DeltaFosB tarpininkaujantys dopamino signalizacijos pokyčiai normalizuojami skaniu didelio riebalų kiekiu (2008)

Visiškas tyrimas

Biol psichiatrija. 2008 Dec 1; 64 (11): 941-50. Epub 2008 Jul 26.

Teegarden SL, Nestler EJ, Bale TL.

Šaltinis

Gyvūnų biologijos katedra, Pensilvanijos universitetas, Filadelfija, PA 19104-6046, JAV.

Abstraktus

FAKTAI:

Jautrumas už atlygį buvo susijęs su elgesiu, susijusiu su piktnaudžiavimu narkotikais, taip pat ir persivalgymu. Tačiau pagrindiniai mechanizmai, prisidedantys prie atlygio jautrumo, nežinomi. Mes hipotezėme, kad dopamino signalizacijos disreguliacija gali būti pagrindinė padidėjusio atlygio jautrumo priežastis, pagal kurią už atlygį skatinantys stimulai galėtų normalizuoti sistemą.

METODAI:

Naudojome padidėjusio jautrumo jautrumo genetinį pelės modelį - „Delta FosB“ ekspresuojančią pelę, kad galėtume išnagrinėti atlygio tako pokyčius, reaguojant į skanią didelio riebumo dietą. Šių pelių atlygio signalizavimo žymenys buvo ištirti tiek iš esmės, tiek po 6 savaitės, kai buvo geriamojo maisto. Pelės buvo ištirtos elgsenos teste po didelio riebalų kiekio dietos pašalinimo, kad būtų galima įvertinti šio modelio pažeidžiamumą skatinančių stimulų pašalinimui.

Rezultatai:

Mūsų rezultatai rodo pasikeitusį atlygio kelio aktyvavimą palei branduolio accumbens-hipotalaminį-ventralinį tegmental sritį, atsirandančią dėl per didelės Delta FosB ekspresijos branduolių accumbens ir striatų regionuose. Fosforilinto ciklinio adenozino monofosfato (cAMP) atsako elemento kiekis (pCREB), smegenų išvestinis neurotrofinis faktorius (BDNF), ir dopamino ir ciklinio adenozino monofosfato reguliuojamo fosfoproteino, turinčio 32 kDa (DARPP-32) molekulinę masę branduolyje accumbens, sumažėjo Delta FosB pelėse, o tai rodo sumažintą dopamino signalizaciją. Šešių savaičių riebalų turinčių dietų ekspozicija visiškai pagerino šiuos skirtumus ir atskleidė stiprų skanios dietos naudingumą. Delta FosB pelės taip pat parodė reikšmingą lokomotorinio aktyvumo ir su nerimu susijusių reakcijų 24 valandų padidėjimą po didelio riebalų pašalinimo.

Išvados:

Šie rezultatai rodo, kad jautrumas pokyčiams, susijusiems su Delta FosB ir dopamino signalizacijos reguliavimu, gali būti normalus su skaniais mitybos būdais, ir kai kurie nutukimo būdai gali būti jautrūs fenotipui..

Įvadas

Nepaisant didėjančių žinių apie nervų sistemas, kurios kontroliuoja apetitą ir sotumą, nutukimo rodikliai Jungtinėse Valstijose ir toliau didėja. Dabartiniai vaistų gydymo būdai yra riboti, o elgesio modifikacijos patiria minimalų ilgalaikį atitiktį (1). Kaloriškai tankių, skanių maisto produktų vartojimas buvo susijęs su streso ir atlygio trajektorijų pokyčiais smegenyse, o tai rodo, kad tokių maisto produktų naudingos savybės gali viršyti energijos balanso signalus (2-4). Maisto produktai, kuriuose yra daug riebalų, veikia kaip natūralus atlygis, aktyvuojantys smegenų atlyginimų centrus, panašius į piktnaudžiavimo narkotikus, ir tokiu būdu buvo naudojami savireguliavimo paradigmose (5-8). Taigi, tikėtina, kad elgesys ir motyvacija persivalgymui ir piktnaudžiavimui narkotikais turi bendrų pagrindinių mechanizmų, kurie gali atverti naujas gydymo galimybes abiem sąlygomis.

Tiriant ryšį tarp skanių maisto produktų ir takų, reguliuojančių atlygį ir stresą smegenyse, mes anksčiau nustatėme molekulinius ir biocheminius sumažėjusio atlygio žymenis ir padidėjusį stresą, kai pasitraukėme iš skanios didelės riebalų dietos (HF). Panašiai kaip ir piktnaudžiavimo narkotikais, mūsų tyrimuose skanios dietos poveikis padidino transkripcijos faktoriaus ΔFosB lygį branduolių accumbens (NAc), centrinės smegenų atlygio struktūros (9, 10).. Pelės, kurios indukuotai viršija AFosB ekspresiją, padidino instrumentinį atsaką už maisto atlygį (11), todėl tapo vertinga priemone, skirta tirti atlygio jautrumo ir ilgalaikio atlygio sistemos disreguliacijos vaidmenį molekulinėje ir biocheminėje reakcijoje į skanią dietą.

Šiame tyrime panaudojome ΔFosB-ekspresuojančias peles, kad galėtume ištirti ilgalaikius pelno žymeklių pokyčius NAc-hipotalamoje - ventraliniame tegmental area (VTA) neurocircuitry, reaguojant į skanią HF dietą. Remiantis ankstesniais tyrimais, atliktais šiose jautrioms jautrioms pelėms, mes manėme, kad ΔFosB sukeltas atlygio jautrumo pokytis susijęs su dopamino signalizacijos reguliavimu, kurį lemia NAc grįžtamasis ryšys su VTA. Be to, mes hipotezėme, kad natūralios energijos tankios HF dietos atlyginimas tuomet normalizuotų šių pelių dopaminerginę sistemą, o tai sukels perdėtą atsaką į stresą, kuris būtų pašalintas iš šios HF dietos.. Unikalus skanios dietos, kaip naudingos medžiagos, panaudojimo aspektas leidžia mums įtraukti hipotalaminius įėjimus, kad atlygintume fenotipo grandinę, kuri gali prognozuoti populiaciją, kuri yra linkusi į atsparumą gydymui. Norėdami išnagrinėti šią hipotezę, po HF poveikio tyrėme dopamino neurotransmisijos žymenis, įskaitant pCREB, BDNF ir DARPP-32 NAc ir tirozino hidroksilazėje, ir dopamino transporterį VTA. Mes taip pat išnagrinėjome specifinius energijos balanso žymenis, kurie, kaip žinoma, veikia dopamino kiekį, įskaitant leptino ir oreksino receptorius VTA ir oreksino ekspresiją šoninėje hipotalamoje.

