DeltaFosB кыйыр CCK колдоочусу ишин жөнгө салат (2010)

Brain Рез. 2010 Май 6; 1329: 10-20.

Жарыяланган онлайн 2010 Март 11. чтыкта:  10.1016 / j.brainres.2010.02.081

PMCID: PMC2876727

ЖАКАН жазган Жакшы Кабар F. Enwright, III,¹ Меган Wald,¹ Мэдисон Апенди,¹ Элизабет Hoffman,¹ Rachel Arey,² Скотт Edwards,² Рамштайн Spencer,² Eric J. Nestler,³ жана Коллин A. McClung^2,

Author маалымат ► Copyright жана нак маалымат ►

Бул макаланын жарыяланган акыркы редакцияланган версиясын ушул жерден таба аласыз Brain Рез

КУП башка макалаларды карагыла деп келтирет жарыяланган макала.

Баруу:

жалпылаган

кыянаттык менен дары өнөкөт таасири менен башчыны да маанилүү биохимиялык, түзүлүштүк жана кыймыл-өзгөрүүлөрдүн кээ бирлери өтө туруктуу копиялоо эске ΔFosB арачылык мүмкүн. Мурунку иш ΔFosB 2 жума чычкандардын overexpression кийин ΔFosB сөз 8 жумасында downregulated турган көпчүлүк striatum көптөгөн ген, билдириш өсүшүнө алып келет деп көрсөттү. Кызыктуусу, бул гендердин саны көп эле копиялоо себеби CREB overexpressing чычкандардын upregulated алынган. Бул изилдөө белгисиз болгон, бирок кыска мөөнөттүү ΔFosB CREB аркылуу гендерди жөнгө болобу. Бул жерде биз 2 ΔFosB overexpression striatum менен CREB сөздөр жогорулатат жума 8 апта булгашат таасир берерин байкашкан. эрте дарстарында мээдеги бул региондогу кээ бир максаттуу ген көрсөтүүчүлөргө милдеттүү CREB көбөйгөн менен байланыштуу. Кызыгы, мурунку отчеттордун негизинде шектүү CREB максаттуу бир ген, cholecystokinin (CCK), Striatum менен CREB тарабынан көзөмөлгө алынган эмес. андан ары жөнгө салууну иликтөө үчүн CCK ΔFosB overexpression кийин, биз кыска мөөнөттүү ΔFosB overexpression көбөйөт ырастады да CCK колдоочусу иши жана ген сөздөр. Ал ошондой эле бир алыскы CREB милдеттүү сайтында (CRE) боюнча милдеттүү ишин көбөйтөт CCK колдоочусу. CRE эми Бирок, сайт нормалдуу базалдык билдирүү үчүн зарыл болгон CCK, Ал ΔFosB кошулуу үчүн талап кылынбайт CCK. Чогуу алганда, бул натыйжалар кыска мөөнөттүү ΔFosB дарстарында бир ген көрсөтүүчүлөргө боюнча CREB сөздөр менен иш-аракеттерин көбөйтөт, бул гендердин ушул шарттарда upregulated турган бир гана механизм эмес экенин айтышууда.

Keywords: ядро accumbens, копиялоо, көз карандылык

Баруу:

КИРИШҮҮ

кыянаттык менен дары Өнөкөт таасири бир нече мээ аймактарда биохимиялык жана түзүмдүк өзгөрүүлөргө себеп болот. Бул өзгөрүүлөр mesolimbic системасында ген сөз таржымалын өзгөртүүлөр тартуу деп эсептелет. Бул система ядросу accumbens орто бадал нейрон менен midbrain (УАК) (ventral striatum), ошондой эле башка мээ аймактарда бир катар dopaminergic нейрон ventral tegmental райондун долбоор (VTA) турат. эки копиялоо себептерден ишине өзгөртүүлөр, САМР жооп элемент милдеттүү белок (CREB) жана ΔFosB (а FOS үй-бүлө белок), кыянаттык менен дары өнөкөт таасири менен көргөн биохимиялык, түзүлүштүк жана жүрүм-турумдун өзгөрүшүнүн көптөгөн ортомчу сунуш кылынган ( тарабынан каралып Nestler, 2005).

CREB CREB / ATF үй-бүлөсүнүн мүчөсү болгон ubiquitously билдирди копиялоо болуп саналат. CREB homodimers бир CRE катарда (консенсус: TGACGTCA) өзгөрүүсү менен байлап, көп ген көрсөтүүчүлөргө табылган. CREB боюнча Phosphorylation (133 аланин боюнча жашабаса, башка сайттар аныкталды да) тинейджер кабылдагыч да ылдый, анын ичинде бир нече белги каскаддарынын менен дем берилиши мүмкүн (Коул и др., 1995). серин 133 боюнча phosphorylation кийин, CREB жогорулаган ген сөз алып биргелешип Activator CREB милдеттүү белок (-Анжелесте) же тиешелүү протеиндерди жумушка (тарабынан каралып Johannessen .Удаалаш., 2004). апийимге же кыянаттык psychostimulant дары Өнөкөт таасир ядросу accumbens менен CREB ишин убактылуу көбөйөт алдыруучу (Barrot .Удаалаш., 2002; Шоу-Lutchman .Удаалаш., 2002, 2003), бир ылайыкташуу, бул дары-пайдалуу касиеттерин азайтууга жана дары-дармек алуу терс сезимдерге мамлекетке салым ойлогон (Nestler, 2005).

Lкыянаттык менен дары жасоого onger созулган ΔFosB, FosB бир жогорку туруктуу жонулган Variant тарабынан жарым-жартылай кыйыр болот деп божомолдонот (Nestler .Удаалаш., 1999; McClung .Удаалаш., 2004; Nestler, 2008). Кетүүсүнүн үй-бүлө мүчөлөрү бир Activator белок 1 пайда Jun үй-бүлө мүчөлөрү менен dimerize (AP-1) комплекси. AP-1 копиялоо комплекстери AP-1 жооп элементтин (консенсус: TGACTCA) өзгөртүлгөн жалгашуу чечмелөө жөнгө салуу (тарабынан каралып Chinenov жана Kerppola, 2001). кыянаттык менен дары курч таасир FOS-бүлө мүчөлөрүнүн өмүрү кыска кошулуу (с) (ошондой эле өсүп CREB иш) алып барат, ал эми кайталап дары таасир жогорку туруктуу ΔFosB топтоо алып келүүдө (Hope .Удаалаш., 1994; Perrotti .Удаалаш., 2008), Билдирүү жума өтүп кете берет.

бойго жеткен striatum экранда Би-transgenic чычкандар inducibly ΔFosB же CREB да overexpressing psychostimulants же кыянаттык менен башка дары менен бир нече жолу кабылган айбандарда да байкалбай биохимиялык жана жүрүш-туруш мумкун көп. АБул transgenic жаныбарлардын ген сөз өзгөрүүлөрдүн болуучу дары сыйлык коштолгон кыскарышы менен байланышкан кыска мөөнөттүү (2 апта) ΔFosB боюнча overexpression, өзгөртүүлөр менен upregulated көптөгөн генин аныктаган. кыска мөөнөттүү ΔFosB менен ген сөз жана жүрүш-жооп өзгөрүүлөр 2 же 8 жумага CREB overexpressing айбандарда да байкалбай турган өзгөчө эмнеси менен окшош болгон (McClung жана Nestler, 2003). таптакыр айырмаланып, узак мөөнөттүү overexpression (8 апта) ΔFosB ошол эле гендердин көптөгөн сөздөр тёмёндёгён, ал эми дары-сооп өсүшүнө алып барат (Kelz .Удаалаш., 1999; McClung жана Nestler, 2003).

Бул изилдөөлөрдүн негизинде аныкталган бир гендин болуп саналат cholecystokinin (CCK), Striatum, анын ичинде бир нече мээ региондордо, бир neuropeptide өндүрүлгөн (Hokfelt .Удаалаш., 1980). CCK dopaminergic берүүнү байытып алабыз (Vaccarino, 1992), Дары сыйлык жана күчөтүү менен алектенет (Джосселин ж.б., 1996. Джосселин .Удаалаш., 1997; Hamilton, .Удаалаш., 2000; Beinfeld .Удаалаш., 2002; Rotzinger .Удаалаш., 2002), Ошондой эле өнөкөт кокаин менен striatum менен башчыны да ынандырууга болот (Ding жана Mocchetti, 1992). Андан тышкары, CCK колдоочусу да CREB жана AP-1 комплекстерин жооп берүүгө көрсөтүлгөн (Haun жана Dixon, 1990; Deavall, .Удаалаш., 2000; Хансен, 2001). ген көп жылдан бери (анын ичинде CCK) CREB төмөнкү эки көбөйдү сөздөрдү көрсөткөн жана кыска мөөнөттүү ΔFosB сөздөр белгилүү же шектүү CREB максаттуу ген жок (булMcClung жана Nestler, 2003), Биз кыска мөөнөттүү ΔFosB сөздөр ушул гендердеги (басым жасоо менен жөнгө салуу алып келет аныктоо келген CCK) CREB жөнгө салуу аркылуу же гендин жөнгө салуу боюнча кыйла татаал механизмдер аркылуу.

