Հանելը հանգեցնում է FosB / ΔFosB արտահայտության հստակ օրինակների, որոնք արտացոլված են շվեյցարական շվեյցարական մկների մեջ, որպես դասակարգված եւ էթանոլի ազդեցության շարժիչի շարժիչի sensitization (2014)

Pharmacol Biochem Behav- ը: 2014 փետրվարի, 117, 70-8: doi: 10.1016 / j.pbb.2013.12.007: Epub 2013 Դեկ 16.

Դե Պաուլի ՌԴ1, Coelhoso CC- ն2, Tesone-Coelho C2, Լինարլի Ա3, Մելլո Լ2, Silveira DX- ը1, Սանթոս-Ջունիոր Ջ4.

Վերացական

Քրոնիկ թմրամիջոցների ներարկումը եւ թմրամիջոցների քայքայումն առաջացնում են արտահայտիչ նեյրոնային պլաստիկություն, որը կարող է համարվել ինչպես ֆունկցիոնալ, այնպես էլ պաթոլոգիական պատասխաններ: Հստակորեն հաստատված է, որ լիմբիկ համակարգում նեյրոնային պլաստիկությունը կարեւոր դեր է կատարում կրկնության, ինչպես նաեւ թմրամոլության պարտադիր բնութագրիչների մեջ: Չնայած FosB / DeltaFosB արտահայտության աճը կազմում է թմրամոլության մեջ նեյրոնային պլաստիկության կարեւորագույն ձեւերից մեկը, պարզ չէ `արդյոք դրանք ներկայացնում են ֆունկցիոնալ կամ պաթոլոգիական ճկունություն: Հատկանշական է այն հանգամանքը, որ հանգստի օգտագործման նկատմամբ թմրամոլության նկատմամբ անհատական ​​տարբերությունները: Այս տարբերությունները հայտնաբերվել են ուսումնասիրության մեջ ներառված էթանոլի վրա հիմնված լոկոմոտիվի sensitization paradigm- ով: Սույն ուսումնասիրության մեջ մենք ուսումնասիրեցինք, թե արդյոք sensitized եւ ոչ sensitized մկները տարբեր են առումով FosB / DeltaFosB արտահայտությունը: Մեծահասակների արական սեռական շվեյցարական մկները օրական խնամվում են էթանոլով կամ աղցանով `21 օրվա ընթացքում: Ըստ ձեռքբերման փուլում շարժիչային ակտիվության, դրանք դասակարգվում էին որպես sensitized (EtOH_High) կամ ոչ sensitized (EtOH_Low): 18h- ​​ից կամ 5days- ից հետո նրանց ուղեղները մշակվել են FosB / DeltaFosB իմունոգոստոկիմիայի համար: Հոկտեմբերյան 5- ի օրվա ընթացքում մենք կարողացանք դիտարկել EtOH- ի բարձր խմբում (շարժիչի ծառի կույտերում), EtOH_Low խմբի (ventral tegmental տարածքում) եւ երկու խմբերի (striatum) աճել FosB / DeltaFosB արտահայտությունը: Տարբերությունները ավելի համահունչ էին EtOH_Low խմբի մեջ: Հետեւաբար, էթանոլի դրսեւորման լոկոմոտուցիոն սենսիտիզացման ձեռքբերման փուլում դիտարկվող վարքային փոփոխականությունը ուղեկցվում էր հեռացման ժամանակահատվածում տարբեր նյարդային պլաստիկությամբ: Բացի այդ, զգայուն եւ ոչ զգայուն մկների հայտնաբերված FosB / DeltaFosB արտահայտության հստակ նախշերը կարծես թե ավելի շատ կապված են հեռացման ժամկետից, քան թմրանյութերի քրոնիկ ճառագայթումը: Վերջապես, FosB / DeltaFosB արտահայտության աճի ժամանակահատվածում աճը կարելի է համարել որպես ֆունկցիոնալ եւ պաթոլոգիական ճկունություն:

 

Թեթեւ մելիռովկա

  • DeltaFosB արտահայտությունը թմրամոլության մեջ նեյրոնային պլաստիկության կարեւոր ձեւ է

  • Այնուամենայնիվ, պարզ չէ, թե արդյոք այն ներկայացնում է ֆունկցիոնալ կամ պաթոլոգիական պլաստիկություն:

  • Այստեղ մենք գտել ենք DeltaFosB- ի տարբերությունները sensitized եւ ոչ sensitized մկների միջեւ:

  • Այս տարբերությունները ավելի շատ վերաբերում են թմրամիջոցների հայտնաբերմանը, այլ ոչ թե հեռացման ժամանակահատվածին:

  • Մենք առաջարկում ենք, որ այդ փոփոխությունները ներկայացնեն ինչպես ֆունկցիոնալ, այնպես էլ պաթոլոգիական պլաստիկությունը:

Keywords

  • FosB;
  • DeltaFosB- ը;
  • Locomotor sensitization;
  • Կանխիկացում;
  • Վարքային փոփոխականություն;
  • Մկնիկներ

1: ներածություն

Թմրամոլության ներկա նյարդաբժշկական հետազոտությունների մարտահրավեր է հասկանալ նեյրոնային պլաստիկության մեխանիզմները, որոնք միջամտում են հանգստի օգտագործման անցնելուց մինչեւ թմրանյութերի որոնման եւ թմրանյութերի ընդունման վարքային վերահսկողության կորուստ: Թմրամոլության կարեւորագույն տեսություններից մեկը, որը կոչվում է «կախվածության մութ կողմը», ենթադրում է, որ իմպուլսիվության առաջացումը (դրական ամրապնդման հետ կապված) կոմպուլյատիվությանը (բացասական ուժեղացման հետ կապված) է: Այս առաջընթացը, փլուզված ցիկլում, ներառում է հետեւյալ վիճակները. Նախապատվություն / կանխավճռականություն, բինգի թունավորում եւ հեռացում / բացասական ազդեցություն (Koob եւ Le Moal, 2005, Koob եւ Le Moal, 2008 և Koob եւ Volkow, 2010): Այս սցենարից թմրամոլության ուսումնասիրությունները կենտրոնացած են նյարդաբուծական մեխանիզմների վրա, որոնք բացասական եւ երկարատեւ բացակայության բացասական հուզական վիճակների հետ կապված են: Ըստ «թմրամիջոցների մութ կողմը» տեսության, կարծես տեղի է ունենում նյարդային սխեմաների երկարատեւ եւ կայուն ճկունության փոփոխություններ `նպատակ ունենալով սահմանափակել պարգեւը: Այնուամենայնիվ, այդ պլաստիկի փոփոխությունները հանգեցնում են բացասական հուզական վիճակին, որը առաջանում է, երբ կանխարգելվում է թմրամիջոցների հասանելիությունը: Այս մեխանիզմը խթանող շարժիչ ուժ է ապահովում կախվածության հաստատման համար, ինչպես նաեւ դրա պահպանման համար (Koob եւ Le Moal, 2005 և Koob եւ Le Moal, 2008).

Locomotor sensitization- ը օգտակար կենդանական մոդել է, որի հիման վրա այն է, որ թմրանյութերի սուբյեկտիվ ազդեցությունների ավելացումները կրկնակի ազդեցություն ունենալու դեպքում նման են թմրամիջոցների ազդեցության խթանման լոկոմոտիվային ազդեցությունների ավելացմանը (Vanderschuren եւ Kalivas, 2000 և Vanderschuren եւ Pierce, 2010): Թեեւ լոկոմոտիվի սենսիտիզացիան չի նմանեցնում թմրամոլության հետ կապված մի քանի վարքագծի, նրա ժամանակավոր մորֆոլոգիական եւ նյարդային քիմիական առանձնահատկությունները զուգահեռ են հանգստի օգտագործումից դեպի թմրամոլության մեջ անցնելըRobinson եւ Kolb, 1999, Vanderschuren եւ Kalivas, 2000 և Vanderschuren եւ Pierce, 2010): Ավանդաբար, լոկոմոտիվի հստակեցման արձանագրությունը բաղկացած է երեք փուլերից `ձեռքբերում (կրկնակի թմրանյութերի ազդեցություն), հանելը եւ մարտահրավերը (նոր շփումը դեղամիջոցի հետ հետաձգելուց հետո): Ցավոք, հետազոտության հիմնական մասը, օգտագործելով լոկոմոտիվային սենսիտիզացիան, կենտրոնացած էր միայն ձեռքբերման եւ մարտահրավերային փուլում `վերագրելով դուրս գալու ժամանակաշրջանը:

