Áhrif ΔFosB overexpression á ópíóíð- og kannabínóíðviðtaka-miðlaðri merkingu í kjarnanum (2011)

Neuropharmacology. 2011 Dec;61(8):1470-6. doi: 10.1016/j.neuropharm.2011.08.046.

Sim-Selley LJ, Þingmaður Cassidy, Sparta A, Zachariou V, Nestler EJ, Selley DE.

Heimild

Lyfjafræðideild og eiturefnafræði og Institute for Drug and Alcohol Studies, Virginia Commonwealth University School of Medicine, Richmond, VA 23298, Bandaríkjunum.

Abstract

Stöðugur umritunarstuðull ΔFosB er örvaður í nucleus accumbens (NAc) með langvarandi útsetningu fyrir nokkrum misnotkun lyfja og erfðabreytt tjáning ofFosB í striatum eykur gefandi eiginleika morfíns og kókains.e. Hins vegar er vélrænni grundvöllur þessara athugana óskiljanlega skilinn. Við notuðum bitransgenic músalíkan með örvandi tjáningu af osFosB í dópamín D (1) viðtaka / dynorphin sem innihalda striatal taugafrumur til að ákvarða áhrif expressionFosB tjáningar á ópíóíð og kannabínóíðviðtaka merki í NAc. Niðurstöður sýndu að mu ópíóíð-miðluð G-próteinvirkni og hömlun á adenýlýlsýklasa voru aukin í NAc músanna sem tjáðu ΔFosB. Á sama hátt var kappa ópíóíð hömlun á adenýlyl sýklasa aukin í ΔFosB tjáðu músunum. Aftur á móti voru kannabínóíðviðtaka miðluð merki ekki frábrugðin milli músa sem ofþjáðu ΔFosB og samanburðarmúsa. Tþessar niðurstöður benda til þess að ópíóíð og kannabínóíð viðtaka merki séu mismunandi mótuð með tjáningu ΔFosB, og benda til að ΔFosB tjáning gæti valdið nokkrum af áhrifum þess með aukinni mu og kappa ópíóíð viðtaka merki í NAc.

Leitarorð: G-prótein, adenylyl cyclase, striatum
Fara til:

1. Inngangur

Ópíóíðviðtökur og kannabínóíð CB1 viðtaka (CB1R) eru taugalíffræðileg markmið fyrir tvo víða notaða lyfjaflokka sem innihalda morfín, heróín og lyfseðilsskyld ópíóíð og marijúana (Δ9-tetrahydrocannabinol (THC), í sömu röð. Bráð áhrif ópíóíða og kannabisefna eru miðluð af G-próteinbundnum viðtaka sem virkjar aðallega Gég / o prótein og framleiðir svörun frá effector downstream eins og hindrun á adenylyl cyclase (Childers, 1991, Childers, o.fl., 1992, Howlett, o.fl., 2002). Vélknúin, minnisskerðandi og geðrofvirk áhrif Δ9-THC eru framleidd af CB1R (Huestis, o.fl., 2001, Zimmer o.fl., 1999), sem dreifast víða í heila, með mikið magn í basli ganglia, hippocampus og cerebellum (Herkenham, o.fl., 1991). Verkjastillandi og gefandi áhrif flestra klínískt mikilvægra og misnotaðra ópíóíðlyfja eru aðallega miðluð af mu ópíóíðviðtökum (MOR) (Matthes, o.fl., 1996), sem eru auðgaðir í útlimakerfinu og heilaæxlinum (Mansour, o.fl., 1994). Mesolimbic kerfið, sem samanstendur af dópamínvirkum spá frá ventral tegmental area (VTA) til nucleus accumbens (NAc), gegnir mikilvægu hlutverki í gefandi áhrifum ópíóíða og kannabisefna (Bozarth og vitur, 1984, Vaccarino o.fl., 1985, Zangen, o.fl., 2006), svo og önnur misnotkun lyfja (Koob og Volkow, 2010). Ennfremur, innræn ópíóíð og kannabínóíð kerfi taka þátt í gefandi áhrifum margra flokka geðlyfja (Maldonado, o.fl., 2006, Trigo, o.fl., 2010). Þess vegna er mikilvægt að skýra frá því hvaða ópíóíð og CB er1R merkja er stjórnað í NAc.

Megin spurning á vímuefnavanda hefur verið að bera kennsl á prótein sem miðla breytingunni frá bráðum til langtímaáhrifa geðlyfja. AP-1 umritunarstuðull ΔFosB er sérstaklega áhugaverður vegna þess að það er stöðug stytt sundurafbrigði afurðar fosb gen sem safnast upp við endurtekna váhrif á misnotkun lyfja eða náttúruleg umbun (McClung, o.fl., 2004, Nestler, 2008, Nestler, o.fl., 1999). Við höfum komist að því að ΔFosB er framkallað í heila eftir endurtekna útsetningu fyrir morfíni, Δ9-THC, kókaín eða etanól, þar sem hvert lyf framleiðir einstakt svæðismynstur ΔFosB tjáningar (Perrotti, o.fl., 2008). Samkvæm niðurstaða á milli lyfja var sú að osFosB var mjög framkallað í striatum, þar sem öll fjögur lyfin örvuðu ΔFosB í NAc kjarna og öll nema Δ9-THC olli marktækri tjáningu í NAc skelinni og caudate-putamen.

Lyfjafræðilegar rannsóknir sýndu að samtímis gjöf dópamíns D1 viðtaka (D1R) mótlyf SCH 23390 hindraði ctionFosB örvun í NAc og caudate-putamen í kjölfar gjafar kókaíns eða morfíns sem gefið var til kynna, sem bendir til hugsanlegrar mikilvægis D1R-tjáandi taugafrumur (Muller og Unterwald, 2005, Nye, o.fl., 1995). Áhrif ΔFosB örvunar á lyfjamiðaða hegðun hafa verið könnuð með því að nota bitransgenic mýs sem tjá ΔFosB í sérstökum taugafrumum stofna NAc og ryggisstrengsins (Chen, o.fl., 1998). Mýs sem tjá ΔFosB í dynorphin / D1R jákvæðir taugafrumur í NAc og ristli á baki (lína 11A) sýna breytt viðbrögð við misnotkun lyfja, einkum aukið næmi fyrir gefandi áhrifum kókaíns eða morfíns (Colby, o.fl., 2003, Kelz, o.fl., 1999, Zachariou, o.fl., 2006). Þessar breytingar urðu í fjarveru breytinga á magni MOR eða ýmissa G-próteiningareininga. Hins vegar voru gildi dynorphin mRNA lækkuð í NAc hjá ΔFosB tjáðu músum (Zachariou, o.fl., 2006), sem bendir til þess að eitt markmið ΔFosB sé gen sem kóðar innræn ópíóíð peptíð. Δ FosB örvun gæti einnig valdið hegðunarbreytingum með því að stjórna merki viðtakanna í NAc en þessi möguleiki hefur ekki verið kannaður. Þess vegna notuðu þessar rannsóknir bitransgeníska músalíkanið til að ákvarða hvort of tjáning á ΔFosB í dynorphin / D1R sem inniheldur ristiltaugafrumur breytir MOR-miðluðu G-próteinvirkni og MOR- og KOR-miðluðu adenylyl sýklasa hömlun í NAc. Áhrif ΔFosB á CB1R-miðluð G-próteinvirkni var einnig metin vegna þess að Δ9-THC gjöf örvar ΔFosB í NAc (Perrotti, o.fl., 2008) og vitað er að endókannabínóíðkerfið stjórnar reglum um umbun heila (Gardner, 2005, Maldonado, o.fl., 2006), en áhrif ΔFosB á endocannabinoid kerfið hafa ekki verið rannsökuð.

