ΔFosB viršsekspresijos įtaka opioidų ir kanabinoidų receptorių sukeltam signalizavimui branduolių accumbens (2011) \ t

Neurofarmakologija. 2011 Dec;61(8):1470-6. doi: 10.1016/j.neuropharm.2011.08.046.

Sim-Selley LJ, Cassidy MP, Sparta A, Zachariou V, Nestler EJ, Selley DE.

Šaltinis

Virdžinijos Sandraugos universiteto Medicinos mokykla, Ričmondas, VA 23298, JAV Farmakologijos ir toksikologijos katedra ir Narkotikų ir alkoholio tyrimų institutas.

Abstraktus

Stabilus transkripcijos faktorius ΔFosB indukuojamas branduolyje accumbens (NAc) lėtiniu keleto piktnaudžiavimo vaistų poveikiu, o transgeninė ΔFosB ekspresija striatume pagerina morfino ir kokaino naudingas savybes.e. Tačiau šių pastabų mechaninis pagrindas yra nepakankamai suprantamas. Mes naudojome bitransgeninį pelės modelį su indukuotina ΔFosB ekspresija dopamino D (1) receptorių / dinamorinų turinčių striatalų neuronai, siekiant nustatyti ΔFosB ekspresijos poveikį opioidų ir kanabinoidų receptorių signalizacijai NAc. Rezultatai parodė, kad opioidų sukeltas G-baltymų aktyvumas ir adenililo ciklo slopinimas pagerėjo pelių, išreiškiančių ΔFosB, NAc. Panašiai taip pat pagerėjo adenililciklazės kappa opioidų inhibicija AFosB ekspresuojančiose pelėse.. Atvirkščiai, kanabinoidų receptorių sukeltas signalizavimas nesiskyrė nuo AFosB ir kontrolinių pelių per didelę ekspresiją turinčių pelių. Tšie rezultatai rodo, kad opioidų ir kanabinoidų receptorių signalizavimas yra diferencijuotas pagal AFosB ekspresiją, ir rodo, kad ΔFosB ekspresija gali sukelti kai kuriuos jos efektus per sustiprintą mu ir kappa opioidų receptorių signalizavimą NAc.

Raktiniai žodžiai: G-baltymas, adenililo ciklazė, striatumas

1. Įvadas

Opioidiniai receptoriai ir kanapių CB₁ receptoriai (CB)₁R) yra neurobiologiniai tikslai dviem plačiai naudojamoms vaistų klasėms, įskaitant morfiną, heroiną ir receptinius opioidus, ir marihuaną (Δ⁹-tetrahidrokanabinolis (THC)). Ūminius opioidų ir kanabinoidų poveikius sąlygoja su G-baltymu susiję receptoriai, kurie aktyvuoja pirmiausia G_{i / o} baltymų ir gamina žemyn esančius efektorinius atsakus, tokius kaip adenililo ciklazės slopinimas (Vaikai, 1991, Childers ir kt., 1992, Howlett ir kt., 2002). Δ variklis, atminties sutrikimas ir psichoaktyvus poveikis⁹-THC gamina CB₁R (Huestis ir kt., 2001, Zimmer ir kt., 1999), kurie yra plačiai paplitę smegenyse ir pasižymi dideliu bazinio ganglijos, hipokampo ir smegenų \ tHerkenham ir kt., 1991). Dauguma kliniškai svarbių ir piktnaudžiaujamų opioidinių vaistų analgetinius ir naudingus efektus daugiausia sukelia mu opioidiniai receptoriai (MOR) (Matthes ir kt., 1996), kurios yra praturtintos limbine sistema ir smegenų žiedu (Mansour ir kt., 1994). Mesolimbinė sistema, sudaryta iš dopaminerginių projekcijų iš ventralinio tegmentalio srities (VTA) iki branduolių accumbens (NAc), atlieka svarbų vaidmenį skatinant opioidų ir kanabinoidų poveikį (Bozarth ir Wise, 1984, Vaccarino ir kt., 1985, Zangen ir kt., 2006), taip pat kiti piktnaudžiavimo narkotikai (Koob ir Volkow, 2010). Be to, endogeninės opioidų ir kanabinoidų sistemos yra susijusios su daugelio psichoaktyvių vaistų klasių naudingumu (Maldonado ir kt., 2006, Trigo ir kt., 2010). Taigi svarbu išsiaiškinti mechanizmus, kuriais opioidas ir CB₁R signalizacija yra reglamentuojama NAc.

