Endogeninis opioidų sukeltas neuroplastiškumas dopaminerginiams neuronams ventraliniame tegmental srityje veikia natūralų ir opiatų atlygį (2014)

PASTABOS: Geriausios DeltaFosB tyrimai mes dažnai cituojame visus dėmesį branduolys accumbens (atlygio centras) ir nustatė, kad seksas beveik neatitinka tų pačių smegenų mechanizmų kaip metas ir kokainas. Iš to paties tyrėjo reikšmingo tyrimo (Natūralių ir narkotikų apdovanojimų įstatymas dėl bendrų neuronų plastiškumo mechanizmų su ΔFosB kaip pagrindiniu tarpininku (2013)):

Taigi natūralūs ir vaistiniai atlygiai ne tik susilieja tame pačiame nerviniame kelyje, bet ir tame pačiame molekuliniame mediatoriuje ir greičiausiai tuose pačiuose „Nucleus Accumbens“ neuronuose, kad paveiktų abiejų rūšių atlygio skatinamąjį aiškumą ir „norą“.

Paimkite: metą, kokainą ir lytį visi daro tuos pačius pagrindinius dalykus, kaip ir tos pačios nervų ląstelės atlygio centre (branduolys accumbens), nesvarbu, ką jie gali daryti kitur kitur smegenyse. Tai panaikino įprastą kalbą, kad natūralūs atlygiai ir narkotikai skiriasi mechanizmais ir poveikiais.

Šis naujas tyrimas ištyrė, ką lytis daro VTA. VTA prasideda dopaminą gaminančios nervinės ląstelės - jos išsišakoja į branduolį accumbens, priekinę žievę ir migdolą. Iš esmės VTA yra daugumos mūsų dopamino šaltinis (šaltinis). Peržiūrėkite šias 2 atlygio grandinės nuotraukas: Pic1, Pic2

Mokslininkai nustatė, kad lytis (kulminacija) sukelia VTA ląstelių kūnus laikinai susitraukiant (vyrams). Ląstelių kūnai ir jų dendritai sudaro smegenų pilkosios medžiagos. Būtent tai priklauso nuo heroino priklausomybės nuo VTA (ne vieną kartą vartojant heroiną, bet lėtinis heroino vartojimas). Atkreipkite dėmesį, kad toks pats VTA ląstelių korpusų susitraukimas atsiranda žmogaus heroino narkomanams.

Lyties sukeltas ląstelių susitraukimas trunka mažiausiai 7 dienas. 30 dienomis lytiniai pokyčiai normalizavosi, tačiau mokslininkai įvertino tik 1, 7 ir 30 dienas.

Ląstelių kūnų susitraukimas priklausomybėje nuo heroino lemia mažesnį dopamino kiekį branduolyje accumbens - arba tai, ką mes vadiname desensibilizacija. Tyrėjai žiurkėms skyrė morfino, kad įvertintų jų atsaką (po lyties), tačiau nieko neįvyko. Paprastai žiurkėms labai patinka morfinas, tačiau čia jie buvo laikinai desensibilizuoti. Trumpai tariant, po ejakuliacijos žiurkių atlygio grandinė nereagavo į žemą heroino kiekį. Tyrėjai spėjo, kad norint sukelti „normalią“ žiurkių reakciją, reikės didesnių dozių.

Apibendrinant - seksas (laikinai) VTA daro tą patį, ką ir priklausomybė nuo heroino: dopaminą gaminančių nervinių ląstelių kūnų susitraukimas. Tai lemia mažesnį dopamino kiekį atlygio centre ir mažesnį reagavimą į narkotikus - o žiurkės smegenims atsigauti reikia mažiausiai 7 dienų.

 

J Neuroscience. 2014 Jun 25;34(26):8825-36. doi: 10.1523 / JNEUROSCI.0133-14.2014.

Krapai KK1, Coppens CM2, Beloate LN3, Fuller J2, Van S2, Frohmader KS2, Laviolette SR2, Lehman MN4, Coolen LM5.

Abstraktus

Natūralus atlygis ir piktnaudžiavimo narkotikai susilieja su mezolimbiniu keliu ir aktyvina bendrą nervų plastiškumo mechanizmą branduolyje. Lėtinis opiatų ekspozicija sukelia plastiškumą ventralinio aspiracinio ploto (VTA) dopaminerginiuose neuronuose, kurie reguliuoja morfino atlyginimų toleranciją.

Čia išbandome hipotezes, kad endogeninių opioidų sujungimas sukelia VTA dopamino ląstelių morfologinius pokyčius žiurkių patelėse, o tai savo ruožtu reguliuoja ilgalaikę seksualinės elgsenos stiprinimo patirtį.

Pirma, seksualinė patirtis sumažino VTA dopamino somo dydį 1 ir 7 dienas, bet ne 30 dienas po paskutinės poravimosi sesijos. Šis poveikis buvo blokuojamas naloksonu prieš kiekvieną poravimosi sesiją; taigi, VTA dopamino ląstelių plastiškumas priklausė nuo endogeninių opioidų poveikio.

Savo ruožtu VTA plastiškumas siejamas su pakeistu opiatų atlyginimu, nes lytiškai patyrę patinai nesukūrė sąlyginės 0.5 mg / kg morfino vietos pirmenybės.

Be to, buvo nustatyta, ar endogeninis opioidų poveikis tarpininkaujant naloksonui, sistemiškai arba VTA, yra tarpinis seksualinis atlygis ir atmintis. Naloksonas neužkerta kelio pradiniam patirties sukeltam lytinio elgesio palengvėjimui per kartotines poravimosi sesijas arba su sąlyga, kad pirmenybė teikiama poravimuisi. Tačiau gydymas naloksonu susilpnino ilgalaikę patirties sukeltos lytinės elgsenos ir nervų aktyvacijos palengvinimo ekspresiją mezolimbinėse vietovėse, kurias sukelia poravimosi sąlygojamos sąlygos..

Kartu šie duomenys rodo, kad endogeniniai opioidai poravimosi metu sukelia neuroninį plastiškumą VTA dopamino neuronuose, kurie atrodo labai svarbūs morfino atlyginimui ir ilgalaikiam atmintyje už natūralų atlygį.

 

Įvadas

Natūralaus atlygio elgesį skatina mezokortikolimbinė sistema (Meisel ir Mullins, 2006; Hoebel ir kt., 2009; Frohmader ir kt., 2010a; Pitchers ir kt., 2010a; Young et al., 2011; Blum ir kt., 2012). Piktnaudžiavimai narkotikais sukelia nervų pokyčius šioje sistemoje, o tai savo ruožtu prisideda prie piktnaudžiavimo narkotikais vystymosi ir išraiška (Hyman ir kt., 2006; „Nestler“, „2012“). Anksčiau mes nustatėme, kad patirtis, susijusi su natūralaus atlygio elgesiu, ty seksualine patirtimi žiurkių patinėlėmis, taip pat sukelia nervų plastiškumą branduolių accumbens (NAc), įskaitant padidėjusius dendritinius stuburus (Pitchers ir kt., 2010a) ir deltaFosB (Pitchers ir kt., 2013). Savo ruožtu šis lyties sukeltas plastiškumas yra labai svarbus seksualinės patirties poveikiui vėlesniam poravimuisi, pasireiškiantį seksualinio elgesio inicijavimo ir atlikimo palengvinimu (Pitchers ir kt., 2010b, 2012, 2013). Be to, lytinė patirtis keičia atsaką į psichostimuliatorius, įskaitant judrumo aktyvumo jautrumą ir padidintą atlygį (Frohmader ir kt., 2010a; Pitchers ir kt., 2010a, 2013).

NAc yra vienas iš dopaminerginių neuronų, esančių ventralinio tegmentalo srityje (VTA), pasroviui. VTA dopamino neuronai aktyvuojami poravimosi metu ir po sąlyčio su lytinio atlygio prognozuojamomis užuominomis (Balfour ir kt., 2004; Frohmader ir kt., 2010a) per endogeninį opioidinį peptidą (EOP), jungiantį prie μ-opioidinių receptorių (MOR; Matthews ir German, 1984; Johnson ir North, 1992; Klitenick ir kt., 1992; Ikemoto ir kt., 1997; Balfour ir kt., 2004). Vadinasi, sąlytis su lytiniu elgesiu prognozuojamomis kondicionuojamomis užuominomis sukelia EOP ir VTA dopamino ląstelių aktyvacijos paleidimą, kuris palengvina seksualinę motyvaciją (Mitchell ir Stewart, 1990; van Furth ir kt., 1995; van Furth ir van Ree, 1996) ir dopamino išsiskyrimą NAc (Fiorino ir kt., 1997).

Pakartotinis eksogeninių opiatų poveikis sukelia morfologinius VTA pokyčius (\ tMazei-Robison ir kt., 2011; Mazei-Robison ir Nestler, 2012), sumažėjęs VTA dopamino neuronų dydis (Sklair-Tavron ir kt., 1996; Spiga ir kt., 2003; Chu ir kt., 2007; Russo ir kt., 2007; Mazei-Robison ir kt., 2011), sumažėjęs neurofilamento baltymų kiekis (\ tBeitner-Johnson ir kt., 1992), padidėjęs dopamino ląstelių susijaudinimas ir sumažėjęs axoplazminis transportavimas ir dopamino išėjimas į NAc (Beitner-Johnson ir kt., 1992; Mazei-Robison ir kt., 2011). Šie VTA dopamino neuronų pokyčiai sukelia morfino atlygio toleranciją ir yra trumpalaikiai, nes jie išsklaidomi per mėnesį nuo vaisto abstinencijos (Russo ir kt., 2007). Šiuo metu neaišku, ar VTA dopamino neuronų plastiškumas yra unikalus opiatų poveikiui, arba jei jie taip pat gaminami išleidžiant EOP natūralaus atlygio elgesio metu.

Čia išbandome hipotezę, kad natūrali atlygio patirtis sukelia neuroplastiką, panašią į opiatų sukeltą neuroplastiką, ir todėl opiatai susilieja su plastiškumo mechanizmu, kuris yra svarbus natūraliam atlygio elgesiui ir atminimo atminimui. Mes tikriname, ar lytinė patirtis žiurkių patelėse sumažina VTA dopamino neuronų dydį per procesą, priklausantį nuo EOP veiksmų VTA. Be to, mes tiriame, ar EOP sukeltas VTA dopamino neuronų pakeitimas yra susijęs su natūralaus apdovanojimo elgesio stiprinimu ir skatinamojo dėmesio priskyrimu ženklams, susijusiems su natūraliu atlygiu, tuo pačiu sukeliant kryžminį toleranciją morfino atlygiui.

Medžiagos ir metodai

Gyvūnai

Suaugusiems vyrams Sprague-Dawley žiurkėms (200 – 225 g) buvo gauti iš Charles River ir visuose eksperimentuose jie laikomi poromis dirbtinai apšviestose patalpose 12 h šviesos / tamsos ciklo metu (10: 00 AM), išskyrus morfino tolerancijos eksperimentą , įsijungia 5: 00 PM). Maisto ir vandens buvo ad libitum išskyrus elgesio bandymus. Stimulio moterys buvo ovariektomizuotos ir implantuotos po oda su 5% 17-β-estradiolio benzoato SILASTIC kapsulėmis (1.98 mm vidinis skersmuo, 0.5 cm ilgis, Dow-Corning). Progesterono injekcijos (po oda, 500 μg 0.1 ml sezamo aliejaus) buvo skiriamos 3 – 6 h prieš tyrimą, kad sukeltų seksualinį imlumą. Visos procedūros buvo patvirtintos Vakarų Ontarijo universitete ir Mičigano universiteto Gyvūnų priežiūros komitetuose ir atitiko Kanados gyvūnų priežiūros tarybą ir Nacionalinius sveikatos institutus, kuriuose dalyvauja stuburiniai gyvūnai.

VTA dopamino somo dydžio pokyčiai

Dienos poravimosi sesijos.

Norint ištirti dopamino neurono somo dydžio pokyčius VTA, lytiškai patyrę ir naivūs gyvūnai buvo nužudyti 1, 7 arba 31 d (n = 5 – 8 vienoje grupėje) po paskutinės poravimosi (patyrimo) ar gydymo (naivus) dienos. Seksualiai patyrusios grupės buvo susietos su seksualiniu elgesiu per paskutinę poravimosi sesiją, taip pat bendras ejakuliacijų skaičius per penkias sesijas (kiekvienos grupės 5 vidurkis) ir nesiskyrė jokiu seksualinio elgesio parametru.

Poravimosi sesijos.

Seksualiai naivūs vyrai buvo priskirti vienai iš dviejų eksperimentinių sąlygų: lytiniu požiūriu naivus arba seksualiai patyręs. Seksualiai patyrę gyvūnai penkis kartus iš eilės buvo leista poruotis su imliomis moterimis stačiakampiais bandymų narvais (60 × 45 × 50 cm), kol bus rodoma ejakuliacija arba iki 1 h (priklausomai nuo to, kas įvyko anksčiau). Narvai buvo kruopščiai nuvalyti 70% etanolio tirpalu ir tarp poravimosi sesijų buvo pridėta šviežių patalynų. Seksualinis elgesys buvo vykdomas tamsoje fazėje (2 – 6 h po tamsos pradžios). Tik tie gyvūnai, kurie ejakuliavo ne mažiau kaip keturių iš penkių poravimosi sesijų metu, buvo laikomi seksualiniu patyrimu ir įtraukti į eksperimentus. Buvo stebimos visos poravimosi sesijos ir užregistruotas seksualinis elgesys. Įrenginių (M) skaičius (IM), prijungimo latentinis laikotarpis (ML; laikas nuo patekimo į moterį pradžios iki pirmojo kalno), vidinės latentinės latentijos (IL; laikas nuo moters įvedimo į pirmą intromiziją) ir ejakuliacijos latentinis laikas (EL; laikas nuo pirmojo įsiskverbimo iki ejakuliacijos) buvo \ tAgmo, 1997). Naivūs gyvūnai buvo patalpinti į švarų testą 1 h kartu su lytiniu būdu patyrusiais patinėliais, kurie poravosi toje pačioje patalpoje, todėl jie buvo veikiami tolimų moterų kvapų ir panašių trikdžių bei aplinkos naujovių, kaip patyrusių vyrų.

