Effet vun der ΔFosB-Oerexpression op opioid an Cannabinoid-Rezeptor-vermittelter Signaliséierung am Nukleus accumbens (2011)

Neuropharmakologie. 2011 Dec;61(8):1470-6. doi: 10.1016/j.neuropharm.2011.08.046.

Sim-Selley LJ, Cassidy MP, Sparta A, Zachariou V, Nestler EJ, Selley DE.

Source

Departement fir Pharmakologie an Toxikologie an Institut fir Drogen- an Alkoholstudien, Virginia Commonwealth University School of Medicine, Richmond, VA 23298, USA.

mythologesch

De stabile Transkriptiounsfaktor ΔFosB gëtt am Nukleus accumbens (NAc) induzéiert duerch chronesch Belaaschtung fir verschidden Drogen vu Mëssbrauch, an transgenen Ausdrock vun ΔFosB am Striatum verbessert d'belountend Eegeschafte vu Morphin a Kokaine. Wéi och ëmmer, déi mechanesch Basis fir dës Observatiounen ass onkomplett verstanen. Mir hunn e bitransgenen Mausmodell mat inducibelen Ausdrock vun ΔFosB benotzt Dopamin D (1) Rezeptor / Dynorphin-enthale striatal Neuronen fir den Effekt vum ΔFosB Ausdrock op Opioid a Cannabinoid Rezeptor Signaliséierung am NAc ze bestëmmen. Resultater weisen datt mu opioid-mediéiert G-Protein Aktivitéit an Inhibitioun vun Adenylyl Cyclase an der NAc vu Mais verstäerkt goufen, déi ΔFosB ausgedréckt hunn. Ähnlech gouf Kappa Opioid Inhibitioun vun Adenylyl Cyclase an den ΔFosB ausdréckende Mais verstäerkt. Am Géigesaz, Cannabinoid Rezeptor-mediéiert Signaliséierung huet net ënnerscheet tëscht Mais déi ΔFosB iwwerausdrécken a Kontrollmais. TDës Erkenntnisser suggeréieren datt Opioid a Cannabinoid Rezeptor Signaliséierung differenziell moduléiert ginn duerch Ausdrock vun ΔFosB, an weisen datt ΔFosB Ausdrock e puer vu sengen Effekter produzéiere kann iwwer verstäerkte Mu a Kappa Opioid Rezeptor Signaliséierung am NAc.

Schlësselwieder: G-Protein, Adenylylcyclase, Striatum

1. Aféierung

Opioid Rezeptoren a Cannabinoid CB₁ Rezeptoren (CB₁R) sinn déi neurobiologesch Ziler fir zwee wäit benotzt Drogenklassen, déi Morphin, Heroin a Rezept Opioiden enthalen, a Marihuana (Δ⁹-tetrahydrocannabinol (THC)), respektiv. Déi akut Effekter vun Opioiden a Cannabinoide ginn duerch G-Protein-gekoppelte Rezeptoren vermëttelt, déi haaptsächlech G aktivéieren_{i / o} Proteinen a produzéieren Downstream Effektorreaktiounen wéi Inhibitioun vun Adenylyl Cyclase (Childers, 1991, Childers et al., 1992, Howlett et al., 2002). D'Motor, Gedächtnisbehënnerung a psychoaktiven Effekter vun Δ⁹-THC gi vu CB produzéiert₁R (Huestis et al., 2001, Zimmer et al., 1999), déi wäit am Gehir verdeelt sinn, mat héijen Niveauen an de Basalganglien, Hippocampus a Cerebellum (Herkenham et al., 1991). D'analgetesch a belountend Effekter vun de meescht klinesch relevanten a mëssbrauchten opioid Drogen ginn haaptsächlech duerch mu opioid Rezeptoren (MOR) vermëttelt (Matthes et al., 1996), déi am limbesche System an dem Gehirnstamm beräichert sinn (Mansour et al., 1994). De mesolimbesche System, besteet aus dopaminergesche Projektioune vum ventrale tegmentale Beräich (VTA) bis Nukleus accumbens (NAc), spillt eng wichteg Roll an de belountende Effekter vun Opioiden a Cannabinoiden (Bozarth a Wise, 1984, Vaccarino et al., 1985, Zangen et al., 2006), wéi och aner Drogen vu Mëssbrauch (Koob an Volkow, 2010). Ausserdeem sinn endogen Opioid a Cannabinoid Systemer an de belountende Effekter vu multiple Klassen vu psychoaktiven Drogen involvéiert (Maldonado et al., 2006, Trigo et al., 2010). Also ass et wichteg Mechanismen ze klären, duerch déi Opioid a CB₁R Signaliséierung ginn am NAc geregelt.

Eng zentral Fro am Drogenmëssbrauchsberäich war d'Proteine z'identifizéieren, déi den Iwwergang vun akuter op laangfristeg Effekter vu psychoaktiven Drogen vermëttelen. Den AP-1 Transkriptiounsfaktor ΔFosB ass besonnesch interessant well et e stabile ofgeschniddene Splice Variant Produkt vun der fosb Gen dat accumuléiert bei widderholl Belaaschtung un Drogen vu Mëssbrauch oder natierleche Belounungen (McClung et al., 2004, Nestler, 2008, Nestler et al., 1999). Mir hu festgestallt datt ΔFosB am Gehir induzéiert gëtt no widderholl Belaaschtung fir Morphin, Δ⁹-THC, Kokain oder Ethanol, mat all Medikament dat en eenzegaartegt regionalt Muster vum ΔFosB Ausdrock produzéiert (Perrotti et al., 2008). Eng konsequent Erkenntnis iwwer Drogen war datt ΔFosB héich am Striatum induzéiert gouf, wou all véier Medikamenter ΔFosB am NAc Kär induzéiert hunn an all ausser Δ⁹-THC bedeitend induzéiert Ausdrock an der NAc Shell a caudate-putamen.

Pharmakologesch Studien weisen datt d'Ko-Administratioun vum Dopamin D₁ Rezeptor (D₁R) Antagonist SCH 23390 blockéiert ΔFosB Induktioun an der NAc a caudate-putamen no intermittierend Kokain oder Morphinverwaltung, suggeréiert d'potenziell Wichtegkeet vun D₁R-Ausdrock Neuronen (Muller a Unterwald, 2005, Neie et al., 1995). Den Effekt vun der ΔFosB Induktioun op Drogen-mediéiert Verhalen gouf ënnersicht mat bitransgene Mais, déi ΔFosB a spezifesche neuronale Populatiounen vum NAc an dorsalen Striatum ausdrécken (Chen et al., 1998). Mais déi ΔFosB an Dynorphin / D ausdrécken₁R positiv Neuronen am NAc an dorsalen Striatum (Linn 11A) weisen verännert Äntwerten op Drogen vu Mëssbrauch, notamment verstäerkte Sensibilitéit fir déi belountend Effekter vu Kokain oder Morphin (Colby et al., 2003, Kelz et al., 1999, Zachariou et al., 2006). Dës Ännerunge koumen an der Verontreiung vu Verännerungen an den Niveauen vu MOR oder verschidde G-Protein-Ënnerunitéiten. Wéi och ëmmer, Dynorphin mRNA Niveauen goufen am NAc vun ΔFosB ausdréckende Mais reduzéiert (Zachariou et al., 2006), suggeréiert datt een Zil vun ΔFosB e Gen ass deen en endogene opioid Peptid kodéiert. ΔFosB Induktioun kéint och Verhalensverännerungen produzéieren andeems d'Rezeptor Signaliséierung am NAc reguléiert, awer dës Méiglechkeet ass net ënnersicht ginn. Dofir hunn déi aktuell Studien de bitransgene Mausmodell benotzt fir ze bestëmmen ob Iwwerexpressioun vun ΔFosB am Dynorphin / D₁R enthalen striatal Neuronen verännert MOR-mediéiert G-Protein Aktivitéit a MOR- a KOR-mediéiert Adenylyl Cyclase Inhibitioun am NAc. Den Effekt vun ΔFosB op CB₁R-mediated G-Protein Aktivitéit war och bewäert well Δ⁹-THC Administratioun induzéiert ΔFosB am NAc (Perrotti et al., 2008) an den Endocannabinoid System ass bekannt fir Gehirbelounungskreesser ze reguléieren (Gardner, 2005, Maldonado et al., 2006), awer den Effekt vun ΔFosB op den Endocannabinoid System gouf net ënnersicht.