Հստակորեն հաստատված է, որ չարաշահումների թմրանյութերի կրկնվող ազդեցությունըPerrotti եւ այլոք, 2008) եւ քրոնիկ սթրես (Perrotti եւ այլոք, 2004) ավելացնում է corticolimbic համակարգում fosB / deltafosB տառատեսակ գործոնի արտահայտությունը: Այս շրջաններում FosB / DeltaFosB- ի կուտակումը ենթադրվում է, որ կենտրոնական դերակատարություն ունենա սթրեսների (Բերտոն եւ այլք, 2007 և Vialou et al., 2010) եւ կոկաինի հատուցող հետեւանքներըՀարրիս եւ այլք, 2007 և Մուսամբար եւ այլք, 2012), էթանոլ (Kaste եւ այլն, 2009 և Li եւ այլն, 2010) եւ օփիոիդների (Zachariou et al., 2006 և Solecki եւ այլն, 2008): Հետեւաբար, հնարավոր է, որ FosB / DeltaFosB- ն մոդուլացնում է էթանոլի վրա հիմնված լոկոմոտոտի sensitization- ի հետ կապված որոշ նեյրոնային պլաստիկային իրադարձությունների, ինչպես նաեւ դուրս գալու, որը հանգեցնում է լոկոմոտիվների sensitization- ի ձեռքբերման փուլին:

Հատկանշական է, որ հանգստի օգտագործման եւ թմրամոլության անցնելու ժամանակ նկատվում են անհատական ​​տարբերություններ (Flagel եւ այլն, 2009, Ջորջ եւ Կոբ, 2010 և Swendsen եւ Le Moal, 2011) Օրինակ, DBA / 2 J մկները ավելի հակված են արձագանքելու, քան C57BL / 6 J էթանոլի հետևանքով շարժիչային զգայունացմանը (Ֆիլիպսը եւ այլք, 1997 և Մելոն եւ Բոեմ, 2011a): Բացահայտված շվեյցարական մկների մեջ առաջին անգամ բնութագրվել է էթանոլի առաջացման լոկոմոտիվի sensitization- ի վերաբերյալ վարքային փոփոխականությունը Masur եւ dos Santos (1988). Այնուհետեւ, մյուս ուսումնասիրությունները ցույց են տվել, որ էթանոլի դրսեւորվող շարժիչային ազդանշանների ձեռքբերման գործում վարքային փոփոխականության հետ կապված կարեւոր նյարդային քիմիական հատկություններSouza-Formigoni et al., 1999, Աբրահա եւ այլն, 2011, Աբրահա եւ այլն, 2012, Քվադրոոս եւ այլք, 2002a և Քվադրոոս եւ այլք, 2002b): Այնուամենայնիվ, այս ուսումնասիրությունները չեն անդրադարձել վարքագծային փոփոխականության ազդեցությունը լոկոմոտիվների sensitization- ի ձեռքբերման փուլից հետո դուրս գալու ժամանակահատվածում: Վերջերս անցկացրած ուսումնասիրության ժամանակ մեր լաբորատորիան զգայուն եւ ոչ sensitized outbred շվեյցարական մկների միջեւ զգալի տարբերություն է արձանագրել քնաբերունի տեսակի 1 (CB1R) տեսակի արտանետման վերաբերյալ: Այս ուսումնասիրության ընթացքում sensitized (բայց ոչ non sensitized mice) աճել է CB1R արտահայտությունը prefrontal cortex, ventral tegmental տարածքում, amygdala, striatum եւ hippocampus (Coelhoso et al., 2013).

Հաշվի առնելով էթանոլի հետևյալ շարժիչային զգայունության վերաբերյալ անհամաչափ շվեյցարական մկների վարքի լավ հաստատված փոփոխականությունը, և որ այդ փոփոխականությունն ուղեկցվում է հստակ նեյրոաքիմիական հատկություններով ՝ հետագա դուրսբերման ժամանակ, սույն ուսումնասիրությունը ուսումնասիրել է FosB / DeltaFosB– ի արտահայտումը սկզբում զգայունացված և ոչ զգայուն մկների (18 ժ) և 5 օր հետ վերցնելուց հետո:

2. Նյութեր եւ մեթոդներ

2.1. Առարկաներ

Օգտագործվել են արական սեռից դուրս շվեյցարական վեբստեր մկներ (EPM-1 գաղութ, Սան Պաուլո, ՍՊ, Բրազիլիա), որոնք ի սկզբանե ստացվել են Albino Swiss Webster տողից ՝ Սան Պաուլոյի Universidade Federal de Biology and Medicine կենդանիների մոդելների զարգացման կենտրոնից: , Փորձարկման սկզբում մկները 12 շաբաթական էին (30-40 գ): 10 մկների խմբերը տեղավորվել են փայտանյութի անկողնային պարագաներով (40 × 34 × 17 սմ) վանդակներում: Animalերմաստիճանը (20–22 ° C) և խոնավությունը (50%) վերահսկվող կենդանիների գաղութը պահպանվել է լույսի / մութ ցիկլի վրա (12/12 ժամ), լույսերը միացված են 07: 00-ին, մկնիկի ձուլակտորներով և ծորակից ջրի գովազդով լիբիտում, բացառությամբ փորձարկման ժամանակ: Թմրամիջոցների բուժման և վարքային թեստերի սկսվելուց առաջ մկները պահպանվել են այս բնակարանային պայմաններում առնվազն 7 օր առաջ: Կենդանիների խնամքի և փորձարարական ընթացակարգերն իրականացվել են Համալսարանի Կենդանիների խնամքի և օգտագործման էթիկայի հանձնաժողովի կողմից հաստատված արձանագրությունների համաձայն (արձանագրության համարը ՝ 2043/09), համաձայն ԵՄ 2010/63 / ԵՄ կենդանիների փորձերի հրահանգի (http://ec.europa.eu/environmental/chemicals/lab_animals/legislation_en.htm).

2.2. Locomotor sensitization

Լոկոմոտիվի sensitization- ի արձանագրությունը հիմնված էր մեր սեփական լաբորատորիայի նախորդ ուսումնասիրության վրա (Coelhoso et al., 2013) Արձանագրության սկզբում բոլոր կենդանիներին ներարկղային (ip) ֆիզիոլոգիական լուծույթ ներարկեցին և անմիջապես փորձարկեցին ավտոմատացված գործունեության տուփում (Ինսայթ, Բրազիլիա) 15 րոպե `բազալ տեղաշարժը հաստատելու համար: Երկու օր անց կենդանիներին ամեն օր ներարկեցին էթանոլ (2 գ / կգ, 15% վտ / վ 0.9% NaCl, ip - EtOH խմբում, N = 40) կամ աղի լուծույթ (համանման ծավալ, ip, - Վերահսկիչ խումբ, N = 12), 21 օրվա ընթացքում: 1-ին, 7-րդ, 14-րդ և 21-րդ ներարկումներից անմիջապես հետո կենդանիները տեղադրվեցին գործունեության վանդակում 15 րոպե: Յուրաքանչյուր իրավիճակում հորիզոնական տեղաշարժը չափվում էր վարքագծի վերլուծության համակարգով (Պան լաբորատորիա, Իսպանիա): Ինչպես եւ սպասվում էր ( Masur եւ dos Santos, 1988 և Coelhoso et al., 2013), ձեռքբերման 21st օրը տեղաշարժման ակտիվության վարքագծային փոփոխականությունը թույլ է տալիս մեզ բաժանել EtOH խմբի կենդանիներին 2 ենթախմբերում: EtOH_High (վերցված բաշխման վերին 30%) եւ EtOH_Low (վերցված է ստորին 30% - ից բաշխում). Այսպիսով, վերլուծության մեջ ընդգրկված էին կենդանիների միայն 60% -ը: Այս ռազմավարությունը նույնն է այն ուսումնասիրողների համար, որոնք օգտագործվում են էթանոլի sensitization paradigm- ի ( Masur եւ dos Santos, 1988, Souza-Formigoni et al., 1999, Քվադրոոս եւ այլք, 2002a, Քվադրոոս եւ այլք, 2002b, Աբրահա եւ այլն, 2011, Աբրահա եւ այլն, 2012 և Coelhoso et al., 2013).

