복부 tegmental 영역에서 dopaminergic 뉴런의 내인성 opioid 유발 neuroplasticity 자연과 아편 보상 (2014)

매일 짝짓기 세션.

VTA에서 도파민 뉴런 소마 크기의 변화의 시간 경과를 연구하기 위해 성 경험이 있고 순진한 동물이 1, 7 또는 31 d에서 사망했다 (n = 교배 (경험) 또는 취급 (순진) 후 마지막 날 이후에 그룹 당 5-8. 성적으로 경험이 많은 그룹은 최종 짝짓기를하는 동안 성행위와 일치 시켰고, 5 회 세션 동안 총 사정 횟수 (각 그룹의 5 평균)와 성행위의 매개 변수에는 차이가 없었습니다.

짝짓기 세션.

성적 순진 남성은 두 가지 실험 조건 중 하나에 할당되었습니다. 성적으로 순진하거나 성적 경험이있는 사람입니다. 성적 경험이있는 동물은 사정을 표시하거나 60 h (어느 것이 든 먼저 오는 것)까지 직사각형 시험 우리 (45 × 50 × 1 cm)의 수용성 암컷과 연속으로 5 번 짝짓기 할 수있었습니다. 새장을 70 % 에탄올 용액으로 철저히 세척하고 짝짓기 세션 사이에 신선한 침구를 추가했습니다. 성기능은 어두운 단계 (암흑이 발병 한 후 2-6 h) 동안 수행되었습니다. 5 개의 짝짓기 회의 중 4 회 이상 사정 한 동물 만이 성적 경험이있는 것으로 간주되어 실험에 포함되었습니다. 모든 교미가 관찰되었고 성행위가 기록되었습니다. 마운트 (M)의 침입 수 (IM), 장착 대기 시간 (ML, 여성의 첫 도입까지의 도입 시간), 침습 지연 (IL : 여성의 도입으로부터 첫 번째 침입까지의 시간) 및 사정 대기 시간 (EL; 최초 입원에서 사정까지의 시간)아목, 1997). 나이브 한 동물을 같은 방에서 짝짓기 한 성 경험이있는 남성과 동시에 1을위한 깨끗한 테스트 케이지에 배치하여 멀리 떨어진 여성의 냄새와 경험있는 남성과 비슷한 수준의 교란 및 환경 적 신기루에 노출되도록했습니다.

면역 형광 라벨링.

동물은 pentobarbital sodium (270 mg / kg, ip)을 사용하여 심하게 마취시키고 50 % 식염수 0.9 ml로 심 내로 관류시킨 다음 500 m paraformaldehyde를 4 m sodium phosphate buffer (PB)에서 0.1 ml로 관류 하였다. 두뇌를 제거하고 같은 fixative에서 실온 (RT)에서 1 h에 대한 postfixed 후 20 ° C에서 저장 0.01 % PB에 0.1 % 자당과 4 % 나트륨 아자 이드에 잠겼습니다. Coronal section을 동결 microtome (H35R, Microm)에서 400 μm로 잘라 내고 동결 방지제 용액 (30 % sucrose, 30 m PB의 0.1 % 에틸렌 글리콜)에 4 개의 평행 시리즈로 수집 한 다음 20 ° C에 보관했다. 모든 배양은 RT에서 부드럽게 교반하고 배양 사이에 0.1 m PBS (pH 7.35)로 충분히 헹구었다. 섹션이 1 % H에 노출되었습니다.₂O₂ 10 min은 내인성 퍼 옥시다아제를 파괴하고, 배양 용액 (PBS + : 1 % Triton X-0.4, Sigma-Aldrich를 함유 한 PBS) 및 100 % 소 혈청 알부민 (Jackson Immuno Research Laboratories)에서 0.1 h 동안 차단 하였다. 다음으로, 절편을 마우스 티로신 히드 록 실라 제 (TH) - 항체 (1 : 20 000; 밀리 포아). 일차 항체 배양 후, 절편을 555 분 동안 AlexaFluor 1- 접합 염소 항 - 마우스 항체 (100 : 30; Invitrogen, Eugene, OR)에서 배양 하였다. 마지막으로, 섹션을 0.1 m PB로 세척하고, Superfrost Plus 유리 슬라이드에 올려 놓고, 건조시키고, 항 - 퇴색제 1,4- 디아 자비 시클로 (2,2) 옥탄 (DABCO; 50 mg / ml, Sigma-Aldrich; 레넷 (Lennette), 1978).

데이터 분석 : 신경 세포 크기.

