Biol Psichiatrija. 2008 m. gruodžio 1 d., 64(11):941-50. Epub 2008 liepos 26 d.
Teegarden SL, Nestler EJ, Bale TL.
Šaltinis
Gyvūnų biologijos katedra, Pensilvanijos universitetas, Filadelfija, PA 19104-6046, JAV.
Abstraktus
FAKTAI:
Jautrumas už atlygį buvo susijęs su elgesiu, susijusiu su piktnaudžiavimu narkotikais, taip pat ir persivalgymu. Tačiau pagrindiniai mechanizmai, prisidedantys prie atlygio jautrumo, nežinomi. Mes hipotezėme, kad dopamino signalizacijos disreguliacija gali būti pagrindinė padidėjusio atlygio jautrumo priežastis, pagal kurią už atlygį skatinantys stimulai galėtų normalizuoti sistemą.
METODAI:
Mes panaudojome padidinto jautrumo atlygiui genetinį pelės modelį – Delta FosB per daug ekspresuojančią pelę, kad ištirtume atlygio kelio pokyčius reaguojant į skanią riebią dietą. Šių pelių atlygio signalizacijos žymenys buvo ištirti tiek iš esmės, tiek po 6 savaičių skanios dietos. Pelės buvo tiriamos atlikus elgesio testą po to, kai buvo atsisakyta riebios dietos, siekiant įvertinti šio modelio pažeidžiamumą, pašalinant naudingus dirgiklius.
Rezultatai:
Mūsų rezultatai rodo pasikeitusį atlygio kelio aktyvavimą išilgai nucleus accumbens-pagumburio-ventralinės tegmentinės srities grandinės, atsirandančios dėl per didelės Delta FosB ekspresijos nucleus accumbens ir striataliniuose regionuose.. Fosforilinto ciklinio adenozino monofosfato (cAMP) atsako elementą jungiančio baltymo lygiai (pCREB), smegenų išvestinis neurotrofinis faktorius (BDNF), o dopamino ir ciklinio adenozino monofosfato reguliuojamas fosfoproteinas, kurio molekulinė masė 32 kDa (DARPP-32) branduolyje, buvo sumažintas Delta FosB pelėse, o tai rodo sumažėjusį dopamino signalizavimą. Šešias savaites laikantis riebios dietos šie skirtumai visiškai sušvelnėjo ir atskleidė stiprų skanios dietos potencialą. Delta FosB pelėms taip pat reikšmingai padidėjo lokomotorinis aktyvumas ir su nerimu susijęs atsakas praėjus 24 valandoms po didelio riebalų pašalinimo.
Išvados:
Šie rezultatai rodo jautrumą atlygio pokyčiams, susijusiems su Delta FosB ir dopamino signalų reguliavimu, kuris gali būti normalizuotas laikantis skanių dietų ir gali būti kai kurių nutukimo formų fenotipas..
Įvadas
Nepaisant didėjančių žinių apie nervų sistemas, kontroliuojančias apetitą ir sotumą, nutukimo lygis Jungtinėse Valstijose ir toliau didėja. Dabartinis gydymas vaistais yra ribotas, o elgesio pokyčiai kenčia nuo minimalaus ilgalaikio atitikimo (1). Kaloringo, skanaus maisto vartojimas buvo siejamas su streso ir atlygio smegenyse pokyčiais, o tai rodo, kad tokio maisto naudingos savybės gali nepaisyti energijos balanso signalų (2–4). Maistas, kuriame yra daug riebalų, veikia kaip natūralus atlygis, aktyvindamas smegenų atlygio centrus panašiai kaip piktnaudžiavimo vaistais, todėl buvo naudojamas savarankiško vartojimo paradigmose (5–8). Taigi tikėtina, kad elgesys ir persivalgymo bei piktnaudžiavimo narkotikais motyvai turi bendrų pagrindinių mechanizmų, kurie gali atverti naujas abiejų būklių gydymo galimybes.
Tiriant ryšį tarp skanaus maisto ir būdų, reguliuojančių atlygį ir stresą smegenyse, Anksčiau mes nustatėme molekulinius ir biocheminius sumažėjusio atlygio ir padidėjusio streso žymenis pasitraukus iš skanios riebios dietos (HF). Panašiai kaip ir piktnaudžiavimo vaistais, mūsų tyrimų metu skanios dietos poveikis padidino transkripcijos faktoriaus ΔFosB kiekį branduolyje (NAc), centrinėje smegenų atlygio struktūroje (9, 10).. Pelės, kurios per daug išreiškia ΔFosB, rodo didesnį instrumentinį atsaką už atlygį už maistą (11), todėl jos yra vertinga priemonė tiriant jautrumo atlygiui ir ilgalaikio atlygio sistemos disreguliavimo vaidmenį molekuliniuose ir biocheminiuose atsakuose į skanią dietą.
Šiame tyrime mes panaudojome ΔFosB per daug ekspresuojančias peles, kad ištirtume ilgalaikius atlygio žymenų pokyčius NAc-pagumburio-ventralinės tegmentinės srities (VTA) nervų grandinėje, reaguojant į skanią HF dietą. Remdamiesi ankstesniais tyrimais su šiomis atlygiui jautriomis pelėmis, iškėlėme hipotezę, kad ΔFosB sukelti atlygio jautrumo pokyčiai apima dopamino signalizacijos reguliavimo sutrikimą, atsirandantį dėl NAc grįžtamojo ryšio į VTA. Be to, iškėlėme hipotezę, kad natūralaus atlygio už daug energijos turinčios ŠN dietos poveikis normalizuos šių pelių dopaminerginę sistemą, o tai sukeltų perdėtą atsaką į stresą, atsirandantį dėl pasitraukimo iš šios HF dietos.. Unikalus skanios dietos, kaip naudingos medžiagos, naudojimo aspektas leidžia į fenotipą įtraukti pagumburio įvestį, skirtą apdovanoti grandinę, kuri gali nuspėti populiaciją, linkusią į gydymui atsparų nutukimą. Norėdami ištirti šią hipotezę, po HF poveikio ištyrėme dopamino neurotransmisijos žymenis, įskaitant pCREB, BDNF ir DARPP-32 NAc ir tirozino hidroksilazę bei dopamino transporterį VTA. Mes taip pat ištyrėme specifinius energijos balanso žymenis, kurie, kaip žinoma, turi įtakos dopamino gamybai, įskaitant leptino ir oreksino receptorius VTA ir oreksino ekspresiją šoniniame pagumburyje.