Imunofluorescencijos ženklinimas.

Gyvūnai buvo giliai anestezuoti naudojant natrio pentobarbitalį (270 mg / kg, ip) ir perfuzuoti intrakardialiai 50 ml 0.9% fiziologinio tirpalo, po to 500 ml 4% paraformaldehido 0.1 m natrio fosfato buferyje (PB). Smegenys buvo pašalintos ir po 1 h kambario temperatūroje (RT) užfiksuotos tame pačiame fiksatoriuje ir po to panardintos į 20% sacharozę ir 0.01% natrio azidą 0.1 m PB laikyti 4 ° C temperatūroje. Koroniniai pjūviai buvo nukirpti 35 μm temperatūroje užšalimo mikrotomoje (H400R, Microm) ir buvo surinkti į keturias lygiagrečias serijas krioprotekto tirpale (30% sacharozė, 30% etileno glikolis 0.1 m PB), po to laikomi 20 ° C temperatūroje. Visos inkubacijos buvo atliktos RT su švelniu maišymu ir dideliais skalavimais 0.1 m PBS, pH 7.35, tarp inkubacijų. Skyriai buvo veikiami 1% H2O2 10 min endogeninių peroksidazių sunaikinimui, tada užblokuotas 1 h inkubavimo tirpale (PBS +: PBS, turintis 0.4% Triton X-100; Sigma-Aldrich) ir 0.1% galvijų serumo albuminą (Jackson Immuno Research Laboratories). Toliau sekcijos buvo inkubuojamos per naktį RT RT pelės tirozino hidroksilazės (TH) antikūnuose (1: 20 000; Millipore). Po pirminio antikūnų inkubavimo, sekcijos buvo inkubuojamos AlexaFluor 555 konjuguotame ožkos anti-pelės antikūne (1: 100; Invitrogen, Eugene, OR) 30 min. Galiausiai, sekcijos buvo plaunamos 0.1 m PB, sumontuotos ant Superfrost Plus stiklinių stiklelių, išdžiovintos ir padengtos gelvatoliu, turinčiu anti-fading agentą 1,4-diazabiciklo (2,2) oktaną (DABCO; 50 mg / ml, Sigma-Aldrich; Lennette, 1978).

Duomenų analizė: neuronų somo dydis.

THT imunoreaktyviųjų (IR) neuronų vaizdai VTA buvo paimti 40 × padidinimu trimis rostriniais ir caudaliniais lygiais (Balfour ir kt., 2004). Skirtingų lygių ląstelių skirtumai nenustatyti. TH-IR neuronų soma dydis buvo išanalizuotas naudojant ImageJ (Nacionaliniai sveikatos institutai). Vidutinis plotas, perimetras ir apykaitumas buvo išmatuoti taip, kaip aprašyta Sklair-Tavron ir kt. (1996). Buvo tiriamas 25 ląstelių vidurkis vienam gyvūnui (kartu su visais 3 VTA lygiais) ir buvo įtrauktos tik ląstelės su aiškiai matomu branduoliu. Kiekvienam gyvūnui apskaičiuotas vidutinis plotas, perimetras ir apvalumas. Statistinei analizei naudota dvipusė ANOVA [veiksniai: seksualinė patirtis (lyties patyrimas ar sekso naivus) ir laikas (1, 7 arba 31 d)], po to post-hoc palyginimai naudojant „Holm – Sidak“ metodą, kurio reikšmingumo lygis yra 0.05.

VTA ne dopamino pokyčiai

Dvigubos pertraukos.

Norint patikrinti, ar seksualinė patirtis kasdienių poravimosi sesijų metu reikalinga mažinant TH-IR neuronų somo dydį, buvo analizuojami penkių dviejų savaičių poravimosi metu poruotų gyvūnų VTA dopamino neuronai. Poravimosi sesijos buvo tokios, kaip aprašyta aukščiau, bet per 2.5 savaičių laikotarpį. Po paskutinio poravimosi ar apdorojimo smegenys buvo surinktos 7 d.

Imunoperoksidazės ženklinimas.

Be to, buvo išbandyta, ar naudojant jautrius dažymo metodus su imunoperoksidaze ir chromogenų aptikimu, būtų galima vizualizuoti TH-IR dydžio pokyčius. Perfuzija ir audinių apdorojimas buvo elgesys, kaip aprašyta aukščiau. Po gydymo 1% H2O2 ir PBS +, sekcijos buvo inkubuojamos per naktį RT esant pelės polikloniniam tirozino hidroksilazės (TH) -antikūnui (1: 20 000; Millipore). Po pirminio antikūnų inkubavimo sekcijos buvo inkubuojamos su biotino konjuguotu ožkų anti-triušio IgG (1 h, 1: 500 PBS +; Vector Laboratories), avidin-biotino-krienų peroksidaze (1 h, ABC elitas; 1: 1 000 PBS Ir „3,3'-diaminobenzidino tetrahidrochlorido (10 min, 0.02%, DAB; Sigma-Aldrich), sustiprintos nikelio sulfatu (0.02% 0.1 m PB) su vandenilio peroksidu (0.015%). Sekcijos buvo kruopščiai plaunamos 0.1 m PB, kad būtų nutraukta reakcija ir sumontuota ant koduotos Superfrost plius stiklinės plokštelės (Fisher) su 0.3% želatina ddH2O. Po dehidratacijos visos skaidrės buvo padengtos DPX laikikliu (dibutilftalato ksilenu; Sigma-Aldrich).

Duomenų analizė: neuronų somo dydis.

TH-IR ląstelių plotas, perimetras ir apskritimas buvo analizuojami kaip aprašyta aukščiau. Be to, išanalizuotos TH-IR ląstelės, esančios pagrindinėje nigroje (SN), tuose pačiuose skyriuose, kurie buvo naudojami VTA TH-IR ląstelių analizei. Galiausiai, atlikus VTA ir SN TH-IR ląstelių analizę, pjūviai buvo priešpriešiniai, naudojant krezilio violetinę, ir ne-TH-IR ląstelės buvo analizuojamos tais pačiais metodais, kaip aprašyta aukščiau. Skirtumai tarp naivių ir patyrusių grupių buvo lyginami naudojant dvipusę studentų grupę t 0.05 reikšmingumo testai.

Naloksono poveikis patirties sukeltam dopamino somo dydžio sumažėjimui

Norint nustatyti, ar MOR suvaidino vaidmenį seksualinės patirties sukeltuose dopamino neuronų somo dydžio pokyčiuose, seksualinio elgesio metu MOR buvo užblokuotas. Pusė gyvūnų gavo seksualinę patirtį, o kita pusė buvo tvarkoma, bet lytiniu požiūriu buvo naivus. Seksualiai patyrusiems gyvūnams buvo leista poruotis 5 dienas iš eilės. Lytiškai patyrusių ir negydytų grupių gyvūnams prieš pat moterį (patyrę) arba prieš gydymą buvo gydomi neselektyvus MOR antagonistas naloksonas (10 mg / kg, Sigma-Aldrich, ištirpintas 0.9% fiziologiniame tirpale) arba fiziologinis tirpalas 30. (naivus); taip sukuriant keturias eksperimentines grupes: seksualiai naivus fiziologinis tirpalas (Naive Sal), seksualiai naivus naloksonas (Naive NLX), lytiniu būdu patyręs fiziologinis tirpalas (Exp Sal) ir seksualiai patyręs naloksonas (Exp NLX; n = 5 – 8 grupėje). Gydymas naloksonu neturėjo statistiškai reikšmingo poveikio nė vienam seksualinio elgesio parametrui, bet kuriam 5 d, o naloksono ir druskos tirpalu gydytos grupės buvo identiškos seksualinės patirties atžvilgiu. Visi gyvūnai buvo nužudyti per intrakardinę perfuziją 7 d po paskutinės poravimosi sesijos. Skirstymas, imunohistochemija ir duomenų analizė (dvipusis ANOVA; veiksniai: sekso patirtis ir gydymas vaistais) buvo atlikti kaip aprašyta aukščiau.

Morfino sąlygota vieta

Eksperimentinis dizainas.

Anksčiau Russo ir kt. (2007) parodė, kad lėtinis morfinas skatina toleranciją morfino atlyginimui. Kadangi seksualinė patirtis ir lėtinis morfinas VTA panašiai sumažina dopamino neuronų soma dydį, lyties sukeltų morfologinių pokyčių funkcinė reikšmė buvo ištirta dėl morfino atlygio. Seksualiai patyrę ir naivūs gyvūnai buvo suskirstyti į šešias skirtingas eksperimentines grupes (n = 9 – 13 vienoje grupėje), remiantis seksualiniu elgesiu (lytiškai naivus arba patyręs) ir morfino doze (0.5, 5.0 arba 10.0 mg / kg, ip) ir buvo išbandyti morfino sukeltos sąlyginės vietovės parinkties (CPP).

Morfinas-CPP.

Kondicionavimas įvyko 1 d po paskutinės poravimosi sesijos ir grupės buvo susietos su seksualiniu pasirodymu per paskutinę poravimosi sesiją. Naudota CPP paradigma susideda iš pretestų, kondicionavimo dienų ir po bandymo, o aparatas buvo pagrįstas Tenk et al. (2009). Trumpai tariant, CPP aparatą (MED Associates) sudarė trys skirtingos kameros. Tarp kiekvieno seanso aparatas buvo kruopščiai išvalytas 70% etanolio tirpalu, kad būtų kuo mažiau užsitęsusių uoslės ženklų. Norint nustatyti individualius pageidavimus, buvo atliktas išankstinis testas, kurio metu gyvūnams 15 minučių buvo suteikta nemokama prieiga prie viso aparato. Gyvūnai, kaip grupė, neparodė reikšmingos pirmenybės konkrečiai kamerai, tačiau kiekvienas atskiras gyvūnas turėjo šiek tiek pirmenybę. Žiurkės, kurios išankstinio testavimo metu pirmenybę teikė vienai iš kamerų (> 200 s skirtumas tarp kiekvienoje kameroje praleisto laiko; <5% gyvūnų), nebuvo įtrauktos į tyrimą. Kondicionavimo metu vaistas buvo suporuotas su iš pradžių pageidaujama arba nerekomenduojama kamera, naudojant nešališką paradigmą (Tzschentke, 2007) ir gyvūnai apsiribojo 30 min. Gyvūnai buvo suleidžiami fiziologiniu tirpalu (ip) ryte (9: 00 AM į 12: 00 PM) ir apsiribojo suporuota druskos kamera (kontrolė). Po pietų (1: 00 – 4: 00 PM) gyvūnai buvo suleisti morfinu (ip, 0.5 mg / kg, 5.0 mg / kg arba 10.0 mg / kg; morfino sulfatas ištirpintas 0.9% fiziologiniame tirpale, Johnson Matthey) ir uždarytas į morfino suporuotą kamerą. Gyvūnams buvo atliktos dvi kondicionavimo dienos. Kitą dieną (3 d po paskutinės poravimosi dienos) buvo atliktas post testas, procesiškai identiškas pretestui. Statistinei analizei atlikti po bandymo morfino poroje susikaupusioje kameroje praleistas laikas buvo lyginamas su laiko, praleisto sūrymu suporuotoje kameroje po seksualiai naivių ar patyrusių vyrų per kiekvieną dozę, naudojant porą. t testas. p <0.05 buvo laikoma statistiškai reikšminga. Papildomos kontrolinės seksualiai naivių ir patyrusių gyvūnų grupės gavo fiziologinį tirpalą tiek suporuotose, tiek neporinėse kamerose, kad galėtų būti neigiamos kontrolinės. Abiejų grupių metu praleistų laiko skirtumas tarp kamerų nenustatytas.

Sisteminio naloksono poveikis patirties sukeltam lytinio elgesio palengvinimui

Eksperimentinis dizainas.

Seksualinė patirtis leidžia palengvinti seksualinį elgesį, kuris palaikomas mažiausiai 1 mėnesį (Pitchers ir kt., 2012). Norint išanalizuoti MOR blokavimo įtaką patirties sukeltam lytinio elgesio palengvinimui, lytiniu būdu patyrę gyvūnai prieš penkias iš eilės poravimosi sesijas gavo arba naloksoną, arba fiziologinį tirpalą.n = 12 kiekvienas), kaip aprašyta aukščiau. Vieną savaitę po paskutinės poravimosi sesijos buvo atliktas galutinis poravimosi bandymas, kurio metu visiems gyvūnams buvo leista mate iki vieno ejakuliacijos arba iki 1 h. Galutinis naloksono ar fiziologinio tirpalo gydymas nebuvo atliktas prieš poravimą paskutinę bandymo dieną. Buvo lyginami poravimosi parametrai, siekiant nustatyti, ar naloksonas paveikė abiejų lyčių patirties sukeltą poravimosi palengvinimą (1 diena prieš 5 dieną), ar palengvino šį palengvinimą (5 diena prieš testą), naudojant dvipusį ANOVA [veiksniai: gydymas (fiziologinis tirpalas prieš naloksoną) ) ir dienos (dienos 1, dienos 5 arba bandymo) ir Holm-Sidak metodas post-hoc palyginimus. Visiems statistiniams tyrimams, p <0.05 buvo laikoma statistiškai reikšminga.