Баруу:

ЖЫЙЫНТЫКТАРЫ

ΔFosB overexpression убактылуу CREB көлөмүн көбөйтөт

Биз ΔFosB overexpression чычкандардын striatum менен CREB белок көлөмүн көбөйтөт же иликтөө үчүн Батыш өчүрөм колдонгон. Бул изилдөө үчүн, биз NSE-TTA transgene жана TetOp-ΔFosB transgene да алып би-transgenic чычкандар (линия 11A) пайдаланылган. маал жок болгон учурда, ушул чычкан striatum менен dynorphin оң нейрондордо ΔFosB мааниде туруктуу өсүшүн көрсөттү (Kelz .Удаалаш., 1999). өнөкөт кокаин дуушар айбандарда да байкалбай ΔFosB overexpressing Бул ыкма ΔFosB кошулуу жарыш көп документтештирилип, аймак-айкын overexpression берет келет (Hope .Удаалаш., 1994; Kelz .Удаалаш., 1999). Биз 11A чычкандардын overexpressing ΔFosB деп табылган, CREB белок аздыгы олуттуу сөз 2 жумадан кийин жана бул денгээлдин upregulated эле сөз 8 жумадан кийин баштапкы кайтып (Figure 1A, n = 8). Кыска мөөнөттүү ΔFosB ашыкча экспрессиясы менен CREB деңгээлиндеги өзгөрүүлөр башка системада кайталанышы мүмкүн экендигин аныктоо үчүн, PC12 клеткаларында ΔFosBди өтө эле көп чагылдырып, CREB деңгээлинин башкаруу органдарына салыштырмалуу бир кыйла жогорулагандыгын аныктадык (p <0.05) (Figure 1BН = 4). Бул жыйынтыктар менен кыска мёёнёттъъ ΔFosB сөз CREB белок көлөмүн жогорулатат деп көрсөткөн.

Figure 1

CREB этаптары ΔFosB overexpression менен көбөйтүү. lysates батыш олдоксон талдоо чейин (A) чычкан 11 же 2 жума же 8A чычкандардын өчүрүү жылгасына тартып STRIATA (B) PC12 клеткалар overexpressing ΔFosB. маалыматтар менен A салыштырганда жылгасына чыгаруу пайыз өзгөрүшүнө катары көрсөтүлгөн ...

Both striatum конкреттүү максаттуу гендердин көрсөтүүчүлөргө ΔFosB жана CREB байлап кыска мөөнөттүү ΔFosB overexpression төмөнкү

Биз Chip (хроматин immunoprecipitation) striatal ткандарына ΔFosB же CREB бир максаттуу ген көрсөтүүчүлөргө болгон милдеттемелер аныктоо жана бул милдеттүү болсо, сынамыгын колдонулган кыска мөөнөттүү ΔFosB overexpression төмөнкү жогорулаган. Биз милдеттүү иликтөөгө BDNF жана CCK демилгечилери да, гендер өтө кыска мөөнөттүү ΔFosB overexpression төмөнкү upregulated, анткени CREB overexpression, же өнөкөт кокаин дарылоо (McClung жана Nestler, 2003). Ошондой эле учурда милдеттүү түрдө талдоо CDK5 ал ΔFosB белгилүү түздөн-түз бутасы болгондуктан, жайылып, (Chen .Удаалаш., 2000; Батлер и др., 2001; Кумар и др., 2005). Акыр-аягы, биз милдеттүү түрдө бааланат prodynorphin колдоочусу, мурдагы изилдөөлөрдүн-жылдан бери ар кандай шарттарда ΔFosB жана CREB эки менен байланыштуу болушу да мүмкүн экенин байкашкан (Андерссон .Удаалаш., 2001; Zachariou .Удаалаш., 2006).

Chip анализ 11 жума 2A чычкандардын тартып overexpressing ΔFosB CREB же ΔFosB тааныган антителолорду колдонуп STRIATA жүргүзүлгөн. Кадимки шарттарда, биз ΔFosB уланат деп табылган CDK5 жана prodynorphin Промоутер, учурда милдеттүү түрдө эч кандай аныкталган жок, ал эми BDNF or CCK Промоутер (стол 1). Андан тышкары, ΔFosB overexpression боюнча ΔFosB бириктирип көбөйдү CDK5 боюнча колдоочусу, бирок prodynorphin колдоочусу. Биз кийинки бул көрсөтүүчүлөргө боюнча милдеттүү CREB ченеп, CREB уланат деп табылган CDK5, BDNF жана prodynorphin Промоутер, бирок үчүн CCK жайылып, кадимки striatum жана 2 жума ΔFosB overexpression деп CREB боюнча милдеттүү түрдө жогорулатат BDNF жана prodynorphin Промоутер, бирок CDK5 колдоочусу. Чогуу алганда, бул натыйжалар ΔFosB жана CREB көрсөткөн сыяктуу бир ген көрсөтүүчүлөргө да байланышуу мүмкүн prodynorphin жана CDK5Бирок, CREB милдеттүү сыяктуу башка көрсөтүүчүлөргө белгилүү болот BDNF. Мындан тышкары, ΔFosB overexpression күтүүгө болот эле, кээ бир көрсөтүүчүлөргө боюнча милдеттүү ΔFosB көтөрүлүүсүнө алып келет, бирок, бул жолу учурда байкалган ΔFosB-арачылыгы CREB кошулуу менен ырааттуу, конкреттүү көрсөтүүчүлөргө милдеттүү CREB үчүн.

стол 1

эки жумага ΔFosB overexpressing чычкандардын ар кандай көрсөтүүчүлөргө чоюлду ченемдик протеиндердин милдеттүү.

Мурунку иш белгилүү ген көрсөтүүчүлөргө боюнча узак мөөнөттүү ΔFosB overexpression тарабынан жасалма ген сөз өзгөрүүлөр, хроматин өзгөртүүлөрдү, атап айтканда, гистон H3 менен acetylation менен байланыштуу экенин көрсөттү (Кумар и др., 2005). Бул кыска мөөнөттүү ΔFosB overexpression үстүнө ген билдирүү өзгөрүүлөрдү эсепке алса, аныктоо үчүн, биз acetylated гистон H3 (transcriptionally активдүү хроматин менен байланышкан гистон өзгөртүү), же methylated гистон H3 (Lys9, transcriptionally менен байланышкан гистон өзгөртүү камалышы ченегенде жигердүү хроматин). Биз 2 жума ΔFosB боюнча overexpression демилгечилери изилдеп ген эч acetylated H3 камалышы эч кандай өзгөрүүлөргө алып (деп табылганстол 1). Биз methylated гистон H3 камалышы олуттуу тёмёндёшънё тапкан prodynorphin колдоочусу, бирок учурда милдеттүү CCK колдоочусу жана милдеттүү түрдө эч кандай өзгөрүү CDK5 жана BDNF демилгечилери бул аркылуу жалпы механизм жок, ΔFosB, кыска мөөнөттүн ичинде, ген сөздөр жөнгө салат деген божомолдор бар. Биз чынында калыштуу жана кызыктуу болду, биз көбөйтүү түшүндүрө алмак эмес, биздин Chip сынамыгын эч кандай айырмачылыктар табылды CCK жана ΔFosB сөз 11 жума төмөнкү 2A чычкандардын РНК сөз айкашы андан ары бул механизмди иликтөө жүргүзүү чечимин кабыл алышты.

Кыска-termΔFosB көбөйөт CCK бир нече системаларындагы сөздөр

striatum-жылы Би-transgenic 11A чычкандардын overexpressing ΔFosB боюнча Microarray мүнөздөмөсү деп табылган CCK сөз айкашы этаптары overexpression боюнча 2 жума төмөнкү жогору, андан кийин бара-бара ΔFosB сөз узун мөөнөткө менен төмөндөйт (Figure 2AН = 3). Биз бул таасир тастыкталды үчүн CCK 2 жана 8 жума боюнча жаныбарлардын өзүнчө бир топ реалдуу убакыт УРК менен, эки жолу пункттарында материалдар табылган microarray талдоо окшош болот (маалыматтар көрсөтүлгөн жок).

Figure 2

ΔFosB жогорулайт Кыска мөөнөттүү overexpression CCK ген сөздөр. (A) CCK РНК 11A чычкандардын 1 жылы overexpression ΔFosB төмөнкү striatum айтылган 2, 4, же 8 жума. Microarray талдоо striatal үлгүлөргө жүргүзүлгөн жана CCK денгээлдери ...

мындан ары ΔFosB чейин жөнгө салуу мүмкүнчүлүгүн иликтөө үчүн CCK сөз айкашы, биз убактылуу бир менен transfected PC12 клеткалары колдонгон CCK-luciferase кабарчы плазмиддердин жана ΔFosB сөз плазмиддердин же pCDNA бирдей суммасы да. Экөө эки (н = 5-9) жана үч (н = 11-13) ΔFosB overexpression күндөрү бир кыйла жогорулашына алып-жылы CCK-luciferase сөз. Андан тышкары, ΔFosB overexpression үч күн кыйла келди CCKoverexpression эки күнгө салыштырмалуу -luciferase дарстарында (Figure 2B). ΔFosB менен Overexpression бир promoterless luciferase куруу чагылдырбайт азгыра эмес (маалыматтар көрсөтүлгөн жок). эч кандай дарылоо шарттарда бир эле, CCK-luciferase иш көрүнөт. Бул жыйынтыктар кыска мөөнөттүү ΔFosB сөз айкашы ишин жогорулатат CCK колдоочусу, ал эми узак мёёнёттъъ ΔFosB overexpression басып турган механизмин жоопсуз калтырат CCK сөздөр.