Medžiagos ir metodai
Gyvūnai
Teksaso universiteto Pietvakarių medicinos centre bitransgeninių pelių patinai, kurie indukuojamai per daug ekspresuoja ΔFosB dinaorfinų teigiamuose neuronuose NAc ir nugaros striatumoje (Kelz ir kt., 1999). išbandytas Pensilvanijos universitete. Visos pelės buvo gydomos doksiciklinu (57 μg/ml geriamajame vandenyje) iki atvykimo į Pensilvanijos universitetą. Siekiant sukelti pernelyg didelę ekspresiją, doksiciklinas buvo pašalintas (n = 6) (100). Kontrolinės pelės (n = 23) toliau vartojo vaistą. Pelės buvo priskirtos dietos grupėms praėjus aštuonioms savaitėms po doksicilino pašalinimo, kai buvo įrodyta, kad ekspresija pasiekia maksimalų lygį (12). Pelės buvo laikomos 26:13 šviesos ir tamsos ciklu (šviesa 12), o maistas ir vanduo buvo prieinami ad libitum. Visi tyrimai buvo atlikti pagal eksperimentinius protokolus, patvirtintus Pensilvanijos universiteto institucinio gyvūnų priežiūros ir naudojimo komiteto, ir visos procedūros buvo atliekamos pagal institucines gaires.
Dietos ekspozicija
Pelėms šešias savaites buvo skirtas namų maistas (n = 16) arba HF (n = 16–17). Namų maistas (Purina Lab Diet, St. Louis, MO) buvo 4.00 kcal/g, sudarytas iš 28% baltymų, 12% riebalų ir 60% angliavandenių. HF dietoje (Research Diets, New Brunswick, NJ) buvo 4.73 kcal/g, kurią sudarė 20 % baltymų, 45 % riebalų ir 35 % angliavandenių.
Biochemija ir genų ekspresija
Pelės buvo analizuojamos po šešių savaičių dietos. Smegenys buvo pašalintos iš kaukolės ir užšaldytos visos ant sauso ledo arba išpjaustytos NAc (maždaug 0.5–1.75 mm nuo bregmos, 3.5–5.5 mm gylyje) ir užšaldytos skystame azote. Iki tyrimo audinys buvo laikomas -80 °C temperatūroje.
Biocheminės analizės
Western blot metodai aprašyti papildomoje medžiagoje. Naudoti antikūnai buvo: Cdk5, CREB ir BDNF (1:500, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) ir fosfo-CREB (pCREB) (Ser 133) (1:500, Cell Signaling Technology, Danvers, MA).
Receptorių autoradiografija
Išsamūs autoradiografijos metodai aprašyti papildomoje medžiagoje. Naudoti ligandai buvo 2 nM H3 – SCH 23390 ir 5 nM H3 – spiperonas (PerkinElmer, Boston, MA).
Hibridizacija in situ
Audinių apdorojimas ir hibridizacija buvo atlikti taip, kaip aprašyta anksčiau (14). DARPP-32 zondą maloniai padovanojo P. Greengard (Rokfelerio universitetas), o oreksino zondą – J. Elmquist (Teksaso universiteto Pietvakarių medicinos centras). DARPP-32 tiriamos skaidrės buvo dedamos filmuoti 3 dienas, o skaidrės, kuriose buvo tiriamas oreksinas, buvo dedamos filmuoti 4 dienas. Filmų vaizdų kiekybinis įvertinimas buvo atliktas, kaip aprašyta anksčiau (10).
QRT-PGR
RNR buvo išskirta iš VTA ir atskirų genų ekspresija įvertinta naudojant TaqMan genų ekspresijos tyrimus (Applied Biosystems, Foster City, CA). Išsamius metodus ir statistines analizes galima rasti papildomoje medžiagoje.
Elgesio analizė
Siekiant ištirti jautrumo atlygiui poveikį dietos sukeltiems elgesio pokyčiams, po keturių savaičių veikimo pelių pogrupis buvo pašalintas iš ŠN ir grąžintas į namų maistą (n = 9 kontrolė, n = 8 ΔFosB). Praėjus 10 valandoms po abstinencijos, pelėms buvo atliktas atviro lauko bandymas pagal mūsų anksčiau paskelbtą mitybos nutraukimo paradigmą (XNUMX). Trumpai tariant, pelė buvo dedama į atviro lauko aparato centrą ir stebima penkias minutes. Buvo išmatuotas bendras linijų kryžminimas, išmatų boliai, laikas centre ir kryžmai į centrą.
Statistika
Visi duomenys, išskyrus Western blot, buvo analizuojami naudojant dvipusę ANOVA, po to Fisher's PLSD testą su doksiciklinu (ΔFosB ekspresija) ir dietos būklę kaip nepriklausomus kintamuosius. Atliekant RT-PGR analizę, buvo panaudota sumažinta P vertė, siekiant ištaisyti daugkartinius palyginimus susijusių genų grupėse (žr. papildomą medžiagą). Western blotai buvo analizuojami naudojant studento t-testą su doksiciklinu kaip nepriklausomu kintamuoju, lyginant optinį tankį toje pačioje blotoje. Visi duomenys pateikiami kaip vidurkis ± SEM.
rezultatai
Baziniai biocheminiai skirtumai
Norint išsiaiškinti molekulinius kelius, kuriais grindžiamas padidėjęs jautrumas atlygiui ΔFosB per daug ekspresuojančiose pelėse, NAc buvo ištirtas kelių pagrindinių signalizacijos molekulių lygis. Pastebėta tendencija, kad ΔFosB pelių NAc padidėjo Cdk5 lygis, palyginti su vadų kontroliniais gyvūnais, gydomais doksiciklinu (F = 5.1, P = 0.08; 1A pav.). ΔFosB pelės išreiškė reikšmingai sumažintą pCREB lygį (F = 7.4, P < 0.05; 1B pav.), taip pat bendrą CREB lygį (F = 5.4, P = 0.05; 1C pav.). Reikšmingas BDNF sumažėjimas taip pat buvo pastebėtas ΔFosB pelių NAc (F = 10.6, P < 0.05; 1D pav.).
1 pav
Pelėms, per daug ekspresuojančioms ΔFosB, buvo biocheminiai sumažėjusio dopamino signalizacijos žymenys NAc
Maisto suvartojimas ir kūno svoris laikantis riebios dietos
Toliau ištyrėme natūraliai naudingos HF dietos poveikį signalinių molekulių pokyčiams ΔFosB per daug ekspresuojančiose pelėse. Nebuvo skirtumų tarp ΔFosB pelių ir valgymo kontrolės nei namuose, nei HF. Tačiau bendras kalorijų suvartojimo sumažėjimas, normalizuotas pagal kūno svorį, kai buvo veikiamas ŠN, kuris buvo būdingas ΔFosB pelėms (F = 11.2, P < 0.01; 2A pav.). Pasibaigus šešioms dietos savaitėms, pelės, vartojusios ŠN, svėrė žymiai daugiau nei besilaikančios čiaudo dietos (F = 17.2, 0.001, P < 5.6, 0.05), o ΔFosB pelės svėrė mažiau nei kontrolinės (F = 2, 0.05, P < XNUMX, XNUMX; XNUMX pav.). XNUMXB). Šis poveikis buvo būdingas skirtumams tarp čiaudo dietos grupių (P < XNUMX).
