Afturköllun veldur mismunandi einkennum FosB / ΔFosB tjáningu í útlendum svissskum músum sem eru flokkaðar sem næmir og ónæmar fyrir næmi með eðlilegum örvum (2014)

Leitarorð

• FosB;
• DeltaFosB;
• Næmi fyrir hreyfingu;
• Uppsögn;
• Hegðabreytileiki;
• Mýs

1. Inngangur

Áskorun núverandi taugalíffræðilegra rannsókna á eiturlyfjafíkn er að skilja taugakerfið á plasti sem miðla umbreytingunni frá afþreyingarnotkun yfir í tap á atferlisstjórnun á lyfjaleit og lyfjanotkun. Ein mikilvægasta kenningin um eiturlyfjafíkn, kölluð „dimma hlið fíknarinnar“, bendir til þess að það sé framrás frá hvatvísi (tengd jákvæðri styrkingu) til nauðungar (tengd neikvæðum styrkingu). Þessi framvinda, í hrundi hrun, samanstendur af eftirfarandi ríkjum: áhyggjuefni / tilhlökkun, ölvun vímuefna og fráhvarf / neikvæð áhrif (Koob og Le Moal, 2005, Koob og Le Moal, 2008 og Koob og Volkow, 2010). Frá þessari atburðarás og síðan hafa rannsóknir á fíkn í fíkninni beinst að taugalífeðlisfræðilegum aðferðum sem tengjast neikvæðum tilfinningalegum ástæðum sem koma bæði úr bráðum og langvarandi bindindisleysi. Samkvæmt kenningunni um „hina dökku fíkn“ virðist vera að verða langvarandi og viðvarandi plastbreytingar í taugrásum sem miða að því að takmarka umbun. Samt sem áður leiða þessar plastbreytingar til neikvæðs tilfinningalegs ástands sem kemur fram þegar komið er í veg fyrir aðgang að lyfinu. Þessi fyrirkomulag veitir sterka hvatningu til að koma á fíkn og einnig til að viðhalda henni (Koob og Le Moal, 2005 og Koob og Le Moal, 2008).

Rásnæmisviðnám er gagnlegt dýralíkan sem byggist á því að aukning á huglægum áhrifum lyfjanna ásamt endurteknum váhrifum þeirra er svipuð aukningu á hreyfingaráhrifum örvandi lyfja (Vanderschuren og Kalivas, 2000 og Vanderschuren og Pierce, 2010). Þrátt fyrir að hreyfiofnæmi hermi ekki eftir nokkrum hegðun sem tengjast eiturlyfjafíkn, eru tímabundnar formfræðilegar og taugakemískir eiginleikar þess samhliða þeim sem leiða umskiptin frá afþreyingarnotkun yfir í sjálfa eiturlyfjafíknina (Robinson og Kolb, 1999, Vanderschuren og Kalivas, 2000 og Vanderschuren og Pierce, 2010). Hefð er fyrir hreyfingarnæmisferli sem samanstendur af þremur stigum: öflun (endurteknum váhrifum lyfja), fráhvarfstímabili og áskorun (nýtt samband við lyfið eftir fráhvarfstímabilið). Því miður einbeittu flestar rannsóknirnar sem notuðu hreyfitæmingu aðeins til öflunar og áskorunarstigs og skarast afturköllunartímabilið.

Það er vel staðfest að endurtekin váhrif á misnotkun lyfjaPerrotti o.fl., 2008) og langvarandi streitu (Perrotti o.fl., 2004) eykur tjáningu umritunarstuðils fosB / deltafosB í barksterakerfinu. Tilkynnt hefur verið um uppsöfnun FosB / DeltaFosB á þessum svæðum til að gegna lykilhlutverki í þanþol gegn streitu (Berton o.fl., 2007 og Vialou et al., 2010) og í gefandi áhrifum kókaíns (Harris et al., 2007 og Muschamp et al., 2012), etanól (Kaste o.fl., 2009 og Li et al., 2010) og ópíóíða (Zachariou et al., 2006 og Solecki o.fl., 2008). Þess vegna er mögulegt að FosB / DeltaFosB móti suma taugaæxlunartilvikanna sem tengjast etanólvöldum næmni hreyfis, svo og afturköllun sem leiðir til öflunarstigs hreyfifræðilegs næmingar.

Það er athyglisvert að það er einstök munur sem sést við breytinguna frá afþreyingarnotkun í eiturlyfjafíkn (Flagel et al., 2009, George og Koob, 2010 og Swendsen og Le Moal, 2011). Til dæmis eru DBA / 2 J mýs líklegri til að bregðast við en C57BL / 6 J við etanól framkallaðri næmingu fyrir hreyfimyndum (Phillips o.fl., 1997 og Melón og Boehm, 2011a). Í útrétta svissneskum músum var atferlisbreytileikanum varðandi hreyfingu næmur hreyfi fyrir etanóli fyrst lýst af Masur og dos Santos (1988). Upp frá því hafa aðrar rannsóknir sýnt fram á mikilvæga taugafræðilega eiginleika sem tengjast hegðunarbreytileika í öflun á næmisviðbrögðum af völdum etanóls (Souza-Formigoni o.fl., 1999, Abrahão o.fl., 2011, Abrahão o.fl., 2012, Quadros o.fl., 2002a og Quadros o.fl., 2002b). Samt sem áður tóku þessar rannsóknir ekki til áhrifa á hegðunarbreytileika á fráhvarfstímabilinu eftir öflunarstig hreyfingarofnæmis. Í nýlegri rannsókn lýsti rannsóknarstofa okkar marktækum mun á næmum og ónæmum, útréttum svissneskum músum varðandi tjáningu kannabínóíðviðtaka af gerðinni 1 (CB1R) við fráhvarf. Í þeirri rannsókn höfðu næmar (en ekki ónæmar mýs) aukið CB1R tjáningu í forstilla heilaberki, ventral tegmental svæði, amygdala, striatum og hippocampus (Coelhoso o.fl., 2013).

Miðað við vel þekktan hegðunarbreytileika hjá svenskum músum sem eru útræddir varðandi etanól framkallaðan næmni fyrir hreyfihreyfingu og að þessi breytileiki fylgir sérstökum taugaefnafræðilegum eiginleikum við síðari afturköllun, kannaði þessi rannsókn tjáningu FosB / DeltaFosB í næmum og næmum músum í upphafi (18 klst.) Og eftir 5 daga uppsögn.

