도파민 수용체의 발현과 분포는 코카인 자체 투여를 중단 한 후 쥐의 핵 내측에서 동적으로 변화한다. (2010)

단백질 가교 결합

이 방법은 이전에 자세히 설명되어 있습니다 (Boudreau and Wolf, 2005; Ferrario et al., 2010). 쥐를 목이 마른 다음 뇌를 빠르게 제거하고 전체 NAc (또는 코어 및 껍질 아구)를 뇌 매트릭스를 사용하여 얻은 2mm 코로나 섹션에서 얼음으로 해부시켰다. McIllwain tissue chopper (Vibratome, St. Louis, MO)를 사용하여 전체 NAc 조직을 즉시 400μm 슬라이스로 잘랐다. 반면 작은 코어 및 껍질 아구 부분은 메스를 사용하여 손으로 다진 다. 조직을 2 mM bis (sulfosuccinimidyl) suberate가 첨가 된 ice-cold 인공 CSF가 들어있는 Eppendorf tube에 넣었다.³; Pierce Biotechnology, Rockford, IL). 가교 결합 반응을 부드럽게 교반하면서 30 ℃에서 4 ℃로 진행시킨 다음 100mM 글리신 (10 ℃에서 4 분)을 첨가하여 종결시켰다. 조직을 짧은 원심 분리로 펠렛 화하고, 프로테아제 및 포스파타제 저해제를 함유하는 빙냉 용해 완충액에 재현 탁시키고, 5 초 동안 초음파 처리하고, 다시 원심 분리 하였다. 상청액의 분취 액을 웨스턴 블 랏팅으로 분석 할 때까지 -80 ℃에서 보관 하였다.

가교 조직에서의 DARs의 웨스턴 블롯 분석

시료 (20-30μg total protein / lysate)를 4-15 % Tris-HCl 겔 (Biorad, Hercules, CA)에서 전기 영동 하였다. 단백질을 1.15 h에서 정전류 (1.5mA)를 사용하는 면역 블로 팅을 위해 polyvinylidene fluoride 막에 옮겼다. 냉각 코일은 과도한 가열을 방지하기 위해 사용되었습니다. Coomassie blue로 이동시킨 후 젤을 염색하여 고 분자량 응집체의 완전한 전이를 확인했습니다. 또한, 우리는 교차 결합 DAR 단백질이 스태킹 겔에서 검출되지 않았 음을 확인했다 (데이터는 표시되지 않음). 전달 후, 멤브레인을 ddH₂실온 (RT)에서 1 hr 동안 공기 건조시키고, 100 % MeOH로 재수 화하고, 1x 트리스 완충 식염수 (TBS)로 세척하고, 0.1M NaOH, pH 10에 15 분 동안 실온에서 침지시켰다. 그런 다음, TBS로 세척하고, RT에서 3 hr 동안 TBS-Tween-20 (TBS-T), pH 7.4에서 1 % Bovine Serum Albumin (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)으로 차단하고, D4 DAR (1 : 1, Millipore, Cat # AB1000P), D1765 DAR (2 : 1, Millipore, Billercia, CA, Cat # AB1000P) 및 D5084 DAR (3 : 1; Millipore; Cat # AB1000P). D1786 및 D4 DARs는 교차 결합 및 세포 내 수용체 모두를 인식하는 항체의 부족으로 분석되지 않았다. 이 실험에 사용 된 DAR 항체 로트는 5-2005에서 구입했음을 유의해야합니다. 현재 이러한 항체 (06-2009)는 DAR 녹아웃 마우스 (발표되지 않은 관찰)에서 조직에서 변경되지 않은 다른 밴딩 패턴을 보여줍니다. 일차 항체 배양 후, 막을 TBS-T 용액으로 세척하고, HRP- 결합 된 항 - 토끼 IgG 또는 항 - 마우스 IgG (10 : 60; Upstate Biotechnology, Lake Placid, NY)로 1 분 동안 배양하고, TBS- T, ddH로 헹구었다.₂O로 옮겨 화학 발광 검출 기판 (Amersham GE, Piscataway, NJ)에 담갔다. 도말을 개발 한 후 이미지를 Versa Doc Imaging Software (Bio-Rad)로 캡처했습니다. Quantity One 소프트웨어 (Bio-Rad)를 사용하여 표면 및 세포 내 밴드의 확산 밀도를 측정했습니다. Ponceau S (Sigma-Aldrich)를 사용하여 결정된 차선의 표면, 세포 내 및 총 (표면 + 세포 내) 단백질 수치를 총 단백질로 정규화하고 TotalLab (Nonlinear Dynamics, Newcastle, UK)로 분석 하였다. 표면 / 세포 내 비율은 두 값이 같은 차선에서 결정되기 때문에 정규화가 필요하지 않습니다. 항체 특이성을 조사하기 위해, 각 항체를 생성하는데 사용 된 펩타이드로 DAR 항체에 대한 예비 흡수 연구를 수행 하였다. D1, D2, 또는 D3 DAR 항체를 10 ° TBS의 500 μL에서 펩타이드의 4 배 초과 농도와 결합시키고, 4 ° C에서 20 시간 동안 혼합하고, 4ml의 최종 부피로 희석하고, 막에 첨가하고, XNUMX ° C.