2. Material a Methoden

2.1. Reagens

[³⁵S]GTPγS (1250 Ci/mmol), [α-³²P]ATP (800 Ci/mmol) an [³H] cAMP (26.4 Ci /mmol) goufen aus PerkinElmer (Shelton, CT) kaaft. ATP, GTP, PIB, cAMP, Bovine serum albumin, creatine phosphokinase, Papaverine, imidazole an WIN-55212-2, sech aus Sigma Aldrich (St. Louis, MO) kaaft. GTPγS gouf vun Roche Diagnostic Corporation (Chicago, IL) kaaft. DAMGO gouf vum Drug Supply Program vum National Institute on Drug Abuse (Rockville, MD) zur Verfügung gestallt. Econo-1 Szintillatiounsflëssegkeet gouf vu Fisher Scientific (Norcross, GA) kritt. Ecolite Scintillatiounsflëssegkeet gouf vum ICN (Costa Mesa, CA) kritt. All aner Chemikalien goufen vum Sigma Aldrich oder Fisher Scientific kritt.

2.2. Mais

Männlech bitransgene Mais ofgeleet vun NSE-tTA (Linn A) × TetOp-ΔFosB (Linn 11) goufen generéiert wéi am Kelz et al. (Kelz et al., 1999). Bitransgene Mais goufen konzipéiert an op Doxycyclin (100 µg am Drénkwaasser) opgewuess fir den transgenen Ausdrock z'ënnerdrécken. Am Alter vun 8 Wochen gouf Doxycyclin fir d'Halschent vun de Mais aus dem Waasser ewechgelooss fir den transgene Ausdrock z'erméiglechen, wärend déi verbleiwen Mais op Doxycyclin gehale goufen fir den Transgen z'ënnerdrécken. Gehirer goufen 8 Woche méi spéit gesammelt, d'Zäit wou d'Transkriptiounseffekter vun ΔFosB maximal sinn (McClung an Nestler, 2003). Eng zweet transgen Mauslinn gouf benotzt an där Δc-Jun, en dominante negativen Antagonist vum c-Jun, an D ausgedréckt gëtt₁R/dynorphin und D₂R/enkephalin Zellen vum Striatum, Hippocampus a Parietal Cortex (Peakman et al., 2003). C-Jun a verwandte Jun Famill Proteine dimeriséieren mat Fos Famill Proteinen a binden un d'AP-1 Site vun Zilgenen fir d'Transkriptioun ze reguléieren. Wéi och ëmmer, Ofkierzung vum N-Terminus vum c-Jun (Δc-Jun) mécht de Komplex transkriptional inaktiv a fäeg d'DNA-Bindung vun aktive AP-1-Komplexen ze blockéieren. Männlech bitransgene Mais ofgeleet vun NSE-tTA (Linn A) × TetOp-FLAG-Δc-Jun (Linn E) goufen generéiert wéi am Peakman et al. (Peakman et al., 2003). Bitransgene Mais goufen konzipéiert an op Doxycyclin (100 µg am Drénkwaasser) opgewuess fir den transgenen Ausdrock z'ënnerdrécken. Welpen goufen op 3 Wochen ofgeschwächt, genotypéiert an a Gruppen getrennt, mat der Halschent op doxycyclinhaltegt Waasser an der Halschent op reegelméissegt Drénkwaasser gehale fir FLAG-Δc-Jun Ausdrock ze induzéieren. Gehirer goufen 6 Woche méi spéit gesammelt, d'Zäit wou maximal Niveaue vu FLAG-Δc-Jun gemooss goufen (Peakman et al., 2003). All Déierprozedure goufen am Aklang mat den National Institutes of Health Guide for the Care and Use of Laboratory Déieren duerchgefouert.

2.3. Membran Virbereedung

Gehirer goufen bei -80 ° C bis den Dag vun der Assay gelagert. Virun der Assay gouf all Gehir opgedaucht, an den NAc gouf op Äis dissektéiert. All Prouf gouf an 50 mM Tris-HCl, 3 mM MgCl homogeniséiert₂, 1 mM EGTA, pH 7.4 (Membranbuffer) mat 20 Schlag vun engem Glashomogenisator bei 4°C. Den Homogenat gouf bei 48,000 × centrifugéiert g bei 4 ° C fir 10 min, resuspendéiert am Membranbuffer, centrifugéiert erëm bei 48,000 × g bei 4°C fir 10 min a resuspendéiert an 50 mM Tris-HCl, 3 mM MgCl₂, 0.2 mM EGTA, 100 mM NaCl, pH 7.4 (assaybuffer). Proteinniveauen goufen duerch d'Methode vu Bradford bestëmmt (Bradford, 1976) benotzt Bovine Serum Albumin (BSA) als Standard.

2.4. Agonist-stimuléiert [³⁵S]GTPγS Bindung

Membrane goufen 10 Minutte bei 30 ° C mat Adenosin-Deaminase (3 mU /ml) am Assay-Puffer pre-inkubéiert. Membranen (5-10 μg Protein) goufen dunn fir 2 Stonnen bei 30 ° C an Assay-Puffer inkubéiert mat 0.1% (w/v) BSA, 0.1 nM [³⁵S] GTPγS, 30 µM PIB an Adenosin Deaminase (3 mU / ml) mat an ouni adequat Konzentratioune vun DAMGO oder WIN55,212-2. Nonspecific bindend war mat 20 µM GTPγS gemooss. D'Inkubatioun gouf duerch Filtratioun duerch GF /B Glasfaserfilter ofgeschloss, gefollegt vun 3 wäschen mat 3 ml äiskale 50 mm Tris-HCl, pH 7.4. Gebonnen Radioaktivitéit gouf duerch flësseg Scintillatiounsspektrofotometrie no Iwwernuechtungsextraktioun vun de Filteren an Econo-1 Scintillatiounsflëssegkeet bestëmmt.