VTA에서 TH- 면역 반응성 (IR) 뉴런의 이미지를 40 × 배율에서 3 개의 주둥이에서 꼬리까지Balfour 등, 2004). 서로 다른 수준의 세포 간에는 차이점이 발견되지 않았습니다. TH-IR 뉴런의 세포 크기는 ImageJ (National Institutes of Health)를 사용하여 분석되었다. 평균 면적, 둘레 및 원형도는 Sklair-Tavron et al. (1996). 동물당 평균 25 세포 (모든 3 VTA 수준을 합친 것)를 분석하여 명확하게 눈에 보이는 핵이있는 세포 만 포함되었습니다. 각 동물에 대해 평균 면적, 둘레 및 원형도를 계산 하였다. 통계 분석을 위해 양방향 ANOVA가 사용되었다 : 요인 (성 경험 또는 성 순진)과 시간 (1, 7 또는 31 d) : 사후 유의 수준이 0.05 인 Holm-Sidak 방법을 사용한 비교.

격월로 짝짓기 세션.

매일 교미하는 동안 성 경험이 TH-IR 신경 세포 soma 크기의 감소에 필요한지 여부를 테스트하기 위해 5 회 격월 교배 기간 동안 교미 된 동물의 VTA dopamine 뉴런을 분석했습니다. 교미 세션은 위에서 설명한대로 였지만 2.5 주 동안 이루어졌습니다. 마지막 교미 또는 취급 후 뇌를 7 d 수집 하였다.

면역 퍼 옥시다아제 표지.

또한, immunoperoxidase 및 chromogen 감지와 민감한 얼룩 기법을 사용하여, 여부도 TH - IR soma 크기 변경의 시각화 수 있도록 테스트되었습니다. 관류 및 조직 처리는 전술 한 바와 같은 행위였다. 1 % H로 치료 한 후₂O₂ 및 PBS +를 함유하는 절편을 마우스 폴리 클로 날 티로신 히드 록 실라 제 (TH) - 항체 (1 : 20 000; 밀리 포아). 1 차 항체 배양 후, 절편을 비오틴 - 비오틴 - 양 고추 냉이 퍼 옥시다아제 (1 h, ABC 엘리트, 1 : PBS 중의 500 : 1 : Vector Laboratories), PBS 중의 비오틴 - 접합 염소 항 - 토끼 IgG (1, 1 : PBS 중 000 3,3) Vector Laboratories) 및 10'-diaminobenzidine tetrachloride (0.02 min, 0.02 %, DAB, Sigma-Aldrich)를 과산화수소 (0.1 %)로 황산 니켈 (0.015 % in 0.1 % PB)으로 강화시켰다. 섹션을 0.3 m PB로 철저히 세척하여 반응을 종결시키고 ddH에서 XNUMX % 젤라틴이 들어있는 코딩 된 Superfrost plus 유리 슬라이드 (Fisher)에 올려 놓습니다₂O. 탈수 후, 모든 슬라이드는 DPX mountant (dibutyl phthalate xylene; Sigma-Aldrich)로 덮었다.

데이터 분석 : 신경 세포 크기.

TH-IR 세포는 상기 기술 된 바와 같이 면적, 주변 및 원형도에 대해 분석되었다. 또한, VTA TH-IR 세포의 분석에 사용 된 것과 동일한 섹션에서, 스탄 (substantia nigra)의 TH-IR 세포를 분석 하였다. 마지막으로, VTA 및 SN TH-IR 세포의 분석 후, 크레 실 바이올렛을 사용하여 절편을 염색하고 비 -TH-IR 세포를 상기 기재된 것과 동일한 방법을 사용하여 분석 하였다. 순진한 그룹과 경험있는 그룹의 차이는 양측 학생의 t 0.05의 유의 수준으로 테스트합니다.

실험적 설계.

이전 Russo et al. (2007) 만성 모르핀은 모르핀 보상에 대한 내성을 유도한다는 것을 보여 주었다. 성 경험과 만성적 인 모르핀은 VTA에서 도파민 뉴런의 소마 크기가 비슷하게 감소하기 때문에 성관계에 따른 형태 학적 변화의 기능적 관련성을 모르핀 보상에 대해 검사했습니다. 성적으로 경험 있고 순진한 동물을 6 개의 다른 실험 그룹으로 나누었다.n 9, 13, 또는 0.5 mg / kg, ip)에 근거하여 모르핀 유발 식 조건부 선호도 (CPP)를 측정 하였다.

Morphine-CPP.