Papildomi kontroliniai eksperimentai

Sisteminė naloksonas bandymo dieną.

Norint parodyti, kad pasikeitęs seksualinis elgesys paskutinėje poravimosi bandymo dieną nebuvo naloksono nebuvimas, galutinis poravimosi bandymo dieną mes tiekėme naloksoną arba fiziologinį tirpalą gyvūnams, kurie poravosi su naloksonu, kol jie įgijo seksualinę patirtį. Konkrečiai, visi gyvūnai buvo suleidžiami naloksonu (10 mg / kg, sc) 30 min. Prieš poravimąsi į vieną ejakuliaciją per 5 dienas iš eilės. 7 d bandymo dieną maždaug pusė gyvūnų gavo naloksono injekciją (10 mg / kg, \ t n = 7) arba fiziologinis tirpalas (n = 6) 30 min. Prieš įvedant imlią moterį. Buvo stebimas ir užregistruotas seksualinis elgesys. Buvo lyginami poravimosi parametrai, siekiant nustatyti, ar naloksonas paveikė abiejų lyčių patirties sukeltą poravimosi palengvinimą (1 diena prieš 5 dieną), ar palengvino šį palengvinimą (5 diena prieš testą), naudojant dvipusį ANOVA [veiksniai: gydymas (fiziologinis tirpalas prieš naloksoną) ) ir dieną (1 diena, 5 diena arba testas)] ir Holm-Sidak metodą post-hoc palyginimus. Visiems statistiniams tyrimams, p <5% buvo laikoma statistiškai reikšminga.

Naloksono poveikis trumpalaikiam palengvinto seksualinio elgesio reiškimui.

Naloksono (10 mg / kg, sc) gydymo poveikis poravimosi metu buvo ištirtas vėlesniam seksualiniam elgesiui per paskutinį poravimosi bandymo dieną, kuri buvo atlikta tik po 1 d po paskutinio poravimosi (druskos tirpalas). n = 5; naloksonas, n = 4).

Sisteminis naloksono apdorojimas.

Norint nustatyti, ar pakartotinis gydymas vien tik naloksonu sukelia lytinio elgesio sutrikimą 7 d po paskutinio gydymo, lytiškai naivūs gyvūnai gavo penkias dienas naloksono (10 mg / kg, sc) arba fiziologinio tirpalo injekcijas iš eilės prieš poravimosi testą 7 d po galutinio naloksono arba fiziologiniu tirpalu. Šioje paskutinėje bandymo dieną gyvūnai nebuvo injekuoti. Seksualinis elgesys buvo stebimas ir užregistruotas kaip aprašyta aukščiau. Poravimosi parametrai buvo lyginami tarp grupių, naudojant nesusijusius t bandymai. Visiems statistiniams tyrimams, p <5% buvo laikoma statistiškai reikšminga.

Sisteminis naloksono ir lyties atlygis.

Viena iš galimybių, leidžiančių sumažinti naloksono poveikį lengvinančio seksualinio elgesio palaikymui, yra ta, kad naloksonas blokuoja malonų seksualinio elgesio poveikį. Norint patikrinti šią galimybę, vyrams, neturintiems išankstinės seksualinės patirties, buvo atlikta CPP seksualinio elgesio paradigma iškart po naloksono ar fiziologinio tirpalo injekcijos. CPP procedūra buvo panaši į aukščiau aprašytą morfino-CPP, įskaitant prieš bandymą, kondicionavimo dienas ir po tyrimo.

Lytinis elgesys buvo susietas su pradiniu nepripažintu kameru. Priešingai, kiekvienas gyvūnas gavo naloksono injekciją (n = 12) arba fiziologinis tirpalas (n = 11) 30 min prieš priimant prieigą prie imlios moters. Vidutinė poravimosi trukmė buvo ∼13 min. Vieną minutę po ejakuliacijos gyvūnas buvo patalpintas į porinę kamerą 30 min. Kitą kondicionavimo dieną gyvūnai suleido arba naloksoną, arba fiziologinį tirpalą (priklausomai nuo to, kas jie buvo gauti prieš poravimą), ir buvo patalpinti į nesuporuotą kamerą 30 min. Po to buvo atliktas post testas, identiškas pretestui. Norint nustatyti kameros pasirinkimą, buvo lyginamas laikas, praleistas poroje, atliekant bandymą ir po bandymo. Statistinei analizei suporuoti t testai buvo naudojami siekiant palyginti pirmenybės ir skirtumo balus ir laiką poroje susietoje kameroje per testą ir po bandymo, siekiant nustatyti, ar seksualiniam elgesiui buvo suformuotas reikšmingas CPP. p <0.05 buvo laikoma reikšminga.

VAL naloksono poveikis patirties sukeltam lytinio elgesio palengvinimui

Eksperimentinis dizainas.

Siekiant nustatyti, ar EOP veiksmai konkrečiai VTA buvo atsakingi už seksualinės patirties sukeltų pokyčių seksualinį elgesį poveikį, prieš penkias kasdienes poravimosi sesijas gyvūnai buvo suleidžiami vietinėje naloksono ar fiziologinio tirpalo infuzijoje. Elgesio paradigma buvo panaši į sisteminį naloksono eksperimentą. Seksualiai patyrę gyvūnai 5 metu iš eilės buvo leista poruotis iki vienos ejakuliacijos arba iki 1 h. Praėjus penkiolikai minučių prieš imantis moteriškos lyties patinų, žiurkių patelės gavo dvišales infuzijas arba su naloksonu (10 μg / μl vienam pusrutuliui; 0.5 μl tūrio; Dvišalės mikroinjekcijos buvo naudojamos 0.9 μl / min srauto greičiu per 0.5 min intervalą, o po to - papildomą 0.5 min. Po to injekcijos kanulė buvo pakeista manekeno kanalu ir dulkių dangteliu. Vieną savaitę po paskutinės poravimosi dienos (bandymo diena) visi gyvūnai dar kartą sujungė į ejakuliaciją be naloksono ar fiziologinio tirpalo infuzijos. 3 pavA apibūdina eksperimentinį projektą. Duomenų analizė atlikta kaip aprašyta sisteminiame naloksono eksperimente.

Cannulation chirurgija.

Vyriškos žiurkės buvo anestezuotos intraperitoninės injekcijos (0.1 ml / kg) ketamino (0.87 mg / ml) ir ksilazino (0.13 mg / ml) ir įdedamos į stereotaksinį aparatą (Kopf Instruments). Dvišaliai 21 gabaritiniai kreiptuvai (Plastics One) buvo nuleisti per smulkias gręžines kaukolėje į smegenis link VTA prie –4.8 mm AP, ± 0.75 mm ML iš bregmos ir −7.8 mm DV nuo kaukolės viršaus pagal Paxinos ir Watson (2013). Kanalai buvo pritvirtinti dantų akrilais, kurie prilipo prie trijų varžtų, nustatytų į kaukolę. Gyvūnams buvo suteiktas 2 savaitės atsigavimo laikotarpis, ir jie buvo kasdien gydomi elgsenos testavimo metu naudojamoms tvarkymo ir injekcijos procedūroms.

„Cannula“ paskirties vietos patikra.

Kanulių išdėstymas buvo ištirtas, naudojant TH-imuninę spalvą, siekiant patvirtinti, kad VTA buvo tiksliai nukreipta. Į tyrimus buvo įtraukti tik tinkamos paskirties gyvūnai (galutiniai grupės dydžiai: patyręs fiziologinis tirpalas n = 8; patyrė naloksono n = 6). Trys papildomi gyvūnai, kurie gavo VTA-naloksono injekcijas, esančias už VTA ribų, buvo sugrupuoti į „praleistą“ injekcijos grupę. Praleista grupė buvo analizuojama atskirai, kad būtų naudojama kaip anatominė kontrolė ir Mann-Whitney U bandymas buvo atliktas siekiant palyginti elgesį galutinėje bandymo dieną su naloksonu ir su fiziologiniu tirpalu gydytiems patyrusiems vyrams.

Susijęs kontekstinio cue-indukuoto pERK išraiška

Eksperimentinis dizainas.

Įrodyta, kad narvelio, kuriame vyrai įgijo poravimosi patirtį, poveikis MTA aktyvumui VTA ir nervų aktyvumui VTA ir NAc (Balfour ir kt., 2004). Taigi poravimosi aplinka tarnauja kaip sąlyginis lytinis atlygis. Dabartinis tyrimas ištyrė, ar reikalingas MOR aktyvinimas seksualinės patirties metu, kad būtų galima atlikti vėlesnį kondicionuojamą cue'o sukeltą nervų aktyvavimą. Naloksonas arba fiziologinis tirpalas buvo sistemingai (ip) 30 min prieš įdedant į poravimosi areną ir imtinai moteriai poravimuisi (patyrusiems) arba prieš kontrolinį manipuliavimą, kurį sudarė įterpimas į tvarkymo narvelį be moters pristatymo (neutrali aplinka, naivus). Taigi buvo sukurtos keturios eksperimentinės grupės: Naive Sal, Naive NLX, Exp Sal ​​ir Exp NLX. Praėjus savaitei po paskutinės poravimosi sesijos, pusė kiekvienos grupės gyvūnų buvo veikiami poravimosi narve („Exp male“: su lytimi susiję sąlyginiai ženklai) arba elgesys su narve (naivūs vyrai: netinkami / neutralūs ženklai), o kita pusė nebuvo veikiama bet kokie užrašai ir vietoj jų liko namų narvuose (siekiant nustatyti pradinę PERK išraišką). Ši eksperimentinė paradigma sukūrė 8 grupes: „Naive Sal-No Cue“, „Naive Sal + Cue“, „Naive NLX-No Cue“, „Naive NLX + Cue“, „Exp Sal-No Cue“, „Exp Sal“ + „Cue“, „Exp NLX-No Cue“, „Exp NLX + Cue“ (n = 4, išskyrus Naive NLX-No Cue, n = 3). Gyvūnai buvo perfuzuoti 10 – 15 min. Kontroliniai gyvūnai buvo pašalinti iš jų naminių narvų ir tuo pat metu perfuzuoti.

Imunohistochemija.

Sekcijos ir imunohistochemija buvo atliekamos, kaip aprašyta aukščiau. Čia panaudojome triušio polikloninį antikūną prieš p42 ir p44 MAP kinazes ERK1 ir ERK2 (pERK; 1: 4 000; Cell Signaling Technology). Pirminis antikūnas yra plačiai apibūdintas literatūroje (Roux ir Blenis, 2004; Murphy ir Blenis, 2006; Frohmader ir kt., 2010b). Be to, pirminio antikūno praleidimas neleido visoms imunoreaktyvumo ir Western blot analizės žiurkių smegenų audiniuose atskleidė dvi juostas, atitinkančias atitinkamus molekulinius svorius.

Duomenų analizė.

pERK-imunoreaktyviosios (-IR) ląstelės buvo skaičiuojamos daugelyje smegenų regionų, naudojant kameros lucida piešimo vamzdelį, pritvirtintą prie "Leica" DMRD mikroskopas: NAc [šerdis (C) ir apvalkalas (S); 400 × 600 μm; medialinė prefrontinė žievė; mPFC; priekinė cingulinė zona (ACA); prelimbinė žievė (PL); infralimbinė žievė (IL); 600 × 800 μm kiekvienas], caudate – putamen (CP; 800 × 800 μm) ir bazolaterinė amygdala (BLA; 900 × 1200 μm; Balfour ir kt., 2004; Frohmader ir kt., 2010b; Pitchers ir kt., 2010b). Dvi sekcijos buvo suskaičiuotos į smegenų sritį, o ląstelių skaičius standartinėse analizės srityse buvo apskaičiuotas kaip ląstelių skaičius milimetre2. Skaičiuojant grupes, du skaičiai buvo apskaičiuoti vienam gyvūnui. Grupės vidurkiai seksualiai patyrusiose ar naivinėse grupėse buvo lyginami naudojant dvipusį ANOVA [veiksniai: narkotikų gydymas (NLX arba Sal) ir cue (cue arba no cue)], po to post-hoc palyginimai naudojant Holm – Sidak arba Mann – Whitney sumos testus, jei reikia, reikšmingumo lygiu p <0.05. NAc lytiškai patyrusių gyvūnų apvalkale buvo stipri veiksnių reikšmingumo tendencija, todėl buvo atlikti poriniai palyginimai, kad būtų palygintos tik fiziologinio tirpalo (Sal-No Cue) ir druskos lašo (Sal + Cue) grupės.

Vaizdai.

Skaitmeniniai vaizdai buvo užfiksuoti naudojant CCD kamerą (Macrofire, Optronics), prijungtą prie a "Leica" mikroskopas (DM5000B) su fiksuotais fotoaparato nustatymais. Vaizdai buvo importuoti į „Adobe Photoshop 9.0“ programinę įrangą. Vaizdai nekeičiami, išskyrus ryškumo ir kontrasto koregavimą.

