Fadok JP, Darvas M, Дикерсон Tmk, Palmiter RD
(2010). PLoS БИР 5 (9): e12751. чтыкта: 10.1371 / journal.pone.0012751
Джонатан P. Fadok1,2, Мартин Darvas2, калмакмын MK Dickerson2, Ричард D. Palmiter2
1 магистратура программасы Нейробиология жана жүрүм-турумдагы, АКШ жана University, Сиэтл, Washington, Америка Кошмо Штаттары,
2 биохимия жана Howard Hughes Аскердик институтунун бөлүмү, АКШ институтун, Сиэтл, Washington, Америка Кошмо Штаттары
Нейротрансмиттер тинейджер (DA) бир Pavlovian коркуу Пропаганда менен окутуу үчүн абдан маанилүү коркуу potentiated эттирет (FPS) деп аталган парадигма. Э синтездөө жөндөмүн жетишпеген Mice шартталган жана сигнал коркунучтуу нерсени кылдыра турган footshock ортосундагы пикир үйрөнө алышпайт. Буга чейин биз ventral tegmental аянттын (VTA) нейрондордо үчүн DA синтези калыбына FPS калыбына келтирүү үчүн жетиштүү эмес экенин көрсөттү. Бул жерде биз VTA тартып DA кабар алып mesocorticolimbic мээ аймактары FPS үчүн Э талап кылган аныктоо үчүн максаттуу-тандалма ээледи калыбына ыкманы колдонгон. Биз basolateral amygdala да DA синтездин калыбына көрсөтөбүз (BLA) жана ядро accumbens (УАК) FPS узак мөөнөттүү эс алуу талап кылынат. Бул маалыматтар коркуу байланыштуу эс пайда болушунун тинейджер көз каранды схемотехникасын салып чечүүчү түшүнүүгө жардам берет.
тааныштыруу
DA гипоталамус, анын ичинде мээ ичиндеги дискреттик ядролорунун, нейрондордун тарабынан синтезделет, жыт берүүчү жана ventral midbrain [1]. DA нейрондор коркуу Пропаганда үчүн маанилүү лимбикалык мээ аймактарга ventral midbrain долбоорунун VTA, мындай prefrontal кабында катары Hippocampus, amygdala жана НАК [1], [2], [3]. коркуу пропаганда боюнча Д.А. ролун ылайык, DA нейрондордун аныктоо чен aversive жыйынтыгын [4] алдын ала коркунучтуу нерсени кылдыра турган сигналдар, ошондой эле таяна тарабынан белгиленет жана өзгөртүлөт жатат, [5], [6]. Мындан тышкары, коркунучтуу сигналдар же оор жагдайларга жооп кылып, DA өлчөмү бир нече лимбикалык мээ аймактарда жогорулатуу [7], [8], [9], [10] жана DA багыттагы дары-дармек жана генетикалык боемочулуктарды коркуу аналоги парадигмалардын үйрөнүп доо кетириши мүмкүн [11], [12], [13], [14].
Pavlovian коркуу Пропаганда-жылы, бейтарап коюлтулган өбөлгө мисалы, жарык сыяктуу, бир aversive Шартсыз сигнал менен жупташкан Ушундай footshock эле. Тренингдин жыйынтыгында шартталган стимул жалгыз тебингенин берүү жооп коркуп [3]. FPS бир турган, адатта, Pavlovian коркуу аналоги парадигмасы колдонулган окутуу эттирет жооп кал-кашайтып жогорулатуу аркылуу бааланат болот [15]. Биз мурда DA нейрон VTA бир FPS парадигмадагы окутуу үчүн жетиштүү болуп саналат [12] экендигин көрсөттү. Андан тышкары, биз Эйсиз-жылы да кыска мөөнөттүү эс тутумга (СТМ) өндүрүү үчүн жетиштүү эмес экенин көрсөттү, бирок узак мөөнөттүү эс тутум (LTM), кал-шок бирикме. VTA DA нейрон калган максаттардын, УАК ири innervation жана ошондуктан LTM түзүүнүн негизги талапкер болчу FPS кабыл алган [2].
Көп адабият сыйлык негизделген парадигмалар менен Associative окутуу үчүн НАК ичинде Д.А. боюнча ролун колдоого [16]. Бул НАК-жылы да ошондой эле Pavlovian коркуу Пропаганда окутуу үчүн маанилүү экендигин азыркы учурда белгисиз. Ошентсе да бир катар изилдөөлөр да түрдүү коркунучтуу сигналдар жана жарыш сөз таяна жооп чажыт көбөйтүү [10] көрсөттү. Мындан тышкары, УАК оор Эйсиз [16] менен ихсанга жатат, [17], коркунуч аналоги үчүн абдан маанилүү бир ядро жана DA NAC жана Эйсиз [18] да нейрондордун кыймыл-милдетин көмөктөшөт, [19], [20], [21 ]. Ошондуктан, бул аймактардын да Эйсиз жана УАК, жана DA сигналдаштыруунун ортосундагы байланыш, Pavlovian коркуу аналоги талап кылынат деп божомолдоого болот.
