nestler եւ այլն, 1999, Nestler, 2008), հայտնվում են տարբեր մոլեկուլային ուղիների, որոնք հանգեցնում են ΔFosB ինդուկցիայի: Այս եզրակացությունների համար հնարավոր բացատրությունը մասնակի բջիջների տեսակն է, որոնք ցույց են տալիս ΔFOSB- ի կուտակումը `սթրեսի եւ կոկաինի դեմ: Քրոնիկ սթրեսը առաջացնում է ΔFosB մոտավորապես հավասարապես, NAc միջին ճարպային նեյրոնների երկու հիմնական ենթաբազմությունների ներքո, որոնք հիմնականում D1- ին ընդդեմ D2 դոպամինային ընկալիչների, մինչդեռ քրոնիկ կոկաինը ներարկում է ΔFosB հիմնականում D1 + նեյրոնների մեջ (Kelz եւ այլն, 1999, Perrotti et al., 2004) . Այսպիսով, հնարավոր է, որ SRF- կախված ուղիները կարող են կարեւոր լինել ΔFosB ինդուկցիայի համար, D2 + նեյրոններում. Այնուամենայնիվ, դա չի բացատրում ΔFosB- ի ամբողջական կորուստը քրոնիկական սթրեսից հետո SRF- ի թակոցից դուրս մկների մեջ, քանի որ ինդուկցիան տեղի է ունենում ինչպես նեյրոնային ենթատիպերում: Այլընտրանքային բացատրությունն այն է, որ քրոնիկ սթրեսը եւ քրոնիկ կոկաինը խանգարում են հստակ միջուկային ազդանշանային կասկադի վրա, ի շնորհիվ NAc նեյրոնների վրա իրենց գործողությունների հստակ ռեժիմների, խրոնիկ սթրեսով, թերեւս, աշխատելով փոփոխված glutamatergic փոխանցման միջոցով, ինչպես նաեւ նշվել է ավելի վաղ եւ խրոնիկ կոկաինը, որն աշխատում է հիմնականում D1- ի միջոցով ռեզերվատորային ազդանշաններ (Nestler, 2008): Այնուամենայնիվ, մեկ այլ հնարավորություն է, որ ΔFosB- ի քրոնիկ սթրեսը քրոնիկ կոկաինի հետ փոխկապակցումն է, որը կախված է տարբեր transcriptional մեխանիզմներից, որոնք տարբեր կերպով վերահսկվում են NAc- ի տարբեր գլութամերգիկ նախագծման շրջաններից իներցիան տարբեր նյարդային միջոցների միջոցով, օրինակ, պրֆֆրոնտորային ծղոտի, հիպոկամպուսի եւ ամիգդալայի որոշ շրջաններ: Այս եւ այլընտրանքային հնարավորությունների ուսումնասիրման համար անհրաժեշտ է հետագա աշխատանք:
Միասին մեր գտածոները բացահայտում են վեպի արտագրման մեխանիզմը, որի միջոցով ΔFosB- ն ներգրավված է NAc- ում, որպեսզի միջնորդի դերակատարություն ունենա սթրեսային խթանների նկատմամբ: Այս ուսումնասիրությունը նաեւ կարեւոր նոր պատկերացում է տալիս ԱՀԿ-ի դերը դեպրեսիայի եւ անհանգստության նման վարքագծի կանոնակարգման հարցում, Նման վարքագծի կարգավորման գործում SRF- ի արտագրման դերի ավելի լավ ընկալումը կնպաստի սթրեսի հետ կապված խանգարումների դիմադրողականության մեջ ներգրավված նոր գենային թիրախների բացահայտմանը և կարող է նպաստել ավելի արդյունավետ հակադեպրեսանտ թերապիաների հետագա զարգացմանը:
Այս աշխատանքը ֆինանսավորվել է Հոգեկան առողջության ազգային ինստիտուտի եւ Թմրամիջոցների չարաշահման ազգային ինստիտուտի եւ AstraZeneca- ի հետ հետազոտական դաշինքից: Մենք շնորհակալություն ենք հայտնում Դեյվիդ Դին Գինթիին Srffl / fl մկների ապահովման համար:
Նամակագրությունը պետք է հասցեագրվի Էրիկ Ջ. Նեստլերին, Fishberg- ի Նեյրոնագիտության բաժին, Սինայի բժշկական դպրոց, One Gustave L. Levy Place, Box 1065, Նյու Յորք, NY 10029-6574: [էլեկտրոնային փոստով պաշտպանված]
Հեղինակային իրավունքի © 2010 հեղինակները 0270-6474 / 10 / 3014585-08 $ 15.00 / 0
Սայլակ
1. ↵
1. Ալբերտի Ս,
2. Krause SM,
3. Kretz O,
4. Philippar U,
5. Լեմբերգեր Տ,
6. Կասանովա Է,
7. Wiebel FF,
8. Շվարց Հ,
9. Frotscher M,
10. Schütz G,
11. Նորդհայմ Ա
(2005) Նյոնոնալ միգրացիան մորթված rostral migratory stream- ի համար պահանջում է շիճուկ արձագանքման գործոն: Քրեական դատավարություն ԱՄՆ-ի 102- ում `6148-6153:
Ամփոփագիր / ԱԶԱՏ Թեժ տեքստ
2. ↵
1. Bading H,
2. Ginty DD,
3. Գրինբերգ ME
(1993) Հիպոկամպալ նեյրոնների գենային արտահայտման կանոնակարգումը հստակ կալցիումային ազդանշանային ուղիներով: Գիտություն 260- ը `181-186:
Ամփոփագիր / ԱԶԱՏ Թեժ տեքստ
3. ↵
1. Բերտոն Օ,
2. McClung CA,
3. Dileone RJ,
4. Կրիշնան V,
5. Renthal W,
6. Ռուսո Ս.Ջ.,
7. Graham D,
8. Ցանկկովա Ն.Մ.,
9. Բոլանոս CA,
10. Ռիոս Մ,
11. Monteggia LM,
12. Ինքն DW,
13. Nestler EJ- ն
(2006b) BDNF- ի հիմնական դերը մեցոլիմիկ դոպամինային ուղին սոցիալական պարտվածության սթրեսում: Գիտություն 311- ը `864-868:
Ամփոփագիր / ԱԶԱՏ Թեժ տեքստ
4. ↵
1. Բերտոն Օ,
2. Covington HE 3rd- ը,
3. Աբներ Ք,
4. Ցանկկովա Ն.Մ.,
5. Carle TL,
6. Ulery P,
7. Bhonsle A,
8. Barrot M,
9. Կրիշնան V,
10. Singewald GM,
11. Singewald N,
12. Birnbaum S,
13. Neve RL,
14. Nestler EJ- ն
(2007) Պերագագուակտիվ մոխրագույնով ΔFosB- ի ներդիրը սթրեսի միջոցով խթանում է ակտիվ պատասխանատու պատասխաններ: Neuron 55- ը `289-300:
CrossRefMedline- ը
5. ↵
1. Chang SH,
2. Poser S,
3. Xia Z
(2004) Նեյրոնային գոյատեւման մեջ շիճուկ արձագանքման գործոնի վեպի դերը: J Neurosci 24- ը `2277-2285:
Ամփոփագիր / ԱԶԱՏ Թեժ տեքստ
6. ↵
1. Ակտիվ Ա,
2. Alarcón JM,
3. Weisberg SP,
4. Touzani K,
5. Huang YY,
6. Nordheim A,
7. Kandel ER- ն