2.5. Adenylyl Cyclase Assay

Membranen (5-25 µg Protein) sech mat adenosine deaminase preincubated wéi uewen beschriwwen, dann fir 15 min bei 30 ° C an der Presenz oder Feele vun 1µM forskolin incubated, mat oder ouni DAMGO, U50,488H oder WIN55,212-2, am Assay-Puffer mat 50 µM ATP, [α-³²P]ATP (1.5 µCi), 0.2 mM DTT, 0.1% (w/v) BSA, 50 µM zyklesch AMP, 50 µM GTP, 0.2 mM Papaverin, 5 mM Phosphokreatin, 20 Unitéiten/ml Kreatinphosphoskin-Deamin an Adphosphoskin /ml) an engem Endvolumen vun 3 µl. Ënner dëse Konditiounen, total [α-³²P]cAMP erëmfonnt war allgemeng manner wéi 1% vum Gesamtbetrag vun derbäigesater [α-³²P]ATP an all Prouf. D'Reaktioun gouf ofgeschloss duerch Kachen fir 3 Minutten an [³²P] Cyclic AMP war isoléiert vun der duebel Kolonn (Dowex an Alumina) Method vun Salomon (Salomon, 1979). [³H] cAMP (10,000 dpm) gouf zu all Rouer virun der Kolonnchromatographie als intern Standard bäigefüügt. Radioaktivitéit war duerch flësseg scintillation Spectrophotometry (45% Effizienz fir ³H) no 4.5 ml vun der eluate goufen an 14.5 ml vun Ecolite scintillation Flëssegket opgeléist.

2.6. Datenanalyse

Wann net anescht uginn, sinn Donnéeën als Moyenne Wäerter ± SE vun 4-8 getrennt Experimenter gemellt, all vun deem war an triplicate gesuergt. Net-stimuléiert [³⁵S] GTPγS Bindung gëtt als agonist-stimuléiert Bindung minus Basal Bindung berechent. Netto Forskolin-stimuléiert Adenylyl Cyclase Aktivitéit ass definéiert als Forskolin-stimuléiert Aktivitéit - Basal Aktivitéit (pmol / mg / min). Prozentsaz Hemmung vun forskolin-stimuléiert adenylyl Cyclase Aktivitéit ass definéiert als (Netto forskolin-stimuléiert Aktivitéit an der Ofwuelung vun agonist - Netto forskolin-stimuléiert Aktivitéit an der Präsenz vun agonist / Netto forskolin-stimuléiert Aktivitéit an der Ofwuelung vun agonist) × 100. All Curve-passend a statistesch Analysë goufen mat Prism 4.0c (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA) gemaach. Konzentratiounseffekt Kéiren goufen duerch iterativ net-linear Réckgang analyséiert fir EC ze kréien₅₀ an E_max Wäerter. Statistesch Bedeitung vun der Konzentratioun-Effekt Donnéeën war vun zwee-Manéier Analyse vun Varianz (ANOVA) bestëmmt, mat agonist Dosis an Gen Aféierungs- (op oder aus) als Haaptfaktoren. Statistesch Bedeitung vu Curve-Fit Wäerter (E_max oder EC₅₀) gouf duerch den net-paarte zwee-tailed Student's t-Test festgeluegt, mat Welch's Korrektur oder Quadratwurzeltransformatioun vun den Donnéeën, wou néideg, fir ongläich Varianzen (vum F-Test festgestallt) am EC ze korrigéieren₅₀ Wäerter.

3. Resultater

3.1. Effekt vum ΔFosB Ausdrock op opioid a cannabinoid Rezeptor-mediéiert G-Protein Aktivatioun

Ze bestëmmen ob MOR- oder CB₁R-mediéiert G-Protein Aktivatioun gouf geännert duerch inducibel transgenen Ausdrock vun ΔFosB an der NAc, agonist-stimuléiert [³⁵S] GTPγS Bindung gouf an isoléierte Membranen iwwerpréift, déi aus dëser Regioun vu bitransgene Mais virbereet sinn, bedingend ausdrécken (ΔFosB on) oder net ausdrécken (ΔFosB off) den ΔFosB Transgen. De MOR-selektive Enkephalin Analog DAMGO gouf benotzt fir MOR ze aktivéieren an de Cannabinoid Aminoalkylindol WIN55,212-2 gouf benotzt fir CB ze aktivéieren₁R. Dës ligands sech virdrun voll agonists zu MOR an CB gewisen₁R, respektiv (Breivogel et al., 1998, Selley et al., 1997). Et war net machbar KOR-mediéiert G-Protein Aktivitéit z'ënnersichen well d'Signal ze niddreg ass am Nager Gehir (Childers et al., 1998). Resultater weisen Konzentratioun-ofhängeg Stimulatioun vu G-Protein Aktivitéit vu béid DAMGO a WIN55,122-2 an NAc vun ΔFosB aus an ΔFosB op Mais (Figure 1). Fir DAMGO-stimuléiert Aktivitéit (Figure 1A), Zwee-Wee ANOVA vun de Konzentratiounseffektdaten hunn bedeitend Haapteffekter vum ΔFosB Status opgedeckt (p<0.0001, F=22.12, df=1) an DAMGO Konzentratioun (p<0.0001, F=29.65, df=5) ouni bedeitend Interaktioun (p=0.857, F=0.387, df=5). Nonlinear Regressiounsanalyse vun de Konzentratiounseffektkurven huet e wesentlech méi grouss DAMGO E_max Wäert an ΔFosB op Mais (E_max = 73 ± 5.2% Stimulatioun) par rapport zu ΔFosB Off Mais (E_max = 56 ± 4.1% Stimulatioun; p <0.05 anescht wéi ΔFosB op Mais duerch Student's t-Test). DAMGO EC₅₀ Wäerter waren net anescht tëscht ΔFosB op an ΔFosB Off Mais (302 ± 72 nM versus 212 ± 56 nM, respektiv, p = 0.346).

Effekt vum ΔFosB Ausdrock op agonist-stimuléiert [³⁵S]GTPγS Bindung am NAc. Membrane vun ΔFosB-ausdréckend (ΔFosB op) oder Kontroll (ΔFosB aus) Mais goufen analyséiert wéi a Methoden beschriwwen mat ënnerschiddleche Konzentratioune ...

Am Géigesaz zu de Resultater, déi mam MOR Agonist DAMGO kritt goufen, goufe keng ΔFosB Status-ofhängeg Differenzen an der G-Protein Aktivatioun mam Cannabinoid Agonist WIN55,212-2 observéiert (Figure 1B). Zwee-Wee ANOVA vun de WIN55,212-2 Konzentratiounseffektdaten hunn e wesentlechen Haapteffekt vun der WIN55,212-2 Konzentratioun opgedeckt (p <0.0001, F = 112.4, df = 7), awer net vum ΔFosB Status (p = 0.172) , F = 1.90, df = 1) an et gouf keng Interaktioun (p = 0.930, F = 0.346, df = 7). Ähnlech gouf et keen Effekt vum ΔFosB Status op WIN55,212-2 E_max Wäerter (103 ± 6% versus 108 ± 8% Stimulatioun an ΔFosB op an aus Mais, respektiv, p = 0.813 vum Student's t-Test) oder EC₅₀ Wäerter (103 ± 20 nM versus 170 ± 23 nM an ΔFosB op an aus Mais, respektiv, p = 0.123).