D1 DAR

WD45에서 코카인과 염분 그룹간에 유의 한 차이는 발견되지 않았습니다. 그러나 코카인 자체 투여의 영향은 WD1에서 분명했다. 전체 NAc의 분석은 WD1-Coc 그룹에서 D1 DAR 표면 / 세포 내 비율이 자기 식염수를 투여 한 그룹과 비교하여 유의하게 높았다그림 2a). 이것은 총 D1 DAR 수준 (표면 + 세포 내)의 변화가없는 경우 표면 D1 DARs의 약간의 증가와 세포 내 D1 DAR의 겸손한 감소 (이 두 가지 효과는 통계적으로 유의하지 않음)에 기인 한 것입니다그림 2a). NAc 코어 내에서 D1 DAR 측정 값에 중요한 영향은 없었습니다 (그림 2b). 그러나 NAc 셸은 전체 NAc에서 관찰 된 것과 비슷한 변화를 보여 주었지만 약간 더 견고했습니다 (그림 2c). 표면 / 세포 내 D1 DAR 비율은 표면 D1 DAR 발현의 상당한 증가로 인해 WD1-Coc 그룹에서 증가했다. 세포 내 수준은 변하지 않았지만 총 D1 DAR 수치가 증가하는 경향이있었습니다. 요약하면, D1 DAR 단백질의 상당 부분이 WD1-Sal 쥐와 비교하여 WD1-Coc 쥐의 NAc 껍질에서 표면 발현되었다. 코카인 자체 투여로부터 1 일 후에 D45 DAR 분포가 대조 상태로 돌아왔다.

Fig. 2

D1 DAR 표면 발현은 코카인 자체 투여로부터 회수 된 1 일 후 NAC 껍질에서 증가 하였다

D2 DAR

전체 NAc에서, 관찰 된 주요 효과는 생리 식염수 대조군과 비교하여자가 투여 된 코카인을 갖는 래트에서 D2 DAR 발현이 감소되었다 (그림 3a). 이것은 표면 밴드에서 감소가 관찰되었을 때 WD45에서 가장 두드러졌으며, 세 개의 모든 세포 내 밴드 (~ 55, 75 및 100kDa) 및 총 D2 DAR 수치는 염분 조절과 비교하여 나타났습니다. 표면 / 세포 내 D2 DAR 비율은 WD45-Coc 그룹에서 표면 D2 DAR보다 더 큰 감소로 WD2-Coc 그룹에서 약간 증가했으나 현저하게 증가했다. 이는 아마도 세포가 가능한 많은 부분을 분배함으로써 감소 된 D2 DAR 발현을 보충하고 있음을 나타낸다 표면에 D2 DARs. 표면 표현 된 D2 DARs의 절대 수준이 감소 되었기 때문에 표면 / 세포 내 비율이 높아도 D1 DAR 전송이 증가하지 않는다는 점을 명심해야합니다. WD2-Coc 그룹에서 DXXUMX DAR 모노머 (~ 55kDa)의 세포 내 수준이 WD45-Sal 및 WD1-Sal 그룹과 비교하여 유의 한 영향을 미쳤지 만 몇 가지 다른 측정도 감소하는 경향이있었습니다 (그림 3a).