ΔFosB overexpression бир алыскы CREB милдеттүү сайтында милдеттүү түрдө көбөйөт CCK колдоочусу

Биздин талдоо деп табылган CCK деген сөз айкашы менен кыска мёёнёттъъ ΔFosB сөз, бирок, Chip сынамыгын деп да CREB да ΔFosB байланыштыруу табылган биздин төмөнкү көбөйгөн CCK колдоочусу. боюнча милдеттүү белок кандайдыр бир өзгөрүүлөр бар же жок экендигин аныктоо үчүн CCK ΔFosB overexpression төмөнкү колдоочусу, биз ичинде алыскы CRE-болуп сайт белек камтыган өкүлдорү electrophoretic мобилдүүлүк кезметтин сынамыгын (EMSA) колдонулган CCK колдоочусу. 11 жума 2A чычкандардын overexpressing ΔFosB боюнча STRIATA ядролук үзүндүлөрдү колдонуп, биз алыскы CRE сайтына милдеттүү көбөйтүүнү табылган CCK колдоочусу (Figure 3 A, CН = 4). Кызыктуусу, 11A чычкандар overexpressing төмөндөп жаткандыгын көрсөткөн 8 жума үчүн ΔFosB CCK сөз айкашы, ошондой эле ушул сайтында милдеттүү түрдө көбөйгөн көрсөттү (Figure 3B, CН = 4). Салыштыра келсек, биз 2 жума ΔFosB overexpressing чычкандардын бир пикирге CRE сайтына милдеттүү түрдө каралат жана бекем CRE striatal үзүндүлөрү боюнча милдеттүү түрдө, ал эми төмөнкү ΔFosB кошулуу милдеттүү саны көбөйгөн (Figure 3FН = 4). Ошентип, бул жолу учурда көргөн жалпы CREB катмарын ΔFosB айынан кёбёйъъсънё карабастан, бул натыйжалар көбөйгөн CREB көрсөтүүчүлөргө боюнча милдеттүү ΔFosB overexpression төмөнкүдөй кээ бир гендер гана тиешелүү болуп, глобалдуу көрүнүш эмес, башкача айтканда, биздин Chip сынамыгын ылайык бар . CREB байланыштуу экенин билиш үчүн CCK Биздин EMSA талдоодо колдоочусу, биз CREB белгилүү греч supershift сынамыгын жасаган. Биздин Chip сынамыгын менен макулдашуу боюнча, биз үчүн CREB эч кандай милдеттүү таба алган жок CCK иликтөө EMSA сынамыгын-жылы алыскы CRE сайт бар, CREB бир пикирге CRE сайтын байлап, supershift олуттуу эмес (ал эмиFigure 3D, EН = 4). иш милдеттүү ДНК CCK колдоочусу да ΔFosB (маалыматтар көрсөтүлгөн жок) үчүн греч жабыр тарткан эмес, ΔFosB ак ниеттүү AP-1 сайттарга милдеттүү бөгөт бир катар алдын ала изилдөөлөр көрсөтүлгөн шарттарда (үмүт менен ал, 1994a, 1994b эле. Chen .Удаалаш., 1995, Hiroi .Удаалаш., 1998). Биз ошондой эле 11A жаныбарлардын ΔFosB сөз 8 жума төмөнкүдөй STRIATA боюнча Chip сынамыгын аткарылган жана эч кандай CREB же ΔFosB камалышы дагы таба CCK колдоочусу (маалыматтар көрсөтүлгөн жок). Ошентип, ΔFosB сөздөр боюнча милдеттүү белок өсүшүнө алып келет CCK колдоочусу билдирүү 2 жана 8 жумадан кийин; Бирок, буларды ким экени белгисиз бойдон калууда.

Figure 3

Протеин боюнча милдеттүү CCK колдоочусу. (A, B) Колдонуу менен Electrophoretic ыкчам нөөмөт пробирдик CCK 2 жумага ΔFosB overexpressing жаныбарлардан striatal кыртыштар менен CRE-сыяктуу сайт (A) же 8 жума (B). (А), ашыкча Жарлыгы атаандашынан адилетсиз атаандаштыктын ...

жылы алыскы CRE сайт CCK жайылып өскөн колдоочусу иши үчүн жооптуу эмес

Биз бир бөлүгүн пайдалануу милдеттүү белок көбөйтүүгө таап бери CCK кёбёйгён, бул сайт зарыл болсо ΔFosB overexpression кийин, алыскы бир CRE сайт камтылган колдоочусу, биз аныктоо үчүн келген CCK ΔFosB overexpression төмөнкү сөздөр. Бул мүмкүнчүлүгүн сынаш үчүн, биз менен PC12 клеткаларды transfected CCK-luciferase анын бекем CRE-сыяктуу сайтка же бир CREB менен кандайдыр бир өз ара жокко турган сайтка бир генетикалык камтыган камтыган плазмиддердин. Кызыктуусу, CRE-окшош сайттын түрлөрдүн базалдык кыскарган CCK 32% га колдоочусу иши (Figure 4AН = 9), бирок, эч кандай таасир эткен жок CCK promotFosB ашыкча экспрессия менен промоутер индукциясы (Figure 4BН = 11-13). Бул, деп божомолдоого болот да CCK колдоочусу толук базалдык иш, ΔFosB overexpression CRE-сыяктуу бир ырааттуулукту талап кылган эмес, жоромолу көбөйгөн колдоочусу иш үчүн бекем CRE-окшош сайтка талап кылат.

Figure 4

The CCKCRE сайттын сөздөр үчүн зарыл болгон эмес, CCK ΔFosB тарабынан дарстарында. (A) CCK-luciferase иш 2 күн кадимки же менен transfection кийин өлчөнгөн CCK-люцифераза же CRE сыяктуу сайт мутацияланган бирөө. * p <0.05 (B) CCK-luciferase ...

cFos уланат CCK колдоочусу

Мурунку изилдөөлөр байкашкан cFos кыска мөөнөттүү ΔFosB сөз менен РНК көбөйөт, бирок, кийин ΔFosB сөздөр узартылышы, striatum менен cFos азгыргандар кокаин дарылоо жөндөмдүүлүгү төмөндөйт (McClung жана Nestler, 2003; Renthal .Удаалаш., 2008). Ошондуктан, cFos өсүшүнө өбөлгө түзөт деген болушу мүмкүн болгон CCK кыска мөөнөттүү ΔFosB сөз төмөнкү сөздөр. Биз cFos үчүн белгилүү бир греч Chip сынамыгын аткарылган жана cFos боюнча милдеттүү түрдө бааланат CCK менен жана кыска мөөнөттүү ΔFosB сөз жок болуш. Биз cFos жалгашуу деп табылган, ал эми CCK колдоочусу, бул милдеттүү кыйла ΔFosB overexpression төмөнкү көбөйтүү эмес (Figure 5Н = 5). Бул cFos байлап бери деп божомолдоого болот CCK колдоочусу, ал жалпы жөнгө салуу үчүн салым кошо алат CCK сөз айкашы, ал, кыязы, жөнгө салууга катышкан эмес, CCK ΔFosB менен болуш.

Figure 5

cFos уланат CCK колдоочусу. Хроматин immunoprecipitation сынамыгын ΔFosB тартып чычкандар overexpressing же жылгасына, же жылгасына чыгаруу 2 жумадан кийин striatal кыртышын колдонуу cFos үчүн белгилүү бир греч жүргүзүлгөн. Реалдуу убакыт ПКО талдоо болду ...

Баруу:

ТАЛКУУЛОО

Бул изилдөө тастыктайт жана ΔFosB striatum менен ген сөздөр жөнгө көрсөтүү мурунку жыйынтыгы менен ачат жана бул кыска мөөнөттүү сөз кийин бир нече механизмдер аркылуу сүйлөп жатат деп тапкан. Биз overexpression ичинен 2 жума өткөндөн кийин, көрсөткөн, ΔFosB сөз өзгөрүүлөргө алып белгилүү гендердеги көрсөтүүчүлөргө түздөн-түз уланат (б.а. CDK5). Мындан тышкары, бул башка ген көрсөтүүчүлөргө боюнча милдеттүү түрдө көбөйгөн CREB алып, CREB белок көлөмүн, маданияттуу клеткалары, ошондой эле striatum эле байкалган таасир көбөйөт (б.а. dynorphin жана BDNF). мурунку макалада кокаин артыкчылык чараларга striatum жылы ΔFosB кыска мөөнөттүү overexpression CREB overexpressed кийин табылган эле ген сөздөр өзгөрүүлөрдүн көп болушуна алып келет, жана ушул сыяктуу жүрүм-турум жооп алып барат (деп табылганMcClung жана Nestler, 2003). Ошентип, ΔFosB CREB, ошондой эле белгилүү бир ген көрсөтүүчүлөргө CREB камалышы жөнүндө кошулуу алып барат ушул табылгага эмне ген сөздөр өзгөрүүлөргө абдан көп, бул эки макала себептер менен жалпы эле түшүнүүгө жардам берет.

аны кыянаттык менен дары-серин 133-phosphorylated CREB баскычтарда өзгөртүүлөрдү азгыра экенин көрсөттү бери ΔFosB тарабынан CREB боюнча дарстарында, кызыктуу болот (Mattson .Удаалаш., 2005) Жана CRE-арачылыгы чечмелөө жогорулатуу (Barrot .Удаалаш., 2002; Шоу-Lutchman .Удаалаш., 2002, 2003), CREB жалпы көлөмүн өзгөртүү жок. Бул CREB баскычтарында өзгөрүүлөр убактылуу болушу да мүмкүн, ошондуктан, жонокой башка изилдөөлөр өткөрүлгөн. биздин колубузда, биз өзгөчө эксперименттерде CREB-RNAдагы кокаин-жасалма көбөйөт көрдүк, бирок, бул таасир өтө өзгөрүлмөлүү болуп саналат (жарыяланбаган байкоо жүргүзүү). кыска мөөнөттүү ΔFosB overexpression төмөнкү 11A transgenic чычкандар жана PC-12 клеткалары да CREB кошулуу көрсөтүп, демек, бул CREB генде дары-жасалма өзгөрүүлөрдү түшүндүрө дагы бир механизмин камсыз кылуу, чынында эле, ΔFosB (же ΔFosB бир максат) менен башчыны да ынандырууга болот деп эсептейт сөздөр.