(2006) Դասընթաց SRF- ի ուսուցման մեջ. Մեծահասակների նախաբերիայի ջնջումը խախտում է ՍՊԸ-ն եւ վեպի համատեքստի անմիջական հիշողությունը: Neuron 50- ը `127-143:
CrossRefMedline- ը
7. ↵
1. Heinze HJ,
2. Heldmann M,
3. Վոգես Ջ,
4. Hinrichs H,
5. Մարկո Պալլարես Ջ,
6. Հոփֆ Ջ.Մ.,
7. Մյուլլեր UJ,
8. Գալազի I,
9. Շտերմմ V,
10. Bogert B,
11. Münte TF
(2009) Հակամարտության խթանման խթանումը խիստ ալկոհոլային կախվածության մեջ, օգտագործելով միջուկային հեծանիվների խորը ուղեղի խթանումը `կլինիկական եւ հիմնական գիտական ասպեկտները: Front Hum Նեուրոսցի 3: 22:
ՄԵԴԼԱՅՆ
8. ↵
1. Ջոնսոն Սմ,
2. Hill CS,
3. Չավլա Ս,
4. Treisman R,
5. Bading Հ
(1997) Կալցիումը վերահսկում է գենի արտահայտությունը երեք հստակ ուղիներով, որոնք կարող են գործել անկախ Ras / mitogen- ակտիվացված սպիտակուցային kinases (ERKs) ազդանշանային կասկադ: J Neurosci 17- ը `6189-6202:
Ամփոփագիր / ԱԶԱՏ Թեժ տեքստ
9. ↵
1. Կալիտա Կ,
2. Խարեբաա Գ,
3. Zheng JJ,
4. Հեթման Մ
(2006) Մեգակարիոբլաստիկ սուր լեյկեմիայի-1- ի դերը ERK1 / 2-ում `BDNF- ի կողմից շիճուկի արձագանքման գործոնի վրա հիմնված transcription- ի կամ ավելացված սինապտիկ ակտիվության խթանման մեջ: J Neurosci 26- ը `10020-10032:
Ամփոփագիր / ԱԶԱՏ Թեժ տեքստ
10. ↵
1. Kelz MB,
2. Chen J,
3. Carlezon WA Jr.,
4. Ուիսլեր Կ,
5. Գիլդեն Լ,
6. Beckmann AM,
7. Steffen C,
8. Ժանգ Յ.Ջ.,
9. Մարոտտի Լ,
10. Ինքն DW,
11. Tkatch T,
12. Baranauskas G,
13. Surmeier DJ,
14. Neve RL,
15. Դուման RS,
16. Picciotto MR,
17. Nestler EJ- ն
(1999) Անթվակիչ գործոնի արտահայտումը ΔFosB ուղեղում վերահսկում է կոկաինի զգայունությունը: Բնություն 401- ը `272-276:
CrossRefMedline- ը
11. ↵
1. Knöll B,
2. Նորդհայմ Ա
(2009) նյարդային համակարգի transcription գործոնների ֆունկցիոնալ բազմակողմանիությունը `SRF պարադիգմը: Թրենդներ Neurosci 32: 432-442:
CrossRefMedline- ը
12. ↵
1. Knöll B,
2. Kretz O,
3. Fiedler C,
4. Ալբերտի Ս,
5. Schütz G,
6. Frotscher M,
7. Նորդհայմ Ա
(2006) Շիճուկի արձագանքման գործոնը վերահսկում է հիպոկամպում նեյրոնային շրջանային ժողովը: Nat Neurosci 9- ը `195-204:
CrossRefMedline- ը
13. ↵
1. Կրիշնան V,
2. Han MH,
3. Graham DL,
4. Բերտոն Օ,
5. Renthal W,
6. Ռուսո Ս.Ջ.,
7. Laplant Q,
8. Գրահամ Ա,
9. Lutter M,
10. Lagace DC,
11. Ղուզե Ս,
12. Reister R,
13. Tannous P,
14. Green TA,
15. Neve RL,
16. Չակավարտի Ս,
17. Կումար Ա,
18. Eisch AJ,
19. Ինքն DW,
20. Lee FS,
21. եւ այլն:
(2007) Մոլեկուլային փոփոխություններ, որոնք հիմքում ընկած են ուղեղի պարգեւատրման շրջաններում սոցիալական պարտվածության նկատմամբ: Բջջային 131- ը `391-404:
CrossRefMedline- ը
14. ↵
1. Kuhn J,
2. Բաուեր Ռ,
3. Pohl S,
4. Լենարց Դ,
5. Հաֆֆ Վ,
6. Kim EH,
7. Klosterkoetter J,
8. Շտերմմ Վ
(2009) Ճառագայթների հիգիենայի խորը ուղեղի խթանման հետեւանքով անխտիր ծխելը դադարեցնելու վերաբերյալ դիտողություններ: Eur- ի Addict Res 15- ը `196-201:
CrossRefMedline- ը
15. ↵
1. Կումար Ա,
2. Choi KH,
3. Renthal W,
4. Ցանկկովա Ն.Մ.,
5. Theobald DE,
6. Truong HT,
7. Ռուսո Ս.Ջ.,
8. Laplant Q,
9. Sasaki TS,
10. Ուիստլեր ՔՆ,
11. Neve RL,
12. Ինքն DW,
13. Nestler EJ- ն
(2005) Chromatin- ի վերամշակումը կոտրատորի մեջ կոկաինը ներգործող պլաստիկության հիմքում ընկած հիմնական մեխանիզմն է: Neuron 48- ը `303-314:
CrossRefMedline- ը
16. ↵
1. Լաբիրինթոս I,
2. Covington HE 3rd- ը,
3. Dietz DM,
4. LaPlant Q,
5. Renthal W,
6. Ռուսո Ս.Ջ.,
7. Մեքենավար M,
8. Mouzon E,
9. Neve RL,
10. Haggarty SJ,
11. Ren Y,
12. Sampath SC,
13. Hurd YL,
14. Greengard P,
15. Թարախովսկի Ա,
16. Schaefer A,
17. Nestler EJ- ն
(2010) Քսան-իռացված պլաստիկության մեջ հիստոնիային methyltransferase G9a- ի կարեւոր դերը: Գիտություն 327- ը `213-216:
Ամփոփագիր / ԱԶԱՏ Թեժ տեքստ
17. ↵
1. McClung CA,
2. Ulery PG,
3. Perrotti LI,
4. Զաչարիո Վ,
5. Բերտոն Օ,
6. Nestler EJ- ն
(2004) DeltaFosB: մոլեկուլային անջատիչ ուղեղի երկարատեւ հարմարվողականության համար: Brain Res Mol Brain Res 132- ը `146-154:
ՄԵԴԼԱՅՆ
18. ↵
1. Nestler EJ- ն
(2008) Կախվածության transkriptinal մեխանիզմները. DeltaFosB- ի դերը: Philos Trans R Soc Lond Բ Բոլ Սի 363: 3245-3255:
Ամփոփագիր / ԱԶԱՏ Թեժ տեքստ
19. ↵
1. Nestler EJ,
2. Carlezon WA Jr.
(2006) Մեզոլիմիկ դոպամինի պարգեւատրման միացում դեպրեսիայի մեջ: Կենսաբանական Հոգեբանություն 59: 1151-1159:
CrossRefMedline- ը
20. ↵
1. Nestler EJ,
2. Kelz MB,
3. Չեն Ժ
(1999) ΔFosB: երկարատեւ նյարդային եւ վարքային պլաստիկության մոլեկուլային միջնորդ: Brain Res 835- ը `10-17:
CrossRefMedline- ը
21. ↵
1. Նյուտոն ՍՍ,
2. Thome J,
3. Wallace TL,
4. Շիրայամա Յ,
5. Շլեզինգեր Լ,
6. Սաքայ Ն,
7. Chen J,
8. Neve R,
9. Nestler EJ,
10. Դուման RS
(2002) Կամպի արձագանքման տարրը պարտադրող սպիտակուցի կամ դինորֆինի արգելումը միջուկում accumbens- ում առաջացնում է հակադեպրեսանտային ազդեցություն: J Neurosci 22- ը `10883-10890:
Ամփոփագիր / ԱԶԱՏ Թեժ տեքստ
22. ↵
1. Նիկուլինա Է.Մ.,
2. Arrillaga-Romany I,
3. Miczek KA,
4. Hammer RP Jr.
(2008) Երկարատեւ փոփոխություն mesocorticolimbic շերտերում առնետների կրկնվող սոցիալական պարտվածքի սթրեսից հետո: mu-opioid reseptor mRNA- ի եւ FosB / DeltaFosB իմունային ակտիվության ժամանակի ընթացքը: Eur J Neurosci 27- ը `2272-2284:
CrossRefMedline- ը
23. ↵
1. Perrotti LI,
2. Հադիշի Յ,
3. Ulery PG,
4. Barrot M,
5. Մոնտեգգիա Լ,
6. Դուման RS,
7. Nestler EJ- ն
(2004) Խրոնիկ սթրեսից հետո ΔFosB- ի ներդիրը պարգեւատրման հետ կապված ուղեղի կառուցվածքներում: J Neurosci 24- ը `10594-10602:
Ամփոփագիր / ԱԶԱՏ Թեժ տեքստ
24. ↵
1. Perrotti LI,
2. Weaver RR,
3. Robison B,
4. Renthal W,
5. Լաբիրինթոս I,
6. Yazdani S,
7. Elmore RG,
8. Knapp DJ,
9. Սելլի Դե,
10. Մարտին Բրյուսելը,
11. Սիմ-Սելլի Լ,
12. Bachtell RK,
13. Ինքն DW,
14. Nestler EJ- ն
(2008) DeltaFosB- ի տարբեր ձեւեր, որոնք ուղեկցվում են ուղեղի վրա `չարաշահման թմրամիջոցներով: Synapse 62- ը `358-369:
CrossRefMedline- ը
25. ↵
1. Philippar U,
2. Շրատտ Գ,
3. Dieterich C,
4. Մյուլլեր Ջ.Մ.,
5. Գալչոչի Պ,
6. Էնգել ՖԲ,
7. Keating MT,
8. Գերտեր Ֆ,
9. Շուլե Ռ,
10. Vingron M,
11. Նորդհայմ Ա
(2004) SRF թիրախային գենը Fhl2- ը հակաօրգանեց SRF- ի RhoA / MAL- ի կախված ակտիվացում: Mol բջջային 16- ը `867-880:
CrossRefMedline- ը
26. ↵
1. Ռամանան Ն,
2. Շեն Յ,
3. Sarsfield S,
4. Լեմբերգեր Տ,
5. Schütz G,
6. Լինդեն DJ,
7. Ginty DD
(2005) SRF- ն միջնորդում է գործունեության մեջ առաջացած գենի եւ սինապտիկ պլաստիկության, բայց ոչ նեյրոնային կենսունակությունը: Nat Neurosci 8- ը `759-767:
CrossRefMedline- ը
27. ↵
1. Renthal W,
2. Carle TL,
3. Լաբիրինթոս I,
4. Covington HE 3rd- ը,
5. Truong HT,
6. Alibhai I,
7. Կումար Ա,
8. Մոնտգոմերի ՌԼ,
9. Olson EN,
10. Nestler EJ- ն
(2008) Delta FosB- ն միջնորդում է քրոնիկ ամֆետամինի ազդեցությունից հետո c-fos գենի epigenetic desensitization: J Neurosci 28- ը `7344-7349:
Ամփոփագիր / ԱԶԱՏ Թեժ տեքստ
28. ↵
1. Renthal W,
2. Կումար Ա,
3. Xiao G,
4. Wilkinson M,
5. Covington HE 3rd- ը,
6. Լաբիրինթոս I,
7. Sikder D,
8. Robison AJ,
9. LaPlant Q,
10. Dietz DM,
11. Ռուսո Ս.Ջ.,
12. Vialou V,
13. Չակավարտի Ս,
14. Kodadek TJ,
15. Stack A,
16. Կաբբաջ Մ,
17. Nestler EJ- ն
(2009) Կոկաինի կողմից քրոմատինի կարգավորման գենոմային ընդհանրացված վերլուծությունը բացահայտում է դերը կեղծիքների համար: Neuron 62- ը `335-348:
CrossRefMedline- ը
29. ↵
1. Schlaepfer TE,
2. Cohen MX,
3. Ֆրիք C,
4. Կոսելի Մ,
5. Brodesser D,
6. Ադմաչեր Ն,
7. Ջո ԱՅ,
8. Kreft M,
9. Լենարց Դ,
10. Շտերմմ Վ
(2008) Deep ուղեղի խթանումը, որը կպարգեւի սխեմաները, մեղմացնում է աներեւույթը հրակայուն խոշոր դեպրեսիայի մեջ: Նեյրոփսիֆոֆարմոլոգիա 33: 368-377:
CrossRefMedline- ը
30. ↵
1. Sesack SR,
2. Գրեյս Ա.Ա.
