Natūrali atlyginimų patirtis keičia AMPA ir NMDA receptorių pasiskirstymą ir funkciją branduolio akumbensuose (2012)

PLoS One ". 2012; 7 (4): e34700. doi: 10.1371 / journal.pone.0034700. Epub 2012 Balandis 18.

Karpiai KK, Schmid S, Di Sebastiano AR, Wang X, Laviolette SR, Lehman MN, Coolen LM.

Šaltinis

Anatomijos ir ląstelių biologijos katedros, Schulicho medicinos ir odontologijos mokyklos, Vakarų Ontarijo universitetas, Londonas, Ontarijas, Kanada.

Abstraktus

Natūralus atlygis ir piktnaudžiavimo narkotikai susilieja su mezolimbine sistema, kuri skatina motyvaciją ir atlygį. Narkotikai sukelia nervų adaptacijas šioje sistemoje, įskaitant transkripcijos, morfologinius ir sinaptinius pokyčius, kurie prisideda prie su narkotikais susijusių prisiminimų ir priklausomybės vystymosi ir išraiška. Anksčiau buvo pranešta, kad lytinė patirtis žiurkių patelėms, natūralus atlygio elgesys, sukelia panašią neuroplastiką mesolimbinėje sistemoje ir daro įtaką natūraliam atlygiui ir su narkotikais susijusiam elgesiui.

Dabartinis tyrimas nustatė, ar seksualinė patirtis sukelia ilgalaikius poravimosi pokyčius, arba jonotropinio glutamato receptorių prekybą ar funkciją branduoliuose accumbens (NAc), po 3 skirtingų atlyginimų laikotarpių: 1 diena, 1 savaitė arba 1 mėnuo po paskutinės poravimosi sesijos.

Vyrų „Sprague Dawley“ žiurkės 5 paeiliui iš eilės (seksualinė patirtis) arba lytiniu požiūriu naivios, kad galėtų atlikti kontrolę. Seksualiai patyrę patinai kiekvienu laiko momentu parodė palengvinimą poravimosi pradžiai ir veikimui. Kitas, intracelulinis ir membraninis paviršiaus išraiška N-metil-D-aspartatas (NMDA: NR1 subvienetas) ir α-amino-3-hidroksi-5-metilizoksazol-4-propionatas (AMPA: GluA1, GluA2 subvienetai) receptoriai NAc buvo nustatytas naudojant bis (sulfosukcinimidil) suberato (BS (3)) baltymų kryžminio ryšio analizę, po to atlikta Western Blot analizė.

NRNNUMX ekspresija padidėjo 1 dienos abstinencijos metu tiek paviršiuje, tiek ląstelėje, tačiau 1 savaitės abstinencijos laikotarpiu sumažėjo. GluA2 padidėjo intraceluliariai 1 savaitę ir padidėjo paviršiuje po 1 mėnesio abstinencijos. Galiausiai, nustatomi viso ląstelių pleistrų gnybtų elektrofiziologiniai įrašai sumažėjęs sintetinių srovių AMPA / NMDA santykis NAc apvalkalo neuronuose po to, kai lytiškai patyrę vyrai stimuliuoja žievės aferentus po visų atlygio susilaikymo laikotarpių.

Kartu šie duomenys rodo, kad seksualinė patirtis sukelia ilgalaikius glutamato receptorių ekspresijos ir funkcijos pokyčius NAc. Nors šis lytinės patirties sukeltas neuroplastiškumas nėra identiškas, jis yra panašus į psichostimuliatorių sukeliamą panašumą, todėl siūlomi bendri natūralaus ir narkotikų atlygio stiprinimo mechanizmai.

Įvadas

Mesolimbinė sistema susideda iš tarpusavyje susietų smegenų sričių, įskaitant ventralinę tegmentalinę sritį, medialinę prefrontalinę žievę (mPFC) ir nucleus accumbens (NAc). [1]. Kartu šios smegenų sritys tarpininkauja natūraliai naudingai, įskaitant maitinimą [2], [3], [4], [5], gerti [6], motinos elgesys [7], socialinis ryšys [8], [9] ir seksualinis elgesysr [10], [11], [12], [13], [14]. Elgsenos tyrimai parodė, kad žiurkių patinų lytinis elgesys yra naudingas ir stiprinamas, nes žiurkių žiurkės sudaro sąlyginę vietą pirmenybei kopuliacijai [15], [16], [17], sukurti greičiau važiavimo greitį T-mazes [18], tiesios rankos kilimo ir tūpimo takas [19] arba kliūtis [20]ir atlikti operantines užduotis, kad gautumėte prieigą prie seksualiai imlių moterų [21], [22]. Be to, seksualinė patirtis skatina vėlesnį seksualinį elgesį, įskaitant didesnę seksualinę motyvaciją ir efektyvumą [23], ir įtakoja sąlyginio vietos pirmenybės išraišką poravimuisi [15]. Šie elgesio pokyčiai rodo, kad atsiranda natūralus atlygis, susijęs su mokymusi ir atmintimi, kuri yra hipotezė, kad ji bus susijusi su mesolimbinės sistemos pokyčiais, kuriuos sukelia poravimosi elgesio patirtis. [11].

Palaikydami šią hipotezę, anksčiau parodėme, kad seksualinė patirtis sukėlė deltafosB reguliavimą NAc, kuris, savo ruožtu, buvo labai svarbus palengvinant seksualinio elgesio inicijavimą ir atlikimą po seksualinės patirties [23].

Be to, seksualinė patirtis padidino dendritų arborizaciją ir spyglių skaičių NAc [11]. Panašius transkripcijos ir morfologijos pokyčius sukelia psichostimuliantai [24], [25], [26]. Buvo įrodyta, kad seksualinė patirtis keičia reagavimą į piktnaudžiavimo vaistus, įskaitant jautrumą psichostimuliantų sukeltam lokomotoriniam aktyvumui (kryžminiam jautrinimui) ir sustiprintą psichostimuliatoriaus atlygį [10], [11], [27]. Buvo įrodyta, kad pasibaigus vaisto vartojimui, vaisto vartojimo nutraukimo ar susilaikymo laikotarpis yra labai svarbus norint paskatinti narkotikus, vadinamą troškimo inkubacija. [28]. Panašiai abejotinas abstinencijos laikotarpis po seksualinės patirties yra labai svarbus seksualinės patirties sukeltam psichostimuliatoriaus atlygio didinimui ir padidėjusiam dendritinių šakų ir stuburo didinimui NAc. [11]. Taigi seksualinė patirtis ir vėlesnis susilaikymas nuo šio natūralaus atlygio sukelia ilgalaikius mezolimbinės sistemos pokyčius, kurie yra panašūs į psichostimuliatorių sukeltus pokyčius ir daro įtaką elgsenos atsakams tiek į natūralų, tiek į narkotikų atlygį.

Buvo pranešta, kad psichostimuliantai sukelia daug papildomų NAc pokyčių, iš kurių kelios priklauso nuo vaisto abstinencijos laikotarpio. Šie pokyčiai apima glutamato receptorių prekybos ir funkcijos pokyčius [29], [30]. Pakartotinis kokainas ilgą abstinencijos laikotarpį (3 – 7 savaitės), padidėja α-amino-3-hidroksi-5-metilizoksazol-4-propionato (AMPA) receptorių subvienetų ir N-metil-D-aspartato paviršiaus ekspresijos (NMDA) receptorių subvienetais, o po a trumpas abstinencijos laikotarpis (1 diena).

Be to, skirtingi AMPA ir NMDA receptorių subvienetai yra skirtingai paveikti vaisto ekspozicijos ir vėlesnių abstinencijos laikotarpių, nes GluA2 trūksta AMPAR paviršiaus ekspresija reguliuojama po ilgų abstinencijos laikotarpių (5 – 7 savaitės) [31], [32]. PFC suteikia pagrindinį glutamaterginį įnašą NAc [33] ir elektrofiziologiniai tyrimai parodė, kad pakartotinis kokainas sukelia AMPA / NMDA santykio pokyčius PFC reaguojantiems NAc lukštų neuronams ir NAc neuronų vidinio sužadinimo pokyčius, kurie gali priklausyti nuo vaisto abstinencijos laikotarpio ir NAc subregiono [34], [35], [36], [37], [38], [39], [40], [41]. Toks vaisto sukeltas nervų plastiškumas prisideda prie psichostimuliančio elgesio jautrinimo pokyčių [42], [43], [44], [45] ir narkotikų paieška [31], [46], [47].