Кызыгы, биз да CREB да ΔFosB байланыштыруу табылган CCK колдоочусу да CCK сөз так, кыска мёёнёттъъ ΔFosB сөз төмөнкү upregulated жатат. CCK VTA жана НАК да (айтылган мол neuropeptide болуп саналатHokfelt .Удаалаш., 1980) Жана, кыязы, кыянаттык менен (Джосселин менен бир дары-турумдук жооп катышып жатат Сүрөсү, 1996. Джосселин .Удаалаш., 1997; Hamilton, .Удаалаш., 2000; Beinfeld .Удаалаш., 2002; Rotzinger .Удаалаш., 2002). клетка маданият сынамыгын-жылы, CCK колдоочусу көп мүнөздөлөт жана CREB жана AP-1 үй-бүлө мүчөлөрү (карап жооп берүүгө көрсөтүлгөн жатат Хансен, 2001). Haun жана Dixon (1990) AP-1 комплекстери менен байланыштырышы мүмкүн экенин көрсөткөн CCK CRE-сыяктуу сайты экстракорпоралдык, Андан ары көрсөтүлгөн, SK-N-MC нейробластома клеткаларын, overexpressed cFos үчүн CRE-болуп сайт кыскарган колдоочусу ийкемдүүлүгүн бул генетикалык колдонгон / cJun (Рурк и др., 1999). Чынында эле, биз да көбөйдү жүрбөйт CCK колдоочусу иши (Figure 2) Жана же CRE-сыяктуу элементтин тегерегиндеги милдеттүү (Figure 3) ΔFosB, башка AP-1 үй-бүлө мүчөсүнүн overexpression, ал эми биз ΔFosB түздөн-түз милдеттүү таба CCK колдоочусу бододо, or экстракорпоралдык, Анын overexpression да үстүндө.

Көп жумуш жөнгө CREB үчүн ролун көрсөттү CCK колдоочусу иш. The CCK CRE-болуп сайт Омурткалуу жаныбарлардын аркылуу сакталат жатат (Хансен, 2001) Жана, кээ бир клетка маданият сынамыгын-жылы да, CREB жана AP-1 комплекстери бул сайтка байлап, жана зарыл болгон CCK колдоочусу иши (Haun жана Dixon, 1990; Deavall, .Удаалаш., 2000; Хансен, 2001). Андан тышкары, бир нече белгилүү жандандыргандан жөнүндө CCK сөз айкашы (анын ичинде bFGF, PACAP, peptones жана жыйрылуу) CREB аркылуу иш-аракет кылууга болду (Хансен, .Удаалаш., 1999; Deavall, ж.б., 2000; Бернард .Удаалаш., 2001; Gevrey, .Удаалаш., 2002; Хансен, .Удаалаш., 2004). биздин CCK-luciferase кабарчы ген маалыматтар жөнгө CRE-сыяктуу сайтына маанилүү ролун колдоого алуу CCK Бул сайттын түрлөрдүн базалдык азайтат бери колдоочусу болуп иш-аракет, CCK колдоочусу иши жана CCKVP16-CREB, CREB бир constitutively активдүү түрдө азгырган -luciferase сөз айкашы, бул сайт (жарыяланбаган байкоо) айландырылган учурда жоголуп кеткен. Ошентип, биз байлап эмес көрүнөт деп CREB таба экен CCK кыска мөөнөттүү ΔFosB overexpression базалык же үстүнө же striatal үзүндүлөрү менен колдоочусу CREB көтөрүлүшү жаткан. Бул CREB деп көлөмүн ишенет тары Бул сайтында милдеттүү өлчөмүн аныктоодо көз каранды эмес болуп, бул башка иш менен колдоого алынат (Ча-Molstad, .Удаалаш., 2004). Мындай башка, мурда аныкталган CREB максаттуу гендер көрсөтүүчүлөргө, бери BDNF жана prodynorphin, Байлап CREB, биз CREB үчүн милдеттүү эмес деп таап ишенет CCK striatal өзөктүк үзүндүлөрү менен болуш. Мындан тышкары, дарстарында CCKΔFosB жөнгө салбайт деп айткан ΔFosB менен -luciferase иши, бүтүн CRE-окшош сайтка көз каранды болгон эмес CCK үчүн CREB түздөн-түз милдеттүү жөнгө салуу боюнча сөз айкашы CCK колдоочусу.

менен өз ара CREB аныктоо үчүн албаганыбыз CCK жайылтуучу тарабынан колдоого алынат Renthal ж.б.. (2009), Ким өнөкөт кокаин астында phosphorylated CREB глобалдык өзгөрүүлөргө (pCREB) жана ΔFosB striatum менен милдеттүү түрдө карап чип-чип ыкманы колдонгон. Мындай эксперименттердин ДНК-белок комплекстери азык- кийин, ΔFosB же pCREB антителолор жана тундурулган ДНК менен immunoprecipitated эле, бир колдоочусу microarray үчүн инкубатордо болгон. көп мурда мүнөздөлгөн CREB максаттуу гендер Бул ыкманын менен аныкталган (Ал эми, мисалы, BDNF, prodynorphin), CCK аныкталган жок. Мындан тышкары, бир пикирге CRE сайтка CREB камалышы маданияттуу клетка сызыктардын ортосундагы абдан ар түрдүү экенин көрсөтүп турат (Ча-Molstad, .Удаалаш., 2004). менен өз ара CREB ашык мурунку изилдөөлөрдүн баары CCK колдоочусу клетка маданияты (биздин EMSA ороочу үлгүлөрү алынган эле турган мээ эмес) жүзөгө ашырылат жана белок-ДНК өз ара иликтөө гел кезметтин сынамыгын колдонулган. бир EMSA бир ДНК тизмегинин жалгашуу эске дараметин баа берет, ал эми Chip сынамыгын бул өз ара бир роман карап камсыз бододо,. Мындан тышкары, маалыматтардын көп кошулуу да көрсөткөн CCK үчүн милдеттүү болуш иши же CREB CCK колдоочусу сыяктуу peptones сыяктуу себептер менен сигнал келген клеткалардан алынган (Бернард .Удаалаш., 2001), Жыйрылуу (Хансен, .Удаалаш., 2004), Же конуштун жана ЭрК, анын ичинде клеткадагы белги каскаддарынын жандандыргандан ар кандай (Хансен .Удаалаш., 1999). биздин тажрыйбаларга колдонулушу, бир гана "сигнал" азгырганда, жетиштүү ΔFosB боюнча overexpression болду CCK сөздөр. Алынган бирге, бул CREB жөндөмү (мүмкүн, жөнгө салуу) менен байлап, деп эсептейт CCK жайылтуучу өзгөчө белги жолдорунун клетка түрү жана кошулуу боюнча өтө эле көз каранды болуп саналат. Андан тышкары, CCK CRE-сыяктуу колдоочусу элемент (жок дегенде uninduced PC12 клеткаларда жана чычкан striatum менен) CREB же ΔFosB же түздөн-түз бутасы эмес. Кызыктуусу, жөнгө салуу FosB CREB тарабынан сөз клетка түрү жана стимулдаштыруу түрүнө тиешелүү болуп саналат. Андерссон менен изилдөө жана башкалар. чычкан striatum салып CREB antisense олигонуклеотиддер, сайынуу жолу жарым-жартылай кошулуу басат деп табылган FosB кокаин башкарууну төмөндөгү (Андерссон .Удаалаш., 2001). Бирок, алар да L-Dopa жөндөмү түрткөнүн деп табылган FosB 6-OHDA-lesioned striatum айтылган CREB antisense олигонуклеотиддер болушунун таасири астында эмес.

CREB жана ΔFosB кыйыр түрдө жөнгө салуу көрүнүшү болгондуктан, CCK колдоочусу жана хроматин түзүмүндөгү өзгөрүүлөр ΔFosB түрткөнүн сигналдар бир түрдүү жооп документтештирилди (Tsankova .Удаалаш., 2004; Кумар и др., 2005; Renthal .Удаалаш., 2008), Биз ΔFosB кыйыр хроматин структурасын өзгөртүү менен колдоочусу ишин байытып мүмкүн экенин айткан. Бирок, 2 жума ΔFosB overexpressing чычкандар, алардын гистон H3 acetylation эч кандай өзгөрүү болгон жок CCK колдоочусу (стол 1). Бул Чип-чип маалыматтар тарабынан колдоого алынат Renthal ж.б.. (2009), Ким менен милдеттүү acetylated H3 эч кандай өзгөрүү жок деп билдирди CCK чычкандардын колдоочусу өнөкөт кокаин кабылган. бери CCK колдоочусу striatum жигердүү болуп, эч кандай репрессиялык methylated гистон күтүлүүдө же байкалган ченемдүү H3. Кызыктуусу, ошондой эле учурда милдеттүү түрдө байланыштуу acetylated H3 жылы ΔFosB overexpression эч кандай өзгөрүү болду BDNF колдоочусу (алар милдеттүү түрдө көбөйгөн CREB көрсөткөн) же CDK5 жана prodynorphin Промоутер (ΔFosB милдеттүү көбөйгөн көрсөттү). колдоочусу ишинин өзгөрүшү менен байланышкан гистон өзгөртүүлөрдү сансыз бар болгондуктан (тарабынан каралып Rando жана Чанг 2009), Бул гендердин кошулуу менен пикирлешип, кыязы, башка хроматин өзгөртүүлөр бар. Ар бир хроматин өзгөртүү, колдоочусу иш деъгээлинин учурда жарыш сөз да, бир гендин кошулуу учурунда өзгөртүү мүмкүн эмес. келечектеги ишинде, аны тегерете хроматин тъзъмъндёгъ башка мүмкүн болуучу өзгөрүүлөрдү карап көрүү кызыктуу болмок CCK ΔFosB overexpression төмөнкү колдоочусу. Кызыктуусу, өнөкөт кокаин (кыязы, аркылуу ΔFosB дарстарында) sirtuin 1 эркбилдирүүсүнө азгыра жана 2, класс III гистон deacetylases нейрондордун PHYSIOLOGY өзгөртө көрүнөт, ЭРК белги жана кокаин үчүн жүрүш-жоопторду көрсөтүп келет (Renthal .Удаалаш., 2009). бир гистон deacetylase менен клуб бир эле учурда ген көп сандаган сөздөр жөнгө салуу мүмкүнчүлүгүнө ээ болмок аркылуу хроматин структурасында глобалдык өзгөрүүлөр.