Fara til:

2. Efni og aðferðir

2.1. Hvarfefni

[35S] GTPyS (1250 Ci / mmól), [a-32P] ATP (800 Ci / mmól) og [3H] cAMP (26.4 Ci / mmól) voru keyptir frá PerkinElmer (Shelton, CT). ATP, GTP, VLF, cAMP, albúmín úr nautgripum, kreatín fosfókínasi, papaveríni, imídasóli og WIN-55212-2, voru keypt frá Sigma Aldrich (St. Louis, MO). GTPyS var keypt af Roche Diagnostic Corporation (Chicago, IL). DAMGO var veitt af fíkniefnaframboðsáætlun Þjóðstofnunar um vímuefnavanda (Rockville, MD). Econo-1 scintillation vökvi var fenginn frá Fisher Scientific (Norcross, GA). Ecolite scintillation vökvi var fenginn frá ICN (Costa Mesa, CA). Öll önnur efni voru fengin frá Sigma Aldrich eða Fisher Scientific.

2.2. Mýs

Karlkyns bitransgenic mýs fengnar úr NSE-tTA (lína A) × TetOp-ΔFosB (lína 11) voru búnar til eins og lýst er í Kelz o.fl. (Kelz, o.fl., 1999). Bitransgenic mýs voru hugsaðar og alin upp á doxycycline (100 μg í drykkjarvatni) til að bæla tjáningu transgena. Við 8 vikna aldur var doxýsýklíni sleppt úr vatninu fyrir helming músanna til að leyfa tjáningu transgena, en hinum músunum var haldið á doxýsýklíni til að bæla transgenið. Heilum var safnað 8 vikum seinna, þegar umritunaráhrif ΔFosB eru hámarks (McClung og Nestler, 2003). Önnur erfðabreytt músalína var notuð þar sem Δc-Jun, ríkjandi neikvæð mótlyf c-Jun, er tjáð í D1R / dynorphin og D2R / enkephalin frumur í striatum, hippocampus og parietal cortex (Peakman o.fl., 2003). C-Jún og skyld fjölskylduprótein í Júní dreifast með Fos fjölskyldupróteinum og bindast AP-1 vefsvæðinu í markgenum til að stjórna umritun. Samt sem áður, stytting á N-endanum á c-Jun (Δc-Jun) gerir flókið afritunar óvirkt og getur hindrað DNA bindingu virkra AP-1 fléttna. Karlkyns bitransgenic mýs fengnar úr NSE-tTA (lína A) × TetOp-FLAG-Δc-Jun (lína E) voru búnar til eins og lýst er í Peakman o.fl. (Peakman o.fl., 2003). Bitransgenic mýs voru hugsaðar og alin upp á doxycycline (100 μg í drykkjarvatni) til að bæla tjáningu transgena. Pups var vanið eftir 3 vikur, arfgerðargerð og aðskilin í hópa, með helmingnum haldið á vatni sem innihélt doxycycline og helminginn á venjulegu drykkjarvatni til að örva FLAG-Δc-Jun tjáningu. Heilum var safnað 6 vikum seinna, þeim tíma sem hámarksgildi FLAG-Δc-Jun hafa verið mæld (Peakman o.fl., 2003). Allar dýraaðgerðir voru gerðar í samræmi við leiðbeiningar um heilbrigðisstofnanir um umönnun og notkun á rannsóknarstofu dýra.

2.3. Himnaundirbúningur

Gáfur voru geymdar við −80 ° C fram á prófdag. Fyrir greiningu var hver heili þídd og NAc var krufinn á ís. Hvert sýni var einsleitt í 50 mM Tris-HCl, 3 mM MgCl2, 1 mM EGTA, pH 7.4 (himnubuffari) með 20 höggum úr einsleitni úr gleri við 4 ° C. Einsleitt var skilvindt við 48,000 × g við 4 ° C í 10 mín., blandað aftur í himnubuffara, skilvindt aftur við 48,000 × g við 4 ° C í 10 mín og blandað aftur í 50 mM Tris-HCl, 3 mM MgCl2, 0.2 mM EGTA, 100 mM NaCl, pH 7.4 (prófunarstuðpúði). Próteinmagn var ákvarðað með aðferð Bradford (Bradford, 1976) með því að nota albúmín (BSA) frá nautgripum sem staðalbúnaður.

2.4. Örvandi-örvaður [35S] GTPyS Binding

Himnur voru ræktaðar út í 10 mínútur við 30 ° C með adenósíndeamínasa (3 mU / ml) í prófunarstuðpúði. Himnur (5 – 10 μg prótein) voru síðan ræktaðar í 2 klst. Við 30 ° C í prófunarbuffi sem innihélt 0.1% (w / v) BSA, 0.1 nM [35S] GTPyS, 30 µM ​​VLF og adenósín deaminasi (3 mU / ml) með og án viðeigandi styrk DAMGO eða WIN55,212-2. Ósértæk binding var mæld með 20 µM ​​GTPyS. Ræktuninni var slitið með síun í gegnum GF / B glertrefjasíur, fylgt eftir með 3 skolun með 3 ml ísköldum 50 mM Tris-HCl, pH 7.4. Bundin geislavirkni var ákvörðuð með fljótandi sindunar litrófsmælingu eftir útdrátt á síunum í einni nóttu af sindunarvökva Econo-1.

2.5. Adenylyl cyclase próf

Himnur (5 – 25 μg prótein) voru ræktaðar með adenósín deaminasa eins og lýst er hér að ofan, síðan ræktaðar í 15 mín við 30 ° C í viðurvist eða fjarveru 1μM forskólíns, með eða án DAMGO, U50,488H eða WIN55,212-2 innihaldsefni 50 µM ​​ATP, [α-32P] ATP (1.5 µCi), 0.2 mM DTT, 0.1% (w / v) BSA, 50 µM ​​hringlaga AMP, 50 µM ​​GTP, 0.2 mM papaverine, 5 mM fosfókreatín, 20 einingar / ml kreatín fosfókínasi og adenósín deam / ml) í lokamagni 3 | il. Við þessar aðstæður, samtals [α-32P] cAMP endurheimt var venjulega minna en 1% af heildarmagni bætt við [α-32P] ATP í hverju sýni. Hvarfinu var slitið með sjóði í 3 mín. Og [32P] Hringlaga AMP var einangrað með tvöfalda súlu (Dowex og súrál) aðferð Salomon (Salomon, 1979). [3H] cAMP (10,000 dpm) var bætt við hvert rör fyrir súluskiljun sem innri staðal. Geislavirkni var ákvörðuð með vökvaspennandi litrófsmælingu (45% skilvirkni fyrir 3H) eftir að 4.5 ml af skolvatni var leyst upp í 14.5 ml af Ecolite sindunarvökva.