Šiuo metu nežinoma, ar panašios glutamato receptorių prekybos ir funkcijos adaptacijos atsiranda po natūralios atlygio patirties ir vėlesnio susilaikymo nuo natūralaus atlygio. Todėl šio tyrimo tikslas buvo išbandyti hipotezę, kad seksualinė patirtis sukelia AMPA arba NMDA receptorių prekybos pokyčius NAc ir PFC-reaguojančių NAc lukštų neuronų sinaptinio stiprumo pokyčius. Be to, šios priemonės buvo nustatytos 3 skirtingais laikais po paskutinės poravimosi sesijos, siekiant ištirti abstinencijos periodo poveikį nuo natūralaus atlygio (1 savaitė arba 1 mėnuo po galutinio poravimosi) dėl plastiškumo NAc, lyginant su abstinencijos laikotarpiu (1 dieną po paskutinio poravimosi).

rezultatai

Eksperimentas 1: lyties palengvinimas

Eksperimento 1 tikslas buvo nustatyti lytinio elgesio palengvinimo po seksualinės patirties laiką. Anksčiau lytinio elgesio palengvinimas buvo nustatytas iki 1 savaitės po paskutinės poravimosi sesijos [23], tačiau anksčiau nebuvo tirta, ar seksualinės elgsenos sukeltas lytinio elgesio palengvinimas išlaikomas po ilgai trunkančio abstinencijos laikotarpio. Čia buvo ištirtos dvi patinų žiurkių grupės ilgalaikio seksualinio elgesio palengvinimo išraiška, arba 1 savaitė, arba 1 mėnuo po paskutinės poravimosi sesijos. Pirma, abi grupės parodė seksualinės elgsenos palengvinimą per penkias kasdienes poravimosi sesijas, kaip parodė žymiai trumpesnės latencijos (Pav. 1A; 1 savaitė, p=0.028; 1 mėnuo, p=0.019), intromission (Pav. 1B; 1 mėnuo, p=0.016; 1 savaitės tendencija, p=0.078) ir ejakuliacija (Pav. 1C; 1 savaitė, p=0.016; 1 mėnuo, p=0.008) 5 dieną, palyginti su lytinės patirties 1 dieną. Be to, seksualinio elgesio palengvinimas buvo išlaikytas 1 savaitę ir 1 mėnesį po paskutinės poravimosi sesijos, lyginamųjų parametrų vėlavimai buvo trumpesni bandymo dieną (1 savaitė arba 1 mėnesio po 5 seksualinės patirties), lyginant su poravimosi diena 1 (Pav. 1A: prijungimo latencija, 1 mėnuo, p=0.016; Pav. 1B: intromission latency, 1 mėnuo, p=0.046; Pav. 1C: ejakuliacijos latencija, 1 savaitė, p=0.016; 1 mėnuo, p=0.008) ir jokių reikšmingų skirtumų tarp poravimosi dienos 5 ir bandymo dienos jokiam elgsenos parametrui bet kuriuo metu (išskyrus sujungimo latentą 1 mėnesį; p=0.016). Taigi 1 mėnesio poravimosi susilaikymo laikotarpiu buvo išlaikytas patirties sukeltas lytinio elgesio palengvinimas.

1 pav    

Ilgalaikis palengvinto seksualinio elgesio palaikymas.

Eksperimentas 2: jonotropinis glutamato receptorių subvieneto perskirstymas / išraiška

Eksperimento 2 tikslas buvo nustatyti jonotropinių glutamato receptorių subvienetų ekspresiją lytiškai patyrusiems ir anksčiau negydytiems vyrams po skirtingų poravimosi abstinencijos laikotarpių. AMPAR ir NMDAR subvieneto paviršius ir ląstelių vidiniai baseinai buvo kiekybiškai įvertinti naudojant membraną nepralaidžią kryžminio ryšio reagentą (BS3), kuris selektyviai modifikavo paviršiuje ekspresuotą baltymą, leidžiantį atskirti nuo nemodifikuotų tarpląstelinių baltymų, naudojant SDS-PAGE ir Western Blot analizę. Pateikiami tipiniai blotai, iliustruojantys paviršiaus (didelės MW,> 250 kDa) ir tarpląstelines juostas 2M pav.

2 pav  
Glutamato receptorių subvieneto ekspresija ir pasiskirstymas NAc.

Vieną dieną po seksualinės patirties NR1 subvieneto ekspresija paviršiuje (S), ląstelėje (I) ir visame (S + I) buvo žymiai padidinta (S, Pav. 2A, p=0.025; Aš, 2D pav, p=0.035; S + I, 2J pav, p=0.023) lytiniu būdu patyrusiems gyvūnams, palyginti su lytiniu požiūriu \ t2N pav). Vieną savaitę po paskutinio poravimosi reikšmingai sumažėjo NR1 santykis su ląstelėmis (S / I santykis); 2G pav; p=0.024) be reikšmingų paviršiaus ar ląstelių ląstelių ekspresijos pokyčių, lyginant su lytiniu požiūriu negydytiems gyvūnams. GluA2 ekspresija gerokai padidėjo vieną savaitę po paskutinio poravimosi, ląstelių ir visiškoje ekspresijoje, be paviršiaus ekspresijos pokyčių (I, 2E pav, p=0.026; S + I, 2K pav, p=0.014) lytiniu būdu patyrusiems gyvūnams, palyginti su \ t2O pav). Kadangi praėjus vienam mėnesiui po paskutinio poravimosi, GluA2 reikšmingai padidėjo S / I santykiu (2H pav; p=0.046), kartu su statistine tendencija padidinti paviršiaus išraišką (Pav. 2B; p=0.055) lytiškai patyrusiems gyvūnams, lyginant su anksčiau negydytomis kontrolėmis. GluA1 pokyčiai nebuvo nustatyti 1 dieną arba 1 savaitę po paskutinio poravimosi. Po 1 mėnesio GluA1 paviršiaus ir S / I santykio išraiška padidėjo lytiniu būdu patyrusiems gyvūnams, palyginti su naiviais kontroliniais tyrimais, nors buvo nustatytos tik statistinės tendencijos (S, Pav. 2C, p=0.098; S / I, 2I pav, p=0.083). Taigi, apibendrinant, pradžioje 1 abstinencijos dieną, buvo nustatytas bendras NR1 ekspresijos padidėjimas, po to padidėjo GluA2 intracelulinė ekspresija po 1 savaitės susilaikymo ir padidėjusi GluA2 ir GluA1 paviršiaus ekspresija po 1 mėnesio abstinencijos (tik pastaroji) kaip statistinė tendencija).

Eksperimentas 3: elektrofiziologija

Eksperimento 3 tikslas buvo nustatyti, ar seksualinė patirtis keičia PAP-reaguojančių NAc apvalkalo neuronų sinchroninį stiprumą. Sintetinės srovės buvo užfiksuotos vidutinio spygliuočio neuronuose, esančiuose seksualiai patyrusių ir anksčiau negydytų vyrų NAc lukšte, stimuliuojant pluoštus, kurie, kaip manoma, atsirado iš PFC. AMPA / NMDA santykis buvo žymiai sumažintas lytiniu būdu patyrusių gyvūnų 1 dieną (p=0.005), 1 savaitė (p=0.016) ir 1 mėnesį (p=0.005) po paskutinės poravimosi sesijos, lyginant su lytiniu požiūriu \ t3A, B, C pav). Siekiant nustatyti, ar įvyko presinaptinio siųstuvo išleidimo tikimybės pasikeitimas, buvo ištirti porinių impulsų santykiai. Sistemos, susijusios su siųstuvo paleidimu, palengvinimo, kuris įvyko reaguojant į suporuotų impulsų stimuliavimą, reikšmė nebuvo skirtinga tarp lytiškai patyrusių ir anksčiau negydytų gyvūnų.3D pav).

3 pav    

AMPA / NMDA santykiai seksualiai patyrusiems ir anksčiau negydytiems vyrams 1 dieną, 1 savaitę arba 1 mėnesį po paskutinės poravimosi ar gydymo sesijos.

Diskusija

Dabartinis tyrimas parodė, kad lytinė patirtis sukelia jonotropinio glutamato receptorių pasiskirstymo ir veikimo pokyčius žiurkių patelėms ir kad kai kurie iš šių pokyčių skiriasi priklausomai nuo abstinencijos trukmės nuo seksualinio elgesio. Lytiniu požiūriu patyrę vyrai, palyginti su lytiniu požiūriu naiviais vyrais, parodė trumpalaikį viso NR1 subvieneto ekspresijos padidėjimą dėl padidėjusio paviršiaus ir ląstelių receptorių baseinų. GluA2 ekspresija padidėjo ląstelėje ir paviršiuje po 1 savaitės ir 1 mėnesio atlygio susilaikymo. Galiausiai, GluA1 išraiška niekada nebuvo reikšmingai pakeista. Be to, lytiškai patyrę gyvūnai turėjo tiesioginį ir ilgalaikį sumažėjusį AMPA / NMDA santykį, užregistruotą iš PFC reaguojančių NAc lukštų neuronų, palyginti su naiviais kontroliniais preparatais. Mūsų rezultatai rodo, kad glutamato receptorių prekyba priklauso nuo abstinencijos laikotarpio trukmės nuo seksualinio elgesio, o sinapsijos stiprumo pakitimai sinapsiuose, kuriuos sudaro prefrontalinės žievės afferentai į NAc korpusą, nėra. Šie pagrindiniai rezultatai yra panašūs į ataskaitas po pakartotinio kokaino vartojimo pagal AMPAR subvienetą, padidėjusį paviršiaus ekspresiją po ilgos narkotikų abstinencijos ir neatidėliojantį AMPA / NMDA santykio sumažėjimą, tačiau skiriasi atsižvelgiant į trumpalaikį NMDAR subvieneto ekspresiją ir nuolatinį AMPA sumažėjimą / NMDA santykis.