2 pav
ΔFosB per daug ekspresuojančių pelių maisto suvartojimas nesiskyrė nei valgant maistą, nei naudojant daug riebalų (HF)
Biocheminiai riebios dietos skirtumai
Norint nustatyti, kaip bazinius NAc signalizacijos skirtumus gali pakeisti HF dieta, tie patys signaliniai baltymai, tirti pradžioje, buvo tiriami gyvūnams, kurie gavo šešias savaites ŠN. Reikšmingų Cdk5 lygių skirtumų nebuvo (3A pav.). Po šešių ŠN savaičių pCREB ir bendrojo CREB lygiai nebesiskyrė (3B, C pav.). BDNF lygis buvo žymiai padidėjęs ΔFosB pelėms po šešių savaičių ŠN poveikio (F = 6.5, P = 0.05; 3D pav.).
3 pav
Daug riebalų (HF) dieta pagerino signalų skirtumus, pastebėtus ΔFosB per daug ekspresuojančių pelių NAc
Dopamino receptorių autoradiografija
Naudojome receptorių autoradiografiją, kad įvertintume, ar ΔFosB sukelti dopamino signalizacijos pokyčiai NAc yra susiję su dopamino receptorių ekspresijos pokyčiais (4A pav.). Didelė riebalų dieta šiek tiek padidino D1 dopamino receptorių surišimo tankį (P = 0.14), o šis skirtumas buvo didesnis ΔFosB pelėms (4B pav.). Taip pat buvo tendencija didinti D1 surišimo plotą po HF (P = 0.06), o post hoc tyrimai parodė, kad tai reikšminga ΔFosB pelėms (P < 0.05; 4C pav.). Skirtingai nuo D1 receptorių, D2 receptorių surišimo tankis nesikeičia (kontrolinis chow = 97.6 ± 6.9, kontrolinis HF = 101.1 ± 8.2, ΔFosB chow = 91.6 ± 1.0, ΔFosB HF = 94.8 ± 9.5) arba surišimo plotas 47.3 (kontrolė) ± 3.4, kontrolinis HF = 53.8 ± 6.0, ΔFosB chow = 51.9 ± 3.7, ΔFosB HF = 49.0 ± 3.3) NAc.
4 pav
Dėl riebios dietos (HF) pasikeitė D1 dopamino receptorių prisijungimas ir DARPP-32 ekspresija ΔFosB per daug ekspresuojančių pelių branduolyje (NAc).
DARPP-32 ekspresija NAc
In situ hibridizacija buvo naudojama DARPP-32 ekspresijos lygiams NAc nustatyti (4D pav.). Riebalų dieta žymiai padidino DARPP-32 ekspresiją šiame smegenų regione (F = 5.1, P < 0.05), taip pat buvo reikšminga dietos ir ΔFosB ekspresijos (F = 8.9, P < 0.05) sąveika, o ΔFosB pelėms buvo didesnė dietos sukeltas pokytis (4E pav.). Bazinis DARPP-32 ekspresijos skirtumas tarp kontrolinių ir ΔFosB pelių buvo nustatytas atlikus post hoc testavimą (P < 0.01), taip pat reikšmingas DARPP-32 ekspresijos padidėjimas ΔFosB pelėse su HF (P <0.01).
Genų ekspresija VTA
QRT-PCR buvo naudojamas genų ekspresijos pokyčiams VTA įvertinti, nukreipiant į kelis pagrindinius genus, anksčiau susijusius su atlygio reguliavimu. Visi mėginiai buvo normalizuoti iki β-aktino. Siekiant užtikrinti, kad gydymas nepakeistų β-aktino ekspresijos, buvo atliktas atskiras tyrimas, skirtas palyginti β-aktiną su antrąja vidine kontrole, GAPDH. Reikšmingų β-aktino raiškos skirtumų nebuvo (ΔCT reikšmės, β-aktinas – GAPDH: kontrolinis chow = 2.29 ± 0.21, kontrolinis HF = 2.01 ± 0.04, ΔFosB chow = 2.32 ± 0.49, ΔFosB .2.37 = ± 0.10 HF = ± XNUMX HF).
Buvo pastebėta tirozino hidroksilazės ekspresijos sąveikos tarp ΔFosB ekspresijos ir gydymo dieta tendencija (F = 3.6, P < 0.06; 5A pav.). Šešių savaičių ekspozicija HF sumažino tirozino hidroksilazės ekspresiją kontrolinėse pelėse ir padidino ekspresiją ΔFosB pelėse. Buvo pastebėta reikšminga sąveika tarp ΔFosB ekspresijos ir dietos poveikio dopamino transporterio ekspresijai (F = 6.7, P < 0.03; 5B pav.). Panašiai kaip tirozino hidroksilazė, HF poveikis sumažino dopamino transporterio ekspresiją kontrolinėse pelėse ir žymiai padidino ΔFosB pelių ekspresiją (P <0.05). Bazinis dopamino transporterio ekspresijos skirtumas tarp kontrolinių ir ΔFosB pelių nepasiekė reikšmingumo (P = 0.16), tačiau po 6 savaičių HF, ΔFosB pelės išreiškė žymiai padidėjusį dopamino transporterio kiekį, palyginti su kontrolinėmis grupėmis (P <0.05).
5 pav
Didelės riebalų dietos (HF) ekspozicija ir ΔFosB ekspresija lėmė daugelio pagrindinių VTA molekulių ekspresijos pokyčius.
Pastebėta tendencija, rodanti padidėjusios ΔFosB ekspresijos poveikį TrkB lygiui VTA mažinti (F = 5.7, P < 0.04; 5C pav.). Nors nebuvo jokio pagrindinio poveikio κ-opioidų receptorių ekspresijai, ΔFosB pelėms buvo tendencija sumažinti ekspresiją (P = 0.08; 5D pav.). Leptino receptoriaus ekspresija taip pat buvo nustatyta VTA. Buvo nustatytas reikšmingas dietos poveikis (F = 6.1, P < 0.03), o ŠN reikšmingai sumažino leptino receptorių kiekį VTA tiek ΔFosB, tiek kontrolinėse pelėse (5E pav.). Taip pat buvo ištirta oreksino receptoriaus 1 ekspresija VTA. Dieta turėjo reikšmingą poveikį oreksino receptorių ekspresijai (F = 9.0, P < 0.02), o pelėms, paveiktoms ŠN, buvo didesnis VTA kiekis (5F pav.). Taip pat buvo tendencija, kad ΔFosB pelės šiame smegenų regione išreiškė didesnį oreksino receptoriaus 1 kiekį (P < 0.05, XNUMX).
