Metamfetamino aktyvuotų Fos ekspresuojančių neuronų molekulinių pokyčių nustatymas iš vieno žiurkės nugaros striatum, naudojant fluorescencinio aktyvinimo ląstelių rūšiavimą (FACS) (2013)

J Neurochem. 2014 Jan; 128 (1): 173-85. doi: 10.1111 / jnc.12381. Epub 2013 Aug 21.

Liu QR1, Rubio FJ, Bossert JM, Marchant NJ, Fanous S, Hou X, Shaham Y, Tikimės, kad BT.

Abstraktus

Metamfetaminas ir kiti vaistai aktyvuoja nedidelę visų smegenų neuronų dalį. Anksčiau sukūrėme fluorescenciniu būdu sukurtą ląstelių rūšiavimo (FACS) metodą, skirtą apibūdinti molekulinius pokyčius, sukeltus selektyviai aktyvuotuose neuronuose, kurie ekspresuoja neuroninio aktyvumo žymeklį Fos. Tačiau, taikant šį metodą, reikia rinkti daugelio žiurkių mėginius. Dabar aprašome modifikuotą FACS metodą, skirtą apibūdinti molekulinius Fos-ekspresuojančių doralinių striatų neuronų pokyčius iš vieno žiurkės, naudojant multipleksinę prieš amplifikacijos strategiją.

Fosas ir NeuN (neuroninis žymeklis) imunohistochemija rodo, kad 5-6% nugaros striatumo neuronų buvo aktyvuoti 90 min po ūminių metamfetamino injekcijų (5 mg / kg, ip), o mažiau nei 0.5% neuronų buvo aktyvuoti fiziologiniu tirpalu.

Mes panaudojome FACS, norėdami atskirti NeuN žymėtus neuronus į Fos-teigiamus ir Fos-neigiamus neuronus, ir įvertinome mRNR ekspresiją, naudojant RT-qPCR nuo penkių Fos-teigiamų neuronų. Metamfetaminas sukėlė 3-20 kartus didesnį tiesioginių ankstyvųjų genų, homer-2, c-fos, fosB ir jo izoformų padidėjimą (ΔfosB ir naujasis izoformas ΔfosB-2) Fos-teigiami, bet ne Fos-neigiami neuronai. Nedelsiant ankstyvo geno mRNR indukcija buvo 10 kartus mažesnė arba jos nėra, kai buvo vertinami nesurūšiuoti mėginiai iš vieno nugaros striatumo homogenato. Mūsų modifikuotas metodas leidžia ištirti unikalius molekulinius pokyčius neuronuose, aktyvuotuose su narkotikais arba su narkotikais susijusiais ženklais sudėtingose ​​priklausomybės modeliuose.

Metamfetaminas ir kiti vaistai aktyvuoja nedidelę visų smegenų neuronų dalį. Mes čia pateikiame patobulintą metodą, skirtą apibūdinti molekulinius pokyčius, sukeltus selektyviai aktyvuotuose neuronuose, kurie ekspresuoja neuroninio aktyvumo žymeklį Fos. Mes naudojome FACS kartu su tiksliniu PCR išankstiniu amplifikavimu, kad įvertintume ūminę metamfetamino sukeltą genų ekspresiją nuo vieno 5 Fos ekspresuojančio neurono iš vieno žiurkės nugaros striatumo. Metamfetaminas sukėlė 3-20 kartus didesnį tiesioginių ankstyvųjų genų (IEG) padidėjimą Fos-teigiamuose, bet ne Fos-neigiamuose neuronuose. Tikslinis PCR išankstinis amplifikavimas leidžia ištirti unikalius molekulinius pokyčius neuronuose, aktyvuotuose su narkotikais arba su narkotikais susijusiais ženklais sudėtingose ​​priklausomybės modeliuose.

Paskelbta 2013. Šis straipsnis yra JAV vyriausybės darbas ir yra viešas JAV.