КОММЕНТАРИИ: эки стресс да, катаал жана бир жаратылыш сыйлыктардын дары DeltaFosB бир топтоо, стресс ар ылдый клеткаларды, кийинчерээк ар кандай кабылдагычтарга жана гендерди кыймылга демилге. Башкача айтканда, көз карандылыкты жана стресске каршы таптакыр башкача механизмдерди таянсак
J Neurosci. 2010 Oct 27; 30 (43): 14585-92.
Vialou V, Лабиринт I, Renthal W, LaPlant QC, Уоттс EL, Mouzon E, Ghose S, Tamminga CA, Nestler EJ.
булак
Fishberg Нейро бөлүмү, Синай тоосу Medicine мектеби, New York, New York 10029, АКШ.
жалпылаган
stress- жана дары-азгырган нейрондордун кыймыл жасоого негизги молекулярдык механизми толук түшүнүлөт. Мындай кайра жасоого тиешеси бар делген бир молекула кыянаттык менен дары өнөкөт стресс же кайталап таасири да жооп ΔFosB, бир копиялоо себеп грызун ядросу accumbens чогулган (УИА), негизги мээ сыйлык аймак болуп саналат. TАл бул экологиялык сигналдар менен ΔFosB кошулуу контролдук жүргүзүлсө протоколдун механизмдери кыял бойдон калууда жогору. Мында, биз иш-каранды копиялоо ойноорун, кан жооп жагдай (SRF) аныктап, stress- бир роман жогору ортомчу катары, Ал эми кокаин жок- ΔFosB азгырган. SRF да чөгүп адам бейтаптардын НАК жана өнөкөт коомдук кыйратылышын стресске дуушар чычкандардын downregulated жатат. SRF Бул downregulation жайнап мал жок. inducible mutagenesis пайдалануу аркылуу, стресс-кыйыр туруштук бере чычкандардын негизинен пайда ΔFosB менен дарстарында, мээдеги бул аймакта SRF сөз көз каранды экенин көрсөткөн. Мындан тышкары, трасттык менен НАК-белгилүү бир генетикалык өчүрүүлөрдүн prodepressant- жана proanxiety сыяктуу мумкун ар түрдүү көмөк жана өнөкөт стресс зыяндуу таасиринен көбүрөөк сезимтал жаныбарларды көрсөтөт. Алардан айырмаланып, биз SRF өнөкөт кокаин катнаш жооп чажыт-жылы ΔFosB топтоо бир ролду ойной эмес экенин көрсөтүп турат. Мындан тышкары, трасттык менен НАК конкреттүү плей-өнөкөт коомдук сокку стресс жана кайталап кокаин таасирленүү көз карандысыз механизмдер аркылуу ΔFosB топтолушун жана жүрүш-сезимталдыкты жөнгө деп көрсөтүү менен, кокаин-жасалма жүрүм-турум боюнча эч кандай таасир тийгизбейт.
тааныштыруу
ядро accumbens (УИА), негизги мээ сыйлык району, экологиялык таасирлер (; Sesack жана Грейс, 2006 Nestler жана Carlezon, 2010) жооп motivationally тиешелүү жүрүм-кууп сезүү жана таанып-билүү салым кошуу үчүн абдан маанилүү болуп саналат. НАК да наркомания ооруулары жана депрессия менен байланышкан жүрүш-бузулушуна тиешеси бар болду. . Демек, терең дем мээ менен НАК бутага адамдар жана кемирүүчүлөрдүн да (Schlaepfer ж.б., 2008 менен depression- жана көз карандылык сыяктуу жүрүм-чечүүгө көрсөтүп жатат. Vassoler ж.б., 2008; Heinze ж.б., 2009. Кун менен ал., 2009).
катаал мамиле же стресске дары кайталап таасир НАК менен ген сөз өзгөрүү моделдерин алдыруучу, мүмкүн болгон көз карандылыкты жана депрессиянын негизинде chronicity (Berton .Удаалаш, 2006.. Krishnan ж.б., 2007; Лабиринт, ж.б. 2010. Vialou .Удаалаш ., 2010). Кызыктуусу, копиялоо себеп ΔFosB, fosB ген бир жонулган продукт, кайталап дары же стресс катнаш жооп (Nestler 2008; Perrotti ж.б., 2008.. Vialou .Удаалаш, 2010) НАК топтобогонун. ΔFosB өнөкөт көз каранды мамлекетке эс дары колдонууга өтүүнү жетектеп болуучу молекулярдык которулуп, ошондой эле сунуш кылынган (Nestler ж.б., 1999. McClung ж.б., 2004. Renthal ж.б., 2009.), УАК өрчүтүүгө топтоо катары кыянаттык менен бир нече дары кубаныч жооптор. Жакында, ΔFosB кошулуу НАК өнөкөт коомдук кыйратылышын стресстен кийинки ролу (.. Никулина ж.б., 2008; Vialou .Удаалаш, 2010) түшүндүрүп жатат: ΔFosB оор стимулдарга активдүү чечүү жооп өбөлгө түзөт жана туруктуулугун жогорулатат. ΔFosB дарстарында жана күч-каранды абалда болот да, УАК менен дарыга жана стресс-азгырган ΔFosB топтоо үчүн жоопкерчилик механизмдери белгисиз бойдон калууда.
Serum response factor (SRF) - с-fos, fosb, Egr1 жана Arc (Knöll and Nordheim, 2009) сыяктуу бир нече токтоосуз эрте гендердин активдүүлүгүнө байланыштуу транскрипциялык активация үчүн зарыл болгон транскрипция фактору. Акыркы изилдөөлөр SRFдин нейрондордун морфологиялык жана цитоархитектуралык касиеттерине, анын ичинде чоңдордун мээсинде синаптикалык активдүүлүктү жана схемалык түзүлүштү жөнгө салууну көрсөттү (Кнелл жана Нордхайм, 2009). Бул ачылыштар бизди SRF функционалдык түрдө кыянаттык менен пайдалануунун же стресстин өнөкөт таасири менен жөнгө салынабы же жокпу, ошондой эле ушул шарттарда regulationFosB индукциясына мындай жөнгө салуунун таасир эте тургандыгын иликтөөгө түрттү.
Бул жерде биз НАКтагы SRFдин төмөндөшү продедепрессантты жана анксиогендик фенотиптерди өбөлгө түзүп, акыры өнөкөт стресстин зыяндуу таасирине жаныбардын алсыздыгын жогорулатуучу жаңы механизмди сүрөттөйбүз.. Бул таасирлер, жарым-жартылай, стресстүү жаныбарлардын NAc-де ΔFosB индукциясын жоготуу менен жүргүзүлөт. Депрессияланган пациенттерден алынган NAc кыртышынан кийинки өлгөндөн кийин SRF жана ΔFosB экспрессиясынын байкалган төмөндөшү биздин ачылыштардын адам депрессиясына болгон тиешесин колдойт. Кызыгы, ΔFosB топтолушун көзөмөлдөгөн бул механизм стресстин мүнөздүү окшойт: кокаиндин өнөкөт таасири SRF экспрессиясына эч кандай таасир этпейт, NAcтен SRF өчүрүлүшү chronicFosB топтолушуна өнөкөт кокаин таасиринен кийинки таасири жок жана мындай SRF жок кылынышы кокаинге эч кандай таасир этпейт жасалма жүрүм-турум. SRF жана ΔFosB ортосундагы бул жаңы өз ара аракеттенүү, стресстин контекстинде, адамдын өнөкөт стресстин сезимталдыгын жөнгө салуучу маанилүү гомеостатикалык механизмди чагылдырышы мүмкүн.
Материалдар жана ыкмалар
жаныбарлар
Сегиз-жума жаштагы C57BL / 6J эркек чычкан (Jackson Лабораториялык) бардык жүрүм-турумдук жана биохимиялык эксперименттеринде колдонулган. Бардык жаныбарлар эксперименталдык курал кеминде 1 жума бою мал мекемесине органдарынын ченемдик жана 23-25 ° C боюнча 12 ч жарык сакталып калган / караңгы айлампасынын (7 тартып жарык: 00 AM 7 үчүн: 00 PM) ад либитум менен тамак-аш, суу алуу мүмкүнчүлүгү. Эксперименттер Нейро коому жана Синай тоосунун этегинде, атасынын мектебинде институттук жаныбарларды сактоо жана пайдалануу боюнча комитетинин нускамасына ылайык жүргүзүлгөн.
кокаин тажрыйбаларды [Батыш өчүрөм жана сандык хроматин immunoprecipitation (Чип)] Анткени, 8- 10-жума-эркек C57BL үчүн / 6J чычкандар колдонулган. Жаныбарлар наборун же кокаин же жети күн сайын intraperitoneal дарыны кабыл алды (20 мг / кг кокаин-HCL; Сигма). Чычкандар акыркы дарылоо кийин 24 ч колдонулган. жүрүм-турумдук эксперименттердин үчүн, чычкан контракттын postsurgery бөлмөсүнө жана төмөндө сүрөттөлгөндөй 10, мг / кг (таяныч маа-) же 7.5 мг / кг (шартталган жер артыкчылыктуу) кокаин-HCL intraperitoneally менен мамиле жасашчу.