DA Pavlovian коркуу Пропаганда менен LTM үчүн НАК жана Эйсиз зарыл бербесин аныкташ үчүн, биз улам бир loxP-курчоосунда жүргүзүлсө протоколдун / котормочулук токтоп киргизүү из синтездөө жөндөмүн жок тинейджер жетишсиздик (АА) чычкан моделин колдонуп тирозин гидроксилаз менен кассеталарды (Thfs) ген [22]. CRE recombinase алдында, DA белги атайын тандалган белгилүү бир максаттуу аймактарга Thfs жандануусу allele бирдиктүү кассета жок кылуу аркылуу калыбына келтирилиши мүмкүн. Биз тандап НАК жалгыз да Э калыбына келтирүү үчүн CRE recombinase айтып retrogradely-сатуу жуктуруп колдонгон, же НАК жана Эйсиз да. Биздин жыйынтыктар DA NAC жана BLA FPS үчүн LTM түзүү үчүн жетиштүү эмес экенин көрсөтүп турат.
натыйжалары
Алдайм-куткарып DD Чычкандарда о калыбына келтирүү
мээнин DA FPS үчүн LTM түзүү үчүн зарыл болгон кайсы аныктоо үчүн, DA милдети CAV2-CRE recombinase сайма аркылуу DD чычкандардын калыбына келтирилген. Бул вирус тандап нейрондорду жабыркатат жана retrogradely ийнелерди сайттан ташылат [23]. DD чычкандардын DA бир нейрон жыйындысы максаттуу ядросунун ичине болсо, бул вирус ал TH өндүрүшүн калыбына келтирүүгө, бир гана DA өндүрүшүн жол, ошону менен Th генди иштерин калыбына келтирүүгө floxed аялдама кассеталарды киреше ventral midbrain боюнча DA нейрон кайра сатуу болот тандалган максаттуу [22]. Биз чычкандардын эки этап менен ушул ыкманы колдонгон. НАК VTA [2] менен DA нейрон ири максаттуу болгондуктан, биз бул ядро FPS үчүн LTM пайда болушу үчүн оор болушу мүмкүн экенин ойлоп, Ошондуктан, CAV2-CRE эки тараптуу сайма бир топтор чажыт киргизилген. Биз ошондой эле DA LTM үчүн VTA бир нече максаттуу болушу мүмкүн гипотезаны сыналган. Бул сыноо үчүн, эки тараптуу сайма НАК жана DD чычкандардын Эйсиз да киргизилген.
Immunohistochemistry DD чычкандардын вирус-ийне менен TH иш-калыбына келтирүү (Figure 1) тастыктоо үчүн колдонулган. Күтүлгөндөй эле, DA ташуу бар менен жергиликтүү-CO башкаруу чычкандардын НАК түйүндөрүндө күчтүү белги болгон (DAT) (Figure 1A-D). TH ошондой эле контролдук чычкандардын (Figure 1E) жөнүндө Эйсиз аныкталган; Бирок, DAT immunoreactivity Эйсиз абдан эле аз болчу, ошондуктан көрсөтүлгөн эмес. Immunohistochemistry эле эмес ийне менен DD чычкандардын (Figure 1 F-J) тартып мээ кыртышына жүргүзүлгөн. НАК эч кандай табылууга TH белги бар эле (Figure 1F, G), бирок DAT бойоктор ушул (Figure 1H, I) болгон. DD чычкандардын BLA да TH бойоктор (Figure 1J) көбү жок болчу.
Figure 1
алдайм-куткарып DD чычкандардын TH керектүү калыбына келтирүү.
НАК-саюу DD чычкандардын тартып Immunohistochemistry TH NAC (Figure 1K-N) ири өлчөмдө кайра экенин көрсөткөн. Жок, байкалуу TH-жылдын НАК-ийне DD чычкандар (Figure 1O) Эйсиз байкалган. НАК жана Эйсиз үчүн Double куткаруу TH чажыт үчүн күчтүү сигнал алып (Figure 1P-S) жана BLA (Figure 1T) бекем TH белги. Бул маалыматтар CAV2-CRE-жылдын ээледи ийне саюу мээ аймактарга өзгөчө TH сөз калыбына абдан натыйжалуу болгонун көрсөтүп турат.