Medžiagos ir metodai

gyvūnai

Vyrų bitransgeninės pelės, kurios indukuotai pernelyg išryškino ΔFosB dinorfinu teigiamuose neuronuose NAc ir dorsal striatum (Kelz ir kt., 1999), buvo sukurtos mišriame fone (ICR: C57Bl6 / SJL) Teksaso pietvakarių medicinos centro ir išlaikė ir išbandytas Pensilvanijos universitete. Visos pelės buvo laikomos doksiciklinu (100 μg / ml geriamajame vandenyje) iki atvykimo į Pensilvanijos universitetą. Norint sukelti viršekspresiją, doksiciklinas buvo pašalintas (n = 23) (12). Kontrolinės pelės (n = 26) toliau vartojo vaistą. Pelės buvo priskirtos dietinėms grupėms po aštuonių savaičių po doksicilino pašalinimo, ir tuo metu pasirodė, kad ekspresija pasiekia maksimalų lygį (13). Pelės buvo laikomos 12: 12 šviesos ir tamsos ciklu (šviesos 0700) su maistu ir vandeniu, turinčiu ad libitum. Visi tyrimai buvo atlikti pagal eksperimentinius protokolus, patvirtintus Pensilvanijos universiteto institucinių gyvūnų priežiūros ir naudojimo komitetui, ir visos procedūros buvo vykdomos vadovaujantis institucinėmis gairėmis.

Dieta

Pelės buvo laikomos namuose (n = 16) arba šešias savaites dedamos į HF (n = 16-17). „House chow“ (Purina Lab Diet, St. Louis, MO) sudėtyje buvo 4.00 kcal / g, kurį sudaro 28% baltymai, 12% riebalai ir 60% angliavandeniai. HF dietoje (Research Diets, New Brunswick, NJ) buvo 4.73 kcal / g, kurį sudaro 20% baltymai, 45% riebalai ir 35% angliavandeniai.

Biochemija ir genų ekspresija

Pelės buvo analizuojamos po šešių savaičių dietos. Smegenys buvo pašalintos iš kaukolės ir užšaldytos visos sauso ledo arba NAc išpjaustytos (maždaug 0.5 - 1.75 mm nuo bregmos, 3.5 - 5.5 mm gylyje) ir užšaldytos skystame azoto. Audinys buvo laikomas -80 ° C temperatūroje, kol buvo ištirta.

Biocheminės analizės

Western blot metodai aprašyti papildomose medžiagose. Naudoti antikūnai buvo: Cdk5, CREB ir BDNF (1: 500, Santa Cruz biotechnologijos, Santa Cruz, CA) ir fosfo-CREB (pCREB) (Ser 133) (1: 500, Cell Signaling Technology, Danvers, MA).

Receptoriaus autoradiografija

Išsamūs autoradiografijos metodai aprašyti papildomose medžiagose. Naudojamos ligandos buvo 2 nM H3 - SCH 23390 ir 5 nM H3 - spiperonas (PerkinElmer, Boston, MA).

In situ hibridizacija

Audinių apdorojimas ir hibridizacija buvo atlikti, kaip aprašyta anksčiau (14). DARPP-32 zondą maloniai suteikė P. Greengard (Rokfelerio universitetas), o oreksino zondas - J. Elmquist (Teksaso universiteto Pietvakarių medicinos centras). DLPP-32 analizuojamos plokštelės buvo įdėtos į plėvelę 3 dienoms, o sluoksniai, ištirti dėl oreksino, buvo įtraukti į plėvelę 4 dienoms. Filmų vaizdų kiekybinis nustatymas buvo atliktas kaip aprašyta anksčiau (10).

QRT-PCR

RNR buvo išskirta iš VTA ir atskirų genų ekspresija įvertinama naudojant TaqMan geno ekspresijos tyrimus (Applied Biosystems, Foster City, CA). Išsamius metodus ir statistines analizes galima rasti papildomose medžiagose.

Elgesio analizė

Siekiant išnagrinėti atlygio jautrumo poveikį mitybos sukeltam elgesio pokyčiui, po keturių savaičių ekspozicijos iš HF buvo pašalintas pelių pogrupis ir grįžta į namus (n = 9 kontrolė, n = 8 ΔFosB). Praėjus dvidešimt keturioms valandoms po nutraukimo, pelėms buvo atliktas atviro lauko tyrimas pagal mūsų anksčiau paskelbtą mitybos nutraukimo paradigmą (10). Trumpai tariant, pelė buvo patalpinta atviro lauko aparato centre ir stebima penkias minutes. Iš viso buvo išmatuoti visi linijos kryžiai, išmatų boli, laikas centre ir kryžiai į centrą.

Statistika

Visi duomenys, išskyrus Western blotus, buvo analizuojami naudojant dvipusį ANOVA, po kurio atliktas Fišerio PLSD testas su gydymu doksiciklinu (ΔFosB išraiška) ir dietos būklė kaip nepriklausomi kintamieji. RT-PCR analizėms buvo naudojama sumažinta P vertė, kad būtų galima ištaisyti daugybę panašių genų grupių palyginimų (žr. Papildomas medžiagas). Western blotai buvo analizuojami naudojant studento t testą, gydant doksiciklinu kaip nepriklausomu kintamuoju, lyginant to paties bloto optinius tankius. Visi duomenys pateikiami kaip vidurkis ± SEM.

rezultatai

Baziniai biocheminiai skirtumai

Norint išsiaiškinti molekulinius kelius, kuriais grindžiamas padidėjęs jautrumas atlygiui ΔFosB per daug ekspresuojančiose pelėse, NAc buvo tiriamas kelių pagrindinių signalinių molekulių lygis. Pastebėta padidėjusio Cdk5 kiekio tendencija ΔFosB pelių NAc, palyginti su kontrolinių gyvūnų pakratais, palaikomais doksiciklino (F = 5.1, P = 0.08; 1A pav.). ΔFosB pelės išreiškė žymiai sumažintą pCREB lygį (F = 7.4, P <0.05; 1B pav.), Taip pat bendrą CREB lygį (F = 5.4, P = 0.05; 1 C pav.). Reikšmingas BDNF sumažėjimas taip pat buvo pastebėtas ΔFosB pelių NAc (F = 10.6, P <0.05; 1D pav.).

1 pav

IceFosB pernelyg išreiškiančios pelės parodė biocheminius sumažinto dopamino signalizacijos žymenis NAc

Maisto suvartojimas ir kūno svoris dėl didelio riebumo

Toliau mes ištyrėme natūraliai naudingos ŠN dietos poveikį signalų molekulių pokyčiams ΔFosB per daug ekspresuojančiose pelėse. Nebuvo skirtumų tarp ΔFosB pelių ir kontrolinio maisto suvartojimo namuose ar HF. Tačiau, veikiant HF, bendras kalorijų suvartojimas, normalizuotas pagal kūno svorį, buvo būdingas ΔFosB pelėms (F = 11.2, P <0.01; 2A pav.). Šešių dietos ekspozicijos savaičių pabaigoje pelės, gaunančios HF, svėrė žymiai daugiau nei tos, kurios laikėsi dietos (F = 17.2, P <0.001), o ΔFosB pelės svėrė mažiau nei kontrolinės grupės (F = 5.6, P <0.05; pav. 2B). Šis poveikis buvo būdingas skirtingoms grupių mitybos dietoms (p <0.05).