2. Efni og aðferðir

2.1. Efni

Útræktar svissneskar Webster mýs (EPM-1 Colony, São Paulo, SP, Brasilía), upphaflega fengnar úr Albino Swiss Webster línunni frá Center for the Development of Animal Models in Biology and Medicine við Universidade Federal de São Paulo, voru notaðar . Mýs voru 12 vikna (30–40 g) þegar prófanir hófust. Hópar með 10 músum voru hýstir í búrum (40 × 34 × 17 cm) með flís rúmfötum. Hitastigi (20–22 ° C) og rakastigi (50%) stjórnaðri nýlendu dýra var haldið við ljós / dökk hringrás (12/12 klst.), Með ljós logað klukkan 07:00 klst, með músarkögglum og kranavatni libitum, nema í prófunum. Músum var haldið við þessar aðstæður í húsnæði í að minnsta kosti 7 daga áður en lyfjameðferð og hegðunarrannsóknir hófust. Umhirða dýra og tilraunaaðgerðir voru gerðar samkvæmt siðareglum sem samþykktar voru af Siðanefnd dýra og notkun háskólans (bókunarnúmer: 2043/09), samkvæmt tilskipun ESB 2010/63 / ESB um dýratilraunir (http://ec.europa.eu/environmental/chemicals/lab_animals/legislation_en.htm).

2.2. Næmi fyrir hreyfingu

Samskiptareglur um hreyfiofnæmi byggðu á fyrri rannsókn frá eigin rannsóknarstofu (Coelhoso o.fl., 2013). Í byrjun samskiptareglunnar var öllum dýrum sprautað í saltvatni í kviðarhol (ip) og þau prófuð strax í sjálfvirkum virkniöskju (Insight, Brasilía) í 15 mínútur til að koma á grunn hreyfingu. Tveimur dögum síðar var dýrum sprautað daglega með etanóli (2 g / kg, 15% w / v í 0.9% NaCl, ip - EtOH hóp, N = 40) eða saltvatn (svipað magn, ip, - samanburðarhópur, N = 12), á 21 degi. Rétt eftir 1., 7., 14. og 21. sprautuna var dýrum komið fyrir í virkni búrinu í 15 mínútur. Lárétt hreyfing í hverju ástandi var mæld með atferlisgreiningarkerfi (Pan Lab, Spáni). Eins og mátti búast við ( Masur og dos Santos, 1988 og Coelhoso o.fl., 2013), hegðunarbreytileiki í hreyfingum á hreyfingu á 21stdegi öflunarins gerir okkur kleift að dreifa dýrum EtOH hóps í 2 undirhópum: EtOH_High (tekið frá efri 30% dreifingarinnar) og EtOH_Low (tekið úr neðri 30% af neðri hluta dreifing). Þannig voru aðeins 60% dýra með í greiningunni. Þessi stefna er samhljóða þeim sem notaðar voru í rannsóknum sem rannsökuðu einstaklingsbundinn breytileika innan etanól næmni hugmyndafræði ( Masur og dos Santos, 1988, Souza-Formigoni o.fl., 1999, Quadros o.fl., 2002a, Quadros o.fl., 2002b, Abrahão o.fl., 2011, Abrahão o.fl., 2012 og Coelhoso o.fl., 2013).

Eftir flokkunina þar sem tilraunahóparnir voru skilgreindir, gerðum við 2 sjálfstæðar tilraunir samkvæmt tímabundnum forsendum afturköllunartímabilsins: (i) dýr lögð í öflunarfasa og fórnað eftir 18 klukkustunda fráhvarf og (ii) dýr lögð í öflunarfasa og fórnað eftir 5 daga uppsögn. Svo þessi rannsókn samanstóð af 3 tilraunahópum (Control, EtOH_High og EtOH_Low) sem var skipt í 2 undirhópa (18 klst og 5 daga fráhvarf) (N = 6 á hvern undirhóp). Val á þessum tveimur tímamörkum innan fráhvarfstímabilsins var vegna hreyfifræðilegra þátta FosB og DeltaFosB tjáningar eftir 18 klst. Fráhvarfs (eins og útskýrt er í umræðukaflanum) og eftir 5 daga fráhvarf, byggt á fyrri rannsóknum frá rannsóknarstofunni okkar sem rannsökuðu nokkur taugaefnafræðileg einkenni varðandi fráhvarfstíma innan mótefnavaka næmni Fallopa o.fl., 2012 og Escosteguy-Neto o.fl., 2012). Að lokum, til að framkvæma fylgni milli hreyfingarnæmis og FosB / DeltaFosB tjáningar, reiknuðum við út stig næmis fyrir hreyfihreyfingu fyrir hvert dýr, með formúlunni: skor = (hreyfing á 21. degi - hreyfing á fyrsta degi) * 1 / hreyfing í 100. dagur.

2.3. Ónæmissjúkdómafræði

Eftir viðkomandi fráhvarfstímabil voru dýr svæfð með kokteil sem innihélt ketamín (75 mg / kg, ip) og xylazine (25 mg / kg, ip). Eftir glatað viðbragð glataðs voru þeir smitaðir í hjartalínurit með 100 ml af fosfatbufferlausn 0.1 M [fosfatbuffaðri saltvatni (PBS)] og síðan 100 ml af 4% paraformaldehýði (PFA). Heilinn var fjarlægður strax eftir perfusion, geymdur í PFA í 24 klst og síðan geymdur í 30% súkrósa / PBS lausn í 48 klst. Raðkórónahlutar (30 μm) voru skornir með því að nota frystandi míkrótóm og geymdir inni í frystivarnarlausn til að nota við ónæmisfræðilega efnafræðilegar aðferðir með fríflotandi litun.