Baséierend op der Form vun de Kéiren an der Tatsaach, datt eis fréier Studien biphasesch WIN55,212-2 Konzentratiounseffektkurven am Gehir gewisen hunn (Breivogel et al., 1999, Breivogel et al., 1998), d'WIN55,212-2 Kéiren goufen och mat engem zwee-Site Modell analyséiert. Analyse vun den duerchschnëttleche Donnéeën huet eng liicht Verbesserung vun der Guttheet vun der Fit mam Zwee-Site Modell gewisen (R² = 0.933 an 0.914, Zomm vu Quadraten = 3644 a 5463 an ΔFosB op an aus Mais, respektiv) am Verglach zum Single-Site Modell (R² = 0.891 an 0.879, Zomm vu Quadraten = 6561 an 6628 an ΔFosB op an aus Mais, respektiv). Wéi och ëmmer, keng bedeitend Differenzen goufen tëscht ΔFosB op an aus Mais an entweder der E_max oder EC₅₀ Wäerter vun héich oder niddereg Potenz Siten (Zousaz Table 1), obwuel et en Trend zu enger méi niddereger EC war₅₀ Wäert op der héijer Potenzplaz bei Mais mat ΔFosB op (EC₅₀héich = 28.0 ± 10.6 nM) am Verglach zu deenen mat ΔFosB aus (EC)₅₀héich = 71.5 ± 20.2 nM; p = 0.094). Ausserdeem gouf et keen Effekt vum ΔFosB Status op Basal [³⁵S] GTPγS bindend an NAc Membranen (253 ± 14 versus 226 ± 14 fmol / mg an ΔFosB op an aus Mais, respektiv, p = 0.188). Dës Donnéeë weisen datt inducibel transgenen Ausdrock vun ΔFosB an der NAc vu Mais d'MOR-mediéiert G-Protein Aktivatioun erhéicht ouni d'CB wesentlech ze beaflossen₁R-mediéiert oder basal G-Protein Aktivitéit.

3.2. Effekt vun ΔFosB op opioid a cannabinoid Rezeptor-mediéiert Inhibitioun vun Adenylyl Cyclase

Fir den Effekt vun induciblen transgeneschen Ausdrock vun ΔFosB op Modulatioun vun der Downstream Effektor Aktivitéit duerch MOR a CB ze evaluéieren₁R, Inhibitioun vun 1 µM forskolin-stimuléiert Adenylyl Cyclase Aktivitéit gouf an NAc Membranen iwwerpréift. Nieft MOR- an CB₁R-mediéiert Inhibitioun vun Adenylyl Cyclase Aktivitéit, Effekter vun der KOR Aktivitéit goufen och iwwerpréift mat der KOR-selektiv voll Agonist U50,488 (Zhu et al., 1997), well fréier Resultater weisen datt Dynorphin mRNA en Zil vun ΔFosB am bitransgenesche Modell war (Zachariou et al., 2006). D'Resultater weisen datt DAMGO, U50,488 a WIN55,212-2 all Konzentratioun-ofhängeg Inhibitioun vun der AdenylylCyclase Aktivitéit a béid ΔFosB off an ΔFosB op Mais produzéiert hunn (Figure 2). Zwee-Wee ANOVA vun DAMGO Konzentratioun-Effekt Daten (Figure 2A) huet bedeitend Haapteffekter vum ΔFosB Status opgedeckt (p = 0.0012, F = 11.34, df = 1) an DAMGO Konzentratioun (p <0.0001, F = 29.61, df = 6), awer keng bedeitend Interaktioun (p = 0.441, F = 0.986) , df = 6). Nonlinear Réckgang Analyse vun DAMGO Konzentratioun-Effekt Kéiren opgedeckt e wesentlech méi niddereg DAMGO EC₅₀ Wäert an ΔFosB op Mais (101 ± 11 nM) am Verglach zu ΔFosB Off Mais (510 ± 182 nM, p <0.05 vum Student T-Test). Wéi och ëmmer, et war kee groussen Ënnerscheed am DAMGO E_max Wäerter (20.9 ± 1.26% versus 19.8 ± 1.27% Inhibitioun an ΔFosB op an aus Mais, respektiv, p = 0.534).

Effekt vum ΔFosB Ausdrock op Inhibitioun vun der Adenylyl Cyclase Aktivitéit am NAc. Membrane vun ΔFosB-ausdréckend (ΔFosB op) oder Kontroll (ΔFosB aus) Mais goufen analyséiert wéi a Methoden a Präsenz vun 1 µM beschriwwen. ...

KOR-mediéiert Adenylyl Cyclase Inhibitioun ënnerscheet sech och als Funktioun vum induciblen transgenen Ausdrock vun ΔFosB (Figure 2B). Zwee-Wee ANOVA vun U50,488 Konzentratiounseffektdaten hunn bedeitend Haapteffekter vum ΔFosB Status gewisen (p = 0.0006, F = 14.53, df = 1) an U50,488 Konzentratioun (p <0.0001, F = 26.48, df = 3) , ouni bedeitend Interaktioun (p = 0.833, F = 0.289, df = 3). Netlinear Regressiounsanalyse vu Konzentratiounseffektkurven huet e méi groussen U50,488 E_max Wäert an ΔFosB op Mais (18.3 ± 1.14% Inhibitioun) am Verglach zu ΔFosB Off Mais (12.5 ± 2.03% Inhibitioun; p <0.05 anescht wéi ΔFosB op vum Student's t-Test), ouni signifikanten Ënnerscheed am U50,488 EC₅₀ Wäerter (310 ± 172 nM versus 225 ± 48 nM an ΔFosB op an aus Mais, respektiv, p = 0.324).

Am Géigesaz zu den Effekter, déi mat MOR a KOR observéiert goufen, gouf et kee bedeitende Effekt vun inducibelen transgenen ΔFosB Ausdrock op Inhibitioun vun Adenylyl Cyclase vum Cannabinoid Agonist WIN55212-2 (Figure 2C). Zwee-Wee ANOVA vu WIN55,212-2 Konzentratioun-Effektdaten hunn e wesentlechen Effekt vun der Drogenkonzentratioun gewisen (p <0.0001, F = 23.6, df = 2), awer net vum ΔFosB Status (p = 0.735, F = 0.118, df) = 1) nach war et eng bedeitend Interaktioun (p = 0.714, F = 0.343, df = 2). Ausserdeem gouf et keen Effekt vum ΔFosB Status op basal oder forskolin-stimuléiert Adenylyl Cyclase Aktivitéit an der Verontreiung vun engem Agonist. Basal Adenylyl Cyclase Aktivitéit war 491 ± 35 pmol / mg / min an ΔFosB op Mais am Verglach zu 546 ± 44 an ΔFosB Off Mais (p = 0.346 vum Student's t-Test). Och d'Adenylyl Cyclase Aktivitéit an der Präsenz vun 1 µM Forskolin war 2244 ± 163 pmol / mg / min an ΔFosB op Mais versus 2372 ± 138 pmol / mg / min an ΔFosB Off Mais (p = 0.555).

3.3. Effekt vum ΔcJun op opioid a cannabinoid Rezeptor-mediéiert Inhibitioun vun Adenylyl Cyclase

Well inducibel transgenen Ausdrock vun ΔFosB verstäerkt inhibitoresch Signaltransduktioun vu MOR a KOR op Adenylyl Cyclase am NAc, war et interessant ze bestëmmen ob en dominante negativen Inhibitor vun ΔFosB-mediéierten Transkriptioun opioid Rezeptor Signaliséierung op eng Géigendeel Manéier moduléiere géif. Fir dës Fro unzegoen, gouf d'Inhibitioun vun der forskolin-stimuléierter Adenylyl Cyclase Aktivitéit duerch DAMGO an U50,488 a Membranen ënnersicht, déi aus der NAc vu bitransgene Mais virbereet sinn, bedingend ΔcJun ausdrécken. D'Resultater weisen kee signifikanten Effekt vum ΔcJun Ausdrock op d'Inhibitioun vun der Adenylyl Cyclase Aktivitéit duerch MOR oder KOR (Figure 3). Zwee-Wee ANOVA vun DAMGO Konzentratioun-Effekt Kéiren weisen e wesentleche Haapteffekt vun DAMGO Konzentratioun (p <0.0001, F = 20.26, df = 6), awer net vun ΔcJun Status (p = 0.840, F = 0.041, df = 1) an et war keng bedeitend Interaktioun (p = 0.982, F = 0.176, df = 6). Ähnlech gouf et kee groussen Ënnerscheed am E_max oder EC₅₀ Wäerter tëscht Mais mat ΔcJun op (E_max = 23.6 ± 2.6%; EC₅₀ = 304 ± 43 nM) oder ΔcJun off (E_max = 26.1 ± 2.5%, p = 0.508; EC₅₀ = 611 ± 176 nM, p = 0.129). Ähnlech Resultater goufen mat U50,488 gesi, sou datt zwee-Wee ANOVA vun de Konzentratiounseffektkurven e wesentlechen Effekt vun der Konzentratioun weisen (p <0.0001, F = 11.94, df = 6), awer net vum ΔcJun Status (p = 0.127) , F = 2.391, df = 1) an et war keng bedeitend Interaktioun (p = 0.978, F = 0.190, df = 6). Och do ware keng bedeitend Differenzen am E_max oder EC₅₀ Wäerter tëscht Mais mat ΔcJun op (E_max = 14.8 ± 2.9%; EC₅₀ = 211 ± 81 nM) oder aus (E_max = 16.7 ± 1.8%, p = 0.597; EC₅₀ = 360 ± 151 nM, p = 0.411).