Oreksino ekspresija šoniniame pagumburyje
In situ hibridizacija matavome oreksino kiekį šoniniame pagumburyje, kuris yra VTA oreksinerginės inervacijos šaltinis (6A pav.). Buvo reikšminga sąveika tarp ΔFosB ekspresijos ir ekspozicijos dietoje dėl oreksino ekspresijos (F = 9.1, P < 0.01), o HF žymiai padidino oreksino kiekį kontrolinėse pelėse (P < 0.05) ir sumažino ΔFosB pelių ekspresiją (6B pav.). Nors bazinėje būsenoje reikšmingų oreksino ekspresijos skirtumų nebuvo, po 6 savaičių HF, ΔFosB pelės išreiškė reikšmingai mažesnį oreksino kiekį, palyginti su kontrolinėmis grupėmis (P < 0.05, XNUMX).
6 pav
Daug riebalų (HF) dieta turėjo skirtingą poveikį oreksino ekspresijai kontrolinėse (Ctrl) ir ΔFosB per daug ekspresuojančiose pelėse
Besveikatos analizės
Norint įvertinti susijaudinimo ir emocionalumo pokyčius dėl mitybos pokyčių, pelėms buvo atliktas atviro lauko testas praėjus 24 valandoms po HF dietos nutraukimo (10). Bendras linijos kirtimas, kuris buvo įvertintas kaip susijaudinimo matas, buvo reikšmingai paveiktas ΔFosB ekspresijos (F = 6.6, P < 0.05) ir dietos (F = 4.6, P < 0.05; 7A pav.). ΔFosB pelės buvo aktyvesnės naujoje aplinkoje nei kontrolinės, o post hoc tyrimai parodė, kad pelės, pašalintos nuo ŠN, buvo žymiai aktyvesnės nei tos, kurios buvo paveiktos čiaudo (P < 0.05, 10). Išmatų boliai buvo skaičiuojami kaip į nerimą panašaus elgesio matas (10.2). Pagrindinis poveikis buvo ΔFosB ekspresija (F = 0.01, P < 7), o ΔFosB per daug ekspresuojančios pelės naujoje aplinkoje gamino daugiau išmatų, ypač namų maisto ir ŠN pašalinimo grupėse (24B pav.). ΔFosB pelėms, laikytoms HF dietos, išmatų buvo mažiau, nei tos, kurios buvo laikomos maitinant maistą ir buvo pašalintos likus 14.5 valandoms iki bandymo. Atrodo, kad kontrolinėms pelėms dieta įtakos neturėjo. Nei ΔFosB ekspresija, nei dieta neturėjo reikšmingo poveikio laikui, praleistam atvirame lauke (kontrolinis maistas = 3.1 ± 18.0 sek., kontrolinis HF = 3.2 ± 15.4 sek., kontrolinis W/D = 1.9 ± 16.9 sek., ΔFosB maistas = 2.4 ± 13.1 sek., ΔFosB HF = 3.9 ± 19.8 sek., ΔFosB W/D = 2.6 ± XNUMX sek.).
7 pav
Pelės, per daug išreiškiančios ΔFosB, buvo jautresnės riebios dietos (HF) nutraukimo poveikiui
Diskusija
Gydant nutukimą, labai svarbu nustatyti veiksnius, turinčius įtakos polinkiui persivalgyti ir priaugti svorio. Smegenų atlygio būdai vaidina svarbų vaidmenį motyvuojant ir reaguojant į skanų maistą ir mitybos pokyčius (6, 10, 15, 16). Kadangi oreksigeniniai ir anoreksigeniniai signalai gali tiesiogiai paveikti atlygio signalizaciją per pagumburio-VTA-NAc grandinę, atlygio centruose išaiškinus genus, reaguojančius į daug energijos turinčias skanias dietas, gali būti naujų terapinių tikslų gydant nutukimą (17, 18). Todėl mes ištyrėme biocheminius ir molekulinius atlygio ir energijos balanso signalizacijos žymenis išilgai pagumburio-VTA-NAc grandinės, reaguojant į HF dietą ΔFosB per daug ekspresuojančiose pelėse, kaip padidinto jautrumo atlygio pokyčiams modelį (13, 19, 20). ir elgesio jautrumą nutraukus dietą. Iškėlėme hipotezę, kad bazinis dopamino signalizacijos reguliavimas ΔFosB pelėse būtų normalizuotas dėl naudingo HF dietos poveikio, apimančio energijos balanso signalų ir dopamino sistemos sankirtą.
Norėdami ištirti žymenis, rodančius dopamino signalizacijos sutrikimą NAc, ištyrėme D1 receptorių lygius ir pasroviui skirtus efektorius. Nors reikšmingų D1 receptorių surišimo skirtumų nebuvo, buvo tendencija, kad HF ekspozicija padidino ΔFosB pelių surišimo plotą. Tai įdomu, nes atrodo, kad ΔFosB indukcija vaistais ir natūraliais atlygiais vyrauja dinorfinų teigiamuose vidutinių dygliuotų neuronų potipiuose, kurie pirmiausia išreiškia D1 receptorius. (9, 21). Žemiau esančio dopamino signalizacijos tikslo pCREB lygis buvo žymiai sumažintas ΔFosB pelėms, palaikant sumažėjusį D1 receptorių aktyvavimą šioje smegenų srityje (22, 23). Įdomu tai, kad mes taip pat nustatėme reikšmingą bendro CREB lygio sumažėjimą ΔFosB pelėse, o tai rodo dar labiau sumažėjusį dopamino signalo perdavimo pajėgumą, kuris gali būti antrinis dėl grįžtamojo ryšio, atsirandančio dėl ilgo pCREB sumažėjimo (24). BDNF ekspresija yra reguliuojama pCREB, yra padidėjusi su D1 aktyvacija ir yra svarbus su atlygiu susijusio neuroplastiškumo tarpininkas NAc (25, 26). Atitinkamai, mes nustatėme reikšmingą BDNF baltymo sumažėjimą ΔFosB pelių NAc.