2 pav

ΔFosB pernelyg ekspresuojančios pelės nesiskyrė maisto produktų suvartojimo skirtumais nei riebalams, nei riebalams (HF)

Biocheminiai skirtumai dėl didelio riebumo dietos

Siekiant nustatyti, kaip HF dieta gali keisti bazinius NAc signalizacijos skirtumus, tie patys signaliniai baltymai, kurie buvo tiriami pradiniame etape, buvo tiriami su gyvūnais, kurie gavo šešias savaites. Cdk5 lygių reikšmės nesiskyrė (3A pav.). Po šešių HF savaičių pCREB ir viso CREB lygiai nebėra skirtingi (3B, C pav.). BDNF lygiai buvo žymiai padidėję AFosB pelėse po šešių HF ekspozicijos savaičių (F = 6.5, P = 0.05; 3D pav.).

3 pav

Didelės riebalų (HF) dietos pagerino signalizacijos skirtumus, pastebėtus ΔFosB viršįtampančių pelių NAc.

Dopamino receptorių autoradiografija

Mes naudojome receptorių autoradiografiją, kad įvertintume, ar ΔFosB sukeltos dopamino signalų pakitimai NAc yra susiję su dopamino receptorių ekspresijos pokyčiais (4A pav.). Dieta su dideliu riebalų kiekiu šiek tiek padidino D1 dopamino receptorių prisijungimo tankį (P = 0.14), ir šis skirtumas buvo didesnis ΔFosB pelėms (4B pav.). Taip pat buvo D1 prisijungimo ploto po HF didėjimo tendencija (P = 0.06), o post hoc testai parodė, kad tai reikšminga ΔFosB pelėms (P <0.05; 4C pav.). Skirtingai nuo D1 receptorių, D2 receptorių rišimosi tankis (kontrolinis chow = 97.6 ± 6.9, kontrolinis HF = 101.1 ± 8.2, ΔFosB chow = 91.6 ± 1.0, ΔFosB HF = 94.8 ± 9.5) ar rišimosi plotas (kontrolinis chow = 47.3) nepasikeitė. Buvo stebėta ± 3.4, kontrolinė HF = 53.8 ± 6.0, ΔFosB chow = 51.9 ± 3.7, ΔFosB HF = 49.0 ± 3.3) NAc.

4 pav

Dėl didelio riebalų kiekio dietos (HF) pasikeitė D1 dopamino receptorių prisijungimas ir DARPP-32 ekspresija ΔFosB overexpressuojančių pelių branduolyje accumbens (NAc)

DARPP-32 išraiška NAc

DARPP-32 ekspresijos lygiams NAc nustatyti buvo naudojama in situ hibridizacija (4D pav.). Dieta su dideliu riebalų kiekiu žymiai padidino DARPP-32 raišką šiame smegenų regione (F = 5.1, P <0.05), tarp dietos ir ΔFosB ekspresijos (F = 8.9, P <0.05) buvo reikšminga sąveika, o ΔFosB pelėms buvo didesnis dietos sukeltas pokytis (4 pav. E). Pagrindiniai DARPP-32 ekspresijos skirtumai tarp kontrolinių ir ΔFosB pelių buvo atskleisti atlikus post hoc tyrimus (P <0.01), taip pat reikšmingas DARPP-32 raiškos padidėjimas ΔFosB pelių ant HF (P <0.01).

Genų ekspresija VTA

QRT-PCR buvo naudojamas siekiant įvertinti genų ekspresijos pokyčius VTA, nukreipiant kelis pagrindinius genus, anksčiau susijusius su atlygio reguliavimu. Visi mėginiai buvo normalizuoti pagal β-aktiną. Siekiant užtikrinti, kad gydymas β-aktino ekspresija nebūtų pakeista, buvo atliktas atskiras tyrimas, siekiant palyginti β-aktiną su antrąja vidine kontrole - GAPDH. Reikšmingų β-aktino ekspresijos skirtumų nebuvo (ΔCT vertės, β-aktinas - GAPDH: kontrolinis čiau = 2.29 ± 0.21, kontrolinis HF = 2.01 ± 0.04, ΔFosB čiau = 2.32 ± 0.49, ΔFosB HF = 2.37 ± 0.10).

Tirozino hidroksilazės ekspresijai buvo nustatyta sąveikos tarp ΔFosB ekspresijos ir gydymo dieta tendencija (F = 3.6, P <0.06; 5A pav.). Šešios savaitės HF poveikio sumažino tirozino hidroksilazės ekspresiją kontrolinėse pelėse ir padidino ekspresiją ΔFosB pelėse. Reikšminga sąveika tarp ΔFosB ekspresijos ir dietos poveikio buvo pastebėta dopamino transporterio ekspresijoje (F = 6.7, P <0.03; 5B pav.). Panašiai kaip tirozino hidroksilazė, ekspozicija HF sumažino dopamino transporterio ekspresiją kontrolinėse pelėse ir žymiai padidino ekspresiją ΔFosB pelėse (P <0.05). Bazinis dopamino transporterio ekspresijos skirtumas tarp kontrolinių ir ΔFosB pelių reikšmingumo nepasiekė (P = 0.16), tačiau po 6 savaičių HF ΔFosB pelės išreiškė reikšmingai padidėjusį dopamino transporterio kiekį, palyginti su kontrolinėmis (P <0.05).

5 pav

Didelės riebalų dietos (HF) ekspozicija ir ΔFosB išraiška lėmė daugelio pagrindinių molekulių ekspresijos pokyčius VTA

Buvo tendencija, rodanti padidėjusios ΔFosB ekspresijos poveikį mažinant TrkB lygį VTA (F = 5.7, P <0.04; 5C pav.). Nors κ-opioidų receptorių ekspresijai nebuvo jokio pagrindinio poveikio, ΔFosB pelėse buvo sumažėjusios ekspresijos tendencija (P = 0.08; 5D pav.). Leptino receptoriaus ekspresija taip pat buvo nustatyta VTA. Buvo nustatytas reikšmingas dietos poveikio poveikis (F = 6.1, P <0.03), o HF reikšmingai sumažino leptino receptoriaus kiekį VTA tiek ΔFosB, tiek kontrolinėse pelėse (5 pav.). Taip pat buvo tiriama oreksino receptoriaus 1 ekspresija VTA. Buvo reikšmingas dietos poveikis oreksino receptoriaus ekspresijai (F = 9.0, P <0.02), kai pelės, veikiamos HF, išreiškė aukštesnį lygį VTA (5F pav.). Taip pat buvo tendencija, kad ΔFosB pelės išreiškė bendrą aukštesnį oreksino receptoriaus 1 kiekį šiame smegenų regione (P <0.05).