컨디셔닝은 마지막 짝짓기 세션 후에 1 d가 발생했으며 그룹은 마지막 짝짓기 세션에서 성행위를 위해 매치되었습니다. 사용 된 CPP 패러다임은 사전 검사, 조절 일 및 사후 검사로 구성되었으며, 장치는 Tenk et al. (2009). 간단히 말해서, CPP 장치 (MED Associates)는 세 개의 별개의 챔버로 구성되었습니다. 각 세션 사이에 장치를 70 % 에탄올 용액으로 철저히 세척하여 느린 후각 신호를 최소화했습니다. 개인의 선호도를 결정하기 위해 동물에게 15 분 동안 전체 장치에 무료로 접근 할 수있는 사전 테스트가 수행되었습니다. 그룹으로서 동물은 특정 챔버에 대해 유의미한 선호도를 나타내지 않았지만 각 개별 동물은 약간의 초기 선호도를 가졌습니다. 사전 테스트 동안 챔버 중 하나에 대해 상당한 선호도를 보인 쥐 (각 챔버에서 소요 된 시간 사이의 200 초 초과, 동물의 5 % 미만)는 연구에서 제외되었습니다. 컨디셔닝하는 동안 약물은 편향되지 않은 패러다임을 사용하여 초기에 선호되는 챔버 또는 선호되지 않는 챔버에 페어링되었습니다 (Tzschentke, 2007) 동물들은 30 분 동안 챔버에 갇혀 있었다. 동물들은 아침에 생리 식염수 (ip)를 주사하였고 (9 : 00 : 12 : 00 PM) 식염수 - 대조 챔버 (대조군)에 국한시켰다. 오후 (1 : 00-4 : 00 PM) 동물에게 몰핀 (ip, 0.5 mg / kg, 5.0 mg / kg 또는 10.0 mg / kg, 0.9 % 식염수에 용해 된 모르핀 황산염, Johnson Matthey) 모르핀 짝을 이루는 방으로 동물들은 두 차례의 조절 일을 겪었다. 다음 날 (교미 마지막 날 3 d)에 사전 검사와 절차 적으로 동일한 사후 검사가 수행되었습니다. 통계 분석을 위해, 사후 검사 동안 모르핀 - 대 상실에서 소비 된 시간은 쌍을 이룬 각 투여 량 내에서 성숙한 또는 경험이있는 수컷에 대한 사후 검사 동안 식염수 - 쌍실에서 소비 된 시간과 비교되었다 t 테스트. p <0.05는 통계적으로 유의 한 것으로 간주되었습니다. 성적으로 순진하고 경험이 많은 동물의 추가 대조군 그룹은 음성 대조군으로 사용하기 위해 쌍을 이루는 챔버와 쌍을 이루지 않은 챔버에서 식염수를 받았습니다. 두 그룹 모두 챔버 사이에 소요 된 시간 차이가 발견되지 않았습니다.

실험적 설계.

성행위는 적어도 1 월 동안 유지되는 성행위를 촉진합니다 (피처 (Pitchers) 등, 2012). 체험에 의해 유도 된 성 행동의 촉진에 대한 MOR 차단 효과를 분석하기 위해, 성적 경험이있는 동물은 5 번의 연속 교배 세션 전에 naloxone 또는 생리 식염수를 투여 받았다.n = 각각 12). 마지막 짝짓기를 한 후 1 주간, 모든 사료가 한 번의 사정 또는 1 시간까지 짝짓기를 할 수있는 최종 짝짓기 시험을 실시했습니다. 최종 시험일에 교미 전에 naloxone이나 염수 처리를하지 않았다. 교배 매개 변수를 비교하여 naloxone이 성 경험에 의한 양성 교대 촉진 (일 1 대 일 5) 또는 양방향 ANOVA를 이용한이 촉진 (일 5 대 검사)의 유지에 영향을 주는지 여부를 결정 하였다 [치료 인자 (생리 식염수 대 나일론 ) 및 일 (1 일, 5 일 또는 시험 일)] 및 Holm-Sidak 방법 사후 비교. 모든 통계 테스트에서, p 0.05 미만은 통계적으로 유의 한 것으로 간주되었습니다.

시험 당일에 전신 날 록산.