Rezultatai

Sekso patirties sukeltos VTA dopamino ląstelių pokyčiai

Seksualinė patirtis sumažino VTA dopamino somo dydį (Pav 1A – C). Seksualinė patirtis žymiai sumažino VTA TH-IR ląstelių somo plotą ir perimetrą (plotas: F(1,31) = 23.068, p <0.001; perimetras, F(1,31) = 18.225, p <0.001). Taip pat buvo pagrindinis reikšmingas laiko poveikis (plotas: F(2,31) = 6.377, p = 0.005; perimetras, F(2,31) = 4.389, p = 0.021) ir reikšminga sąveika tarp patirties ir laiko (plotas: F(2,31) = 5.284, p = 0.011; perimetras, F(2,31) = 4.347, p = 0.022). Lygiagrečiai palyginus nustatyta, kad TH-IR ląstelių plotas ir perimetras žymiai sumažėjo 1 ir 7 d po paskutinės lytinės elgsenos su lytiniu keliu patirtais gyvūnais dienos, palyginti su seksualiniu požiūriu naivių kontrolinių tyrimų metu [Pav 1B, plotas: p = 0.002 (1 d), p <0.001 (7 d); C, perimetras: p = 0.009 (1 d), p <0.001 (7 d)]. Seksualinio elgesio poveikis išsisklaidė, kai po to sekė atlygio susilaikymo laikotarpis, kai po paskutinės poravimosi sesijos TH-IR neuronų somos dydis grįžo į pradinį lygį 31 d. (Pav 1B, plotas: p = 0.798; C, perimetras: p = 0.785). Sekso patirties sukeltas keitimas nebuvo aptinkamas nė viename iš laiko taškų (Pav 1D). VTA dopamino somo dydžio sumažinimas nepriklausė nuo kasdienių poravimosi sesijų, nes poravimosi patirtis per penkias savaites trukusias poravimosi sesijas taip pat sumažino VTA dopamino somo dydį (Pav 2A,B, E – H, plotas: p = 0.004; perimetras: p <0.001). Priešingai, sekso patirtis neturėjo įtakos TH-IR somos dydžiui pamatinėje nigroje (Pav 2C, I – J, plotas: p = 0.13; perimetras: p = 0.16), taip pat nepakeistas somo dydis netoliese esančiuose VTA ne TH-IR neuronuose (Pav 2D, E – H, plotas: p = 0.46; perimetras: p = 0.45).

1 pav. 

Endogeniniai opioidų sukeltos VTA dopamino neuronų somo dydžio pokyčiai. A, Reprezentatyvūs VTA dopamino neuronų vaizdai iš seksualiai naivių ir patyrusių gyvūnų, rodantys, kad sumažėjo soma dydis 7 d po paskutinės poravimosi sesijos. Skalės juosta, 5 μm. Kiekybiniai duomenys, rodantys, kad seksualinė patirtis („Exp“, „juodosios juostos“) žymiai sumažino plotą (B; μm2) ir perimetrą (C; μm) VTA dopamino ląstelių, 1 d (Naive, Exp; n = 6) ir 7 d (Naive, n = 5; Exp, n = 6), bet ne 31 d (Naive, n = 6; Exp, n = 8) po paskutinio poravimosi, lyginant su seksualiai naiviais kontroliniais preparatais (Naivus, baltos juostos). Patirtų vyrų plotas buvo sumažintas iki 84%, palyginti su naiviu 1 arba 7 d. Patirtose grupėse perimetras buvo sumažintas iki 91.6 ir 90%, palyginti su 1 ir 7 d resp. Cirkuliacijai įtakos neturėjo (D). Šis dopamino ląstelių plastiškumas plote (E) ir perimetrą (F) buvo užkirstas kelias naloksonui (NLX, n = 8), bet ne fiziologinis tirpalas (Sal, n = 7) gydymas poravimosi metu, 7 d po paskutinės poravimosi sesijos, lyginant su lytiniu požiūriu naiviu gydymu (Sal, n = 5; NLX, n = 6). Duomenys reiškia vidurkį ± SEM; * žymi reikšmingą skirtumą, palyginti su tos pačios dienos seksualiniu požiūriu naiviuoju kontroliu.B, C) arba lyginant su fiziologiniu tirpalu gydomomis lytiškai naivomis kontrolėmis ir naloksonu gydomais lytiškai patyrusiais \ tE, F).

2 pav. 

Seksualinė patirtis nesumažino soma dydžio in vitro nigros dopamino neuronuose arba VTA neondopamino neuronuose. VTA TH-IR neuronų soma sritisA; μm2) ir perimetrą (B; μm) lytiškai naiviems (baltiems) ir patyrusiems (juodiems) gyvūnams, kurie įgijo patirties poravimu du kartus per savaitę, o ne iš eilės. Substantia nigra TH-IR soma sritisC) ir VTA ne TH-IR soma sritis (D) lytiškai naiviems (baltiems) ir patyrusiems (juodiems) gyvūnams. Duomenys reiškia vidurkį ± SEM; * žymi reikšmingą skirtumą, lyginant su seksualiai naiviais kontroliniais vaistais. Reprezentatyvūs vaizdai, rodantys TH-IR (rudos) neuronus seksualiai naivi VTA (E) ir patyrė (F) vyrai. G, H, Aukštesnis didinimo vaizdas, rodomas rodyklėje E ir F atitinkamai. Nissl dažyti neuronai šiuose vaizduose yra parodyti mėlynai. Reprezentatyvūs vaizdai, rodantys seksualiai naivus SN-IR neuronus (I) ir patyrę (J) vyrai. Skalės juostos: E-J, 20 μm.

Lytinės patirties sukeltas VTA dopamino neuronų soma dydžio sumažėjimas priklauso nuo opioidų receptorių aktyvacijos

Seksualinės patirties sukeltą VTA dopamino neurono somo dydžio sumažėjimą blokavo neselektyvus MOR antagonistas naloksonas, vartojamas prieš kiekvieną poravimosi sesiją. Naloksono gydymas prieš poravimosi sesijas turėjo didelį poveikį plotui (F(1,22) = 4.738, p = 0.041) ir nukreipta link reikšmingo poveikio perimetrui (F(1,22) = 2.892, p = 0.052). Didelė sąveika tarp patirties ir gydymo naloksonu buvo nustatyta teritorijai (F(1,22) = 5.578, p = 0.027) ir perimetrą (F(1,22) = 8.167, p = 0.009). Lygiagretūs palyginimai parodė, kad seksualinė patirtis su fiziologiniu tirpalu gydomais gyvūnais žymiai sumažino VTA dopamino neuronų 7 d plotą ir perimetrą po paskutinės poravimosi sesijos, lyginant su druskos būdu gydomais seksualiai naiviais vyrais (Pav 1E, plotas: p = 0.018; F, perimetras: p = 0.007). Priešingai, lytiškai patyrę naloksono gydyti gyvūnai nesiskyrė nuo naloksono gydytų naivų (Pav 1E, plotas: p = 0.483; F, perimetras: p = 0.330). Be to, lyginant su patyrusiais naloksono gyvūnais, patyrė druskingų gyvūnų soma dydis buvo žymiai sumažėjęs.Pav 1E, plotas: p = 0.002; F, perimetras: p = 0.002). Šis naloksono poveikis buvo specifinis seksualinei patirčiai, nes gydymas vien tik naloksonu neturėjo įtakos TH-IR ląstelių somo dydžiui lytiniu požiūriu naiviems naloksono gydomiems vyrams, lyginant su gydymu fiziologiniu tirpalu (Pav 1E,F). Be to, šis naloksono poveikis dėl patirties sukeltos somo dydžio sumažėjimo nebuvo dėl naloksono poveikio seksualiniam elgesiui, nes poravimosi elgesys gerokai nesiskyrė tarp naloksono ir druskos tirpių gydytų vyrų, išskyrus ilgesnį laiką pradėti poravimą po ejakuliacijos (po ejakuliacijos intervalo) gydytiems vyrams, gydytiems naloksonu, pirmos ir penktosios poravimosi \ tp = 0.03 ir p = 0.004, atitinkamai). Kiekvieno iš penkių poravimosi sesijų metu su druskos ir naloksono apdorotais vyrais kopijuojamos į ejakuliaciją.

Seksualinės patirties sukelta morfino atlyginimų tolerancija

Seksualinės patirties poveikis VTA dopamino somo dydžiui, veikiant EOP VTA, yra panašus į tas, apie kurias pranešta dėl egzogeninių opiatų (Sklair-Tavron ir kt., 1996; Russo ir kt., 2007). Todėl buvo išbandyta, ar natūralus atlygio sukeltas VTA dopamino ląstelių plastiškumas turi įtakos opiatų morfino naudai. Iš tiesų, seksualinė patirtis sukėlė morfino atlygio toleranciją, panašią į lėtinių opiatų poveikį.Russo ir kt., 2007). Lytiškai patyrę vyrai nesukūrė 0.5 mg / kg morfino dozės CPP; kadangi lytiškai naivūs vyrai sudarė šios dozės CPP, kaip parodė, kad po bandymo su morfino poromis susieta kamera praleidžia daugiau laiko.Pav 3; p = 0.039). Ir seksualiai naivios, ir patyrusios grupės morfino pora kameroje praleido žymiai daugiau laiko, lyginant su sūrymu suporuota kamera su didesnėmis morfino dozėmis: 5.0 mg / kg (Pav 3; Naivus: p = 0.029; Exp: p 0.012) ir 10.0 mg / kg (Pav 3; Naivus: p <0.001; Tinka iki: p = 0.002).

3 pav. 

Lytinės patirties poveikis morfino atlygiui. Laikas, praleistas fiziologiniu tirpalu (Sal) arba morfine poroje (Mor; 0.5, 5 arba 10 mg / kg kūno svorio) po seksualiai naivus po bandymo (Naive, n = 10 – 13) arba patyrė (Exp, n = 9 – 13). Duomenys pateikiami kaip vidurkis ± SEM; * žymi reikšmingą skirtumą, lyginant su saliu suporuota kamera tame pačiame gyvūne. NS, Ne reikšminga.

Sekso patirties sukeltas palengvinimas poravimosi elgsenoje priklauso nuo opioidų receptorių aktyvacijos

Iki šiol gautos išvados rodo, kad EOP, veikiantis VTA per 5 kasdienę trumpą poravimosi sesiją, sukelia VTA dopamino neuronų plastiškumą, kuris yra panašus į lėtinio morfino ar heroino savarankiško vartojimo poveikį.Russo ir kt., 2007; Mazei-Robison ir kt., 2011). Mes įtarėme, kad VTA dopamino somo dydžio sumažinimas yra labai svarbus už atlygį mokantis ir ypač seksualinės patirties sukeltam lytinio elgesio palengvinimui motyvacijos ir veikimo požiūriu. Ši hipotezė buvo išbandyta blokuojant MOR naudojant naloksoną poravimosi metu ir išnagrinėjus poveikį lytinio elgesio, kurį sukėlė seksualinė patirtis, palengvinimui per penkias kasdienes poravimosi sesijas. Duomenys pateikiami 4 pav tik pirmojo ir penktojo poravimosi sesijoms, nes tai yra duomenys, geriausiai atspindintys patirties sukeltą poravimosi elgesio palengvinimą. Be to, ilgalaikis naloksono gydymo poveikis poravimosi sesijų metu yra išbandytas, siekiant išlaikyti patirties sukeltą poravimosi elgesio palengvinimą per paskutinį poravimosi testą 1 savaitę. 4 pavA rodo eksperimentinį dizainą. Buvo reikšmingas pagrindinis poravimosi poveikis visiems lyties elgesio parametrams (kalno latentinis laikotarpis: F(2,55) = 11.286, p <0.001; intromisijos vėlavimas: F(2,55) = 8.767, p <0.001; ejakuliacijos latencija: F(2,55) = 10.368, p <0.001) ir naloksono gydymas latentiniais laikais (F(1,55) = 6.585, p = 0.013) ir intromission (F(1,55) = 7.863, p = 0.007). Lygiagretūs palyginimai parodė, kad gydymas naloksonu pirmojo poravimosi metu paveikė seksualinį elgesį, nes naloksono gyvūnai turėjo žymiai ilgesnes latentines savybes iki pirmojo kalno (p = 0.002) ir intromission (p = 0.002), lyginant su fiziologinio tirpalo kontrolėmis pirmąją poravimosi dieną. Šis naloksono poveikis pradiniam lytiniam elgesiui buvo sumažintas seksualinės patirties ir nepastebėta nė vieno iš vėlesnių poravimosi sesijų metu (Lentelė 1). Be to, naloksono vartojimas prieš kiekvieną iš penkių poravimosi sesijų neužkerta kelio seksualinei elgsenai su lytiniu elgesiu. Suderinus su stiprėjančiu seksualinės patirties poveikiu, su fiziologiniu tirpalu gydyti vyrai parodė sumažėjusias latentines lytes (Pav 4B; p = 0.032) intromizija (Pav 4C; p = 0.033) ir ejakuliacija (Pav 4D; p <0.001) penktojo poravimosi seanso metu, palyginti su pirmuoju poravimosi seansu, kuris parodė seksualinio elgesio palengvėjimą. Panašiai naloksonu gydytiems vyrams latentai buvo žymiai trumpesni (Pav 4B; p <0.001), intromisija (Pav 4C; p <0.001) ir ejakuliacija (Pav 4D; p = 0.017) penktą kartą, palyginti su pirmąja diena. Be to, penktoje poravimosi sesijoje naloksono gydyti patinai nesiskyrė nuo fiziologinio tirpalo kontrolinių rodiklių nė vienoje latentoje.

4 pav. 