Бир мүмкүн талапкер катышкан CCK ΔFosB overexpression кийинки жөнгө салуу AP-1 үй-бүлө мүчөсү cFos болду. cFos билдирүү CREB менен жөнгө салынат (Sheng .Удаалаш., 1990; Impey .Удаалаш., 2004), Жана cFos overexpression (анын милдеттүү өнөктөшү cJun менен overexpression менен бирдей) жогорулайт CCK колдоочусу иши (Рурк и др., 1999). Ошондуктан, кыска мёёнёттъъ ΔFosB overexpression көбөйгөн CREB этаптары cFos жогорулатууга жана милдеттүү жогорулаган алып келиши мүмкүн CCK CRE-болуп сайт. cfos РНК ΔFosB overexpression эки жумадан кийин чычкандардын башчыны да ынандырууга болот (McClung жана Nestler, 2003) Жана өнөкөт кокаин же узак мөөнөттүү ΔFosB overexpression дуушар чычкандардын тёмёндёгён (Renthal .Удаалаш., 2008). Бул жерде түздөн-түз cFos уланат деп таап, CCK striatal кыртышында колдоочусу, бирок, ΔFosB overexpression олуттуу милдеттүү көбөйөт. Бул эми cFos тартылган жөнгө салуу болушу мүмкүн деп айтууга болот CCK жалпы сөз, жалгыз cFos камалышы бир өзгөрүү ΔFosB турган, кыязы, бир механизм эмес, жөнгө салат CCK сөздөр. Бул ΔFosB да азгыра мүмкүн экенин, бирок, мүмкүн, cFos пост-котормочулук өзгөрүүлөрдү (мисалы, өзгөртүп phosphorylation) же милдеттүү өнөктөшү (мисалы, cJun сыяктуу) же ко-Activator белок билдирүүсүнө берилген. Бирок, бүтүн CRE-сыяктуу сайт бери (мурда AP-1 комплекстерин үчүн милдеттүү сайт болуп көрсөтүлгөн, көрүп Haun жана Dixon, 1990) Көбөйгөн үчүн талап кылынбайт CCK ΔFosB overexpression менен көргөн болуш иши (биздин кабарчы ген эксперименттерде баа сыяктуу), ал башка транс-милдетин себептер да ΔFosB менен жөнгө салынат билүүгө болот.

The CCK Биздин luciferase кабарчысы ген эксперименттеринде колдонулган колдоочусу үзүндүсү бир сакталган Sp1 милдеттүү сайтына жана E-кутучаны (Хансен 2002 тарабынан каралат) камтыйт. Атап айтканда, E-куту тизмектеринин көптөгөн копиялоо нерсеге байлап көрсөткөн (тарабынан каралып Торлби жана МакНамара, 2004). PC12 клеткаларды колдонуу менен, биз E-куту көлөмү бул генетикалык көрдүм CCK колдоочусу иш, бирок ΔFosB үчүн жетекчиси жооп өзгөртө албайт (маалыматтар көрсөтүлгөн жок). Кызыктуусу, CCKCRE сайтына жана E-коробкага да пайда камтыган -luciferase кабарчы эч кандай табылууга базалдык ишин жана ΔFosB overexpression (жарыяланбаган байкоо) үчүн жооп бербей жатат. боюнча ΔFosB дагы бир болуучу медиатор CCK колдоочусу ATFs, өнөкөт psychostimulant таасир striatum жасалма болушу үчүн белгилүү бир түрлөрү (Грин и др., 2008). Бирок, биз бул ΔFosB ATFs кошулуу (маалыматтар көрсөтүлгөн жок) эч кандай далилдерди таба алышкан жок, жана ATFs боюнча айландырылып CRE-окшош сайтка байлап керек болчу CCK колдоочусу.

Бул изилдөө бир эскертүү биз ΔFosB overexpress үчүн би-transgenic системасын колдонуп, жана ошондуктан бир өнөкөт кокаин бул парадигманын жана башкаруу ортосундагы окшоштукту тартабыз эскичил болушу керек. Бирок, overexpression мээдеги бул регион менен чектелген, себеби 11A transgenic чычкандар, striatum жылы ΔFosB конкреттүү таасирин карап уникалдуу мүмкүнчүлүк болот (Chen .Удаалаш., 1998), Кокаин башкаруу анда кыйыр түрдө striatum таасир этиши мүмкүн болгон башка мээ региондордо ар кандай өзгөрүүлөрдү алдыруучу эми. Мындан тышкары, өнөкөт кокаин менен мамиле эмес transgenic жаныбарларга салыштырып, бир нече изилдөөлөр 11A чычкандардын ушундай жүрүм-турум жана молекулярдык мумкун документалдуу (Kelz .Удаалаш., 1999; McClung жана Nestler, 2003; Renthal .Удаалаш., 2009). Андан тышкары, Батлер и ал. (2001) striatal билдирген бирдей Cdk5 РНК жана белок дарстарында жана ушул эле 11A штамм-жылы кокаин мамиле караганда, азык-transgenic ОДНОПОМЕТНИКИ, ошондой эле CDK5 максаттуу, p35 жана DARPP-32 ушундай өзгөрүүлөргө.

Жыйынтыктасак, биз кыска сынак ΔFosB сөз striatum-жылы бир нече механизмдер аркылуу гендердин кошулуу алып келет деп тапкан. Бул али аныктала турган жолунан тышкары CREB протеин жана иш, хроматин өзгөртүүлөрдү камалышы, киришүү дарстарында жана түздөн-түз үндөгөндөй, камтыйт.

Баруу:

EXPERIMENTAL жол-жоболору

жаныбарлар

Эркек би-transgenic 11A жаныбарлар (NSE-TTA х TetOP-ΔFosB) Бул макалада колдонулган жана мүнөздөлөт Kelz .Удаалаш., 1999. ΔFosB overexpress үчүн, чычкан башкаруу чычкан маал боюнча сакталып калган, ал эми жашы 3 жана 6 жума ортосунда маал алынып салынды. Бардык чычкандар тобу жайгашкан жана 12 боюнча сакталып калды: 12 жарык / караңгы айлампасынын, 7 через экенимди жана өчүрүү жарык 7 боюнча жарык менен жарнама LIB тамак-аш, суу алуу мүмкүнчүлүгү. Бардык чычкан эксперименттер Даллас шаарындагы Техас түштүк борборуна институтун жаныбарлар сактоо жана пайдалануу боюнча комитети тарабынан жактырылды протоколдорго ылайык болгон.

Журналист жана сөз айкашы Плазмиддер

wildtype (WT) CCK колдоочусу-luciferase кабарчысы pGL200-Люк багытка (Promega) салып, болжол менен 3 BP ПКО бөлүгүн киргизүү тарабынан даярдалган. Бул үзүндүсү чычкан геномдук ДНК алынган эле (грунттарды: 5 "TATCCTCATTCACTGGGACGC 3" суунун жана 5 "TACCTTTGGATGGGGAAATCG 3" ылдый) жана башында pGEM-T Easy багытка (Promega, #A1360) киргизилет. колдоочусу үзүндүсү анда pGL1-Люк боюнча Kpn1 / Xho3 чектөө энзим сайттарга кирип, клондоштуруу жолу болду.

жылы CRE чекити генетикалык түзүү үчүн CCK илгерилетүүчү, мурда кабарланган CRE сыяктуу сайтка каршы багытталган мутагендик праймер (сезгич праймер: 5'CGTGTCCTGCTGGACTGAGCTCGCACTGGTAAACA 3 ', antisense primer: 5'CTGTTTACCCAGTGCGCGCTGAGTCCAGCAGGACACG 3') инструкциясы менен өзгөрүлгөн инструментарийде колдонулган инструментарийдин колдонулушу . Бул билдирилген CRE сыяктуу сайтты (ACTGCGTCAGC) ACTGAGCTCCге айландырат. Бардык кабарчы плазмидалар ДНКнын секвенциясы менен тастыкталды. ΔFosB туюнтма плазмида pCDNA 3.1дин көп жолу клондолгон жерине киргизилген andFosB толук узундугун камтыйт жана буга чейин сүрөттөлгөн (Ulery жана Nestler, 2007).