Effekt vum ΔcJun Ausdrock op Inhibitioun vun der Adenylyl Cyclase Aktivitéit am NAc. Membranen aus ΔcJun-ausdréckend (ΔcJun op) oder Kontroll (ΔcJun aus) Mais goufen a Präsenz vun DAMGO (A), U50,488H (B) oder WIN55,212-2 inkubéiert ...

Den ΔcJun Ausdrock huet och net wesentlech Inhibitioun vun Adenylyl Cyclase am NAc vum Cannabinoid Agonist beaflosst. Zwee-Wee ANOVA vun de WIN55,212-2 Konzentratiounseffektkurven weisen e wesentlechen Haapteffekt vun der WIN55,212-2 Konzentratioun (p <0.0001, F = 15.53, df = 6), awer net vum Genotyp (p = 0.066, F = 3.472, df = 1) an et war keng bedeitend Interaktioun (p = 0.973, F = 0.208, df = 6). Och et waren keng bedeitend Differenzen am WIN55,212-2 E_max Wäerter (13.0 ± 2.3% an 13.6 ± 0.9% Hemmung an ΔcJun op versus Off Mais, respektiv, p = 0.821) an oder EC₅₀ Wäerter (208 ± 120 nM a 417 ± 130 nM an ΔcJun op versus Off Mais, respektiv, p = 0.270). Also, obwuel et e klengen Trend zu enger Ofsenkung vun der Potenz vu WIN55,212-2 bei Mais war, déi ΔcJun ausdrécken, huet d'Transgen d'Cannabinoidhemmung vun Adenylyl Cyclase net wesentlech geännert. Ausserdeem gouf et keen Effekt vum ΔcJun Status op basal oder forskolin-stimuléiert Adenylyl Cyclase Aktivitéit. Basal Adenylyl Cyclase Aktivitéit war 1095 ± 71 pmol/mg/min an 1007 ± 77 pmol/mg/min (p = 0.403) bei Mais mat ΔcJun op oder aus, respektiv. Adenylyl Cyclase Aktivitéit stimuléiert vun 1 µM forskolin war 4185 ± 293 pmol /mg /min versus 4032 ± 273 pmol /mg /min (p = 0.706) bei Mais mat ΔcJun op oder aus, respektiv.

3.4. Diskussioun

D'Resultater vun dëser Etude hunn eng verstäerkte MOR-mediéiert G-Protein Aktivatioun an Inhibitioun vun Adenylyl Cyclase an der NAc vu Mais mat induciblen transgenen Ausdrock vun ΔFosB an Dynorphin / D opgedeckt₁R enthält Neuronen. KOR-mediéiert Inhibitioun vun der Adenylyl Cyclase Aktivitéit gouf och am NAc vun ΔFosB ausdréckende Mais verstäerkt, suggeréiert datt ΔFosB den endogene opioid System am NAc reguléiert. DAMGO E_max Wäert war méi grouss fir MOR-stimuléiert [³⁵S]GTPγS Bindung, a seng EC₅₀ Wäert war méi niddereg fir Adenylyl Cyclase Inhibitioun, an ΔFosB iwwerausdréckende Mais am Verglach mat Kontroll Mais. Dës Erkenntnisser suggeréieren d'Méiglechkeet vun der Rezeptorreserve fir Effektormodulatioun awer net G-Protein Aktivatioun ënner den iwwerpréiften Assaybedéngungen. D'Entdeckung datt maximal Inhibitioun vun Adenylyl Cyclase vum KOR Agonist vum ΔFosB Ausdrock beaflosst gouf suggeréiert eng niddereg Rezeptorreserve fir déi KOR-mediéiert Äntwert, konsequent mat den nidderegen Niveaue vu KOR Bindungsplazen am Mausgehir (Unterwald et al., 1991). Am Géigesaz, CB₁R-mediéiert G-Protein Aktivitéit an Inhibitioun vun Adenylyl Cyclase waren net beaflosst vum ΔFosB Ausdrock, suggeréiert datt d'Opioid- a Cannabinoid Systemer an hirer Äntwert op ΔFosB an dësen NAc Neuronen ënnerscheeden.

Den Effekt vun ΔFosB op opioid Rezeptor-mediéiert Signaliséierung ass konsequent mat eisem virege Bericht datt ΔFosB Ausdrock am Striatum akut a chronesch Effekter vu Morphin verännert huet (Zachariou et al., 2006). Eng Entdeckung vun där Studie war datt Mais mat transgenen Ausdrock vun ΔFosB am Dynorphin / D₁R striatal Neuronen ware méi empfindlech op Morphin an der Plaz Konditioun wéi Kontrollen. Ausserdeem gouf dësen Effekt duerch viral vermëttelt Ausdrock vun ΔFosB duerch Site-spezifesch Injektioun an den NAc imitéiert. Dës Observatioune si konsequent mat den aktuellen Resultater déi verstäerkte MOR Signaliséierung am NAc weisen.

Mir identifizéiert virdru d'Genkodéierung Dynorphin als Zil vun ΔFosB, a proposéiert datt reduzéiert Dynorphin konsequent mat verstäerkten belountende Properties vu Morphin an ΔFosB bitransgene Mais wier. (Zachariou et al., 2006). Déi aktuell Resultater weisen datt KOR-mediéiert Inhibitioun vun Adenylyl Cyclase am NAc an ΔFosB ausdréckende Mais verbessert gëtt, wat eng kompensatoresch Erhéijung vun der KOR Empfindlechkeet no reduzéierter Dynorphin reflektéiere kéint. Virdrun Studien hu gewisen datt KOR a bestëmmte Gehirregiounen vu Prodynorphin Knockout Mais upreguléiert gouf, dorënner NAc (Clarke et al., 2003).