최종 짝 지어주는 시험 날에 변경된 성행위가 나 록소 네 부재로 인한 것이 아니라는 것을 보여주기 위해, 우리는 성관계를 겪었을 때 짝짓기를받은 나일 옥손과 동물을 짝짓기 시험 날에 날 록산 또는 식염수를 투여했다. 구체적으로, 모든 동물은 10 연속 일 동안 하나의 사정에 교배하기 전에 naloxone 주사 (30 mg / kg, sc) 5 분을 투여 받았다. 시험 당일 7 d 후에, 약 절반의 동물에게 날 록산 (10 mg / kg, n = 7) 또는 식염수 (n = 6) 수용성 여성의 도입 전에 30 분. 성적 행동이 관찰되고 기록되었습니다. 교배 매개 변수를 비교하여 naloxone이 성 경험에 의한 양성 교대 촉진 (일 1 대 일 5) 또는 양방향 ANOVA를 이용한이 촉진 (일 5 대 검사)의 유지에 영향을 주는지 여부를 결정 하였다 [치료 인자 (생리 식염수 대 나일론 ) 및 일 (1 일, 5 일 또는 시험 일)] 및 Holm-Sidak 방법 사후 비교. 모든 통계 테스트에서, p <5 %는 통계적으로 유의 한 것으로 간주되었습니다.

촉진 된 성 행동의 단기적인 표현에 대한 나 로크 손의 효과.

짝짓기 중 naloxone (10 mg / kg, sc) 치료의 효과는 최종 교미 검사 일 동안의 마지막 행동 (1 mg / kg, sc) n = 5; 나 로크 손, n = 4).

체계적인 나 로크 손 전처리.

마지막 치료 후 나일 록 단독 요법의 반복 치료가 7 d의 성적 장애를 일으키는 지 여부를 확인하기 위해 성 순진 동물은 교합 테스트 전 연속 날에 5 일간의 날 록손 (10 mg / kg, sc) 또는 생리 식염수를 투여 받았다. 최종 naloxone 후 7 d 또는 식염수 주사. 이 마지막 시험 일에 동물은 주사를 맞지 않았습니다. 성적 행동은 위에서 설명한대로 관찰되고 기록되었습니다. 짝짓기의 매개 변수는 짝이없는 t 테스트. 모든 통계 테스트에서, p <5 %는 통계적으로 유의 한 것으로 간주되었습니다.

체계적인 나일 록과 섹스 보상.

촉진 된 성 행동의 유지에 대한 날록손의 약화 효과에 대한 한 가지 가능성은 날록손이 성 행동의 보상 효과를 차단한다는 것입니다. 이러한 가능성을 시험하기 위해, CPP 패러다임은 사전 성적 경험이없는 수컷에서 날록손 또는 식염수 주사 직후 성적 행동에 대해 수행되었다. CPP 절차는 시험 전, 컨디셔닝 일 및 시험 후를 포함하여 모르핀 -CPP에 대해 전술 한 바와 유사 하였다.

성행위는 초기에 선호하지 않은 방과 짝을 이뤘습니다. 균형을 이룬 방식으로, 각 동물은 나일로 손 (naloxonen = 12) 또는 식염수 (n = 11) 수용력있는 여성에게 접근하기 전에 30 분. 짝짓기 세션의 평균 지속 시간은 ~ 13 분입니다. 사정 후 1 분, 동물을 30 분 동안 쌍으로 된 챔버에 두었다. 다른 컨디셔닝 당일에, 동물은 나 로크 손 또는 생리 식염수 (이들이 교미 전에 투여 된 것)를 주사하여 30 분 동안 비평 형 챔버에 넣었다. 그 다음, 사전 테스트와 동일한 사후 테스트가 수행되었습니다. 챔버 선호도를 결정하기 위해, 예비 테스트 및 사후 테스트 동안 쌍 챔버에서 소비 된 시간을 비교했다. 통계 분석을 위해 쌍을 이룬 t 테스트는 성적 행동에 대해 중요한 CPP가 형성되었는지 여부를 결정하기 위해 사전 테스트 및 사후 테스트 동안 선호도 및 차이점 점수와 쌍방의 시간을 비교하기 위해 사용되었습니다. p 0.05 미만은 중요한 것으로 간주되었습니다.

실험적 설계.