Seksualinis elgesys yra labai naudingas ir stiprinamas. Taigi, kai žiurkių patelė patiria seksualinę patirtį, ji turi didesnę seksualinę motyvaciją ir efektyvumą, o tai rodo trumpesnės latencijos, kad būtų pradėta poravimosi ir ekrano ejakuliacija, ir padidėjęs kopuliacijos efektyvumas [10], [23]. Čia buvo patvirtinta, kad šis seksualinio elgesio palengvinimas pasirodė 1 savaitę po poravimosi, ir nustatyta, kad iki 1 mėnesio poravimosi susilaikymas palengvino seksualinį elgesį. Lyties patirties sukeltas lytinio elgesio palengvinimo laikinas pobūdis atitinka mūsų ankstesnį tyrimą, rodantį, kad kryžminis jautrumas yra amfetamino lokomotorinį poveikį skatinantis poveikis, kai buvo tiriamas toks pat poravimosi laikotarpis [11]. Ankstesniuose tyrimuose NAc dalyvavo kaip palengvinto seksualinio elgesio palaikymo tarpininkas. Ir NAc šerdies, ir apvalkalo neuronai aktyvuojami poravimu arba su padažu susijusiais ženklais [48]ir seksualinė patirtis padidina dendritinių šakų pasiskirstymą ir spyglius NAc šerdyje ir lukštui savaitę po poravimosi [11]. Be to, mažinant transkripcijos faktoriaus deltaFosB aktyvumą NAc per virusinį vektorinį transliavimą, sumažėja patirties sukeltas lytinio elgesio palengvinimas [23], [49]. Tšios išvados rodo, kad NAc yra konkrečiai susijusi su seksualinės elgsenos stiprinimu, ir yra potencialiai svarbi seksualinės patirties kryžminio jautrumo narkotikų poveikiui [23].

Dabartinis tyrimas parodė, kad seksualinė patirtis sukėlė AMPAR sintezės ir (arba) prekybos žmonėmis pokyčius, kurie priklausė nuo seksualinės abstinencijos laikotarpio trukmės. Pirma, padidėjo GluA2 ekspresija ląstelėse 1 savaitę, o tai rodo, kad padidėja GluA2 receptorių sintezė ir (arba) endocitozė. Tada 2 mėnesį po paskutinio poravimosi buvo nustatytas padidėjęs GluA1 paviršiaus ir (arba) ląstelių santykis (daugiausia dėl padidėjimo paviršiuje), o tai rodo, kad receptoriai perskirstomi į ląstelės paviršių. AMAP prekybos žmonėmis pokyčiai po kokaino poveikio taip pat priklausė nuo narkotikų vartojimo trukmės [50]. Paprastai ląstelių paviršius ir sinaptosominis GluA1 ir GluA2 / 3 kiekis po savaitės susilaikymo nuo kokaino padidėja ir palaikomi iki 3 savaitės po paskutinės kokaino injekcijos. [51], [52], [53], [54], [55]. Po ilgesnio vaisto abstinencijos periodo (5 savaitės), GluA1 paviršiaus ekspresija išliko aukšta ir šiek tiek sumažėjo GluA2 paviršiaus ir (arba) ląstelių santykis, todėl GluA2 trūksta AMPARs buvo reguliuojamas [31], [56]. Šis padidėjęs GluA2 neturinčių receptorių ekspresija paviršiuje buvo aptiktas po ilgai nutraukto gydymo (5 – 7 savaitės) nuo išplėstinės kokaino savarankiško vartojimo, bet po ilgalaikio pašalinimo iš nepastovaus kokaino [32]. Be to, GluA2 stokojamo AMPAR blokada neleido ieškoti narkotikų [31], [57]. AMPA receptorių prekybos po seksualinės patirties ir abstinencijos pokyčiai šiek tiek skiriasi nuo kokaino sukeltos prekybos. Kalbant apie padidintą GluA1 paviršiaus ekspresiją, dabartiniai duomenys rodo, kad gliA1 receptorių padidėjimas membranos paviršiuje yra nedidelis, nes 1 mėnesį po lytinės patirties nepasiekė statistinio reikšmingumo, o tai rodo, kad GluA1 paviršiaus ekspresija gali reikalauti ilgesnių abstinencijos laikotarpių tolesniam augimui - reguliavimas, panašus į kokaino sukeltus pokyčius po 5 savaitės susilaikymo [31]. Be to, dabartiniai duomenys skiriasi pagal GluA2, kuris po 5 arba daugiau savaičių be kokaino sumažėjo, o seksualinė patirtis ir 1 abstinencijos mėnuo padidino GluA2 paviršiaus išraišką. Mes manome, kad AMPA receptorių reguliavimas NAc gali būti labai svarbus ilgalaikiam seksualinės patirties poveikiui dėl vėlesnio atlygio elgesio ir padidėjusio amfetamino atlygio [11] po ilgalaikio abstinencijos laikotarpio, kuris buvo ištirtas šiame tyrime. Priešingai, AMPA receptorių ekspresijos ar prekybos pokyčiai nėra labai svarbūs trumpalaikiam seksualinės patirties poveikiui atlygio elgesiui. Remiant, daugelis pranešimų parodė, kad pakeistas AMPAR perdavimas nėra būtinas narkotikų sukeliamam elgsenos jautrinimui psichostimuliantams (peržiūrai) [30]). Jautrinimas ir kryžminis jautrinimas buvo pastebėtas po 1 darbo užmokesčio susilaikymo dienos be pakeitimų AMPAR padidėjime [11], [53]. Be to, elgsenos jautrinimas buvo įrodytas pakartotinai veikiant psichostimuliantiniam amfetaminui, kuris nebuvo susijęs su jokiais AMPAR perdavimo pokyčiais. [50], [53], [58].

NMDAR vaidmuo buvo daug mažiau ištirtas nei AMPAR, atsižvelgiant į elgesio jautrinimą ir receptorių prekybą. Neselektyvus NMDAR antagonistas (MK-801) užkirto kelią lokomotorinio jautrumo padidėjimui su kokainu ar amfetaminu, tačiau nesugebėjo blokuoti šio jautrumo ekspresijos [59], [60]. NMDAR vaidmuo seksualinėje elgsenoje buvo minimaliai ištirtas naudojant sisteminį arba tarp medialinį MKP-801 srities preopticinės zonos vartojimą, kuris sumažino lytinį elgesį anksčiau negydytiems ir patyrusiems patinams. [61], [62], [63]. NMDAR taip pat tarpininkauja kitiems gamtos pranašumams, nes NMDAR antagonistai sumažino maistą kūdikiams [64] ir padidėjęs maistinis troškimas žiurkėms [65]. NMDAR ekspresija NAc yra keičiama dėl kokaino poveikio, o ilgesnės (3 savaitės), bet ne trumpos (1 dienos) abstinencijos periodai nuo pakartotinio kokaino padidino NMDAR subvienetų ekspresiją (NR1, NR2A, NR2B) [55], [60]. Dabartiniai rezultatai rodo, kad seksualinė patirtis padidino bendrą NR1 ekspresiją 1 dieną dėl padidėjusio paviršiaus ir ląstelių receptorių baseinų kiekio, be to, sumažėjo paviršiaus ir (arba) ląstelių santykis po 1 savaitės abstinencijos periodo. Todėl mes manome, kad pradinis NMDAR perdavimo padidėjimas gali būti labai svarbus trumpalaikiam seksualinės patirties poveikiui vėlesniam atlygio elgesiui.

Be to, trumpalaikis NR1 subvieneto padidėjimas po seksualinės patirties gali reikšti seksualinės patirties sukeltą tylų sinapso formavimąsi. Huang et al [66] parodė, kad pakartotinis kokainas sukėlė tylias sinchronizacijas NAc korpuse, kuriame buvo svarbiausias post-synaptic naujų NMDAR įdarbinimas. Tylios glutamaterginės sinapsės išreiškia funkcines NMDAR sukeltas sroves be AMPAR tarpinių srovių [67], [68], [69]. Buvo įrodyta, kad ankstesnis kokaino poveikis gali sukelti tylias sinapsines smegenis ir kad šios naujai sukurtos sinapsės suteikia pagrindą tolesniam patyrimui [66], [70]. NMDAR sudaro mažiausiai vienas NR1 subvienetas kartu su vienu ar keliais NR2 subvienetais (A – D). NR1 yra reikalingas funkcinių kanalų formavimui; todėl NR1 ekspresijos pokyčiai gali suteikti funkcinių NMDA receptorių skaičiaus pokyčių indeksą. Pakartotinis kokainas skatina NR1 ir NR2B turinčių NMDAR įterpimą ir sukuria tylias sinapsines NAc korpuse. Šios NR2B turinčios tylios sinapsijos buvo slopinamos vartojant kokainą, kuris susilpnino tolesnį lokomotorinį jautrinimą kokainui. [71]. Tylus sinapsių skaičius sumažėjo po kelių dienų nuo kokaino susilaikymo, tuo tarpu judesio jautrinimas išliko, o tai rodo, kad per anksti sinapsijos gali atsirasti formuojant naujas plastikines grandines, kurios gali būti pakeistos (galbūt dėl ​​atlygio susilaikymo), kad būtų tarpininkaujama šiems nuolatiniams elgesiams. Taigi, mes hipotezuojame, kad NR1 bendros išraiškos reguliavimas po seksualinės patirties gali būti dėl padidėjusio NMDAR skaičiaus naujai suformuotose tylose sinapse. Be to, seksualinė patirtis, po kurios ilgai trunka abstinencija, gali lemti sumažėjusius tylos sinapsius, paaiškindamas sumažėjusį NR1 paviršiaus / ląstelių santykį ir padidėjusį AMPAR subvienetų su ilgalaikiais abstinencijos periodais, nes sinapsijos yra nepatvirtintos.