Visi vidutiniai spygliuoti neuronai NAc išreiškia DARPP-32 (27). Dėl daugybės pasroviui veikiančių veiksnių jis yra gyvybiškai svarbus atlygio būdų dalyvis (28), jis buvo susijęs su priklausomybe nuo narkotikų ir kitais sutrikimais, susijusiais su dopamino sistema, įskaitant afektinius sutrikimus ir šizofreniją. (27, 29). Mes nustatėme didelį bazinį DARPP-32 ekspresijos sumažėjimą ΔFosB pelių NAc. DARPP-32 ekspresiją reguliuoja BDNF, todėl sumažėjusi ekspresija gali būti tiesiogiai susijusi su BDNF lygio sumažėjimu, nustatytu ΔFosB pelėse (27, 29, 30). Net nedideli DARPP-32 fosforilinimo būsenos pokyčiai gali sukelti esminių intracelulinio signalizacijos pokyčių NAc (27). Ankstesni tyrimai neparodė jokių DARPP-32 baltymo pokyčių ΔFosB pelėse po 12 savaičių pašalinimo iš doksiciklino, kai buvo atliktas platesnis striatalinis vertinimas (31). tai rodo, kad ΔFosB poveikis DARPP-32 gali priklausyti nuo laiko ir regiono.
Iškėlėme hipotezę, kad dramatiškas dopamino signalizacijos indeksų sumažėjimas ΔFosB pelių NAc greičiausiai susijęs su VTA dopamino projekcijos neuronų pokyčiais, nors ΔFosB šiuose neuronuose nėra per daug išreikštas.. Todėl mes ištyrėme su dopaminu susijusių genų ekspresiją VTA, įskaitant tirozino hidroksilazę ir dopamino transporterį. Tirozino hidroksilazės ir dopamino transporterio lygiai teigiamai koreliuoja su dopamino gamyba. Buvo tendencija, kad ΔFosB pelėms buvo sumažėjęs tirozino hidroksilazės kiekis ir reikšmingas dopamino transporterio sumažėjimas, atsižvelgiant į dopamino signalų reguliavimą NAc.. Kadangi šie baziniai su dopaminu susijusių genų sumažėjimai ΔFosB pelių VTA tikriausiai atspindi pasikeitusį grįžtamąjį ryšį iš NAc ilgalaikės ΔFosB per didelės ekspresijos metu., mes ištyrėme BDNF receptoriaus TrkB raišką kaip galimą NAc grįžtamojo ryšio į VTA mechanizmą (32). Panašiai kaip tirozino hidroksilazė ir dopamino transporteris, TrkB ekspresija taip pat parodė tendenciją, kad ΔFosB pelėse iš esmės sumažėjo, o tai nepasiekė reikšmingumo, kai buvo pakoreguota atliekant kelis palyginimus. BDNF-TrkB kompleksas gali būti transportuojamas atgal ir veikti VTA, kad paveiktų vietinę genų ekspresiją ir skatintų ląstelių augimą bei palaikymą (33). Be to, presinapsinio TrkB BDNF aktyvinimas NAc gali tiesiogiai stimuliuoti dopamino neurotransmisiją (32), palaikydamas pagrindinį dopamino signalizacijos sumažėjimą šiose pelėse.
κ-opioidų receptorių aktyvinimas dinorfinu reguliuoja dopamino signalizaciją ir yra dar vienas mechanizmas, pagal kurį NAc teikia grįžtamąjį ryšį VTA (34). Mes nustatėme, kad κ-opioidų receptorių ekspresija VTA parodė tendenciją mažėti ΔFosB pelėms. Kadangi buvo įrodyta, kad per didelė ΔFosB ekspresija sumažina dinorfinų ekspresiją NAc (20), ΔFosB pelėms gali smarkiai sumažėti grynasis VTA κ-opioidų aktyvinimas. Nors dinorfino signalizacija paprastai daro slopinamąjį poveikį dopamino neuronams (35), žiurkėms, kurios dažniau vartoja vaistus nuo piktnaudžiavimo, sumažėja dinorfino kiekis NAc, o tai rodo iš esmės sumažėjusio dinorfino signalizacijos vaidmenį didinant jautrumą atlygiui (36). , 37). Dinorfino – κ-opioidų sistemos reguliavimo sutrikimas buvo susijęs su piktnaudžiavimo narkotikais įgijimu ir išlikimu, palaikant kritinę opioidų signalizacijos pusiausvyrą normalizuojant dopamino kelius. (38).
Remdamiesi daug energijos turinčios HF dietos naudingu pajėgumu, iškėlėme hipotezę, kad ΔFosB pelių dopamino ir opioidų atlygio signalų reguliavimo sutrikimas paskatins šias peles reaguoti į tokią dietą, taip normalizuodama atlygio sistemą aktyvinant pagumburį. -VTA-NAc grandinė. Šešių savaičių dietos metu ΔFosB ir kontrolinių pelių suvartojamo maisto skirtumų nepastebėta, o tai rodo, kad ΔFosB pelių atlygio signalizacijos biocheminių ir molekulinių žymenų pokyčiai atsirado ne dėl suvartotų kalorijų skirtumų. Kaip ir tikėtasi, baziniai skirtumai, nustatyti pCREB, bendrojo CREB, BDNF, DARPP-32 ir κ-opioidų receptorių lygiuose tarp ΔFosB ir kontrolinių pelių buvo susilpnėję, greičiausiai dėl padidėjusios dopamino išeigos ΔFosB pelėms su HF (29, 39–41). .
Tirozino hidroksilazės ir dopamino transporterio tyrimas VTA atskleidė stebinančias priešingas ΔFosB ir kontrolinių pelių reakcijas po HF. Kontrolinėms pelėms sumažėjo tirozino hidroksilazės ir dopamino transporterio ekspresija, o ΔFosB pelėms padidėjo abiejų šių su dopaminu susijusių genų ekspresija. Įdomu tai, kad tirozino hidroksilazės ekspresija VTA keičiasi dėl lėtinio kokaino ar metamfetamino vartojimo (42–44), o tai rodo, kad ΔFosB pelėms natūralus ŠN atlygis gali būti ryškesnis nei kontrolinėms pelėms.
Siekiant ištirti, kaip galimas pagumburio įvestis į VTA gali perduoti signalus, atspindinčius energijos balansą, taip pat buvo ištirta leptino receptoriaus ir oreksino receptoriaus-1 ekspresija. Cirkuliuojantis leptino kiekis padidina ŠN, o leptinas savo ruožtu gali veikti VTA ir pakeisti dopamino signalizaciją (18, 45). VTA leptino receptorių ekspresija panašiai sumažėjo dėl HF tiek ΔFosB, tiek kontrolinėse pelėse, atsižvelgiant į panašų svorio padidėjimą ir dietą vartojant HF. Didelis riebalų kiekis taip pat padidino oreksino receptoriaus-1 ekspresiją tiek ΔFosB, tiek kontrolinių pelių VTA. Oreksinas aktyvina dopamino neuronus VTA, skatina VTA plastiškumą ir didina dopamino kiekį NAc (46-48). Remiantis mūsų stebėjimais, nustatyta, kad riebus maistas padidina oreksino ekspresiją pelėms (49, 50). Taigi, padidėjusi oreksino receptorių ekspresija, taip pat leptino signalizacijos pokyčiai VTA gali paskatinti dietos atlygį tiek ΔFosB, tiek kontrolinėms pelėms, palaikydami disociaciją tarp energijos balanso signalų perdavimo būdų ir tų, kurie tiesiogiai susiję su atlygiu.