Srffl / ет чычкандар мурда сүрөттөлгөн (Ramanan ж.б.., 2005) катары иштелип чыккан. НАК конкреттүү SRF плей-stereotaxic сайынуу CRE recombinase кийинки орунду ээледи overexpression менен камсыз кылынган (CRE) жашыл белокту (ачкан) менен кошулуп adeno-байланыштуу вирус аркылуу (AAV) багыттар. А укукка өчүрүүдө CRE колдонулган. AAV-орунга илинди контролдоо катары Srffl / ет чычкандардын AAV-CRE-орунга илинди ордуна дары сайылган. Кыскача айтканда, чычкан кетамин аралашмасынан колдонуп Эллисон алынган (10 мг / кг) жана xylazine (10 мг / кг), төмөнкү орунду ээледи жеткирүү үчүн колдонулат stereotaxic координаты менен: + 1.6 (место / арт), + 1.5 (каптал), - 4.4 (жонундагы / ventral) кийинки (bregma салыштырмалуу) чейин 10 ° бурч боюнча. эс 0.5 мин кийин тазаланган тумоосу 5 μl жалпысынан эки тараптуу бир 0.1 ашуун мүн мезгил жеткирилди (5 μl / мин). Чычкандар 2 жума хирургиялык кийин сыналган, ээледи сөз максималдуу болуп, тездик менен жайылып бараткан ийне сайттар стандарттуу гистологиялык ыкмаларды колдонуу менен, бардык жаныбарлар үчүн тастыкталган. SRF AAV-CRE-ачкан жана AAV-орунга илинди NAC салынып жаныбарлардан microdissected НАК соккуларды жүргүзүлгөн үчүн ээледи-кыйыр CRE сөз натыйжалуулугу immunohistochemistry жана кайтарым-транскриптазанын УРК менен бекитилген. AAV-ачкан жана AAV-CRE-орунга илинди VIRUSES мурда сүрөттөлгөн (Maze .Удаалаш., 2010) катары иштелип чыккан.
Жүрүш-туруш тартиби
Коомдук талкалоо стресс.
C57BL / 6J чычкандар мурда айтылгандай 10 күнгө өнөкөт коомдук сокку стресске дуушар болушкан (Berton .Удаалаш, 2006. Krishnan ж.б., 2007.. Vialou .Удаалаш, 2010). Кыскасы, ар бир чычкан күнүнө 1 мүн тааныш эмес жана агрессивдүү эркек CD5 ардактуу баккан чычканга туш болгон. CD1 агрессор менен түздөн-түз өз ара кийин, жаныбарлар анда сезим эмес, физикалык контакте менен кийинки 24 ч үчүн бирдей клеткасынын чектеш бөлүгүнө жайгаштырылган. Control жаныбарлар барабар, таксономиялык курам, бирок ошол эле штаммдын мүчөлөрү менен бир жайда болду. Коомдук өз ара тесттер утуп акыркы күнү төмөнкү 24 ч аткарылган.
Белгисиз CD1 эркек чычканга социалдык жол бербөө жарыяланган протоколдорго ылайык бааланган (Бертон жана башкалар, 2006; Кришнан жана башкалар, 2007; Виалу жана башкалар., 2010). Эксперименталдык чычкан алгач 2.5 мүнөткө чейин бош зым торчосу бар ачык талаага киргизилген. Экинчи сеанстын жүрүшүндө зымдуу капаска тааныш эмес CD1 эркек чычкан киргизилген. Өз ара аракеттенүү зонасында өткөргөн убакыт (капастын тегерегиндеги 8 см кең коридор) өлчөндү. Жеңилген чычкандарды сезгич жана туруктуу субпопуляцияларга бөлүү мурда айтылгандай жүргүзүлгөн (Кришнан жана башкалар, 2007; Виалу жана башкалар, 2010). Көзөмөлдөөчү чычкандардын көпчүлүгү бош максаттуу тосмо менен эмес, социалдык максат менен өз ара аракеттенүүгө көбүрөөк убакыт сарпташкандыктан, өз ара аракеттенүү коэффициенти 100 (социалдык максаттын жоктугуна карата өз ара аракеттенүү зонасында өткөргөн бирдей убакыт) чектөө катары белгиленди. <100 упайы бар чычкандар сезгич, ≥100 упайлары барлар чыдамдуу деп белгиленди. Кеңири жүрүм-турумдук, биохимиялык жана электрофизиологиялык анализдер бул өзгөчө сезгич жана туруктуу элдердин популяцияларынын аныктыгын колдойт (Кришнан жана башкалар, 2007; Вилкинсон жана башкалар, 2009; Виалу жана башкалар, 2010).
коомдук талкалоо стресс Srffl / ет чычкандардын алсыздыгын текшерип, AAV-орунга илинди же AAV-CRE-орунга илинди менен эки тараптуу ийне чычкандар, үч consecutives дуушар болушкан, ошол эле күнү жана ошондон кийин коомдук өз ара 24 ч сыналган. Бул submaximal талкалоо тартиби мурда prosusceptibility мумкун генетикалык Manipulations төмөнкү (Krishnan ж.б., 2007. Vialou .Удаалаш, 2010.) Ачып коюлду.
Үйрөнгөн алсыз.
Srffl / ет чычкандар AAV-орунга илинди же AAV-CRE-орунга илинди же overexpressing мурда айтылгандай үйрөнгөн алсыз тартиби дуушар болушкан (Berton .Удаалаш., 2007). Кыскача айтканда, чычкан 1 consecutives күн (2 МА 0.45 анын мөөнөтү) үстүнөн 5 ч үчүн үзгүлтүктүү, качып кутулгус бут таасирлерге дуушар болушкан. сыноо күнү, чычкан 15 ырааттуу качып кыйынчылыктарга кутуга кайра алынган. Ар бир сот учурунда, тынымсыз сокку урулду, чычкандарга болгон чектеш, nonelectrified отсек кирип качып мүмкүнчүлүгүнө ээ болушту. ийгиликтүү качып кийин, эшик дароо жаап, качып кечигүү жазылган болчу. чычкандар 25 с ичинде качып жок болгондуктан, тергөө токтотулган жана ийгиликсиз болуп жазылып калган. Алдын ала изилдөөлөр ээледи сөз НАК жана башка региондордо стресс жок базалык качып жүрүм-турумуна эч кандай таасир тийгизбейт деп көрсөткөн (Newton, ж.б. 2002. Berton ж.б., 2007.).
Таяныч маа-.
AAV-GFP же AAV-Cre-GFP да NAc инъекцияларынан эки жума өткөндөн кийин, Srffl / fl чычкандар кыймылдаткыч сезгичтикке кабылышты. Чычкандар кыймылдуу аренага күнүнө 30 мүнөт бою 4 д. Пайда болгондон кийин, жаныбарларга 10 мг / кг кокаин-HCl ичеги-карынга сайылып, кыймылдоочу кутучаларга жайгаштырылды. Жаныбарлардын кыймылдаткыч иш-аракеттери күнүнө 30 мүнөт амбулаториялык нурлардын үзүлүшү катары фотобам системасын (Сан Диего инструменттери) колдонуу менен катталды. Локомотивдик сенсибилизация 6 күндүн ичинде катталган.
Шартталган жер артык.
Жай кондиционерлоо процедурасы жогоруда баяндалгандай жүргүзүлгөн (Лабиринт жана башкалар, 2010), төмөнкү өзгөртүүлөр менен. Кыскача айтканда, Srffl / fl чычкандарына AAV-GFP же AAV-Cre-GFP интра-NAc тундурмаларынан кийин 18 күндөн кийин, жаныбарлар шарттуу үч чөйрөдөн турган кондиционер бөлмөлөрүнө жайгаштырылды. Эки климатташтыруучу палатанын экөөнө тең олуттуу артыкчылык көрсөткөн чычкандар изилдөөдөн чыгарылган (<10% бардык жаныбарлар). Кондиционердик топтор дагы эле бар болушу мүмкүн болгон камеранын бир тараптуулугун жөнгө салуу үчүн салмактуу болушкан. Кийинки күндөрү жаныбарларга эритинди сайып, түштөн кийин бир камерада 30 мүнөт камашты, андан кийин кокаин (7.5 мг / кг, ip) сайып, эртеси экинчи бөлмөгө 30 мин камашты, бардыгы тең дарылоо боюнча ассоциациянын эки туру (эки туздуу жана эки кокаин жупташуусу). Сыноо күнү, чычкандар 20 мүнөт дарылоо жок кайра аппаратка жайгаштырылган жана тарап артыкчылык баа берүү үчүн сыналган. Кокаинге локомотордук реакциялар баңги заттарды дарылоонун натыйжалуулугун камсыз кылуу үчүн кокаин-жупташкан бөлмөлөрдүн нурлары менен бааланган. Бардык топтор үчүн, локомотив вирустук дарылоо таасирин тийгизбеши үчүн, тузга жооп катары баштапкы локомотив бааланган.
Башка жүрүш-тесттер.