Клетканын маданият жана ДНК transfections

Келемиш феохромоцитома (PC12) клеткалары Дульбекконун модификацияланган Бүркүт орто F-12де сакталып, ага 10% жылкы сывороткасы, 5% түйүлдүктүн уйдун сывороткасы жана 1% пенициллин / стрептомицин 37 ° C жана 5% CO₂. Клеткалар BTX 360 электропораторун (350В, 0 ом жана 850 мкФ) колдонуп, электропорация жолу менен 800 мкл Дулбекконун фосфаты бар буфердик эритинди 4 мкг репортер жана 10 мкг экспрессиялык конструкция менен 5 мм аралыктагы кюветада өткөрүлдү. ДНКнын жалпы көлөмүн нормалдаштыруу үчүн бош вектордук плазмида (pCDNA) колдонулган. Трансфекциядан кийин клеткалар көрсөтүлгөн убакыттын ичинде 35 мм коллаген менен капталган идиштерге өстүрүлдү.

Luciferase сынамыгын

Трансфекциядан эки-үч күн өткөндөн кийин, клеткаларды 3 жолу Дулбекконун фосфат буфердик тузу менен жууп, лизис менен жуушкан (25мм глицилгликин, 15мм MgSO колдонуп)₄, 4 MM EGTA, 1% Triton X-100, рН 7.8, 1 MM DTT), чогултуп, экстрагирлөө аркылуу тазаланат. lysate боюнча 30 μL 140 μL luciferase пробирдик туруучу (25 мм glycylglycine менен бирге эле, 15 MM MgSO₄, 4 MM EGTA, 1 MM DTT, 1 MM ATP, 1 мм калий кездешүүчү, 1 мм коэнзими A, рН 7.8). Тъстёгъ булалар, ошондой эле иш-күнүнө luciferin 800 μL 40 мм бир дардын дозасы сайылгандан кийин бир Чини-1 microplate химиялык окурманга менен өлчөнгөн. Luciferase иш BioRad белок тамганы тарабынан аныкталуучу жалпы белок мазмунуна нерседей эле.

Electrophoretic мобилдүүлүк нөөмөт пробирдик

Би-transgenic 11A чычкандардын тартып striatum тараптуу бүдүрчөлөр ядролук үзүндүлөрүн (же 2 же 8 жумага маал өчүрүү сакташкан) (McClung жана Nestler, 2003) Ылайык даярдалды Huang жана Уолтерс (1996). ³²P-белгиленген эки тыгылып олигонуклеотиддер зонддору Promega Гэл Shift тамганы системасы протокол (#E3300) колдонуу менен даярдалган жана Академия Roche Quick Spin Мамычаларын менен тазаланышты. консенсус CRE жана AP-1 иликтөө тизмектеринин Promega (#E328A жана E320B, тиешелүүлүгүнө жараша) келген эле жана CCK CRE тизилиши (CCK-CRE сезүү CTAGCGAGCTCTGGACTGCGTCAGCACTGGGTGCA; CCK-CRE antisense: CCCAGTGCTGACGCAGTCCAGAGCTCGCTAGCTTT) болгон.

Милдеттүү түрдө аткарууга тийиш болгон сезимге жана electrophoresis Promega Гэл Shift тамганы системасы тартиби (#E3300) жөнүндө өзгөртүүлөрдү пайдалануу менен ишке ашырылган. Бет ачаар барак аспаптын 50,000 CPM 10 мкг striatal өзөктүк сүзүлгөн менен коштолуп турду. Cold атаандашы ДНК же антителолор чейин radiolabeled иш киргизүү кошулган. supershift эксперимент үчүн, 2 CREB греч боюнча мкг (Upstate биотехнологиясы # 06-083) колдонулган. Кабыл 4% polyacrylamide ЗАРИ боюнча electrophoresed, кургатылган, ошондой эле (1 күн 2 саат күчөтүү экрандарда пайдалануу) кино дуушар болушкан.

иммуно-

PC12 клеткалары үчүн трансфекцияланган клеткалардын 35 мм плиталары муздак музда жууп, Дулбекконун фосфат-буфердүү туздуу физиологиялык эритмеси жана лизаттар муздак RIPA лизис буферинде даярдалган (50мМ Tris pH 7.4, 5мМ NaCl, 5мм EDTA, 1% дезоксихолат, 1 Протеаза ингибиторлорун камтыган% Triton X-100, 0.1% натрий додецил сульфаты). Ультрадыбыс менен, клирингден жана Брэдфорд протеин анализинен кийин лизаттар толугу менен денатурацияланып, ар бир үлгүнүн 50 мкг 10% SDS полиакриламид гели боюнча электрофороттолду. Белоктор PVDF мембранасына өткөрүлүп, 1% Tween-3 (TBS-T сүтү) камтыган Трис-буферленген туздуу сүттө 0.1% майсыз кургак сүттө 20 саатка блоктолду жана түнкүсүн 4 ° C температурада баштапкы антителолор (CREB-) менен текшерилди. Upstate Biotechnology # 06-083, 1: 1,000де колдонулган; GAPDH- Sigma # G8795, 1: 80,000де колдонулган) TBS-T сүтүндө суюлтулган. TBS-Tде бир нече жолу жуугандан кийин, тактар ​​бөлмө температурасында бир саат бою щелочтук фосфатаза менен бириктирилген экинчи антителолорду (Sigma) колдонуп, TBS-T сүтүндө 1: 5,000 суюлтулган. Tris-буфердик туздагы көп жолу жуулгандан кийин, түстүү реакция BioRad (# 170-6432) көрсөтмөлөрүнө ылайык жүргүзүлдү. Мембраналар түн ичинде кургатылып, жалпак сканерде сканерден өткөрүлүп, ImageJдин жардамы менен жүргүзүлгөн денситометрия (төмөндө караңыз).

striatal үзүндүлөр, мурда жарыяланган Батыш олдоксон сынамыгын жүргүзүлгөн (Hope .Удаалаш., 1994). Tissue 1 мм Жоондугу бир мээ булагына боюнча Айтпа чычкандар, муз жайгаштырылат жана жаныбарларды союп алынып салынды. Tissue шибегелер колдонулган чейин -80 ° C кабыл алынган жана камакка алынганын билдирген. Tissue да phosphatase жана протеазынын ингибиторлору камтыган өзгөртүлгөн жуугучтар негизинде Санитардык-жылы муз sonicated болгон (Рош, Сигма). sonication кийин, үлгүлөр кайнак суу менен, денатуралдаштырылган жана 15,000xg боюнча 15 мүнөт ийбөө алынган; supernatant кийин чогултулган жана иштелип чыккан; белок топтолуу суммаларды андан Уимблдон пробасы (Bio-Раад) аркылуу сан көрсөткүчтөрү алынган. Бул үлгүлөр 10% Актиламиддер / bisacrylamide Лари, 5% сүт бөгөттөлгөн жана негизги антителолор менен инкубатордо бир PVDF кабыкчасынын которуп алышкан (Anti-CREB, Upstate, Лейк-Плэсид, NY). Доскада кийин бир chemiluminescence системасын (Пирс) колдонуу менен ченеп чыкты. Бардык үлгүлөр GAPDH (Fitzgerald, ынтымактын, MA) үчүн нерседей эле. Стандарттык буйру биз тамганы сызыктуу спектри боюнча камсыздоо үчүн алышкан.

Densitometry талдоо

PC12 immunoblots үчүн densitometry талдоо rodbard тут ImageJ аркылуу аткарылган. Орточо негизги белги ар бир өлчөө бөлүнүп жана GAPDH сигнал CREB катышы ар бир үлгүдөгү эсептелип чыккан. striatal immunoblots жана EMSA талдоо үчүн, Апенди Image 1.62c өбөлгөлөрү разряддуу менен колдонулган.

Хроматин immunoprecipitation (Чип)

Chip сынамыгын ыкмасына ылайык жасалган Tsankova .Удаалаш. (2004) жана Kumar ж.б.. (2005). Кыскача айтканда, доксициклинде же андан тышкары жерде сакталып турган 11А чычкандарынан алынган эки тараптуу стриаталдык үлгүлөр 1% формальдегид менен кайчылаш байланышта болуп, өз ара байланышуу глицин менен өчүрүлдү (акыркы концентрациясы 0.125 М). Бул үлгүлөр кортекстин алынып салынышы менен ядронун денгээлинде алынган мээнин бүт кесимдеринен алынган. Хроматинди ультрадыбыс менен болжол менен 0.2 ден 1 кб фрагменттерине чейин кыркып, Протеин G шурулары менен тазалашты (Thermo Scientific # 22852) жана -80 ° C температурада тоңдурулган киргизүү үлгүлөрү. Ар бир жаан-чачынга 60-100 мкг хроматин колдонулган. Ар бир баштапкы антителонун 5-10 мкг колдонулган (CREB: Upstate Biotechnology # 06-863, ΔFosB: Santa Cruz Biotechnology # SC-48x, acetylated H3: Upstate Biotechnology # 06-599, methylated H3 (LYS9): Cell Signaling Technology, cFos: Santa Cruz Biotechnology # SC-7202x). Антитело-хроматин комплекстери өндүрүштүн көрсөтмөлөрүнө ылайык (Thermo Scientific # 22852) Протеин G плюс мончок менен иммунопрепарирленген. Киргизилген жана тундурулган үлгүлөрдүн тескери кайчылаш байланышынан кийин, ар бир үлгү сандык ПТРге (qPCR) дуушар болгон. Ушул антителолордун бардыгын ChIP үчүн колдонуу бир топ тастыкталды (Tsankova .Удаалаш., 2004; Кумар и др., 2005; Renthal .Удаалаш., 2009).