Am Géigesaz zu ΔFosB, induciblen transgeneschen Ausdrock vun ΔcJun, den dominante negativen ofgeschniddene Mutant vum ΔFosB bindende Partner cJun, huet d'Adenylyl Cyclase Inhibitioun net duerch MOR oder KOR Agonisten geännert. Dës Resultater suggeréieren datt Basalniveauen vum ΔFosB Ausdrock, déi relativ niddereg sinn, keng bedeitend Roll spillen fir opioid Rezeptor Signaliséierung op dësem Niveau vun der Signaltransduktioun an der NAc z'erhalen. D'Tatsaach datt de bedingte belountende Effekt vu Morphin duerch ΔcJun Ausdrock an eiser viregter Studie reduzéiert gouf (Zachariou et al., 2006) suggeréiert entweder datt d'Morphin Induktioun vun ΔFosB wärend der Konditiounsprozedur wichteg ass fir Verhalensreaktiounen op d'Drogen ze reguléieren oder datt transkriptional Effekter vun ΔFosB aner wéi déi, déi d'proximal Signaliséierung vun opioid Rezeptoren beaflossen, opioid Belounung beaflosse kënnen. Op jidde Fall weisen d'Resultater vun der aktueller Etude kloer datt, wann ΔFosB Ausdrock iwwer Basalniveauen am striatal Dynorphin / D erhéicht gëtt₁R-ausdréckend Neuronen, et gëtt eng robust Erhéijung vun der Kopplung vu MOR a KOR zur Inhibitioun vun AdenylylCyclase am NAc.

D'Mechanismen, duerch déi MOR- a KOR-mediéiert Signaliséierung verbessert ginn duerch ΔFosB Iwwerexpressioun sinn onkloer, awer mir hu virdru gewisen datt MOR Niveauen, bewäert duerch [³H] naloxon Bindung, sinn net anescht am NAc vun ΔFosB op versus Off Mais (Zachariou et al., 2006). Déi selwecht Studie huet festgestallt datt Gα_i1 an 2 Proteinniveauen goufen an dëser Regioun net vum ΔFosB Ausdrock beaflosst. Ee, virdrun Gentherapie Ausdrock Rei Analysë gewisen, datt Gα_o mRNA gouf an NAc vun ΔFosB op Mais upreguléiert (McClung an Nestler, 2003). Et wäert an zukünfteg Studien interessant sinn fir den Effekt vum transgenen ΔFosB Ausdrock op G-Protein Ënnerunitéit Ausdrock um Proteinniveau wéi och op den Ausdrock vu ville G-Protein modulatoresche Proteinen z'ënnersichen.

Et ass interessant datt ΔFosB Ausdrock net CB verbessert huet₁R-mediéiert Signaliséierung am NAc. Et ass méiglech datt Ännerungen am CB₁R Signaliséierung geschitt an enger diskreter Bevëlkerung vun Neuronen déi an der ganzer NAc Virbereedung verstoppt ass. Zum Beispill, Administratioun vun Δ⁹- THC bedeitend induzéiert ΔFosB am Kär, awer net Shell, vum NAc (Perrotti et al., 2008). Echjo, et gouf gewisen datt d'Erausfuerderung mat Δ⁹-THC no widderholl Administratioun vun Δ⁹-THC erhéicht Dopamin Verëffentlechung am NAc Kär, awer reduzéiert Verëffentlechung an der Schuel (Cadoni et al., 2008). Et ass och wichteg ze bemierken datt d'11A Linn vu bitransgene Mais ΔFosB nëmmen an Dynorphin / D ausdrécken₁R positiv mëttel spiny Neuronen vum Striatum, awer CB₁R ginn a béid Dynorphin / D ausgedréckt₁R an Enkephalin/D₂R positiv striatal Neuronen (Hohmann and Herkenham, 2000), souwéi op Terminaler vun cortical afferents (Robbe et al., 2001). Ausdrock vum dominanten negativen Reguléierer vun ΔFosB-mediéierten Transkriptioun, ΔcJun, hat och kee wesentlechen Effekt op Cannabinoid Rezeptor Signaliséierung, obwuel ΔcJun inducibel a béid D ausgedréckt ass.₁ an D₂- enthält Populatiounen vu mëttleren spiny Neuronen an dëse Mais (Peakman et al., 2003). Et ass awer méiglech datt de basal ΔFosB Ausdrock genuch niddereg ass datt ΔcJun d'Rezeptor-Signaliséierung net beaflosst, wéi suggeréiert vu Resultater mat MOR a KOR. Et ass och méiglech datt CB₁R Signaliséierung gëtt bescheiden duerch basal ΔFosB Ausdrock verstäerkt, sou datt weider Erhéijung vun ΔFosB Ausdrock oder seng Handlunge mat ΔcJun blockéieren nëmme liicht Effekter haten déi net den Niveau vun der statistescher Bedeitung erreecht hunn. Indirekt Ënnerstëtzung fir dës Interpretatioun ka gesi ginn andeems Dir WIN55,212-2 EC vergläicht₅₀ Wäerter tëscht Mais déi ΔcJun versus ΔFosB ausdrécken. D'Verhältnis vun der WIN55,212-2 EC₅₀ Wäert fir Adenylyl Cyclase Inhibitioun bei Mais mat induzéierten Ausdrock vun ΔcJun zu sengem EC₅₀ Wäert fir G-Protein Aktivatioun bei Mais mat induzéierten Ausdrock vun ΔFosB war 4.0, wärend deeselwechte Verhältnis bei Mais ouni Induktioun vun entweder Transgen 1.2 war.

Alternativ kënne Cannabinoide ΔFosB Ausdrock induzéieren ouni direkten Effekt op CB₁R Signalisatioun. An dësem Szenario kënne Cannabinoiden d'Reaktiounsfäegkeet op déi psychoaktiv Effekter vun aneren Drogen via ΔFosB-mediéierten Transkriptiounsreguléierung moduléieren. echn Tatsaach, Administratioun vun Δ⁹-THC produzéiert Kräiz-Sensibiliséierung fir Opioiden an Amphetamin (Cadoni et al., 2001, Lamarque et al., 2001), konsequent mat dëser Hypothese. Ausserdeem gouf widderholl Administratioun vum Cannabinoid Agonist CP55,940 gemellt fir d'MOR-mediéiert G-Protein Aktivatioun an der NAc ze erhéijen, ähnlech wéi Mais déi ΔFosB induktiv ausdrécken an der aktueller Studie (Vigano et al., 2005). Den Effekt vum ΔFosB Ausdrock op Δ⁹-THC-mediéiert Verhalen ass net bewäert ginn, awer déi aktuell Resultater ausgeschloss keng Interaktioun. D'Resultater vun dëser an eiser fréierer Etude (Zachariou et al., 2006) weisen ΔFosB-induzéiert Ännerungen am MOR a KOR / Dynorphin am Striatum. Déi belountend Effekter vun Δ⁹-THC, wéi gemooss duerch Plaz Präferenz, ginn a MOR null Mais ofgeschaaft, wärend Läschung vu KOR ofgeschwächt Δ⁹-THC Plaz Aversioun an opgedeckt Δ⁹-THC Plaz Preferenz (Ghozland et al., 2002). Ähnlech, bedingt Plazaversion zu Δ⁹-THC fehlt am Pro-Dynorphin Knockout am Verglach mat Wild-Typ Mais (Zimmer et al., 2001). Dës Donnéeë suggeréieren datt Δ⁹-THC kéint méi belountend sinn no ΔFosB Induktioun a konsequent Induktioun vu MOR Signaliséierung mat Reduktiounen am Dynorphin Ausdrock.

Am Resuméy, d'Resultater vun dëser Etude weisen datt Ausdrock vun ΔFosB am D₁R / Dynorphin positiv striatal Neuronen verstäerkte MOR- a KOR-mediéiert Signaliséierung um Niveau vun der G-Protein vermëttelt Hemmung vun der Adenylyl Cyclase Aktivitéit am NAc. Dës Entdeckung ass konsequent mat Studien déi eng Roll fir den endogenen opioid System an der Belounung bewisen hunn (Trigo et al., 2010), a bitt e potenzielle Mechanismus fir ΔFosB-mediéierten Effekter op Belounung. Am Géigesaz, CB₁R-mediéiert Signaliséierung am NAc war net wesentlech vum striatal ΔFosB Ausdrock beaflosst ënner de Konditiounen déi ënnersicht goufen, obwuel weider Studien berechtegt sinn fir den Effekt vun der ΔFosB Induktioun op den Endocannabinoid System ze bestëmmen.