Srffl / жарыяланган протоколдоруна негизделген ет чычкандар ачык талаага, жарык / караңгы, салык-сүзүү тесттер текшерилген (Vialou .Удаалаш., 2010). ачык-талаада чычкандар иши кызыл жарык шарттарда Video көзөмөлдөө системасын (Ethovision) колдонуу мүн 5 үчүн жазылып калган. жарык / караңгы сыноо үчүн, чычкан эркин кичинекей жабык аренада байланыштуу бир чоң Illuminated аренада курамында эки камералуу кутучаны изилдеп уруксат берилди. Чычкандар же тосмонун өткөргөн убакыт баа берүү үчүн 5 мин бир мезгил үчүн текшерилген. борбордо жана жарык аренада өткөргөн ачык-талаа жана жарык / караңгы тесттер, убакыттын өтүшү менен, тиешелүүлүгүнө жараша, тынчсыздануу тиешелүү жоопторду кайтарым көрсөткүчү катары баалашты. А 1 г аргасыз-сүзүп тест 5 мүн мөөнөткө өткөрүлдү. аргасыз-сүзүп сыноо учурунда кыймылдабай жогорулатуу жолу prodepressant сыяктуу жүрүм-турум деп чечмеленген. 1 д аргасыз-сүзүп тест көп чычкандар колдонулган жана чечмелөө дарылоо кыймылдабай жолу кыскартуу, жарыш сөз күчүнүн чарасы катары тастыкталды алынган.
Immunohistochemistry
Srffl / ет чычкандар Эллисон жана 4% paraformaldehyde / Төртиликтин intracardially эле иштеген жок. Мээси жок жана 30% сахароза / PBS менен cryoprotected алынган. Coronal бөлүмдөрү (30 мкм) бир калыпта кармалууга microtome боюнча кесип жана иммуногистохимиялык анализдерди жүргүзүү үчүн иштелип чыкты. Srffl тууралыгын текшерүү / SRF плей-каршы багытталган polyclonal антитело менен аткарылган ескертпе (1 / 2000; Санта-Крус-биотехнология). CRE сөз ачкан (тоок polyclonal, 1 / 8000, Aves Labs) аркылуу тастыкталган CRE ачкан менен аралаштырып эле изилдөө мээбиздин ичинде сөз. Srffl коомдук кыйратылышын стресс кийин ΔFosB кошулуу сандык үчүн / чычкандар плей-Петербург, ΔFosB белок N-терминалдык аймагына каршы көтөрүлдү коен polyclonal антитело аркылуу аныкталган (1 / 1000; Санта-Крус-биотехнология). Сүрөттөр турган confocal микроскоп менен алынган (20 × рендерлеп; дүрбүсү менен). орточо мааниси андан кийин ар бир жаныбар үчүн эсептелген менен терс жана ΔFosB immunoreactivity үчүн алгылыктуу деп эсептелген ачкан-immunopositive клеткалардын саны, ар бир жаныбардын бир нече сүрөттөрү менен сан көрсөткүчтөрү болгон. Ар бир жаныбардын статистикалык талдоо үчүн жекече байкоо каралды.
Адам патологоанатомиялык НАК ткань
Адамдын өлгөндөн кийинки мээ тканы Даллас Мээ Коллекциясынан алынган, анда Даллас Медициналык экспертизанын кеңсесинен жана Техас Университетинен (UT) Түштүк-Батыштагы Ткандарды Трансплантациялоо Программасынан кийинки туугандарынын макулдугу менен ткандар чогултулат. Ткань эркектерден жана аялдардан, жаш курагына, өлгөндөн кийинки аралыктагы, РНК бүтүндүгүнүн саны (RIN) жана рН боюнча дал келген анализден өттү. Өлүм учурунда кома, гипоксия, пирексия, талма, дегидратация, гипогликемия, көптөгөн органдардын иштебей калышы жана нейротоксикалык заттардын сиңиши агроналдык факторлор, өлгөндөн кийинки мээ ткандарындагы РНК бүтүндүгүнө таасир этет (Томита жана башкалар, 2004). Бул сегиз шарттын ар бири боюнча ткань үлгүлөрүн мүнөздөө үчүн биз агоналдык фактор шкаласын (AFS) колдондук. Агоналдык фактордун жоктугуна 0 балл коюлду жана анын катышуусу 1ден бааланып, 0дон 8ге чейинки AFSдин жалпы упайын камсыз кылды, 0 же 1 баллдык агондук баллдар менен кездеме жакшы сапаттагы үлгүлөрдү чагылдырат; демографиялык көрсөткүч 1-таблицада келтирилген. Ткандардын мыкты сапаты жогорку RIN көрсөткүчтөрү менен тастыкталды. -40 ° C изопентанда тоңуп, -80 ° Cде сакталаардан мурун учурлар стандарттуу диссекцияга дуушар болгон; андан ары NAc бөлүү тоңдурулган ткандарга жүргүзүлдү. UT Southwestern институционалдык кароо кеңеши изилдөө үчүн бул кыртыштын жыйнагын карап чыгып, бекитти. Кийинчерээк депрессиянын ар бир учуру боюнча түздөн-түз информатор менен маектешүү жүргүзүлүп, анда иштин оорусу жөнүндө маалыматтар документтештирилген; эки депрессиялык оорунун консенсус диагнозу эки изилдөө психиатры тарабынан DSM-IV критерийлерин колдонуу менен жүргүзүлдү. Бул изилдөөгө киргизилген бир дагы учурда антидепрессанттардан тышкары, кыянаттык менен колдонулган дары-дармектер, алкоголдук ичимдиктер же рецепт боюнча берилген дары-дармектер үчүн кан токсикологиясынын экраны оң болгон эмес. Антидепрессанттык дарылоого карабастан, бардык субъекттер өлүм учурунда клиникалык депрессияга туш болушкан. Ткандардын үлгүлөрү талдоо үчүн сокур ыкма менен таратылды.
Мазмуну 1.
адам патологоанатомиялык изилдөө үчүн кубулуштарды
Батыш өчүрөм
Адам жана чычкан NAC үлгүлөрү мурда айтылгандай иштелип чыкты (Maze .Удаалаш., 2010). Frozen тканы протеазынын (Рочтун) жана phosphatase Ингибиторы (Сигма) менен 5% SDS камтыган 1 мм HEPES lysis Санитардык-жылы sonicated болгон. Протеин Бирикмелер Dc белок тамганы (Bio-Раад) тарабынан аныкталат. белок үлгүлөрдүн бирдей SDS-БЕТ жана Батыш өчүрөм дуушар болушкан. Батыш доскада SRF (1 / 2000; Санта-Крус-биотехнология) үчүн антитело колдонуп окшошпу же GAPDH (1 / 1500; Abcam), анан изделет жана Odyssey иштетүүчү тутумун колдонуу менен алынган сан көрсөткүчтөрү (Licor).
РНК обочолонуп жана сандык ПКО
РНК обочолонуп, сандык ПКО (qPCR) жана маалыматтарды талдоо мурда айтылгандай жасаган (Лабиринт .Удаалаш, 2010. Vialou .Удаалаш, 2010.). Кыскасы, РНК TriZol реагенти (Invitrogen) менен бөлүнүп жана Qiagen тартып RNAeasy чакан буюм менен мындан ары аруу болгон. Бардык РНК үлгүлөрү 260 / 280 жана 260 / 230 үчүн аныкталган ≥1.8 баалайт. Кайтарым копиялоо iScript (Bio-Раад) колдонуу менен аткарылган. qPCR колдонуп SYBR жашыл (Quanta) төмөнкү цикл параметрлери менен Колдонмо Биосистемалардын 7900HT RT ПКО системасы менен жүзөгө ашырылган: 2 ° С 95 мин; 40 95 ° С 15 с үчүн стадиялары, 59 с үчүн 30 ° C, 72 ° C 33 с үчүн; жана бир ПКО азыктарын ырастоо үчүн акылы ийилген иштеп ° C 95 үчүн жылытуу түздөлүп. Маалыматтар C (т) дарылоо абалы баалуулуктарын (контролдоо күнү чыдамы жок же туруктуу чычкандар, же адам башкаруу и депрессиядан) ΔΔC (т) ыкмасы менен (Tsankova .Удаалаш., 2006) салыштырып текшерилген. ΔFosB qPCR грунттарды: дарекке, AGGCAGAGCTGGAGTCGGAGAT жана кайтарым, GCCGAGGACTTGAACTTCACTCG.
Chip
Chip мурда сүрөттөлгөн (Maze .Удаалаш., 2010) топтолгон эки тараптуу НАК соккуларды көзөмөлдөө, сезгич жана туруктуу чычкандар (төрт 14-арымын шибегелер / чычкан) акыркы сокку стажы 1 ч жана saline- жана Кокаин- чейин эле аткарылган мамиле жаныбарлар акыркы дарылоо кийин ч 24. Tissue 1% КЖЧнын кайчылаш-түз байланыштуу болгон. Fixation кийин Glycine колдонуу аркылуу үзгүлтүккө жана ткандар жууп -80 ° C пайдалануу чейин сакталып калган эле. Кыркып хроматин түнөп каршы SRF греч (Санта-Крус-биотехнология) мурда магниттик мончок (Dynabeads M-280; Invitrogen) байланган менен инкубатордо болгон. Кайтарым кайчылаш-сайттардын жана ДНК тазалангандан кийин, трасттык камалышы fosb колдоочусу эки кан жооп элементи милдеттүү сайттарды камтыган fosb колдоочусу бир аймакты камтып, грунттарды колдонуп qPCR менен аныкталган. SRF pulldowns олуттуу жок-антитело башкаруу салыштырмалуу көбөйгөн. Чычкан fosb ген колдоочусу грунттарды: алдыга, CCCTCTGACGTAATTGCTAGG жана кайтарым, ACCTCCCAAACTCTCCCTTC.