Norint ištirti stresą sukeliantį atlygio atėmimo poveikį, pelės buvo tiriamos atvirame lauke, praėjus 24 valandoms po HF pašalinimo. ΔFosB pelės buvo jautresnės ūminiam pageidaujamos dietos nutraukimo poveikiui, o naujoje atviroje arenoje buvo padidėjęs susijaudinimo aktyvumas ir išmatų gamyba, palyginti su visomis kitomis kontrolinėmis ir dietos grupėmis. ΔFosB pelės šiame teste taip pat parodė įdomų elgsenos modelį, rodantį atlygį ir jautrumą stresui: HF dieta iš pradžių sumažino išmatų bolių gamybą, palyginti su chow, o pasitraukimas vėl padidino šį su nerimu susijusį atsaką. Šis pastebėtas aktyvumo atvirame lauke padidėjimas nesusijęs su oreksino ekspresijos pokyčiais, o tai rodo ryšį su streso sukeltu susijaudinimu, kuris nėra tik oreksino sukelto signalizacijos pokyčių poveikis. Apskritai šie duomenys patvirtina mūsų hipotezę, kad ΔFosB pelės būtų jautresnės ūminiam pageidaujamos dietos atsisakymo poveikiui dėl padidėjusio jautrumo atlygiui..
Kaip ilgalaikė per didelė ΔFosB ekspresija NAc sukelia tokius elgesio pokyčius ir atlygio signalizaciją? Mes pasiūlėme VTA sutapimų aptikimo modelį, kuriame pakeistas grįžtamasis ryšys iš NAc ir pagumburio perduoda signalus apie atlygio būseną, kad nustatytų dopamino sistemos reguliavimą, kuris gali palaikyti ryšį tarp atlygio kelio disreguliacijos ir polinkio į nutukimą (8 pav.). Aukšto dažnio ekspozicijos metu kelios įvestys, atspindinčios energijos balansą ir atlygio būseną, susilieja su VTA. Leptino ir oreksino signalizacijos padidėjimas, taip pat pakitęs grįžtamasis ryšys iš NAc į šoninį pagumburį gali turėti įtakos tai, kaip šie oreksigeniniai signalai reaguoja į HF ΔFosB pelėse (17, 18, 45, 47, 51–53). Riebalų dietos sukeltas BDNF padidėjimas gali suteikti VTA grįžtamąjį ryšį ir toliau skatinti su dopamino susijusio genų ekspresijos pokyčius.
8 pav
Didelė riebalų (HF) dieta normalizuoja nereguliuojamą atlygio signalizaciją ΔFosB pelėms
Šie rezultatai apibūdina molekulinius atlygio jautrumo žymenis ir rodo, kad ilgalaikis dopamino sistemos reguliavimo sutrikimas gali sukelti priklausomybę ir nutukimą. Be to, šie duomenys yra svarbus žingsnis siekiant tiksliai nustatyti galimus naujus terapinius tikslus nutukimo ir kitų sutrikimų, kurie gali būti sutelkti į atlygio sistemą, gydymui ir prevencijai. Ateityje bus svarbu ištirti, kaip ši sistema reaguoja į HF dietos pašalinimą, taip pat ištirti bet kokius lyčių skirtumus, susijusius su jautrumu atlygiui ir riebiai dietai.
Papildoma medžiaga
Supp. Metodai
Spauskite čia norėdami peržiūrėti. (61K, doc)
Padėka
Autoriai nori padėkoti Cathy Steffen už pagalbą gyvūnų veisimui ir perkėlimui. Šis darbas buvo paremtas Pensilvanijos universiteto diabeto centro (DK019525) ir Nacionalinio psichikos sveikatos instituto (R01 MH51399 ir P50 MH66172) ir Nacionalinio piktnaudžiavimo narkotikais instituto (R01 DA07359) dotacijomis.
Išnašos
Finansiniai atskleidimai: visi autoriai pareiškia, kad neturi biomedicininių finansinių interesų ar galimų interesų konfliktų.
Nuorodos
1. Wadden TA, Berkowitz RI, Womble LG, Sarwer DB, Phelan S, Cato RK, Hesson LA, Osei SY, Kaplan R, Stunkard AJ. Atsitiktinis gyvenimo būdo modifikavimo ir nutukimo farmakoterapijos tyrimas. N Engl J Med. 2005;353(20):2111–20.[PubMed]
2. Blendy JA, Strasser A, Walters CL, Perkins KA, Patterson F, Berkowitz R, Lerman C. Sumažėjęs nikotino atlygis nutukimo atveju: kryžminis žmonių ir pelių palyginimas. Psichofarmakologija (Berlis) 2005 m
3. Franken IH, Muris P. Individualūs atlygio jautrumo skirtumai yra susiję su sveikų moterų troškimu valgyti ir santykiniu kūno svoriu. Apetitas. 2005;45(2):198–201.[PubMed]
4. Kelley AE, Berridge KC. Natūralaus atlygio neuromokslas: priklausomybę sukeliančių vaistų svarba. J Neurosci. 2002;22(9):3306–11.[PubMed]
5. Cagniard B, Balsam PD, Brunner D, Zhuang X. Pelės, kurioms chroniškai padidėjęs dopamino kiekis, pasižymi didesne motyvacija, bet ne mokosi, kad gautų atlygį už maistą. Neuropsichofarmakologija. 2006;31(7):1362–70.[PubMed]
6. Liang NC, Hajnal A, Norgren R. Apgaulingas šėrimas kukurūzų aliejumi padidina žiurkės accumbens dopamino kiekį. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 2006;291(5):R1236–9.[PubMed]
7. Mendoza J, Angeles-Castellanos M, Escobar C. Skanaus valgio įtraukimas skatina maisto numatymo aktyvumą ir c-Fos ekspresiją su atlygiu susijusiose smegenų srityse. Neurologijos. 2005;133(1):293–303.[PubMed]
8. Schroeder BE, Binzak JM, Kelley AE. Įprastas prefrontalinės žievės aktyvacijos profilis po nikotino ar šokolado susijusių kontekstinių ženklų poveikio. Neurologijos. 2001;105(3):535–45.[PubMed]
9. Nestler EJ, Barrot M, Self DW. DeltaFosB: ilgalaikis molekulinis jungiklis priklausomybei gydyti. Proc Natl Acad Sci US A. 2001;98(20):11042–6. [PMC nemokamas straipsnis][PubMed]