2.6. Gagnagreining

Nema annað sé tekið fram, er greint frá gögnum sem meðalgildi ± SE í 4 – 8 aðskildum tilraunum, sem hver um sig var framkvæmdar í þríriti. Netörvandi [35S] GTPyS binding er reiknuð sem örvandi binding að frádregnum basal bindingu. Net forskólínörvuð adenylyl sýklasa virkni er skilgreind sem forskólínörvuð virkni - grunnvirkni (pmól / mg / mín.). Hlutfallshömlun á forskólínörvuðu adenýlýlsýklasavirkni er skilgreind sem (nett forskólínörvuð virkni án örva - nett forskólínörvuð virkni í viðurvist örvandi / nett forskólínörvuð virkni í fjarveru örva) × 100. Allar ferilpassandi og tölfræðilegar greiningar voru gerðar með því að nota Prism 4.0c (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA). Leiðbeiningar um þéttniáhrif voru greindar með endurteknum, ólínulegri aðhvarfi til að fá EC50 og Emax gildi. Tölfræðileg marktækni gagna um áhrif á áhrif var ákvörðuð með tvíhliða greining á dreifni (ANOVA), með því að nota örvandi skammt og örvun gena (óvirk eða óvirk) sem aðalþættina. Tölfræðileg þýðing gildistölu við feril (Emax eða EB50) var ákvarðað með t-prófinu, sem ekki var parað, með tvíþættum námsmanni, með því að nota leiðréttingu Welch eða umbreytingu kvaðratrótanna á gögnum þar sem nauðsynlegt var til að leiðrétta fyrir misjöfnum frávikum (greind með F-prófi)50 gildi.

Fara til:

3. Niðurstöður

3.1. Áhrif expressionFosB tjáningar á ópíóíð og kannabínóíð viðtaka miðluð G-prótein örvun

Til að ákvarða hvort MOR- eða CB1R-miðluð G-prótein örvun var breytt með örvandi erfðabreyttri tjáningu ΔFosB í NAc, örvandi örvandi [35S] GTPyS-binding var skoðuð í einangruðum himnum sem voru framleidd úr þessu svæði bitransgenískra músa sem tjáðu með skilyrðum hætti (ΔFosB á) eða tjáðu ekki (ΔFosB af) FosB transgen. MOR-sérhæfða enkephalin hliðstæða DAMGO var notuð til að virkja MOR og kannabínóíð amínóalkýlindól WIN55,212-2 var notað til að virkja CB1R. Þessir bindlar voru áður sýndir fullir örvar hjá MOR og CB1R, hver um sig (Breivogel, o.fl., 1998, Selley, o.fl., 1997). Ekki var gerlegt að skoða KOR-miðlaða virkni G-próteina vegna þess að merkið er of lítið í nagdýraheilum (Childers, o.fl., 1998). Niðurstöður sýndu styrkháð örvun á virkni G-próteina með DAMGO og WIN55,122-2 í NAc frá ΔFosB burt og ΔFosB hjá músum (Mynd 1). Fyrir virkni með DAMGO-örvun (Mynd 1A), tvíhliða ANOVA af styrk-gögnum leiddi í ljós veruleg helstu áhrif ΔFosB stöðu (p <0.0001, F = 22.12, df = 1) og DAMGO styrkur (p <0.0001, F = 29.65, df = 5) án marktækt samspil (p = 0.857, F = 0.387, df = 5). Ólínuleg aðhvarfsgreining á þéttni-áhrifum ferlinum leiddi í ljós marktækt meiri DAMGO Emax gildi í ΔFosB á músum (Emax = 73 ± 5.2% örvun) miðað við ΔFosB af músum (Emax = 56 ± 4.1% örvun; p <0.05 frábrugðið ΔFosB á músum með t-prófi Student). DAMGO EC50 gildi voru ekki mismunandi á milli ΔFosB á og osFosB af músum (302 ± 72 nM á móti 212 ± 56 nM, hver um sig, p = 0.346).

Mynd 1 

Áhrif ΔFosB tjáningar á örva örvandi [35S] GTPyS binding í NAc. Himnur úr ΔFosB-tjáandi (ΔFosB á) eða stjórnunar (ΔFosB slökkt) músum voru greindar eins og lýst er í Aðferðum með því að nota mismunandi styrk ...

Öfugt við niðurstöðurnar sem fengust með MOR örvum DAMGO, sást enginn ΔFosB stöðuháður munur á virkjun G-próteina með kannabínóíð örva WIN55,212-2 (Mynd 1B). Tvíhliða ANOVA af WIN55,212-2 styrkleikagögnunum leiddi í ljós veruleg aðaláhrif WIN55,212-2 styrk (p <0.0001, F = 112.4, df = 7), en ekki af ΔFosB stöðu (p = 0.172 , F = 1.90, df = 1) og engin milliverkun var (p = 0.930, F = 0.346, df = 7). Að sama skapi voru engin áhrif af ΔFosB stöðu á WIN55,212-2 Emax gildi (103 ± 6% á móti 108 ± 8% örvun í osFosB músum og slökkt, í sömu röð, p = 0.813 með t-prófi nemanda) eða EB50 gildi (103 ± 20 nM á móti 170 ± 23 nM í osFosB músum slökkt og slökkt, hver um sig, p = 0.123).

Byggt á lögun ferlanna og þeirri staðreynd að fyrri rannsóknir okkar hafa sýnt tvífasa WIN55,212-2 styrk-áhrif bugða í heila (Breivogel, o.fl., 1999, Breivogel, o.fl., 1998), WIN55,212-2 ferlarnir voru einnig greindir með tveggja staðna líkani. Greining á meðaltölum gagna sýndi lítillega framför í velferð að nota tveggja staðna líkanið (R2 = 0.933 og 0.914, summa ferninga = 3644 og 5463 í osFosB músum og slökkt, í sömu röð) samanborið við eins staðar líkanið (R2 = 0.891 og 0.879, summan af reitum = 6561 og 6628 í osFosB músum og slökkt, hver um sig). Enginn marktækur munur fannst hins vegar á milli BFosB músa og slit í hvorugri Emax eða EB50 gildi háu eða lágu styrkleika staðanna (Viðbótartafla 1), þó að það væri tilhneiging til lægri EB50 gildi á háum styrkleika stað hjá músum með ΔFosB á (EC50hár = 28.0 ± 10.6 nM) miðað við þá sem eru með osFosB óvirkt (EB50hár = 71.5 ± 20.2 nM; p = 0.094). Ennfremur voru engin áhrif af ΔFosB stöðu á basal [35S] GTPyS binding í NAc himnum (253 ± 14 á móti 226 ± 14 fmol / mg í osFosB músum og slökkt, í sömu röð, p = 0.188). Þessar upplýsingar benda til þess að örvandi erfðabreytt tjáning ΔFosB í NAc músanna hafi aukið MOR-miðlað G-prótein virkjun án þess að hafa marktækt áhrif á CB1R-miðluð eða basal G-prótein virkni.