Oksekso ekspresija šoninėje hipotalamoje

Mes išmatavome oreksino lygį šoniniame hipotalamyje, VTA oreksinerginės inervacijos kilmę, atlikdami in situ hibridizaciją (6A pav.). Buvo reikšminga sąveika tarp ΔFosB ekspresijos ir dietos poveikio oreksino ekspresijai (F = 9.1, P <0.01), HF žymiai padidino oreksino kiekį kontrolinėse pelėse (P <0.05) ir sumažino ekspresiją ΔFosB pelėse (6B pav.). Nors reikšmingų oreksino ekspresijos skirtumų bazinėje būsenoje nebuvo, po 6 savaičių HF, ΔFosB pelės išreiškė žymiai sumažintą oreksino kiekį, palyginti su kontrolinėmis grupėmis (P <0.05).

6 pav

Didelio riebalų (HF) dieta turėjo skirtingą poveikį oreksino ekspresijai kontrolėje (Ctrl) ir ΔFosB viršekspresinėse pelėse

Beelgesio analizės

Norint įvertinti susijaudinimo ir emocingumo pokyčius dėl mitybos pokyčių, pelėms buvo atliktas atviro lauko testas 24 valandas po ŠN dietos atsisakymo (10). Visiems linijų kryžiams, kurie buvo įvertinti kaip susijaudinimo matas, reikšmingą įtaką turėjo ΔFosB raiška (F = 6.6, P <0.05) ir dieta (F = 4.6, P <0.05; 7A pav.). ΔFosB pelės buvo aktyvesnės naujoje aplinkoje nei sąrėmiai, o post hoc tyrimai parodė, kad pelės, pašalintos iš HF, buvo žymiai aktyvesnės nei tos, kurios buvo paveiktos chow (P <0.05). Išmatų boli buvo skaičiuojami kaip į nerimą panašaus elgesio matas (10). Buvo pagrindinis ΔFosB ekspresijos poveikis (F = 10.2, P <0.01), o ΔFosB perekspresuojančios pelės naujoje aplinkoje gamino daugiau išmatų boli, ypač naminių čiulių ir HF pašalinimo grupėse (7B pav.). ΔFosB pelės, laikomos HF dietoje, gamino mažiau išmatų boli nei tos, kurios buvo laikomos ant čiuvos, ir tos, kurios buvo pašalintos 24 valandas prieš bandymą. Atrodo, kad kontrolinės pelės neturėjo įtakos dietai. Nebuvo reikšmingo nei ΔFosB ekspresijos, nei dietos poveikio laikui, praleistam atviro lauko centre (kontrolinis ėdalas = 14.5 ± 3.1 sek., Kontrolinis HF = 18.0 ± 3.2 sek., Kontrolinis W / D = 15.4 ± 1.9 sek., ΔFosB čiau = 16.9 ± 2.4 sek., ΔFosB HF = 13.1 ± 3.9 sek., ΔFosB W / D = 19.8 ± 2.6 sek.).

7 pav

Pelės, per daug ekspresuojančios ΔFosB, buvo jautresnės didelio riebalų dietos (HF) pašalinimo poveikiui

Diskusija

Nutukimo gydymui yra labai svarbu nustatyti veiksnius, turinčius įtakos jautrumui persivalgymui ir svorio padidėjimui. Smegenų atlygio būdai atlieka svarbų vaidmenį motyvuojant ir reaguojant į skanius maisto produktus ir mitybos pokyčius (6, 10, 15, 16). Kadangi oreksigeniniai ir anoreksijos signalai gali tiesiogiai įtakoti signalų signalizavimą per hipotalaminį-VTA-NAc kontūrą, genų, reaguojančių į energiją turinčius skanius mitybos produktus atlygio centruose, išaiškinimas gali suteikti naujus terapinius tikslus nutukimo gydymui (17, 18). Todėl mes išnagrinėjome biocheminius ir molekulinius atlyginimų ir energijos balanso žymenis, signalizuojančius išilgai hipotalamijos-VTA-NAc grandinės, reaguojant į HF dietą ΔFosB-pernelyg išreiškiančioms pelėms, kaip padidinto jautrumo atlyginimų pokyčiams modelį (13, 19, 20) , ir elgesio jautrumas po dietos pašalinimo. Mes hipotezėme, kad bazinis dopamino signalizacijos reguliavimas ΔFosB pelėse būtų normalizuojamas pagal HF dietos naudingą poveikį, apimantį energijos balanso signalų ir dopamino sistemos susikirtimą.

Norint ištirti dopamino signalizacijos disertaciją rodančius žymenis NAc, mes ištyrėme D1 receptorių lygius ir tolesnius efektorius. Nors D1 receptorių jungimosi metu reikšmingų skirtumų nebuvo, buvo nustatyta HF ekspozicijos tendencija padidinti FosB pelių surišimo sritį. Tai įdomu, nes ΔFosB indukcija pagal vaistus ir natūralius pranašumus yra dominuojanti vidutinio spygliuočių neuronų, kurie visų pirma išreiškia D1 receptorius, dinamometriniu teigiamu potipiu. (9, 21). Žemutinio dopamino signalizavimo tikslo pCREB lygiai žymiai sumažėjo AFosB pelėse, palaikant sumažintą D1 receptorių aktyvaciją šiame smegenų regione (22, 23). Įdomu tai, kad mes taip pat nustatėme reikšmingą bendrą CREB lygių sumažėjimą ΔFosB pelėse, o tai rodo, kad dopamino signalo transdukcija yra dar mažesnė, o tai gali būti antrinė dėl grįžtamojo ryšio, atsirandančio dėl ilgalaikio pCREB (24) sumažėjimo. BDNF ekspresiją reguliuoja pCREB, yra padidėjusi su D1 aktyvinimu, ir yra svarbi su atlygiu susijusi neuroplastika NAc (25, 26). Atitinkamai, mes nustatėme reikšmingą BDNF baltymo sumažėjimą ΔFosB pelių NAc.