Fyrir ónæmisfræðiefnafræði var framkvæmd hefðbundin aðferð við avidin – biotin – immunoperoxidasa. Heiladeildir allra tilraunahópa voru teknar með í sama hlaupi, voru meðhöndlaðar með vetnisperoxidasa (3%) í 15 mínútur og síðan þvegnar með PBS í 30 mínútur. Síðan voru allir hlutar útsettir á 30 mín í PBS-BSA 5% til að forðast ósértæk viðbrögð. Eftir það voru hlutar ræktaðir á einni nóttu með aðal mótefna kanínunni andstæðingur FosB / DeltaFosB (1: 3,000; Sigma Aldrich, St Louis, MO, Bandaríkjunum. Nr. Katt AV32519) í PBS-T lausn (30 ml PBS, 300 μl Triton X-100). Í framhaldi af því voru hlutar ræktaðir í 2 klst í biotinylated geit and-kanína IgG aukamótefni (1: 600; Vector, Burlingame, CA, Bandaríkjunum) við stofuhita. Hlutarnir voru síðan meðhöndlaðir með avidin-biotin flókna (Vectastain ABC staðalbúnaður; Vector, Burlingame, CA, Bandaríkjunum) í 90 mínútur og fengu nikkel-magnaðri díamínóbensidín viðbrögð. Milli þrepa voru hlutarnir skolaðir í PBS og hrærðir á snúningi. Hlutar voru festir á gelatínhúðaðar glærur, þurrkaðir, þurrkaðir og þakið.

Eftirfarandi heilasvæði voru greind: forrétthyrnd heilaberki [fremri cingulate heilaberki (Cg1), prelimbic heilaberki (PrL) og infralimbic heilaberki (IL)], mótor heilaberki [aðal (M1) og framhaldsskammtur (M2)], riddarastrengur (dorsomedial striatum) DmS) og dorsolateral striatum (DlS)], ventral striatum [nucleus accumbens core (Acbco) og skel (Acbsh), ventral pallidum (VP)], hippocampus [pyramidal lag af Cornus Ammong 1 og 3 (CA1 og CA3, hver um sig), kornað lag af dentate gyrus (DG)], amygdala [basolateral nucleus (BlA) og central nucleus (CeA)], miðlægur kjarni undirstúku (VMH) og ventral tegmental area [anterior (VTAA) og posterior (VTAP) hlutar) ( Sjáðu 1. mynd). Nikon Eclipse E200 smásjá tengd tölvu var notuð til að taka myndir úr hverjum hluta í stækkun × 20. Myndirnar voru vistaðar sem .tiff skjalasöfn til að greina aftan á FosB / DeltaFosB ónæmisvirkni. Ónæmisvirku frumurnar voru taldar með ImageJ hugbúnaðinum (NIH Image, Bethesda, MD, Bandaríkjunum). Heilasvæðin voru afmörkuð á hverri ljósmynd samkvæmt The Stereotaxic Mouse Brain Atlas (Franklin og Paxinos, 1997). Þar sem smámyndir teknar af smásjánni tákna 2.5 × 10³ Μm² í 20 × stækkun er magn FosB / DeltaFosB merktra frumna gefið upp sem meðaltal ónæmislitunarfrumna á 2.5 × 10³ Μm². Gildin sem fengust í EtOH hópunum voru eðlileg við samanburðargildin og gefin upp sem%. (Stjórn = 100%).

2.4. tölfræðigreining

Upphaflega var Shapiro – Wilk notað til að sannreyna dreifingu allra breytna. Hegðunarniðurstöður voru greindar með einstefnu ANOVA fyrir endurtekna mælingu með tilliti til þáttar 5 tímabil hreyfingarnæmis: basal, dagur 1, dagur 7, dagur 14 og dagur 21. Vefjafræðilegar niðurstöður voru greindar með tvíhliða ANOVA, miðað við sem þættir: fráhvarfstími (18 klst og 5 dagar) og tilraunahópur (Control, EtOH_High og EtOH_Low). Breyturnar sem ekki voru mælikvarðar voru staðlaðar í Z stig til að draga úr dreifingu gagna og síðan beitt í tvíhliða ANOVA, eins og áður var lýst. Newman Keuls post-hoc var notað þegar þörf krefur. Að lokum könnuðum við möguleg fylgni milli FosB / DeltaFosB jákvæðra frumna og stigs næmis fyrir hreyfifærum. Þessar fylgni voru eingöngu reiknuð fyrir kjarnana þar sem tölfræðilegur munur hafði verið á tilraunahópum. Vegna þess að þessi munur var takmarkaður við 5 daga fráhvarf (sjá kafla niðurstaðna) vísa FosB / DeltaFosB gildi sem talin eru til í þessum fylgni til þessa sérstaka tímabils afturköllunar. Vegna þess að þessi munur var takmarkaður við 5 daga fráhvarf (sjá kafla niðurstaðna) vísa FosB / DeltaFosB gildi sem talin eru í þessum fylgni til þessa sérstaka tíma afturköllunar. Marktæknistigið var sett á 5% (p <0.05).

3. Niðurstöður

3.1. Næmi fyrir hreyfingu

ANOVA fyrir endurteknar mælingar greindu verulegur munur á hópstuðlinum [F_(2,32) = 68.33, p <0.001], á tímabili siðareglna [F_(4,128) = 9.13, p <0.001] og samspil þeirra [F_(8,128) = 13.34, p <0.001]. Enginn munur var á grunn hreyfingu og báðir EtOH hóparnir höfðu svipaða hreyfingaaukningu á fyrsta degi yfirtöku, samanborið við samanburðarhópinn (p <0.01). Hins vegar sýndi EtOH_High (en ekki EtOH_Low) framsækna aukningu á hreyfivirkni allan öflunarstigið (p <0.01, miðað við Control og EtOH_Low hópa, á síðasta kaupdegi; p <0.01 miðað við hreyfivirkni þess fyrsta kaupdaginn) ( 2. mynd). Þessi gögn staðfestu niðurstöður upprunalegu rannsóknarinnar ( Masur og dos Santos, 1988) og úr fyrri skýrslu okkar ( Coelhoso o.fl., 2013) varðandi hegðunarbreytileika í svívirku músum með úthreinsun sem lagðar voru fram til næmingar á hreyfingu fyrir etanóli.