статистикалык анализ
Биохимиялык жана жүрүм-турумдук анализдердеги көзөмөлдөөчү, сезгич жана чыдамдуу чычкандардын ортосундагы каражаттарды салыштыруу үчүн бир тараптуу ANOVA колдонулган. Эки тараптуу ANOVAs rFosB индукциясын Srf жергиликтүү нокаут чычкандарындагы социалдык жеңилүү жолу менен салыштыруу үчүн, ошондой эле Srf нокаутунун үйрөнгөн алсыздык жана кыймыл-аракет сезимталдык протоколдорундагы таасирин салыштыруу үчүн колдонулган. Студенттин t тесттери Srf нокаутунун ΔFosB индукциясына жана адамдын өлгөндөн кийинки ткандарындагы топтордун ортосундагы чычкан ChIP анализиндеги каражаттарды салыштыруу үчүн колдонулган. Эксперименталдык шарттардын айырмачылыгы p-0.05 болгондо статистикалык мааниге ээ деп эсептелген.
натыйжалары
SRF жана ΔFosB адам депрессия айтылган жана коомдук талкалап чычкандар
Депрессияга окшогон жүрүм-турумду өнүктүрүүдө SRF үчүн потенциалдуу ролду изилдөө үчүн, биз биринчи пост-өлгөндөн кийин депрессияга чалдыккан адам бейтаптардын NAc менен SRF протеин сөз бааланган. Депрессияга дуушар болгон субъектилердин жаш курагына дал келген башкаруу элементтерине салыштырмалуу НАКдагы SRF деңгээли төмөндөп көрсөтүлгөн (t (19) = 1.9; p <0.05) (сүрөт. 1A). SRFтин иш-аракеттерге байланыштуу тезинен эрте экспрессияны жөнгө салууда ролун эске алганда (Раманан жана башкалар., 2005), биз SRF бул мээ регионунда ΔFosB экспрессиясын көзөмөлдөө менен алектениши мүмкүн деп божомолдогон. Бул гипотезаны колдоп, Δfosb mRNA деңгээли депрессияга кабылган адамдардын NAc де төмөндөгөнүн байкадык (t (16) = 1.8; p <0.05) (1-сүрөт). Бул ушул шарттарда ΔFosB протеининин деңгээлинин төмөндөшүнүн акыркы ачылыштарына дал келет (Vialou et al., 2010).
Figure 1.
Өнөкөт стресстин айынан SRF репрессиясы НАКтагы decreasedFosB транскрипциясынын төмөндөшү менен байланыштуу. A, B, Postmortem адамдын депрессияланган бейтаптары SRF протеининин азайган деңгээлин көрсөтүшөт (n = 10 / топ; A) жана Afosb mRNA экспрессиясында NAc (n = 8 / топ; B). C, өнөкөт (10 г) социалдык жеңилүү стрессине дуушар болгон чычкандар сезгич жана туруктуу субпопуляцияларга топтоштурулган. D, Өнөкөт социалдык жеңилүү стресси сезгич чычкандардын NAc-де SRF протеин деңгээлин төмөндөтөт, бирок чыдамдуу чычкандарда эмес, Cде көрсөтүлгөн коомдук өз ара аракеттенүү тестинен 24 саат өткөндөн кийин башкаруу элементтери менен салыштырганда, E., NAcтагы ΔfosB mRNA деңгээлдери сезгич чычкандарда өзгөрүүсүз, бирок бир кыйла туруктуу жаныбарларда жөнгө салынат (n = 7-15 / топ). Өнөкөт социалдык жеңилүү стрессинен кийин F, SRF протеин фосб генинин промотору менен байланышты күчөтөт, чычкандарда эмес (n = 5 / group). Көрсөтүлгөн маалыматтар орточо ± SEM (ката тилкеси катары көрсөтүлгөн) катары көрсөтүлөт. Con., Control; Деп., Депрессия; Sus., Сезгич; Res., Чыдамдуу. * p <0.05 контролдоого каршы; *** p <0.001 контролдоого каршы; #p <0.05 жана сезгич; ## p <0.01 сезгичтикке каршы; ### p <0.001 жана сезгич.
Бул ачылыштарды кеңейтүү үчүн, биз чычкандарда өнөкөт социалдык жеңилүү стресс протоколун колдондук. Сезимтал жана чыдамкай чычкандардын эки айырмаланган тобу айкын болгон (Кришнан жана башкалар., 2007), анда сезгич жаныбарлар башкаруучу жана чыдамдуу жаныбарларга салыштырмалуу социалдык өз ара аракеттенүүнү кыйла кыскартышкан (F (2,23, 157.2) = 0.001; p <0.001; t Bonferroni коррекциясы менен тесттер, сезгичтик менен контролдоо, p <0.05; чыдамдуулукка каршы башкаруу, p <0.01; чыдамдуулукка каршы сезгич, p <1) (2,32С-сүрөт). Акыркы жеңилүү эпизодунан эки күн өткөндөн кийин, сезгич, чыдамкай жана башынан өткөрбөгөн башкаруу чычкандар NAcте SRF туюнтмасы үчүн талданган. Адамдын депрессиясындагы табылгаларга окшоп, SRF протеин деңгээли сезгич чычкандардын NAc-де башкаруу органдарына салыштырмалуу бир кыйла төмөндөгөн, ал эми SRF деңгээлине чыдамдуу чычкандардын NAc таасир этпеген (F (4.7) = 0.05; p <0.05; t Бонферрони коррекциясы, сезгичти контролдоо, p <0.05; ийкемдүү жана сезгич, p <1) (Сүр. XNUMXD).
Андан кийин, биз ушул үч топтогу жаныбарлардын NAcтеги Δfosb mRNA экспрессиясын карап чыгып, resfosb экспрессиясынын туруктуу өсүшүн байкадык, бирок ийкемдүү чычкандарда тенденция байкалды, бирок байкалган жок (t (14) = 2.1; p <0.05 ) (1Э-сүрөт). SRF деңгээлдери менен Δfosb транскрипциясынын ортосундагы өз ара байланышты дагы иликтөө үчүн, биз SRFдин фосб генинин промоторуна байланышы сезгич жана чыдамдуу чычкандардын айрым топторундагы өнөкөт социалдык жеңилүү стрессинен кийин өзгөргөндүгүн текшерүү үчүн ЧИПти колдондук. Элементтер чычкандарга салыштырмалуу (t (8) = 2.1; p <0.05) салыштырмалуу NAcтеги фосб промотору менен SRF байланышын жакшыртышты (t (8) = 2.0; p <0.05). Сезимтал чычкандарда SRF индукциясынын жетишсиздигин чагылдырган башкаруу жана сезгич чычкандардын ортосунда эч кандай айырмачылык байкалган жок (1-сүрөт).
Өнөкөт социалдык жеңилүүдөн кийинки стресстен кийин ΔFosBди жөнгө салууда SRF ролун тастыктоо үчүн, Srffl / fl чычкандар RFosB стресс индукциясына NAc дан SRFдин тандап алынып салынышынын таасирин изилдөө үчүн колдонулган. Srffl / fl чычкандарына стереотаксикалык түрдө GFP же Cre-GFP билдирүүчү AAV векторлору менен ички NAc сайылды. AAV-Cre-GFP тарабынан азгырылган SRFдин NAc спецификалык нокауту иммуногистохимиялык жол менен тастыкталды (2-сүрөт). Чынында эле, нокауттун натыйжалуулугун көрсөткөн SRF боёгу менен Кре экспрессиясынын ортосунда эч кандай дал келген жок. Микродиссекцияланган NAc муштумдарында биз SRF протеин деңгээлинин 50% га төмөндөшүн байкадык (t (11) = 4.3; p <0.001). Чоңдугу мындай микродиссекциялардагы ткандардын бир бөлүгү вирустук жол менен жукпагандыгын чагылдырат.
Figure 2.
SRF өнөкөт коомдук жеңилүү стресс менен ΔFosB индукциясын ортомчулук кылат. A, AAV-Cre-GFPдин Srffl / fl чычкандарынын NAc сайылышы, Cre-экспрессиялык нейрондордогу SRF протеининин нокаутуна алып келет. AAV-GFP инъекциясы байкалаарлык натыйжа берген жок. B, NAc тартып SRF мындай тандалма нокаут толугу менен өнөкөт коомдук жеңилүү стресс (N = 4 / топ) кийинки NAc менен ΔFosB индукциясын бөгөт коёт. Көрсөтүлгөн маалыматтар орточо ± SEM (ката тилкеси катары көрсөтүлгөн) катары көрсөтүлөт. * p <0.05 AAV-GFP контролуна каршы; ** p <0.01 AAV-GFP жеңилишине каршы.
Кийин AA-Cre-GFP же AAV-GFP менен интра-NAc сайылып, жеңилген Srffl / fl чычкандарынын NAc ΔFosB үчүн сандык иммуногистохимиясын жасадык. Өнөкөт социалдык жеңилүү стрессинен кийин ΔFosB экспрессиясы AAV-GFP сайылган жаныбарлардын NAc (вирус × дарылоо өз ара аракети, F (1,12) = 6.4; Bonferroni коррекциясы менен тесттер, контролдоо жана жеңилүү, p <0.05; AAV-Cre vs AAV-GFP, p <0.01). Бирок, бул индукция AAV-Cre-GFP алган Srffl / fl чычкандарында байкалган эмес (сүрөт. 2B), chronicFosB өнөкөт стресс менен NAc индукциясын SRF талап кылаарын көрсөткөн.