TH-жылдын ээледи куткаруу ийне DD чычкандардын Д.А. калыбына алып келди деп ырастоо үчүн, биз да, DA метаболиттерди жана неадреналин жогорку басымдуу суюк заттардын жардамы менен (HPLC; стол 1) сан көрсөткүчтөрү. бул экспериментте, биз да НАК же amygdala да куткаруу жүзөгө DA прогноздук DA көлөмүн башка эмес ийне менен аймакты таасир болмок TH куткаруу бир максаттуу аныктоо. Биз тинейджер-түгөнгөндө DD чычкан amygdala башкаруу өлчөмүн НАК жана 0.51% контролдоо DA ченемдерин 1.39% болгон. НАК-куткарып DD чычкандар НАК контролду 34.0% болгон DA санда болгон; ге amygdala менен DA этаптары DD баскычтарында-ийне эмес эле (1.57%) болду. Amygdala-куткарып DD чычкандар DA көлөмүн контролдоо 38.4% болгон amygdala, бирок DA аздыгы НАК ошол эле эмес куткарып DD баскычтарында (0.46%) болушкан эле. Бул жыйынтыктар DD чычкандардын ийне максаттуу аймактарда к вирус-арачылыгы куткаруу жогорку DA денгээлде алып барарын көрсөтүүдө.
Мындан тышкары, УАК же amygdala да салып тумоосу менен ийне башка максатка DA дегээлинде бийиктикте алып келген жок. Акыр-аягы, TH DD чычкандардын noradrenergic нейрондордо билдирди, анткени [24], [25], биз Эйсиз боюнча ИГХ жылы DD чычкандардын noradrenergic аксон көрүп TH чакан суммасын таандык. эмес куткарып DD чычкандардын Эйсиз менен норадреналин болушу HPLC (стол 1) менен да тастыкталган.
стол 1
HPLC да, СИ сандык жана DA метаболиттерди.
Тинейджер Узак мөөнөттүк эс-тутум үчүн НАК жана Эйсиз талап кылынат
Коркунучтуу чочулоо – бул Павловдук кондициялоонун бир түрү, мында шарттуу стимул акустикалык үрөй учурарлык реакцияны күчөтөт [15]. DAны NAcга гана, же NAc жана BLAга гана тандап калыбына келтирүү акустикалык үрөй учурарлык реакциянын өзүн начарлатпашы үчүн, башкаруу элементтери жана куткарган DD чычкандары үчүн таң калыштуу жооп ийри сызыктары түзүлдү (сүрөт 2A). Эки тараптуу кайталануучу чаралар дисперсияны талдоо (RM ANOVA) үн интенсивдүүлүгүнүн олуттуу таасирин көрсөттү (F (4,172) = 37.1, б <0.01), бирок дарылоо өз ара аракеттенүү боюнча эч кандай топ жок. DA функциясынын бузулушу да FPSти начарлатышы мүмкүн болгон сенсомотордук дарбазадагы айырмачылыктарды жаратышы мүмкүн [15], [26]. Sensomotor Gating талдоо үчүн, бардык чычкандар prepulse бөгөт коюу (PPI) парадигма (Figure 2B) бир нече денгээлде сыналган. Prepulse интенсивдүүлүгүнүн олуттуу таасири болгон (RM ANOVA F (2,86) = 57.79, б <0.01), бирок дарылоо өз ара аракеттенүү менен эч кандай топ жок. Бул жыйынтыктар биздин эксперименталдык манипуляциялардын натыйжасында пайда болгон DA сигналынын NACга, же NAc жана BLAга тандалма куткаруусу акустикалык үрөй учурарлык реакцияны же сенсомотордук эшикти өзгөртпөгөнүн көрсөтүп турат. 2-сүрөт DAны NAc менен BLAга тең калыбына келтирүү LTM үчүн жетиштүү. FPS үчүн. чычкандар коркуу кондициялоо парадигмасына дуушар болушкан (Figure 2C). Тренинг учурунда чычкандарга 30 сыноо берилди, анда 10 сек жарык сигналы жумшак футшок (0.5 сек, 0.2 мА) менен жупташкан. Кыска мөөнөттүү эс тутум (STM) машыгуудан 10 мүнөт өткөндөн кийин жана LTM 24 сааттан кийин сыналган. Кондициялоодон мурун топтордун ортосунда олуттуу айырмачылыктар болгон эмес. Тренингден кийин, STM NAc жана BLAга калыбына келтирүү менен DD чычкандарында толугу менен калыбына келтирилди. NAc сайылган DD чычкандарда STM бузулган, бирок бул таасир маанисине жете алган жок; бирок, алар контролдук чычкандарга караганда LTM кыйла азыраак болгон (p<0.05; Bonferroni посттест). LTM NAc жана BLAга эки тараптуу сайылган DD чычкандарындагы контролдук деңгээлге толугу менен калыбына келтирилди. бут шок (Figure 2D) үчүн жүрүм-туруму боюнча топтордун ортосунда эч кандай олуттуу айырмачылыктар болгон. Бул маалыматтар NAc жана BLAдагы DA FPS үчүн LTMди жеңилдетүү үчүн жетиштүү экенин көрсөтүп турат.