성 경험에 의해 유발 된 변화가 성 행동에 미치는 영향에 대해 VTA에서 구체적으로 EOP가 작용하는지 여부를 결정하기 위해 매일 5 회의 짝짓기를하기 전에 동물에게 VTA에 naloxone 또는 생리 식염수를 국부적으로 주입했습니다. 행동 패러다임은 전신적인 날록톤 실험과 유사했다. 성적 경험이있는 동물은 사정 또는 5 시까 지 1 연일 동안 짝짓기 할 수있었습니다. 수용성 암컷을 주입하기 15 분 전에 수컷 쥐에게 naloxone (반구 당 10 μg / μl, 0.5 μl 부피, 0.9 % 식염수에 용해) 또는 생리 식염수 (반구 당 0.5 μl)의 양측 주입을 받았다. 양측 미세 주입을 0.5 분 간격으로 1 ㎕ / 분의 유속으로 투여하고 확산을 위해 제자리에 남은 주입 캐 뉼러로 1 분을 추가로 투여 하였다. 주입 캐 뉼러를 더미 캐 뉼러 및 먼지 캡으로 교체 하였다. 짝짓기 마지막 날 (시험 당일) 1 주 후에, 모든 동물은 날 록산이나 식염수가 주입되지 않은 상태에서 한번 더 사정되었다. 그림 3A 실험 디자인을 간략히 설명합니다. 데이터 분석은 전신 날 록손 실험에서 기술 된대로 수행되었다.

사정 수술.

수컷 쥐를 ketamine (0.1 mg / ml)과 xylazine (0.87 mg / ml)의 복강 내 주사 (0.13 ml / kg)로 마취시키고, 정위 장치 (Kopf Instruments)에 넣었다. 양측의 21 게이지 가이드 캐뉼라 (Plastics One)를 두개골의 작은 천공 구멍을 통해 VTA 방향으로 VTA 방향으로 낮추고 두개골 상부에서 bregma와 -4.8 mm DV 방향으로 ± 0.75 mm ML Paxinos와 Watson (2013). Cannulas는 두개골에 세 개의 나사에 고정 된 치과 용 아크릴로 고정되었습니다. 동물에게는 2 주 회복 기간이 주어졌고 행동 테스트 중에 사용 된 취급 및 주입 절차에 익숙해지기 위해 매일 처리되었습니다.

Cannula 배치 확인.

캐뉼라의 위치는 TH- 면역 염색법을 사용하여 검사하여 VTA가 정확하게 표적되었는지 확인했습니다. 적절한 위치를 가진 동물 만이 분석에 포함되었다 (최종 집단 크기 : 경험 식염수 n = 8; 숙련 된 나일 록 n = 6). VTA 외부로 향한 intra-VTA naloxone 주사를받은 3 마리의 추가 동물을 "놓친"주사 그룹으로 함께 그룹화했습니다. 놓친 그룹은 해부학 적 통제와 Mann-Whitney U 시험은 최종 시험 당일의 행동을 나일로 손 및 생리 식염수 치료 경험이있는 남성과 비교하기 위해 사용되었습니다.

실험적 설계.

수컷이 짝짓기 경험을 쌓은 새장에 노출되면 VTA 및 MTA에서 MTA 활성화 및 VTA 및 신경 활동을 유발한다Balfour 등, 2004). 따라서, 짝짓기 환경은 성적 보상을 예측하는 조건부 큐 역할을합니다. 현재의 연구는 성적 경험 동안 MOR 활성화가 후속 조건화 된 큐 - 유도 신경 활성화를 위해 요구되는지 여부를 테스트 하였다. Naloxone 또는 생리 식염수는 짝짓기 경기장에 배치하기 전에 계통적으로 (ip) 30 분 투여하고, 짝짓기 (숙련 된)를위한 수용성 여성의 도입, 또는 암컷 (중성)의 제시없이 조작 케이지에 배치하여 이루어진 대조 조작 환경, 순진). 따라서 Naive Sal, Naive NLX, Exp Sal ​​및 Exp NLX의 네 실험 그룹이 생성되었습니다. 최종 짝짓기를 한 후 1 주일에 각 그룹의 동물 중 절반은 짝짓기 케이지 (성충과 관련된 조건부 큐) 또는 취급 케이지 (순진 남성 : 비 일시적 / 중립적 큐)에 노출되는 반면 나머지 절반은 어떤 단서가 아니라 홈 케이지 (기본 pERK 표현을 결정하기 위해)에 남았습니다. 이 실험 패러다임은 8 그룹을 만들었습니다 : Naive Sal-No 큐, Naive Sal + Cue, Naive NLX-No 큐, Naive NLX + 큐, Exp Sal-No 큐, Exp Sal ​​+ 큐, Exp NLX- 큐, Exp NLX + 큐 (n = NaNive NLX-No Cue를 제외하고 각각 4, n = 3). 동물은 큐 노출 후 10-15 분 동안 관류되었다. 대조 동물을 그들의 우리에서 제거하고 동시에 관류 하였다.

면역 조직 화학.

