ಮೆಥಾಂಫೆಟಮೈನ್-ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಿದ ಫೋಸ್-ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಗೊಳಿಸುವ ನರಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಫ್ಲೋರೆಸೆನ್ಸ್-ಸಕ್ರಿಯ ಜೀವಕೋಶ ವಿಂಗಡಣೆ (ಎಫ್ಎನ್ಎಸ್ಎಕ್ಸ್) (ಎಕ್ಸ್ಎನ್ಎನ್ಎಕ್ಸ್) ಬಳಸಿ ಏಕ ಇಲಿ ಡಾರ್ಸಲ್ ಸ್ಟ್ರೈಟಮ್ನಿಂದ ಆಣ್ವಿಕ ಬದಲಾವಣೆಗಳನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚುವಿಕೆ.

ಮೆಥಾಂಫೆಟಮೈನ್ ಮತ್ತು ಇತರ drugs ಷಧಿಗಳು ಮೆದುಳಿನಲ್ಲಿರುವ ಎಲ್ಲಾ ನ್ಯೂರಾನ್‌ಗಳ ಒಂದು ಸಣ್ಣ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುತ್ತವೆ. ನರ ಚಟುವಟಿಕೆ ಮಾರ್ಕರ್ ಫೋಸ್ ಅನ್ನು ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸುವ ಸಕ್ರಿಯ ನ್ಯೂರಾನ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಆಯ್ದವಾಗಿ ಪ್ರಚೋದಿಸಲ್ಪಟ್ಟ ಆಣ್ವಿಕ ಮಾರ್ಪಾಡುಗಳನ್ನು ನಿರೂಪಿಸಲು ನಾವು ಈ ಹಿಂದೆ ಫ್ಲೋರೊಸೆನ್ಸ್-ಆಕ್ಟಿವೇಟೆಡ್ ಸೆಲ್ ಸಾರ್ಟಿಂಗ್ (ಎಫ್‌ಎಸಿಎಸ್) ಆಧಾರಿತ ವಿಧಾನವನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಿದ್ದೇವೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಈ ವಿಧಾನಕ್ಕೆ ಅನೇಕ ಇಲಿಗಳಿಂದ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಸಂಗ್ರಹಿಸುವ ಅಗತ್ಯವಿದೆ. ಮಲ್ಟಿಪ್ಲೆಕ್ಸ್ ಪೂರ್ವ-ವರ್ಧನೆ ತಂತ್ರವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಒಂದೇ ಇಲಿಯಿಂದ ಫೋಸ್-ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸುವ ಡಾರ್ಸಲ್ ಸ್ಟ್ರೈಟಲ್ ನ್ಯೂರಾನ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಆಣ್ವಿಕ ಮಾರ್ಪಾಡುಗಳನ್ನು ನಿರೂಪಿಸಲು ಮಾರ್ಪಡಿಸಿದ ಎಫ್‌ಎಸಿಎಸ್ ಆಧಾರಿತ ವಿಧಾನವನ್ನು ನಾವು ಈಗ ವಿವರಿಸುತ್ತೇವೆ.

ತೀವ್ರವಾದ ಮೆಥಾಂಫೆಟಮೈನ್ ಚುಚ್ಚುಮದ್ದಿನ ನಂತರ (5 mg / kg, ip) 6 ನಿಮಿಷದ ಡಾರ್ಸಲ್ ಸ್ಟ್ರೈಟಮ್ ನ್ಯೂರಾನ್‌ಗಳನ್ನು 90-5% ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಲಾಗಿದೆಯೆಂದು ಫಾಸ್ ಮತ್ತು ನ್ಯೂಯುಎನ್ (ನ್ಯೂರಾನಲ್ ಮಾರ್ಕರ್) ಇಮ್ಯುನೊಹಿಸ್ಟೋಕೆಮಿಸ್ಟ್ರಿ ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.