Visi vidutinio spygliuočio neuronai NAc ekspresuoja DARPP-32 (27). Dėl daugelio pasekmių efektorių jis tampa gyvybiškai svarbiu atlygio teikimo būdų žaidėju (28), jis susijęs su narkomanija ir kitais sutrikimais, susijusiais su dopamino sistema, įskaitant emocinius sutrikimus ir šizofreniją. (27, 29). Mes nustatėme gilų bazinį DARPP-32 ekspresijos sumažėjimą ΔFosB pelių NAc. DARPP-32 ekspresiją reguliuoja BDNF, todėl sumažėjusi ekspresija gali būti tiesiogiai susijusi su BDNF lygių sumažėjimu, nustatytais AFosB pelėse (27, 29, 30). Netgi nedideli DARPP-32 fosforilinimo būsenos pokyčiai gali lemti esminius intraląstelinio signalizacijos pokyčius NAc (27). Ankstesni tyrimai parodė, kad DARPP-32 baltymų pokytis ΔFosB pelėse po 12-wk pašalinimo iš doksiciklino, kai buvo atliktas platesnis striatalo įvertinimas (31), nepasikeitė. rodo, kad ΔFosB poveikis DARPP-32 gali būti specifinis laiko ir regiono atžvilgiu.

Mes hipotezėme, kad dramatiškas dopamino signalizacijos rodiklių sumažėjimas ΔFosB pelių NAc greičiausiai lėmė VTA dopamino projekcinių neuronų pokyčius, nors ΔFosB nėra pernelyg išreikštas šiuose neuronuose. Todėl tyrėme su dopamino susijusių genų ekspresiją VTA, įskaitant tirozino hidroksilazę ir dopamino transporterį. Tirozino hidroksilazės ir dopamino transporterio lygiai teigiamai koreliuoja su dopamino produkcija. Buvo pastebėta tendencija, kad ΔFosB pelės pasižymi sumažėjusiu tirozino hidroksilazės kiekiu ir reikšmingu dopamino transporterio sumažėjimu, atsižvelgiant į dopamino signalizacijos sutrikimą NAc.. Kadangi šie baziniai dopamino sukeltų genų redukcijos ΔFosB pelių VTA greičiausiai atspindi pakeistą NAc grįžtamąjį ryšį ilgalaikio ΔFosB viršsekspresijos metu, mes ištyrėme BDNF receptoriaus TrkB ekspresiją kaip galimą NAc grįžtamojo ryšio su VTA (32) mechanizmą. Panašiai kaip ir tirozino hidroksilazės ir dopamino transporteris, TrkB ekspresija taip pat parodė tendenciją mažinti αFosB peles, kurios nepasiekė reikšmės, kai jos buvo koreguojamos daugkartiniams palyginimams. BDNF-TrkB kompleksas gali būti retrogradiškai transportuojamas ir veikia VTA, kad paveiktų vietinę genų ekspresiją ir skatintų ląstelių augimą ir palaikymą (33). Be to, presinaptinio TrkB aktyvinimas BDNF per NAc gali tiesiogiai stimuliuoti dopamino neurotransmisiją (32), palaikant pagrindinį dopamino signalizacijos sumažėjimą šiose pelėse.

Κ-opioidinių receptorių dinamorfinis aktyvavimas reguliuoja dopamino signalizaciją ir yra kitas mechanizmas, kuriuo NAc teikia grįžtamąjį ryšį VTA (34). Nustatėme, kad κ-opioidų receptorių ekspresija VTA parodė tendenciją mažinti ΔFosB peles. Kadangi įrodyta, kad ΔFosB overexpression sumažina dinorfino ekspresiją NAc (20), ΔFosB pelės tikriausiai sumažina grynąsias VTA κ-opioidų aktyvinimas. Nors dinorfino signalizacija paprastai daro slopinamąjį poveikį dopamino neuronams (35), žiurkėms, kurioms pasireiškia geresnis piktnaudžiavimo narkotikų vartojimas, pasireiškia sumažėjęs dinamorfino kiekis NAc, nurodant iš esmės sumažėjusio dinorfino signalizavimo vaidmenį didinant atlygio jautrumą (36). , 37). Dinorfino - κ-opioidų sistemos reguliavimas buvo siejamas su piktnaudžiavimo narkotikais įgijimu ir nuolatiniu palaikymu, palaikant kritinę opioidų signalų pusiausvyrą normalizuojant dopamino kelius (38).

Remiantis energingo tankio HF dietos atlyginimu, mes hipotezėme, kad dopamino ir opioidų atlyginimo signalizacijos ΔFosB pelėse reguliavimas sukels šių pelių didesnį atlygį už tokį mitybą, taip normalizuodamas atlygio sistemą aktyvinant hipotalamą. -VTA-NAc grandinė. Per šešių savaičių trukmės dietą ekspozicijoje tarp ΔFosB ir kontrolinių pelių nebuvo pastebėta jokių skirtumų, o tai rodo, kad biocheminių ir molekulinių atpažinimo signalų žymenų pokyčiai ΔFosB pelėse nebuvo susiję su suvartotų kalorijų skirtumais. Kaip tikėtasi, baziniai skirtumai, nustatyti pCREB, bendro CREB, BDNF, DARPP-32 ir κ-opioidų receptorių lygiuose tarp ΔFosB ir kontrolinių pelių, buvo susilpninti, greičiausiai dėl padidėjusio dopamino kiekio ΔFosB pelėse HF (29, 39-41) .

Tiriant tirozino hidroksilazę ir dopamino transporterį VTA, nustatyta, kad ΔFosB ir kontrolinių pelių reakcijos prieš HF buvo netikėtos.. Kontrolinės pelės parodė tirozino hidroksilazės ir dopamino transporterio ekspresijos sumažėjimą, o AFosB pelėms buvo padidėjusi abiejų šių dopamino susijusių genų ekspresija. Įdomu tai, kad tirozino hidroksilazės ekspresija VTA yra keičiama lėtiniu kokaino arba metamfetamino vartojimu (42-44), o tai rodo, kad AFosB pelės gali rasti natūralų HF atlygį labiau nei kontrolinės pelės.

Siekiant ištirti, kaip galimas hipotalaminis įėjimas į VTA gali būti perduodantis signalus, atspindinčius energijos balansą, taip pat buvo ištirta leptino receptoriaus ir oreksino receptoriaus-1 ekspresija. Cirkuliuojančio leptino koncentracija padidėja HF, o leptinas savo ruožtu gali veikti VTA, kad pakeistų dopamino signalizaciją (18, 45). VTA leptino receptorių ekspresija buvo panašiai sumažinta HF tiek AFosB, tiek kontrolinėse pelėse, atsižvelgiant į panašų svorio padidėjimą ir dietos suvartojimą HF metu. Dideli riebalai taip pat padidino oreksino receptorių-1 ekspresiją AFosB ir kontrolinių pelių VTA. Oxxin aktyvuoja dopamino neuronus VTA, skatina VTA plastiškumą ir didina dopamino kiekį NAc (46-48). Nustatyta, kad didelio riebumo dieta padidina oreksino ekspresiją pelėms, pagal mūsų pastabas (49, 50). Taigi, padidėjusi oreksino receptorių ekspresija, taip pat leptino signalizacijos pokyčiai VTA gali paskatinti dietą tiek „FosB“, tiek kontrolinėse pelėse, palaikant disociaciją tarp kelių, perduodančių energijos balanso signalus, ir tuos, kurie tiesiogiai susiję su atlygiu.