Փորձարարական խմբերը սահմանող դասակարգումից հետո մենք իրականացրել ենք 2 անկախ փորձ ՝ ըստ հետ կանչման ժամանակավոր չափանիշների. դուրս գալուց 18 օր հետո: Այսպիսով, այս ուսումնասիրությունը բաղկացած էր 5 փորձարարական խմբից (Control, EtOH_High և EtOH_Low), որոնք բաժանված էին 3 ենթախմբերի (2 ժամ և 18 օր դուրսբերում) (N = 6 ըստ ենթախմբի): Հետկանչման ժամանակահատվածում այս երկու ժամանակային նշանների ընտրությունը պայմանավորված էր FosB- ի և DeltaFosB- ի արտահայտման կինետիկ ասպեկտներով `դուրս գալուց 18 ժամ հետո (ինչպես բացատրվում է քննարկման բաժնում) և դուրս գալուց 5 օր հետո` հիմնվելով մեր լաբորատորիայի նախորդ ուսումնասիրությունների վրա: որը հետաքննել է որոշ նյարդաքիմիական առանձնահատկություններ ՝ կապված շարժման զգայունացման պարադիգմում դուրսբերման ժամանակահատվածի հետ ( Fallopa եւ այլն, 2012 և Escosteguy-Neto et al., 2012) Վերջապես, շարժիչային զգայունության և FosB / DeltaFosB արտահայտության միջև փոխկապակցվածություն կատարելու համար մենք հաշվարկեցինք յուրաքանչյուր կենդանու համար շարժիչային զգայունացման միավորը `բանաձևով. Միավոր = (Տեղաշարժը 21-րդ օրը - Տեղաշարժը 1-ին օրը) * 100 / Տեղաշարժը 1-ին օր

2.3. Իմունխիստոկիմիա

Համապատասխան հեռացման ժամանակահատվածից հետո կենդանիները խորապես անզգայացվեցին կոտեյլով, որը պարունակում էր ketamine (75 մգ / կգ, IP) և քսիլազին (25 մգ / կգ, IP): Եղջերաթաղանթի ռեֆլեքսի կորստից հետո դրանք ներծծվել են transcardially 100 մլ ֆոսֆատ բուֆերային լուծույթով 0.1 Մ [ֆոսֆատային բուֆերային աղով (PBS)], որին հաջորդում է 100 մլ 4% պարաֆորմալդեհիդ (PFA): Ուղեղները հանվել են պերֆուզիայից անմիջապես հետո, պահվել PFA- ում 24 ժամ և այնուհետև պահվել 30% սախարոզայի / PBS լուծույթի մեջ 48 ժամ: Սերիական պսակաձեւ հատվածները (30 մկմ) կտրվել են սառեցնող միկրոտոմի միջոցով և պահվել հակասառեցման լուծույթի ներսում, որն օգտագործվում է իմունոհիստոքիմիայի պրոցեդուրաներում ՝ ազատ լողացող գունավորմամբ:

Իմունոհիստոքիմիայի համար կատարվել է ավիդին – բիոտին – իմունոպերօքսիդազի պայմանական տեխնիկա: Բոլոր փորձարարական խմբերի ուղեղի հատվածները ներառվել են նույն գործողության մեջ ՝ 3 րոպե նախապես մշակվելով ջրածնի պերօքսիդազով (15%) և 30 րոպե լվանալ PBS– ով: Հետո բոլոր բաժինները ենթարկվել են 30 րոպեի ընթացքում PBS-BSA .5% -ով `ոչ սպեցիֆիկ ռեակցիաներից խուսափելու համար: Դրանից հետո հատվածները մեկ գիշերվա ընթացքում ինկուբացվել են առաջնային հակամարմինների նապաստակի հակատիպային FosB / DeltaFosB (1: 3,000; Sigma Aldrich, St Louis, MO, ԱՄՆ. No. կատ. AV32519) PBS-T լուծույթում (30 մլ PBS, 300 μl Triton X-100): Դրանից հետո հատվածները 2 ժամ տևեցին ինկուբացիա `բիոտինիլացված այծի հակահայկական նապաստակ IgG երկրորդական հակամարմինում (1: 600; Վեկտոր, Բերլինգամ, Կալիֆոռնիա, ԱՄՆ) սենյակային ջերմաստիճանում: Բաժիններն այնուհետև մշակվել են ավիդին – բիոտինային համալիրով (Vectastain ABC Standard փաթեթ; Վեկտոր, Բերլինգամ, Կալիֆոռնիա, ԱՄՆ) 90 րոպե և հանձնվել նիկելի ուժեղացված դիամինոբենզիդինային ռեակցիայի: Քայլերի միջև հատվածները ողողվում էին PBS- ով և գրգռվում պտտողի վրա: Բաժինները տեղադրվեցին ժելատինով պատված սլայդերի վրա, չորացրեցին, ջրազրկվեցին և ծածկվեցին:

Ստորգետնյա խոռոչի գոտիները վերլուծվել են նախաերկրային կորտեքսով, նախնական բջիջները (Cg1), նախատրամիկ կորտեքս (PrL) եւ infralimbic cortex (IL), շարժիչային ծածկույթ [առաջնային (M1) եւ երկրորդային (M2)], dorsal striatum (dorsomedial striatum DmS) եւ dorsolateral striatum (DlS), ventral striatum [միջուկային accumbens core (Acbco) եւ shell (Acbsh), ventral pallidum (VP)], հիպոկամպուս [Cornus Ammong 1 եւ 3 (CA1 եւ CA3 պիրամիդալային շերտը) (DT), ամիգդալա [բազոլարյան կորիզ (ԲԼԱ) եւ կենտրոնական կորիզ (CeA)], հիպոթալամուսի (ՎՄՀ) եւ վրացական ազդեցության տարածք [նախորդ (VTAA) եւ հետերային (VTAP) մասեր) Տեսնել Նկար 1) Nikon Eclipse E200 մանրադիտակը, որը միացված է համակարգչին, օգտագործվել է յուրաքանչյուր բաժնից 20 × խոշորացումով պատկերներ նկարելու համար: Պատկերները պահպանվել են որպես .tiff արխիվներ FosB / DeltaFosB իմունաակտիվության հետին վերլուծության համար: Իմունային ռեակտիվ բջիջները հաշվել են ImageJ ծրագրակազմի միջոցով (NIH Image, Bethesda, MD, ԱՄՆ): Ուղեղի շրջաններն ուրվագծվել են յուրաքանչյուր լուսանկարի վրա ՝ համաձայն «Stereotaxic Mouse Brain Atlas»Franklin եւ Paxinos, 1997) Քանի որ մանրադիտակի կողմից արված ֆոտոմանրագրությունները ներկայացնում են 2.5 10 XNUMX3 մկմ2 20 × խոշորացումով, FosB / DeltaFosB պիտակավորված բջիջների քանակական արտահայտումն արտահայտվում է որպես իմունոստեյնեցնող բջիջների միջին 2.5 × 10-ի համար3 մկմ2, EtOH խմբերում ստացված արժեքները նորմալացվել են Վերահսկիչ արժեքների և արտահայտվում են%: (Վերահսկում = 100%):

  •  
  • Նկար 1  

    Ուղեղի շրջանների սխեմատիկ ներկայացումը նմուշառված է: Մկների ուղեղի կորոնալ հատվածների սխեմատիկ նկարագրությունը, որոնք բնորոշվում են նմուշառված տարածքներից (հարմարեցված են Franklin եւ Paxinos, 1997) M1 = առաջնային շարժիչային ծառի կեղեվ; M2 = երկրորդային շարժիչային ծառի կեղեվ, CG1 = առջևի ցինգուլյար կեղեվ, PrL = նախալիմբային կեղև, IL = ինֆրալիմբային կեղեվ, Acbco = կորիզի միջուկ, Acbsh = կորիզի բշտիկային թաղանթ, VP = փորոքային պալիդում DmS = դորսոմեդիայի խոռոչ, DlS = կռնուղեղային շեղում, Cornus Ammonis 1, CA1 = Cornus Ammonis 3; DG = ատամնավոր գրուսի հատիկավոր շերտ, BlA = ամիգդալայի բազոլերալ կորիզ, CeA = ամիգդալայի կենտրոնական միջուկ, VmH = վենտրոմեդիական հիպոթալամիկական միջուկ, VTAA = փորոքային հատվածային տարածքի նախորդ մաս, VTAP = փորոքային հատվածային տարածքի հետին մասը:

2.4. Վիճակագրական վերլուծություն

Սկզբնապես, Shapiro – Wilk- ն օգտագործվում էր բոլոր փոփոխականների բաշխման նորմալությունը ստուգելու համար: Վարվելակերպի արդյունքները վերլուծվել են միակողմանի ANOVA- ի կողմից `կրկնակի չափման համար` որպես գործոն համարելով շարժիչային զգայունության 5 շրջաններ `հիմնական, 1-ին, 7-րդ, 14-րդ և 21-րդ օրեր: Հյուսվածքաբանական արդյունքները վերլուծվել են երկկողմանի ANOVA- ի միջոցով, հաշվի առնելով որպես գործոններ ՝ դուրսբերման ժամանակահատվածը (18 ժամ և 5 օր) և փորձարարական խումբը (Control, EtOH_High և EtOH_Low): Ոչ պարամետրական փոփոխականները ստանդարտացվել են Z միավորների մեջ `տվյալների ցրումը նվազեցնելու համար, և հետագայում կիրառվել են երկկողմանի ANOVA- ում, ինչպես նախկինում նկարագրված էր: Նյուման Կեուլս post-hoc- ը օգտագործվել է անհրաժեշտության դեպքում: Վերջապես, մենք ուսումնասիրեցինք FosB / DeltaFosB դրական բջիջների և շարժողական զգայունացման միավորների հնարավոր փոխհարաբերությունները: Այս փոխհարաբերությունները հաշվարկվել են միայն այն միջուկների համար, որտեղ փորձարարական խմբերի միջև վիճակագրական տարբերություններ են հայտնաբերվել: Քանի որ այդ տարբերությունները սահմանափակված էին հետկանչի 5 օրով (տե՛ս արդյունքների բաժինը), այս փոխկապակցվածություններում դիտարկված FosB / DeltaFosB արժեքները վերաբերում են հետկանչի այս հատուկ ժամանակահատվածին: Քանի որ այդ տարբերությունները սահմանափակված էին հետկանչի 5 օրով (տե՛ս արդյունքների բաժինը), FosB / DeltaFosB- ի արժեքները, որոնք դիտարկվել են այս փոխկապակցվածության մեջ, վերաբերում են հետ վերցնելու այս հատուկ ժամանակին: Նշանակության մակարդակը սահմանվել է 5% (p <0.05):

3. Արդյունքները

3.1. Locomotor sensitization

ANOVA- ն կրկնակի միջոցառումների համար խմբային գործոնում զգալի տարբերություններ է հայտնաբերել [F(2,32) = 68.33, p <0.001], արձանագրության ժամանակահատվածում [F(4,128) = 9.13, p <0.001], և նրանց միջև փոխազդեցությունը [F(8,128) = 13.34, p <0.001]: Բազալային շարժման մեջ տարբերություններ չկային, և EtOH- ի երկու խմբերն էլ շարժման նմանատիպ աճ էին ունեցել ձեռքբերման առաջին օրը, երբ համեմատվում էին Վերահսկիչ խմբի հետ (p <0.01): Այնուամենայնիվ, EtOH_High (բայց ոչ EtOH_Low) - ը ձեռք բերման փուլում առաջացրեց շարժողական գործունեության առաջանցիկ աճ (p <0.01, Վերահսկման և EtOH_Low խմբերի նկատմամբ, ձեռքբերման վերջին օրը. p <0.01 `ձեռքբերման առաջին օրվա ընթացքում իր շարժողական գործունեության հետ կապված) ( Նկար 2): Այս տվյալները հաստատեցին արդյունքները բնօրինակի ուսումնասիրությունից ( Masur եւ dos Santos, 1988) եւ մեր նախորդ զեկույցից ( Coelhoso et al., 2013) վարակված շվեյցարական մկների վարքագծային փոփոխականության վերաբերյալ, որոնք ներկայացվել են էթանոլի հարվածային հենաշարժիչի sensitization- ին:

  • Էթանոլը նպաստում է քրոնիկական շրջանում տեղաշարժի աստիճանական եւ կայուն աճի ...
  • Նկար 2  

    Էթանոլը խթանում է շարժման աստիճանական և ուժեղ աճը EtOH_High, բայց ոչ EtOH_Low խմբում քրոնիկական բուժման ընթացքում: Տվյալներն արտահայտվել են որպես միջին ± SEM N = 12 Control, EtOH_High և EtOH_Low խմբերի համար: ⁎⁎P <0.01 ՝ Վերահսկիչ խմբի նկատմամբ, նույն ժամանակահատվածում: ##P <0.01 ՝ EtOH_Low խմբի նկատմամբ, նույն ժամանակահատվածում: ‡‡P <0.01 բազալ շարժիչային գործունեության հետ կապված ՝ նույն խմբի ներսում: ¥¥P 0.01-ի վրա շարժողական գործունեության հետ կապված <1st ձեռքբերման օրը, նույն խմբում:

3.2. FosB / DeltaFosB արտահայտությունը

Նկարում պատկերված է FosB / DeltaFosB իմունոթերապեւտիկ տեսողական ֆոտոմիկոգրաֆիան Նկար 3 եւ նորմալացված արժեքները ցուցադրվում են Նկար 4, Նկար 5, Նկար 6 և Նկար 7. Երկկողմանի ANOVA- ն զգալի տարբերություններ է հայտնաբերել M1, M2, DmS, DLS, Acbco, Acbsh, VP եւ VTA (FosB / DeltaFosB- ի ոչ ֆունկցիոնալ արժեքները եւ բոլոր կառույցների վիճակագրական վերլուծությունները, տես Աղյուսակ Suppl1 և Աղյուսակ 1համապատասխանաբար): Այն կառույցներում, որտեղ վիճակագրական տարբերություններ կարող էին դիտվել, առկա էին FosB / DeltaFosB արտահայտության չորս տարբեր ձևեր: Առաջինում, որը դիտվել է M1 և M2- ում, FosB / DeltaFosB արտահայտության աճ է նկատվել էթանոլի դուրսբերման հինգերորդ օրը միայն EtOH_High խմբում (համեմատած EtOH_High արժեքների հետ ՝ 18 ժամ դուրս գալու, ինչպես նաև ՝ վերահսկողության և EtOH_Low խմբերը դուրսբերման 5 օրվա ընթացքում) (տե՛ս Նկար 4) VTAA- ում դիտարկված երկրորդ օրինակում FosB / DeltaFosB արտահայտությունն աճեց էթանոլի դուրսբերման 5 օրվա ընթացքում միայն EtOH_Low խմբում (համեմատած EtOH_LOW արժեքների հետ 18 ժամ դուրսբերման, ինչպես նաև Վերահսկիչ խմբի ՝ դուրսբերման 5 օրվա ընթացքում) ) (տեսնել Նկար 5) Երրորդ օրինակում, որը դիտվել է DmS, Acbco և Acbsh- ում, FosB / DeltaFosB արտահայտությունն աճել է էթանոլի դուրսբերման 5 օրվա ընթացքում և EtOH_High և EtOH_Low խմբերում (համեմատած դրանց համապատասխան արժեքների հետ 18 ժամ դուրսբերման հետ), սակայն միայն EtOH_Low խմբում տարբերվում էր Վերահսկիչ խմբից (տես Նկար 6) Վերջապես, DlS- ում և VP- ում նկատվող չորրորդ օրինակում, FosB / DeltaFosB արտահայտությունն աճեց էթանոլի դուրսբերման 5 օրվա ընթացքում և EtOH_High և EtOH_Low խմբերում (համեմատած դրանց համապատասխան արժեքների հետ քաշման 18 ժամվա ընթացքում), չնայած այս աճը վիճակագրորեն ավելի արտահայտիչ էր: EtOH_Low- ում, քան EtOH_High խմբում, և միայն EtOH_Low խումբը տարբերվում էր Control group- ից (տե՛ս Նկար 7).