Fig. 3

NAc에서의 세포 내 및 표면 D2 DAR 수치는 코카인 자기 투여로부터 45 일 후에 감소했다

D2 DAR 발현의 전반적인 감소는 NAc의 핵심 및 껍질 부분에서도 나타났습니다 (그림 3b 및 3c, 각각 효과가 쉘에서 더 두드러지는 경향이 있음에도 불구하고). 따라서, 지표 D2 DAR 수치는 코카인 쥐에서 코어의 WD45에서만 감소했지만, 쉘에서는 WD1 및 WD45에서 감소했다. 총 D2 DAR은 쉘에서만 유의하게 감소했습니다. 세포 내 밴드가 통계적으로 유의 한 효과를 나타내는 탈락 - 및 부위 특이성의 차이가 있었지만, 코어 및 껍질 둘 다에서 철수 일 모두에서 세포 내 D2 DAR 밴드의 감소가 발생했다. 요약하면, D2 DAR 표면 및 세포 내 단백질 수준은 코카인 자체 투여 후 NAc에서 감소 하였다. WD1은 이미 약간의 감소를 보였습니다.

코카인자가 투여를 중단 한 후 NAc 껍질에서 D1 DAR 표면 발현이 일시적으로 증가합니다.

코카인자가 투여 후 D1 DAR 표면 발현은 WD1의 NAc 껍질에서 증가했지만 WD45에 의해 표준화되었지만 코어에서는 변화가 관찰되지 않아 일시적인 증가가 껍질에 국한되었음을 나타냅니다. 수용체 자가방사선 촬영을 이용한 이전 연구에서도 비슷한 결과가 얻어졌습니다. Ben-Shaharet al. (2007) 확장된 접근(1시간/일) 코카인 자가 투여를 중단한 후 20분(14일 또는 60일은 아님)에 쥐의 NAc 껍질에서 증가된 D6 DAR 밀도를 발견한 반면, 코어에서는 변화가 관찰되지 않았거나 짧은 접근 코카인 자가 투여 후에는 변화가 관찰되지 않았습니다. -투여(2일 XNUMX시간). Nader et al. (2002) 1번의 코카인 자가 투여 세션 중 마지막 후에 살해된 붉은 털 원숭이의 핵심은 아니지만 껍질에서 D100 DAR 밀도가 약간 증가한 것을 관찰했습니다. 동일한 처방을 중단한 지 30일 후에 평가된 원숭이는 입쪽 NAc와 꼬리 부분의 중심 및 껍질 모두에서 D1 DAR 밀도가 증가한 것으로 나타났으나, D1 DAR 밀도는 90일까지 정상화되었습니다.베버리지 외, 2009). 우리와 마찬가지로 이러한 모든 결과는 코카인 자가 투여를 중단한 후 특히 껍질에서 D1 DAR 수준이 일시적으로 증가했음을 나타냅니다. 그러나 이 그룹의 초기 연구에서는 훨씬 더 오랜 기간(1개월; 무어 등, 1998a). NAc의 D1 DAR 결합 감소는 쥐에서 확장 접근 요법을 중단한 지 18시간 후에 발견되었지만, 이 연구에서 총 코카인 섭취량은 위에서 논의한 쥐 연구보다 높았습니다.드 몬티스 등, 1998). 이러한 결과는 D1 DAR 적응이 코카인 노출의 여러 측면에 달려 있음을 나타냅니다. 또 다른 고려 사항은 수용체 자가방사선 촬영이 전체 세포 수용체를 측정하는 반면, 단백질 가교 실험은 표면 수용체와 세포내 수용체를 구별할 수 있다는 것입니다. 흥미롭게도 면역블롯팅 연구에서는 인간 코카인 사용자의 NAc에서 D1 DAR 수준이 증가하는 추세를 발견했습니다.Worsley 등, 2000).