3.2. Áhrif ΔFosB á ópíóíð og kannabínóíðviðtengda hömlun á adenýlýlsýklasa

Til að meta áhrif örvandi erfðabreyttra tjáningar á osFosB á mótun virkni eftirlitsvirkja með MOR og CB1R, hömlun á 1 µM ​​forskólínörvandi adenylyl sýklasa virkni var skoðuð í NAc himnum. Auk MOR- og CB1R-miðluð hömlun á adenylyl sýklasa virkni, áhrif KOR virkni voru einnig skoðuð með því að nota KOR-sérhæfða fullan örva U50,488 (Zhu, o.fl., 1997) vegna þess að fyrri niðurstöður sýndu að dynorphin mRNA var markmið targetFosB í bitransgenic líkaninu (Zachariou, o.fl., 2006). Niðurstöður sýndu að DAMGO, U50,488 og WIN55,212-2 báðir framleiddu styrkháð hömlun á adenylyl cyclase virkni í bæði FosB off og ΔFosB hjá músum (Mynd 2). Tvíhliða ANOVA upplýsingar um DAMGO styrkleikaáhrif (Mynd 2A) leiddi í ljós veruleg helstu áhrif ΔFosB stöðu (p = 0.0012, F = 11.34, df = 1) og DAMGO styrk (p <0.0001, F = 29.61, df = 6), en engin marktæk milliverkun (p = 0.441, F = 0.986) , df = 6). Ólínuleg aðhvarfsgreining á DAMGO styrk-áhrifum ferlum leiddi í ljós lægra DAMGO EC50 gildi í ΔFosB á músum (101 ± 11 nM) samanborið við ΔFosB af músum (510 ± 182 nM, p <0.05 með t-prófi nemanda). Hins vegar var enginn marktækur munur á DAMGO Emax gildi (20.9 ± 1.26% á móti 19.8 ± 1.27% hömlun í osFosB músum og slökkt, í sömu röð, p = 0.534).

Mynd 2 

Áhrif expressionFosB tjáningar á hömlun á adenylyl sýklasa virkni í NAc. Himnur úr ΔFosB-tjáandi (ΔFosB á) eða stjórnunar (ΔFosB slökkt) músum voru greindar eins og lýst er í Aðferðum í viðurvist 1 µM ...

KOR-miðluð adenýlyl sýklasa hömlun var einnig mismunandi sem virkni örvandi erfðabreyttra tjáningar á osFosB (Mynd 2B). Tvíhliða ANOVA af U50,488 styrk-gögnum sýndi marktæk helstu áhrif ΔFosB stöðu (p = 0.0006, F = 14.53, df = 1) og U50,488 styrk (p <0.0001, F = 26.48, df = 3) , án marktækrar víxlverkunar (p = 0.833, F = 0.289, df = 3). Ólínuleg aðhvarfsgreining á þéttni-áhrifum ferlum leiddi í ljós meiri U50,488 Emax gildi í ΔFosB á músum (18.3 ± 1.14% hömlun) samanborið við ΔFosB af músum (12.5 ± 2.03% hömlun; p <0.05 frábrugðin ΔFosB á með t-prófi námsmanns), án marktæks munar á U50,488 EC50 gildi (310 ± 172 nM á móti 225 ± 48 nM í osFosB músum slökkt og slökkt, hver um sig, p = 0.324).

Öfugt við áhrif sem fram komu við MOR og KOR voru engin marktæk áhrif af völdum erfðabreyttra genFosB tjáningar á hömlun á adenýlýlsýklasa af kannabisefnum örvandi WIN55212-2 (Mynd 2C). Tvíhliða ANOVA á WIN55,212-2 gögnum um styrk og áhrif sýndi veruleg áhrif lyfjaþéttni (p <0.0001, F = 23.6, df = 2), en ekki af ΔFosB stöðu (p = 0.735, F = 0.118, df = 1) né var marktæk milliverkun (p = 0.714, F = 0.343, df = 2). Ennfremur voru engin áhrif af ΔFosB stöðu á basal eða forskólín-örvuð adenýlýlsýklasavirkni í fjarveru nokkurs örva. Basal adenýlýlsýklasavirkni var 491 ± 35 pmól / mg / mín í ΔFosB á músum samanborið við 546 ± 44 í ΔFosB af músum (p = 0.346 með t-próf ​​Student). Sömuleiðis var virkni adenýlylsýklasa í nærveru 1 µM forskólíns 2244 ± 163 pmól / mg / mín í ΔFosB á músum á móti 2372 ± 138 pmól / mg / mín í ΔFosB af músum (p = 0.555).

3.3. Áhrif ΔcJun á ópíóíð og kannabínóíðviðtengda hömlun á adenýlýlsýklasa

Vegna þess að örvandi erfðabreytt tjáning á osFosB jók hömlunarmerknaflutning frá MOR og KOR til adenylyl sýklasa í NAc, var það áhugavert að ákvarða hvort ríkjandi neikvæður hemill fyrir criptionFosB-miðlaða umritun myndi móta ópíóíðviðtaka merki á gagnstæða hátt. Til að taka á þessari spurningu var hömlun á forskólínörvandi adenylyl sýklasa virkni með DAMGO og U50,488 skoðuð í himnum sem voru framleidd úr NAc bitrígenfrumum músum sem tjáðu skilyrt ΔcJun. Niðurstöðurnar sýndu engin marktæk áhrif af JcJun tjáningu á hömlun á adenylyl sýklasa virkni af MOR eða KOR (Mynd 3). Tvíhliða ANOVA DAMGO styrkleiksferla sýndi veruleg aðaláhrif DAMGO styrk (p <0.0001, F = 20.26, df = 6), en ekki af ΔcJun stöðu (p = 0.840, F = 0.041, df = 1) og engin marktæk milliverkun var (p = 0.982, F = 0.176, df = 6). Að sama skapi var enginn marktækur munur á Emax eða EB50 gildi á milli músa með ΔcJun á (Emax = 23.6 ± 2.6%; EB50 = 304 ± 43 nM) eða ΔcJun slökkt (Emax = 26.1 ± 2.5%, p = 0.508; EB50 = 611 ± 176 nM, p = 0.129). Svipaðar niðurstöður sáust með U50,488, þannig að tvíhliða ANOVA af styrk-áhrifaferlinum sýndi marktæk áhrif af styrk (p <0.0001, F = 11.94, df = 6), en ekki af ΔcJun stöðu (p = 0.127) , F = 2.391, df = 1) og það var engin marktæk milliverkun (p = 0.978, F = 0.190, df = 6). Sömuleiðis var enginn marktækur munur á Emax eða EB50 gildi á milli músa með ΔcJun á (Emax = 14.8 ± 2.9%; EB50 = 211 ± 81 nM) eða slökkt (Emax = 16.7 ± 1.8%, p = 0.597; EB50 = 360 ± 151 nM, p = 0.411).