Endogeniniai opioidai atlieka lemiamą vaidmenį skatinant lytinį elgesį. A, Eksperimentinis dizainas. B-D, Seksualinio elgesio parametrai vyrams, gydytiems fiziologiniu tirpalu (Sal, baltos juostos, n = 11) arba naloksonas (NLX; juodos juostos, n = 12) su sisteminiu vartojimu. Rodomi duomenys yra latentiniai nustatymai (B; sekundžių), intromission (C; sekundžių) ir ejakuliacija (D; per kelias dienas iš eilės 1 ir 5 penkias dienas iš eilės poravimosi. Be to, duomenys pateikiami galutiniam poravimosi testui, 7 d po penktos poravimosi sesijos. Duomenys pateikiami kaip vidurkis ± SEM; + žymi reikšmingą skirtumą tarp gydymo 1 ir 5 dienų; * rodo reikšmingą skirtumą tarp tyrimo dienos ir 5 dienos gydymo metu; # rodo reikšmingą skirtumą tarp naloksono ir druskos grupių per dieną.

Peržiūrėkite šią lentelę: 

1 lentelė. 

Naloksono vartojimas prieš padaugėjus latentų, kad būtų galima pritvirtinti ir įsiskverbti tik pirmąją poravimosi dieną

Priešingai, gydymas naloksonu seksualinės patirties metu trukdė išlaikyti patirties sukeltą lytinio elgesio palengvinimą paskutinėje poravimosi bandymo dieną. Tyrimo diena buvo atlikta 7 d po paskutinės poravimosi, kai naloksono injekcijos nebuvo. Su fiziologiniu tirpalu gydyti kontroliniai patinai parodė, kad patirtis sukėlė lytinį elgesį. Konkrečiai, latentai, skirti pritvirtinti, intromizuoti ir ejakuliacijai, nesiskyrė tarp penktosios poravimosi sesijos ir paskutinės bandymų dienos (Pav 4B – D). Kadangi naloksono gydyti vyrai pastebimai padidino latentinių lytinių santykių padidėjimą (Pav 4B; p = 0.033), intromission (Pav 4C; p = 0.036) ir ejakuliacija (Pav 4D; p = 0.049) bandymo dieną, palyginti su penkta poravimosi sesija. Be to, nustatyta, kad bandymo dieną naloksono gyvūnai buvo gerokai lėtesni nei vyriškos druskos tirpalai, kurie buvo rodomi ilgesnėse latentinėse laikmenose (Pav 4B; p = 0.017) ir intromission (Pav 4C; p = 0.043). Taigi gydymas naloksonu blokavo patirties sukeltos lytinės elgsenos palaikymo, bet ne pradinio, vystymąsi. Šie rezultatai rodo, kad EOP sukeltas VTA dopamino neuronų plastiškumas yra labai svarbus ilgalaikio natūralaus atlygio elgesio stiprinimo išraiška.

Buvo atlikti keli papildomi bandymai, siekiant nustatyti, ar opioidų receptorių blokados poveikis ilgalaikio lytinio elgesio stiprinimo praradimui pasireiškė nepriklausomai nuo naloksono vartojimo per paskutinį poravimosi bandymo dieną (Pav 5A,B), buvo būdingi ilgalaikio, bet ne trumpalaikio poravimosi palengvinimo išlaikymui (Pav 5E,F), nebuvo sukeltas vien kasdienio naloksono poveikio (\ tPav 5C,D), o ne dėl seksualinio atlygio praradimo naloksono gydomiems vyrams (\ tPav 5G,H). Pirma, norint parodyti, kad pasikeitęs seksualinis elgesys galutiniame poravimosi teste nebuvo naloksono nebuvimas, paskutiniame poravimosi testo dieną buvo vartojamas naloksonas arba fiziologinis tirpalas gyvūnams, kurie padaugino porą su naloksonu, kol jie įgijo seksualinę patirtį (Pav 5A). Vienas svarbiausių poravimosi dienų poveikis buvo latentiniams laikams (Pav 5B; F(2,27) = 30.031, p = 0.038) ir intromission (Lentelė 2; F(2,27) = 10.686, p = 0.048). Nėra pagrindinio poravimosi dienos poveikio latentinei ejakuliacijai (Lentelė 2; F(2,27) = 2.388, p = 0.109) Panašiai kaip aprašyta aukščiau, gydymas naloksonu poravimosi metu neturėjo įtakos seksualinio elgesio palengvinimui per pirmąsias penkias seksualinės patirties sesijas. Abiejų grupių (druskos ir naloksono grupių, nustatytų gydant galutinį poravimosi testą, abiejų grupių metu buvo gautas naloksonas poravimosi metu) parodė, kad 5 dieną, palyginti su 1, seksualinis elgesys buvo lengvesnis, o pirmosios kalno trukmės rodikliai buvo žymiai trumpesni (Pav 5B; fiziologinis tirpalas: p = 0.033; naloksonas: p = 0.014) ir intromission (Lentelė 2; fiziologinis tirpalas: p = 0.034; naloksonas: p = 0.026). Gyvūnams, kurie paskutinę poravimosi bandymo dieną gavo naloksoną arba fiziologinį tirpalą, buvo ilgiau užfiksuoti (Pav 5B; fiziologinis tirpalas: p = 0.018; naloksonas: p = 0.029) ir intromission (Lentelė 2; fiziologinis tirpalas: p = 0.019; naloksonas: p = 0.020), palyginti su penkta poravimosi patirtimi. Todėl naloksono ar fiziologinio tirpalo skyrimas bandymo dieną prieš poravimą nepadarė naloksono poveikio seksualinės patirties metu, o ilgalaikio seksualinio elgesio palengvinimo sumažėjimas buvo toks pat, kaip ir su gyvūnais, kurie negavo injekcijos. paskutinę poravimosi bandymo dieną (Pav 4).

5 pav. 

Endogeniniai opioidai yra svarbūs ilgalaikio patirties sukeltos lytinės elgsenos išraiška. AEksperimentinis eksperimentas su NLX gydymo poveikiu bandymo dieną. B, Penkias dienas iš eilės po poravimosi ir paskutinės poravimosi bandymo dienos (bandymas), po sūrymo (pilkos) arba naloksono (juodos) injekcijos, užfiksuokite latentą 1 ir 5 dienomis. Duomenys yra vidutiniai ± SEM. * rodo reikšmingą skirtumą tarp 1 dienos ir 5 dienos gydymo metu. # rodo reikšmingą skirtumą tarp testo dienos ir dienos 5 gydymo metu. CEksperimentinis eksperimentinis bandymas, siekiant išbandyti vien tik naloksono pirminio gydymo poveikį be seksualinio patyrimo elgesio. D, Sumažinkite latentą galutinėje poravimosi bandymo dieną, 7 dienas po 5 dienų, kai sūrymo arba naloksono injekcijos nevyksta. Duomenys yra vidutiniai ± SEM. E, Eksperimentinis eksperimentinis projektas, skirtas patikrinti, ar gydymas naloksonu paveikė trumpalaikį seksualiai patyrusių gyvūnų seksualinio elgesio rodymą. F1 ir 5 dienos penkias dienas po poravimosi ir paskutinės poravimosi testo dienos, 1 dieną po 5, laikykite latentą 1 dieną, esant druskos (pilkos) arba naloksono (juodos) injekcijai. Duomenys yra vidutiniai ± SEM. * rodo reikšmingą skirtumą tarp 5 dienos ir XNUMX dienos gydymo metu. G, Eksperimentinis eksperimentinis projektas, skirtas patikrinti, ar gydymas naloksonu užblokavo seksualinio elgesio atlygį. H, Laikas, praleistas poravimosi poroje (sekundėmis) per testą (baltas) ir po bandymo (juoda), kai gyvūnai gauna naloksoną arba fiziologinį tirpalą prieš poravimą. Duomenys reiškia vidurkį ± SEM; * žymi reikšmingą skirtumą, lyginant su pretestu.

Peržiūrėkite šią lentelę: 

2 lentelė. 

Duomenys rodo, kad kontroliniai eksperimentai yra latentiniai įsišaknijimui ir ejakuliacijai (sekundėmis), siekiant nustatyti, ar MOR blokados poveikis ilgalaikio seksualinio elgesio stiprinimo praradimui pasireiškė nepriklausomai nuo naloksono vartojimo trūkumo paskutinėje poravimosi bandymo dieną

Norint nustatyti, ar gydymas naloksonu, kai jis buvo susietas su seksualine patirtimi ir nėra pakartotas naloksonui per se, sukėlė lytinio elgesio sutrikimą 7 d po paskutinio gydymo, prieš galutinį poravimosi testą 7 lytiniu būdu negydyti gyvūnai gavo penkias naloksono ar druskos injekcijas. d vėliau (Pav 5C). Nėra jokių reikšmingų skirtumų tarp poravimosi parametrų tarp druskingo ir naloksono iš anksto apdorotų grupių (Pav 5D; kalno vėlavimas; intromizacijos latencija: fiziologinis tirpalas 139.7 ± 40.3 vs naloksonas 121.83 ± 42.55; ejakuliacijos latentinis laikas: fiziologinis tirpalas 887.9 ± 70.0 vs naloksonas 1050.8 ± 327.31). Šie rezultatai rodo, kad vien naloksono nepakanka, kad pakeistų vėlesnį seksualinį elgesį, panašų į vien tik naloksono poveikį VTA dopamino neuronų plastiškumui.

Mes manome, kad gydymas naloksonu seksualinės patirties įgijimo metu sutrikdo ilgalaikę seksualinės patirties sukeltos lytinės elgsenos palengvinimo išraišką. Norėdami tai dar kartą išbandyti, naloksono gydymo poveikis poravimosi metu buvo ištirtas vėlesniam seksualiniam elgesiui per paskutinį poravimosi testą, kuris buvo atliktas tik po 1 d po paskutinio poravimosi (eksperimentinis projektas; Pav 5E). Pastatytas didelis poravimosi dienos poveikis kalnui (Pav 5F; F(2,20) = 19.780, p <0.001) ir intromisijos delsos (Lentelė 2; F(2,20) = 19.041, p <0.001). Nebuvo reikšmingo pagrindinio dienos efekto ejakuliacijos latencijai (Lentelė 2; F(2,20) = 3.042, p = 0.070). Panašiai kaip aprašyta aukščiau, visi vyrai (nepaisant gydymo fiziologiniu tirpalu arba naloksonu) parodė seksualinės elgsenos palengvinimą per penkias seksualinės patirties sesijas, kurios buvo pažymėtos žymiai trumpesnėmis latentinėmis lytomis (Pav 5F; fiziologinis tirpalas: p = 0.002; naloksonas: p = 0.018) ir intromission (Lentelė 2; fiziologinis tirpalas: p = 0.006; naloksonas: p = 0.009) 5 dieną, palyginti su 1. Panašiai, palengvintas seksualinis elgesys buvo įrodytas bandymo dieną, lyginant su 1 diena, žymima žymiai trumpesnėmis latentinėmis lytomis (Pav 5F; fiziologinis tirpalas: p = 0.001; naloksonas: p = 0.020) ir intromission (Lentelė 2; fiziologinis tirpalas: p = 0.004; naloksonas: p = 0.009). Dar svarbiau, kad naloksono gydymas poravimosi metu neturėjo reikšmingos įtakos lytinės patirties sukeltam lytinio elgesio palengvinimui, kai buvo tiriamas 1 d po lytinės patirties, nepriklausomai nuo gydymo naloksonu šiame paskutiniame poravimosi bandymo dieną.

Galiausiai mes išbandėme galimybę, kad lengvinantis naloksono poveikį ilgalaikiam palengvinto seksualinio elgesio pasireiškimui atsiranda dėl blokuojančio naloksono poveikio teikiančioms malonias seksualinio elgesio savybes. Tačiau naloksonas, įvestas prieš pat poravimą, nepakeitė poravimosi CPP (Pav 5G), tai rodo, kad gydymas naloksonu nepasikeitė seksualiniu atlygiu. Tiek druskos, tiek naloksono gydytos grupės sudarė reikšmingą CPP seksualiniam elgesiui, kaip rodo žymiai padidėjęs laikas, praleistas lyties poroje.Pav 5H; fiziologinis tirpalas: p = 0.038; naloksonas: p = 0.002) po bandymo, palyginti su išankstiniu testu. Todėl naloksonas nedaro neigiamo poveikio seksualinio elgesio palaikymui, blokuodamas su seksualiniu elgesiu susijusį atlygį.

Seksualinio elgesio palengvinimas priklauso nuo EOP veiksmų VTA

Patvirtinti, kad EOP veikia specialiai VTA, kad paskatintų ilgalaikį seksualinio elgesio palengvinimą, 3 pavA buvo pakartotinai vartojamas su VTA naloksono infuzijomis, o ne sisteminėmis injekcijomis. Rezultatai buvo identiški pirmiau aprašytam sisteminiam vartojimui. Buvo reikšmingas pagrindinis poravimosi dienos poveikis visiems lytinio elgesio parametrams (Pav 6A, prijungimo vėlavimas: F(2,33) = 4.494, p = 0.019; B, intromission latency: F(2,33) = 4.042, p = 0.027; C, ejakuliacijos latentinis laikas: F(2,33) = 5.309, p = 0.010) ir gydymas VTA naloksonu gydant latentus (F(1,33) = 7.345, p = 0.011) ir intromission (F(1,33) = 6.126, p = 0.019). Intra-VTA naloksonas neužkerta kelio pradiniam patirties sukeltam lytinio elgesio palengvėjimui per 5 datingimą, nes gydytiems naloksono vyrams pasireiškė sumažėjusi latentinė įtampa (Pav 6A; p = 0.001), intromission (Pav 6B; p <0.001) ir ejakuliacija (Pav 6C; p = 0.001) 5 dieną, palyginti su 1. Penktąją poravimosi dieną nė vienoje iš latentų naloksono gydytų patinų nesiskyrė nuo fiziologinio tirpalo gydytų vyrų. Intra-VTA naloksono gydymas, kaip ir sisteminis vartojimas, sukėlė žymiai padidėjusį kalio (Pav 6A; p <0.001) ir intromisijos delsos (Pav 6B; p <0.001) pirmąją poravimosi dieną, palyginti su druskos tirpalu gydytais patinais, kas nebuvo pastebėta vėlesnių poravimosi sesijų metu (kurių metu naloksonu ir druskos tirpalu gydyti vyrai nesiskyrė). Vienas netikėtas pastebėjimas buvo tas, kad šio eksperimento metu druskos tirpalu gydyti vyrai neparodė statistiškai reikšmingo kalno ar intromisijos latentų palengvėjimo (kaip parodyta visuose aukščiau aprašytuose eksperimentuose), o penktą dieną, palyginti su pirmąja diena, sutrumpėjo tik ejakuliacijos latentiškumas. (druskos tirpalas: p = 0.001).