NAc 껍질에서 관찰한 D1 DAR 표면 발현의 일시적인 증가가 큐 유발 코카인 갈망의 배양에 중요합니까? 홈 케이지 철수 후 큐 유도 코카인(또는 소멸 훈련 후 추구하는 코카인의 큐 유도 복원)에 대한 D1 DAR 작용제 또는 길항제의 NAc 내 주사 효과를 테스트한 연구가 없기 때문에 이는 평가하기 어렵습니다. 그러나 내측 NAc(껍질 및 내측 코어)에 있는 D1 수용체는 D1 및 D2 DAR의 협력 활성화를 요구하는 메커니즘을 통해 멸종을 추구하는 코카인 프라이밍 복원과 관련이 있는 것으로 보입니다.앤더슨 (Anderson) 등, 2003; 2008; Bachtell et al., 2005; 슈미트와 ​​피어스, 2006; 슈미트 (Schmidt) 등, 2006). 우리의 결과와 함께, 이는 NAc 껍질의 뉴런이 일시적인 D1R 상향 조절로 인해 조기 철수를 추구하는 D1 DAR 매개 코카인에 더 반응한다는 것을 시사할 수 있습니다. 그러나 멸종 훈련과 홈 케이지 철수는 NAc의 다양한 신경 적응과 연관되어 있기 때문에 복원에서 잠복기 연구로 외삽할 때는 주의가 필요합니다.서튼 외., 2003; Ghasemzadeh 등, 2009; 늑대와 페라리온, 2010). 기저측 편도체와 전전두엽 피질의 D1 DAR이 코카인 추구의 신호 유발 복원에도 중요하다는 점을 주목하는 것이 중요합니다(예: Ciccocioppo 등, 2001; Alleweireldt 등, 2006; Berglind 등, 2006).

세포 수준에서 시냅스 전 및 시냅스 후 DAR은 모두 NAc의 주요 세포 유형이자 출력 뉴런인 중간 가시 뉴런의 흥분성을 조절할 수 있습니다.니콜라 (Nicola) 등, 2000; 오도넬, 2003). 반복적인 비우발적 코카인 투여는 NAc에서 D1 DAR 활성화의 일부 효과를 향상시키는 것으로 알려져 있습니다. 따라서 코카인 치료를 중단한 지 1일에서 XNUMX개월 후에 중간 가시 뉴런(이온삼투압 글루타메이트에 의해 구동됨)의 활성을 억제하는 DXNUMX DAR 작용제의 강화된 능력이 NAc 전체에서 관찰되었습니다.헨리와 화이트, 1991; 1995). 그러나 여기에 보고된 증가된 D1 DAR 표면 발현은 쉘에만 국한되고 WD1에서만 시연되었기 때문에 이러한 이전 결과를 설명할 수 없습니다. 반복적인 코카인 주사를 중단한 후 10~14일 동안 코카인 공격을 실시한 지 XNUMX일 후, 버리에와 말레카(2002) 글루타메이트 신경 말단의 시냅스 전 D1 유사 DAR에 의해 분명히 매개되는 NAc 중간 가시 뉴런에서 흥분성 시냅스 반응의 DA 매개 억제가 강화되는 것을 관찰했습니다. 그러나 챌린지 주입으로 인해 발생할 수 있는 효과(예: Boudreau 등, 2007 및 Kourrich et al., 2007), 종의 차이와 핵심 기록의 부족으로 인해 그들의 연구 결과를 우리의 연구 결과와 비교하기가 어렵습니다. 또한 다음이 사용하는 DAR 작용제와 길항제에 주목해야 합니다. 헨리와 화이트(1991; 1995) 및 버리에와 말렌카(2002) D1과 D5 DAR을 구별하지 않았습니다.

코카인 자가 투여를 중단한 후 NAc의 D2 DAR 수준이 감소합니다.

우리 연구에서 관찰된 주요 효과는 식염수 대조군에 비해 코카인 자가 투여를 중단한 후 NAc 코어와 쉘 모두에서 D2 DAR 단백질이 감소한 것입니다. 이는 WD1과 WD45 모두에서 세포내, 표면 및 전체 밴드가 감소한 껍질에서 더욱 두드러졌습니다. 핵심에서는 D2 DAR 표면 발현이 WD45에서만 감소했으며 총 D2 DAR 수준은 크게 감소하지 않았습니다. 다른 여러 연구에서도 코카인 자가 투여를 중단한 후 D2 DAR 발현이 감소한 것으로 나타났습니다. 광범위한 코카인 자가 투여 경험이 있는 붉은털원숭이에서 수용체 자가방사선 촬영으로 측정한 D2 DAR 밀도는 마지막 세션 직후 조직을 채취했을 때 NAc 코어와 껍질을 포함한 많은 선조체 영역에서 감소했습니다.무어 등, 1998b; Nader 등, 2002). PET를 사용하여 기저핵에서 이러한 효과는 코카인 자가 투여를 시작한지 ​​1주 이내에 감지되었습니다.Nader 등, 2006). 금단 중 D2 DAR 수준이 회복되는 속도는 총 코카인 섭취량에 따라 달라질 수 있습니다. 방사선 사진 연구에서 NAc의 D2 DAR 수준은 30회의 코카인 자가 투여 세션을 중단한 후 90일 또는 100일 후에 대조군 값으로 회복되었습니다.베버리지 외, 2009). 그러나 장기간 노출(1년)하여 총 코카인 섭취량이 많은 원숭이를 대상으로 한 PET 연구에서 원숭이 3마리 중 5마리는 2일 후에 D90 DAR 수준이 회복된 반면, 2마리의 원숭이는 12개월 후에도 회복되지 않았습니다.Nader 등, 2006). 전반적으로, 이러한 결과는 금단 기간 동안 D2 DAR 수준이 감소했다는 우리의 연구 결과와 잘 일치합니다.