Svarbiausias narkotikų vartojimo srities klausimas buvo nustatyti baltymus, kurie tarpininkauja perėjimui nuo ūminio iki ilgalaikio psichoaktyviųjų vaistų poveikio. AP-1 transkripcijos faktorius ΔFosB yra ypač įdomus, nes jis yra stabilus sutrumpintas jungimo varianto produktas, fosb genas, kuris susikaupia pakartotinai veikiant piktnaudžiavimo ar natūralių \ tMcClung ir kt., 2004, „Nestler“, „2008“, Nestler ir kt., 1999). Mes nustatėme, kad ΔFosB indukuojamas smegenyse po pakartotinio poveikio morfinui, Δ⁹-THC, kokainas arba etanolis, kiekvienas vaistas sukuria unikalų regioninį ΔFosB ekspresijos modelį (Perrotti ir kt., 2008). Nuolatinis narkotikų aptikimas buvo tas, kad ΔFosB buvo labai paskatintas striatume, kur visi keturi vaistai sukėlė ΔFosB NAc šerdyje ir visi, išskyrus Δ⁹-THC žymiai sukėlė ekspresiją NAc apvalkale ir caudate-putamen.

Farmakologiniai tyrimai parodė, kad dopamino D vartojimas kartu₁ receptorius (D₁R) antagonistas SCH 23390 blokavo ΔFosB indukciją NAc ir caudato-putamen'e po pertrūkiančio kokaino ar morfino vartojimo, nurodydamas galimą D reikšmę.₁R ekspresuojantys neuronai (Muller ir Unterwald, 2005, Nye et al., 1995). Ištirtas ΔFosB indukcijos poveikis vaistų sukeltam elgesiui, naudojant bitransgenines peles, kurios ekspresuoja ΔFosB specifinėse NAc ir dorsal striatum neuronų populiacijose (Chen ir kt., 1998). Pelės, ekspresuojančios ΔFosB dinorfinu / D₁R teigiami neuronai NAc ir dorsal striatum (linija 11A) rodo pakitusią reakciją į piktnaudžiavimo narkotikus, ypač padidėjusį jautrumą kokaino ar morfino poveikiui (Colby ir kt., 2003, Kelzas ir kt., 1999, Zachariou ir kt., 2006). Šie pokyčiai atsirado nesant MOR ar įvairių G baltymų subvienetų pokyčių. Tačiau ΔFosB ekspresuojančių pelių NAc sumažėjo dinamorfinų mRNR koncentracija (Zachariou ir kt., 2006), tai rodo, kad vienas AFosB tikslas yra genas, koduojantis endogeninį opioidinį peptidą. ΔFosB indukcija taip pat gali sukelti elgesio pokyčius reguliuojant receptorių signalizaciją NAc, tačiau ši galimybė nebuvo ištirta. Todėl šiuose tyrimuose buvo naudojamas bitransgeninis pelės modelis, siekiant nustatyti, ar ΔFosB per didelė ekspresija dinamorine / D₁R turintys striatalų neuronai keičia MOR-medijuojamą G-baltymų aktyvumą ir MOR- ir KOR-tarpininkaujamą adenililo ciklazės slopinimą NAc. ΔFosB poveikis CB₁Taip pat buvo vertinamas R-medijuojamo G baltymo aktyvumas, nes Δ⁹-THC vartojimas sukelia ΔFosB NAc (Perrotti ir kt., 2008) ir žinoma, kad endokannabinoidų sistema reguliuoja smegenų atlygio grandines (\ tGardner, 2005, Maldonado ir kt., 2006), tačiau ΔFosB poveikis endokannabinoidų sistemai netirtas.