3.2. FosB / DeltaFosB tjáning

Lýsandi ljósmyndagerð FosB / DeltaFosB ónæmisvirkni er sýnd í 3. mynd og staðlað gildi eru sýnd í 4. mynd, 5. mynd, 6. mynd og 7. mynd. Tvíhliða ANOVA fannst marktækur munur á M1, M2, DmS, DlS, Acbco, Acbsh, VP og VTA (fyrir óstaðlað gildi FosB / DeltaFosB ónæmisvirkni og tölfræðilegar greiningar á öllum byggingum, sjá Tafla Suppl1 og Tafla 1, í sömu röð). Í mannvirkjunum þar sem hægt var að sjá tölfræðilegan mun voru fjögur mismunandi mynstur FosB / DeltaFosB tjáningar. Í þeirri fyrstu, sem kom fram í M1 og M2, varð aukning á tjáningu FosB / DeltaFosB á fimmta degi fráhvarfs etanóls aðeins í EtOH_High hópnum (samanborið við EtOH_High gildi við 18 klst. Fráhvarfs, sem og við stjórn og EtOH_Lága hópa eftir 5 daga uppsögn) (sjá 4. mynd). Í öðru mynstrinu, sem kom fram í VTAA, jókst FosB / DeltaFosB tjáning aðeins 5 daga eftir etanól í EtOH_Low hópnum (samanborið við EtOH_Low gildi við 18 klst. Fráhvarf, sem og við samanburðarhópinn eftir 5 daga fráhvarf ) (sjá 5. mynd). Í þriðja mynstrinu, sem kom fram í DmS, Acbco og Acbsh, jókst FosB / DeltaFosB tjáning eftir 5 daga fráhvarf af etanóli í báðum EtOH_High og EtOH_Low hópunum (samanborið við gildi þeirra við 18 klst fráhvarf), þó aðeins EtOH_Low hópurinn frábrugðin stjórnhópi (sjá 6. mynd). Að lokum, í fjórða mynstrinu, sem kom fram í DlS og VP, jókst FosB / DeltaFosB tjáning eftir 5 daga fráhvarf etanóls í báðum EtOH_High og EtOH_Low hópunum (samanborið við gildi þeirra við 18 klst. Fráhvarf), þó að þessi aukning hafi verið tölfræðilega meira svipmikil í EtOH_Low en í EtOH_High hópi, og aðeins EtOH_Low hópur var frábrugðinn Control Group (sjá 7. mynd).

Til að staðfesta að breytingar á FosB / DeltaFosB tjáningu væru vegna fráhvarfs og ekki vegna útsetningar etanóls, gerðum við fylgni milli stigs hreyfingarofnæmis og FosB / DeltaFosB ónæmismerktu frumna á 5. degi fráhvarfs í kjarna hér að ofan (M1, M2, Acbco, Acbsh, DmS, DlS, VP, VTAA). Eins og búist var við voru engar marktækar fylgni fyrir neina af þessum kjarna (M1 - r² = 0.027862, p = 0.987156; M2 - r² = 0.048538, p = 0.196646; Acbco - r² = 0.001920, p = 0.799669; Acbsh - r² = 0.006743, p = 0.633991; DmS - r² = 0.015880, p = 0.463960; DlS - r² = 0.023991, p = 0.914182; VP - r² = 0.002210, p = 0.785443; VTAA - r² = 0.001482, p = 0.823630).

4. Umræður

Niðurstöðurnar sem fram hafa komið í þessari rannsókn benda til þess að aukin tjáning FosB / DeltaFosB sem sést hefur í etanól af völdum hreyfingarnæmisviðmiðunarinnar sé líklega tengd fráhvarfi frekar en langvarandi útsetningu fyrir lyfjum. Samt sem áður fylgdi breytileiki hegðunar í næmni hreyfingarþroska í þróun með sérstökum mynstrum FosB / DeltaFosB tjáningar við fráhvarf. Hlutverk vélknúinna heilabólgu, ventral tegmental svæði og striatum í öflun og tjáningu hreyfingarofnæmisviðmiðunar er vel staðfest (Vanderschuren og Pierce, 2010). Ennfremur er afnám mesólimbísks ferli einn af megin taugasálfræðilegum eiginleikum fráhvarfstímabils, ásamt tilkomu langvarandi amygdala (Koob og Le Moal, 2005 og Koob og Le Moal, 2008). Hins vegar voru aðeins fáar rannsóknir sem kanna fráhvarfstíma hreyfingarnæmisviðmiðunar. Niðurstöður okkar urðu fyrir athyglisverðum breytingum á tjáningu FosB / DeltaFosB í mótor heilaberki, ventral tegmental svæði og striatum á þessu tímabili.

FosB cDNA kóðar tjáningu 33, 35 og 37 kDa próteina. Útsetning fyrir bráðu áreiti leiðir til sterkrar 33- og stakrar 35- og 37- kDa Fos prótein örvunar. Sem afleiðing, undir bráðri virkjun, er ríkjandi FosB tjáning tengd 33 kDa (McClung et al., 2004 og Nestler, 2008). Það er annar merkilegur munur á þessum próteinum: aðeins 35–37 kDa prótein eru mjög stöðug ísóform. Vegna þessa mikla stöðugleika safnast þessi styttu form FosB, einnig kallað DeltaFosB, saman í heilanum og eru mjög tjáð sem viðbrögð við langvarandi áreiti, svo sem geðlyfjum, langvarandi krampa í krampa og streitu (Kelz og Nestler, 2000, Nestler o.fl., 2001 og McClung et al., 2004). Þess vegna hefur verið litið á DeltaFosB sem viðvarandi sameindalofa til að miðla myndum langvarandi tauga- og atferlisplastleika. Athyglisvert er að glæsileg rannsókn þar sem notuð var músalínur sem tjáðu á mismunandi hátt FosB og DeltaFosB sýndu að FosB er nauðsynleg til að auka álagsþol og óvirkir einnig fylgni milli hreyfiaðgerðar af völdum geðlyfja og uppsöfnun DeltaFosB í striatum (Ohnishi o.fl., 2011). Þess vegna gætu bæði prótein gegnt mikilvægum hlutverkum í tilraunareglunni sem notuð var í þessari rannsókn. Það er athyglisvert að FosB mótefnið sem notað er þekkir bæði FosB og DeltaFosB. Þar sem FosB minnkar í upphafsgildi innan 6 klst. Eftir bráð áreiti (Nestler o.fl., 2001) og DeltaFosB safnast upp eftir ítrekaða útsetningu fyrir áreiti, ákváðum við að fórna dýrunum 18 klst. eftir öflunarstigið, til að forðast mögulega hlutdrægni etanólmeðferðar yfir FosB tjáningu. Engu að síður, til að vera tæknilega nákvæmur, munum við vísa í þessari rannsókn sem FosB / DeltaFosB tjáningu. Það er mikilvægt að hafa í huga að þessi stefna hefur verið notuð í öðrum rannsóknum, þar á meðal þeim sem notuðu sama frummótefnið og lýst er hér (Conversi o.fl., 2008, Li et al., 2010, Flak o.fl., 2012 og García-Pérez o.fl., 2012). Fyrir vikið, auk þessara tilraunatakmarkana, munum við ræða niðurstöður okkar með hliðsjón af hlutverki DeltaFosB í taugafrumum.