Norint išnagrinėti stresą sukeliančius atlygio panaikinimo efektus, pelės buvo ištirtos atviro lauko bandyme 24 val. Po HF pašalinimo. ΔFosB pelės buvo jautresnės ūminiam dietos pašalinimo poveikiui, rodydamos padidėjusį susijaudinimo aktyvumą ir išmatų boli gamybą naujose atvirose arenose, lyginant su visomis kitomis kontrolės ir dietos grupėmis. OsFosB pelės taip pat parodė įdomų elgesio modelį šiame tyrime, kuris rodo, kad jautrumas ir įtampa yra jautrus, o HF dieta iš pradžių mažina išmatų boli gamybą, palyginti su chow, ir pasitraukimas vėl padidino su nerimu susijusį atsaką. Šis pastebėtas atvirojo lauko aktyvumo padidėjimas nesusijęs su orexino ekspresijos pokyčiais, rodančiais ryšį su streso sukeltu susijaudinimu, kuris yra ne tik oreksino perduodamų signalizacijos pokyčių poveikis. Apskritai šie duomenys patvirtina mūsų hipotezę, kad ΔFosB pelės būtų jautresnės ūminiam dietos pasitraukimo poveikiui dėl padidėjusio jautrumo jautrumui.

Kaip ilgalaikis ΔFosB pernelyg didėjimas NAc sąlygoja tokius elgsenos ir atlygio signalizacijos pokyčius? Mes pasiūlėme VTA sutapimo nustatymo modelį, kuriame pakeistos NAc ir hipotalamos atsiliepimai perduoda signalus, susijusius su atlygio būsena, siekiant nustatyti dopamino sistemos reguliavimą, galintį palaikyti ryšį tarp atlygio kelio disreguliacijos ir polinkio nutukimui (8 pav.). HF ekspozicijos metu daugelis sąnaudų, atspindinčių tiek energijos balansą, tiek atlygio būseną susilieja su VTA. Leptino ir oreksino signalizacijos padidėjimas, taip pat pakitęs grįžtamasis ryšys iš NAc į šoninę hipotalamą gali turėti įtakos šiems oreksigeniniams signalams reaguoti į HF AFosB pelėse (17, 18, 45, 47, 51-53). Didelio riebalų dietos sukeltas BDNF padidėjimas gali suteikti grįžtamąjį ryšį su VTA, dar labiau skatinant su dopamino vartojimu susijusių genų ekspresijos pokyčius.

8 pav

Didelio riebalų (HF) dieta normalizuoja reguliuojamą atlygio signalizavimą ΔFosB pelėse

Šie rezultatai apibūdina atlygio jautrumo molekulinius žymenis ir rodo, kad ilgalaikis dopamino sistemos reguliavimas gali paskatinti individą priklausomybei ir nutukimui. Be to, šie duomenys suteikia svarbų žingsnį nustatant galimus naujus gydymo uždavinius nutukimo ir kitų sutrikimų gydymui ir prevencijai, kurie gali būti orientuoti į atlygio sistemą. Ateityje bus svarbu ištirti, kaip ši sistema reaguoja į HF dietos pašalinimą, taip pat ištirti bet kokius lyties skirtumus jautrumo atlyginimams ir didelio riebalų kiekio dietos atžvilgiu.

Papildoma medžiaga

Supp. Metodai

Spauskite čia norėdami peržiūrėti. (61K, doc)

Padėka

Autoriai nori padėkoti Cathy Steffenui už pagalbą veisiant ir perkeliant gyvūnus. Šis darbas buvo paremtas Pensilvanijos universiteto diabeto centro (DK019525) ir Nacionalinio psichikos sveikatos instituto (R01 MH51399 ir P50 MH66172) ir Nacionalinio narkotikų vartojimo instituto (R01 DA07359) dotacija.

Išnašos

Finansiniai atskleidimai: visi autoriai pareiškia, kad jie neturi biomedicininių finansinių interesų ar galimų interesų konfliktų.

Nuorodos

1. Wadden TA, Berkowitz RI, Womble LG, Sarwer DB, Phelan S, Cato RK, Hesson LA, Osei SY, Kaplan R, Stunkard AJ. Atsitiktinis gyvenimo būdo modifikavimo ir farmakoterapijos tyrimas nutukimui. N Engl J Med. 2005; 353 (20): 2111 – 20. [PubMed]

2. Blendy JA, Strasser A, Walters CL, Perkins KA, Patterson F, Berkowitz R, Lerman C. Sumažintas nikotino atlygis nutukimo atveju: žmogaus ir pelės kryžminis palyginimas. Psichofarmakologija (Berl) 2005

3. Franken IH, Muris P. Individualūs atlyginimų jautrumo skirtumai yra susiję su maisto troškimu ir santykiniu kūno svoriu sveikose moteryse. Apetitas. 2005; 45 (2): 198 – 201. [PubMed]

4. Kelley AE, Berridge KC. Gamtinių pranašumų neurologija: aktualumas priklausomybę sukeliantiems vaistams. J Neurosci. 2002; 22 (9): 3306 – 11. [PubMed]

5. Cagniard B, Balzamas PD, Brunner D, Zhuang X. Pelės, kurių chroniškai padidėjęs dopaminas turi geresnę motyvaciją, bet ne mokymąsi, už maisto atlygį. Neuropsichofarmakologija. 2006; 31 (7): 1362 – 70. [PubMed]

6. Liang NC, Hajnal A, Norgren R. Sham, maitinantis kukurūzų aliejų, padidina žiurkių dopamino kiekį. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 2006; 291 (5): R1236 – 9. [PubMed]

7. Mendoza J, Angeles-Castellanos M, Escobar C. Įgijimas skaniu maistu sukelia maisto laukiančią veiklą ir c-Fos ekspresiją, susijusią su atlygiu susijusiose smegenų srityse. Neurologija. 2005; 133 (1): 293 – 303. [PubMed]

8. Schroeder BE, Binzak JM, Kelley AE. Paprastas prefrontalinio žievės aktyvinimo profilis, susidūręs su kontekstiniais nikotino ar šokolado ryšiais. Neurologija. 2001; 105 (3): 535 – 45. [PubMed]

9. „Nestler EJ“, „Barrot M“, „Self DW“. DeltaFosB: ilgalaikis molekulinis jungiklis priklausomybei. Proc Natl Acad Sci US A. 2001, 98 (20): 11042 – 6. [PMC free article] [PubMed]