2. Medžiagos ir metodai

2.1. Reagentai

[³⁵S] GTPyS (1250 Ci / mmol), [a-³²P] ATP (800 Ci / mmol) ir [³H] cAMP (26.4 Ci / mmol) buvo įsigyti iš PerkinElmer (Shelton, CT). ATP, GTP, BVP, cAMP, galvijų serumo albuminas, kreatino fosfokinazė, papaverinas, imidazolas ir WIN-55212-2 buvo įsigyti iš Sigma Aldrich (St. Louis, MO). GTPyS buvo įsigytas iš Roche Diagnostic Corporation (Čikaga, IL). DAMGO buvo suteiktas Nacionalinio narkotikų vartojimo instituto narkotikų tiekimo programoje (Rockville, MD). Econo-1 scintiliacinis skystis gautas iš Fisher Scientific (Norcross, GA). Ekolito scintiliacinis skystis gautas iš ICN (Costa Mesa, CA). Visos kitos cheminės medžiagos buvo gautos iš Sigma Aldrich arba Fisher Scientific.

2.2. Pelės

Vyriškos bitransgeninės pelės, gautos iš NSE-tTA (linija A) × TetOp-AFosB (linija 11), buvo sukurtos, kaip aprašyta Kelz et al. (Kelzas ir kt., 1999). Bitransgeninės pelės buvo sukurtos ir auginamos doksiciklinu (100 µg geriamajame vandenyje), kad slopintų transgeno ekspresiją. 8 savaitės doksiciklinas buvo praleidžiamas iš vandens pusėje pelių, kad būtų galima transgeno ekspresiją, o likusios pelės buvo laikomos doksiciklinu, kad slopintų transgeną. Smegenys buvo surenkamos po 8 savaičių, o laikas, kai ΔFosB transkripcijos poveikis yra maksimalus (McClung ir Nestler, 2003). Naudota antroji transgeninė pelės linija, kurioje Δc-Jun, dominuojanti neigiamas c-Jun antagonistas, yra išreikštas D₁R / dynorfinas ir D₂Striatumo, hipokampo ir parietinės žievės R / enkefalino ląstelės (Peakman ir kt., 2003). C-Jun ir susiję birželio šeimos baltymai dimerizuojasi su Fos šeimos proteinais ir prisijungia prie tikslinių genų AP-1 vietos, kad reguliuotų transkripciją. Tačiau c-Jun N-galo sutrumpinimas (Δc-Jun) paverčia kompleksą transkripciniu būdu neaktyviu ir gali užkirsti kelią aktyvių AP-1 kompleksų prisijungimui prie DNR. Vyriškos bitransgeninės pelės, gautos iš NSE-tTA (linija A) × TetOp-FLAG-Ac-Jun (E linija), buvo sukurtos, kaip aprašyta Peakman et al. (Peakman ir kt., 2003). Bitransgeninės pelės buvo sukurtos ir auginamos doksiciklinu (100 µg geriamajame vandenyje), kad slopintų transgeno ekspresiją. Kūdikiai buvo nujunkyti 3 savaitėmis, genotipai buvo nustatyti ir suskirstyti į grupes, pusiau palaikomi doksiciklino turintys vandenys, o pusė - reguliariai geriamam vandeniui. Smegenys buvo surenkamos po 6 savaičių - laikas, kai buvo išmatuoti maksimalūs FLAG-Δc-Jun lygiai (Peakman ir kt., 2003). Visos gyvūnų procedūros buvo atliktos pagal Nacionalinius sveikatos vadovo laboratorinius gyvūnus ir jų naudojimą.