6 pav. 

Endogeniniai opioidai VTA sąlygoja patirties sukeltą lytinio elgesio palengvinimą ir jo ilgalaikę priežiūrą. Seksualinio elgesio parametrai vyrams, gydytiems fiziologiniu tirpalu (Sal, baltos juostos, n = 8) arba NLX (juodos juostos, n = 6), vartojant VTA. Rodomi duomenys yra latentiniai nustatymai (A), intromission (B) ir ejakuliacija (C) dienomis 1 ir 5 penkias dienas iš eilės poravimosi. Be to, duomenys apie galutinę poravimosi bandymo dieną, 7 d po 5, nerodomi druskos arba naloksono injekcijos metu. Duomenys yra vidutiniai ± SEM; + žymi reikšmingą skirtumą tarp gydymo 1 ir 5 dienų; * rodo reikšmingą skirtumą tarp tyrimo dienos ir 5 dienos gydymo metu; # rodo reikšmingą skirtumą tarp naloksono ir Sal grupių per dieną. Koronuotų VTA sekcijų (H, -4.60; I, -5.00; J, -5.25 iš bregmos) scheminiai brėžiniai, rodantys visų VNA injekcijų vietas visiems gyvūnams eksperimente 5 (fiziologinis tirpalas, baltas; naloksonas, juodas; praleistas, pilkas). naudojant Swanson Brain Maps šabloninius brėžinius (Swanson, 2004). Kanapės buvo dvišalės, tačiau injekcijos vietos yra vienašališkos, kad jas būtų lengviau pristatyti. fr, Fasciculus retroflexus; ML, Medial lemniscus; SN, materia nigra.

Intra-VTA naxolone gydymas neleido palaikyti lytinio elgesio, kuris pastebėtas lytiniu būdu patyrusiems vyrams, panašus į sisteminio naloksono poveikį. Konkrečiai, paskutinę bandymo dieną naloksono gydyti vyrai turėjo ilgesnes latentines lytes (Pav 6A; p = 0.011), intromission (Pav 6B; p = 0.010) ir ejakuliacija (Pav 6C; p = 0.015), lyginant su penktuoju poravimosi etapu ir lyginant su vyrams, gydytiems fiziologiniu tirpalu, \ tPav 6A, p = 0.006; B, p = 0.008). Priešingai, su fiziologiniu tirpalu gydyti gyvūnai latentais nesiskyrė, kad įsitvirtintų ir įsijungtų tarp paskutinės bandymo dienos ir 5 poravimosi dienos. Šie poveikiai buvo būdingi naloksono pristatymui į VTA, nes vyrai, turintys netoliese esančias kanapes, bet nesiekė VTA (Pav 6D; n = 3) parodė ilgalaikį seksualinio elgesio palengvinimą, panašų į fiziologinio tirpalo apdorotas kontrolines medžiagas (ML, IL = 53 ± 6.245, EL = 389 ± 299.5 ir gerokai skiriasi, lyginant su VTA naloksono gyvūnais paskutinėje poravimosi bandymo dieną (ML, IL: p = 0.029; EL: p = 0.0395).

EOP veiksmas reikalingas su lytimi susijusiai sąlyginai sukeltai nervų aktyvacijai

Remiantis iki šiol gautais rezultatais, mes manėme, kad EOP aktyvinimas VTA per poravimosi patirtį ir vėlesnis VTA dopamino somo dydžio sumažinimas yra labai svarbus paskatinant paskatinimą prisirišimui, susijusiam su stimuliais, ir todėl palengvinto seksualinio elgesio palaikymu. Norint išbandyti šią hipotezę, buvo išnagrinėti opioidinių receptorių blokavimo pasekmių dėl neuroninio aktyvumo, kurį sukelia vėlesnis sąlytis su sąlygotais kontekstiniais ženklais, prognozuojant seksualinį atlygį (lytimi susietų kontekstinių užuominų), poveikis. Seksualiai naivūs gyvūnai taip pat buvo paveikti aplinkos apsaugos ženklais, tačiau jie nebuvo susiję su ankstesne poravimosi patirtimi, todėl buvo neutralūs. Galiausiai, pradiniai pERK lygiai buvo nustatyti seksualiai patyrusiose ir naivinėse kontrolinėse grupėse, kurios liko namų narvuose ir nebuvo veikiamos jokiais ženklais (-Ne Cue). Ankstesnių išvadų patvirtinimas ir išplėtimas (Balfour ir kt., 2004), poveikio kontekstiniams ženklams, susijusiems su ankstesniu lytiniu atlygiu, žymiai padidėjo pERK išraiška lytiškai patyrusiems vyrams NAc (Pav 7) ir mPFC (Pav 8A – C), tačiau BLA nesukėlė neuronų aktyvinimo (Pav 8D) arba CPu (duomenys nerodomi). NAc šerdyje įvyko pagrindiniai poveikio koeficientai (F(1,12) = 12.1941, p = 0.004), ACA (F(1,12) = 5.541, p = 0.038) ir PL (F(1,12) = 5.241, p = 0.041) ir naloksono gydymas NAc šerdyje (F(1,12) = 6.511, p = 0.025), ACA (F(1,12) = 15.242, p = 0.002) ir PL (F(1,12) = 7.336, p = 0.019). NAc branduolyje buvo didelė sąveika (F(1,12) = 10.107, p = 0.008), ACA (F(1,12) = 16.060, p = 0.002), PL (F(1,12) = 8.235, p = 0.014) ir IL ((F(1,12) = 6.965, p = 0.022). Pirma, poravimu susijusi Cue ekspozicija gerokai padidino pERK sūrymu gydytiems lytiškai patyrusiems gyvūnams (Exp Sal ​​+ Cue), palyginti su kontrolėmis, kurios nebuvo veikiamos jokiais užrašais ir paimtos iš namų narve (Exp Sal-No Cue) NAc šerdyje (Pav 7A; p <0.001) ir mPFC subregionai ACA (Pav 8A; p = 0.001), PL (Pav 8B; p = 0.003) ir IL (Pav 8C; p = 0.029). Priešingai, fiziologiniu būdu gydytiems lytiškai naiviems gyvūnams poveikio kontekstiniams ženklams, kurie nebuvo susiję su seksualiniu atlygiu, nesukėlė pERK jokioje smegenų srityje (Naive Sal + Cue, palyginti su naiviu Sal-No Cue; Fig. 7, 8), įrodantis, kad pERK indukcija būdinga su seksualine patirtimi susijusiems ženklams. Be to, vien tik seksualinė patirtis nekeičia pradinės PERK ekspresijos nė viename smegenų regione, nes nebuvo skirtumų tarp grupių, paimtų iš namų narvų, tiek seksualiai naivių, tiek patirties, ir gydytų fiziologiniu tirpalu arba naloksonu.

7 pav. 

Endogeninis opioidinis poveikis reikalingas nervų aktyvacijai NAc, kurį sukelia su lytimi susiję sąlyginiai ženklai. PERK-IR ląstelių skaičius mm2 į branduolį accumbens šerdyje (A) ir apvalkalas (B) lytiškai naiviems (baltiems) ir patyrusiems („Exp; black“) gyvūnams, kurie buvo apdoroti sisteminiu NLX arba fiziologiniu tirpalu (Sal) poravimosi metu („Exp male“) arba gydymo sesijomis (Naive vyrai). Grupės buvo veikiamos kontekstiniais užuominomis (Cue), kurios buvo susijusios su žymomis „Exp“ vyrams ir neutraliomis užuominomis Naive gyvūnuose, arba paimtos iš namų narvų (No Cue; nurodė, kad trūksta Cue-etiketės). Duomenys pateikiami kaip vidurkis ± SEM; * žymi reikšmingą skirtumą, lyginant su iš anksto apdorotu fiziologiniu tirpalu, kai nėra kontrolinių medžiagų (Naive Sal-No Cue ir Exp Sal-No Cue); # nurodo reikšmingą skirtumą, lyginant su „Sal“ apdorota „Cue“ eksponuota „Exp“ grupe (Exp Sal ​​+ Cue). Reprezentatyvūs pERK-IR ląstelių vaizdai viename mm2 seksualiai patyrusių vyrų, sergančių Sal (C, D) arba NLX (E, F), kurie buvo paimti iš namų narvelio (No Cue, C, E) arba buvo priskirti susietiems kontekstiniams ženklams (Cue; D, F). N = 4 kiekviena grupė, išskyrus Naive NLX (No Cue), n = 3. ac, priekinė komisija. Skalės juosta, 100 μm.

8 pav. 

Naloksono poveikis poravimosi cue indukuoto pERK ekspresijai kituose VTA tiksliniuose regionuose. PERK-IR ląstelių skaičius mm2 lytiškai naivus (baltas) ir patyręs (Exp; black) gyvūnas, kuris poravimosi metu buvo apdorotas sisteminiu NLX arba fiziologiniu tirpalu (Sal), ir ACA buvo veikiami kontekstiniais ženklais (Cue) arba namų narve (be užuominų).A), PL (B), IL (C) ir BLA (D). Duomenys yra vidutiniai ± SEM; * žymi reikšmingą skirtumą, lyginant su iš anksto apdorotu fiziologiniu tirpalu, kai nėra kontrolinių medžiagų (Naive Sal-No Cue ir Exp Sal-No Cue); # nurodo reikšmingą skirtumą, lyginant su „Sal“ apdorotais lytiniu keliu veikiančiais seksualiai naiviais kontroliniais preparatais (Naive Sal + Cue).

Pagrįsdami mūsų hipotezę, naloksono gydymas seksualinės patirties metu žymiai susilpnino pERK indukciją su lytimi susijusiais sąlyginiais ženklais. pERK ekspresija šiuose naloksono gydomuose patyrimuose patyrusiems vyrams (Exp NLX + Cue) nesiskyrė nuo pradinės pERK ekspresijos nė vienoje iš lytiškai naivių ar patyrusių kontrolinių grupių, paimtų iš namų narvų (Naive Sal-No Cue arba Naive NLX- No Cue). Be to, pERK ekspresija naloksono gydomiems patyrusiems vyrams (Exp NLX + Cue) buvo gerokai mažesnė, lyginant su druskos tirpalu veikiančiais patyrusiais gyvūnais (Exp Sal ​​+ Cue) NAc šerdyje (Pav 7A; p = 0.002) ir mPFC subregionai (Pav 8A, ACA: p <0.001; B, PL: p = 0.002; C, IL: p = 0.015).

NAc korpuse dviejų krypčių ANOVA analizė nesukėlė statistiškai reikšmingo veiksnių, galinčių sukelti poveikį, ir gydymo naloksonu. Tačiau lyginant su poromis, nustatyta, kad sūrio ekspozicija sukėlė pERK sūrymu gydytoje lytiškai patyrusioje grupėje (Exp SAL + Cue), lyginant su jokia neužkrėsta Saline Naive kontroline grupe (Pav 7B; Naive SAL-No Cue: p = 0.0163).

Diskusija

Dabartinis tyrimas rodo, kad EOP, veikiantis VTA seksualinio elgesio metu, natūralus atlygio elgesys sukėlė tvirtą, bet laikiną VTA dopamino ląstelių dydžio sumažėjimą. VTA ne dopamino neuronuose, nei dopamino neuronuose, esančiuose netoliese esančioje materia nigroje, somo dydžio sumažėjimas nebuvo pastebėtas, o tai rodo, kad šis pokytis būdingas VTA dopamino ląstelėms. Šis VTA dopamino plastiškumas atrodo panašus į lėtinio opiatų poveikio poveikį.Sklair-Tavron ir kt., 1996; Russo ir kt., 2007; Mazei-Robison ir kt., 2011) ir sukėlė panašų toleranciją už eksogeninį opiatą (morfiną). Mes parodėme, kad VTA dopamino plastiškumas yra labai svarbus ilgalaikiam (palaikomam), bet ne trumpalaikiam (vystymuisi), seksualinio elgesio stiprinimui ir su užmokesčiu susijusiam cue indukuotam nervų aktyvumui (pERK) VTA tiksliniuose regionuose: NAc ir mPFC. Šie rezultatai rodo VTA dopamino plastiškumo vaidmenį ilgalaikėje natūralaus atlygio nuspėjamojo užuominų ar atlygio atminimo skatinimo išraiška.