Dabartinės išvados, kad seksualinė patirtis ir atlygio susilaikymo laikotarpiai sukėlė glutamato receptorių prekybos ir išraiškos pokyčius, parodė, kad sinchroninio stiprumo pakitimai atsirado dėl dirginamojo sinapso NAc. Todėl elektrofiziologijos procedūra, paremta ankstesniu Tomaso ir kolegų tyrimu [72] buvo naudojamas tirti glutamato receptorių funkciją NAc lukštų neuronuose, vadovaujantis tais pačiais abstinencijos periodais, kurie parodė, kad jie sukelia jautrintą lytį ir vaistų elgseną, ir glutamato receptorių perskirstymą. Panašiai kaip ir ankstesniuose tyrimuose po kokaino poveikio, plastiškumas buvo nustatytas NAc apvalkalo sinapse, kurios reagavo į PFC įvestį. PFC yra gerai įsitvirtinusi, kad galėtų atlikti pagrindinį vaidmenį priverstinio elgesio ir piktnaudžiavimo narkotikais srityje [73], [74]. PFC taip pat yra labai svarbus kompulsinio seksualinio elgesio vystymuisi ar išraiškai, nes PFC pažeidimai sukelia netinkamą lytinio elgesio ieškojimą žiurkių patinams [75]. Dabartiniai duomenys parodė, kad seksualinė patirtis sukėlė neatidėliotiną ir ilgalaikį AMPA / NMDA santykio sumažėjimą PFC reaguojančių NAc ląstelių neuronuose.

Anksčiau buvo daroma prielaida, kad pagrindinis skirtumas tarp natūralaus ir narkotikų atlygio yra tai, kad AMPA / NMDA santykio pokyčiai po natūralaus atlygio yra laikini ir išnyks su laiku, o narkotikų sukeliami pokyčiai išliks [76]. Ši hipotezė buvo pagrįsta išvadomis, kad kokainas, bet ne maistas ar sacharozė sukėlė ilgalaikį AMPA / NMDA santykio padidėjimą VTA [76]. Atvirkščiai, dabartinis tyrimas rodo, kad seksualinė patirtis iš tikrųjų sukėlė ilgalaikį AMPA / NMDA santykio pasikeitimą NAc.

Tačiau lyties sukeltas NAc apvalkalo plastiškumas skiriasi nuo kokaino poveikio, kuris, kaip įrodyta, siejamas su dvipusiu AMPAR tarpininkaujančio sužadinimo pokyčiu. Po kokaino ekspozicijos ir vienos vaisto abstinencijos dienos sumažėjo AMPA / NMDA santykis [72] ir degimo pajėgumų depresija [34] buvo rastas panašus į rezultatus, gautus dėl trumpalaikio seksualinės patirties poveikio. Tačiau po 14 dienų abstinencijos trukmės nuo kokaino, NAc lukšto neuronai padidino AMPA / NMDA santykį, o tai rodo, kad susilaikymas nuo kokaino sustiprino sinaptinį stiprumą NAc. [54]. HDėl kokaino poveikio atsiranda dvipusis sinaptinio plastiškumo pokytis, sumažėjęs AMPA sukeltas atsakas netrukus po vaisto poveikio, tačiau padidėjęs AMPAR sukeltas susijaudinimas su ilgai trunkančiu vaistų susilaikymu. Priešingai, užsitęsęs susilaikymas nuo seksualinės patirties lėmė sumažėjusį AMPAR sukeltą jaudrumą NAc korpuse, nors judėjimo ir jautrumo, susijusio su amfetamino vartojimu, jautrumas yra stebimas šių abstinencijos laikotarpių metu. [11]. Tačiau kitose ataskaitose nustatyta, kad trumpas ir ilgas abstinencijos laikotarpis po kokaino ekspozicijos sumažėjo vidinis membraninis sužadinimas tiek šerdyje, tiek lukštuose. [35], [36], [37], [38], [39], [40], [41], rodantis, kad nėra dvikrypčių pokyčių, panašių į seksualinės patirties poveikį. Be to, dabartiniai rezultatai rodo, kad seksualinė patirtis nesukelia presinaptinio glutamato išsiskyrimo tikimybės pokyčių dėl skirtumų tarp porų pulso santykio. Kalivas ir kolegos parodė, kad pakartotinis kokainas sukelia ekstraląstelinių ne sinaptinių glutamato junginių mediatorių pokyčius NAc, ar tokie pokyčiai atsiranda lytinės patirties atžvilgiu (peržiūrai) [77]).

Tikėtina, kad glutamaterginis įnašas į NAc iš kitų smegenų sričių, nei PFC, atlieka funkcinį vaidmenį seksualinės patirties pasekoje vėlesniame atlygio elgesyje. Tjis gauna glutamaterginį įnašą iš bazolaterinės amygdalos (HLA) ir hipokampo ventralinio subiculumo [78]. BLA atlieka svarbų elgesį už atlygį [79], [80], yra labai svarbi aplinkos stimulų susiejimui su seksualiniu atlygiu [81] ir instrumentinis elgesys inicijuojant poravimą [82]. Vadinasi, yra viliojanti spėlioti, kad ir seksualinės patirties sukeltas sinapsinio stiprumo pakitimas, reaguojant į BLA reaguojantį sinapses.

Sumažėjęs AMPA / NMDA santykis PFC sinapsėse NAc apvalkale atitinka padidėjusią NR1 ekspresiją netrukus po seksualinės patirties, tačiau neatitinka padidėjusio GluA2 ir GluA1 po ilgų abstinencijos laikotarpių. Vienas iš paaiškinimų yra tas, kad receptorių prekyba vyko sinapse, gaunančioje glutamaterginį indėlį, atsirandantį iš kitų smegenų sričių, be PFC. Be to, NAc šerdies įtraukimas, be NAc apvalkalo, baltymų mėginiuose neleidžia atlikti tikslių koreliacijų tarp baltymų ekspresijos ir sinaptinių stiprumo duomenų. Nepaisant to, dabartinės išvados aiškiai rodo, kad natūralus atlygio elgesys ir paskesnis atlygio susilaikymas sukelia sinaptinį plastiškumą NAc, panašumą ir skirtumus nuo psichostimuliantų sukeltų.

IIšvada, seksualinė patirtis ir vėlesnis vyrų žiurkių atlygio susilaikymas parodė, kad sukelia tiesioginį ir ilgalaikį seksualinės elgsenos palengvinimą, panašų į seksualinės patirties poveikį jautrinimui amfetamio judėjimo sukeliamam poveikiuine [11], ir buvo susijęs su neatidėliotinu ir ilgalaikiu AMPA / NMDA santykio sumažėjimu sincse NAc apvalkale. Be to, lytinė patirtis sukėlė greitą NMDAR reguliavimą ir lėtai plėtojant AMPAR perskirstymą į NAc neuronų paviršių. Taigi, panašus į psichostimuliatorių poveikį, natūralus atlygio elgesys gali sukelti ilgalaikius glutamato receptorių ekspresijos, prekybos žmonėmis ir jaudrumo pokyčius. Tačiauilgas susilaikymas nuo seksualinės patirties, skirtingai nei po kokaino, sukėlė ilgalaikį AMPA / NMDA santykio mažėjimą NAc korpuse. Buvo pasiūlyta keletas išbandomų hipotezių, susijusių su galimais pagrindiniais veiksniais, dėl kurių atsirado šis neatitikimas, įskaitant BLA reaguojančių sinapšų pokyčius po natūralios atlyginimų patirties. Šie duomenys dar kartą parodo panašumus ir skirtumus tarp ilgalaikių natūralios ir narkotikų atlygio pasekmių pasekmių ir gali padėti geriau suprasti, kaip narkotikai gali veikti šiam natūraliam atlygio būdui.

Metodai

Etikos ataskaita

Visos procedūros buvo patvirtintos Vakarų Ontarijo universiteto Gyvūnų priežiūros ir naudojimo komitete ir atitiko Kanados Tarybos rekomendacijas dėl gyvūnų priežiūros gairių, kuriose dalyvauja stuburiniai gyvūnai.

gyvūnai

Suaugę vyrų Sprague Dawley žiurkės (eksperimentas 1 ir 2: 10 – 12 savaitės; eksperimentai 3, 8 – 10 savaitės bandymų pradžioje) buvo gauti iš Charles River Laboratories (Senneville, QC, Kanada). Toks pat lyties gyvūnai buvo poromis laikomi plexiglas narveliuose su tunelio vamzdeliu temperatūros reguliuojamoje patalpoje, palaikomi 12 / 12 val. ad libitum išskyrus elgesio bandymus. Stimulio patelėms (210 – 220 gramai) poravimosi metu po dvišalės ovariektomijos po oda buvo implantas, kurio sudėtyje yra 5% estradiolio benzoato ir 95% cholesterolio. Seksualinis imlumas buvo pradėtas vartoti 500 µg progesteroną 0.1 mL sezamo aliejuje maždaug prieš 4 valandas prieš bandymą.

Seksualinė patirtis

Visi žiurkių patinai buvo lytiškai naivūs prieš pradedant tyrimus. Poravimosi sesijos įvyko ankstyvosios tamsos fazės metu (tarp 2 – 6 valandų po tamsiojo laikotarpio pradžios), kai apšviestas raudonas. Kiekvieno poravimosi metu žiurkėms buvo leista kopuliuoti į ejakuliaciją arba iki 1 valandos ir užregistruoti seksualinės elgsenos parametrai, įskaitant: prijungimo latentinį laiką (ML; laikas nuo moters įvedimo iki pirmojo kalno), intromizacijos latentinį laiką (IL; iki pirmojo kalno su makšties įsiskverbimu), ir ejakuliacijos latentinis laikas (EL; laikas nuo pirmojo įsiskverbimo iki ejakuliacijos) [83]. Lytiškai naivūs kontroliniai vaistai buvo tvarkomi, laikomi tose pačiose patalpose kaip poravimosi gyvūnai ir tokiu būdu buvo veikiami tokie patys triukšmo lygiai, bendri trikdymai ir tolimos smegenų kvapai, bet jiems nebuvo leista bendrauti ar susitarti su imliomis moterimis.