НАК жылы SRF плей-prodepression- жана proanxiety сыяктуу мумкун өбөлгө түзөт
ChronicFosB индукциясы өнөкөт социалдык жеңилүү стресси аркылуу ортомчулук көрсөткөндүктөн (Vialou et al., 2010), биз SRFдин төмөндөшү жана ΔFosB индукциясынын жоголушу, сезгич жаныбарларда акыры келип чыккан терс адаптацияны билдирет деп божомолдогонбуз. стресстин зыяндуу таасирине алсызыраак жаныбарлар. Бул гипотезаны текшерүү үчүн, жогоруда айтылгандай, чоңдорго жеткен Srffl / fl чычкандарында Srf генинин жергиликтүү NAc-спецификалык жок болушун шарттадык жана натыйжада чычкандар жана алардын башкаруу элементтери баштапкы депрессияны жана тынчсызданууну баалоо үчүн жүрүм-турум парадигмаларынын батарейкасында текшерилди. жүрүм-турум сыяктуу. SRF жергиликтүү NAc жок кылуу аргасыз сүзүү тест аркылуу өлчөнгөн сыяктуу бир prodepression окшош таасирин өбөлгө (t (30) = 2.5; p <0.05), ошондой эле бир anksiogenic таасири ачык талаада өлчөнгөн (t (38) = 1.9; p <0.05) жана ачык / караңгы тесттер (t (8) = 1.9; p <0.05). Ошентип, AAV-Cre-GFPди NAcке алган Srffl / fl чычкандары аргасыз сүзүп сыноодогу кыймылсыздыктын кечигүүсүн төмөндөтүп, ачык талаанын борборунда аз убакытты жана жарык / караңгы коробканын жарык бөлүгүндө аз убакытты көрсөттү. AAV-GFP сайылган айбанаттарга салыштырмалуу (3A – C сүрөт). Бирок, SRFди NAc ичинде жок кылуу локомотивдин баштапкы деңгээлин өзгөртпөгөндүктөн, SRF нокаутка учураган жаныбарлардагы байкалган жүрүм-турумдук таасирлер жалпы кыймыл-аракет кыймылынын аномалияларына байланыштуу болгон эмес (сүрөт. 3D). Бул маалыматтар НАКтагы ΔFosB депрессияга окшогон жүрүм-турумдарды жөнгө салса дагы, ал тынчсыздануу менен байланышкан жоопторго тартылбайт окшойт деген мурунку отчетторду эске алуу менен кызыктуу (Vialou et al., 2010). SRF жоготуу анксиогендик жоопторду туудурат деген биздин учурдагы ачылыштар ΔFosB дан башка максаттар аркылуу жасайт деп божомолдойт.
Figure 3.
НАКтан чыккан SRF нокауту prodepression- жана proanxiety сыяктуу фенотиптерге өбөлгө түзөт. A-C, SRffl / fl чычкандарынын AAc-Cre-GFP инъекциясы аркылуу жетишилген NAcтен SRFди тандап нокаут, аргасыз сүзүү тестинде кыймылсыздыкка кечигүүнү азайтат (n = 14-18 / топ; A) жана борбордо болгон убакытты жана ачык талаадагы (B) жана жарык / караңгы (C) тесттердеги жарык бөлүгүндө болгон убакытты кыскартат (n = 5-15 / топ). D, AAV-GFP же AAV-Cre-GFP интра-NAc сайма алган чычкандардын ачык талаасында базалдык кыймыл-аракет ишинде эч кандай айырмачылык байкалган жок. E, F, үйрөнгөн алсыздыкка (n = 7-8 / топ; E) жана социалдык жеңилүү стресске (n = 5-6 / топ; F) сезгичтиктин жогорулашы, тиешелүүлүгүнө жараша, качуу жана социалдык өз ара аракеттенүү убактысы менен өлчөнөт. . Көрсөтүлгөн маалыматтар орточо ± SEM (ката тилкеси катары көрсөтүлгөн) катары көрсөтүлөт. * p <0.05 GFPге каршы же максаттуу түрдө жок; ** p <0.01 GFPге каршы; *** p <0.001 GFPге каршы.
Андан кийин NAcте SRF өчүрүлүшү дагы жаныбардын стресстин зыяндуу таасирине туруштук берүүсүн жогорулатабы же жокпу, изилдеп чыктык. НАКка AAV-Cre-GFP же AAV-GFP сайылган Srffl / fl чычкандары эки депрессия моделинде изилденип, алсыздыкты жана өнөкөт социалдык жеңилүү стрессин билишти. Үйрөнгөн алсыздыкта, AAV-Cre-GFP алган Srffl / fl жаныбарлары буттун шок стрессине дуушар болгондон кийин бут шокунан кутулуу үчүн кечигүүнү күчөттү (дарылоо × сыноолордун өз ара аракети, F (14,180) = 10.2; Bonferroni коррекциясы менен t сыноолору, p <0.001; AAV-Cre vs AAV-GFP, p <0.01), бул стресстен келип чыккан жүрүм-турум тартыштыгына сезгичтиктин жогорулагандыгын көрсөтөт (3E сүрөт). Ошо сыяктуу эле, NAc жергиликтүү SRF жок кылуу, ошондой эле коомдук жийиркеничтүү көбөйгөн (t (10) = 1.8; p <0.05) AAV-GFP сайылган көзөмөлдөө жаныбарлар салыштырмалуу өнөкөт коомдук жеңилүү стресстен кийин (сүрөт. 3F), бир prodepression сыяктуу таасир.
ΔFosB кошулуу менен SRF тартуу жана кокаин үчүн жүрүш-жооптордун жоктугу
ΔFosB ошондой эле кокаин сыяктуу кыянаттык менен колдонулган дары-дармектерге жооп иретинде НАКта иштелип чыккандыгын эске алганда, кокаин иш-аракетинде SRF үчүн потенциалдуу ролду изилдөө кызыктуу болгон. Өнөкөт социалдык жеңилүү стрессинен айырмаланып, кайталап кокаин тартуу НАКтагы SRF протеининин көрүнүшүн өзгөрткөн жок (t (14) = 0.8; p> 0.05) (сүрөт. 4A) жана SRF бул мээ регионунда fosB генинин промоторуна милдеттүү түрдө таасир эткен жок. (t (4) = 0.7; p> 0.05) (4B-сүрөт). Бул, стресстен айырмаланып, өнөкөт кокаинден кийин ΔFosB индукциясы SRF аркылуу жүргүзүлбөйт деп божомолдойт. Өнөкөт кокаинден кийин ΔFosB топтолушу Srffl / fl жаныбарларында AAV-Cre-GFP менен НАКка AAV-GFP алганда өзгөргөнбү же жокпу, текшерип көрүп, биз аны түздөн-түз текшердик. Биз SRF жок кылуу бул мээ аймагындагы кокаин айынан ΔFosB топтолушуна эч кандай таасир тийгизген эмес (сүрөт. 4C).
Figure 4.
SRF жоготуу ΔFosB Кокаин кошулуу же кокаин-жөнгө жүрүш эч таасир берген жок. A, B, Кайталап кокаин таасирленүү (7 г, д, 20 мг / кг кокаин-HCL) мээдеги бул аймактагы fosB гендин колдоочусу үчүн SRF милдеттүү боюнча УИА (A) менен SRF белок сөз эч кандай таасир же болгон (B) 24 ч кийин дары таасири (н = 5 / топ). C, ΔFosB топтолушу, ченегенде immunocytochemically, өнөкөт кокаин катнаш кийинки SRF менен НАК конкреттүү плей-каранды эмес. D, E, УАК тартып SRF жергиликтүү өчүрүүлөрдүн ошондой эле туздуу сайынуу (г 1) кокаин айынан буту-иш-аракеттери жана маа- төмөнкү таяныч иши жөнүндө эч кандай таасир эткен (н = 8 / топ) (г 1-7; D) же кокаин шартталган жер артыкчылык боюнча (N = 8 / топ; E). көрсөтүлгөн маалыматтар Г. KJENN (ката шыргый катары) ± катары айтылган.
Бул таң калыштуу табылгага көз салуу үчүн, биз NAc тандамал SRF нокаут кокаинге жүрүм-турумдук жоопторду өзгөртөбү же жокпу иликтедик. SRFдин кокаин менен ΔFosB индукциясын жөнгө салбагандыгына ылайык, SRFтин NAc спецификалык нокауту кокаиндин бир нече жолку таасиринен кийин байкалган курч кокаин же локомотордук сезгичтиктен келип чыккан кыймыл-аракетке эч кандай таасирин тийгизген эмес (дарылоо × убакыттын өз ара аракети, F [4,80] = 0.3; p> 0.05) (4D-сүрөт). Ошо сыяктуу эле, SRF боюнча NAc-нокаут менен кокаин сыйланган кыйыр чарасын камсыз кокаин-шартталган жер артыкчылыктуу эч кандай таасири болгон жок (t (14) = 0.1; p> 0.05) (сүрөт. 4E).