Gerai dokumentuota, kad seksualinė patirtis palengvina vėlesnį seksualinį elgesį, įskaitant greitesnį poravimosi pradžią ir didesnį našumą (Balfour ir kt., 2004; Pitchers ir kt., 2010a,b, 2012). Šis lytinio elgesio palengvinimas ar sustiprinimas palaikomas bent 28 d po poravimosi (Pitchers ir kt., 2012). Be to, buvo įrodyta, kad lytinis elgesys ir sąlyginiai gudrybės, prognozuojantys lytinį atlygį, sukelia MOR internalizaciją VTA ir sukelia neuronų aktyvaciją visoje mezolimbinėje sistemoje, įskaitant VTA (dopamino ir nondopamino neuronus), NAc, PFC ir BLA (Balfour ir kt., 2004, 2006). Gerai žinoma, kad VTA dopamino neuronai atlieka svarbų vaidmenį mokant ir priskirdami skatinamojo pobūdžio skatinamųjų stimulų (Berridge ir Robinson, 1998; Berridge ir kt., 2009; Flagel et al., 2011) ir yra svarbūs atlyginimų prognozavimui (Schultz, 2010). Dabartinės išvados plečia mūsų dabartines žinias, parodydamos, kad už atlygį sukeltas VTA neuroplastumas yra labai svarbus šioms funkcijoms ir priklauso nuo MOR aktyvinimo, kurį atlieka EOP VTA. Šiuo metu nežinoma, kuris EOP yra MOR ligandas, kuris VTA veikia vyrų lytinio elgesio metu. Nors ir β endorfinas, ir enkefalinas buvo skatinami motyvuoti maisto stiprintuvus (Hayward ir kt., 2002), tai dar turi būti nustatyta vyrų seksualiniam elgesiui. Anksčiau mes parodėme, kad β-endorfinų neuronai nėra aktyvuojami poravimosi metu, o POMC mRNR taip pat nedidėja; todėl rodo, kad β endorfinas negali būti kritinis EOP, veikiantis VTA poravimosi metu (Davis ir kt., 2007). Šis VTA dopamino plastiškumas buvo būtinas neurologiniam aktyvumui mPFC, NAc ir VTA po poveikio seksualinio atlygio prognozavimo aplinkos ženklams. Be to, VTA dopamino plastiškumas buvo labai svarbus ilgalaikiam lytinio elgesio pradžios ir veikimo išraiška. Priešingai, seksualinės patirties sukeltas VTA neuroplastiškumas nebuvo būtinas hedoniniam atsakui, nes lyties atlygis (kurį nustatė CPP) ir trumpalaikis seksualinės motyvacijos ir veiklos palengvinimas (lytinės patirties metu arba 1 d vėliau) išliko nepaisant nepaisant MOR blokados poravimosi metu (Mehrara ir Baum, 1990). Vietoj to, duomenys rodo, kad VTA dopamino neuroplasticity tarpininkauja ilgesniam laikotarpiui (7 d po paskutinės seksualinės patirties; Pitchers ir kt., 2012) lyties atlygio „noro“ išraiška ir padidėję motyvuoti atsakymai į poravimosi ženklus (Milleris ir Baumas, 1987; Berridge ir Robinson, 1998).

Seksualiai patyrę gyvūnai parodė kryžminį toleranciją morfino atlyginimams, panašiai kaip ratų, veikiančių pelėse, poveikį, kitą natūralų atlygį elgesį, poveikį, blokuojamą gydant naloksonu (Lett ir kt., 2001, 2002) ir nustatyta, kad jie priklauso nuo VTA dopamino ląstelių plastiškumo (dabartiniai duomenys). Panašiai kaip ir natūralios naudos, pakartotinis morfino arba heroino poveikis opiatams sąlygoja trumpalaikį VTA dopamino somo dydžio sumažėjimą (Sklair-Tavron ir kt., 1996; Spiga ir kt., 2003; Russo ir kt., 2007; Mazei-Robison ir kt., 2011). Be to, opiatų ekspozicija trumpais pasitraukimo laikotarpiais sukelia atlyginimų toleranciją, kurią lemia didesnės vaisto dozės, kad būtų sudarytos atlygio asociacijos (Shippenberg ir kt., 1987; Russo ir kt., 2007) ir sukelia savarankišką gyvūnų vartojimą narkotikų vartojimui \ tAhmed ir kt., 2000; Walker ir kt., 2003). Taigi, EOP ir opiatai veikia bendruosius neuroninius substratus, kad ankstyvo pasitraukimo metu sukurtų atlyginimų toleranciją, o tai gali atspindėti kompensacinį homeostatinį mechanizmą, skirtą neutralizuoti pakartotinį poveikį (Koob ir Le Moal, 2005). Priešingai, ilgalaikio opioidinio vaisto susilaikymo metu tolerancija yra pakeista į jautrumą narkotikų naudingoms savybėms (Harris ir Aston-Jones, 2003; Aston-Jones ir Harris, 2004; Harris ir Gewirtz, 2004). Įdomu tai, kad seksualinė patirtis, kurią lydi 7 – 28 d lytinis susilaikymas, sukelia kryžminį jautrumą psichostimuliantų atlygiui (Pitchers ir kt., 2010a), kuri priklauso nuo poravimosi sukeltos deltaFosB ekspresijos ir dopamino receptorių 1 aktyvinimo \ tPitchers ir kt., 2013). Taigi, seksualinio atlygio patirtis sukelia vienalaikį opiatų atlygio toleranciją ir psichostimuliatoriaus atlygio jautrumą, nors morfino atlyginimų tolerancijos laikotarpis išlieka ilgesnis. Mes teigiame, kad šiuos priešingus poveikius narkotikų atlygiui gali paskatinti skirtingos nervinio plastiškumo formos įvairiose mezolimbinės sistemos srityse: VTA EOP veiksmas ir dopamino plastiškumas tarpininkauja opiatų atlygio tolerancijai (dabartinis tyrimas), o NAc deltaFosB ekspresija kontroliuoja psichostimuliatoriaus jautrinimą (Pitchers ir kt., 2013). Abu šie reiškiniai gali prisidėti prie narkotikų vartojimo padidėjimo (Ahmed ir Koob, 1998, 1999; Ahmed ir kt., 2000, 2002, 2003; Walker ir kt., 2003).

Molekuliniai mechanizmai, kuriais EOP veikia VTA dopamino neuronus natūralaus atlygio elgesio metu, lieka nežinomi. IRS2-Akt-mTORC2 kelias yra pagrindinis sumažinto somo dydžio tarpininkas VTA, kurį sukelia pakartotinis morfinas (Jaworski ir kt., 2005; Russo ir kt., 2007; Mazei-Robison ir kt., 2011). Pakartotinius morfino vartojimo sukeltus dopamino neuronų kiekio pokyčius VTA gali užkirsti kelią smegenų kilmės neurotrofinio faktoriaus (BDNF) intraveninės VTA infuzijos metu; Sklair-Tavron ir Nestler, 1995). BDNF aktyvina šį kelią per „TrkB“ signalizaciją (Russo ir kt., 2007), receptorių kinazė su dideliu afinitetu BDNF ir IRS2-Akt kelio dalis (Seroogija ir Gall, 1993; Numan ir Seroogy, 1999), ir išreikštas dopamino ir GABA neuronais VTA. Įvairių IRS2-Akt kelio komponentų reguliavimas naudojant virusinio vektoriaus genų perdavimo technologiją imituoja lėtinio opiatų poveikio poveikį. Be to, opiatų poveikio poveikį galima išgelbėti atkuriant šį signalizacijos kelią (Russo ir kt., 2007) ir mTORC2 komponento viršijimas apsaugo nuo morfino sukeltos VTA dopamino somos redukcijos (Mazei-Robison ir kt., 2011). Todėl ankstesniame darbe, tiriant lėtinių opiatų poveikį VTA dopamino somo dydžiui, matyti, kad morfino sukeltas IRS2-Akt-mTOR slopinimas yra pakankamas ir būtinas šiam poveikiui pasiektiMazei-Robison ir Nestler, 2012). Taigi yra viliojanti spėlioti, kad seksualinės patirties poveikis VTA dopamino neuroplastikai yra panašiai tarpininkaujamas BDNF ir IRS2-Akt-mTORC2 keliu.

Apibendrinant galima pasakyti, kad šiuo metu atliktas tyrimas parodė, kad VTA neuroplastiką sukelia patirtis, kuri yra natūraliai naudinga elgesiui, ypač pasikartojančiam vyrų lytiniam elgesiui. Konkrečiai kalbant, EOP veikia VTA, kad sumažintų dopamino somo dydį, kuris, kaip manoma, siejamas su padidėjusiu nervų susijaudinimu ir mažesniu dopamino kiekiu, dėl kurio atsiranda hipodopaminerginė sistema, ir keičia mezolimbinę sistemą, veikiančią dėl seksualinio atlygio prognozavimo. Be to, VTA neuroplastika yra labai svarbi skatinamajai motyvacijai ir atminimui atminti, bet ne seksualinio elgesio hedoniniam poveikiui. Galiausiai, VTA neuroplastika, kurią sukelia natūralus atlygio elgesys ir trumpas atlygio susilaikymo laikotarpis, daro įtaką opiatų atlygiui ir todėl gali turėti įtakos pažeidžiamumui narkomanijos vystymuisi.

Išnašos

  • Gavo sausio 12, 2014.
  • Gauta peržiūra gegužės 17, 2014.
  • Priimta gegužės 20, 2014.

  • Šis tyrimas buvo paremtas Kanados sveikatos tyrimų instituto dotacijomis LMC ir Gamtos mokslų ir inžinerijos mokslinių tyrimų tarybai KKP

  • Autoriai skelbia konkuruojančius finansinius interesus.

  • Korespondencija turėtų būti siunčiama dr. Lique M. Coolen, Misisipės universiteto medicinos centro, Fiziologijos ir biofizikos katedros, 2500 North State Street, Jackson, MS 39216-4505. [apsaugotas el. paštu]

Nuorodos

  1. ↵
    1. Agmo A

    (1997) Vyrų žiurkių lytinis elgesys. Brain Res Brain Res Protoc 1: 203-209.

  2. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Koob GF

    (1998) Perėjimas nuo vidutinio iki pernelyg didelio narkotikų vartojimo: pokyčiai hedoniniame taške. Mokslas 282: 298-300.

  3. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Koob GF

    (1999) Ilgalaikis kokaino savarankiško vartojimo nustatymo taško padidėjimas po padidėjimo žiurkėms. Psichofarmakologija 146: 303-312.

  4. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Walker JR,
    3. Koob GF

    (2000) Nuolat didėjanti motyvacija vartoti heroiną žiurkėms, kurių istorija buvo padidėjusi. Neuropsychopharmacology 22: 413-421.

  5. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Kenny PJ,
    3. Koob GF,
    4. Markou A

    (2002) Neurobiologiniai hedoninio alostazės įrodymai, susiję su didėjančiu kokaino vartojimu. Nat Neurosci 5: 625-626.

  6. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Lin D,
    3. Koob GF,
    4. Parsons LH

    (2003) Kokaino savarankiško vartojimo padidėjimas nepriklauso nuo kokaino sukeltų branduolių, kurie sukelia dopamino koncentraciją. J Ncurochcm 86: 102-113.

  7. ↵
    1. Aston-Jones G,
    2. Harris GC

    (2004) Smegenų substratai, skirti didesniam vaistų ieškojimui užsitęsusio pasitraukimo metu. Neurofarmakologija 47: 167-179.

  8. ↵
    1. Balfour ME
    2. Yu L,
    3. Coolen LM

    (2004) Seksualinis elgesys ir su lytimi susiję aplinkos ženklai aktyvuoja mesolimbinę sistemą žiurkių patinams. Neuropsychopharmacology 29: 718-730.

  9. ↵
    1. Balfour ME
    2. Brown JL,
    3. Yu L,
    4. Coolen LM

    (2006) Galimas efferentų indėlis iš medialinio prefrontalinio žievės į neuroninį aktyvavimą po lytinio elgesio žiurkių patinose. Neurologijos 137: 1259-1276.

  10. ↵
    1. Beitner-Johnson D,
    2. Gitara X,
    3. Nestler EJ

    (1992) Neurofilamento baltymai ir mezolimbinė dopamino sistema: bendras reguliavimas pagal lėtinį morfiną ir lėtinį kokainą žiurkių skilvelio viduje. J Neuroscience 12: 2165-2176.

  11. ↵
    1. Berridge KC
    2. Robinson TE

    (1998) Koks yra dopamino vaidmuo atlyginant: hedoninis poveikis, mokymas už atlygį ar skatinamasis dėmesys? Brain Res Brain Res Rev 28: 309-369.

  12. ↵
    1. Berridge KC
    2. Robinson TE,
    3. Aldridge JW

    (2009) Atskyrimo komponentų išskyrimas: „patinka“, „noras“ ir mokymasis. Curr Opin Pharmacol 9: 65-73.

  13. ↵
    1. Blum K,
    2. Werner T
    3. Carnes S
    4. Carnes P,
    5. Bowirrat A,
    6. Giordano J,
    7. Oscar-Berman M,
    8. Auksas M

    (2012) Lytis, vaistai ir roko „n“ ritė: hipotezė, kad bendras mezolimbinis aktyvinimas yra atlygio geno polimorfizmo funkcija. J Psichoaktyvūs vaistai 44: 38-55.

  14. ↵
    1. Chu NN,
    2. Zuo YF,
    3. Meng L,
    4. Lee DY,
    5. Han JS,
    6. Cui CL

    (2007) Periferinė elektrinė stimuliacija pakeitė ląstelių dydžio sumažėjimą ir padidino BDNF lygį kraujagyslių takmentalinėje srityje lėtinėmis morfino gydomomis žiurkėmis. Smegenų raiška 1182: 90-98.