인간 코카인 중독자를 대상으로 한 PET 연구에서는 복측 선조체를 포함한 많은 선조체 부위에서 D2 DAR 수준이 감소한 것으로 나타났는데, 이는 초기 금단과 3~4개월 간의 해독 후에 명백히 나타났습니다.Volkow et al., 1990, 1993, 1997). 그러나 D2 DAR 가용성은 코카인의 긍정적인 주관적 효과 또는 프라이밍 용량 후 더 많은 코카인을 복용하기로 한 결정과 상관관계가 없었기 때문에 행동의 중요성은 불분명합니다.Martinez et al., 2004). 신호로 인한 코카인 갈망은 금단(“인큐베이션”) 동안 시간에 따른 증가를 보이지만 코카인 프라이밍된 코카인 추구에서는 발생하지 않는다는 점에 유의하는 것이 중요합니다.Lu 등, 2004a). 따라서, Martinezet al. (2004) D2 DAR 가용성이 여기에서 연구된 인큐베이션 모델의 초점인 큐 유발 코카인 탐색과 연관될 수 있는 가능성을 열어 두십시오. 인간 코카인 사용자의 낮은 D2 DAR 가용성은 전두엽 피질 대사 감소와 관련이 있습니다.Volkow et al., 1993). 다른 변화와 함께 이는 중독자가 약물이나 약물 쌍 신호에 노출될 때 발생하는 통제력 상실과 비 약물 보상에 비해 약물의 더 큰 중요성에 기여할 수 있습니다.Volkow et al., 2007; Volkow et al., 2009). PET 연구에서 감소된 D2 DAR 수준은 D2 DAR 수준 감소보다는 DA 방출 증가를 나타낼 수 있지만 최근 결과는 코카인 의존 환자의 경우 이러한 설명에 반론을 제기합니다.Martinez et al., 2009). 더욱이, 인간 코카인 사용자에 대한 사후 연구에서는 면역블로팅을 사용하여 NAc에서 D2 DAR 수준이 감소하는 추세를 발견했습니다.Worsley 등, 2000).

인간 코카인 중독자를 대상으로 한 연구에서는 D2 DAR 가용성 감소가 소인 특성인지 코카인 노출의 결과인지 확인할 수 없지만 다른 결과에서는 둘 다 사실임을 나타냅니다. 한편, 약물을 남용하지 않는 인간을 대상으로 한 실험에서는 D2 DAR 가용성과 메틸페니데이트 투여 시 "약물 선호" 보고 사이에 역의 상관관계가 있음을 발견했습니다.Volkow et al., 1999; 2002). 이러한 결과는 낮은 D2 DAR 가용성이 중독에 대한 취약성을 증가시킬 수 있음을 시사합니다. 붉은털원숭이를 대상으로 한 연구에서도 비슷한 결론이 뒷받침됩니다. 사회적으로 사육되는 원숭이에서 사회적 지배력의 달성은 선조체의 D2 DAR 가용성을 증가시키며 이는 하위 원숭이에 비해 코카인 강화 효과에 대한 민감도가 낮은 것과 관련이 있습니다.Morgan et al., 2002). 사회적 지위는 약물을 사용하지 않는 지원자의 선조체 D2 DAR 가용성과도 상관관계가 있습니다(Martinez et al., 2010). 반면, PET와 수용체 자가방사선 연구에서는 장기간 코카인 자가 투여가 위에서 논의한 바와 같이 개별적으로 수용된 원숭이에서 선조체 D2 DAR 수용체 가용성을 감소시키는 것으로 나타났습니다.무어 등, 1998b; Nader 등, 2002; Nader 등, 2006). 만성 코카인 자가 투여는 또한 사회적으로 지배적인 원숭이의 D2 DAR 가용성을 감소시키는 것으로 보입니다.Czoty 등, 2004). 따라서 장기간 코카인을 자가 투여한 후에는 우성 원숭이와 하급 원숭이 사이에 D2 수용체 가용성이나 코카인 강화 효과에 더 이상 유의미한 차이가 없었습니다.Czoty 등, 2004). 그러나 금욕 기간 동안 지배적인 원숭이에서 상승된 D2 DAR 수준이 다시 나타났으며 이는 코카인 강화 효과에 대한 민감도 감소를 예측하는 특성인 새로운 것에 대한 반응의 긴 잠복기와 상관관계가 있었습니다.Czoty 등, 2010).