구강과 면역 조직 화학을 전술 한 바와 같이 수행 하였다. 여기에서 우리는 p42 및 p44 MAP 키나제 인 ERK1 및 ERK2 (pERK; 1 : 4 000; Cell Signaling Technology)에 대한 토끼 다 클론 항체를 사용했습니다. 일차 항체는 문헌에서 광범위하게 특성화되어있다 (Roux와 Blenis, 2004; Murphy와 Blenis, 2006; Frohmader 등, 2010b). 또한, 일차 항체를 생략하면 모든 면역 반응성 및 래트 뇌 조직의 웨스턴 블랏 분석이 방지되어 적절한 분자량에서 두 ​​개의 밴드가 나타났다.

데이터 분석.

pERK- 면역 반응성 (-IR) 세포는 다수의 뇌 영역에서 a에 부착 된 카메라 lucida 드로잉 튜브를 사용하여 계수되었다. Leica DMRD 현미경 : NAc [코어 (C) 및 쉘 (S); 400 × 600 μm; 내측 전두엽 피질; mPFC; 전두엽 영역 (ACA); 외전 피질 (prelimbic cortex, PL); 흉골 외 피질 (IL); 600 × 800 μm], caudate-putamen (CP; 800 × 800 μm), basolateral amygdala (BLA; 900 × 1200 μm; Balfour 등, 2004; Frohmader 등, 2010b; 피처 (Pitchers) 등, 2010b). 뇌 영역 당 2 개의 절편을 계수하고 표준 분석 영역의 세포 수를 mm 당 세포 수로 계산 하였다². 그룹 평균을 계산하기 위해 동물 당 두 개의 카운트를 평균했다. 성적 경험이 있거나 순진한 집단 내에서의 집단 평균은 양방향 ANOVA [요인 : 약물 치료 (NLX 또는 Sal) 및 큐 (큐 또는 큐 없음)]를 사용하여 비교되었다. 사후 Holm-Sidak 또는 Mann-Whitney 합계 테스트를 사용하여 적절한 경우 유의 수준을 비교합니다. p <0.05. 성적으로 경험 한 동물의 NAc 쉘에서는 인자의 중요성에 대한 강한 경향이 있었기 때문에 식염수 (Sal-No Cue)와 식염수 (Sal + Cue) 그룹 만 비교하기 위해 쌍대 비교를 수행했습니다.

이미지.

디지털 이미지는 CCD 카메라 (Macrofire, Optronics)를 사용하여 Leica 현미경 (DM5000B) 고정 카메라 설정. 이미지는 Adobe Photoshop 9.0 소프트웨어로 가져 왔습니다. 밝기 및 대비 조정을 제외하고 이미지가 어떤 방식 으로든 변경되지 않았습니다.

VTA 도파민 뉴런의 내인성 오피오이드 유도 소마 크기 변화. A, 성적으로 순진하고 경험이있는 동물에서 VTA 도파민 뉴런의 대표 이미지는 최종 교미 세션 후 소마 크기 7 d 감소를 보여줍니다. 스케일 바, 5 μm. 성적 경험 (경험치, 검정색 막대)이 면적 감소를 초래한다는 정량적 데이터 (B; μm 단위²) 및 둘레 (C; μm 단위의 VTA 도파민 세포, 1 d (Naive, Exp; n = 6) 및 7 d (Naive, n = 5; Exp, n = 6), 31 d (Naive, n = 6; Exp, n = 8), 최종적으로 교미 한 후에는 성 순진한 대조군 (Naive, white bars)과 비교 하였다. 84 또는 1 d에서 순진한 대조군에 비해 경험있는 남성에서 면적이 7 %로 감소했습니다. 91.6 및 90 d resp에서 대조군과 비교하여 숙련 된 그룹에서 경계가 1 및 7 %로 감소되었습니다. 원형도에 영향을 미치지 않았습니다 (D). 영역에서의 도파민 세포 가소성 (E) 및 둘레 (F)은 날록손 (NLX, n = 8), 식염수 (Sal, n = 7) 처리, 성숙한 대조군과 비교하여 최종 교배 후 7 d (Sal, n = 5; NLX, n = 6). 데이터는 평균 ± SEM을 나타내고; *는 같은 날의 성적 순진한 대조군과 비교하여 유의 한 차이를 나타냅니다 (B, C) 또는 염분 - 처리 된 성적으로 순진한 대조군 및 날 록산 - 처리 된 성적 경험이있는 남성 (E, F).