Eksperimentas 1: lyties palengvinimas

Sprague Dawley žiurkių patelės, sujungtos savo namuose, 5 iš eilės, kasdienės poravimosi sesijos. Gyvūnai buvo suskirstyti į 2 eksperimentines grupes ir buvo išbandyti seksualiniam elgesiui 1 savaitę arba 1 mėnesį po paskutinės poravimosi sesijos (bandymo diena; n=7 grupėje). Grupės buvo susietos su seksualinės elgsenos parametrais ir jokių reikšmingų skirtumų tarp grupių nebuvo aptikta jokio lytinio elgesio matavimo metu per poravimosi sesiją, tuo pat metu įgyjant seksualinę patirtį.

Duomenų analizė

Grupės palyginimuose buvo vertinama seksualinės patirties 1 ir 5 diena, siekiant nustatyti lytinio elgesio su seksualine patirtimi palengvinimą tarp 1 dienos ir testo dienos, o tarp 5 ir Test Day (1 savaitės arba 1 mėnesio po 5 mėnesio). , intromizacijos ir ejakuliacijos latentai naudojant Wilcoxin pasirašyto rango testą su reikšmingumo lygiu 5%.

Eksperimentas 2: jonotropinis glutamato receptorių subvieneto perskirstymas / išraiška

Siekiant ištirti jonotropinių receptorių persiskirstymą, buvo panaudota panaši eksperimento 1 paradigma. Seksualiai naivios Sprague Dawley žiurkės buvo suskirstytos į seksualiai patyrusias ir naivias grupes. Lytiškai patyrusioms grupėms seksualinė patirtis buvo įgyta per 5 nuoseklius kasdienius poravimosi užsiėmimus (kaip aprašyta aukščiau). Lytiškai patyrę vyrai buvo suskirstyti į 3 eksperimentines grupes (pritaikytas seksualinės elgsenos parametrams) audinių surinkimui, 1 dieną, 1 savaitę arba 1 mėnesį po paskutinės poravimosi sesijos. Seksualiai naivių kontrolinių ančių (apdorojamų taip, kaip aprašyta aukščiau) smegenys buvo surinktos tuo pačiu metu po galutinio apdorojimo. Į grupes įtraukta: seksualiai patyrusi (AMPAR: 1D, n=9; 1W, n=12; 1M, n=12; NMDAR: 1D, n=9, 1W arba 1M, n=6) arba seksualiai naivus (AMPAR: 1D, n=9; 1W, n=12; 1M, n=12; NMDAR: 1D, n=9, 1W arba 1M, n=6).

Paviršiaus receptorius

Gyvūnai buvo sunaikinti natrio pentobarbitaliu (270 mg / kg; ip), po to nukirpti galvą. Po nukirpimo kiekvienos smegenys buvo greitai pašalintos ir nedelsiant įdėtos į ledo šaltą fiziologinį tirpalą. Dvišalis NAc buvo išpjautas naudojant žiurkės smegenų matricą (ASI Instruments, Warren, MI, JAV) ir skalpelio ašmenis pagal NAc ribas, kurias apibrėžė Paxinos ir Watson (1998). Toliau NAc audiniai buvo susmulkinti į 400 × 400 µm kubelius, naudojant McIlwain audinių smulkintuvą (Vibratome, Sent Luisas, MO, JAV). AMPA ir NMDA receptorių subvieneto kryžminio susiejimo metodika buvo pagrįsta Boudreau & Wolf [53]. Nedelsiant po smulkinimo smegenų audinys buvo greitai perkeliamas į Eppendorfo mėgintuvėlį, kuriame yra 1 ml ledo šalto aCSF su baltymo skersinio reagavimo bis (sulfosukcinimidil) subertuotu (BS).3, 2 mM; Pierce Biotechnology, Rockford, IL, USA) ir 30 minučių inkubuojama ant svirties 4 ° C temperatūroje. BS3 neperžengia ląstelių membranų, leidžiančių selektyviai susieti paviršiaus išreikštus baltymus su sulfidinėmis jungtimis, tokiu būdu sudarant didelės molekulinės masės agregatus, o ląsteliniai baltymai lieka nepakeisti. Ši reakcija leidžia išskirti paviršiaus ir ląstelių vidinius baltymus pagal MW, naudojant elektroforezės natrio dodecilo sulfato-poliakrilamido (SDS-PAGE) ir Western Blot analizę. Kryžminio ryšio reakcija buvo nutraukta pridedant 100 µL 1 M glicino 10 min., Esant 4 ° C. Audinys buvo išpilstytas centrifuguojant 14 000 aps./min. 2 minučių 4 ° C temperatūroje ir supernatantas buvo išmetamas. Granulės buvo resuspenduotos 400 µL ledo šaltinio lizės buferyje [25 mM Hepes (pH 7.4), 500 mM NaCl, 2 mM EDTA, 1 mM DTT, 1 mM PMSF, 20 mM NaF, 0.1% Nonidet P-40 (0.1 %), proteazių inhibitoriaus kokteilis (Ministop, Roche Diagnostics GmbH, Manheimas, Vokietija) ir 1 × fosfatazės inhibitoriaus kokteilis (Phosstop, Roche Diagnostics GmbH,)]. Mėginiai buvo ultragarsuojami 5 sekundėms, kad sutrikdytų audinį, po to 14 min. 000 ° C temperatūroje centrifuguojami 2 4 aps./min. Supernatantas buvo perkeltas į naują Eppendorf mėgintuvėlį, iš kurio į ledą buvo patalpintas 30 µL mėginys, o likęs supernatantas buvo laikomas -80 ° C vakcinos analizei. Kiekvienam mėginiui kryžminių lizatų baltymų koncentracija buvo nustatyta naudojant BCA tyrimą (ThermoFisher Scientific Inc., Waltham, MA) ir NanoDrop ND-1000 spektrofotometrą (ThermoFisher Scientific Inc., Waltham, MA).

Western Blot analizė

Baltymų mėginiai (20 µg) buvo pakrauti ir elektroforezuojami 4-15% gradiento Tris-HCl geliuose (Bio-Rad Laboratories Ltd., Mississauga, Ontarijas, Kanada), naudojant Mini Trans-Blot Cell sistemą (Bio-Rad Laboratories Ltd.) ir Tris-glicino-SDS veikiantis buferis [25 mM Tris, 192 mM glicinas, 0.1% SDS (pH8.3)]. Precision Plus baltymai Visi „Blue“ standartai (Bio-Rad Laboratories Ltd.) buvo naudojami kaip molekulinės masės žymekliai. Po atskyrimo baltymai buvo perkelti į Millipore Immobilon-FL polivinilideno difluorido membranas (PVDF; Millipore, Billerica, MA, USA), naudojant imunoblotavimo sistemą „Trans-Blot Cell wet Blotting“ (Bio-Rad Laboratories Ltd.). Baltymų perkėlimas vyko pernešimo buferyje (20% metanolis ir 0.037% SDS Tris-glicinu [25 mM Tris, 192 mM glicinas (pH 8.3)], esant 82 V, 1 val. Kambario temperatūroje (RT). bent dviem egzemplioriais, subalansuotais tarp grupių ir atskirų gelių.

Po to membranos buvo inkubuojamos 2[santykis]3 tirpalas, kuriame yra 50 blokavimo buferio (LI-COR Biosciences, Lincoln, NE) ir Tris-buferio druskos tirpalas (TBS; 150 mM Tris ir 8.0 mM NaCl (pH1)) 16 val. Tada membranos buvo individualiai inkubuojamos 4 valandoms ant kratytuvo 1 ° C temperatūroje su triušiais polikloniniais anti-GluA106 (∼1 kDa; XNUMX[santykis]1K; Millipore, Cat # AB1504) ir GluA2 ((100 kDa; 1[santykis]4K; Millipore, Cat # AB1768) arba pelės monokloninis anti-NR1 (N130 kDa; 1[santykis]2K; „Upstate“ („Millipore“), katės Nr. 05-432). Šie pirminiai antikūnai buvo anksčiau naudojami ir patvirtinti [84], [85]ir pagamino vieną juostą atitinkamu molekuliniu svoriu, kuris buvo užkertamas kelią antikūnui preptizuojant su peptidu, kai jis buvo naudojamas nesusijusiems audiniams. Visi antikūnai buvo atskiesti 2[santykis]Odisėjos blokavimo buferio 3 mišinys su TBS-T (TBS + 0.05% Tween-20 (pH8.0). Po trijų 10 min. Plovimo TBS-T, membranos buvo inkubuojamos antriniuose antikūnuose, praskiestuose 2[santykis]3 mišinys iš Odyssey blokuojančio buferio ir TBS-T 1 val. Antriniai antikūnai buvo Alexa-680 konjuguotas ožkos anti-triušis (1[santykis]5K; Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) arba IR Dye800 CW konjuguotas ožkos anti-pele (1[santykis]10K; LI-COR Biosciences). Fluorescentinis imunoreaktyvumas buvo vizualizuotas ir vaizdai užfiksuoti naudojant „Odyssey 2.1“ skaitytuvą (LI-COR Biosciences).