인간과 원숭이에서와 마찬가지로 쥐 연구에서는 낮은 D2 DAR 가용성이 코카인 취약성의 위험 요소임을 나타냅니다. 따라서 충동성이 높은 쥐(코카인 자가 투여 증가와 관련된 특성)를 대상으로 한 PET 연구에서는 복부 선조체에서 D2/D3 DAR 가용성이 감소한 것으로 나타났습니다.Dalley 등, 2007). NAc의 D2 DAR 수준은 중독 취약성과 관련된 또 다른 특성인 새로운 것에 대한 높은 운동 반응을 보이는 쥐에서도 감소합니다.후크 (Hooks) 등, 1994). 쥐에 대한 우리의 결과는 NAc의 D2 DAR 수준 감소가 원숭이와 인간에 대한 연구(위)와 일치하는 반복적인 코카인 노출의 결과일 수도 있음을 나타냅니다. 그러나 쥐를 대상으로 한 두 가지 수용체 자가 방사선 촬영 연구에서는 우리와 다른 결과가 발견되었습니다. Ben-Shaharet al. (2007) NAc 껍질에서는 감소가 관찰되었지만 우리 자신의 것과 유사한 확장된 접근 코카인 자가 투여 요법(2시간/일)에서 철수한 후(20분, 14일 중 60일) NAc에서 감소된 D6 DAR 수준을 관찰하지 못했습니다. 제한된 접근 요법(2일 14시간) 및 중단 후 XNUMX일(벤-샤하르 외, 2007). Stéfanskiet al. (2007) 제한된 접근 코카인 자가 투여(2시간/일)를 중단한 후 24시간 동안 코어 또는 쉘에서 D2 DAR 수준에 변화가 없었지만 D2 DAR 수준은 요크 코카인 대조군에서 감소했습니다. 위에서 언급한 바와 같이 수용체 자가방사선 촬영은 전체 세포 수용체를 측정하는 반면, PET 및 단백질 가교 연구는 세포 표면 수용체를 측정합니다.

전반적으로, D2 DAR 수준과 코카인 자가 투여 사이의 관계에 대한 연구는 D2 DAR이 일반적으로 코카인 자가 투여를 제한하는 모델을 지원합니다. 따라서 우리는 실험에서 관찰된 감소된 D2 DAR 수준이 코카인 금단 후 신호 유도 코카인에 기여할 수 있다고 제안합니다. 특히, NAc 코어의 D2 DAR 표면 발현이 WD45에서는 감소했지만 WD1에서는 감소하지 않았다는 사실과 큐 유발 코카인 탐색에서 NAc 코어의 핵심 역할과 결합되어 NAc 코어의 시간 의존적 D2 DAR 하향 조절이 신호 유발 코카인 추구의 시간에 따른 강화에 기여합니다. 이는 금단 중 D2 작용제의 NAc 내 주입이 신호 유발 코카인 탐색을 감소시킬 것이라고 예측합니다. 불행하게도 배양 모델에서 NAc 내 D2 DAR 약물의 효과를 조사한 연구는 없습니다. 반면에, 코카인 프라이밍 복원에 대한 연구에서는 껍질과 내측 코어의 D1 및 D2 DAR이 협력하여 코카인 추구를 촉진한다는 것을 나타냅니다.앤더슨 (Anderson) 등, 2003; Bachtell et al., 2005; 슈미트와 ​​피어스, 2006; 슈미트 (Schmidt) 등, 2006). 이러한 발견에 기초하여, 우리 실험에서 관찰된 감소된 D2 DAR 발현은 코카인 추구를 감소시킬 것으로 예측될 수 있습니다. 즉, 실제로 관찰되는 금단 의존적 강화와 반대되는 효과를 생성할 수 있습니다. 불일치는 멸종 훈련 후 코카인 프라이밍 복직에서 금단 후 큐 유도 코카인 탐색으로 일반화하여 도입된 문제를 반영할 수 있습니다.