  • FosB / DeltaFosB ի immunoreactivity տեսողական ֆոտոմիկգրաֆիա `× 20- ում ...
  • Նկար 3  

    FosB / DeltaFosB իմունային ռեակցիայի նկարագրական ֆոտոմիկոգրաֆիա `× 20-ի մեծացման դեպքում: DmS = dorsomedial striatum; DlS = կռնակի հատվածի խոռոչ; Acbco = nucleus accumbens միջուկ; Acbsh = nucleus accumbens shell; VP = փորոքային պալիդում; VTAa = փորոքային հատվածային տարածքի նախորդ մասը:

  •  
  • Նկար 4  

    FosB / DeltaFosB- ի արտահայտումը 18 ժամ և 5 օրվա ընթացքում դուրսբերման շրջանում EtOH_High և EtOH_Low խմբերում M1- ում և M2- ում: Տվյալներն արտահայտվել են որպես միջին ± SEM և ներկայացնում են նորմալացված տվյալները `համաձայն Վերահսկիչ խմբերի արժեքների (կետավոր գիծ` համարվում է 100%): Մոխրագույն ձողեր = 18 ժամ էթանոլի դուրսբերում; Սև ձողեր = էթանոլի դուրսբերման 5 օր: ** P <0.01 `իր համապատասխան Վերահսկիչ խմբի նկատմամբ; ## P <0.01, հետ կանչման 18 ժամվա ընթացքում դրա համապատասխան արժեքի հետ կապված: ‡‡ P <0.01, նույն ժամանակահատվածում EtOH_Low խմբի նկատմամբ: M1 = առաջնային շարժիչի ծառի կեղեվ, M2 = երկրորդային շարժիչային ծառի կեղեվ:

  • FOSB / DeltaFosB- ի արտահայտումը 18h- ​​ում եւ 5days- ի թողարկման ժամանակ EtOH_High ...
  • Նկար 5  

    FosB / DeltaFosB- ի արտահայտումը VTA- ի EtOH_High և EtOH_Low խմբերում դուրսբերման 18 ժամ և 5 օրվա ընթացքում: Տվյալներն արտահայտվել են որպես միջին ± SEM և ներկայացնում են նորմալացված տվյալները `համաձայն Վերահսկիչ խմբերի արժեքների (կետավոր գիծ` համարվում է 100%): Մոխրագույն ձողեր = 18 ժամ էթանոլի դուրսբերում; Սև ձողեր = էթանոլի դուրսբերման 5 օր: ** P <0.01 `իր համապատասխան Վերահսկիչ խմբի նկատմամբ; ## P <0.01, հետ կանչման 18 ժամվա ընթացքում դրա համապատասխան արժեքի համեմատ: VTA = փորոքային հատվածային տարածք:

  • FOSB / DeltaFosB- ի արտահայտումը 18h- ​​ում եւ 5days- ի թողարկման ժամանակ EtOH_High ...
  • Նկար 6  

    FosB / DeltaFosB- ի արտահայտումը 18 ժամ և 5 օրվա ընթացքում դուրսբերման ժամանակահատվածում EtOH_High և EtOH_Low խմբերում Acbco, Acbsh և DmS: Տվյալներն արտահայտվել են որպես միջին ± SEM և ներկայացնում են նորմալացված տվյալները `համաձայն Վերահսկիչ խմբերի արժեքների (կետավոր գիծ` համարվում է 100%): Մոխրագույն ձողեր = 18 ժամ էթանոլի դուրսբերում; Սև ձողեր = էթանոլի դուրսբերման 5 օր: * P <0.05 ** P <0.01, իր համապատասխան Վերահսկիչ խմբի նկատմամբ; ## P <0.01, հետ կանչման 18 ժամվա ընթացքում դրա համապատասխան արժեքի համեմատ: Acbco = nucleus accumbens միջուկ, Acbsh = nucleus accumbens shell, DmS = dorsomedial striatum:

  • FOSB / DeltaFosB- ի արտահայտումը 18h- ​​ում եւ 5days- ի թողարկման ժամանակ EtOH_High ...
  • Նկար 7  

    FosB / DeltaFosB- ի արտահայտումը 18 ժամ և 5 օրվա ընթացքում դուրսբերման ժամանակահատվածում EtOH_High և EtOH_Low խմբերում VP և DlS- ում: Տվյալներն արտահայտվել են որպես միջին ± SEM և ներկայացնում են նորմալացված տվյալները `համաձայն Վերահսկիչ խմբերի արժեքների (կետավոր գիծ` համարվում է 100%): Մոխրագույն ձողեր = 18 ժամ էթանոլի դուրսբերում; Սև ձողեր = էթանոլի դուրսբերման 5 օր: ** P <0.01 ՝ իր համապատասխան Վերահսկիչ խմբի նկատմամբ; # P <0.05 ## P <0.01, հետ կանչման 18 ժամվա ընթացքում դրա համապատասխան արժեքի համեմատ: ‡‡ P <0.01, նույն ժամանակահատվածում EtOH_Low խմբի նկատմամբ: VP = փորոքային պալիդում, DlS = դորսոլերալ գծիկ:

  • Աղյուսակ 1: 

    Երկկողմանի ANOVA- ում ստացված վիճակագրական պարամետրերը, FosB / DeltaFosB արտահայտության վերլուծության վերաբերյալ:

  • կորիզԺամկետի գործոնըԲուժման գործոնԺամանակ * Բուժում
    M1F(1,30) = 5.61, P = 0.025F(2,30) = 3.21, P = 0.055F(2,30) = 2.61, P = 0.089
    M2F(1,30) = 4.72, P = 0.038F(2,30) = 1.53, P = 0.233F(2,30) = 3.45, P = 0.045
    CG1- ըF(1,30) = 11.08 P = 0.002F(2,30) = 0.95, P = 0.398F(2,30) = 3.31, P = 0.050
    ՊրԼF(1,30) = 8.53, P = 0.007F(2,30) = 1.72, P = 0.197F(2,30) = 2.74, P = 0.081
    ILF(1,30) = 3.77, P = 0.062F(2,30) = 1.91, P = 0.167F(2,30) = 0.98, P = 0.389
    AcbcoF(1,30) = 22.23 P <0.001F(2,30) = 2.63, P = 0.089F(2,30) = 5.68, P = 0.008
    ԱկբշF(1,30) = 50.44 P <0.001F(2,30) = 4.27, P = 0.023F(2,30) = 13.18, P <0.000
    VPF(1,30) = 38.01 P <0.001F(2,30) = 5.07, P = 0.013F(2,30) = 10.93, P <0.000
    DmSF(1,30) = 28.89 P <0.001F(2,30) = 3.75, P = 0.035F(2,30) = 7.71, P = 0.002
    DlSF(1,30) = 13.58 P = 0.001F(2,30) = 5.41, P = 0.011F(2,30) = 4.72, P = 0.017
    CA1F(1,30) = 4.81, P = 0.036F(2,30) = 7.37, P = 0.002F(2,30) = 1.62, P = 0.215
    CA3F(1,30) = 14.92 P = 0.001F(2,30) = 2.46, P = 0.102F(2,30) = 3.81, P = 0.034
    DGF(1,30) = 0.59, P = 0.447F(2,30) = 1.49, P = 0.241F(2,30) = 0.24, P = 0.785
    BlAF(1,30) = 6.47, P = 0.016F(2,30) = 0.12, P = 0.884F(2,30) = 1.71, P = 0.199
    CeAF(1,30) = 2.55, P = 0.121F(2,30) = 0.22, P = 0.801F(2,30) = 0.71, P = 0.501
    VmH- ըF(1,30) = 6.51, P = 0.016F(2,30) = 0.71, P = 0.503F(2,30) = 1.75, P = 0.192
    ՎՏԱԱF(1,30) = 9.64, P = 0.004F(2,30) = 3.76, P = 0.035F(2,30) = 2.65, P = 0.087
    VTAP- ըF(1,30) = 6.05, P = 0.021F(2,30) = 1.79, P = 0.184F(2,30) = 1.64, P = 0.211
  • M1 = առաջնային շարժիչի ծառի կեղեվ; M2 = երկրորդային շարժիչային ծառի կեղեվ, CG1 = նախորդ ցինգուլյար կեղեվ, PrL = նախալիմբիկ ծառի կեղեվ, IL = ինֆրալիմբային ծառի կեղեվ, Acbco = կորիզի միջուկ, Acbsh = միջուկի ակումբենսի թաղանթ, VP = փորոքային պալիդում DmS = դորսոմեդիկ շեղում, DlS = կռնուղեղային շեղում, Cornus Ammonis 1, CA1 = Cornus Ammonis 3; DG = ատամնավոր գրուսի հատիկավոր շերտ, BlA = ամիգդալայի բազոլերալ միջուկ, CeA = ամիգդալայի կենտրոնական միջուկ, VmH = վենտրոմեդիական հիպոթալամիկական միջուկ, VTAA = փորոքային հատվածային տարածքի նախորդ մաս; VTAP = կենտրոնական հատվածային տարածքի հետին մասը:

Հաստատելու համար, որ FosB / DeltaFosB արտահայտության փոփոխությունները կապված են հեռացման հետ, եւ ոչ թե էթանոլի ազդեցության, մենք իրականացրել ենք կորոմատիա, շարժիչային հսկողության եւ FosB / DeltaFosB immunolabelled բջիջների միջեւ վերը նշված միջուկների վերացման 5 օրը (M1, M2, Acbco, Acbsh, DmS, DlS, VP, VTAA): Ինչպես ակնկալվում էր, այս միջուկներից որեւէ մեկը (M1 - r2 = 0.027862, p = 0.987156; M2 - r2 = 0.048538, p = 0.196646; Acbco - r2 = 0.001920, p = 0.799669; Ակբշ - r2 = 0.006743, p = 0.633991; DmS - r2 = 0.015880, p = 0.463960; DlS - r2 = 0.023991, p = 0.914182; ՎՊ - r2 = 0.002210, p = 0.785443; VTAA - r2 = 0.001482, p = 0.823630):

4. Քննարկում

Սույն հետազոտության արդյունքում արձանագրված արդյունքները ցույց են տալիս, որ էթանոլի դրսեւորած լոկոմոտիվի sensitization պարադիգմում նկատվող FosB / DeltaFosB- ի աճող արտահայտությունը, ամենայն հավանականությամբ, կախված է ոչ թե քրոնիկ թմրամիջոցների քրոնիկ հիվանդության առաջացման հետ: Այնուամենայնիվ, զարգացման լոկոմոտիվի սենսիտիզացման վարքագծային փոփոխականությունը ուղեկցվում էր FosB / DeltaFosB արտահայտության հստակ նախշերով `դուրս գալու ժամանակ: Շարժիչային ծառի կեղեւի դերը, վրացական ազդեցության տարածությունը եւ ստիատումը, տեղաշարժման սենսիտիզացիայի պարադիգմը ձեռք բերելու եւ արտահայտելու համար, լավ հաստատված է (Vanderschuren եւ Pierce, 2010): Բացի այդ, mesolimbic ուղու դերակատարումը հեռացման շրջանի կենտրոնական նյարդաբատաբանական առանձնահատկություններից մեկն է, ընդլայնված amygdala (Koob եւ Le Moal, 2005 և Koob եւ Le Moal, 2008): Այնուամենայնիվ, միայն մի քանի ուսումնասիրություններ ուսումնասիրել են locomotor sensitization paradigm- ի դուրս գալու ժամանակաշրջանը: Մեր արդյունքները հայտնաբերեցին FosB / DeltaFosB- ի արտահայտության մեջ հետաքրքիր փոփոխություններ ավտոմոբիլային ծղոտե ներքնակում, վրացական ներշնչող տարածքում եւ այս ժամանակահատվածում ստիատում:

FosB cDNA- ն կոդավորում է 33, 35 և 37 կԴա սպիտակուցների արտահայտությունը: Սուր գրգռիչների ազդեցությունը հանգեցնում է ուժեղ 33- և դիսկրետ 35- և 37- kDa Fos սպիտակուցի ինդուկցիայի: Որպես արդյունք, սուր ակտիվացման ներքո գերակշռող FosB արտահայտությունը կապված է 33 կԴա-ի հետ (McClung et al., 2004 և Nestler, 2008) Այս սպիտակուցների միջև կա ևս մեկ ուշագրավ տարբերություն. Միայն 35–37 կԴա սպիտակուցներն են բարձր կայուն իզոֆորմներ: Այս բարձր կայունության պատճառով FosB- ի այս կարճացված ձևերը, որոնք կոչվում են նաև DeltaFosB, կուտակվում են ուղեղում և խիստ արտահայտվում են ի պատասխան քրոնիկական խթանների, ինչպիսիք են հոգեմետ դեղերի բուժումը, քրոնիկ էլեկտրաքաղցկեղային նոպաները և սթրեսը (Kelz եւ Nestler, 2000, Nestler եւ այլն, 2001 և McClung et al., 2004): Արդյունքում DeltaFosB- ն դիտարկվել է որպես կայուն մոլեկուլային փոխարկիչ, երկարատեւ նյարդային եւ վարքային պլաստիկության ձեւերի միջնորդության համար: Հետաքրքիր է, որ FosB- ի եւ DeltaFosB- ի տարբեր ձեւերով արտահայտված մկնիկի գծերը օգտագործող էլեգանտ ուսումնասիրությունը ցույց է տվել, որ FosB- ը կարեւոր է սթրեսների հանդուրժողականության բարձրացման համար եւ նաեւ չեզոքացնում է հոգեբանական խթանման շարժիչային շարժիչի sensitization- ի եւ DeltaFosB- ի կուտակման միջեւ շերտումՕնիշի եւ այլք, 2011) Հետեւաբար, երկու սպիտակուցներն էլ կարող են կարևոր դեր ունենալ սույն ուսումնասիրության մեջ օգտագործված փորձարարական պրոտոկոլում: Հատկանշական է, որ օգտագործված FosB հակամարմինը ճանաչում է ինչպես FosB, այնպես էլ DeltaFosB: Քանի որ FosB- ը սուր խթանից հետո 6 ժամվա ընթացքում նվազում է ելակետային մակարդակի (Nestler եւ այլն, 2001) և DeltaFosB- ը կուտակվում են գրգռիչների կրկնվող ազդեցությունից հետո, մենք որոշեցինք զոհաբերել կենդանիներին ձեռքբերման փուլից 18 ժամ հետո `խուսափելու FosB արտահայտության նկատմամբ էթանոլի բուժման հնարավոր կողմնակալություններից: Այնուամենայնիվ, տեխնիկապես ճշգրիտ լինելու համար, մենք սույն ուսումնասիրության մեջ կանդրադառնանք որպես FosB / DeltaFosB արտահայտություն: Կարևոր է նշել, որ այս ռազմավարությունն օգտագործվել է այլ ուսումնասիրություններում, ներառյալ նրանցում, որոնք օգտագործել են այստեղ նկարագրված նույն առաջնային հակամարմինը (Conversi եւ այլն, 2008, Li եւ այլն, 2010, Flak et al., 2012 և Գարսիա-Պերես եւ այլք, 2012): Արդյունքում, բացի այդ փորձարարական սահմանափակումներից, մենք կքննարկենք մեր արդյունքները, հաշվի առնելով DeltaFosB- ի դերը նեյրոնային պլաստիկության մեջ:

Հստակորեն հաստատված է, որ թմրանյութերի քրոնիկ ազդեցությունը ավելացնում է FosB / DeltaFosB արտահայտությունը ուղեղի մի շարք շրջաններումNestler եւ այլն, 2001 և Perrotti եւ այլոք, 2008) Հետաքրքիր է, որ սույն ուսումնասիրության ընթացքում ոչ էթանոլի զգայունացված, ոչ էլ էթանոլով չզգայուն մկները չեն տարբերվում քրոնիկ աղակալված մկներից FosB / DeltaFosB արտահայտության վերաբերյալ ձեռքբերման փուլից 18 ժամ անց: Ավելին, զգալի փոխկապակցվածություն չի եղել FosB / DeltaFosB արտահայտության և շարժողական զգայունացման միավորների միջև: Այս տարաձայնությունը գոնե մասամբ կարելի է բացատրել փորձնական արձանագրության մեջ հայտնաբերված տարբերություններով: Օրինակ ՝ հաշվի առնելով էթանոլի ազդեցությունը, երկու ուսումնասիրություններում երկու շիշ ազատ ընտրության պարադիգմը օգտագործվել է խմելու 15 ընդհատվող նստաշրջաններում (Li եւ այլն, 2010) կամ սննդային ամբողջական հեղուկ դիետա, որն ավտոմատ կերպով իրականացվում է 17 օրվա ընթացքում (երբ կենդանիները սպառում են էթանոլ 8-ից 12 գ / կգ / օր դոզաներում)Perrotti եւ այլոք, 2008): Մեկ այլ ուսումնասիրության մեջ, չնայած հեղինակները վերաբերում են քրոնիկ բուժմանը, արձանագրությունը բաղկացած է միայն 4 էթանոլի ազդեցություններից (Ռիաբինի եւ Վանգ, 1998) Այսպիսով, այլ տեղերում օգտագործված արձանագրությունները բոլորովին տարբերվում են այստեղ օգտագործվածից, որը բաղկացած էր 21 օրվա բուժումից, երբ փորձարարի կողմից օրական էթանոլի ներարկումներ էին իրականացվում: Չնայած այս տարբերություններին, կան մի քանի ուսումնասիրություններ, որոնք ներառում են ներզերծային ներարկումներ, որոնք հայտնում են FosB / DeltaFosB արտահայտության աճի մասին ՝ հոգեսթիմուլյատորների կողմից առաջացրած շարժիչային զգայունության արձանագրություններից հետո (Brenha եւ Stellar, 2006, Conversi եւ այլն, 2008 և Vialou et al., 2012) եւ օփիոիդների (Kaplan et al., 2011): Այնուամենայնիվ, այդ ուսումնասիրություններում լոկոմոտիվների զգայունացման արձանագրությունները ներառում են ավելի քիչ, քան 21- ի դեղերի ազդեցությունները, եւ դրանցից մի քանիսը թմրադեղեր են իրականացվում միջամտորեն: Ի հակադրություն, մեր արձանագրությունը օգտագործեց նույն բուժումը, որը նկարագրված է նախորդ ուսումնասիրություններում, որոնք ներառում են 21 ամենօրյա էթանոլի ներարկումներMasur եւ dos Santos, 1988, Souza-Formigoni et al., 1999, Քվադրոոս եւ այլք, 2002a, Քվադրոոս եւ այլք, 2002b, Աբրահա եւ այլն, 2011 և Աբրահա եւ այլն, 2012): Կա ապացույց, որ չնայած քրոնիկ կոկաինների վարչակազմը նպաստում է DeltaFosB արտահայտության կուտակումին միջուկի սենսորների մեջ, այն նաեւ նպաստում է DeltaFosB mRNA ինդուկցիայի հանդեպ հանդուրժողականության եւ ventral եւ dorsal striatum (Larson et al., 2010): Հետեւաբար, մենք ենթադրում էինք, որ մեր փորձնական խմբերի միջեւ ձեռքբերման փուլում առկա տարբերությունների բացակայությունը կարող է պայմանավորված լինել FosB / DeltaFosB- ի ինդուկցիայի նկատմամբ հանդուրժողականությունից, քանի որ ներկա պրոտոկոլում եղել է ձեռքբերման ավելի մեծ փուլ `համեմատած հոգեբանական եւ օփիոիդների համար օգտագործվող ժամանակաշրջանների հետ այլ ուսումնասիրություններում:

Ուսումնասիրությունները, օգտագործելով նոկաուտի եւ տրանսգենային մկների, ցույց են տվել, որ FosB- ի մուտանտի մկները ուժեղացրել են վարքագծային արձագանքը կոկաինին, ինչպես, օրինակ, խթանիչ շարժիչի ազդեցությունները եւ պայմանավորված տեղը նախապատվությունը: Բացի այդ, այս մուտանտի մկների մեջ բացակայում է նաեւ բազալային եւ կոկաինը-իջեցնող DeltaFosB- ի արտահայտությունը (Hiroi et al., 1997): Ընդհակառակը, DeltaFosB- ի ինդուկտիվ գերբնակվածությամբ տրանսգենային մկները ցույց են տալիս, որ կոկաինը եւ մորֆինըՄուսամբար եւ այլք, 2012): Այս արդյունքները ցույց տվեցին DeltaFosB- ի եւ պարգեւատրման գործընթացի միջեւ սերտ կապի անմիջական վկայությունը: Բացի կրկնակի թմրանյութերի ազդեցություններից, քրոնիկ սթրեսը նույնպես մեծացնում է DeltaFosB արտահայտությունը corticolimbic սխեմաների մեջ (Perrotti եւ այլոք, 2004): Հետաքրքիր է, որ DeltaFosB- ին գերազանցող ճարպակալման մկաններն ավելի քիչ զգայուն են kappa-opioid agonist- ի դեպրեսիվ ազդեցությունները, որոնք հայտնի են դիսֆորիային եւ սթրես-նման ազդեցությունները կրծողներիՄուսամբար եւ այլք, 2012) Այսպիսով, բացի պարգևատրման գործընթացից, DeltaFosB- ը նաև առանցքային դեր է խաղում երևույթների հուզական ասպեկտներում: Այս սցենարում հրաժարումը կարող է նաև խթանել FosB / DeltaFosB արտահայտությունը, քանի որ սթրեսը թմրանյութերի դուրսբերման հիմնական բաղադրիչն է: Այս հեռանկարը համապատասխանում է մեր արդյունքներին, քանի որ FosB / DeltaFosB արտահայտության և զգայունացման միավորների միջև որևէ փոխկապակցվածություն չկար, և ավելին, FosB / DeltaFosB արտահայտության աճը նկատվեց հետ վերցնելու միայն հինգերորդ օրը:

Հետաքրքիր է, որ որոշ կառույցներում FOSB / DeltaFosB- ի աճը նկատվել է EtOH_High- ի եւ EtOH_Low- ի խմբում, թեեւ ավելի շատ արտահայտված է նախկինում, ենթադրելով, որ այդ աճը կարող է ունենալ տարբեր ֆունկցիոնալ հետեւանքներ, ըստ իրենց ինտենսիվության: Այս վարկածը կարելի է բացատրել FosB / DeltaFosB- ի մի քանի ֆունկցիոնալ դերերով: Օրինակ, կոկաինին ենթարկված առնետները DeltaFosB- ի արտանետումները բարձրացրեցին ձուլման ժամանակահատվածում ճառագայթային ականջակալներում, ազդեցությունը դրականորեն կապված է կոկաինի նախապատվության հետ, բայց բացասականորեն նորովի նախապատվության հետ: Բացի այդ, դուրսբերման ընթացքում սթրեսը մեծացնում է հոգեբանական խթանիչների վարքային արձագանքը `ավելացնելու DeltaFosB արտահայտությունը corticolimbic neurons (Nikulina et al., 2012): Այսպիսով, DeltaFosB- ը կարող էր կանխատեսել հեդոնային վերամշակման դիսեգրումը, որը տեղի է ունենում ձգձգվող դուրսբերման ընթացքում (Marttila եւ այլն, 2007): Մյուս կողմից, այնպես էլ սթրեսային եւ հակադեպրեսանտային արձագանքների երկարակեցությունը կապված է բարձրակարգ DeltaFosB արտահայտության հետ striatum (Vialou et al., 2010): Հետեւաբար, մենք ենթադրում ենք, որ EtOH_High- ի ստերիմատում ավելացված FosB / DeltaFosB- ը կարող է բարելավվել էթանոլի պարգեւիչ ազդեցությունը, որը բերում է ավելի մեծ զգայունության հետագա դեղերի ազդեցությանը: Մյուս կողմից, EtOH_Low խմբի մեջ տեսած FosB / DeltaFosB- ի ավելի ինտենսիվ աճը կարող էր նվազեցնել զգայունությունը դիսֆորիայի եւ սթրեսային ազդեցությունների նկատմամբ, նվազեցնելով հետագա թմրանյութերի ազդեցության բացասական ուժեղացման ազդեցությունները եւ, որպես հետեւանք, բացատրելով ավելի բարձր դիմադրություն խումբը: Հետաքրքիր է, որ այս պարադոքսը ունեցել է նյարդաքիմիական հիմք: Օրինակ, միջնադարյան ճառագայթում FosB- ին գերազանցող ճառագայթային մկները ճառագայթային accumbens- ի GABAergic նեյրոնները բարձրացրել են ինչպես mu- եւ kappa- opioid ընկալիչներիSim-Selley et al., 2011), եւ այդ ընկալիչները համապատասխանաբար ավելացնում եւ խանգարում են mesolimbic տոնուսը (Manzanares et al., 1991 և Devine et al., 1993): Բացի այդ, բջջային տիպի արտահայտությունը կարող է նաեւ կտրուկ փոխել աճող FosB / DeltaFosB- ի ֆունկցիոնալ հետեւանքները: DeltaFosB- ի D1- ում կամ D2- ում հայտնաբերված նեյրոնները, որոնք DeltaFosB- ը գերազանցում են DeltaFosB- ը, ցույց են տալիս, որ DeltaFosB- ը D1- (բայց ոչ D2-) նեյրոնները խթանում է կոկաինի վարքային պատասխաններըGrueter et al., 2013).