Það er vel staðfest að langvarandi útsetning lyfja eykur tjáningu FosB / DeltaFosB á nokkrum svæðum í heila (Nestler o.fl., 2001 og Perrotti o.fl., 2008). Forvitnilegt er að í þessari rannsókn voru hvorki etanólnæmar né etanól ónæmar mýs frábrugðnar langvarandi saltvatnsmúsum varðandi FosB / DeltaFosB tjáningu 18 klst. Ennfremur voru engin marktæk fylgni milli tjáningar FosB / DeltaFosB og stigs næmingar hreyfis. Þessi frávik gæti verið skýrð, að minnsta kosti að hluta, með þeim mun sem er að finna í tilraunaskránni. Til dæmis, miðað við útsetningu fyrir etanóli, var tveggja hugmynda um frjálsa val í tveimur flöskum notað í 15 rannsóknum með hléum (Li et al., 2010) eða næringarfræðilega heilt fljótandi fæði gefið sjálfvirkt á 17 dögum (þar sem dýr neyta etanóls í skömmtum á bilinu 8 til 12 g / kg / dag) (Perrotti o.fl., 2008). Í annarri rannsókn, þó að höfundarnir vísi til langvarandi meðferðar, samanstóð bókunin aðeins í 4 etanól útsetningu (Ryabinin og Wang, 1998). Svo að samskiptareglur sem notaðar eru annars staðar eru algerlega aðgreindar þeim sem notaðar eru hér, sem samanstóð af 21 dags meðferð þar sem daglegur etanól sprautur var gefinn af tilraunum. Þrátt fyrir þennan mun eru nokkrar rannsóknir sem fela í sér inndælingar í kviðarhol þar sem greint er frá aukningu á tjáningu FosB / DeltaFosB eftir samskiptareglum um næmi fyrir hreyfifærni af völdum geðörvandi lyfja (Brenhouse og Stellar, 2006, Conversi o.fl., 2008 og Vialou et al., 2012) og ópíóíða (Kaplan o.fl., 2011). Samskiptareglur um hreyfiofnæmi í þessum rannsóknum fela þó í sér miklu minna en 21 útsetningu fyrir lyfjum, og í sumum þeirra var lyfið gefið með hléum. Aftur á móti notaði siðareglur okkar sömu meðferð og lýst var í fyrri rannsóknum sem innihéldu 21 daglegar etanól sprautur (Masur og dos Santos, 1988, Souza-Formigoni o.fl., 1999, Quadros o.fl., 2002a, Quadros o.fl., 2002b, Abrahão o.fl., 2011 og Abrahão o.fl., 2012). Vísbendingar eru um að þrátt fyrir að langvarandi gjöf kókaíns stuðli að uppsöfnun DeltaFosB tjáningar í kjarna accumbens, þá stuðlar það einnig að umburðarlyndi gagnvart DeltaFosB mRNA örvun bæði í ventral og í ristli á bakinu (Larson o.fl., 2010). Þess vegna héldum við fram að skortur á mismun á tilraunahópum okkar í öflunarstiginu gæti verið vegna umburðarlyndis varðandi örvun FosB / DeltaFosB, þar sem í þessari samskiptareglu var stærra tímabil öflunarstigs samanborið við tímabil sem notuð voru til geðörvandi og ópíóíða. í öðrum rannsóknum.

Rannsóknir sem notuðu rothögg og erfðabreyttar mýs sýndu að FosB stökkbreyttar mýs hafa aukið hegðunarsvörun við kókaíni, svo sem örvandi áhrif á hreyfi og skilyrt staðsetningarval. Ennfremur er tjáning á bæði basal- og kókaínframkallaða DeltaFosB fjarverandi í þessum stökkbreyttu músum (Hiroi o.fl., 1997). Aftur á móti sýna erfðabreyttar mýs með framkallaða ofþjáningu DeltaFosB aukna næmi fyrir gefandi áhrifum kókaíns og morfíns (Muschamp et al., 2012). Þessar niðurstöður komu fram beinar vísbendingar um nána fylgni milli DeltaFosB og gefandi ferlisins. Fyrir utan endurteknar váhrif á lyf, eykur langvarandi streitu DeltaFosB tjáningu í barksterarásum (Perrotti o.fl., 2004). Athyglisvert er að erfðabreyttar mýs, sem ofþýða DeltaFosB, eru ekki eins viðkvæmar fyrir þunglyndisáhrifum kappa-ópíóíðörva, sem vitað er að valda dysphoria og streitu-eins áhrifum hjá nagdýrum (Muschamp et al., 2012). Svo, auk verðlaunaferlisins, gegnir DeltaFosB einnig lykilhlutverki í tilfinningalegum þáttum fyrirbæranna. Í þessari atburðarás gæti afturköllun komið af stað FosB / DeltaFosB tjáningu, þar sem streita er lykilþáttur í fráhvarfi lyfs. Þetta sjónarhorn er í samræmi við niðurstöður okkar, vegna þess að engin fylgni var milli tjáningar FosB / DeltaFosB og stigs næmingar, og ennfremur sást aukningin á FosB / DeltaFosB tjáningu aðeins á fimmta degi fráhvarfs.