Mynd 3 

Áhrif expressioncJun tjáningar á hömlun á adenylyl sýklasa virkni í NAc. Himnur úr ΔcJun-tjáandi (ΔcJun on) eða stjórnunar (ΔcJun off) músum voru ræktaðar í viðurvist DAMGO (A), U50,488H (B) eða WIN55,212-2 ...

ΔcJun tjáning hafði heldur ekki marktæk áhrif á hömlun á adenýlyl cyclase í NAc af kannabínóíð örvum. Tvíhliða ANOVA af WIN55,212-2 styrkleiksferlinum sýndi veruleg megináhrif WIN55,212-2 styrk (p <0.0001, F = 15.53, df = 6), en ekki af arfgerð (p = 0.066, F = 3.472, df = 1) og það var engin marktæk milliverkun (p = 0.973, F = 0.208, df = 6). Sömuleiðis var enginn marktækur munur á WIN55,212-2 Emax gildi (13.0 ± 2.3% og 13.6 ± 0.9% hömlun í ΔcJun á móti af músum, hvort um sig, p = 0.821) og eða EC50 gildi (208 ± 120 nM og 417 ± 130 nM í ΔcJun á móti af músum, hver um sig, p = 0.270). Þannig að þrátt fyrir að lítilsháttar þróun væri í átt að minni styrk WIN55,212-2 hjá músum sem tjáðu ΔcJun, breytti transgen ekki marktækt kannabínóíð hömlun á adenylyl cyclase. Ennfremur voru engin áhrif af JcJun stöðu á basal- eða forskólínörvandi adenylyl cyclase virkni. Basal adenylyl cyclase virkni var 1095 ± 71 pmól / mg / mín og 1007 ± 77 pmol / mg / mín (p = 0.403) hjá músum með JcJun óvirkan eða slökkt. Adenylyl sýklasa virkni örvuð með 1 µM ​​forskólíni var 4185 ± 293 pmól / mg / mín á móti 4032 ± 273 pmol / mg / mín (p = 0.706) hjá músum með ΔcJun óvirkan eða slökkt.

3.4. Umræður

Niðurstöður þessarar rannsóknar leiddu í ljós aukna MOR-miðlaða G-prótein örvun og hömlun á adenýlýlsýklasa í NAc músanna með örvandi erfðabreyttri tjáningu á osFosB í dynorphin / D1R sem inniheldur taugafrumur. KOR-miðluð hömlun á adenylyl sýklasa virkni var einnig aukin í NAc hjá ΔFosB tjá músum, sem bendir til að ΔFosB stjórni innrænu ópíóíðkerfinu í NAc. DAMGO Emax gildi voru meiri fyrir MOR-örvaða [35S] GTPyS bindandi, og EB þess50 gildi var lægra fyrir adenylyl sýklasa hömlun, í osFosB of-tjáandi músum samanborið við samanburðar mýs. Þessar niðurstöður benda til möguleika á viðtaka varasjóðs fyrir mótun effector en ekki örvun G-próteins við prófunaraðstæður sem skoðaðar voru. Niðurstaðan um að hámarks hömlun á adenýlyl sýklasa af KOR örva var fyrir áhrifum af expressionFosB tjáningu bendir til lágs viðtaka fyrir KOR-miðlað svar, í samræmi við lágt magn KOR bindistaða í músarheila (Unterwald, o.fl., 1991). Aftur á móti, CB1R-miðluð G-próteinvirkni og hömlun á adenýlýlsýklasa voru ekki fyrir áhrifum af ΔFosB tjáningu, sem bendir til þess að ópíóíð og kannabisefniskerfin séu misjöfn í svörun þeirra við ΔFosB í þessum NAc taugafrumum.

Áhrif ΔFosB á ópíóíðviðtakamiðluð merki eru í samræmi við fyrri skýrslu okkar um að ΔFosB tjáning í striatum hafi breytt bráðum og langvinnum áhrifum morfíns (Zachariou, o.fl., 2006). Ein niðurstaða þeirrar rannsóknar var að mýs með erfðabreytt tjáningu ofFosB í dynorphin / D1R striatal taugafrumur voru næmari fyrir morfíni við staðnæmingu en samanburðaraðgerðir. Ennfremur voru þessi áhrif hermt eftir með veirumiðluðum tjáningu ΔFosB með staðbundinni innspýtingu í NAc. Þessar athuganir eru í samræmi við núverandi niðurstöður sem sýna aukna MOR merki í NAc.

Við greindum áður um erfðakóðunina dynorfín sem skotmark fyrir osFosB og lagði til að minnkað dynorfín væri í samræmi við aukna gefandi eiginleika morfíns í ΔFosB bitransgenískum músum (Zachariou, o.fl., 2006). Núverandi niðurstöður sýna að KOR-miðluð hömlun á adenylyl sýklasa í NAc er aukin í ΔFosB tjá músum, sem gætu endurspeglað jöfnun aukinnar KOR næmi í kjölfar minnkaðs dynorphins. Fyrri rannsóknir hafa sýnt að KOR var stjórnað upp á ákveðnum heila svæðum prodynorphin knockout músa, þar á meðal NAc (Clarke o.fl., 2003).

Öfugt við ΔFosB, örvandi erfðabreytt tjáning ΔcJun, ríkjandi neikvæða styttu stökkbrigði ΔFosB bindiefnisins cJun, breytti ekki adenylyl sýklasa hömlun af MOR eða KOR örvum. Þessar niðurstöður benda til þess að grunngildi ΔFosB tjáningar, sem eru tiltölulega lág, gegni ekki marktæku hlutverki við að viðhalda merkjum ópíóíðviðtaka á þessu stigi merkjasendinga í NAc. Sú staðreynd að skilyrt gefandi áhrif morfíns minnkaði með JcJun tjáningu í fyrri rannsókn okkar (Zachariou, o.fl., 2006) bendir annað hvort á að morfín örvun ΔFosB meðan á skilyrðingaraðgerðinni stendur sé mikilvæg til að stjórna hegðunarviðbrögðum við lyfinu eða að umritunaráhrif ofFosB annarra en þeirra sem hafa áhrif á nálæga merki með ópíóíðviðtökum gætu haft áhrif á ópíóíð umbun. Í öllum tilvikum sýna niðurstöður þessarar rannsóknar greinilega að, þegar expressionFosB tjáning er hækkuð yfir grunngildum í dynatalíni / D1R-tjáandi taugafrumur, það er mikil aukning á tengingu MOR og KOR við hömlun á adenylyl sýklasa í NAc.