ನ್ಯೂಯುಎನ್-ಲೇಬಲ್ ಮಾಡಲಾದ ನ್ಯೂರಾನ್‌ಗಳನ್ನು ಫಾಸ್-ಪಾಸಿಟಿವ್ ಮತ್ತು ಫಾಸ್- negative ಣಾತ್ಮಕ ನ್ಯೂರಾನ್‌ಗಳಾಗಿ ಬೇರ್ಪಡಿಸಲು ನಾವು ಎಫ್‌ಎಸಿಎಸ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿದ್ದೇವೆ ಮತ್ತು ಆರ್ಟಿ-ಕ್ಯೂಪಿಸಿಆರ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಐದು ಫಾಸ್-ಪಾಸಿಟಿವ್ ನ್ಯೂರಾನ್‌ಗಳಿಂದ ಎಂಆರ್‌ಎನ್ಎ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಿದ್ದೇವೆ. ಮೆಥಾಂಫೆಟಮೈನ್ ಪ್ರಚೋದಿತ 3-20- ತಕ್ಷಣದ ಆರಂಭಿಕ ಜೀನ್‌ಗಳ ಚಾಪ, ಹೋಮರ್- 2, ಸಿ-ಫಾಸ್, ಫಾಸ್ಬಿ ಮತ್ತು ಅದರ ಐಸೋಫಾರ್ಮ್‌ಗಳ ಹೆಚ್ಚಳ (OsfosB ಮತ್ತು ಕಾದಂಬರಿ ಐಸೋಫಾರ್ಮ್ ΔfosB-2) ಫಾಸ್-ಪಾಸಿಟಿವ್ ಆದರೆ ಫಾಸ್- negative ಣಾತ್ಮಕ ನ್ಯೂರಾನ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಅಲ್ಲ. ಏಕ ಡಾರ್ಸಲ್ ಸ್ಟ್ರೈಟಮ್ ಹೋಮೋಜೆನೇಟ್‌ಗಳಿಂದ ವಿಂಗಡಿಸದ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ ನಿರ್ಣಯಿಸಿದಾಗ ತಕ್ಷಣದ ಆರಂಭಿಕ ಜೀನ್ ಎಮ್‌ಆರ್‌ಎನ್ಎ ಪ್ರಚೋದನೆಯು ಎಕ್ಸ್‌ಎನ್‌ಯುಎಂಎಕ್ಸ್-ಪಟ್ಟು ಕಡಿಮೆ ಅಥವಾ ಇರುವುದಿಲ್ಲ. ನಮ್ಮ ಮಾರ್ಪಡಿಸಿದ ವಿಧಾನವು ಸಂಕೀರ್ಣ ವ್ಯಸನ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ drugs ಷಧಗಳು ಅಥವಾ ಮಾದಕವಸ್ತು-ಸಂಬಂಧಿತ ಸೂಚನೆಗಳಿಂದ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಲಾದ ನ್ಯೂರಾನ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ವಿಶಿಷ್ಟವಾದ ಆಣ್ವಿಕ ಮಾರ್ಪಾಡುಗಳನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲು ಸಾಧ್ಯವಾಗುವಂತೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ.

ಮೆಥಾಂಫೆಟಮೈನ್ ಮತ್ತು ಇತರ drugs ಷಧಿಗಳು ಮೆದುಳಿನಲ್ಲಿರುವ ಎಲ್ಲಾ ನ್ಯೂರಾನ್‌ಗಳ ಒಂದು ಸಣ್ಣ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುತ್ತವೆ. ನರ ಚಟುವಟಿಕೆ ಮಾರ್ಕರ್ ಫೋಸ್ ಅನ್ನು ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸುವ ಸಕ್ರಿಯ ನ್ಯೂರಾನ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಆಯ್ದವಾಗಿ ಪ್ರಚೋದಿಸಲ್ಪಟ್ಟ ಆಣ್ವಿಕ ಮಾರ್ಪಾಡುಗಳನ್ನು ನಿರೂಪಿಸಲು ಸುಧಾರಿತ ವಿಧಾನವನ್ನು ನಾವು ಇಲ್ಲಿ ವರದಿ ಮಾಡುತ್ತೇವೆ. ತೀವ್ರವಾದ ಮೆಥಾಂಫೆಟಮೈನ್-ಪ್ರೇರಿತ ಜೀನ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ಒಂದೇ ಇಲಿ ಡಾರ್ಸಲ್ ಸ್ಟ್ರೈಟಮ್‌ನಿಂದ 5 ಫೋಸ್-ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸುವ ನ್ಯೂರಾನ್‌ಗಳಿಂದ ನಿರ್ಣಯಿಸಲು ಉದ್ದೇಶಿತ ಪಿಸಿಆರ್ ಪೂರ್ವ-ವರ್ಧನೆಯೊಂದಿಗೆ ನಾವು ಎಫ್‌ಎಸಿಎಸ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿದ್ದೇವೆ. ಮೆಥಾಂಫೆಟಮೈನ್ ಫೋಸ್-ಪಾಸಿಟಿವ್ನಲ್ಲಿ ಫೋಸ್- negative ಣಾತ್ಮಕ ನ್ಯೂರಾನ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ತಕ್ಷಣದ ಆರಂಭಿಕ ಜೀನ್‌ಗಳ (ಐಇಜಿ) 3-20- ಪಟ್ಟು ಹೆಚ್ಚಳವನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸಿತು. ಉದ್ದೇಶಿತ ಪಿಸಿಆರ್ ಪೂರ್ವ-ವರ್ಧನೆಯು ಸಂಕೀರ್ಣ ವ್ಯಸನ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ drugs ಷಧಗಳು ಅಥವಾ ಮಾದಕವಸ್ತು-ಸಂಬಂಧಿತ ಸೂಚನೆಗಳಿಂದ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಲಾದ ನ್ಯೂರಾನ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ವಿಶಿಷ್ಟವಾದ ಆಣ್ವಿಕ ಮಾರ್ಪಾಡುಗಳನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲು ಸಾಧ್ಯವಾಗಿಸುತ್ತದೆ.

2013 ಅನ್ನು ಪ್ರಕಟಿಸಲಾಗಿದೆ. ಈ ಲೇಖನವು ಯುಎಸ್ ಸರ್ಕಾರದ ಕೆಲಸವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಇದು ಯುಎಸ್ಎದಲ್ಲಿ ಸಾರ್ವಜನಿಕ ವಲಯದಲ್ಲಿದೆ.