талкулоо
Бул изилдөө өнөкөт коомдук кыйратылышын стресс кийин НАК жылы ΔFosB бир роман жогору ортомчу катары SRF иликтенгендиги depressive- жана тынчсыздануу сыяктуу жүрүм-өнүктүрүүгө SRF өлчөнөт. Биз, өнөкөт коомдук кыйратылышын стресс чыдамы менен НАК жылы SRF көлөмүн төмөндөйт, ал эми туруктуу эмес, жаныбарларды да түздөн-түз далилдеп турат, бул downregulation биз көрсөткөн бул мээ аймагында ΔFosB кошулуу тоскоолдук өнөкөт стресс менен натыйжалуу күрөшүүгө үчүн зарыл деп башкача айтканда, ийкемдүүлүгү (Vialou .Удаалаш., 2010). SRF сөз окшош кыскартуу ΔFosB РНК жана белок сөз ачылбай, адамдардын НАК табылды да кыскарган. Ал эми, ΔFosB аздыгы ΔFosB сөздөр контролдоо, али белгисиз башка жүргүзүлсө протоколдун механизмдерин, шерик SRF бир downregulation карабастан сезгич чычкандар менен НАК кыскарган эмес. өнөкөт стрессти бул мээ аймагынан SRF боюнча inducible генетикалык таштоого пайдалануу менен түзүлгөн кийин НАК жылы ΔFosB кошулуу ортомчулардын SRF үчүн себеп ролу. Жүрүш-талдоо мындан ары бул НАК конкреттүү SRF плей-чычкандардын SRF базалык жана стресс-азгырган depression- жана тынчсыздануу сыяктуу жүрүм-турум да өнүгүшүндө негизги ролду ойногон деп өлчөнөт. каларлык айырмаланып, SRF өчүрүүлөрдүн өнөкөт кокаин башкаруу же кокаин жүрүш таасирин жооп ΔFosB кошулуу эч таасир берген жок. Бул жыйынтыктар ΔFosB кошулуу жөнгө салуу жана өзүнчө экологиялык силкюлю үчүн жүрүш-жооптор SRF бир көркөм кара сөз чыгармасына киреби стимул-өзгөчө ролун колдойт.
SRF-арачылыгы копиялоо мурда кичинекей ишине жооп берүү үчүн көрсөтүлгөн, негизинен жогорулаган кальций киришинен улам, ошондой эле күчөтүлгөн neurotrophic ишине ошондой эле, атап айтканда, мээ-алынган neurotrophic себеп болгон учурда (BDNF) (Bading .Удаалаш, 1993. Xia ж.б., 1996.. Джонсон, ж.б. 1997. Чанг ж.б., 2004. Kalita ж.б., 2006; бозоргон жана Nordheim, 2009). Бул SRF чыдамы менен НАК менен downregulated эмне үчүн кызыктуу суроо туулат, бирок туруктуу эмес, өнөкөт коомдук кыйратылышын стресс кийин чычкандар. сезгич чычкандар бери BDNF белок көлөмүн көбөйүп, УАК innervate ventral tegmental аянты (VTA) тинейджер нейрон НАК менен белги ылдый BDNF, ошондой эле күчөтүлгөн жарылып атышууну, өсүп көрсөтүшүбүз бул айырма жөнгө салуу, тинейджер же BDNF сигналдаштыруунун ортомчулугу аркасында эмес, мүмкүн, ал эми туруштук бере жаныбарлар BDNF сигналдаштыруунун жана VTA атаандаша чендердин нормадан (Krishnan ж.б.., 2007) көрсөтүшөт. Атаандаш мүмкүндүгү SRF сөздөр differentially туруктуу чычкандарга каршы чыдамы менен жөнгө салынат көрсөткөн бул мээ аймактын өзгөртүп glutamatergic innervation, жооп чажыт тыюу жатат (Vialou .Удаалаш., 2010). Андан ары иш менен түздөн-түз ушул жана башка мүмкүн болуучу механизмдерин изилдөө талап кылынат.
колдонуу менен акыркы изилдөөлөр гендик-кең жана башка ыкмалар нейрондордо SRF максаттуу гендердин ~5-10% деп айтууга дароо алгачкы гендердин (Philippar ж.б., 2004.. Ramanan ж.б., 2005; Etkin ж.б., 2006. бозоргон жана Nordheim, 2009). Бул өнөкөт стресс, ΔFosB, fosb дароо алгачкы гендин бир кыскартылган продуктунун кошулуу менен SRF үчүн маалыматтар маанилүү ролун көрсөтүп менен шайкеш келет. Кызыктуусу, көптөгөн SRF NAC максаттуу бул ар кандай изилдөөлөр ΔFosB да белгилүү максаттарды атынан аныкталган ген (Кумар ж.б., 2005. Renthal ж.б., 2008, 2009. Лабиринт, ж.б. 2010.). Бул жалпы жөнгө ген арасында нейрондордун cytoskeleton жөнгө салуу үчүн белгилүү бир нече (мисалы, Cdk5, Арк, жана Actb). Бул, өз кезегинде, SRF бир нече нейрондордун клетка түрлөрү менен актин динамикасын жана нейрондордун моторикасын таасир отчеттор менен шайкеш келет (Alberti .Удаалаш, 2005. Ramanan ж.б., 2005. Бозоргон, ж.б. 2006.), ΔFosB белгилүү, ал эми НАК нейрон dendritic омурткасы алдыга озуу менен таасир этет (Maze .Удаалаш., 2010). Мындай жалпы иш Endpoints жалпы максаттуу гендердин нейрондордун Учак таасир бир катар иш, ΔFosB анын кошулуу менен бирге SRF биргелешкен таасир тийгизиши мүмкүн, демек, жүрүм-турумун татаал.
SRF да кичинекей пластикалык жана нейрондордун кыймыл-аракет-каранды ген сөз жана кыймыл-жөнгө салуу боюнча маанил³³ ролду ойной көрсөттү. Мисалы, да электрошок талма менен роман-чөйрөнүн өз ыктыяры менен изилдөө да жооп же нейрондордун кошулуу дароо башында ген SRF-каранды кошулуу жоготуу SRF өзгөрүүлөрдүн Hippocampus-жылы түшкөн узак мөөнөттүү кичинекей бөгөт менен байланышта болгон (Ramanan ж.б.. , 2005; Etkin .Удаалаш, 2006).. Мындан тышкары, Hippocampus ичинде трасттык соолуп узак мөөнөттүү кичинекей депрессия, роман контекст боюнча аларды азгырган дароо башында ген сөз жана начар роман чөйрөнү геологиялык-чалгындоо иштеринин учурунда көнүгүшүп (Etkin .Удаалаш., 2006) менен тартыштыкты алып көрсөтүлдү. Бул маалыматтар жаныбардын айлана-чөйрөнүн бузулушуна ылайыктуу адаптацияланышында, жогоруда айтылган жаңы чөйрөгө көнүп кетүүнү үйрөнгөндө же терс стресстик стимулдарга адаптация болгондо, стресстин жайылышына жол бербөө үчүн SRF маанилүүлүгүн белгилейт. - биздин азыркы изилдөөдөгүдөй, жүрүм-турумдун тартыштыгы. Ошентип, биз SRF экспрессиясынын тартыштыгын көрсөткөн жаныбарлар же сезгич адамдардагы социалдык жеңилүү стрессине жооп иретинде же SRF түздөн-түз нокдаун аркылуу, жогорулаган депрессиялык жана тынчсыздануу сыяктуу жүрүм-турумду көрсөтүшөт. Депрессияга кабылган адамдардын НАКта SRF деңгээлинин төмөндөшүн эске алганда, SRF адамдын айлана-чөйрөнүн терс таасирлерине позитивдүү көнүү жөндөмүн жөнгө салууда, анын ичинде inFosB экспрессиясын NAcте жөнгө салууда негизги ролду ойнойт деп божомолдоого болот.
Ар кандай механизмдери: көз карандылык СТРЕСС RESISTANCE VS
Ушул изилдөөнүн укмуштуудай табылга деп, SRF өнөкөт стресс жооп чажыт-жылы ΔFosB топтоо талап кылынат, бирок ал өнөкөт кокаин жооп катары ошол эле мээ аймакта ΔFosB кошулуу үчүн талап кылынбайт. Ошо сыяктуу эле, SRF дары табигый жүрүш-жооп үчүн талап кылынбайт. Мындай маалымат сигналдар ΔFosB көптөгөн түрлөрүнө жооп чажыт менен башчыны да ынандырууга болот карабастан, көрсөткөн (Nestler ж.б., 1999. Nestler, 2008), ΔFosB кошулуу алып айырмаланып молекулярдык жолдору болуп көрүнгөн жок. Бул табылгаларга бир себеби кокаин каршы баса жооп ΔFosB топтолушун көрсөткөн жарым-жартылай башка клетка түрлөрү болуп саналат. Өнөкөт стресс болжол менен НАК орто бадал нейрон негизги эки жагын ойлош бирдей ичинде ΔFosB алдыруучу, бул өнөкөт кокаин басымдуу D1 + нейрон ичинде ΔFosB алдыруучу, ал эми негизинен, D2 тинейджер кабылдагыч салыштырмалуу D1 билдирген (Kelz .Удаалаш, 1999.. Perrotti ж.б., 2004) . Ошентип, ал D2 + нейрондордо ΔFosB Шамбесай SRF-каранды жолдору маанилүү болушу да мүмкүн. Ошентсе да, бул дарстарында нейрондордун чакан да пайда болот, себеби, өнөкөт стресс кийин толук ΔFosB кошулуу SRF жылы плей-чычкандар жоготууга түшүндүрө алмак эмес. An альтернатива түшүндүрмө өнөкөт стресс жана өнөкөт кокаин айырмаланган клеткадагы белги каскаддарынын барбай, УАК нейрондордун боюнча иш өздөрүнүн режимдерин улам, белгилегендей, балким, өзгөртүп glutamatergic берүү аркылуу өнөкөт стресс менен мурун жана өнөкөт кокаин D1 аркылуу негизинен иштеп жатат кабылдагыч белги (Nestler, 2008). Анткен менен дагы бир мүмкүнчүлүк ΔFosB мисалы дарстарында жана өнөкөт кокаин салыштырмалуу өнөкөт стресс менен, так жүргүзүлсө протоколдун механизмдерин көз каранды differentially айырмаланган нейрон ресурстар тарабынан көзөмөлдөнбөгөн ар кандай glutamatergic долбоорлоо аймактарынан НАК innervating, prefrontal кортексинин бир нече аймактарында, Hippocampus жана amygdala турат. Көп мындан аркы иш ушул жана башка мүмкүнчүлүктөрдү изилдөө үчүн зарыл.