Fuerschungsariichtungen

MOR Signaliséierung gëtt an de Nukleus accumbens vu Mais verstäerkt déi ΔFosB ausdrécken
KOR Hemmung vun Adenylyl Cyclase gëtt och verbessert bei Mais déi ΔFosB ausdrécken
Ausdrock vun ΔFosB ännert CB net₁R Signalisatioun am Nucleus accumbens

Ergänzungsmaterial

01

Klickt hei fir ze kucken.^{(45K, pdf)}

Dankbarkeet

D'Auteuren soen Hengjun He, Jordan Cox an Aaron Tomarchio Merci fir technesch Hëllef mat der [³⁵S]GTPγS Bindungsanalysen. Dës Etude gouf vun USPHS Grants DA014277 (LJS), DA10770 (DES) an P01 DA08227 (EJN) ënnerstëtzt.

Noten

Verzichterklärung vum Verlag: Dëst ass eng PDF-Datei vun engem net verworfene Manuskript deen fir d'Publikatioun akzeptéiert gouf. Als Service fir eis Cliente këmmeren mir dës fréie Versioun vum Manuskript. De Manuskript wäert d'Kopieveraarbechtung, d'Setzgarantie an d'Iwwerpréiwung vum entstinnende Beweis ënnerwerfen, ier se an der Final citat Form publizéiert gëtt. Maacht weg datt während dem Produktiounsfehler eventuell Décisiounen entdeckt kënne ginn, déi d'Inhalter beaflosse kënnen, an all gesetzlech Verännerungen, déi op d'Zäitschrëft gelidden sinn.