성적 경험은 흑질 도파민 뉴런이나 VTA 비 과도파민 뉴런의 세포 크기를 감소시키지 않았다. VTA TH-IR 뉴런 소마 영역 (A; μm 단위²) 및 둘레 (B; 연속적으로보다는 일주일에 두 번 짝짓기하여 경험을 쌓은 성적으로 순진한 (흰색) 동물과 경험있는 동물 (검은 색)에서 (μm 단위). TH-IR 소마 영역 (C) 및 VTA 비 TH-IR 소마 영역 (D)을 성적으로 순진한 (흰색) 동물과 경험있는 (검은 색) 동물로 묘사했습니다. 데이터는 평균 ± SEM을 나타내고; *는 성적으로 순진한 대조군과 비교하여 유의 한 차이를 나타냅니다. 성적으로 순진한 VTA에서 TH-IR (갈색) 뉴런을 나타내는 대표 이미지E), 경험있는 (F) 남성. G, H, 화살표로 표시된 뉴런의 고배율 이미지 E 및 F 각기. Nissl 염색 된 뉴런은이 이미지에서 파란색으로 표시됩니다. 성적 순진의 SN에서 TH-IR 뉴런을 나타내는 대표 이미지I)와 경험있는 (J) 남성. 스케일 바 : E-J, 20 μm.

성 경험이 모르핀 보상에 미치는 영향. 성 경험이없는 상태에서 사후 테스트 동안 생리 식염수 (Sal) 또는 모르핀 결합 (Mor, 0.5, 5 또는 10 mg / kg bodyweight) n = 10-13) 또는 경험있는 (Exp, n = 9-13) 남자. 데이터는 평균 ± SEM으로 나타내었다; *는 동일한 동물 내의 Sal-paired chamber에 비해 유의 한 차이를 나타냅니다. NS, 중요하지 않음.

내인성 오피오이드는 경험적으로 유발 된 성행위의 촉진에 중요한 역할을합니다. A, 실험적 설계. B-D, 식염수로 처치 한 수컷의 성 행동 매개 변수 (샐, 흰 막대, n = 11) 또는 날록손 (NLX, 검은 색 막대, n = 12). 표시된 데이터는 탑재 대기 시간입니다 (B; 초), intromission (C; 초), 사정 (D; 초) 1 및 5 (5 일 연속 교배). 또한 마지막 교미 테스트 인 7 d에 대한 데이터가 5 번째 교배 세션 후에 표시됩니다. 데이터는 평균 ± SEM으로 나타내었다; +는 치료 중 일 1 및 5 사이의 유의 한 차이를 나타냅니다. *는 치료 당일 5 사이의 유의 한 차이를 나타냅니다. #는 하루 내에서 날록손과 생리 식염수 사이의 유의 한 차이를 나타냅니다.

짝 지어주기 전에 Naloxone을 투여하면 짝짓기 첫날에만 장착 및 내파울 때 대기 시간이 증가했습니다.

내인성 오피오이드는 경험에 의한 성 행동 촉진의 장기적인 표현에서 중요합니다. A시험 당일 NLX 치료 효과에 대한 실험을위한 실험적 설계. B식염수 (회색) 나 날 록산 (검정) 주사 후 5 일간 교배 및 최종 교미 검사 일 (시험) 1 및 5 일 동안의 대기 시간. 데이터는 평균 ± SEM을 나타낸다. *는 치료 중 1 일과 5 일 사이의 유의 한 차이를 나타냅니다. #는 검사 일과 ​​치료 중 일 5 사이의 유의 한 차이를 나타냅니다. C짝짓기 행동에 성적 경험없이 혼자 전처리 치료의 효과를 시험하기위한 실험을위한 실험적 설계. D최종 교미 테스트 당일에 마운트 레이턴시, 짝짓기가 없을 때 생리 식염수 또는 날록손 주사 7 일 후 5 일. 데이터는 평균 ± SEM을 나타낸다. E나이로신 치료가 성적 경험이있는 동물에서 촉진 된 성행위의 단기간의 표시에 영향을 미치는지 여부를 테스트하기위한 실험을위한 실험적 설계. F(1) 일 및 5 일 (1) 5 1 5 XNUMX XNUMX (XNUMX). 데이터는 평균 ± SEM을 나타낸다. *는 치료 중 XNUMX 일과 XNUMX 일 사이의 유의 한 차이를 나타냅니다. Gnaloxone 치료가 성적 행동의 보상 효과를 차단했는지 여부를 테스트하기위한 실험용 실험 디자인. H짝짓기 전에 나로 독 (naloxone) 또는 생리 식염수를 투여받은 동물에 대한 예비 검사 (흰색) 및 사후 검사 (검정) 동안 짝을 이룬 약실을 짝짓기하는 데 걸린 시간 (초). 데이터는 평균 ± SEM을 나타내고; *는 예비 검사와 비교하여 유의 한 차이를 나타냅니다.