(2010) Cortico-bazal ganglia- ի վարձատրության ցանցը `միկրոկարդուղի: Նեյրոփսիֆոֆարմոլոգիա 35: 27-47:
CrossRefMedline- ը
31. ↵
1. Թոմիտա Հ,
2. Vawter MP,
3. Walsh DM,
4. Էվանս Ս.Ջ.,
5. Choudary PV,
6. Լի Ջ,
7. Overman KM,
8. Atz ME,
9. Myers RM,
10. Ջոնս Է.Գ.,
11. Ուոթսոն Ս.Ջ.,
12. Աքիլ Հ,
13. Bunney WE Jr.
(2004) Գգոնային եւ հետբուհական գործոնների ազդեցությունը գենային արտահայտման պրոֆիլների վրա. Միկրոավտոբուսային վերլուծությունների որակի վերահսկում կամ մարդու ուղեղի հետամնացություն: Biol Հոգեբուժության 55: 346-352:
CrossRefMedline- ը
32. ↵
1. Ցանկկովա Ն.Մ.,
2. Բերտոն Օ,
3. Renthal W,
4. Կումար Ա,
5. Neve RL,
6. Nestler EJ- ն
(2006) Կայուն հիպոկամպալ քրոմատինի կարգավորումը դեպրեսիայի եւ հակադեպրեսանտի մկնիկի մոդելում: Nat Neurosci 9- ը `519-525:
CrossRefMedline- ը
33. ↵
1. Վասոլեր FM,
2. Շմիդտ HD,
3. Ջերարդ ME,
4. Հայտնի ԿՌ,
5. Ciraulo DA,
6. Kornetsky C,
7. Knapp CM,
8. Պիրս
(2008) Կրծքագեղձի խթանումը միջուկի ականջի խցանման համար խթանում է կոկաինի պրոտեինների առաձգականությունը `առնետների որոնման նպատակով: J Neurosci 28- ը `8735-8739:
Ամփոփագիր / ԱԶԱՏ Թեժ տեքստ
34. ↵
1. Vialou V,
2. Robison AJ,
3. Laplant QC,
4. Covington HE 3rd- ը,
5. Dietz DM,
6. Օնիշի ՅՆ,
7. Mouzon E,
8. Rush AJ 3rd- ը,
9. Watts EL,
10. Wallace DL,
11. Iñiguez SD,
12. Օնիշի Յ.Հ.,
13. Շ Steiner MA,
14. Ուորեն Բլ,
15. Կրիշնան V,
16. Bolaños CA,
17. Neve RL,
18. Ղուզե Ս,
19. Բերտոն Օ,
20. Թամմինգա CA,
21. Nestler EJ- ն
(2010) ΔFosB ուղեղի պարգեւատրման սխեմաների միջոցով միջնորդում է սթրեսին եւ հակադեպրեսանտային պատասխաններին: Nat Neurosci 13- ը `745-752:
CrossRefMedline- ը
35. ↵
1. Wilkinson MB,
2. Xiao G,
3. Կումար Ա,
4. LaPlant Q,
5. Renthal W,
6. Sikder D,
7. Kodadek TJ,
8. Nestler EJ- ն
(2009) Imipramine- ի բուժումը եւ ճկունությունը ցուցադրվում են ուղեղի պարգեւատրման հիմնական շրջանում նման քրոմատների կարգավորում: J Neurosci 29- ը `7820-7832:
Ամփոփագիր / ԱԶԱՏ Թեժ տեքստ
36. ↵
1. Xia Z,
2. Դուդեք Հ,
3. Miranti CK,
4. Գրինբերգ ME
(1996) NMDA ընդունիչի միջոցով կալցիումի ներարկումն առաջացնում է անմիջապես վաղ գենի արտագրումը MAP kinase / ERK- կախված մեխանիզմով: J Neurosci 16- ը `5425-5436:
Ամփոփագիր / ԱԶԱՏ Թեժ տեքստ
;