Athyglisvert er að í sumum mannvirkjum sáust hækkanir á FosB / DeltaFosB bæði í EtOH_High og EtOH_Low hópnum, þó meira áberandi í fyrri hópnum, sem bendir til þess að þessar hækkanir gætu haft mismunandi hagnýtar afleiðingar, í samræmi við styrkleika þeirra. Þessa tilgátu var hægt að skýra með nokkrum aðgreindum hlutverkum FosB / DeltaFosB. Til dæmis höfðu rottur, sem voru langvarandi útsettar fyrir kókaíni, aukið tjáningu DeltaFosB í kjarnaaðilum meðan á afturköllunartímabilinu stóð, áhrif sem voru jákvæð í tengslum við kókaínvalkost, en neikvætt með nýsköpunarvalkosti. Ennfremur eykur streita við fráhvarf hegðunarviðbrögð við geðörvandi lyfjum með því að auka tjáningu DeltaFosB í barkstera í taugafrumum (Nikulina o.fl., 2012). Svo, DeltaFosB gæti spáð fyrir um truflun á hedonic vinnslu sem á sér stað við langvarandi afturköllun (Marttila o.fl., 2007). Á hinn bóginn eru bæði seiglan gagnvart streitu og svörun gegn þunglyndislyfjum tengd hærri DeltaFosB tjáningu í striatum (Vialou et al., 2010). Þess vegna veltum við fyrir okkur að aukið FosB / DeltaFosB á striatum í EtOH_High hefði getað aukið gefandi áhrif etanóls og veitt aukinni næmi fyrir síðari útsetningu fyrir lyfjum. Á hinni hliðinni, gat meiri aukning á FosB / DeltaFosB sem sást í EtOH_Low hópnum, getað minnkað næmni fyrir bæði meltingartruflunum og streituáhrifum, lágmarkað neikvæða styrkingaráhrif af síðari váhrifum lyfja og þar af leiðandi útskýrt meiri mótstöðu í þessu hópur. Athyglisvert er að þessi þversögn hafði taugakemískan grunn. Til dæmis, með erfðabreyttum músum sem ofþjáðu FosB í miðlungs hrygg GABAergic taugafrumum í nucleus accumbens höfðu aukið magn bæði mú- og kappa-ópíóíðviðtaka (Sim-Selley o.fl., 2011), og þessir viðtakar auka og hindra mesólimbatón (í sömu röð)Manzanares o.fl., 1991 og Devine o.fl., 1993). Ennfremur, tjáning frumna gæti einnig breytt verulegum afleiðingum aukinnar FosB / DeltaFosB á harkalegan hátt. Í glæsilegri rannsókn þar sem notuð var mýs sem ofþjáðu DeltaFosB í D1- eða D2- sem tjáðu taugafrumur í kjarna accumbens leiddu í ljós að DeltaFosB í D1- (en ekki í D2-) taugafrumum eykur hegðunarviðbrögð við kókaíni (Grueter et al., 2013).

Forvitnilegt, varðandi hreyfibarka, var aukning á tjáningu FosB / DeltaFosB aðeins í EtOH_High hópnum og það var takmarkað við 5. dag fráhvarfs. Skortur á aukningu við 18 klst. Fráhvarf gæti verið skýrður með mögulegu þolskerfi í FosB / DeltaFosB tjáningu á þessu svæði eftir langvarandi útsetningu fyrir etanóli. Ennfremur benda niðurstöður okkar til þess að það séu virkar taugefnafræðilegar breytingar á hreyfibarki á fráhvarfstímabilinu, þrátt fyrir að dýrunum hafi ekki verið hagrætt á þessu tímabili. Þetta er athyglisvert, vegna þess að þessi mýkt getur gegnt hlutverki, að minnsta kosti að hluta, til að viðhalda næmingu hreyfis. Þrátt fyrir að viðvarandi ofurhreyfing eftir nokkra daga fráhvarf hafi ekki verið rannsökuð hér eru nokkrar rannsóknir, þar á meðal fyrri frá rannsóknarstofu okkar, sem sýndu að næmar mýs (en ekki ónæmar) höfðu aukna hreyfingu þegar áskorun var gerð við etanól eftir tiltekinn fráhvarfstíma (Masur og dos Santos, 1988, Souza-Formigoni o.fl., 1999, Quadros o.fl., 2002a, Quadros o.fl., 2002b, Abrahão o.fl., 2011, Abrahão o.fl., 2012, Fallopa o.fl., 2012 og Coelhoso o.fl., 2013).

Að lokum er það athyglisvert að aðeins EtOH_Low hópurinn sýndi aukna FosB / DeltaFosB tjáningu á fremri (en ekki aftari) hluta ventral tegmental svæðisins. Þessir hlutar eru með sérstaka áætlun og taugakemísk snið og þátttaka þeirra í umbunaferlinu er háð nokkrum þáttum (Ikemoto, 2007). Til dæmis er sjálfsstjórnun etanóls á rottum tengd aftanverðu, en ekki við leggshluta v tegtegalsvæðisins (Rodd-Henricks o.fl., 2000 og Rodd o.fl., 2004). Ennfremur gegnir endocannabinoid kerfið, svo og GABA-A, dópamínvirka D1-D3, og serótónínvirka 5HT3 viðtökur mikilvægu hlutverki í etanól leitandi hegðun (Linsenbardt og Boehm, 2009, Rodd o.fl., 2010, Melón og Boehm, 2011b og Hauser o.fl., 2011). Samt sem áður er GABA-B í fremri hluta miðlæga tegmentalsvæðisins mikilvægur hvað varðar gefandi (Moore og Boehm, 2009) og örvandi hreyfiáhrif (Boehm et al., 2002) af etanóli. Ennfremur taka kólínvirkir nikótínviðtakar í fremri hluta þátt í auknu uppsöfnuðu dópamínmagni af völdum etanóls (Ericson o.fl., 2008). Þess vegna, óháð sérstöku sniði þessara hluta, er mögulegt að breytingar sem sáust í EtOH_Low hópnum í fremri hlutunum gætu tengst gefandi ferli. Langvarandi kókaín en ekki langvarandi útsetning fyrir morfíni eða langvarandi streitu eykur DeltaFosB á ventral tegmental svæði, sérstaklega hjá gamab amínósmjörsýru (GABA) frumuþýðingu (Perrotti o.fl., 2005). Þessi staðreynd gæti útskýrt eðlilegt magn FosB / DeltaFosB við fráhvarf sem kom fram á ventr tegmental svæði EtOH_High músa, óháð væntanlegri reynslu af mikilli streitu á þessu tímabili. Ennfremur staðfesta þessi gögn, að minnsta kosti að hluta til, þá tilgátu að aukning á FosB / DeltaFosB tjáningu við fráhvarf í EtOH_Low gæti verið einkennd sem aðlögunarviðbrögð.