10. Teegarden SL, Bale TL. Maistinės pirmenybės sumažėjimas padidina emocionalumą ir riziką, kad maistas gali atsinaujinti. Biol psichiatrija. 2007; 61 (9): 1021 – 9. [PubMed]

11. Olausson P, Jentsch JD, Tronson N, Nestler EJ, Taylor JR. „dFosB“ „Nucleus Accumbens“ reglamentuoja sustiprintą instrumentinį elgesį ir motyvaciją. Neurologijos žurnalas. 2006; 26 (36): 9196 – 9204. [PubMed]

12. Chen J, Kelz MB, Zeng G, Sakai N, Steffen C, Shockett PE, Picciotto MR, Duman RS, Nestler EJ. Transgeniniai gyvūnai su indukuotu tiksliniu genų ekspresija smegenyse. Mol Pharmacol. 1998; 54 (3): 495 – 503. [PubMed]

13. Kelz MB, Chen J, Carlezon WA, Jr, Whisler K, Gilden L, Beckmann AM, Steffen C, Zhang YJ, Marotti L, Self DW, Tkatch T, Baranauskas G, Surmeier DJ, Neve RL, Duman RS, Picciotto MR, Duman RS Nestler EJ. Transkripcijos faktoriaus deltaFosB ekspresija smegenyse kontroliuoja jautrumą kokainui. Gamta. 1999; 401 (6750): 272 – 6. [PubMed]

14. Bale TL, Dorsa DM. Lytiniai skirtumai ir estrogeno poveikis oksitocino receptorių ribonukleino rūgšties ekspresijai ventromedialinėje hipotalamoje. Endokrinologija. 1995; 136 (1): 27 – 32. [PubMed]

15. Avena NM, Long KA, Hoebel BG. Žiurkėms, priklausančioms nuo cukraus, po abstinencijos padidėjo cukraus atsakas: cukraus nepriteklių įrodymas. Physiol Behav. 2005; 84 (3): 359 – 62. [PubMed]

16. Ar MJ, Franzblau EB, Kelley AE. Nucleus accumbens mu-opioidai reguliuoja didelės riebalų turinčios dietos vartojimą per aktyvuoto smegenų tinklo aktyvavimą. J Neurosci. 2003; 23 (7): 2882 – 8. [PubMed]

17. Zheng H, Patterson LM, Berthoud HR. Oxxin signalizacija ventralinio tegmentalio zonoje reikalinga norint padidinti riebalų apetitą, kurį sukelia opioidų stimuliavimas. J Neurosci. 2007; 27 (41): 11075 – 82. [PubMed]

18. Hommel JD, Trinko R, Sears RM, Georgescu D, Liu ZW, Gao XB, Thurmon JJ, Marinelli M, DiLeone RJ. Leptino receptorių signalizacija vidurio smegenų dopamino neuronuose reguliuoja šėrimą. Neuronas. 2006; 51 (6): 801 – 10. [PubMed]

19. Colby CR, Whisler K, Steffen C, Nestler EJ, Self DW. Striatyvinė ląstelių tipo specifinė „DeltaFosB“ ekspresija padidina kokaino skatinimą. J Neurosci. 2003; 23 (6): 2488 – 93. [PubMed]

20. Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, Cassidy MP, Kelz MB, Shaw-Lutchman T, Berton O, Sim-Selley LJ, Dileone RJ, Kumar A, Nestler EJ. Esminis DeltaFosB vaidmuo branduolio akumbensuose morfino veikloje. Nat Neurosci. 2006; 9 (2): 205 – 11. [PubMed]

21. Lee KW, Kim Y, Kim AM, Helmin K, Nairn AC, Greengard P. Kokaino sukeltas dendritinių stuburo formavimasis D1 ir D2 dopamino receptorių turinčiose vidutinio dydžio smailių neuronuose branduoliuose. Proc Natl Acad Sci US A. 2006, 103 (9): 3399 – 404. [PMC free article] [PubMed]

22. Blendy JA, Maldonado R. Genetinė narkomanijos analizė: cAMP atsako elemento rišamojo baltymo vaidmuo. J Mol Med. 1998; 76 (2): 104 – 10. [PubMed]

23. Nestler EJ. Narkomanijos molekuliniai mechanizmai. Neurofarmakologija. 2004; 47 1: 24 – 32. [PubMed]

24. Tanis KQ, Duman RS, Newton SS. CREB rišimasis ir aktyvumas smegenyse: regioninis specifiškumas ir indukcija elektrokonvulsiniu priepuoliu. Biol psichiatrija. 2007

25. Kumar A, Choi KH, Renthal W, Tsankova NM, Theobald DE, Truong HT, Russo SJ, Laplant Q, Sasaki TS, Whistler KN, Neve RL, Self DW, Nestler EJ. Chromatino rekonstrukcija yra pagrindinis mechanizmas, kuriuo grindžiamas striatumo kokaino sukeltas plastiškumas. Neuronas. 2005; 48 (2): 303 – 14. [PubMed]

26. Graham DL, Edwards S, Bachtell RK, Dileone RJ, Rios M, Self DW. Dinaminis BDNF aktyvumas branduolių accumbens su kokaino vartojimu padidina savęs vartojimą ir atkrytį. Nat Neurosci. 2007; 10 (8): 1029 – 37. [PubMed]

27. Svenningsson P, Nairn AC, Greengard P. DARPP-32 tarpininkauja daugelio piktnaudžiavimo narkotikų veiklai. Aaps J. 2005; 7 (2): E353 – 60. [PMC free article] [PubMed]

28. Palmer AA, Verbitsky M, Suresh R, Kamens HM, Reed CL, Li N, Burkhart-Kasch S, McKinnon CS, Belknap JK, Gilliam TC, Phillips TJ. Geno ekspresijos skirtumai pelėms, skirtingai atrinktoms metamfetamino jautrumui. Mamm genomas. 2005; 16 (5): 291 – 305. [PubMed]

29. Bogush A, Pedrini S, Pelta-Heller J, Chan T, Yang Q, Mao Z, Sluzas E, Gieringer T, Ehrlich ME. AKT ir CDK5 / p35 tarpininkauja smegenų neurotrofinio faktoriaus DARPP-32 indukcijai vidutinio dydžio smailių neuronuose in vitro. J Biol Chem. 2007; 282 (10): 7352 – 9. [PubMed]

30. Benavides DR, Bibb JA. Cdk5 vaidmuo piktnaudžiavimas narkotikais ir plastiškumas. Ann NY Acad Sci. 2004; 1025: 335 – 44. [PubMed]

31. Bibb JA, Chen J, Taylor JR, Svenningsson P, Nishi A, Snyder GL, Yan Z, Sagawa ZK, Ouimet CC, Nairn AC, Nestler EJ, Greengard P. Lėtinio kokaino poveikio reguliuoja neuroninis baltymas Cdk5. Gamta. 2001; 410 (6826): 376 – 80. [PubMed]