Aðferðirnar sem MOR- og KOR-miðlaðar merkingar eru auknar með overFosB ofþjáningu eru óljósar, en við höfum áður sýnt að MOR stig, metin með [3H] naloxon binding, eru ekki ólík í NAc hjá ΔFosB á móti músum (Zachariou, o.fl., 2006). Sama rannsókn kom í ljós að Gαi1 og 2 próteinmagn hafði ekki áhrif á þetta svæði af byFosB tjáningu. Hins vegar, fyrri greiningar á genatjáningu sýndu að Gαo mRNA var stjórnað upp í NAc af ΔFosB á músum (McClung og Nestler, 2003). Það mun vekja áhuga í framtíðarrannsóknum að skoða ítarlega áhrif erfðabreyttra expressionFosB tjáningar á tjáningu G-próteina á einingunni á próteinstiginu sem og á tjáningu margra G-próteina mótunarpróteina.

Það er athyglisvert að expressionFosB tjáning jók ekki CB1R-miðlað merkjasending í NAc. Hugsanlegt er að breytingar á CB1R merki eiga sér stað hjá stakum hópi taugafrumna sem er skyggður á allan NAc undirbúninginn. Til dæmis, gjöf Δ9- THC framkallaði verulega ΔFosB í kjarna NAc (en ekki skel)Perrotti, o.fl., 2008). Égndeed, það hefur verið sýnt fram á að áskorunin með Δ9-THC eftir endurtekna gjöf Δ9-THC jók losun dópamíns í NAc kjarna en minnkaði losun í skelinni (Cadoni, o.fl., 2008). Það er einnig mikilvægt að hafa í huga að 11A línan af bitransgenískum músum tjáir ΔFosB aðeins í dynorphin / D1R jákvæðir miðlungs spiny taugafrumur af striatum, en CB1R eru tjáðir í báðum dynorfín / D1R og enkephalin / D2R jákvæðir taugafrumur úr ristli (Hohmann og Herkenham, 2000), svo og á skautum af staðgöngum í barksterum (Robbe o.fl., 2001). Tjáning á ríkjandi neikvæðu eftirlitsstofninum við osFosB-miðlaða umritun, ΔcJun, hafði heldur engin marktæk áhrif á kannabínóíðviðtaka merki, þó að JcJun sé framkallað með örvandi hætti í báðum D1 og D2-heldur stofna miðlungs spiny taugafrumna í þessum músum (Peakman o.fl., 2003). Hins vegar er mögulegt að basal-FosB tjáning sé nægilega lág til að ΔcJun hafi ekki áhrif á merki viðtakanna eins og niðurstöður MOR og KOR bentu til. Það er líka mögulegt að CB1R merkja er aukin lítillega með basal-FosB tjáningu, þannig að frekari aukning á ΔFosB tjáningu eða hindrun aðgerða þess með ΔcJun hafði aðeins lítil áhrif sem náðu ekki stigi tölfræðilegrar mikilvægis. Óbeinan stuðning við þessa túlkun má sjá með því að bera saman WIN55,212-2 EC50 gildi milli músa sem tjá ΔcJun á móti ΔFosB. Hlutfall WIN55,212-2 EC50 gildi fyrir adenylyl sýklasa hömlun hjá músum með framkallaðri tjáningu ΔcJun við EC þess50 gildi fyrir örvun G-próteina í músum með framkallaðri tjáningu á osFosB var 4.0, en sama hlutfall hjá músum án örvunar hvorki transgensins var 1.2.

Að öðrum kosti gætu kannabisefni valdið örvun á expressionFosB tjáningu án beinna áhrifa á CB1R merki. Í þessari atburðarás gætu kannabisefni mótað svörun við geðvirkum áhrifum annarra lyfja með osFosB-miðluðu uppskriftareglugerð. Égn staðreynd, stjórnun Δ9-THC framleiðir krossofnæmi fyrir ópíóíðum og amfetamíni (Cadoni, o.fl., 2001, Lamarque, o.fl., 2001), í samræmi við þessa tilgátu. Ennfremur var greint frá því að endurtekin gjöf á kannabisefni örvandi CP55,940 auki MOR-miðlaða G-prótein örvun í NAc, svipað og mýs sem framkallaða ΔFosB í þessari rannsókn (Vigano o.fl., 2005). Áhrif ΔFosB tjáningar á Δ9-THC-miðluð hegðun hefur ekki verið metin, en núverandi niðurstöður útiloka ekki samspil. Niðurstöður þessarar og fyrri rannsóknar okkar (Zachariou, o.fl., 2006) sýna breytingar á FOSB af völdum MOR og KOR / dynorphin í striatum. The gefandi áhrif Δ9-THC, mælt með staðvali, eru afnumin í MOR núllmúsum, en eyðingu KOR veiklað ten9-THC setti fram andúð og kom í ljós Δ9-THC staðsetningarkostur (Ghozland, o.fl., 2002). Á sama hátt, skilyrt stað andúð á Δ9-THC er ekki í pro-dynorphin knockout samanborið við villtar tegundir músa (Zimmer o.fl., 2001). Þessi gögn benda til þess að Δ9-THC gæti verið meira gefandi eftir ΔFosB örvun og þar af leiðandi örvun á MOR merkjasendingum með lækkun á tjáningu dynorphin.

Í stuttu máliy, niðurstöður þessarar rannsóknar sýndu að tjáning ΔFosB í D1R / dynorphin jákvæðar striatal taugafrumur juku MOR- og KOR-miðlaðar merkjasendingar við stig G-prótein miðlaðrar hömlunar á adenylyl cyclase virkni í NAc. Þessi niðurstaða er í samræmi við rannsóknir sem hafa sýnt hlutverk innrænu ópíóíðkerfisins í umbun (Trigo, o.fl., 2010), og bjóða upp á hugsanlegt fyrirkomulag fyrir Δ FosB-miðluð áhrif á umbun. Aftur á móti, CB1R-miðluð merki í NAc höfðu ekki marktæk áhrif á atalFosB tjáningu undir fóstur við þær aðstæður sem skoðaðar voru, þó frekari rannsóknir séu tilefni til að ákvarða áhrif ΔFosB örvunar á endókannabínóíð kerfið.