Kiekybinis ir statistinis tyrimas

Kiekvienam baltymo mėginiui, naudojant „Odisėjos“ programinę įrangą, buvo apskaičiuoti kiekvienos juostos fluorescencijos intensyvumo lygiai (aukšta MW, paviršiaus ekspresija> 250 kDa, o ląstelių ekspresijai - aukščiau išvardytos specifinės MW juostos) ir apskaičiuoti kiekvieno gyvūno vidurkiai. Paviršiaus (S), tarpląstelinio (I), santykio (S / I, receptoriaus subvieneto pasiskirstymo matas) ir viso (S + I, visos receptoriaus subvieneto išraiškos matas) juostos tankio vertės buvo normalizuotos pagal atitinkamos lytiškai naivios kontrolės vidutines vertes. grupės. Fluorescencijos intensyvumo skirtumai tarp kiekvieno mėginio (pakrauto į skirtingus gelius) pakartojimų nebuvo skirtingi, o tai patvirtino baltymų mėginių pakrovimo kintamumo trūkumą. Visi Western Blot duomenys buvo analizuojami tarp seksualiai patyrusių ir lytiškai naivių kontrolinių grupių tuo pačiu metu, naudojant nesusijusius t testus, kurių reikšmingumo lygis buvo 0.05

Eksperimentas 3: elektrofiziologija

Tas pats eksperimentinis projektas buvo naudojamas kaip aprašyta pirmiau eksperimentams 1 ir 2. Seksualiai patyrę vyrai buvo suskirstyti į 3 eksperimentines grupes, suderintas su lytinio elgesio rodikliais ir pagal audinių kolekcijos 1 dieną, 1 savaitę arba 1 mėnesį po paskutinės poravimosi sesijos (1 diena, n=7; 1 savaitė, n=9; 1 mėnuo, n=10). Šių jaunesnių žiurkių lytinis elgesys nesiskyrė nuo 1 ir 2 eksperimentų su vyresnio amžiaus vyrų žiurkių elgesiu. Žiurkės buvo anestezuotos natrio pentobarbitaliu (270 mg / kg; ip) ir po to transkardinė perfuzija su šaltu šaltai deguonimi (95% O2, 5% CO2) paruošimo tirpalas, turintis [250 mM sacharozę, 2.5 mM KCl, 1.25 mM NaH2PO4, 4 mM MgCl2, 0.1 mM CaCl2, 26 mM NaHCO3, 10 mM gliukozė, 3 mM myoinositolis, 2 mM natrio piruvatas ir 0.5 mM ascorbatas]. Smegenys buvo išskiriamos ir dedamos į šaltą šaltą deguonies paruošimo tirpalą. Sagittal smegenų griežinėliai, 400 µm storio, buvo gauti iš kiekvieno gyvūno naudojant vibratomą (Microm, Walldorf, Vokietija). Iš viso 4 griežinėliai per smegenis buvo perkelti į laikymo kamerą su dirbtiniu smegenų skysčiu (aCSF) [125 mM NaCl, 2.5 mM KCl, 1.25 mM NaH2PO4, 1.3 mM MgCl2, 2.5 mM CaCl2, 26.2 mM NaHCO3 ir 10 mM gliukozė], kaitinama iki 32 ° C 30 min, ir po to leidžiama susigrąžinti iki kambario temperatūros mažiausiai 1 val. prieš įrašant vieną gabalėlį į įrašymo kamerą. Ši kamera buvo pripildyta deguonimi aCSF, esant 22 ° C temperatūrai. Nebuvo jokių skirtumų tarp grupių dėl lytinių elgesio parametrų. Smegenys buvo paimti iš lytiniu požiūriu naivių kontrolinių mėginių kiekviename 3 laiko taške po galutinio apdorojimo (n=3 – 4 kiekvienas).

Shell neuronai buvo tiriami medialinėse NAc skiltyse, kuriuose nebuvo dorsalinio striatumo [72]. Nerūdijančio plieno bipoliniai mikroelektrodai buvo įterpti į priešakinę žievės-NAc sieną rostraliai prie įrašymo elektrodo, kad būtų galima atlikti presinaptinę kortikinių afferentinių pluoštų stimuliaciją. Vital vidutiniai spinistiniai neuronai buvo vizualiai atpažinti pagal jų somo dydį (aplink 30 – 35 µ M skersmenį) ir santykinai neigiamą −75 membranos potencialą −85 mV. Įrašai atlikti naudojant „Axopatch 200A“ stiprintuvą ir „20 kHz“ (Digidata 1340) atrankos dažnį su 10 kHz žemo dažnio filtru. PClamp 9.0 buvo naudojamas eksperimento protokolams ir analizei. Afferentai buvo stimuliuojami poriniais impulsais (50 ms ISI) 0.1 Hz ir neuronais, naudojant bipolinį koncentrinį volframo elektrodą. Ląstelės buvo įtvirtintos prie -80 mV ir depolarizuotos iki 40 mV 500 ms prieš sinaptinę stimuliaciją, siekiant sumažinti NMDA srovių magnio bloką. AMPA / NMDA santykiai buvo nustatyti atsižvelgiant į EPSC vidurkį esant + 40 mV, kai nėra NMDAR antagonisto AP5 (50 µM; visos ląstelės srovės 30 × kontrolė ir 30 × esant AP5). NMDA atsakas buvo apskaičiuotas atimant AP5 įrašus iš kontrolės. AMPAR EPSC smailė buvo padalyta iš NMDAR EPSC smailės, kad gautų AMPA / NMDA santykį. Siekiant nustatyti porinius impulsų santykius, buvo atlikti matavimai su -80 mV su presinaptine stimuliacija (30 ×).

Duomenų analizė

Lytiškai naivių kontrolinių duomenų duomenys buvo sujungti į vieną kontrolinę grupę (n=10 gyvūnai 10 neuronai), nes statistinių skirtumų tarp laiko taškų kontroliniuose tyrimuose nebuvo. Seksualiai patyrusios grupės (1 diena, n=7; 1 savaitė, n=9; 1 mėnuo, n=10 neuronai; paprastai vienas neuronas vienam gyvūnui) buvo lyginamas su lytiniu požiūriu naiviu kontroline grupe, naudojant vienpusį ANOVA (faktoriai: laiko intervalas), po kurio sekė Fisher LSD post-hoc palyginimai, kurių reikšmingumo lygis yra 5%.

Padėka

Dėkojame Dr. Marina E. Wolf ir Mike Milovanovičiui Rosalind Franklin medicinos ir mokslo universitete dėl jų techninės konsultacijos.

Išnašos

Konkuruojantys interesai: Autoriai pareiškė, kad nėra konkuruojančių interesų.

Finansavimas: Kanados sveikatos tyrimų institutai LMC ir ARD, gamtos mokslų ir inžinerijos mokslinių tyrimų taryba LMC ir KKP. Finansuotojai neturėjo jokio vaidmens studijų planavimo, duomenų rinkimo ir analizės, sprendimo skelbti ar rengti rankraštį.