талкулоо
DA ирилештирүү жана amygdala сыяктуу негизги лимбикалык мээ аймактарда LTM түзүү үчүн шарттарды түзүү эсептелет, УАК жана Hippocampus [27], [28], [29], ал эми мурунку изилдөөлөрдүн Pavlovian коркуу Пропаганда боюнча Д.А. үчүн ролду айтып жатышат [ 13]. Буга чейин, биз да бир FPS парадигмасы эстутум изи турукташтыруу үчүн маанилүү экенин көрсөткөн [12]. Мындан тышкары, VTA чыккан mesocorticolimbic районго DA кызматына калыбына STM FPS үчүн эск жана LTM калыбына келтирүү үчүн жетиштүү болгон, бир гана жалгыз ге Эйсиз кайрадан калыбына [12]. Бирок, окутуунун бул түрүнө LTM пайда болушу үчүн керектүү DA иш-сайттар белгисиз болчу. Бул жерде биз НАК жана Эйсиз үчүн DA синтези калыбына FPS үчүн LTM үчүн жетиштүү эмес экенин көрсөтүп турат. Ошондой эле, биз НАК үчүн долбоордук DA нейрон менен Th ошол калыбына BLA калыбына [12], же Эйсиз жана НАК да калыбына келтирүү сыяктуу эск куткаруу карата абал боюнча күчүнө кире элек болчу таба. Бул НАК ТМС караганда LTM пайда болушу үчүн дагы маанилүү болушу мүмкүн деп айтууга болот.
ээледи калыбына мамиле бир болуучу эскертүү DA нейрондор ашык ар бир калканга күрөө божомолдоруна жиберүүгө мүмкүн эмес. Ошентип, УАК салып тумоосуна ИБК Эйсиз үчүн, Th, жана ошону менен Э калыбына келтирүү мүмкүн. Биздин immunohistochemistry натыйжалары DA нейрондор НАК адамдардан калктын өзүнчө болуп Эйсиз, себеби бир гана ошол аймактагы бир Мээ аймагында күчөтүлгөн TH бойоктор тумоосу ийне innervating innervating деп ойлойм. HPLC натыйжалары DA сапаты amygdala чажыт-куткарып боюнча DD чычкандар менен эмес, УАК менен бийик, анткени бул аргумент бекемдөө. Бул жыйынтыктар чагылтуу максаттуу [30] негизинде DA нейрон эместигин изилдеген көптөгөн изилдөөлөр менен макулдашылган, [31], [32], [33].
Э НАК жана Эйсиз да Pavlovian коркуу Пропаганда үчүн зарыл негизги диаграммасы жана механизмдер чечилбеген бойдон калууда. Чынында, BLA NAC [16] үчүн божомолдоруна жөнөтөт, [34] жана бул синапс узак мөөнөттүү бөгөт, окууга жана эс негизги уюлдук кишиге [35] дуушар болот. Мындан тышкары, DA Эйсиз менен LTP көмөктөшүүчү жана НАК [18], [21]. Ошентип, Pavlovian коркуу аналоги учурунда, ал DA Эйсиз жылы glutamatergic пирамиданын клетканын ишине көмөктөшөт [19], [20], [36], анын ичинде клеткалардын бул долбоор үчүн НАК [34] Д. эми НАК өбөлгө болгон деп божомолдоого болот НАК синапс менен Эйсиз боюнча LTP, бул LTM калыптандырууга көмөк көрсөтүү. FPS үчүн Эйсиз жана НАК-жылы да көз каранды окуялардын так убактысын аныктоо бул жараянга маанилүүлүгүн түшүнүүгө көмөк кылат.
Материалдар жана ыкмалар
этика билдирүүсү
Бардык чычкандар Ден соолук улуттук институтунун жана чычкандар менен жол Washington Институттук Animal сактоо жана пайдалануу боюнча комитетинин University (2183-02) тарабынан бекитилген тарабынан белгиленген талаптарга ылайык каралат.