코카인자가 투여를 중단 한 후 NAc 코어에서 D3 DAR 표면 발현의 시간에 따른 증가가 발생합니다

코카인 자가 투여 및 복직 패러다임에서 D3 DAR 선호 약물에 대한 연구는 D3 DAR 길항제가 코카인 중독 치료, 특히 코카인 관련 단서에 대한 반응성을 줄이는 데 유용할 수 있음을 시사합니다.Heidbreder 등, 2005; 2008년; 르 폴 외, 2005; 사이와 가드너, 2007). 이러한 결과는 내인성 DA에 의한 D3 DAR의 활성화가 큐 유발 코카인 탐색을 중재하는 데 관여할 수 있음을 의미합니다. 우리의 결과는 NAc 코어의 D3 DAR 표면 발현이 확장 액세스 코카인 자체 투여로 인해 WD1에서는 변하지 않았지만 코카인 갈망의 잠복기와 관련하여 WD45에서는 증가했음을 보여줍니다. 표면/세포내 비율에서는 작지만 상당한 증가가 있었지만 D3 DAR 표면 발현은 껍질에서 크게 증가하지 않았습니다. 코카인 관련 단서에 반응하는 D3 DAR 전송의 역할과 큐 유도 코카인 탐색을 위한 코어의 중요성을 고려할 때 NAc 코어의 D3 DAR 표면 발현 증가가 큐 유도 코카인의 배양에 기여했다고 추측하는 것은 유혹적입니다. WD45에서 관찰되는 갈망. 그러나 D3 DAR 길항제가 코카인 추구를 감소시키는 역할을 하는 신경 부위는 확립되지 않았습니다. 특히, 큐 유발 코카인 탐색에 대한 D3 DAR 선호 약물의 NAc 내 주사 효과를 조사한 연구는 없습니다. 다른 모델에서는 Schmidtet al. (2006) D3 선호 작용제 PD 128,907을 코어 또는 쉘에 주입해도 멸종 훈련 후 코카인이 회복되지 않는 것으로 나타났습니다.

우리의 결과는 일반적으로 코카인 노출 후 NAc의 총 D3 DAR 수준을 측정한 수용체 자동 방사선 촬영 연구와 일치합니다. 스탈리와 매시(1996) D3 DAR 결합은 연령이 일치하는 대조군과 비교하여 코카인 과다 복용 피해자의 NAc에서 더 높았다고 보고했습니다. 조건화된 장소 선호 패러다임에서 코카인에 노출되고 3일 동안 중단한 후, 쥐는 NAc 핵과 껍질에서 DXNUMX DAR 결합이 증가한 것으로 나타났습니다.르 폴 외, 2002). Neisewanderet al. (2004) 다양한 금단 기간 후 코카인 프라이밍 복직을 테스트한 후 3시간 후에 사망한 광범위한 코카인 자가 투여 경험이 있는 쥐의 D24 DAR 결합을 측정했습니다. NAc의 D3 DAR 결합은 WD1에서는 변하지 않았지만 시간이 지남에 따라 증가한다는 우리의 관찰과 일치하여 더 오랜 시간(WD31-32) 후에 증가했습니다. 더욱이, 금단 중 코카인 추구를 감소시키는 약물 치료는 D3 DAR 결합의 증가를 약화시켰으며, 이는 D3 DAR 상향 조절이 코카인 추구와 기능적으로 연관되어 있음을 시사합니다. D3 DAR은 다음과 같이 증가합니다. Neisewanderet al. (2004) 핵심에서는 유의미한 반면 껍질에서는 경향 만 관찰되었지만 하위 영역은 핵과 껍질이 덜 뚜렷한 NAc의 주둥이 부분에서 분석되었습니다. 우리의 분석은 NAc의 주둥이 부분과 꼬리 부분의 핵심과 껍질에 대해 수행되었습니다.

이 작업은 DA009621, DA00453 및 MEW에 대한 NARSAD 우수 조사자 상, MM에 대한 DA020654, KLC에 대한 박사 전 국립 연구 서비스 상 DA021488의 지원을 받았습니다.