32. Blochl A, Sirrenberg C. Neurotropinai stimuliuoja dopamino išsiskyrimą iš žiurkių mezencepalinių neuronų per Trk ir p75Lntr receptorius. J Biol Chem. 1996; 271 (35): 21100 – 7. [PubMed]

33. Berton O, McClung CA, Dileone RJ, Krishnan V, Renthal W, Russo SJ, Graham D, Tsankova NM, Bolanos CA, Rios M, Monteggia LM, Self DW, Nestler EJ. Esminis BDNF vaidmuo mesolimbiniame dopamino trasoje socialiniame pralaimėjime. Mokslas. 2006; 311 (5762): 864 – 8. [PubMed]

34. Nestler EJ, Carlezon WA., Jr. Biol psichiatrija. 2006; 59 (12): 1151 – 9. [PubMed]

35. Ford CP, Beckstead MJ, Williams JT. Somatodendritinių dopamino slopinančių postinaptinių srovių Kappa opioidų slopinimas. J Neurophysiol. 2007; 97 (1): 883 – 91. [PubMed]

36. Nylander I, Vlaskovska M, Terenius L. Smegenų dinamorfo ir enkefalino sistemos Fischer ir Lewis žiurkėse: morfino tolerancijos ir pasitraukimo poveikis. Brain Res. 1995; 683 (1): 25 – 35. [PubMed]

37. Nylander I, Hyytia P, Forsander O, Terenius L. Skirtumai tarp alkoholio (AA) ir alkoholio išvengiančių (ANA) žiurkių prodynorfino ir proenkepalino sistemose. Alkoholio Clin Exp Res. 1994; 18 (5): 1272 – 9. [PubMed]

38. Kreek MJ. Kokainas, dopaminas ir endogeninė opioidų sistema. J Addict Dis. 1996; 15 (4): 73 – 96. [PubMed]

39. Carlezon WA, Jr, Duman RS, Nestler EJ. Daugelis CREB veidų. Tendencijos Neurosci. 2005; 28 (8): 436 – 45. [PubMed]

40. Dudman JT, Eaton ME, Rajadhyaksha A, Macias W, Taher M, Barczak A, Kameyama K, Huganir R, Konradi C. Dopamino D1 receptoriai tarpininkauja CREB fosforilinimu per NMDA receptoriaus fosforilinimą Ser897-NR1. J Neurochem. 2003; 87 (4): 922 – 34. [PubMed]

41. Savarankiškas DW. Narkotikų vartojimas ir elgesys, susijęs su neuroadaptacija mesolimbinėje dopamino sistemoje. Neurofarmakologija. 2004; 47 1: 242 – 55. [PubMed]

42. Beitner-Johnson D, Nestler EJ. Morfinas ir kokainas dopaminerginių smegenų atlyginimų regionuose tirozino hidroksilazei veikia dažnai. J Neurochem. 1991; 57 (1): 344 – 7. [PubMed]

43. Lu L, Grimm JW, Shaham Y, Hope BT. Molekulinės neuroadaptacijos accumbens ir ventralinio tegmentalio zonoje per pirmąsias 90 dienas, kai priverstinai susilaikė nuo kokaino savarankiško vartojimo žiurkėms. J Neurochem. 2003; 85 (6): 1604 – 13. [PubMed]

44. Shepard JD, Chuang DT, Shaham Y, Morales M. Metamfetamino savarankiško poveikio poveikis tirozino hidroksilazės ir dopamino transporterio lygiams žiurkės mesolimbiniame ir nigrostriatiniame dopamino keliuose. Psichofarmakologija (Berl) 2006, 185 (4): 505 – 13. [PubMed]

45. Fulton S, Pissios P, Manchon RP, Stiles L, Frank L, Pothos EN, Maratos-Flier E, Flier JS. Leptino reguliavimas mezoaccumbens dopamino keliu. Neuronas. 2006; 51 (6): 811 – 22. [PubMed]

46. Narita M, Nagumo Y, Miyatake M, Ikegami D, Kurahashi K, Suzuki T. Baltymų kinazės C poveikis oreksino sukeltam ekstraląstelinio dopamino kiekio padidėjimui ir jo naudingas poveikis. Eur J Neurosci. 2007; 25 (5): 1537 – 45. [PubMed]

47. Narita M, Nagumo Y, Hashimoto S, Khotib J, Miyatake M, Sakurai T, Yanagisawa M, Nakamachi T, Shioda S, Suzuki T. Tiesioginis oreksinerginių sistemų dalyvavimas mesolimbinio dopamino kelio ir susijusių morfino sukeltų elgesių aktyvavime. J Neurosci. 2006; 26 (2): 398 – 405. [PubMed]

48. „Borgland SL“, „Taha SA“, „Sarti F“, „Fields HL“, „Bonci“. „Orexin A“ VTA yra labai svarbus sinapsiniam plastiškumui ir elgesio jautrumui kokainui sukelti. Neuronas. 2006; 49 (4): 589 – 601. [PubMed]

49. Park ES, Yi SJ, Kim JS, Lee HS, Lee IS, Seong JK, Jin HK, Yoon YS. Oreksino-A ir neuropeptido Y ekspresijos pokyčiai nevalgytų ir labai riebalų turinčių žiurkių hipotalamoje. J Vet Sci. 2004; 5 (4): 295 – 302. [PubMed]

50. Wortley KE, Chang GQ, Davydova Z, Leibowitz SF. Peptidai, reguliuojantys maisto vartojimą: hipertrigliceridemijos metu orexino geno ekspresija padidėja. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 2003; 284 (6): R1454 – 65. [PubMed]

51. Zheng H, Corkern M, Stoyanova I, Patterson LM, Tian R, Berthoud HR. Peptidai, reguliuojantys maisto suvartojimą: apetitą skatinantys akumbenų manipuliacijos aktyvuoja hipotalaminius oreksino neuronus ir slopina POMC neuronus. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 2003; 284 (6): R1436 – 44. [PubMed]

52. Baldo BA, Gual-Bonilla L, Sijapati K, Daniel RA, Landry CF, Kelley AE. Oreksino / hipokretino turinčių hipotalaminių neuronų subpopuliacijos aktyvinimas GABAA receptorių pernešto branduolio accumbens sluoksnio slopinimu, bet ne veikiant naujai aplinkai. Eur J Neurosci. 2004; 19 (2): 376 – 86. [PubMed]

53. Harrisas GC, Wimmer M, Aston-Jones G. Šoninių hipotalaminių oreksinų neuronų vaidmuo. Gamta. 2005; 437 (7058): 556 – 9. [PubMed]