Жаныбарлар жана дарылоо
DD чычкандар сүрөттөлгөн [22] катары иштелип чыккан. Кыскасы, DD (Thfs / ТЭН; DbhTh / +) чычкандар шарттуу CRE recombinase тарабынан кайра жандандыруу мүмкүн эки таасирсиз кылынганын тирозин гидроксилаз (Th) alleles ашырат. DD чычкандар бир бүтүн тинейджер β-гидроксилаз (Dbh) allele бар, бир Dbh allele Th ген максаттуу киргизүү менен норадреналин нормалдуу өндүрүү үчүн уруксат берүү үчүн [24], [25]. Control жаныбарлар, жок эле дегенде, бир бүтүн Th allele жана бир бүтүн Dbh allele ашырат. Аларды эркек-аял чычкандар 2-6 ай курактагы жүрүш-текшерүү туш болушкан. Бардык чычкан 12 12 астында бөлмөсүнө алынган (жарык: караңгы) бир температура көзөмөлдөгөн чөйрө менен тамак-аш менен айлампасынын (5LJ5; PMI Азыктандыруучу, Сент-Луис, MO) жана суу ад либитум. Бардык жүрүш эксперимент жарык мезгилдин ичинде ишке ашырылган. DD чычкандар катуу hypophagic болгондуктан, алар күн сайын (intraperitoneally) 3 куюшуп, 4-dihydroxy-L-phenylalanine (L-Dopa) 50 бир көлөмүндө 33 мг / кг боюнча μl / г, баштап болжол менен төрөттөн кийинки мезгилдеги күнү 10 [25]. ээледи сайган, DD чычкандар, алар мындан ары L-Dopa тазалоосуз тийиштүү түрдө жеп чейин L-Dopa күнүмдүк эткени менен колдоого алынган.
Viral сайма
Isoflurane (1.5-5%) - Эллисон, чычкан stereotaxic аспап (David Kopf инструменттери, Tujunga, CA) ичине жайгаштырылган. Ядродогу протондордун гендердин иш-калыбына келтирүү үчүн гана accumbens, рекомбинанттык CAV2-CRE вирус (2.1 × 1012 бөлүкчөлөр / мл боюнча titered) эки тараптуу дары сайылган (мм-координаттары: Bregma үчүн 1.7 место, 0.75 кийинки үчүн жанынан, 4.75 ventral Bregma чейин; 0.5 μl / жарым шар) DD жана контролдоо чычкандар салып. НАК жана Эйсиз из кош калыбына келтирүү үчүн, CAV2-CRE вирус НАК салып эки тараптуу ийне, ошондой эле жогоруда көрсөтүлгөн жана BLA (мм-координаттары: 1.5 3.25 кийинки үчүн жанынан Bregma, анын арт, 5 ventral Bregma чейин; 0.5 μl / жарым шар) DD жана контролдоо чычкандар менен. Бул ээледи багытына так сүрөттөлүшү [22] жарыяланды. Кыкта Микрокаржылоо куюунун насостун (WPI, Сарасота, FL) тиркелет 10-өлчөөчү аспап шприц ийне (Hamilton, Рено, NV) пайдаланып 32-мин ичинде ийне болгон. НАК жалгыз жана кош куткаруу топ келген Control чычкандар бир топко түзүлөт жана кандай жүрүш-туруш төмөнкү параметр менен айырмаланган эмес.
аппаратура
эттирет бөлмөлөрдү (SR-Lab, Сан-Диего инструменттери, Сан-Диего, CA) үн-бөгөт коюу маселелери [12] айтылгандай prepulse жайлатып, жоопторду жана коркунучтуу potentiated эттирет селт эттирет өлчөө үчүн пайдаланылган. жооп сереси бир- ге prepulse жайлатып эсептөө үчүн колдонулган, жооп, коркуу-potentiated эттирет, жана шок Reactivity селт эттирет. Үн болгон бир үн өлчөнсө окурманга менен ырасталган жок (RadioShack, Fort Worth, TX). А калибрлөө бирдиги эттирет жооп окууда (Сан-Диего инструменттери, Сан-Диего, CA) бүтүндүгүн камсыз кылуу үчүн колдонулду. An 8-кызаруучу жарык ордуларында катары пайдалануу үчүн эттирет кутусунун арткы дубалга минип алган.
жооп ийилген селт эттирет
бир 5-мин көнүгүшүп мезгилден кийинки, жаныбарлар үн кагуусу көлөмүн көбөйтүү менен сыноолорго 10 катар сунуш кылынды: күчүн тартып, ал эч бир үн жок, 105 санариптик берүүгө, 30 сек бир бөлүмдү менен. Бардык үн крупа 40 МСЭК эле.