Einstakur munur sem sást við breytinguna frá afþreyingarnotkun í eiturlyfjafíkn er merkilegur (Flagel et al., 2009, George og Koob, 2010 og Swendsen og Le Moal, 2011). Fyrir vikið er brýnt að rannsaka taugalíffræðilega eiginleika sem tengjast mismunandi breytileika. Hegðunarnæming er dýralíkan sem oft er notað til að rannsaka taugalíffræðilega eiginleika eiturlyfjafíknar. Grunnur þessa líkans er að huglæg áhrif lyfjanna aukast með endurteknum útsetningum þeirra. Þegar það hefur verið aflað, er næming á hreyfingu langvarandi og er í beinu tímabundnu sambandi við formfræðilegar og taugefnafræðilegar breytingar á mesólimbískum farvegi og nokkrum heilakjarna kjarna sem tengjast tilfinningasemi og hreyfivirkni (Robinson og Kolb, 1999 og Vanderschuren og Pierce, 2010). Brautryðjandarannsókn gerð af Masur og dos Santos (1988) sýnt fram á að mikill hegðunarbreytileiki er í útréttum svissneskum músum varðandi næmingu á hreyfi fyrir hreyflum vegna etanóls. Héðan í frá hafa aðrar rannsóknir sýnt fram á mikilvæga fylgni milli taugakemískra eiginleika og breytileika í hegðun, aðallega þeim sem tengjast dópamínvirkni (Abrahão o.fl., 2011, Abrahão o.fl., 2012 og Souza-Formigoni o.fl., 1999) og glutamatergic kerfin (Quadros o.fl., 2002a og Quadros o.fl., 2002b). Ennfremur sýndi fyrri rannsókn frá rannsóknarstofu okkar, þar sem notuð var staðbundið næmispróf, etanól, framkölluð (en ekki næmar) mýs, áberandi aukning á kannabínóíðviðtaka gerð 1 (CB1R) á afturköllunartímabilinu (Coelhoso o.fl., 2013). Hér greindum við mismunandi mynstur FosB / DeltaFosB tjáningar við fráhvarf milli EtOH_High og EtOH_Low hópa.

Til að draga saman, er breytileiki í hegðun sem sást í öflunarstigi etanól völdum hreyfingarofnæmis fylgt með sérstökum taugafrumleikum meðan á afturköllunartímabilinu stendur. Athyglisvert er að niðurstöður okkar benda til þess að mismunandi mynstur FosB / DeltaFosB tjáningar sem greindust í næmum og ónæmum músum séu meira tengd fráhvarfstímabili frekar en langvarandi útsetningu fyrir lyfjum, líklega vegna umburðarlyndis af umbreytingu FosB / DeltaFosB umritunar.

Eftirfarandi eru viðbótargögn sem tengjast þessari grein.

Meðmæli

• Nikulina o.fl., 2012
• EM Nikulina, MJ Lacagnina, S. Fanous, J. Wang, RP Hammer Jr.
• Með hléum félagslegur ósigur streita eykur mesocorticolimbic ΔFosB / BDNF sam-tjáningu og virkjar stöðugt barkstækkandi taugafrumur: afleiðing fyrir varnarleysi fyrir geðörvandi lyfjum
• Neuroscience, 212 (2012), bls. 38-48
• Grein

  |

   PDF (1552 K)

  |

  Skoða skrá í Scopus

   | 

  Vitna í greinar (12)
•  
• Vialou et al., 2012
• V. Vialou, J. Feng, AJ Robison, SM Ku, D. Ferguson, KN Scobie, et al.
• Bæði prótein í sermi og cAMP svörunarþátt bindandi prótein eru bæði nauðsynleg vegna örvunar kókaíns á osFosB
• J Neurosci, 32 (2012), bls. 7577 – 7584
• Skoða skrá í Scopus

  |

  Full Text með CrossRef

   | 

  Vitna í greinar (17)
• Vanderschuren og Pierce, 2010
• LJ Vanderschuren, RC Pierce
• Næmingarferli í eiturlyfjafíkn
• Curr Top Behav Neurosci, 3 (2010), bls. 179 – 195
• Skoða skrá í Scopus

  |

  Full Text með CrossRef

   | 

  Vitna í greinar (53)
• Vanderschuren og Kalivas, 2000
• LJ Vanderschuren, PW Kalivas
• Breytingar á dópamínvirkum og glútamatergískum smiti við framköllun og tjáningu hegðunarnæmingar: gagnrýnin endurskoðun á forklínískum rannsóknum
• Psychopharmacology (Berl), 151 (2000), bls. 99-120
• Skoða skrá í Scopus

  |

  Full Text með CrossRef

   | 

  Vitna í greinar (884)
• Swendsen og Le Moal, 2011
• J. Swendsen, M. Le Moal
• Einstök varnarleysi vegna fíknar
• Ann NY Acad Sci, 1216 (2011), bls. 73 – 85
• Skoða skrá í Scopus

  |

  Full Text með CrossRef

   | 

  Vitna í greinar (35)
• Souza-Formigoni o.fl., 1999
• ML Souza-Formigoni, EM De Lucca, DC Hipólide, SC Enns, MG Oliveira, JN Nobrega
• Næming fyrir örvandi áhrifum etanóls er tengd staðbundinni aukningu á D2 viðtakabindingu í heila
• Psychopharmaology, 146 (1999), bls. 262 – 267
• Skoða skrá í Scopus

  |

  Full Text með CrossRef

   | 

  Vitna í greinar (54)
• Solecki o.fl., 2008
• W. Solecki, T. Krowka, J. Kubik, L. Kaczmarek, R. Przewlocki
• Hlutverk fosB í hegðun sem tengist morfínlaun og staðbundinni minni
• Behav Brain Res, 190 (2008), bls. 212 – 217
• Grein

  |

   PDF (328 K)

  |

  Skoða skrá í Scopus

   | 

  Vitna í greinar (7)
• Sim-Selley o.fl., 2011
• LJ Sim-Selley, þingmaður Cassidy, A. Sparta, V. Zachariou, EJ Nestler, DE Selley
• Áhrif overFosB ofþrýstings á ópíóíð og kannabínóíð viðtaka miðluð merki í kjarna accumbens
• Neuropharmacology, 61 (2011), bls. 1470-1476
• Grein

  |

   PDF (446 K)

  |

  Skoða skrá í Scopus

   | 

  Vitna í greinar (10)
• Ryabinin og Wang, 1998
• AE Ryabinin, YM Wang
• Endurtekin gjöf áfengis hefur mismunandi áhrif á c-Fos og FosB prótein ónæmisviðbrögð í DBA / 2 J músum
• Alcohol Clin Exp Res, 22 (1998), bls. 1646 – 1654
• Skoða skrá í Scopus

