Greining á sameindabreytingum í metamfetamínvirkum Fos-tjáð taugafrumum úr einni rottum dorsalstriatum með flúrljómandi virku frumuflokkun (FACS) (2013)

J Neurochem. 2014 Jan; 128 (1): 173-85. doi: 10.1111 / jnc.12381. Epub 2013 Ágúst 21.

Liu QR1, Rubio FJ, Bossert JM, Marchant NJ, Fanous S, Hou X, Shaham Y, Vona að BT.

Abstract

Metamfetamín og önnur lyf virkja lítinn hluta allra taugafrumna í heilanum. Við þróuðum áður flúrljómunarvirkja frumu flokkun (FACS) byggða aðferð til að einkenna sameindabreytingar sem valdar voru sértækt í virkjuðum taugafrumum sem tjá taugakerfismerkið Fos. Samt sem áður, þessi aðferð krefst þess að safna saman sýnum frá mörgum rottum. Við lýsum nú breyttri FACS-byggðri aðferð til að einkenna sameindabreytingar í Fos-tjáandi ristiltaugafrumum úr ryggjum frá einni rottu með því að nota margbrotna forstækkunarstefnu.

Fos og NeuN (taugafræðileg merki) ónæmisheilbrigðasjúkdómur benda til þess að 5-6% af ristiltaugafrumum voru virkjaðar 90 mín eftir bráðar metamfetamínsprautur (5 mg / kg, ip) en minna en 0.5% taugafrumna voru virkjaðar með saltvatnssprautum.

Við notuðum FACS til að aðgreina NeuN-merktar taugafrumur í Fos-jákvæðar og Fos-neikvæðar taugafrumur og metum mRNA tjáningu með því að nota RT-qPCR frá allt að fimm Fos-jákvæðum taugafrumum. Metamfetamín olli 3-20-faldri aukningu á fyrstu snemma genum boga, homer-2, c-fos, fosB og ísóformum þess (ΔfosB og skáldsaga isoform ΔfosB-2) í Fos-jákvæðum en ekki Fos-neikvæðum taugafrumum. Strax snemma framkalla mRNA gena var 10-falt lægri eða fjarverandi þegar það var metið í ósönnuðum sýnum úr stökum dorsal striatum einsleitnum. Breytt aðferð okkar gerir það mögulegt að rannsaka einstaka sameindabreytingar í taugafrumum sem eru virkjaðar af lyfjum eða lyfjatengdum vísbendingum í flóknum fíkn líkönum.

Metamfetamín og önnur lyf virkja lítinn hluta allra taugafrumna í heilanum. Við greinum hér frá bættri aðferð til að einkenna sameindabreytingar sem valda sértækar í virkjuðum taugafrumum sem tjá taugavirkjunarmerkið Fos. Við notuðum FACS ásamt markvissri PCR formögnun til að meta bráða metamfetamín af völdum genatjáningar frá eins fáum og 5 Fos-tjáandi taugafrumum frá einum rottum í ryggisstratum. Metamfetamín olli 3-20-faldri aukningu strax snemma gena (IEGs) í Fos-jákvæðum en ekki Fos-neikvæðum taugafrumum. Markviss forstækkun PCR gerir það mögulegt að rannsaka einstaka sameindabreytingar í taugafrumum sem eru virkjaðar af lyfjum eða lyfjatengdum vísbendingum í flóknum líköum um fíkn.

Útgefið 2013. Þessi grein er bandarísk ríkisstjórn og er í almenningi í Bandaríkjunum.