Менен бирге, биздин ачылыштар ΔFosB оор стимулдарга proresilience жооп ортомчу НАК менен башчыны да ынандырууга болот, ал аркылуу бир көркөм кара сөз чыгармасына киреби жүргүзүлсө протоколдун механизмдерин аныктоо. Бул изилдөө да depression- жана тынчсыздануу сыяктуу жүрүм-жөнгө салуу чажыт деъгээлинде SRF ойногон ролун маанилүү жаңы түшүнүк берет. Мындай жүрүм-турумду жөнгө салууда SRFнин транскрипциялык ролу жөнүндө жакшыраак түшүнүккө ээ болуу, стресстен улам келип чыккан ооруларга туруштук берүүчү гендин жаңы максаттарын аныктоого жардам берет жана натыйжалуу антидепрессант терапиясынын келечектеги өнүгүүсүнө шарт түзөт.
Бул иш Наркология Психикалык саламаттык жана Улуттук институтунун улуттук институтунун гранттар жана AstraZeneca менен изилдөө союз тарабынан колдоого алынган. Биз Srffl / ет чычкандар менен камсыз кылуу үчүн, Дөөт D. Ginty ырахмат.
Кат алышуу Eric J. Nestler, дедуктирлештирбейт Fishberg департаментинин, дары-Синай тоосунда мектебинин, бир Кирико L. Levy жайгаштыруу, кутуча 1065, New York, NY 10029-6574 менен чечилиши керек. [электрондук почта корголгон]
Copyright © 2010 Жазуучулар 0270-6474 / 10 / 3014585-08 $ 15.00 / 0
шилтемелер
1. ↵
1. Alberti S,
2. Krause SM,
3. Kretz Оо,
4. Philippar U,
5. Lemberger T,
6. Casanova E,
7. Wiebel FF,
8. Schwarz H,
9. Frotscher M,
10. Schütz G,
11. Nordheim А
(2005) нейрондордун murine rostral которгон жашап мигранттар кан жооп ойноорун талап кылат. Жаздын Natl Acad Илимий USA 102: 6148-6153.
Кыскача / FREE Full Text
2. ↵
1. Bading H,
2. Ginty DD,
3. Гринберг ME
(1993) так кальций белги жолдор менен кохлеардык нейрондордо ген сөз жөнгө салуу. Science 260: 181-186.
Кыскача / FREE Full Text
3. ↵
1. Berton Оо,
2. McClung CA,
3. Dileone RJ,
4. Krishnan V,
5. Renthal W,
6. Russo SJ,
7. Грэм D,
8. Tsankova Н.М.,
9. Bolanos CA,
10. Rios M,
11. Monteggia LM,
12. Өзүн өзү DW,
13. Nestler EJ
(2006b) коомдук кыйратылышын стресс mesolimbic тинейджер жолуна BDNF негизги ролу. Science 311: 864-868.
Кыскача / FREE Full Text
4. ↵
1. Berton Оо,
2. Клей АЛ 3rd.
3. Ebner K,
4. Tsankova Н.М.,
5. Карле TL,
6. Ulery P,
7. Bhonsle A,
8. Barrot M,
9. Krishnan V,
10. Singewald GM,
11. Singewald N,
12. Birnbaum S,
13. Neve RL,
14. Nestler EJ
(2007) Стресс periaqueductal боз ΔFosB менен клуб активдүү чечүү жооп өбөлгө түзөт. Нейрон 55: 289-300.
CrossRefMedline
5. ↵
1. Чанг SH,
2. Поузер S,
3. Xia Z
(2004) нейрондордун аман куюу жооп эске үчүн романы ролу. J Neurosci 24: 2277-2285.
Кыскача / FREE Full Text
6. ↵
1. Etkin A,
2. Аларкон JM,
3. Weisberg SP,
4. Touzani K,
5. Huang YY,
6. Nordheim A,
7. Кандел ER
(2006) SRF үчүн окутуу ролу: бойго тездик менен жок кылууну LTD жана роман жагдайды дароо эс түзүү да таасирин тийгизбей койбойт. Нейрон 50: 127-143.
CrossRefMedline
7. ↵
1. Heinze HJ,
2. Heldmann M,
3. Voges J,
4. Hinrichs H,
5. Марко-Pallarès J,
6. Hopf JM,
7. Müller Бурджанадзе,
8. Galazky I,
9. Штурм V,
10. Bogerts B,
11. Munte TF
(2009) ядросунун мээнин терең дем менен катуу алкоголь көз каранды унаасында маа- каршы accumbens: клиникалык жана негизги илим аспектилери. Front Hum Neurosci 3: 22.
Medline
8. ↵
1. Джонсон CM,
2. Hill CS,
3. Chawla S,
4. Treisman R,
5. Bading H
(1997) Калий ген сөздөр өз алдынча Рас / mitogen-жандырылды белок КРЕАТИНКИНАЗА (ERKs) белги каскадын иштеши мүмкүн биринен айырмалуу үч башка жолдор аркылуу көзөмөлдөйт. J Neurosci 17: 6189-6202.
Кыскача / FREE Full Text
9. ↵
1. Kalita K,
2. Kharebava G,
3. Чжэн JJ,
4. Hetman M
(2006) megakaryoblastic курч лейкоз-1 жылы ERK1 / BDNF менен кан жооп себеп-айдаган буйруйт жана 2 көз каранды дем же өскөн кичинекей иш ролу. J Neurosci 26: 10020-10032.
Кыскача / FREE Full Text
10. ↵
1. Kelz MB,
2. Chen J,
3. Carlezon WA мл,
4. Whisler K,
5. Gilden L,
6. Beckmann AM,
7. Steffen C,
8. Чжан YJ,
9. Marotti L,
10. Өзүн өзү DW,
11. Tkatch T,
12. Baranauskas G,
13. Surmeier DJ,
14. Neve RL,
15. Думан RS,
16. Picciotto MR,
17. Nestler EJ
(1999) мээде копиялоо эске ΔFosB билдирүү кокаин сезимталдыкты көзөмөлдөйт. Nature 401: 272-276.
CrossRefMedline
11. ↵
1. Бозоргон B,
2. Nordheim А
(2009) толкунданып системасында копиялоо себептерден Белек тараптуулугу: SRF парадигма. Айлары Neurosci 32: 432-442.
CrossRefMedline
12. ↵
1. Бозоргон B,
2. Kretz Оо,
3. Алдым C,
4. Alberti S,
5. Schütz G,
6. Frotscher M,
7. Nordheim А
(2006) Serum жооп себеп Hippocampus менен нейрондордун райондук жыйын көзөмөлдөйт. Nat Neurosci 9: 195-204.
CrossRefMedline
13. ↵
1. Krishnan V,
2. Han М.Х.,
3. Грэм DL,
4. Berton Оо,
5. Renthal W,
6. Russo SJ,
7. LaPlant Q,
8. Грэм A,
9. Lutter M,
10. Lagace DC,
11. Ghose S,
12. Reister R,
13. Tannous P,
14. Green та,
15. Neve RL,
16. Chakravarty S,
17. Кумар A,
18. Eisch AJ,
19. Өзүн өзү DW,
20. Lee FS,
21. жана башкалар.
(2007) мээнин сыйлык аймактардагы коомдук утуп чалдыгуу жана каршылык негизги молекулярдык көнүктүрүү. Клетканын 131: 391-404.
CrossRefMedline
14. ↵
1. Кун J,
2. Бауэр R,
3. Пол S,
4. Lenartz D,
5. Huff W,
6. Ким Эх,
7. Klosterkoetter J,
8. Штурм V
(2009) ядро accumbens жөнүндө терең мээ дем кийин эч көмөксүз тамекини таштоонун боюнча Observations. Eur Addict Рез 15: 196-201.
CrossRefMedline
15. ↵
1. Кумар A,
2. Choi KH,
3. Renthal W,
4. Tsankova Н.М.,
5. Theobald DE,
6. Truong HT,
7. Russo SJ,
8. LaPlant Q,
9. Sasaki TS,
10. Whistler KN,
11. Neve RL,
12. Өзүн өзү DW,
13. Nestler EJ
(2005) хроматин каалады striatum менен кокаин-жасалма пластикасын артында турган негизги механизм болуп саналат. Нейрон 48: 303-314.