Алдын-ала кагуусу аталат
PPI катары сүрөттөлөт [12] өлчөнгөн. Кыскасы, бир көнүгүшүп мезгилден кийинки, чычкан 5, 40-МСЭКтин, 120-DB, кагуусу-жалгыз сыноолор менен берилген. Чычкандар анда титирөө кагуусу-жалгыз сот биринин 50 сыноолор менен берилген, үч prepulse сыноолордун бири (5, 10 жана 15-дБ жогору алкагында), же эч кандай акустикалык стимул бар болгон бир нөл соттук териштирүү болду. Prepulse аталат төмөнкүдөй колдонуу ар бир prepulse деъгээлде эсептелип чыккан:% аталат = [(орточо эттирет жообу боюнча prepulse сот / орточо эттирет кагуусу-жалгыз сот жооп) × 100].
Коркуу-potentiated эттирет
Бардык чычкандар 3 күндүк FPS парадигманы катары сүрөттөлөт [12] аркылуу сыналган. Кыскасы, базалык, чычкан, 20 сыноолорго жасалма туш буйрук катар берилди ордуларында жана эч-кашы бүркөлө шарттары арасында бирдей бөлүнөт. On күнү 2, чычкан 30 жупташтырууларын (2 мүн орточо ITI) бир 10-МА 0.2-сөк footshock менен 0.5-сөк кал жарык кабыл алды. чычкандар, анда кыска мөөнөттүү эс үчүн сыноо алдында 10 мүн өз клеткаларынын ичине жайгаштырылган. On күнү 3, LTM бааланган. төмөнкү формула коркуу potentiated эттирет эсептөө үчүн колдонулган:% бөгөт = [(жок-кашы бүркөлө сыноолор-1 боюнча жооптордун шарты сыноолор / орточо жооп орточо) × 100].
Immunohistochemistry
[12] айтылгандай Mouse мээ кыртышы, стандарттык ыкмаларды колдонуп гистологиялык талдоо үчүн даярдалган. Эркин-калкып coronal бөлүмдөрү (30 мкм) коён анти-чи (1 2000, Millipore) жана чычкан каршы DAT (1 1000, Millipore) антителолор менен immunostained алынган. Орто антителолор Cy2- же Cy3- коштолду (1 200, Джексон ImmunoResearch) да болгон. Сүрөттөр адил brightfield микроскоп (Nikon) менен кабыл алынган.
Жогорку басымдуу суюк заттардын
Чычкандар Beuthanasia (250 мг / кг) менен курмандыкка чалынчу жана мээси жок жана муз муздак мрамор плитада жайгаштырылган. чычкан мээ булагына колдонуу (Activational Systems, Warrren, MI), 1-мм коюу сыра НАК же amygdala аркылуу кабыл алынган. Tissue шибегелер (1-мм диаметри), андан кийин 1.7 мл микротюбдун жайгаштырылган, алынып, тез суюк азот селейдим. Үлгүлөр алар талдоо үчүн Нейрохимия Core лабораториясына (молекулярдык Neuroscience изилдөө Venderbilt University борбору) кургак Муз үстүндөгү жөнөтүлгөн чейин -80 ° С сакталган жок.
Статистикалык анализ
Статистикалык анализ GraphPad Prism программасын (La Jolla, California) колдонуу менен аткарылган.
Acknowledgments
Биз кол пайдалуу сын-пикирлер үчүн Ларри Zweifel ыраазычылык Glenda Froelick жана Albert Кинтана Гистологиядагы жардам алыш үчүн, жана Valerie чычкан колония кылуу үчүн дубалдар. Биз, ошондой эле, докт Miguel Chillón (Барселона Universitat Autonoma боюнча CBATEG багытын Production Unit) CAV2 үчүн ыраазычылык билдирем.
Шилтемелер
Атаандаш кызыкчылык: Authors жок атаандаш кызыкчылык бар деп жарыялашкан.
Каржылоо: Бул иликтөө жарым-жартылай Howard Hughes Медициналык Институту, Коомдук Саламаттыкты сактоо кызматы, Улуттук изилдөө кызматынын сыйлыгы, T32 GM07270, Улуттук Медициналык Илимдер Институтунан жана NIH Жалпы Медицина Илимдер Институттарынын Грант 4 R25 GM 058501- тарабынан колдоого алынган 05. Каржылоочулардын изилдөөлөрдү иштеп чыгууда, маалыматтарды чогултууда жана талдоодо, жарыялоо чечиминде же кол жазманы даярдоодо эч кандай ролу болгон эмес.
