Metamfetamino aktyvuotų Fos ekspresuojančių neuronų molekulinių pokyčių nustatymas iš vieno žiurkės nugaros striatum, naudojant fluorescencinio aktyvinimo ląstelių rūšiavimą (FACS) (2013)

Metamfetaminas ir kiti vaistai aktyvuoja nedidelę visų smegenų neuronų dalį. Anksčiau sukūrėme fluorescencija aktyvintų ląstelių rūšiavimo (FACS) metodą, skirtą apibūdinti molekulinius pokyčius, selektyviai sukeltus aktyvuotuose neuronuose, kurie išreiškia nervinio aktyvumo žymeklį Fos. Tačiau taikant šį metodą reikia sujungti daugelio žiurkių mėginius. Dabar aprašome modifikuotą FACS pagrįstą metodą, skirtą apibūdinti Fos ekspresuojančių nugaros striatalinių neuronų molekulinius pokyčius iš vienos žiurkės, naudojant daugialypę išankstinio amplifikacijos strategiją.

Fos ir NeuN (neuronų žymeklis) imunohistochemija rodo, kad 5–6% nugaros striatum neuronų buvo aktyvuoti praėjus 90 minučių po ūmių metamfetamino injekcijų (5 mg/kg, ip), o mažiau nei 0.5% neuronų buvo suaktyvinti fiziologinio tirpalo injekcijomis.

Mes panaudojome FACS, kad atskirtume NeuN pažymėtus neuronus į Fos-teigiamus ir Fos-neigiamus neuronus, ir įvertinome mRNR ekspresiją naudodami RT-qPCR iš vos penkių Fos-teigiamų neuronų. Metamfetaminas 3–20 kartų padidino tiesioginių ankstyvųjų genų arc, homer-2, c-fos, fosB ir jo izoformų skaičių.ΔfosB ir nauja izoforma ΔfosB-2) Fos teigiamuose, bet ne Fos neigiamuose neuronuose. Neatidėliotina ankstyva geno mRNR indukcija buvo 10 kartų mažesnė arba jos nebuvo, kai buvo vertinama nerūšiuotuose mėginiuose iš pavienių nugaros striatumo homogenatų. Mūsų modifikuotas metodas leidžia ištirti unikalius molekulinius neuronų pokyčius, kuriuos aktyvuoja vaistai arba su vaistais susiję ženklai sudėtinguose priklausomybės modeliuose.

Metamfetaminas ir kiti vaistai aktyvuoja nedidelę visų smegenų neuronų dalį. Mes čia pranešame apie patobulintą metodą molekuliniams pokyčiams, selektyviai sukeltiems aktyvuotuose neuronuose, kurie išreiškia nervinio aktyvumo žymenį Fos, apibūdinti. Mes naudojome FACS kartu su tiksline PGR išankstine amplifikacija, kad įvertintume ūminę metamfetamino sukeltą genų ekspresiją iš vos 5 Fos ekspresuojančių neuronų iš vienos žiurkės nugaros striatum. Metamfetaminas sukėlė 3–20 kartų greitų ankstyvųjų genų (IEG) padidėjimą Fos teigiamuose, bet ne Fos neigiamuose neuronuose. Tikslinis PGR išankstinis amplifikavimas leidžia ištirti unikalius molekulinius neuronų pokyčius, kuriuos aktyvuoja vaistai arba su vaistais susiję ženklai sudėtinguose priklausomybės modeliuose.

Paskelbta 2013 m. Šis straipsnis yra JAV vyriausybės darbas ir yra viešas JAV.