10. Teegarden SL, Bale TL. Sumažėjęs mitybos pasirinkimas padidina emocionalumą ir dietos atkryčio riziką. Biol Psichiatrija. 2007;61(9):1021–9.[PubMed]
11. Olausson P, Jentsch JD, Tronson N, Nestler EJ, Taylor JR. dFosB branduolyje Accumbens reguliuoja maistu sustiprintą instrumentinį elgesį ir motyvaciją. Neurologijos žurnalas. 2006;26(36):9196–9204.[PubMed]
12. Chen J, Kelz MB, Zeng G, Sakai N, Steffen C, Shockett PE, Picciotto MR, Duman RS, Nestler EJ. Transgeniniai gyvūnai, turintys indukuojamą tikslinę genų ekspresiją smegenyse. Mol Pharmacol. 1998;54(3):495–503.[PubMed]
13. Kelz MB, Chen J, Carlezon WA, Jr, Whisler K, Gilden L, Beckmann AM, Steffen C, Zhang YJ, Marotti L, Self DW, Tkatch T, Baranauskas G, Surmeier DJ, Neve RL, Duman RS, Picciotto MR, Nestler EJ. Transkripcijos faktoriaus deltaFosB ekspresija smegenyse kontroliuoja jautrumą kokainui. Gamta. 1999;401(6750):272–6.[PubMed]
14. Bale TL, Dorsa DM. Lyčių skirtumai ir estrogeno poveikis oksitocino receptorių pasiuntinio ribonukleino rūgšties ekspresijai ventromedialiniame pagumburyje. Endokrinologija. 1995;136(1):27–32.[PubMed]
15. Avena NM, Long KA, Hoebel BG. Nuo cukraus priklausomos žiurkės labiau reaguoja į cukrų po abstinencijos: cukraus trūkumo efekto įrodymas. Fizinis elgesys. 2005;84(3):359–62.[PubMed]
16. Will MJ, Franzblau EB, Kelley AE. Nucleus accumbens mu-opioidai reguliuoja riebios dietos vartojimą aktyvuodami paskirstytą smegenų tinklą. J Neurosci. 2003;23(7):2882–8.[PubMed]
17. Zheng H, Patterson LM, Berthoud HR. Oreksino signalizacija ventralinėje tegmentalinėje srityje reikalinga didelio riebumo apetitui, kurį sukelia opioidų stimuliacija nucleus accumbens. J Neurosci. 2007;27(41):11075–82.[PubMed]
18. Hommel JD, Trinko R, Sears RM, Georgescu D, Liu ZW, Gao XB, Thurmon JJ, Marinelli M, DiLeone RJ. Leptino receptorių signalizacija vidurinių smegenų dopamino neuronuose reguliuoja maitinimą. Neuronas. 2006;51(6):801–10.[PubMed]
19. Colby CR, Whisler K, Steffen C, Nestler EJ, Self DW. Striatalinių ląstelių tipui būdinga per didelė DeltaFosB ekspresija padidina paskatą kokainui. J Neurosci. 2003;23(6):2488–93.[PubMed]
20. Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, Cassidy MP, Kelz MB, Shaw-Lutchman T, Berton O, Sim-Selley LJ, Dileone RJ, Kumar A, Nestler EJ. Esminis DeltaFosB vaidmuo morfino veikimo branduolyje accumbens. Nat Neurosci. 2006;9(2):205–11.[PubMed]
21. Lee KW, Kim Y, Kim AM, Helmin K, Nairn AC, Greengard P. Kokaino sukeltas dendritinis stuburo formavimasis D1 ir D2 dopamino receptorių turinčiuose vidutiniuose dygliuosiuose neuronuose nucleus accumbens. Proc Natl Acad Sci US A. 2006;103(9):3399–404. [PMC nemokamas straipsnis][PubMed]
22. Blendy JA, Maldonado R. Genetinė narkomanijos analizė: cAMP atsako elementą surišančio baltymo vaidmuo. J Mol Med. 1998;76(2):104–10.[PubMed]
23. Nestler EJ. Molekuliniai priklausomybės nuo narkotikų mechanizmai. Neurofarmakologija. 2004;47 1:24–32.[PubMed]
24. Tanis KQ, Duman RS, Newton SS. CREB surišimas ir aktyvumas smegenyse: regioninis specifiškumas ir elektrokonvulsinio priepuolio indukcija. Biol Psichiatrija. 2007 m
25. Kumar A, Choi KH, Renthal W, Tsankova NM, Theobald DE, Truong HT, Russo SJ, Laplant Q, Sasaki TS, Whistler KN, Neve RL, Self DW, Nestler EJ. Chromatino remodeliavimas yra pagrindinis mechanizmas, kuriuo grindžiamas kokaino sukeltas plastiškumas striatumoje. Neuronas. 2005;48(2):303–14.[PubMed]
26. Graham DL, Edwards S, Bachtell RK, Dileone RJ, Rios M, Self DW. Dinaminis BDNF aktyvumas nucleus accumbens vartojant kokainą padidina savarankišką vartojimą ir atkrytį. Nat Neurosci. 2007;10(8):1029–37.[PubMed]
27. Svenningsson P, Nairn AC, Greengard P. DARPP-32 tarpininkauja daugelio piktnaudžiavimo narkotikais veiksmams. Aaps J. 2005;7(2):E353–60. [PMC nemokamas straipsnis][PubMed]
28. Palmer AA, Verbitsky M, Suresh R, Kamens HM, Reed CL, Li N, Burkhart-Kasch S, McKinnon CS, Belknap JK, Gilliam TC, Phillips TJ. Genų ekspresijos skirtumai pelėse, skirtingai parinktos pagal jautrumą metamfetaminui. Mamm genomas. 2005;16(5):291–305.[PubMed]
29. Bogush A, Pedrini S, Pelta-Heller J, Chan T, Yang Q, Mao Z, Sluzas E, Gieringer T, Ehrlich ME. AKT ir CDK5 / p35 tarpininkauja smegenų kilmės neurotrofinio faktoriaus DARPP-32 indukcijai vidutinio dydžio dygliuotuose neuronuose in vitro. J Biol Chem. 2007;282(10):7352–9.[PubMed]
30. Benavides DR, Bibb JA. Cdk5 vaidmuo piktnaudžiaujant narkotikais ir plastiškumu. Ann NY Acad Sci. 2004; 1025:335–44.[PubMed]
31. Bibb JA, Chen J, Taylor JR, Svenningsson P, Nishi A, Snyder GL, Yan Z, Sagawa ZK, Ouimet CC, Nairn AC, Nestler EJ, Greengard P. Lėtinio kokaino poveikio poveikį reguliuoja neuronų baltymas CDk5. Gamta. 2001;410(6826):376–80.[PubMed]