CrossRefMedline
16. ↵
1. Лабиринт I,
2. Клей АЛ 3rd.
3. Dietz DM,
4. LaPlant Q,
5. Renthal W,
6. Russo SJ,
7. Механик M,
8. Mouzon E,
9. Neve RL,
10. Казахстане SJ,
11. Ren Y,
12. Sampath СК,
13. Hurd YL,
14. Greengard P,
15. Tarakhovsky A,
16. Schaefer A,
17. Nestler EJ
(2010) кокаин айынан пластикалык менен гистон methyltransferase G9a негизги ролу. Science 327: 213-216.
Кыскача / FREE Full Text
17. ↵
1. McClung CA,
2. Ulery PG,
3. Perrotti LI,
4. Zachariou V,
5. Berton Оо,
6. Nestler EJ
(2004) DeltaFosB: мээде узак мөөнөттүү көнүү боюнча молекулярдык которулуу. Brain Рез Mol Brain Рез 132: 146-154.
Medline
18. ↵
1. Nestler EJ
(2008) жүргүзүлсө протоколдун көз механизмдери: deltaFosB ролу. Статс Транс R Soc Lond B Biol Илимий 363: 3245-3255.
Кыскача / FREE Full Text
19. ↵
1. Nestler EJ,
2. Carlezon WA мл
(2006) депрессия менен mesolimbic тинейджер сыйлык райондук. Биологиялык психиатрия 59: 1151-1159.
CrossRefMedline
20. ↵
1. Nestler EJ,
2. Kelz MB,
3. Chen J
(1999) ΔFosB: узак мөөнөттүү Нейрондук жана жүрүм-турумдук пластикалык молекулярдык арачы. Brain Рез 835: 10-17.
CrossRefMedline
21. ↵
1. Newton SS,
2. Thome J,
3. Уоллес TL,
4. Shirayama Y,
5. Шлезингер L,
6. Токио N,
7. Chen J,
8. Neve R,
9. Nestler EJ,
10. Думан RS
(2002) ядросунда конуштун жооп элементи-милдеттүү протеин же dynorphin амброксол accumbens бир чечмелөө сыяктуу таасир тийгизет. J Neurosci 22: 10883-10890.
Кыскача / FREE Full Text
22. ↵
1. Никулина EM,
2. Arrillaga-сесото I,
3. Miczek KA,
4. Hammer КП мл
(2008) узак келемиштер кайталанат коомдук кыйратылышын стресс кийин mesocorticolimbic структураларда өзгөртүү: убакыт Му-наркотикалык сезгич РНК жана FosB / DeltaFosB immunoreactivity албетте. Eur J Neurosci 27: 2272-2284.
CrossRefMedline
23. ↵
1. Perrotti LI,
2. Hadeishi Y,
3. Ulery PG,
4. Barrot M,
5. Monteggia L,
6. Думан RS,
7. Nestler EJ
(2004) өнөкөт стресс кийин сыйлык байланышкан мээ структураларында ΔFosB менен клуб. J Neurosci 24: 10594-10602.
Кыскача / FREE Full Text
24. ↵
1. Perrotti LI,
2. Weaver RR,
3. Робисан B,
4. Renthal W,
5. Лабиринт I,
6. Yazdani S,
7. Elmore RG,
8. Карин DJ,
9. Selley DE,
10. Мартин BR,
11. Sim-Selley L,
12. Bachtell RK,
13. Өзүн өзү DW,
14. Nestler EJ
(2008) кыянаттык менен дары тарабынан мээдеги DeltaFosB кошулуу айкын ченемдүүлүктөрү. Synapse 62: 358-369.
CrossRefMedline
25. ↵
1. Philippar U,
2. Schratt G,
3. Dieterich C,
4. Müller JM,
5. Galgóczy P,
6. Engel FB,
7. Keating MT,
8. Gertler F,
9. Schule R,
10. Vingron M,
11. Nordheim А
(2004) SRF максаттуу ген Fhl2 RhoA / MAL-каранды SRF жанданганын antagonizes. Мол Cell 16: 867-880.
CrossRefMedline
26. ↵
1. Ramanan N,
2. Шен Y,
3. Саранди S,
4. Lemberger T,
5. Schütz G,
6. Линден DJ,
7. Ginty DD
(2005) SRF иш-жасалма ген сөздөр жана кичинекей пластикасын, бирок нейрондордун жагдайлар ортомчулук кылат. Nat Neurosci 8: 759-767.
CrossRefMedline
27. ↵
1. Renthal W,
2. Карле TL,
3. Лабиринт I,
4. Клей АЛ 3rd.
5. Truong HT,
6. Alibhai I,
7. Кумар A,
8. Монтгомери RL,
9. Олсон EN,
10. Nestler EJ
(2008) Delta FosB өнөкөт amphetamine таасиринен кийин с-кетүүсүнүн ген нъгъъ көндүрүп ортомчулук кылат. J Neurosci 28: 7344-7349.
Кыскача / FREE Full Text
28. ↵
1. Renthal W,
2. Кумар A,
3. Xiao G,
4. Wilkinson M,
5. Клей АЛ 3rd.
6. Лабиринт I,
7. Sikder D,
8. Робисан AJ,
9. LaPlant Q,
10. Dietz DM,
11. Russo SJ,
12. Vialou V,
13. Chakravarty S,
14. Kodadek TJ,
15. Stack A,
16. Kabbaj M,
17. Nestler EJ
(2009) кокаин менен хроматин жөнгө геному жалпы анализ sirtuins боюнча билүүгө болот. Нейрон 62: 335-348.
CrossRefMedline
29. ↵
1. Schlaepfer TE,
2. Коэн Мексики,
3. Рыжый C,
4. Kosel M,
5. Brodesser D,
6. Axmacher N,
7. Джо AY,
8. Kreft M,
9. Lenartz D,
10. Штурм V
(2008) Deep мээ Байбичелер сыйлык дем сезими негизги Депрессия менен anhedonia жумшартат. Neuropsychopharmacology 33: 368-377.
CrossRefMedline
30. ↵
1. Sesack SR,
2. Grace AA
(2010) Кортикостероид базалдык ganglia сыйлык тармак: microcircuitry. Neuropsychopharmacology 35: 27-47.
CrossRefMedline
31. ↵
1. Tomita H,
2. Vawter депутаты,
3. Уолш DM,
4. Evans SJ,
5. Choudary PV,
6. Li J,
7. Overman KM,
8. Портал'дан ME,
9. Myers RM,
10. Джонс EG,
11. Уотсон SJ,
12. Акил H,
13. Bunney WE мл
(2004) ген сөздөр тармак боюнча agonal жана аларды союп себептердин таасири: microarray ичинде сапат көзөмөл анализ же союп адамдын мээсинде. Biol психиатрия 55: 346-352.
CrossRefMedline
32. ↵
1. Tsankova Н.М.,
2. Berton Оо,
3. Renthal W,
4. Кумар A,
5. Neve RL,
6. Nestler EJ
(2006) депрессия жана чечмелөө иш-чычкан моделинин кохлеардык хроматин жөнгө күч-кубат берет. Nat Neurosci 9: 519-525.
CrossRefMedline
33. ↵
1. Vassoler FM,
2. Schmidt HD,
3. ME Жерар,
4. Famous KR,
5. Ciraulo да,
6. Kornetsky C,
7. Карин CM,
8. Пирс RC
(2008) Deep мээ ядросунун дем номиналдык келемиштер издеп дарыны кокаин Азгырык шилтемелерди айынан кайрадан өз коколой башы accumbens. J Neurosci 28: 8735-8739.
Кыскача / FREE Full Text
34. ↵
1. Vialou V,
2. Робисан AJ,
3. LaPlant QC,
4. Клей АЛ 3rd.
5. Dietz DM,
6. Ohnishi YN,
7. Mouzon E,
8. Шашпагыла AJ 3rd.
9. Уоттс EL,
10. Уоллес DL,
11. Iñiguez SD,
12. Ohnishi YH,
13. Штайнер MA,
14. Warren BL,
15. Krishnan V,
16. Bolaños CA,
17. Neve RL,
18. Ghose S,
19. Berton Оо,
20. Tamminga CA,
21. Nestler EJ
(2010) ΔFosB мээнин сыйлык райондо стресс жана чечмелөө жооп туруктуулугун ортомчулук кылат. Nat Neurosci 13: 745-752.
CrossRefMedline
35. ↵
1. Wilkinson MB,
2. Xiao G,
3. Кумар A,
4. LaPlant Q,
5. Renthal W,
6. Sikder D,
7. Kodadek TJ,
8. Nestler EJ
(2009) Imipramine дарылоо жана шайыр негизги мээ сыйлык аймактагы окшош хроматин жөнгө көрсөтүшөт. J Neurosci 29: 7820-7832.
Кыскача / FREE Full Text
36. ↵
1. Xia Z,
2. Шаппелл H,
3. Miranti С.К.,
4. Гринберг ME
(1996) Калий NMDA кабылдагыч аркылуу агылып карта Креатинкиназа / ЭРК көз каранды механизм боюнча дароо башында ген чечмелөө негиз түзөт. J Neurosci 16: 5425-5436.
Кыскача / FREE Full Text
;