Nuorodos

1. Morgane PJ, Galler JR, Mokler DJ. Limbinės priekinės smegenų / limbinės vidurinės smegenų sistemų ir tinklų apžvalga. Prog Neurobiol. 2005;75: 143-160. [PubMed]
2. Avena NM, Bocarsly ME, Rada P, Kim A, Hoebel BG. Po to, kai kasdien suleidžiamas sacharozės tirpalas, maisto trūkumas sukelia nerimą ir dopamino / acetilcholino disbalanso sutrikimą. Physiol Behav. 2008;94: 309-315. [PubMed]
3. Avena NM, Rada P, Hoebel BG. Cukrus ir riebalų įsiskverbimas turi didelį priklausomybę sukeliančio elgesio skirtumą. J Nutr. 2009;139: 623-628. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
4. Avena NM. Nėščiojimas: gyvūnų modelių neurocheminės įžvalgos. Valgykite disord. 2009;17: 89-92. [PubMed]
5. Vucetic Z, Reyes TM. Centrinė dopaminerginė grandinė, kontroliuojanti maistą ir atlygį: poveikis nutukimo reguliavimui. Wiley Interdiscip Rev Syst Biol Med. 2010;2: 577-593. [PubMed]
6. Yoshida M, Yokoo H, Mizoguchi K, Kawahara H, Tsuda A ir kt. Valgyti ir gerti dėl padidėjusio dopamino išsiskyrimo į branduolį ir ventralinį tegmentalinį plotą žiurkėms: matuojant in vivo mikrodializės būdu. Neuroscience latvis. 1992;139: 73-76. [PubMed]
7. Numan M. Motyvacinės sistemos ir motinos elgesio neuronų grandinė žiurkėse. Dev Psychobiol. 2007;49: 12-21. [PubMed]
8. Jauni LJ, Lim MM, Gingrich B, Insel TR. Ląsteliniai socialinės arešto mechanizmai. Horm Behav. 2001;40: 133-138. [PubMed]
9. Jaunas LJ, Wang Z. Pora klijavimo neurobiologija. Nat Neurosci. 2004;7: 1048-1054. [PubMed]
10. „Frohmader KS“, „Pitchers KK“, „Balfour ME“, „Coolen LM“. Malonumų maišymas: narkotikų poveikio lytiniam elgesiui žmonėms ir gyvūnų modeliams apžvalga. Horm Behav. 2010;58: 149-162. [PubMed]
11. Pitchers KK, Balfour ME, Lehman MN, Richtand NM, Yu L, et al. Neuroplastika mesolimbinėje sistemoje, kurią sukelia natūralus atlygis ir paskesnis atlygio susilaikymas. Biol Psichiatrija. 2010;67: 872-879. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
12. Wallace DL, Vialou V, Rios L, Carle-Florence TL, Chakravarty S, et al. „DeltaFosB“ įtaka branduoliui siejama su natūraliu atlygiu. J Neuroscience. 2008;28: 10272-10277. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
13. Bradley KC, Boulware MB, Jiang H, Doerge RW, Meisel RL ir kt. Genų ekspresijos pokyčiai branduolyje accumbens ir striatum po seksualinės patirties. Genesas Behav. 2005;4: 31-44. [PubMed]
14. Bradley KC, Meisel RL. Seksualinio elgesio c-Fos indukcija branduolyje accumbens ir amfetamino stimuliuojamas lokomotorinis aktyvumas jautrinamas ankstesniam seksualiniam patyrimui Sirijos žiurkėnų moterims. J Neuroscience. 2001;21: 2123-2130. [PubMed]
15. Tenk CM, Wilson H, Zhang Q, Kitchers KK, Coolen LM. Seksualinis atlygis žiurkių patinams: seksualinės patirties poveikis sąlyginėms vietovės nuostatoms, susijusioms su ejakuliacija ir intromis. Horm Behav. 2009;55: 93-97. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
16. Agmo A, Berenfeld R. Vyrų žiurkių ejakuliacijos savybių stiprinimas: opioidų ir dopamino vaidmuo. Behav Neurosci. 1990;104: 177-182. [PubMed]
17. Agmo A, Gomez M. Seksualinis sutvirtinimas blokuojamas infuzuojant naloksoną į medialinę preopticinę zoną. Behav Neurosci. 1993;107: 812-818. [PubMed]
18. Kagan J. Nepakankamo ir visiško seksualinio elgesio diferencinė atlygio vertė. J Comp Physiol Psychol. 1955;48: 59-64. [PubMed]
19. Lopez HH, Ettenberg A. Seksualinės sąlygos: motyvacinio poveikio slopinimas dopamino receptorių antagonizmo metu. Pharmacol Biochem Behav. 2002;72: 65-72. [PubMed]
20. Šefildo FD, Wulffas JJ, „Backer R.“. Palyginimas be lytinio potraukio sumažinimo. J Comp Physiol Psychol. 1951;44: 3-8. [PubMed]
21. „Everitt BJ“, „Fray P“, „Kostarczyk E“, „Taylor S“, „Stacey P.“. Žmonių patinų (Rattus norvegicus) instrumentinio elgesio su seksualiniu stiprinimu tyrimai. I. Kontrolė trumpais regėjimo stimuliais, suporuotais su imliąja moterimi. J Comp Psychol. 1987;101: 395-406. [PubMed]
22. Everitt BJ, Stacey P. Tyrimai dėl instrumentinio elgesio su lytiniu stiprinimu žiurkių patinams (Rattus norvegicus): II. Išankstinio ploto pažeidimų, kastracijos ir testosterono poveikis. J Comp Psychol. 1987;101: 407-419. [PubMed]
23. Pitchers KK, Frohmader KS, Vialou V, Mouzon E, Nestler EJ ir kt. DeltaFosB branduolyje accumbens yra labai svarbus stiprinant seksualinio atlygio poveikį. Genesas Behav. 2010;9: 831-840. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
24. Dietz DM, Dietz KC, Nestler EJ, Russo SJ. Psichostimuliatoriaus sukelto struktūrinio plastiškumo molekuliniai mechanizmai. Farmakopsihiatrija. 2009;42(Suppl 1): S69 – 78. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
25. McClung CA, Nestler EJ. CREB ir DeltaFosB reguliuoja geno ekspresiją ir kokaino atlygį. Nat Neurosci. 2003;6: 1208-1215. [PubMed]
26. Robinson TE, Kolb B. Struktūrinis plastiškumas, susijęs su piktnaudžiavimo narkotikais poveikiu. Neurofarmakologija. 2004;47("1"): 33-46. [PubMed]
27. Frohmader KS, Lehman MN, Laviolette SR, Coolen LM. Kartu ekspozicija metamfetaminu ir seksualiniu elgesiu pagerina vėlesnį narkotikų atlygį ir sukelia lytinį elgesį su vyrais žiurkėms. J Neuroscience. 2011;31: 16473-16482. [PubMed]
28. Grimm JW, Hope BT, Wise RA, Shaham Y. Neuroadaptacija. Kokaino troškimas inkubuoti po pašalinimo. Gamta. 2001;412: 141-142. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
29. Thomas MJ, Kalivas PW, Shaham Y. Neuroplastiškumas mezolimbinės dopamino sistemos ir priklausomybės nuo kokaino srityje. Br J Pharmacol. 2008;154: 327-342. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
30. Wolf ME. Kokaino sukeltų neuroadaptacijų Bermudų trikampis. Tendencijos neurosci. 2010;33: 391-398. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
31. Conrad KL, Tseng KY, Uejima JL, Reimers JM, Heng LJ, et al. „Accumbens“ formavimas GluR2 trūksta AMPA receptorių medijuoja kokaino troškimą. Gamta. 2008;454: 118-121. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
32. McCutcheon JE, Wang X, Tseng KY, Wolf ME, Marinelli M. Kieto pralaidumo AMPA receptoriai yra branduolio accumbens sinapsėse po ilgai pasitraukus iš kokaino savarankiško vartojimo, bet ne eksperimento metu vartojamo kokaino. J Neuroscience. 2011;31: 5737-5743. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
33. McGeorge AJ, Faull RL. Projektavimas iš smegenų žievės į striatumą žiurkėse. Neurologija. 1989;29: 503-537. [PubMed]
34. Kourrich S, Thomas MJ. Panašūs neuronai, priešingi pritaikymai: psichostimuliantų patirtis diferencijuotai keičia ugnies savybes „accumbens“ šerdyje, palyginti su lukštais. J Neuroscience. 2009;29: 12275-12283. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
35. Ishikawa M, Mu P, Moyer JT, Wolf JA, Quock RM ir kt. Homeostatinis sinapso sukeltas membranos plastiškumas branduolių accumbens neuronuose. J Neuroscience. 2009;29: 5820-5831. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
36. Moussawi K, Pacchioni A, Moran M, Olive MF, Gass JT ir kt. N-acetilcisteinas atstato kokaino sukeltą metaplastiškumą. Nat Neurosci. 2009;12: 182-189. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
37. Mu P, Moyer JT, Ishikawa M, Zhang Y, Panksepp J, et al. Kokaino ekspozicija dinamiškai reguliuoja branduolių accumbens neuronų vidinį membraninį sužadinimą. J Neuroscience. 2010;30: 3689-3699. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
38. Zhang XF, Cooper DC, baltas FJ. Pakartotinis gydymas kokainu sumažina visą ląstelių kalcio srovę žiurkių branduolių accumbens neuronuose. J Pharmacol Exp Ten. 2002;301: 1119-1125. [PubMed]
39. Zhang XF, Hu XT, Baltas FJ. Viso ląstelių plastiškumas kokaino pasitraukimo metu: sumažėjusi natrio srovė branduolių accumbens neuronuose. J Neuroscience. 1998;18: 488-498. [PubMed]
40. Hu XT, Basu S, baltas FJ. Pakartotinis kokaino vartojimas slopina HVA-Ca2 + potencialą ir padidina K + kanalų aktyvumą žiurkių branduolių accumbens neuronuose. J neurofiziolas. 2004;92: 1597-1607. [PubMed]
41. Hu XT, Ford K, White FJ. Pakartotinis kokaino vartojimas sumažina kalcineurino (PP2B) kiekį, tačiau padidina DARPP-32 moduliavimą natrio srovėms žiurkių branduoliuose. Neuropsychopharmacology. 2005;30: 916-926. [PubMed]
42. Wolf ME. Eksitacinių aminorūgščių vaidmuo psichomotorinių stimuliatorių elgesio jautrinimas. Prog Neurobiol. 1998;54: 679-720. [PubMed]
43. Vanderschuren LJ, Kalivas PW. Dopaminerginio ir glutamaterginio perdavimo pokyčiai elgsenos jautrinimo indukcijai ir ekspresijai: kritinė ikiklinikinių tyrimų apžvalga. Psichofarmakologija (Berl) 2000;151: 99-120. [PubMed]