32. Blochl A, Sirrenberg C. Neurotrofinai stimuliuoja dopamino išsiskyrimą iš žiurkės mezencefalinių neuronų per Trk ir p75Lntr receptorius. J Biol Chem. 1996; 271(35): 21100–7.[PubMed]
33. Berton O, McClung CA, Dileone RJ, Krishnan V, Renthal W, Russo SJ, Graham D, Tsankova NM, Bolanos CA, Rios M, Monteggia LM, Self DW, Nestler EJ. Esminis BDNF vaidmuo mezolimbiniame dopamino kelyje esant socialiniam pralaimėjimo stresui. Mokslas. 2006;311(5762):864–8.[PubMed]
34. Nestler EJ, Carlezon WA., Jr. Mezolimbinio dopamino atlygio grandinė sergant depresija. Biol Psichiatrija. 2006;59(12):1151–9.[PubMed]
35. Ford CP, Beckstead MJ, Williams JT. Kapa opioidų somatodendritinių dopamino slopinančių postsinapsinių srovių slopinimas. J Neurofiziolis. 2007;97(1):883–91.[PubMed]
36. Nylander I, Vlaskovska M, Terenius L. Smegenų dinorfino ir enkefalino sistemos Fischer ir Lewis žiurkėse: morfino tolerancijos ir pasitraukimo įtaka. Brain Res. 1995;683(1):25–35.[PubMed]
37. Nylander I, Hyytia P, Forsander O, Terenius L. Skirtumai tarp alkoholio mėgstančių (AA) ir alkoholio vengiančių (ANA) žiurkių prodinorfinų ir proenkefalino sistemose. Alcohol Clin Exp Res. 1994;18(5):1272–9.[PubMed]
38. Kreek MJ. Kokainas, dopaminas ir endogeninė opioidų sistema. J Addict Dis. 1996;15(4):73–96.[PubMed]
39. Carlezon WA, Jr, Duman RS, Nestler EJ. Daugybė CREB veidų. Neurosci tendencijos. 2005;28(8):436–45.[PubMed]
40. Dudman JT, Eaton ME, Rajadhyaksha A, Macias W, Taher M, Barczak A, Kameyama K, Huganir R, Konradi C. Dopamino D1 receptoriai tarpininkauja CREB fosforilinant fosforilinant NMDA receptorius Ser897-NR1. J Neurochem. 2003;87(4):922–34.[PubMed]
41. Savarankiškas DW. Narkotikų vartojimo ir ieškojimo elgesio reguliavimas neuroadaptacijomis mezolimbinėje dopamino sistemoje. Neurofarmakologija. 2004;47 1:242–55.[PubMed]
42. Beitner-Johnson D, Nestler EJ. Morfinas ir kokainas daro įprastą lėtinį poveikį tirozino hidroksilazei dopaminerginiuose smegenų atlygio regionuose. J Neurochem. 1991;57(1):344–7.[PubMed]
43. Lu L, Grimm JW, Shaham Y, Hope BT. Molekulinės neuroadaptacijos žiurkių pilvo ir pilvo apatinės dalies srityje per pirmąsias 90 dienų priverstinio susilaikymo nuo savarankiško kokaino vartojimo žiurkėms. J Neurochem. 2003;85(6):1604–13.[PubMed]
44. Shepard JD, Chuang DT, Shaham Y, Morales M. Metamfetamino savarankiško vartojimo poveikis tirozino hidroksilazės ir dopamino transporterio lygiams žiurkės mezolimbiniuose ir nigrostrialiniuose dopamino keliuose. Psychopharmacology (Berl), 2006; 185(4):505–13.[PubMed]
45. Fulton S, Pissios P, Manchon RP, Stiles L, Frank L, Pothos EN, Maratos-Flier E, Flier JS. Mesoaccumbens dopamino kelio leptino reguliavimas. Neuronas. 2006;51(6):811–22.[PubMed]
46. Narita M, Nagumo Y, Miyatake M, Ikegami D, Kurahashi K, Suzuki T. Proteinkinazės C įtaka oreksino sukeltam ekstraląstelinio dopamino lygio padidėjimui ir jo naudingas poveikis. Eur J Neurosci. 2007;25(5):1537–45.[PubMed]
47. Narita M, Nagumo Y, Hashimoto S, Khotib J, Miyatake M, Sakurai T, Yanagisawa M, Nakamachi T, Shioda S, Suzuki T. Tiesioginis oreksinerginių sistemų dalyvavimas aktyvuojant mezolimbinį dopamino kelią ir su tuo susijusį elgesį, kurį sukelia morfijus. J Neurosci. 2006;26(2):398–405.[PubMed]
48. Borgland SL, Taha SA, Sarti F, Fields HL, Bonci A. Oreksinas A VTA yra labai svarbus sinapsinio plastiškumo ir elgesio jautrinimo kokainui indukcijai. Neuronas. 2006;49(4):589–601.[PubMed]
49. Park ES, Yi SJ, Kim JS, Lee HS, Lee IS, Seong JK, Jin HK, Yoon YS. Oreksino-A ir neuropeptido Y ekspresijos pokyčiai nevalgiusių ir riebiu maistu šeriamų žiurkių pagumburyje. J Vet Sci. 2004;5(4):295–302.[PubMed]
50. Wortley KE, Chang GQ, Davydova Z, Leibowitz SF. Peptidai, reguliuojantys maisto suvartojimą: hipertrigliceridemijos metu padidėja oreksino geno ekspresija. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 2003;284(6):R1454–65.[PubMed]
51. Zheng H, Corkern M, Stoyanova I, Patterson LM, Tian R, Berthoud HR. Peptidai, reguliuojantys maisto suvartojimą: apetitą sukeliantis manipuliavimas su accumbens aktyvina pagumburio oreksino neuronus ir slopina POMC neuronus. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 2003;284(6):R1436–44.[PubMed]
52. Baldo BA, Gual-Bonilla L, Sijapati K, Daniel RA, Landry CF, Kelley AE. Oreksino / hipokretino turinčių pagumburio neuronų subpopuliacijos aktyvinimas GABAA receptorių sukeltu nucleus accumbens apvalkalo slopinimu, bet ne veikiant naujai aplinkai. Eur J Neurosci. 2004;19(2):376–86.[PubMed]
53. Harris GC, Wimmer M, Aston-Jones G. Šoninių pagumburio oreksino neuronų vaidmuo ieškant atlygio. Gamta. 2005;437(7058):556–9.[PubMed]
;