제시된 데이터는 장기간의 성적 행동 강화의 손실에 대한 MOR 봉쇄의 효과가 최종 짝짓기 검사 당일에 나룰 손 (naloxone) 투여의 부족과 무관한지를 결정하기 위해 시행 된 대조군 실험에서 주입 및 사정 (초)에 대한 대기 시간입니다

VTA의 내인성 오피오이드는 경험적으로 유발 된 성행위의 촉진과 장기간의 유지 관리를 조정합니다. 생리 식염수로 처치 한 남성의 성 행동 매개 변수 (Sal, white bars, n = 8) 또는 NLX (검은 색 막대, n = 6). 표시된 데이터는 탑재 대기 시간입니다 (A), intromission (B), 사정 (C) 교배 5 일간의 1 및 5 일. 또한, 최종 짝짓기 검사 일, 식염수 또는 나일 록 주사가 없을 때 7 다음 날 X에 대한 데이터가 표시됩니다. 데이터는 평균 ± SEM을 나타내고; +는 치료 중 일 5 및 1 사이의 유의 한 차이를 나타냅니다. *는 치료 당일 5 사이의 유의 한 차이를 나타냅니다. #는 하루 내에 나일 록과 샐 그룹 사이의 유의 한 차이를 나타냅니다. 실험 5 (생리 식염수, 흰색, 날록산, 검은 색, 결핍, 회색)에서 모든 동물에 대한 VTA 주입 부위를 나타내는 코로나 VTA 단면 (H, -4.60, I, -5.00, J, -bN) Swanson Brain Maps의 템플릿 그림 사용 (스완 손, 2004). Cannulas는 양측이지만, 주입 사이트는 표현의 용이성을 위해 일방적으로 표현됩니다. fr, 대퇴 복대; ML, Medial lemniscus; SN, substantia nigra.

내인성 오피오이드 작용은 성 관련 조건부 신호에 의해 유도 된 NAc에서의 신경 활성화에 필요하다. mm 당 pERK-IR 세포의 수² 핵 속에서는A) 및 셸 (B(수컷 남성) 또는 취급 세션 (순진 남성) 동안 전신 NLX 또는 염분 (살)로 전처리 된 성적으로 순진한 (흰색) 경험이 풍부한 동물. 그룹은 특급 수컷의 교미 관련 단서 및 순수 동물의 중성 단서이거나 홈 케이지 (큐 없음, 큐 라벨 없음으로 표시)에서 가져온 상황 별 단서 (CUE)에 노출되었습니다. 데이터는 평균 ± SEM으로 나타내었다; *는 식염수 처리 전 큐에 노출되지 않은 대조군 (Naive Sal-No Cue 및 Exp Sal-No Cue)과 비교할 때 유의 한 차이가 있음을 나타냅니다. #은 Sal로 처리 한 Cue-Exp Exp Group (Exp Sal ​​+ Cue)과 비교하여 유의 한 차이를 나타낸다. mm 당 pERK-IR 세포의 대표 이미지² 성 경험이있는 남성의 NAc 코어에서 샐 (C, D) 또는 NLX (E, F) (Cue, C, E), 또는 짝짓기와 관련된 문맥적인 단서 (Cue; D, F). N = NaNive NLX (No Cue)를 제외한 각 그룹 4, n = 3. AC, 전치엽. 스케일 바, 100 μm.

Naloxone이 다른 VTA 표적 지역에서 신호를 유발하는 pIEG 발현에 미치는 영향. mm 당 pERK-IR 세포의 수² (ACA)에서 문맥 신호 (큐) 또는 홈 케이지 (큐 없음)에 노출 된 성적으로 순진한 (흰색) 경험이 풍부한 (Exp; 검은 색) 동물에서 NLX 또는 Saline (전과)A), PL (B), IL (C), BLA (D). 데이터는 평균 ± SEM을 나타내고; *는 식염수 처리 전 큐에 노출되지 않은 대조군 (Naive Sal-No Cue 및 Exp Sal-No Cue)과 비교할 때 유의 한 차이가 있음을 나타냅니다. #은 Sal로 치료 한 큐에 노출 된 성적 순진 대조군 (Naive Sal + Cue)과 비교하여 유의 한 차이를 나타낸다.