Hápunktar rannsókna

  • MOR merkjasending er aukin í kjarna safna músa sem tjá ΔFosB
  • KOR hömlun á adenýlýlsýklasa er einnig aukin hjá músum sem tjá ΔFosB
  • Tjáning ΔFosB breytir ekki CB1R merki í kjarna accumbens
Fara til:

Viðbótarefni

Fara til:

Þakkir

Höfundarnir þakka Hengjun He, Jordan Cox og Aaron Tomarchio fyrir tæknilega aðstoð við [35S] GTPyS bindandi próf. Þessi rannsókn var studd af USPHS Grants DA014277 (LJS), DA10770 (DES) og P01 DA08227 (EJN).

Fara til:

Neðanmálsgreinar

Fyrirvari útgefanda: Þetta er PDF skjal af óskráðri handriti sem hefur verið samþykkt til birtingar. Sem þjónustu við viðskiptavini okkar erum við að veita þessa snemma útgáfu handritsins. Handritið verður undirritað afrita, gerð og endurskoðun sönnunargagna áður en hún er gefin út í endanlegri bönnuð formi. Vinsamlegast athugaðu að á framleiðsluferlinu má finna villur sem gætu haft áhrif á efnið og öll lögboðin frávik sem gilda um dagbókina eiga við.

Fara til:

Meðmæli

  • Bozarth MA, vitur RA. Líffærafræðilega ólíkar ópíumviðtaka sviðum miðla verðlaun og líkamlega ósjálfstæði. Science. 1984;224: 516-517. [PubMed]
  • Bradford MM. Hröð og viðkvæm aðferð til að mæla míkrógrömm próteina með því að nota meginregluna um próteinlitunarbindingu. Anal. Lífefnafræðingur. 1976;72: 248-254. [PubMed]
  • Breivogel CS, Childers SR, Deadwyler SA, Hampson RE, Vogt LJ, Sim-Selley LJ. Langvinn delta9-tetrahydrocannabinol meðferð framleiðir tímabundið tap á kannabínóíðviðtaka G-próteinum í heila. J. Neurochem. 1999;73: 2447-2459. [PubMed]
  • Breivogel CS, Selley DE, Childers SR. Virkni kannabínóíð viðtakaörva til að örva [35S] GTPyS binding við heilahimnu hjá rottum er í samhengi við örvun af völdum lækkunar á VLF sækni. J. Biol. Chem. 1998;273: 16865-16873. [PubMed]
  • Cadoni C, Pisanu A, Solinas M, Acquas E, Di Chiara G. Hegðunarnæmi eftir endurtekna váhrif á Delta 9-tetrahydrocannabinol og krossofnæmi með morfíni. Psychopharmacology (Berl) 2001;158: 259-266. [PubMed]
  • Cadoni C, Valentini V, Di Chiara G. Hegðunarnæmi fyrir delta 9-tetrahýdrókannabínól og krossofnæmi með morfíni: mismunadreifingar á uppsöfnuðum skel og kjarna dópamín flutningi. J. Neurochem. 2008;106: 1586-1593. [PubMed]
  • Chen J, Kelz MB, Zeng G, Sakai N, Steffen C, Shockett PE, Picciotto MR, Duman RS, Nestler EJ. Meðfædd dýr með örvandi, markvissa genatjáningu í heila. Mol. Pharmacol. 1998;54: 495-503. [PubMed]
  • Childers SR. Annar boðberi ópíóíð viðtaka. Life Sci. 1991;48: 1991-2003. [PubMed]
  • Childers SR, Fleming L, Konkoy C, Marckel D, Pacheco M, Sexton T, Ward S. Opioid og hömlun á kannabínóíðviðtaka adenylyl cyclase í heila. Ann. NY Acad. Sci. 1992;654: 33-51. [PubMed]
  • Childers SR, Xiao R, Vogt LJ, Sim-Selley LJ. Kappa ópíóíðviðtakaörvun [35S] GTPyS binding í naggrísuheila: Skortur á sönnunargögnum fyrir kappa2-virkur virkjun G-próteina. Biochem. Pharmacol. 1998;56: 113-120. [PubMed]
  • Clarke S, Zimmer A, Zimmer AM, Hill RG, Kitchen I. Svæðasamhæfð uppstýring á ör-, delta- og kappa-ópíóíðviðtökum en ekki ópíóíðviðtaka eins og 1 viðtökum í heila enkephalin og dynorphin knockout músa. Neuroscience. 2003;122: 479-489. [PubMed]
  • Colby CR, Whisler K, Steffen C, Nestler EJ, Self DW. Striatal frumu-sértæk yfirfækkun DeltaFosB eykur hvata fyrir kókaín. J. Neurosci. 2003;23: 2488-2493. [PubMed]
  • Gardner EL. Endokannabínóíð merkjakerfi og umbun heila: áhersla á dópamín. Pharmacol. Biochem. Behav. 2005;81: 263-284. [PubMed]
  • Ghozland S, Matthes HW, Simonin F, Filliol D, Kieffer BL, Maldonado R. Hvatningaráhrif kannabisefna eru miðluð af mú-ópíóíðum og kappa-ópíóíðviðtökum. J. Neurosci. 2002;22: 1146-1154. [PubMed]
  • Herkenham M, Lynn AB, Johnson MR, Melvin LS, de Costa BR, Rice KC. Einkenni og staðsetning kannabínóíðviðtaka í heila rottu: megindleg in vitro sjálfsrannsóknarrannsókn. J. Neurosci. 1991;11: 563-583. [PubMed]
  • Hohmann AG, Herkenham M. Staðsetning kannabínóíð CB (1) viðtaka mRNA í taugafrumum undirstofnum rottuþráða: tvöfaldur-flokkun staðsetningarrannsóknar á staðnum. Synapse. 2000;37: 71-80. [PubMed]
  • Howlett AC, Barth F, Bonner TI, Cabral G, Casellas P, Devane WA, Felder CC, Herkenham M, Mackie K, Martin BR, Mechoulam R, Pertwee RG. Alþjóðasamband lyfjafræði. XXVII. Flokkun kannabínóíðviðtaka. Lyfjafræðileg endurskoðun. 2002;54: 161-202.
  • Huestis MA, Gorelick DA, Heishman SJ, Preston KL, Nelson RA, Moolchan ET, Frank RA. Blokkun á áhrifum reyks marijúana af CB1-sértækum kannabínóíð viðtakablokki SR141716. Arch. Geðlækningar. 2001;58: 322-328. [PubMed]
  • Kelz MB, Chen J, Carlezon WA, Jr, Whisler K, Gilden L, Beckmann AM, Steffen C, Zhang YJ, Marotti L, Self DW, Tkatch T, Baranauskas G, Surmeier DJ, Neve RL, Duman RS, Picciotto MR, Nestler EJ. Tjáning á umritunarþáttinum deltaFosB í heilanum stýrir næmi fyrir kókaíni. Nature. 1999;401: 272-276. [PubMed]
  • Koob GF, Volkow ND. Taugakerfi fíknar. Neuropsychopharmacology. 2010;35: 217-238. [PMC ókeypis grein] [PubMed]
  • Lamarque S, Taghzouti K, Simon H. Langvarandi meðferð með Delta (9) -tetrahydrocannabinol eykur hreyfingu svörunar við amfetamíni og heróíni. Afleiðingar fyrir varnarleysi vegna eiturlyfjafíknar. Neuropharmacology. 2001;41: 118-129. [PubMed]
  • Maldonado R, Valverde O, Berrendero F. Þátttaka endocannabinoid kerfisins í eiturlyfjafíkn. Stefna Neurosci. 2006;29: 225-232. [PubMed]
  • Mansour A, Fox CA, Thompson RC, Akil H, Watson SJ. mu-ópíóíð viðtaka mRNA tjáningu í miðtaugakerfi rottu: samanburður við mu-viðtaka bindingu. Brain Res. 1994;643: 245-265. [PubMed]
  • Matthes HWD, Maldonado R, Simonin F, Valverde O, Slowe S, Kitchen I, Befort K, Dierich A, LeMeur M, Dolle P, Tzavara E, Hanoune J, Roques BP, Kieffer BL. Tap á verkjalyfjum af völdum morfíns, umbunaráhrifum og fráhvarfseinkennum hjá músum sem skortir μ-ópíóíðviðtaka genið. Nature. 1996;383: 819-823. [PubMed]
  • McClung CA, Nestler EJ. Reglugerð um genatjáningu og kókaínverðlaun með CREB og DeltaFosB. Nat. Neurosci. 2003;6: 1208-1215. [PubMed]
  • McClung CA, Ulery PG, Perrotti LI, Zachariou V, Berton O, Nestler EJ. DeltaFosB: sameindaskipti fyrir langtímaaðlögun í heilanum. Brain Res. Mol. Brain Res. 2004;132: 146-154. [PubMed]
  • Muller DL, Unterwald EM. D1 dópamínviðtökur móta virkni deltaFosB í rottumstriatumi eftir gjöf morfíns í bláæð. J. Pharmacol. Exp. Ther. 2005;314: 148-154. [PubMed]
  • Nestler EJ. Review. Tjáningarferli fíkniefna: hlutverk DeltaFosB. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 2008;363: 3245-3255. [PMC ókeypis grein] [PubMed]
  • Nestler EJ, Kelz MB, Chen J. DeltaFosB: sameindarmiðill langvarandi tauga og hegðunar plasticity. Brain Res. 1999;835: 10-17. [PubMed]
  • Nye HE, Von BT, Kelz MB, Iadarola M, Nestler EJ. Lyfjafræðilegar rannsóknir á reglugerð um langvarandi FOS-tengda mótefnavaka framköllun með kókaíni í striatum og kjarna accumbens. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1995;275: 1671-1680. [PubMed]
  • Peakman MC, Colby C, Perrotti LI, Tekumalla P, Carle T, Ulery P, Chao J, Duman C, Steffen C, Monteggia L, Allen MR, lager JL, Duman RS, McNeish JD, Barrot M, Self DW, Nestler EJ , Schaeffer E. Örvandi, heila-svæðisbundin tjáning ríkjandi neikvæð stökkbrigði c-Jun í transgenic mýs minnkar næmi fyrir kókaíni. Brain Res. 2003;970: 73-86. [PubMed]
  • Perrotti LI, Weaver RR, Robison B, Renthal W, Maze I, Yazdani S, Elmore RG, Knapp DJ, Selley DE, Martin BR, Sim-Selley L, Bachtell RK, Self DW, Nestler EJ. Einstök mynstur DeltaFosB framkalla í heila með fíkniefnum. Synapse. 2008;62: 358-369. [PMC ókeypis grein] [PubMed]
  • Robbe D, Alonso G, Duchamp F, Bockaert J, Manzoni OJ. Staðsetning og verkunarháttur kannabínóíðviðtaka við glutamatergic samstillingu í músarkjarnanum. J. Neurosci. 2001;21: 109-116. [PubMed]
  • Salomon Y. Adenylate sýklasa próf. Adv. Hringlaga núkleótíð Res. 1979;10: 35-55. [PubMed]
  • Selley DE, Sim LJ, Xiao R, Liu Q, Childers SR. Mu ópíóíð viðtakaörvandi [35S] GTPyS binding í thalamus hjá rottum og ræktaðar frumulínur: Merki umbreytingarferli undirliggjandi virkni örva. Mol. Pharmacol. 1997;51: 87-96. [PubMed]
  • Trigo JM, Martin-Garcia E, Berrendero F, Robledo P, Maldonado R. Innræna ópíóíðkerfið: algengt undirlag í eiturlyfjafíkn. Lyf Alkóhól Afhending. 2010;108: 183-194. [PubMed]
  • Unterwald EM, Knapp C, Zukin RS. Taugafræðilega staðsetning κ1 og κ2 ópíóíðviðtaka í rottum og marsvínheilum. Brain Res. 1991;562: 57-65. [PubMed]
  • Vaccarino FJ, Bloom FE, Koob GF. Blokkun kjarna accumbens ópíatviðtaka dregur úr heróínlaun í bláæð í rottunni. Psychopharmacology (Berl) 1985;86: 37-42. [PubMed]
  • Vigano D, Rubino T, Vaccani A, Bianchessi S, Marmorato P, Castiglioni C, Parolaro D. Sameindakerfi sem taka þátt í ósamhverfu samspili kannabínóíðs og ópíóíðkerfa. Psychopharmacology (Berl) 2005;182: 527-536. [PubMed]
  • Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, Cassidy MP, Kelz MB, Shaw-Lutchman T, Berton O, Sim-Selley LJ, Dileone RJ, Kumar A, Nestler EJ. Ómissandi hlutverk DeltaFosB í kjarnanum accumbens í morfín aðgerð. Nat. Neurosci. 2006;9: 205-211. [PubMed]
  • Zangen A, Solinas M, Ikemoto S, Goldberg SR, Wise RA. Tveir heilasíður til að fá kannabisefnislaun. J. Neurosci. 2006;26: 4901-4907. [PubMed]
  • Zhu J, Luo LY, Li JG, Chen C, Liu-Chen LY. Virkjun klónaðs kappa ópíóíðviðtaka hjá mönnum með örvum eykur [35S] GTPyS bindingu við himnur: ákvörðun styrkleika og virkni bindla. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1997;282: 676-684. [PubMed]
  • Zimmer A, Valjent E, Konig M, Zimmer AM, Robledo P, Hahn H, Valverde O, Maldonado R. Fjarvist delta -9-tetrahydrocannabinol dysphoric áhrif í dynorphin-skortum músum. J. Neurosci. 2001;21: 9499-9505. [PubMed]
  • Zimmer A, Zimmer AM, Hohmann AG, Herkenham M, Bonner TI. Aukin dánartíðni, ofvirkni og hypoalgesia hjá kannabisefnum CB1 viðtaka músum. Proc. Natl. Acad. Sci. Bandaríkin 1999;96: 5780-5785. [PMC ókeypis grein] [PubMed]