кызыктырган ар бир ген колдоочусу боюнча милдеттүү белок Levels qPCR (Колдонмо Биосистемалардын (ABI) Prism 7700, Foster шаарынын CA) менен байланыштуу ДНК көлөмүн өлчөө аркылуу аныкталды. Киргизүү же жалпы ДНК (nonimmunoprecipitated) жана immunoprecipitated ДНК SYBR Грин (Колдонмо Биосистемалардын, CA) алдында үч нускада күчөтүлгөн болчу. Ар бир үлгүдөн Ct баалуулуктар тизмеги Detector 1.1 программалык каражаттарды пайдалануу менен алынган. шаблон ДНК салыштырмалуу сандык ΔΔCt ыкмасын колдонуу менен аткарылган (Tsankova .Удаалаш., 2004). Грунттарды колдонулат: BDNF колдоочусу 4: CTTCTGTGTGCGTGAATTTGCT; AGTCCACGAGAGGGCTCCA CDK5 колдоочусу: GCTGAAGCTGTCAGGAGGTC; GTGCCCCGCTCTTGTTATTA CCK колдоочусу: CTTGGGCTAGCCTCATTCACTG; TTAAATAGCTCCTCCCGGTTCG Prodynorphin колдоочусу: GGCTTCCTTGTGCTTCAGAC; GCGCTGTTTGTCACTTTCAA.

статистикалык анализ

Бардык маалыматтар орточо ± стандарттык ката дегенди билдирет. Статистикалык айырмачылык Студенттин эки куйруктуу t-тестинин натыйжасында аныкталды (p <0.05). Бир нече жолу салыштырганда, p-маанилери Bonferroni коррекциясы аркылуу жөнгө салынган.

Баруу:

Acknowledgments

Биз пайдалуу талкуулоо үчүн Will Renthal жана Arvind Кумар ыраазычылык билдирип кетким келет. Ошондой эле, биз бул эксперименттер каржылоо үчүн Нида ыраазычылык билдирип кетким келет.

Баруу:

Шилтемелер

Publisher's Disclaimer: Бул жарыялоо үчүн кабыл алынган бир Unedited кол жазманын бир PDF сөп. Биздин кардарлар үчүн кызмат катары кол жазмасынын бул алгачкы нускасын менен камсыз кылат. кол жазма анын акыркы citable түрүндө жарыяланат чейин натыйжасында далилдөө copyediting, калыптоо жана экспертизадан өтүп калат. өндүрүштү каталар мазмунуна кандай таасир этиши мүмкүн болгон ачылган мүмкүн ичинде экенин эске алууну суранабыз, жана журналына тиешелүү бардык юридикалык тартуу байланыштуу.

Classification шарттары:

Рубрика: #1 Уюлдук жана молекулярдык түйшүккө системаларынын Biology

Баруу:

шилтемелер

1. Андерссон M, Konradi C, Ченчи MA. САМР жооп элемент-милдеттүү белок жатсам тинейджер көз каранды ген билдирүү үчүн талап кылынат, бирок тинейджер-denervated striatum. J Neurosci. 2001; 21: 9930-43. [PubMed]
2. Barrot M, Olivier JD, Perrotti LI, DiLeone RJ, Berton Оо, Eisch AJ, Impey S, Storm DR, Neve RL, Yin JC, Zachariou V, Nestler EJ. Ядродогу CREB иш дүйнөсү стимулдарга жүрүш-жооптордун эле дүрмөттөлгөн номиналдык башкаруу accumbens. Жаздын Natl Acad Илимий АКШ A. 2002; 99: 11435-40. [КУП акысыз макала] [PubMed]
3. Beinfeld MC, Connolly KJ, Пирс RC. Ядронун Кокаин дарылоо көбөйөт клетка сыртындагы cholecystokinin (CCK) сергек, эркин көчүп келемиштер кыртышын accumbens, жүрүм-турумдук кокаин менен курчутулат жаткан келемиштер менен жакшыртылган таасир. J Neurochem. 2002; 81: 1021-7. [PubMed]
4. Бернард C, Саттер A, C Vinson, Ratineau C, Chayvialle J, Cordier-Bussat M. Peptones туруучу аденозин monophosphate жооп элемент-милдеттүү себептер аркылуу ичеги cholecystokinin ген чечмелөө өбөлгө. Эндокринология. 2001; 142: 721-9. [PubMed]
5. Батлер JA, Chen J, Тейлор JR, Svenningsson P, г. A, Снайдер GL, Ян Z, Принтинг ZK, Оуме CC, Nairn AC, Nestler Э.Дж., Greengard P. кокаин үчүн өнөкөт катнаш Effects нейрондордун белок Cdk5 менен жөнгө салынат. Nature. 2001; 410: 376-80. [PubMed]
6. Ча-Molstad H, Keller DM, Yochum GS, Impey S, Гудман RH. Уюлдук түрү мүнөздүү САМР-жооп элементтерин копиялоо себеби CREB боюнча милдеттүү. Жаздын Natl Acad Илимий АКШ A. 2004; 101: 13572-7. [КУП акысыз макала] [PubMed]
7. Chen J, Nye АЛ, Kelz MB, Hiroi N, Nakabeppu Y, үмүт Б.Т., Nestler EJ. да электрошок алып коюу жана кокаин дарылоо менен Delta FosB жана FosB сыяктуу протеиндерди жөнгө салуу. Mol Pharmacol. 1995; 48: 880-9. [PubMed]
8. Chen J, Kelz MB, Zeng G, Токио N, Steffen C, Shockett ишкер, Picciotto MR, Duman RS, Nestler EJ. Мээнин ичинде inducible, максаттуу ген сөз менен Transgenic жаныбарлар. Mol Pharmacol. 1998; 54: 495-503. [PubMed]
9. Chen J, Чжан Y, Kelz MB, Steffen C, Ang ES, Zeng L, Nestler EJ. cyclin көз каранды Креатинкиназа 5 кошулуу өнөкөт да электрошок талма менен Hippocampus жылы: ΔFosB ролу. J Neurosci. 2000; 20: 8965-71. [PubMed]
10. Chinenov Y, Kerppola TK. копиялоо ченемдик өзгөчөлүктөрүн ортомчу FOS-Jun ара: Ар кандай жакын байланыштар. Oncogene. 2001; 20: 2438-52. [PubMed]
11. Коул RL, Konradi C, Дуглас J, Химэн SE. amphetamine жана тинейджер үчүн нейрондордун ылайыкташуу: чычкан striatum менен гендин жөнгө prodynorphin молекулярдык механизми. Нейрон. 1995; 14: 813-23. [PubMed]
12. Deavall DG, Raychowdhury R, ​​Dockray Г.Ж., Dimaline R. STC-1 клеткаларда PACAP тарабынан CCK ген буйруйт контролдоо. Am J Physiol Gastrointest Боор Physiol. 2000; 279: G605-12. [PubMed]
13. Ding XZ, Mocchetti I. Dopaminergic чычкан striatum менен cholecystokinin РНК мазмуну жөнгө салуу. Brain Рез Mol Brain Рез. 1992; 12: 77-83. [PubMed]
14. Торлби S, копиялоо себептер жана кан тамыр жабыркашы түзүү МакНамара C. Id үй-бүлө. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2004; 24: 2014-20. [PubMed]
15. Gevrey JC, Cordier-Bussat M, Némoz-Gaillard E, Chayvialle JA, Abello J. туруучу AMP- жана белок hydrolysates тарабынан cholecystokinin ген жүргүзүлсө протоколдун кошулуу үчүн кальций-каранды белок kinases боюнча Co-талап. J Biol Chem. 2002; 277: 22407-13. [PubMed]
16. Green та, Alibhai IN, Unterberg S, Neve RL, Ghose S, Tamminga CA, Nestler EJ. копиялоо жагдайлар (ATFs) ATF2, ATF3 жана ядросунда ATF4 жандандыруу боюнча клуб accumbens жана психикалык жүрүм аларды жөнгө салуу. J Neurosci. 2008; 28: 2025-32. [PubMed]
17. Hamilton ME, Redondo JL, Freeman AS. курч дары башкарууга жооп чычкан ядро ​​accumbens менен тинейджер жана cholecystokinin ашып кетти. Synapse. 2000; 38: 238-42. [PubMed]
18. Hansen TV, Rehfeld JF, Nielsen FC. Митоген менен активдешкен протеин киназасы жана белок киназы Белгилөөчү жолдор циклдик аденозин 3 ′, 5′-монофосфат жооп элементин бириктирүүчү протеинди активдештирүү аркылуу холецистокининдин транскрипциясын стимулдайт. Мол Эндокринол. 1999; 13: 466-75. [PubMed]
19. Хансен TV, Nielsen FC. нейрондордун cholecystokinin ген буйруйт жөнгө салуу. Scand J Clin Lab Invest тобу. 2001; 234: 61-7. [PubMed]
20. Хансен TV. Cholecystokinin ген копиялоо: колдоочусу элементтери, копиялоо себептер менен билдиребиз жолдору. Пептиддер. 2001; 22: 1201-11. [PubMed]
21. Хансен TV, Rehfeld Ж., Nielsen FC. CREB жана биргелешип Activator -Анжелесте жанданганын координаттар аркылуу KCL жана forskolin cholecystokinin ген сөздөр өстүрүүдө синергетикалык-чейин жөнгө салат. J Neurochem. 2004; 89: 15-23. [PubMed]
22. Haun RS, Dixon се. чычкан cholecystokinin ген билдирүү үчүн маанилүү бир жүргүзүлсө протоколдун жогорулаган адам с-кетүүсүнүн ген -296 элементи окшош ырааттуулугун камтыйт. J Biol Chem. 1990; 265: 15455-63. [PubMed]
23. Hiroi N, Marek Г.Ж., Браун JR Силер H, Saudou F, Vaidya VA, Duman RS, Гринберг ME, Nestler EJ. молекулярдык, уюлдук жана өнөкөт да электрошок Талманын жүрүм-турумдук иш-аракеттери менен fosB ген негизги ролу. J Neurosci 1998. 1998; 18: 6952-62. [PubMed]
24. Hokfelt T, Rehfeld Ж., Skirboll L, Ivemark B, M Голдштейн, Марки K. ушунчалык-лимбикалык Нейрондордо тинейджер жана CCK жанаша далил. Nature. 1980; 285: 476-8. [PubMed]
25. Hope Б.Т., Kelz MB, Duman RS, Nestler EJ. Өнөкөт да электрошок талма (ECS) дарылоо өзгөртүлүп, курамы жана өзгөчөлүктөрү менен мээдеги узак AP-1 комплексинин билдириш найдено. J Neurosci. 1994; 14: 4318-28. [PubMed]
26. Hope Б.Т., Nye АЛ, Kelz MB, өз алдынча DW, Iadarola MJ, Nakabeppu Y, Duman RS, Nestler EJ. өнөкөт кокаин жана башка өнөкөт дарылоо аркылуу мээдеги өзгөртүп FOS сыяктуу протеиндерди курамында узак AP-1 комплексинин клуб. Нейрон. 1994; 13: 1235-44. [PubMed]
27. Huang KX, Уолтерс JR. чычкан striatum менен AP-1 копиялоо себеби ДНК милдеттүү иш Dopaminergic жөнгө салуу. Neuroscience. 1996; 75: 757-75. [PubMed]
28. Impey S, МакКоркл SR, Ча-Molstad H, Dwyer JM, Yochum GS, Boss JM, McWeeney S, Данн JJ, Mandel G, Гудман RH. копиялоо себеби ченемдик аймактын бир ген жалпы талдоо: CREB regulon аныктоо. Клетка. 2004; 119: 1041-54. [PubMed]
29. Johannessen M, Delghandi депутаты, Moens U. Эмне CREB айланат? Клетканын сигнал. 2004; 16: 1211-27. [PubMed]
30. Джосселин SA, Vaccarino FJ. Каршы CCK (A) таасири менен CCK (B) келемиштер менен шартталган ишин өнүктүрүү боюнча антагонисттер. Behav Pharmacol. 1996; 7: 505-512. [PubMed]
31. Джосселин SA, Де Cristofaro A, Vaccarino FJ. CCK (A) келемиштер менен кокаин чыгарган коюлтулган иш сатып кабылдагыч тартуу үчүн далил. Brain Рез. 1997; 763: 93-102. [PubMed]
32. Kelz MB, Chen J, Carlezon WA, мл, Whisler K, L Gilden, Beckmann AM, Steffen C, Чжан Ю.Д., Marotti L, өз алдынча DW, Tkatch T, G Baranauskas, Surmeier DJ, Neve RL, Duman RS, Picciotto MR , Nestler EJ. Мээдеги копиялоо себеп deltaFosB билдирүү кокаин сезимталдыкты көзөмөлдөйт. Nature. 1999; 401: 272-6. [PubMed]
33. Кумар A, Чой KH, Renthal W, Tsankova Н.М., Theobald DE, Truong HT, Russo SJ, LaPlant Q, Sasaki TS, Whistler KN, Neve RL, өз алдынча DW, Nestler EJ. Хроматин каалады striatum менен кокаин-жасалма пластикасын артында турган негизги механизм болуп саналат. Нейрон. 2005; 48: 303-14. [PubMed]
34. Mattson BJ, Bossert JM, Симмонс DE, Nozaki N, Nagarkar D, Kreuter JD, үмүт BT. кокаин-курчутулат келемиштер ядросу accumbens Кокаин-жасалма CREB phosphorylation клетка сыртындагы сигнал байланышкан киназ күчөтүү жигердүүлүгү менен иштетилген, бирок протеин Креатинкиназа A. J Neurochem. 2005; 95: 1481-94. [PubMed]
35. McClung CA, Nestler EJ. CREB жана DeltaFosB тарабынан ген сөз менен кокаин сооп жөнгө салуу. Nat Neurosci. 2003; 6: 1208-15. [PubMed]
36. McClung CA, Ulery PG, Perrotti LI, Zachariou V, Berton Оо, Nestler EJ. DeltaFosB: мээде узак мөөнөттүү көнүү боюнча молекулярдык которулуу. Brain Рез Mol Brain Рез. 2004; 132: 146-54. [PubMed]
37. Nestler EJ, Kelz MB, Chen JS. ΔFosB: узак мөөнөттүү Нейрондук жана жүрүм-турумдук пластикалык бир молекула арачы. Brain Рез. 1999; 835: 10-17. [PubMed]
38. Nestler EJ. көз карандылыктан үчүн жалпы молекулярдык жолдору барбы? Nat Neurosci. 2005; 8: 1445-9. [PubMed]
39. Nestler EJ. көз карандылыкты жүргүзүлсө протоколдун механизмдери: DeltaFosB ролу. Статс Транс R Soc Lond B Biol Sci. 2008; 363: 3245-55. [КУП акысыз макала] [PubMed]
40. Perrotti LI, Weaver RR, Робисан B, Renthal W, Лабиринт I, Yazdani S, Elmore RG, Карин DJ, Selley DE, Мартин BR, Sim-Selley L, Bachtell RK, өз алдынча DW, Nestler EJ. кыянаттык менен дары тарабынан мээдеги DeltaFosB кошулуу айкын ченемдүүлүктөрү. Synapse. 2008; 62: 358-69. [КУП акысыз макала] [PubMed]
41. Rando OJ, Чанг HY. хроматин структурасын геному жалпы көрүүлөр. Annu Аян BIOCHEM. 2009; 78: 245-71. [КУП акысыз макала] [PubMed]
42. Renthal W, Карл TL, Лабиринт I, Клей АЛ, 3rd., Truong HT, Alibhai мен, Кумар A, Монтгомери RL, Олсон EN, Nestler EJ. Delta FosB өнөкөт amphetamine таасиринен кийин с-кетүүсүнүн ген нъгъъ көндүрүп ортомчулук кылат. J Neurosci. 2008; 28: 7344-9. [КУП акысыз макала] [PubMed]
43. Renthal W, Кумар A, Сяо G, Wilkinson M, Клей АЛ, 3rd, Лабиринт I, Sikder D, Робисан AJ, LaPlant Q, Dietz DM, Russo SJ, Vialou V, Chakravarty S, Kodadek TJ, Stack A, Kabbaj M, Nestler EJ. кокаин менен хроматин жөнгө геному жалпы анализ sirtuins боюнча билүүгө болот. Нейрон. 2009; 62: 335-48. [КУП акысыз макала] [PubMed]
44. Rotzinger S, Буш DE, Vaccarino FJ. mesolimbic тинейджер милдетинин Cholecystokinin тездиги: жүйөлүү жүрүм-жөнгө салуу. Pharmacol Toxicol. 2002; 91: 404-13. [PubMed]
45. Рурк IJ, Хансен TV, Nerlov C, Rehfeld Ж., Nielsen FC. cholecystokinin ген колдоочусу менен чыгат E-кутучада жана Camp / TPA кабыл элементтердин ортосундагы терс cooperativity. FEBS Летт. 1999; 448: 15-8. [PubMed]
46. Шоу-Lutchman TZ, Barrot M, Уоллес T, Gilden L, Zachariou V, Impey S, Duman RS, Storm D, Nestler EJ. naltrexone-тундурулган Morphine алуу учурунда CRE-арачылыгы буйруйт аймактык жана уюлдук картасын түзүү. J Neurosci. 2002; 22: 3663-3672. [PubMed]
47. Шоу-Lutchman TZ, Impey S, Storm D, Nestler EJ. amphetamine тарабынан чычкан мээдеги CRE-арачылыгы буйруйт жөнгө салуу. Synapse. 2003; 48: 10-7. [PubMed]
48. Sheng M, McFadden G, Гринберг ME. Мембрана жыйрылуу жана кальций копиялоо себеп CREB боюнча phosphorylation аркылуу с-кетүүсүнүн чечмелөө берилген. Нейрон. 1990; 4: 571-82. [PubMed]
49. Tsankova Н.М., Кумар A, Nestler EJ. курч жана өнөкөт да электрошок талма кийин чычкан Hippocampus менен ген колдоочусу аймактарында гистон өзгөртүүлөр. J Neurosci. 2004; 24: 5603-10. [PubMed]
50. Ulery PG, Nestler EJ. Ser27 phosphorylation менен DeltaFosB жүргүзүлсө протоколдун ишин жөнгө салуу. Eur J Neurosci. 2007; 25: 224-30. [PubMed]
51. Vaccarino FJ. Ядро psychostimulant сыйлык жана аны менен байланышкан жүрүм-жылы тинейджер-CCK ара accumbens. Neurosci Biobehav Аян 1992; 18: 207-14. [PubMed]
52. Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, Кэссиди депутаты, Kelz MB, Шоу-Lutchmann T, Berton Оо, Sim-Selley LJ, DiLeone RJ, Кумар A, Nestler EJ. ΔFosB: Morphine иш ядро ​​accumbens жылы ΔFosB үчүн маанилүү ролу. Nature Neurosci. 2006; 9: 205-11. [PubMed]