шилтемелер
1. Bjorklund A, Даннетт SB. бир өзгөртүү: мээде тинейджер нейрон системалары. Айлары Neurosci. 2007; 30: 194-202. [PubMed]
2. Fields HL, Hjelmstad GO, Маргулис, EB, Никола SM. үйрөнгөн appetitive жүрүм-туруму жана оң күчөтүү боюнча Ventral tegmental аймак нейрондор. Annu Аян Neurosci. 2007; 30: 289-316. [PubMed]
3. Марен S. Pavlovian коркуу жаткан Нейробиология. Annu Аян Neurosci. 2001; 24: 897-931. [PubMed]
4. Brischoux F, Chakraborty S, Брайерли DI, Ungless MA. зыяндуу сигналдар менен ventral VTA жылы тинейджер нейрон .Суигон козголгондо. Жаздын Natl Acad Илимий АКШ A. 2009; 106: 4894-4899. [КУП эркин макала] [PubMed]
5. Guarraci FA, Капп BS. сергек коёндой боюнча түрдүү pavlovian коркуу Пропаганда учурунда ventral tegmental аянты dopaminergic нейрон An electrophysiological мүнөздөмөсү. Behav Brain Жен. 1999; 99: 169-179. [PubMed]
6. Нундун уулу ЖАШЫЯ M, Адлер A, Mitelman R, Vaadia E, Бергман H. Midbrain dopaminergic нейрондор жана striatal антихолинергикалык interneurons ыктымалдык классикалык аналоги сыноолорго ар кандай экспонаттар боюнча сыйлык aversive окуялардын ортосунда айырма бар коддорду. J Neurosci. 2008; 28: 11673-11684. [PubMed]
7. Аберкромби ED, Keefe KA, DiFrischia DS, Zigmond MJ. striatum жылы Vivo тинейджер чыгаруу боюнча стресс түрдүү таасири, ядро accumbens жана түздөн-түз ошо макулуктардын. J Neurochem. 1989; 52: 1655-1658. [PubMed]
8. Inglis FM, amygdala боюнча Moghaddam B. Dopaminergic innervation аздыгынан катуу жооп болуп саналат. J Neurochem. 1999; 72: 1088-1094. [PubMed]
9. Kalivas PW, ядронун сөөктөрүндө тинейджер берүү Сүрөткө P. тандап жандантуу Стресс accumbens. Brain Рез. 1995; 675: 325-328. [PubMed]
10. Pezze MA, Heidbreder CA, Feldon J, Murphy CA. ядронун жооп тандап шартталган Контексттик жана дискреттик сигналдарды aversively негизги жана номиналдык тинейджер accumbens. Neuroscience. 2001; 108: 91-102. [PubMed]
11. де-Oliveira AR, Билайт.Лида AE, Брандау ML. Тинейджер D2 коюлтулган коркуп сөз кабылдагыч механизмдери. Pharmacol BIOCHEM Behav. 2006; 84: 102-111. [PubMed]
12. Fadok JP, Дикерсон TM, Palmiter RD. Тинейджер кал-каранды коркуу Пропаганда үчүн зарыл болуп саналат. J Neurosci. 2009; 29: 11089-11097. [КУП эркин макала] [PubMed]
13. Pezze MA, коркуу Пропаганда менен Feldon J. Mesolimbic dopaminergic жолдору. Prog Neurobiol. 2004; 74: 301-320. [PubMed]
14. Ponnusamy R, Гандурас HA, Бедаттын M. D2 сыяктуу тинейджер кабылдагыч системалуу блокада чычкандар менен шартталган коркуу кырылышына көмөктөшөт. Үйрөнүү Эс. 2005; 12: 399-406. [КУП эркин макала] [PubMed]
15. Коч M. эттирет боюнча къурау. Prog Neurobiol. 1999; 59: 107-128. [PubMed]
16. Sesack SR, Grace AA. Кортикостероид жаштын Ganglia сыйлык тармак: microcircuitry. Neuropsychopharmacology. 2010; 35: 27-47. [КУП эркин макала] [PubMed]
17. McGaugh JL. amygdala сезимдик кызыктуу окуяларды эстегенде бирикмесин modulates. Annu Аян Neurosci. 2004; 27: 1-28. [PubMed]
18. Bissiere S, Humeau Y, feedforward жайлатып басуу менен каптал amygdala менен Luthi A. тинейджер дарбазалары LTP дарстарында. Nat Neurosci. 2003; 6: 587-592. [PubMed]
19. Kroner S, Rosenkranz JA, Grace А.А., Barrionuevo G. тинейджер экстракорпоралдык basolateral amygdala нейрондордун жандануусу modulates. J Neurophysiol. 2005; 93: 1598-1610. [PubMed]
20. Marowsky A, Yanagawa Y, K Obata, Vogt KE. interneurons бир атайын колдо amygdala милдетинин dopaminergic көмөк ортомчулук кылат. Нейрон. 2005; 48: 1025-1037. [PubMed]