44. Wolf ME, Ferrario CR. AMPA receptorių plastiškumas branduolyje accumbens po pakartotinio sąlyčio su kokainu. Neurosci Biobehav Rev. 2010;35: 185-211. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
45. Pierce RC, Bell K, Duffy P, Kalivas PW. Pakartotinis kokainas padidina sužadinimo aminorūgščių perdavimą transplantato branduolyje tik žiurkėms, kurioms būdingas elgesio jautrumas. J Neuroscience. 1996;16: 1550-1560. [PubMed]
46. Suto N, Tanabe LM, Austin JD, Creekmore E, Pham CT ir kt. Ankstesnis psichostimuliatorių poveikis padidina kokaino atgavimo procesą, kurį atlieka branduolys accumbens AMPA. Neuropsychopharmacology. 2004;29: 2149-2159. [PubMed]
47. Kornvalio JL, Kalivas PW. Glutamato perdavimas į branduolį accumbens sukelia kokaino priklausomybės atkrytį. J Neuroscience. 2000;20: RC89. [PubMed]
48. Balfour ME, Yu L, Coolen LM. Seksualinis elgesys ir su lytimi susiję aplinkos ženklai aktyvuoja mesolimbinę sistemą žiurkių patinams. Neuropsychopharmacology. 2004;29: 718-730. [PubMed]
49. Vialou V, Robison AJ, Laplant QC, Covington HE, 3rd, Dietz DM, et al. „DeltaFosB“ smegenų atlygio grandinėse tarpininkauja atsparumui stresui ir antidepresantams. Nat Neurosci. 2010;13: 745-752. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
50. Ferrario CR, Li X, Wang X, Reimers JM, Uejima JL, et al. Glutamato receptorių perskirstymo vaidmuo lokomotorinio jautrinimo kokainui atžvilgiu. Neuropsychopharmacology. 2010;35: 818-833. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
51. Boudreau AC, Ferrario CR, Glucksman MJ, Wolf ME. Signalizacijos kelio adaptacijos ir nauji baltymų kinazės A substratai, susiję su elgesio jautrinimu kokainui. J Neurochem. 2009;110: 363-377. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
52. Boudreau AC, Reimers JM, Milovanovic M, Wolf ME. Ląstelių paviršiaus AMPA receptoriai žiurkių branduolyje didėja, kai vartojamas kokaino vartojimas, tačiau po kokaino poveikio jis internalizuojamas kartu su pakeistu mitogeno aktyvuotų baltymų kinazių aktyvavimu. J Neuroscience. 2007;27: 10621-10635. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
53. Boudreau AC, Wolf ME. Elgesio jautrinimas kokainui yra susijęs su padidėjusiu AMPA receptorių paviršiaus ekspresija branduolyje accumbens. J Neuroscience. 2005;25: 9144-9151. [PubMed]
54. Kourrich S, Rothwell PE, Klug JR, Thomas MJ. Kokaino patirtis kontroliuoja dvipusį sinaptinį plastiškumą branduolyje accumbens. J Neuroscience. 2007;27: 7921-7928. [PubMed]
55. Ghasemzadeh MB, Mueller C, Vasudevan P. Elgesio jautrinimas kokainui yra susijęs su padidėjusiu glutamato receptorių judėjimu iki postinaptinio tankio po ilgesnio pasitraukimo laikotarpio. Neurologija. 2009;159: 414-426. [PubMed]
56. Mameli M, Halbout B, Creton C, Engblom D, Parkitna JR ir kt. Kokaino sukeltas sinaptinis plastiškumas: išlikimas VTA sukelia adaptacijas NAc. Nat Neurosci. 2009;12: 1036-1041. [PubMed]
57. Famous KR, Kumaresan V, Sadri-Vakili G, Schmidt HD, Mierke DF ir kt. Fluorilinimo priklausoma GluR2 turinčių AMPA receptorių prekyba branduolio accumbens vaidina svarbų vaidmenį atkuriant kokaino paiešką. J Neuroscience. 2008;28: 11061-11070. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
58. Bachtell RK, „Self DW“. Atnaujintas kokaino ekspozicija sukelia trumpalaikius AMPA receptorių sukelto elgesio pokyčius. J Neuroscience. 2008;28: 12808-12814. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
59. Karler R, Calder LD, Chaudhry IA, Turkanis SA. MK-801 blokuoja kokaino ir amfetamino „atvirkštinės tolerancijos“ blokavimą. Life Sci. 1989;45: 599-606. [PubMed]
60. Schumann J, Yaka R. Ilgalaikis pasitraukimas iš pakartotinio nepageidaujamo kokaino poveikio padidina NMDA receptorių ekspresiją ir ERK aktyvumą branduolyje accumbens. J Neuroscience. 2009;29: 6955-6963. [PubMed]
61. Powell WS, Dominguez JM, Hull EM. NMDA antagonistas slopina kopuliavimą ir patirties sukeltą vyrų lytinio elgesio padidėjimą žiurkėse. Behav Neurosci. 2003;117: 69-75. [PubMed]
62. Fleming AS, Kucera C. Seksualinės patirties poveikį blokuoja tiek baltymų sintezės inhibitorius, tiek cikloheksimidas, tiek nekonkurencinis NMDA antagonistas MK-801. Behav Neural Biol. 1991;56: 319-328. [PubMed]
63. Dominguez JM, Balfour ME, Lee HS, Brown JL, Davis BA, et al. Poravimas aktyvuoja NMDA receptorius vyrų žiurkių medialiniame preopticiniame plote. Behav Neurosci. 2007;121: 1023-1031. [PubMed]
64. „Bisaga A“, „Padilla M“, „Garawi F“, „Sullivan MA“, „Haney M.“. Hum Psychopharmacol. 2007;22: 41-47. [PubMed]
65. Yonghui L, Xigeng Z, Yunjing B, Xiaoyan Y, Nan S. Priešais MK-801 poveikį maisto ir morfino sukeltų sąlyginių vietų preferencijai žiurkėms. J Psychopharmacol. 2006;20: 40-46. [PubMed]
66. Huang YH, Lin Y, Mu P, Lee BR, Brown TE, et al. Kokaino patirtis in vivo sukelia tylias sinapses. Neuronas. 2009;63: 40-47. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
67. Liao D, Zhang X, O'Brien R, Ehlers MD, Huganir RL. Morfologinių postsinapsinių tylių sinapsių reguliavimas besivystančiuose hipokampo neuronuose. Nat Neurosci. 1999;2: 37-43. [PubMed]
68. „Pickard L“, „Noel J“, „Henley JM“, „Collingridge GL“, „Molnar E.“. Synaptic AMPA ir NMDA receptorių pasiskirstymo ir AMPA receptorių subvieneto sudėties pokyčiai gyvuose hipokampo neuronuose. J Neuroscience. 2000;20: 7922-7931. [PubMed]
69. Groc L, Gustafsson B, Hanse E. AMPA signalizacija atsirandančiose glutamaterginėse sinapse: ten ir ten nėra! Tendencijos neurosci. 2006;29: 132-139. [PubMed]
70. Marie H, Morishita W, Yu X, Calakos N, Malenka RC. Tylios sinapso generavimas pagal ūminę in vivo CaMKIV ir CREB ekspresiją. Neuronas. 2005;45: 741-752. [PubMed]
71. Brown TE, Lee BR, Mu P, Ferguson D, Dietz D, et al. Tylus sinapso mechanizmas, susijęs su kokaino sukeltu judesio jautrinimu. J Neuroscience. 2011;31: 8163-8174. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
72. Thomas MJ, Beurrier C, Bonci A, Malenka RC. Ilgalaikė branduolio depresija: nervų koreliacija dėl elgesio jautrumo kokainui. Nat Neurosci. 2001;4: 1217-1223. [PubMed]
73. Feil J, Sheppard D, Fitzgerald PB, Yucel M, Lubman DI ir kt. Priklausomybė, kompulsinis vaistų ieškojimas ir frontostriatinių mechanizmų vaidmuo reguliuojant slopinančią kontrolę. Neurosci Biobehav Rev. 2010;35: 248-275. [PubMed]
74. Goldstein RZ, Volkow ND. Priklausomybės prefrontalinės žievės disfunkcija: neurofiltravimo atradimai ir klinikinės reikšmės. Nat Rev Neurosci. 2011;12: 652-669. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
75. Davis JF, Loos M, Di Sebastiano AR, Brown JL, Lehman MN, et al. Medialinės prefrontalinės žievės pažeidimai sukelia netinkamą lytinį elgesį žiurkių patinams. Biol Psichiatrija. 2010;67: 1199-1204. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
76. Chen BT, Bowers MS, Martin M, Hopf FW, Guillory AM ir kt. Kokainas, bet ne natūralus atlygis savarankiškai, nei pasyvi kokaino infuzija VTA sukelia nuolatinį LTP. Neuronas. 2008;59: 288-297. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
77. Kalivas PW. Glutamato homeostazės priklausomybės hipotezė. Nat Rev Neurosci. 2009;10: 561-572. [PubMed]
78. Belujon P, Grace AA. Hippocampus, amygdala ir stresas: sąveikaujančios sistemos, turinčios įtakos jautrumui priklausomybei. Ann NY akad mokslas. 2011;1216: 114-121. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
79. Ishikawa A, Ambroggi F, Nicola SM, laukai HL. Amygdalos ir medialinio prefrontalinio žievės įnašai, skatinantys reaguoti į stimulą. Neurologija. 2008;155: 573-584. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
80. Stuber GD, Sparta DR, Stamatakis AM, van Leeuwen WA, Hardjoprajitno JE ir kt. Jaudinantis perdavimas iš amygdalos į branduolį accumbens palengvina atlygį. Gamta. 2011;475: 377-380. [PubMed]
81. van Furth WR, Wolterink G, van Ree JM. Vyriško seksualinio elgesio reguliavimas: smegenų opioidų ir dopamino dalyvavimas. Brain Res Brain Res Rev. 1995;21: 162-184. [PubMed]
82. Everitt BJ, Cador M, Robbins TW. Amigdalos ir ventralinės striatumo sąveika stimuliuojančių ir asociacijų asociacijose: tyrimai, naudojant antrosios eilės seksualinio stiprinimo grafiką. Neurologija. 1989;30: 63-75. [PubMed]
83. Agmo A. Vyrų žiurkių lytinis elgesys. Brain Res Brain Res Protoc. 1997;1: 203-209. [PubMed]
84. Nelson CL, Milovanovic M, Wetter JB, Ford KA, Wolf ME. Elgsenos jautrinimas amfetaminui nėra susijęs su glutamato receptorių paviršiaus ekspresijos pokyčiais žiurkių branduolyje. J Neurochem. 2009;109: 35-51. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
85. Gao C, Wolf ME. Dopamino receptoriai reguliuoja NMDA receptorių paviršiaus ekspresiją prefrono žievės neuronuose. J Neurochem. 2008;106: 2489-2501. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]