  |

  Full Text með CrossRef

   | 

  Vitna í greinar (33)
• Rodd-Henricks o.fl., 2000
• ZA Rodd-Henricks, DL McKinzie, RS Crile, JM Murphy, WJ McBride
• Sviðsleysi fyrir sjálfan gjöf etanóls innan höfuðkúpu innan ventral tegmentalsvæðis hjá kvenkyns Wistar rottum
• Psychopharmacology (Berl), 149 (2000), bls. 217-224
• Skoða skrá í Scopus

  |

  Full Text með CrossRef

   | 

  Vitna í greinar (130)
• Rodd o.fl., 2010
• ZA Rodd, RL Bell, SM Oster, JE Toalston, TJ Pommer, WJ McBride, et al.
• Serótónín-3 viðtökur á afturhluta miðlæga tegmentalsvæðinu stjórna sjálfri etanólgjöf áfengisvals (P) rottna
• Áfengi, 44 (2010), bls. 245 – 255
• Grein

  |

   PDF (604 K)

  |

  Skoða skrá í Scopus

   | 

  Vitna í greinar (19)
• Rodd o.fl., 2004
• ZA Rodd, RI Melendez, RL Bell, KA Kuc, Y. Zhang, JM Murphy, et al.
• Sjálf gjöf etanóls innan höfuðkúpu innan ventral tegmentalsvæðis karlkyns Wistar rottna: vísbendingar um þátttöku dópamín taugafrumna
• J Neurosci, 24 (2004), bls. 1050 – 1057
• Skoða skrá í Scopus

  |

  Full Text með CrossRef

   | 

  Vitna í greinar (111)
• Robinson og Kolb, 1999
• TE Robinson, B. Kolb
• Breytingar á formgerð á dendrites og dendritic spines in the nucleus accumbens and prefrontal cortex eftir endurtekna meðferð með amfetamíni eða kókaíni
• Eur J Neurosci, 11 (1999), bls. 1598 – 1604
• Skoða skrá í Scopus

  |

  Full Text með CrossRef

   | 

  Vitna í greinar (427)
• Quadros o.fl., 2002b
• IM Quadros, JN Nóbrega, DC Hipolide, EM de Lucca, ML Souza-Formigoni
• Mismunandi tilhneiging til ofnæmis etanóls er ekki tengd breyttri bindingu við D1 viðtaka eða dópamín flutning í músheili
• Addic Biol, 7 (2002), bls. 291 – 299
• Skoða skrá í Scopus

  |

  Full Text með CrossRef

   | 

  Vitna í greinar (21)
• Quadros o.fl., 2002a
• IM Quadros, DC Hipólide, R. Frussa Filho, EM De Lucca, JN Nóbrega, ML Souza-Fomigoni
• Ónæmi fyrir etanólnæmi tengist aukinni bindingu NMDA viðtakanna á sérstökum heila svæðum
• Eur J Pharmacol, 442 (2002), bls. 55 – 61
• Grein

  |

   PDF (128 K)

  |

  Skoða skrá í Scopus

   | 

  Vitna í greinar (36)
• Phillips o.fl., 1997
• TJ Phillips, AJ Roberts, CN Lessov
• Hegðunarnæmi fyrir etanóli: erfðafræði og áhrif streitu
• Pharmacol Biochem Behav, 57 (1997), bls. 487 – 493
• Grein

  |

   PDF (186 K)

  |

  Skoða skrá í Scopus

   | 

  Vitna í greinar (101)
• Perrotti o.fl., 2008
• LI Perrotti, RR Weaver, B. Robison, W. Renthal, I. Maze, S. Yazdani, et al.
• Greinilegt mynstur DeltaFosB örvunar í heila með misnotkun lyfja
• Synapse, 62 (2008), bls. 358-369
• Skoða skrá í Scopus

  |

  Full Text með CrossRef

   | 

  Vitna í greinar (79)
• Perrotti o.fl., 2004
• LI Perrotti, Y. Hadeishi, PG Ulery, M. Barrot, L. Monteggia, RS Duman, et al.
• Innleiðing deltaFosB í umbunartengdum heilauppbyggingum eftir langvarandi streitu
• J Neurosci, 24 (2004), bls. 10594 – 10602
• Skoða skrá í Scopus

  |

  Full Text með CrossRef

   | 

  Vitna í greinar (148)
• Perrotti o.fl., 2005
• LI Perrotti, CA Bolaños, KH Choi, SJ Russo, S. Edwards, PG Ulery, et al.
• DeltaFosB safnast upp í GABAergic frumuþýðingu í aftari hala á ventral tegmental svæðinu eftir geðlyfja meðferð
• Eur J Neurosci, 21 (2005), bls. 2817 – 2824
• Skoða skrá í Scopus

  |

  Full Text með CrossRef

   | 

  Vitna í greinar (85)
• Ohnishi o.fl., 2011
• YN Ohnishi, YH Ohnishi, M. Hokama, H. Nomaru, K. Yamazaki, Y. Tominaga, et al.
• FosB er nauðsynleg til að auka álagsþol og mótvægir hreyfingu næmi fyrir byFosB
• Líffræðileg geðlækningar, 70 (2011), bls. 487 – 495
• Grein

  |

   PDF (2016 K)

  |

  Skoða skrá í Scopus

   | 

  Vitna í greinar (13)
•  
•  
•  
•  
•  
•  
•  
•  
•  
•  
•  
•  
•  
•  
•  
•  
•  
•  

• Vialou et al., 2010
• V. Vialou, AJ Robison, QC Laplant, HE Covington III, DM Dietz, YN Ohnishi, et al.
• DeltaFosB í umbunarbrautum heila miðlar seiglu við streitu og svörun þunglyndislyfja
• Nat Neurosci, 13 (2010), bls. 745 – 752
• Skoða skrá í Scopus

  |

  Full Text með CrossRef

   | 

  Vitna í greinar (141)
•  
• Zachariou et al., 2006
• V. Zachariou, CA Bolanos, DE Selley, D. Theobald, þingmaður Cassidy, MB Kelz, et al.
• Nauðsynlegt hlutverk DeltaFosB í kjarnanum sem samanstendur af aðgerð í morfíni
• Nat Neurosci, 9 (2006), bls. 205 – 211
• Skoða skrá í Scopus

  |

  Full Text með CrossRef

   | 

  Vitna í greinar (138)

•  
• Samsvarandi höfundur hjá: Rua Cesário Mota Jr, 61, 12 andar, São Paulo, SP 01221-020, Brasilíu. Sími / fax: + 55 11 33312008.
• 1
• Þessir höfundar tóku jafnan þátt í þessari rannsókn.