Referenze

Bozarth MA, Wise RA. Anatomesch ënnerscheeden Opiatrezeptor Felder vermëttelen Belounung a kierperlech Ofhängegkeet. Wëssenschaft. 1984;224: 516-517. [PubMed]
Bradford MM. Eng séier a sensibel Method fir d'Quantifizéierung vu Mikrogramm Quantitéite vu Protein mat dem Prinzip vun der Protein-Faarfbindung. Anal. Biochem. 1976;72: 248-254. [PubMed]
Breivogel CS, Childers SR, Deadwyler SA, Hampson RE, Vogt LJ, Sim-Selley LJ. Chronesch Delta⁹-Tetrahydrocannabinol Behandlung produzéiert en Zäit-ofhängege Verloscht vu Cannabinoid Rezeptor-aktivéierte G-Proteinen am Gehir. J. Neurochem. 1999;73: 2447-2459. [PubMed]
Breivogel CS, Selley DE, Childers SR. Cannabinoid Rezeptor Agonist Effizienz fir Stimulatioun [³⁵S] GTPγS Bindung zu Ratten cerebellar Membranen korreléiert mat agonist-induzéierten Ofsenkungen vun der PIB Affinitéit. J. Biol. Chem. 1998;273: 16865-16873. [PubMed]
Cadoni C, Pisanu A, Solinas M, Acquas E, Di Chiara G. Verhale Sensibiliséierung no widderholl Belaaschtung fir Delta 9-tetrahydrocannabinol a Kräiz-Sensibiliséierung mat Morphin. Psychopharmacologie (Berl) 2001;158: 259-266. [PubMed]
Cadoni C, Valentini V, Di Chiara G. Verhale Sensibiliséierung op Delta 9-Tetrahydrocannabinol a Cross-Sensibiliséierung mat Morphin: Differenziell Verännerungen an der Akkumbal Shell a Kär Dopamin Iwwerdroung. J. Neurochem. 2008;106: 1586-1593. [PubMed]
Chen J, Kelz MB, Zeng G, Sakai N, Steffen C, Shockett PE, Picciotto MR, Duman RS, Nestler EJ. Transgen Déieren mat induciblen, geziilten Genausdrock am Gehir. Mol. Pharmacol. 1998;54: 495-503. [PubMed]
Childers SR. Opioid Rezeptor-gekoppelt zweet Messenger. Life Sci. 1991;48: 1991-2003. [PubMed]
Childers SR, Fleming L, Konkoy C, Marckel D, Pacheco M, Sexton T, Ward S. Ann. NY Acad. Sci. 1992;654: 33-51. [PubMed]
Childers SR, Xiao R, Vogt LJ, Sim-Selley LJ. Kappa opioid Rezeptor Stimulatioun vun [³⁵S] GTPγS Bindung am Meerschwein Gehir: Mangel u Beweiser fir Kappa₂- selektiv Aktivatioun vu G-Proteinen. Biochem. Pharmacol. 1998;56: 113-120. [PubMed]
Clarke S, Zimmer A, Zimmer AM, Hill RG, Kitchen I. Regioun selektiv Upreguléierung vu Mikro-, Delta- a Kappa-Opioid Rezeptoren awer net opioid Rezeptor-ähnlech 1 Rezeptoren am Gehir vun Enkephalin an Dynorphin Knockout Mais. Neurologie. 2003;122: 479-489. [PubMed]
Colby CR, Whisler K, Steffen C, Nestler EJ, Self DW. Striatal Zell Typ-spezifesch Iwwereraxpression vun DeltaFosB erhéijen d'Incentive fir Kokain. J. Neurosci. 2003;23: 2488-2493. [PubMed]
Gardner EL. Endocannabinoid Signalsystem a Gehir Belounung: Schwéierpunkt op Dopamin. Pharmacol. Biochem. Behav. 2005;81: 263-284. [PubMed]
Ghozland S, Matthes HW, Simonin F, Filliol D, Kieffer BL, Maldonado R. Motivational Effekter vu Cannabinoide ginn duerch mu-opioid a kappa-opioid Rezeptoren vermëttelt. J. Neurosci. 2002;22: 1146-1154. [PubMed]
Herkenham M, Lynn AB, Johnson MR, Melvin LS, de Costa BR, Rice KC. Charakteriséierung a Lokaliséierung vu Cannabinoid Rezeptoren am Rat Gehir: eng quantitativ in vitro autoradiographesch Studie. J. Neurosci. 1991;11: 563-583. [PubMed]
Hohmann AG, Herkenham M. Lokaliséierung vu Cannabinoid CB (1) Rezeptor mRNA an neuronale Subpopulatiounen vu Ratstriatum: eng Duebel-Label in situ Hybridiséierungsstudie. Synapse. 2000;37: 71-80. [PubMed]
Howlett AC, Barth F, Bonner TI, Cabral G, Casellas P, Devane WA, Felder CC, Herkenham M, Mackie K, Martin BR, Mechoulam R, Pertwee RG. International Union of Pharmacology. XXVII. Klassifikatioun vu Cannabinoid Rezeptoren. Pharmakologesch Iwwerpréiwung. 2002;54: 161-202.
Huestis MA, Gorelick DA, Heishman SJ, Preston KL, Nelson RA, Moolchan ET, Frank RA. Blockade vun Effekter vu gefëmmt Marihuana vum CB1-selektive Cannabinoid Rezeptor Antagonist SR141716. Arch. Gen. Psychiatrie. 2001;58: 322-328. [PubMed]
Kelz MB, Chen J, Carlezon WA, Jr, Whisler K, Gilden L, Beckmann AM, Steffen C, Zhang YJ, Marotti L, Self DW, Tkatch T, Baranauskas G, Surmeier DJ, Neve RL, Duman RS, Picciotto MR, Nestler EJ. Ausdréck vum Transkriptionsfaktor DeltaFosB am Gehir hunn d'Sensibilitéit géint Kokain kontrolléiert. Natur. 1999;401: 272-276. [PubMed]
Koob GF, Volkow ND. Neurocircuitry vun Sucht. Neuropsychopharmacologie. 2010;35: 217-238. [PMC gratis Artikel] [PubMed]
Lamarque S, Taghzouti K, Simon H. Chronesch Behandlung mat Delta (9) -Tetrahydrocannabinol verbessert d'Lokomotorreaktioun op Amphetamin an Heroin. Implikatioune fir Schwachstelle fir Drogenofhängeger. Neuropharmakologie. 2001;41: 118-129. [PubMed]
Maldonado R, Valverde O, Berrendero F. Engagement vum Endocannabinoid System an der Drogenofhängeger. Trends Neurosci. 2006;29: 225-232. [PubMed]
Mansour A, Fox CA, Thompson RC, Akil H, Watson SJ. mu-Opioid Rezeptor mRNA Ausdrock an der Ratten CNS: Verglach mat Mu-Rezeptor Bindung. Brain Res. 1994;643: 245-265. [PubMed]
Matthes HWD, Maldonado R, Simonin F, Valverde O, Slowe S, Kitchen I, Befort K, Dierich A, LeMeur M, Dolle P, Tzavara E, Hanoune J, Roques BP, Kieffer BL. Verloscht vu Morphin-induzéierter Analgesie, Belounungseffekt an Entzugssymptomer bei Mais déi den µ-Opioid Rezeptor Gen feelen. Natur. 1996;383: 819-823. [PubMed]
McClung CA, Nestler EJ. Reglement vun der Genexpression an der Kokainbelaaschtung vum CREB a DeltaFosB. Nat. Neurosci. 2003;6: 1208-1215. [PubMed]
McClung CA, Ulery PG, Perrotti LI, Zachariou V., Berton O, Nestler EJ. DeltaFosB: en molekulare Schalter fir eng laang Adaptatioun am Gehir. Gehir Res. Mol. Gehir Res. 2004;132: 146-154. [PubMed]
Muller DL, Unterwald EM. D1 Dopamine-Rezeptor moduléiert d'DeltaFosB-Induktioun am RettungsStriatum no der intermittierender Morphinverabreichung. J. Pharmacol. Exp. Ther. 2005;314: 148-154. [PubMed]
Nestler EJ. Iwwerpréiwung. Transkriptional Mechanik vu Sucht: D'Roll vun DeltaFosB. Philos. Trans. R. Soc. London. B. Biol. Sci. 2008;363: 3245-3255. [PMC gratis Artikel] [PubMed]
Nestler EJ, Kelz MB, Chen J. DeltaFosB: en molekulare Mediateur vu laangfristeg neurale a versteetleche Plastizitéit. Brain Res. 1999;835: 10-17. [PubMed]
Nye HE, Hope BT, Kelz MB, Iadarola M, Nestler EJ. Pharmakologesch Studien iwwer d'Reguléierung vun chronescher FOS-bezogenen Antigen-Induktioun vum Kokain am Striatum an dem Nukleus accumbens. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1995;275: 1671-1680. [PubMed]
Peakman MC, Colby C, Perrotti LI, Tekumalla P, Carle T, Ulery P, Chao J, Duman C, Steffen C, Monteggia L, Allen MR, Stock JL, Duman RS, McNeish JD, Barrot M, Self DW, Nestler EJ , Schaeffer E. Induzibel, Gehirregregenspezifesch Ausdrock vun engem dominante negativ Mutante vum c-Jun bei transgenen Mäusen d'Sensibilitéit fir Kokain. Brain Res. 2003;970: 73-86. [PubMed]
Perrotti LI, Weaver RR, Robison B, Renthal W, Maze I, Yazdani S, Elmore RG, Knapp DJ, Selley DE, Martin BR, Sim-Selley L, Bachtell RK, Self DW, Nestler EJ. Distinct Muster vun DeltaFosB Induktioun am Gehir vum Drogen vu Mëssbrauch. Synapse. 2008;62: 358-369. [PMC gratis Artikel] [PubMed]
Robbe D, Alonso G, Duchamp F, Bockaert J, Manzoni OJ. Lokaliséierung a Mechanismen vun der Handlung vu Cannabinoid Rezeptoren an de glutamatergesche Synapsen vun der Maus Nucleus accumbens. J. Neurosci. 2001;21: 109-116. [PubMed]
Salomon Y. Adenylate Cyclase Assay. Adv. Cyclesch Nukleotid Res. 1979;10: 35-55. [PubMed]
Selley DE, Sim LJ, Xiao R, Liu Q, Childers SR. Mu opioid Rezeptor-stimuléiert [³⁵S] GTPγS Bindung a Ratten Thalamus a kultivéierten Zelllinnen: Signaltransduktiounsmechanismen déi d'Agonistesch Effizienz ënnerleien. Mol. Pharmacol. 1997;51: 87-96. [PubMed]
Trigo JM, Martin-Garcia E, Berrendero F, Robledo P, Maldonado R. Drogen Alkohol Depend. 2010;108: 183-194. [PubMed]
Unterwald EM, Knapp C, Zukin RS. Neuroanatomesch Lokaliséierung vu κ1 a κ2 Opioid Rezeptoren am Ratten a Meerschwein Gehir. Brain Res. 1991;562: 57-65. [PubMed]
Vaccarino FJ, Bloom FE, Koob GF. Blockade vun Nukleus accumbens Opiatrezeptoren attenuéiert intravenös Heroin Belounung an der Rat. Psychopharmacologie (Berl) 1985;86: 37-42. [PubMed]
Vigano D, Rubino T, Vaccani A, Bianchessi S, Marmorato P, Castiglioni C, Parolaro D. Psychopharmacologie (Berl) 2005;182: 527-536. [PubMed]
Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, Cassidy MP, Kelz MB, Shaw-Lutchman T, Berton O, Sim-Selley LJ, Dileone RJ, Kumar A, Nestler EJ. Eng wichteg Roll fir DeltaFosB am Nukleus accumbens am Morphin Aktioun. Nat. Neurosci. 2006;9: 205-211. [PubMed]
Zangen A, Solinas M, Ikemoto S, Goldberg SR, Wise RA. Zwee Gehir Siten fir Cannabinoid Belounung. J. Neurosci. 2006;26: 4901-4907. [PubMed]
Zhu J, Luo LY, Li JG, Chen C, Liu-Chen LY. Aktivatioun vum gekloonten mënschleche Kappa Opioid Rezeptor duerch Agonisten verbessert [35S] GTPγS Bindung un Membranen: Bestëmmung vu Potenz an Effizienz vu Liganden. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1997;282: 676-684. [PubMed]
Zimmer A, Valjent E, Konig M, Zimmer AM, Robledo P, Hahn H, Valverde O, Maldonado R. J. Neurosci. 2001;21: 9499-9505. [PubMed]
Zimmer A, Zimmer AM, Hohmann AG, Herkenham M, Bonner TI. Erhéicht Mortalitéit, Hypoaktivitéit an Hypoalgesie bei Cannabinoid CB1 Rezeptor Knockout Mais. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1999;96: 5780-5785. [PMC gratis Artikel] [PubMed]