Հետաքրքրական է, որ շարժիչային ծառի կեղևի վերաբերյալ FosB / DeltaFosB արտահայտության աճ կար միայն EtOH_High խմբում, և այն սահմանափակվեց դուրսբերման 5-րդ օրը: Հետ կանչման 18 ժամվա ընթացքում ավելացման բացակայությունը կարելի է բացատրել այս տարածաշրջանում FosB / DeltaFosB արտահայտության մեջ հնարավոր հանդուրժողականության մեխանիզմի միջոցով էթանոլի քրոնիկ ազդեցությունից հետո: Ավելին, մեր արդյունքները ենթադրում են, որ դուրսբերման ժամանակահատվածում շարժիչի կեղևում կան ակտիվ նյարդաքիմիական փոփոխություններ, չնայած այն բանին, որ այս ժամանակահատվածում կենդանիները չեն շահարկվել: Սա հետաքրքիր է, քանի որ այս պլաստիկությունը կարող է դեր ունենալ, գոնե մասամբ, շարժիչային զգայունության պահպանման գործում: Չնայած մի քանի օրվա հեռացումից հետո կայուն հիպերլոկումը այստեղ չի ուսումնասիրվել, կան մի քանի ուսումնասիրություններ, ներառյալ նախորդները մեր լաբորատորիայից, որոնք ցույց են տալիս, որ զգայունացված մկները (բայց ոչ զգայունացված) ուժեղացրել են տեղաշարժը, երբ տվյալ դուրսբերման ժամանակահատվածից հետո էթանոլի հետ վիճարկելը (Masur եւ dos Santos, 1988, Souza-Formigoni et al., 1999, Քվադրոոս եւ այլք, 2002a, Քվադրոոս եւ այլք, 2002b, Աբրահա եւ այլն, 2011, Աբրահա եւ այլն, 2012, Fallopa եւ այլն, 2012 և Coelhoso et al., 2013).

Ի վերջո, ուշագրավ է, որ միայն EtOH_Low խումբը ցուցադրեց աճող FosB / DeltaFosB արտահայտությունը ventral tegmental տարածքի նախորդ (բայց ոչ ետեւի) մասում: Այս մասերը ունեն հստակ կանխատեսումներ եւ նեյրոքիմիական պրոֆիլներ, եւ նրանց մասնակցության մրցույթի գործընթացը կախված է մի քանի գործոններից (Ikemoto, 2007) Օրինակ ՝ առնետների էթանոլի ինքնակազմակերպումը կապված է հետին մասի հետ, բայց ոչ փորոքային հատվածային տարածքի փորոքային մասի հետ (Ռոդդ-Հենրիքսի եւ այլք, 2000 և Rodd et al., 2004): Բացի այդ, էնդոկմանաբոոիդային համակարգը, ինչպես նաեւ GABA-A, dopaminergic D1-D3- ը եւ serotoninergic 5HT3 ընկալիչները կարեւոր դեր են խաղում էթանոլի փնտրման վարքագծումLinsenbardt եւ Boehm, 2009, Rodd et al., 2010, Մելոն եւ Բոեմ, 2011b և Hauser et al., 2011): Այնուամենայնիվ, GABA-B- ը վրացական tegmental- ի նախնական մասում կարեւոր է պարգեւատրման առումով (Moore եւ Boehm, 2009) եւ խթանիչ շարժիչի ազդեցությունները (Boehm et al., 2002) էթանոլի: Բացի այդ, նախնական մասում քոլիներգիկ նիկոտինային ընկալիչները ներգրավված են էթանոլի կողմից առաջ բերված բարձրորակ դոպամինային մակարդակներում (Էրիկոնոն եւ այլք, 2008): Հետեւաբար, անկախ այդ մասերի որոշակի պրոֆիլից, հնարավոր է, որ նախորդ բաժնում EtOH_Low խմբի մեջ փոփոխությունները կարող են կապված լինել հատուցող գործընթացի հետ: Քրոնիկ կոկաինը, սակայն ոչ քրոնիկ մորֆին կամ քրոնիկական սթրեսը մեծացնում է DeltaFosB- ն վենդրալցիկային շրջանում, մասնավորապես գամմա-ամինոբուրիկ թթվի (GABA) բջիջների բնակչության (Perrotti եւ այլոք, 2005): Այս փաստը կարող էր բացատրել FOSB- ի / DeltaFosB- ի նորմալ մակարդակները, երբ հայտնաբերվել է EtOH- ի մկների վրացական tegmental հատվածում, անկախ տվյալ ժամանակահատվածում բարձր սթրեսային փորձից: Բացի այդ, այս տվյալները հաստատում են առնվազն մասամբ այն վարկածը, որ FOB / DeltaFosB արտահայտության աճը EtOH_Low- ում դուրս գալու ընթացքում կարող է բնութագրվել որպես հարմարվողական պատասխան:

Անհատական ​​տարբերությունները, որոնք նկատվում են հանգստի օգտագործումից թմրամոլության անցնելու ժամանակ, ուշագրավ են (Flagel եւ այլն, 2009, Ջորջ եւ Կոբ, 2010 և Swendsen եւ Le Moal, 2011): Արդյունքում, անհրաժեշտ է ուսումնասիրել անհատական ​​փոփոխականության հետ կապված նյարդաբիոլոգիական առանձնահատկությունները: Վարքային սենսիտիզացիա է, որը սովորաբար օգտագործվում է թմրամիջոցների նյարդաբույսերի նյարդաբժշկական առանձնահատկությունների ուսումնասիրման համար: Այս մոդելի հիմքը այն է, որ դեղերի սուբյեկտիվ ազդեցությունները կրկնապատկվում են: Երբ ձեռք է բերվել լոկոմոտիվի սենսիտիզացիան երկարատեւ է եւ գտնվում է ուղղակի ժամանակային կապում մազոլիմիկ ուղիների մորֆոլոգիական եւ նյարդային քիմիական փոփոխությունների եւ մի շարք էնցեֆալիկ միջուկների հետ, կապված հուզական եւ շարժիչ վարքագծի հետ (Robinson եւ Kolb, 1999 և Vanderschuren եւ Pierce, 2010): Առաջնորդվելով ռահվիրա ուսումնասիրություն Masur եւ dos Santos (1988) ցույց տվեց, որ գոյություն ունի վարակված շվեյցարական մկների մեծ վարքային փոփոխականություն, կապված էթանոլի դրսեւորումների հետ: Այդ ժամանակից ի վեր այլ հետազոտություններ ցույց են տվել նյարդային քիմիական առանձնահատկությունների եւ վարքագծային փոփոխականության միջեւ կարեւոր հարաբերակցություն, հիմնականում կապված դոպամիներգիկ (Աբրահա եւ այլն, 2011, Աբրահա եւ այլն, 2012 և Souza-Formigoni et al., 1999) եւ glutamatergic համակարգերը (Քվադրոոս եւ այլք, 2002a և Քվադրոոս եւ այլք, 2002b): Բացի այդ, մեր լաբորատորիայից նախորդ ուսումնասիրությունը, օգտագործելով էթանոլի վրա հիմնված հենաշարժիչի սենսիտիզացիայի պարադիգմը, ցույց տվեցին, որ զգայուն (բայց ոչ ստանդարտացված) մկները դուրս եկած ժամանակահատվածում ներկայացրել են քնագնինոիդային ընդունիչի տեսակի 1 (CB1R)Coelhoso et al., 2013): Այստեղ մենք հայտնաբերեցինք FOB / DeltaFosB արտահայտության տարբեր ձեւերը, EtOH_High- ի եւ EtOH_Low խմբերի միջեւ:

Ամփոփելու համար, էթանոլի ինդուկտիվացված լոկոմոտուցիոն սենսիտիզացման ձեռքբերման փուլում դիտարկվող վարքային փոփոխականությունը ուղեկցվում է հստակ նեյրոնային պլաստիկության հետ, դուրս գալու ժամանակահատվածում: Հետաքրքիր է, որ մեր արդյունքները ցույց են տալիս, որ զգայուն եւ ոչ զգայուն մկների հայտնաբերված FosB / DeltaFosB արտահայտության տարբեր ձեւերը ավելի շատ կապված են հեռացման ժամանակահատվածից, քան թմրանյութերի քրոնիկ ազդեցության հետ, հավանաբար թմրամիջոցների ներթափանցված FosB / DeltaFosB տեքստերի հանդուրժողականության պատճառով:

Ստորեւ բերված է սույն հոդվածի հետ կապված լրացուցիչ տվյալներ:

Acknowledgments

Գնորդի եւ CCC- ի կողմից CAPES- ից եւ FAPESP- ից ստացել է համապատասխան վարպետություն: CTC, LEM, DXS եւ JGSJ- ը շնորհվում են FAPESP- ը և CNPq.

Սայլակ

  •  
  • Համապատասխան հեղինակ ՝ Ռուա Սեզարիո Մոտա կրտսեր, 61, 12 տարեկան, Սան Պաուլո, SP 01221-020, Բրազիլիա: Հեռ. / Ֆաքս ՝ + 55 11 33312008:
  • 1
  • Այս հեղինակները հավասարապես մասնակցեցին ներկա ուսումնասիրությանը:

Հեղինակային իրավունքի © 2013 Elsevier Inc.