  15. ↵
    1. Davis BA,
    2. Fitzgerald ME
    3. Brown JL,
    4. Amstalden KA,
    5. Coolen LM

    (2007) POMC neuronų aktyvavimas bendrojo susijaudinimo, bet ne lytinio elgesio žiurkėms. Behav Neurosci 121: 1012-1022.

  16. ↵
    1. Fiorino DF,
    2. Coury A,
    3. Phillips AG

    (1997) Dinaminių pokyčių dopamino išsiliejimas per Coolidge poveikį žiurkių patinams. J Neuroscience 17: 4849-4855.

  17. ↵
    1. Flagel SB,
    2. Clark JJ,
    3. Robinson TE,
    4. Mayo L
    5. Czuj A,
    6. Willuhn I,
    7. Akers CA
    8. Clinton SM
    9. Phillips PE,
    10. Akil H

    (2011) Selektyvus dopamino vaidmuo skatinant mokymąsi. Gamta 469: 53-57.

  18. ↵
    1. Frohmader KS,
    2. Pitchers KK,
    3. Balfour ME
    4. Coolen LM

    (2010a) Mišinių maišymas: narkotikų poveikio lytiniam elgesiui žmonėms ir gyvūnų modeliams apžvalga. Horm Behav 58: 149-162.

  19. ↵
    1. Frohmader KS,
    2. Wiskerke J,
    3. Išminčius RA
    4. Lehman MN,
    5. Coolen LM

    (2010b) Metamfetaminas veikia neuronų grupes, reguliuojančias lytinį elgesį žiurkių patinose. Neurologijos 166: 771-784.

  20. ↵
    1. Harris AC,
    2. Gewirtz JC

    (2004) Padidėjęs pasipiktinimas nutraukiant ūminį morfiną: opiatų pasitraukimo ir nerimo modelis. Psichofarmakologija 171: 140-147.

  21. ↵
    1. Harris GC,
    2. Aston-Jones G

    (2003) Pakeista motyvacija ir mokymasis po opiatų pasitraukimo: ilgalaikio atlygio apdorojimo reguliavimo reguliavimas. Neuropsychopharmacology 28: 865-871.

  22. ↵
    1. Hayward MD,
    2. Pintar JE,
    3. Mažas MJ

    (2002) Selektyvus pelno trūkumas pelėms, neturinčioms beta-endorfino ir enkefalino. J Neuroscience 22: 8251-8258.

  23. ↵
    1. Hoebel BG,
    2. Avena NM
    3. Bocarsly ME,
    4. Rada P

    (2009) Natūrali priklausomybė: elgesio ir grandinės modelis, pagrįstas priklausomybe nuo cukraus žiurkėms. J Addict Med 3: 33-41.

  24. ↵
    1. Hyman SE,
    2. Malenka RC,
    3. Nestler EJ

    (2006) Neuriniai priklausomybės mechanizmai: su mokymu ir atmintimi susijęs atlygis. Annu Rev Neurosci 29: 565-598.

  25. ↵
    1. Ikemoto S,
    2. Kohl RR,
    3. McBride WJ

    (1997) GABA (A) receptorių blokada priekinėje skilvelio zonoje padidina ekstraląstelinį dopamino kiekį žiurkių branduolyje. J Ncurochcm 69: 137-143.

  26. ↵
    1. Jaworski J,
    2. Spangler S
    3. Seeburgo DP,
    4. Hoogenraad CC,
    5. Sheng M

    (2005) Dendritinės arborizacijos kontrolė naudojant fosfoinozitido-3'-kinazės-Akt-žinduolių rapamicino kelio tikslą. J Neuroscience 25: 11300-11312.

  27. ↵
    1. Johnson SW
    2. Šiaurės RA

    (1992) Opioidai stimuliuoja dopamino neuronus vietinių interneuronų hiperpolarizacija. J Neuroscience 12: 483-488.

  28. ↵
    1. Klitenick MA
    2. DeWitte P,
    3. Kalivas PW

    (1992) Somatodendritinio dopamino išsiskyrimo ventralinio tegmentalio srityje reguliavimas opioidais ir GABA: in vivo mikrodializės tyrimas. J Neuroscience 12: 2623-2632.

  29. ↵
    1. Koob GF,
    2. Le Moal M

    (2005) Atlygio neurocirkuliacijos plastiškumas ir narkomanijos „tamsia pusė“. Nat Neurosci 8: 1442-1444.

  30. ↵
    1. Lennette DA

    (1978) Patobulinta imunofluorescencinės mikroskopijos montavimo terpė. Am J Clin Pathol 69: 647-648.

  31. ↵
    1. Lett BT,
    2. Grant VL,
    3. Koh MT

    (2001) Naloksonas susilpnina reguliuojamą vietą, kurią sukelia žiurkių ratas. Physiol Behav 72: 355-358.

  32. ↵
    1. Lett BT,
    2. Grant VL,
    3. Koh MT,
    4. Flynn G

    (2002) Ankstesnė patirtis, susijusi su ratų važiavimu, sukelia kryžminį atsparumą morfino poveikiui. Pharmacol Biochem Behav 72: 101-105.

  33. ↵
    1. Matthews RT
    2. Vokietijos DC

    (1984) Elektrofiziologiniai įrodymai dėl žiurkių ventralinio tegmentalės dopamino neuronų sužadinimo morfinu. Neurologijos 11: 617-625.

  34. ↵
    1. Mazei-Robison MS
    2. Koo JW,
    3. Friedman AK,
    4. Lansink CS,
    5. Robison AJ,
    6. Vinish M,
    7. Krishnan V,
    8. Kim S,
    9. Siuta MA
    10. Galli A,
    11. Niswender KD,
    12. „Appasani R“
    13. Horvath MC,
    14. Neve RL,
    15. Worley PF,
    16. Snyder SH,
    17. Hurd YL,
    18. Cheer JF,
    19. Han MH
    20. Russo SJ,
    21. et al.

    (2011) mTOR signalizacijos ir neuronų aktyvumo vaidmuo morfino sukeltose adaptacijose ventralinės tegmentalinės srities dopamino neuronuose. Neuronas 72: 977-990.

  35. ↵
    1. Mazei-Robison MS
    2. Nestler EJ

    (2012) Opiatų indukuotas molekulinis ir ląstelinis plonumas ventraliniam tegmentalui ir lokus coeruleus katecholamino neuronams. Cold Spring Harb Perspect Med 2: a012070.

  36. ↵
    1. Mehrara BJ,
    2. Baum MJ

    (1990) Naloksonas sutrikdo patinų žiurkių išraiškos, bet ne žiurkių patekimo į estetinę moterį. Psichofarmakologija 101: 118-125.

  37. ↵
    1. Meisel RL,
    2. Mullins AJ

    (2006) Seksualinė patirtis moterų graužikams: ląstelių mechanizmai ir funkcinės pasekmės. Smegenų raiška 1126: 56-65.

  38. ↵
    1. Miller RL,
    2. Baum MJ

    (1987) Naloksonas slopina poravimosi ir kondicionuojamoje vietoje vyriškos lyties žiurkių patelę netrukus po kastracijos. Pharmacol Biochem Behav 26: 781-789.

  39. ↵
    1. Mitchell JB,
    2. Stewart J

    (1990) Lytinio elgesio palengvinimas žiurkių patelėse, susijusiose su opiatų VTA injekcijomis. Pharmacol Biochem Behav 35: 643-650.

  40. ↵
    1. Murphy LO,
    2. Blenis J

    (2006) MAPK signalo specifiškumas: tinkama vieta tinkamu laiku. Trends Biochem Sci 31: 268-275.

  41. ↵
    1. Nestler EJ

    (2012) Transkripciniai narkomanijos mechanizmai. Clin Psychopharmacol Neurosci 10: 136-143.

  42. ↵
  • ↵
    1. Paxinos G,
    2. Watson C

    (2013) Žiurkės smegenys stereotaksinėse koordinatėse (Academic, Boston), Ed 7.

  • ↵
    1. Pitchers KK,
    2. Balfour ME
    3. Lehman MN,
    4. Richtand NM
    5. Yu L,
    6. Coolen LM

    (2010a) Neuroplastika mezolimbinėje sistemoje, kurią sukelia natūralus atlygis ir vėlesnis atlygio susilaikymas. Biol psichiatrija 67: 872-879.

  • ↵
    1. Pitchers KK,
    2. Frohmader KS,
    3. Vialou V
    4. Mouzon E,
    5. Nestler EJ,
    6. Lehman MN,
    7. Coolen LM

    (2010b) DeltaFosB branduolyje accumbens yra labai svarbus stiprinant seksualinio atlygio poveikį. Genesas Behav 9: 831-840.

  • ↵
    1. Pitchers KK,
    2. Schmid S,
    3. Di Sebastiano AR
    4. Wang X,
    5. Laviolette SR,
    6. Lehman MN,
    7. Coolen LM

    (2012) Natūrali atlyginimų patirtis keičia AMPA ir NMDA receptorių pasiskirstymą ir funkciją branduolyje accumbens. PLoS Vienas 7: e34700.

  • ↵
    1. Pitchers KK,
    2. Vialou V
    3. Nestler EJ,
    4. Laviolette SR,
    5. Lehman MN,
    6. Coolen LM

    (2013) Natūralūs ir narkotikų apdovanojimai veikia bendruosius neuroninius plastiškumo mechanizmus, o DeltaFosB yra pagrindinis tarpininkas. J Neuroscience 33: 3434-3442.

  • ↵
    1. Roux PP,
    2. Blenis J

    (2004) ERK ir p38 MAPK aktyvuotos baltymų kinazės: baltymų kinazių šeima su įvairiomis biologinėmis funkcijomis. Microbiol Mol Biol Rev 68: 320-344.

  • ↵
    1. Russo SJ,
    2. Bolanos CA
    3. Theobald DE,
    4. DeCarolis NA,
    5. Renthal W,
    6. Kumar A,
    7. Winstanley CA
    8. Rental NE,
    9. Wiley MD
    10. Savarankiškas DW
    11. Russell DS,
    12. Neve RL,
    13. Eisch AJ,
    14. Nestler EJ

    (2007) IRS2-Akt kelias vidurio smegenų dopamino neuronuose reguliuoja elgesio ir ląstelių atsakus į opiatus. Nat Neurosci 10: 93-99.

  • ↵
    1. Schultz W

    (2010) Dopamino neuronų kelios funkcijos. F1000 Biol Rep 2: 2.

  • ↵
    1. Seroogija KB,
    2. Gall CM

    (1993) Neurotrofinų ekspresija vidurio smegenų dopaminerginiais neuronais. Exp Neurol 124: 119-128.

  • ↵
    1. Shippenberg TS,
    2. Bals-Kubik R
    3. Herz A

    (1987) Opioidų motyvacinės savybės: įrodymas, kad delta-receptorių aktyvavimas tarpininkauja stiprinimo procesuose. Smegenų raiška 436: 234-239.

  • ↵
    1. Sklair-Tavron L
    2. Nestler EJ

    (1995) Morfino ir neurotrofinų, NT-3, NT-4 ir BDNF opoziciniai poveikiai lokus coeruleus neuronams in vitro. Smegenų raiška 702: 117-125.

  • ↵
    1. Sklair-Tavron L
    2. Shi WX,
    3. SB juosta,
    4. Harris HW
    5. Bunney BS,
    6. Nestler EJ

    (1996) Lėtinis morfinas sukelia matomus mesolimbinių dopamino neuronų morfologijos pokyčius. Proc Natl Acad Sci USA 93: 11202-11207.

  • ↵
    1. Spiga S
    2. Serra GP
    3. Puddu MC,
    4. Foddai M,
    5. Diana M

    (2003) Morfino pašalinimo sukeltos anomalijos VTA: konfokalinė lazerinio skenavimo mikroskopija. Eur J Neurosci 17: 605-612.

  • ↵
    1. Swanson LW

    (2004) Smegenų žemėlapiai: žiurkių smegenų struktūra (Academic, San Diego), Ed 3.

  • ↵
    1. Tenk CM,
    2. Wilson H
    3. Zhang Q,
    4. Pitchers KK,
    5. Coolen LM

    (2009) Seksualinis atlygis žiurkių patinams: seksualinės patirties poveikis sąlyginėms vietovės nuostatoms, susijusioms su ejakuliacija ir intromis. Horm Behav 55: 93-97.

  • ↵
    1. Tzschentke TM

    (2007) Užmokesčio matavimas su sąlygotos vietos pirmenybės (CPP) paradigma: paskutinio dešimtmečio atnaujinimas. Addict Biol 12: 227-462.

  • ↵
    1. van Furth WR,
    2. van Ree JM

    (1996) Seksualinė motyvacija: endogeninių opioidų įtraukimas į ventralinį tegmentalą. Smegenų raiška 729: 20-28.

  • ↵
    1. van Furth WR,
    2. Wolterink G,
    3. van Ree JM

    (1995) Vyriško seksualinio elgesio reguliavimas: smegenų opioidų ir dopamino dalyvavimas. Brain Res Brain Res Rev 21: 162-184.

  • ↵
    1. Walker JR,
    2. Chen SA,
    3. Moffitt H,
    4. Inturrisi CE,
    5. Koob GF

    (2003) Lėtinė opioidų ekspozicija padidina heroino savęs vartojimą žiurkėms. Pharmacol Biochem Behav 75: 349-354.

  • ↵
    1. Young KA,
    2. Gobrogge KL,
    3. Liu Y,
    4. Wang Z

    (2011) Pora surišimo neurobiologija: įžvalgos iš socialiai monogaminio graužiko. Priekinis Neuroendokrinolis 32: 53-69.

    •