21. Wolf ME, Sun X, Mangiavacchi S, Chao SZ. Психотикалык заттардан жана нейрондордун пластикалык. Neuropharmacology. 2004; 47 (тобу 1): 61-79. [PubMed]
22. Hnasko TS, Перес FA, Scouras AD, Stoll EA, Гэйл SD, .Удаалаш. тинейджер-кем чычкандардын nigrostriatal тинейджер боюнча CRE recombinase-арачылыгы калыбына hypophagia жана bradykinesia тескериге. Жаздын Natl Acad Илимий АКШ A. 2006; 103: 8858-8863. [КУП эркин макала] [PubMed]
23. Soudais C, Лаплас-Builhe C, K Kissa, Кремер EJ. Иттин сыналуучу багыттарды жана бододо, аларды натыйжалуу дарга транспорту менен нейрон артыкчылыктуу берилүүсүнүн. FASEB J. 2001; 15: 2283-2285. [PubMed]
24. Szczypka MS, Rainey MA, Ким DS, Alaynick WA, Marck Б.Т., .Удаалаш. тинейджер-кем чычкандардын жүрүм-турумун азыктандырууда. Жаздын Natl Acad Илимий АКШ A. 1999; 96: 12138-12143. [КУП эркин макала] [PubMed]
25. Чжоу QY, Palmiter RD. Тинейджер-кем чычкандар катуу hypoactive, adipsic жана aphagic болуп саналат. Клетка. 1995; 83: 1197-1209. [PubMed]
26. Swerdlow NR, Braff DL, Гейер MA. кем sensorimotor эле дүрмөттөлгөн жаныбарлар модели: биз билгенибизди айтабыз, биз эмнени ойлоп, биз жакында билүү кандай. Behav Pharmacol. 2000; 11: 185-204. [PubMed]
27. LaLumiere RT, .Шейх EM, McGaugh JL. basolateral amygdala же ядрого кыртышын accumbens менен эс бириктирүү Модулатион да мээ аймактарда жарыш тинейджер сезгич жандануусуна талап кылат. Үйрөнүү Эс. 2005; 12: 296-301. [КУП эркин макала] [PubMed]
28. Manago F, Castellano C, Oliverio A, Mele A, Де Leonibus E. тинейджер кабылдагычтар чакан ролу, D1 сыяктуу жана D2 сыяктуу, бир-тергөө Тоскоол болуучу качуу менен ядро эс бириктирүү боюнча субаймактык, өзөгү жана жер кыртышын, accumbens ичинде милдети. Үйрөнүү Эс. 2009; 16: 46-52. [PubMed]
29. Rossato JI, Bevilaqua LR, Izquierdo I, Медина JH, Cammarota M. тинейджер узак мөөнөттүү эс сактоо талабыбызды көзөмөлдөйт. Илим. 2009; 325: 1017-1020. [PubMed]
30. Lammel S, Хетсел A, Hackel Оо, Джонс I, Казимир B, .Удаалаш. эки mesocorticolimbic тинейджер системасындагы mesoprefrontal нейрон өзгөчө касиеттери. Нейрон. 2008; 57: 760-773. [PubMed]
31. Ford CP, Марк GP, Картрайт JT. Касиеттери жана mesolimbic тинейджер нейрон наркотикалык к¼рс¼тм¼ же жерди максаттуу жараша өзгөрүлүп турат. J Neurosci. 2006; 26: 2788-2797. [PubMed]
32. Маргулис, EB, Lock H, Хейпер VI, Shippenberg TS, Hjelmstad GO, .Удаалаш. KAPPA опиоиддер тандап prefrontal кортекске долбоордук dopaminergic нейрондорду көзөмөлдөө. Жаздын Natl Acad Илимий АКШ A. 2006; 103: 2938-2942. [КУП эркин макала] [PubMed]
33. Маргулис EB Митчелл JM, г. Nasushiobara J, Hjelmstad GO, Fields HL. Midbrain тинейджер нейрондор: проекторлор максаттуу иш-аракеттер мүмкүн болуучу узактыгы жана тинейджер D (2) сезгич жайлатып аныктайт. J Neurosci. 2008; 28: 8908-8913. [PubMed]
34. McGaugh JL, Макинтайр С.К., Power AE. эс бириктирүү Amygdala тездиги: башка мээ тутуму менен өз ара аракеттенүү. Neurobiol Эс үйрөн. 2002; 78: 539-552. [PubMed]
35. Попеску AT, Saghyan А.А., Pare D. amygdala тарабынан corticostriatal пластикалык NMDA көз каранды көмөк көрсөтүү. Жаздын Natl Acad Илимий АКШ A. 2007; 104: 341-346. [КУП эркин макала] [PubMed]
36. Rosenkranz JA, Grace AA. Тинейджер-кыйыр pavlovian Пропаганда учурунда жыты-жылдын апрел айында amygdala мүмкүнчүлүктөрдү тездиги. Nature. 2002; 417: 282-287. [PubMed]
;