2.3. Membranų paruošimas

Smegenys buvo laikomos -80 ° C temperatūroje iki bandymo dienos. Prieš tyrimą kiekviena smegenis buvo atšildyta, o NAc buvo išpjauta ant ledo. Kiekvienas mėginys buvo homogenizuotas 50 mM Tris-HCl, 3 mM MgCl₂1 mM EGTA, pH 7.4 (membraninis buferis) su 20 smūgiais iš stiklo homogenizatoriaus 4 ° C temperatūroje. Homogenatas centrifuguojamas 48,000 × g 4 ° C temperatūroje 10 min, resuspenduojama membraniniame buferyje, vėl centrifuguojama 48,000 × g 4 ° C temperatūroje 10 min ir iš naujo suspenduota 50 mM Tris-HCl, 3 mM MgCl₂, 0.2 mM EGTA, 100 mM NaCl, pH 7.4 (tyrimo buferis). Baltymų kiekis buvo nustatytas Bradfordo metodu (Bradfordas, 1976) kaip standartą naudojant galvijų serumo albuminą (BSA).

2.4. Agonistas skatinamas [³⁵S] GTPγS rišimas

Membranos 10 minučių buvo iš anksto inkubuojamos 30 ° C temperatūroje su adenozino deaminaze (3 mU / ml) analizės buferyje. Tada membranos (5 – 10 µg baltymas) 2 val. Inkubuojamos 30 ° C temperatūroje tirpalo buferyje, turinčiame 0.1% (m / t) BSA, 0.1 nM [³⁵S] GTPγS, 30 µM BVP ir adenozino deaminazė (3 mU / ml) su ir be atitinkamų DAMGO arba WIN55,212-2 koncentracijų. Nespecifinis surišimas buvo matuojamas 20 µM GTPyS. Inkubavimas buvo nutrauktas filtruojant per GF / B stiklo pluošto filtrus, po to 3 plaunami 3 ml ledo šalto 50 mM Tris-HCl, pH 7.4. Susijusi radioaktyvumas buvo nustatytas skysto scintiliavimo spektrofotometrijos metodu po to, kai filtrai buvo ekstrahuojami naktį Econo-1 scintiliaciniame skystyje.

2.5. Adenililo ciklazės tyrimas

Membranos (5 – 25 µg baltymas) buvo iš anksto inkubuojamos su adenozino deaminaze, kaip aprašyta aukščiau, po to 15 min. Inkubuojamos 30 ° C temperatūroje, esant 1 µM forskolinui arba be jo, su arba be DAMGO, U50,488H arba WIN55,212-2. 50 µM ATP, [α-³²P] ATP (1.5 µCi), 0.2 mM DTT, 0.1% (m / t) BSA, 50 µM ciklinis AMP, 50 µM GTP, 0.2 mM papaverinas, 5 mM fosfokreatinas, 20 vienetai / ml kreatino fosfokinazės ir adenozino deaminazė (3 mU / ml) galutinio 100 µl tūrio. Esant tokioms sąlygoms, iš viso [α-³²Išgautas P] cAMP paprastai buvo mažesnis nei 1% viso pridėto [α-³²P] ATP kiekviename mėginyje. Reakcija buvo nutraukta virinant 3 min ir [³²P] Ciklinis AMP buvo išskirtas dvigubo kolonėlės (Dowex ir aliuminio oksido) metodu Salomon (Salomonas, 1979). [³H] cAMP (10,000 dpm) buvo pridėta prie kiekvieno mėgintuvėlio prieš kolonėlės chromatografiją kaip vidinį standartą. Radioaktyvumas buvo nustatytas skysto scintiliavimo spektrofotometrijos metodu (45% efektyvumas. \ T ³H) po to, kai 4.5 ml eliuato buvo ištirpinta 14.5 ml ekolito scintiliacinio skysčio.

2.6. Duomenų analizė

Jei nenurodyta kitaip, duomenys pateikiami kaip 4 – 8 atskirų eksperimentų, kurių kiekvienas atliktas trimis egzemplioriais, vidutinės vertės ± SE. Tinklas skatinamas [³⁵S] GTPγS surišimas apskaičiuojamas kaip agonistų stimuliuojamas rišimas, atėmus bazinį surišimą. Grynas forskolino stimuliuojamas adenililo ciklazės aktyvumas apibrėžiamas kaip forskolino stimuliuojamas aktyvumas - bazinis aktyvumas (pmol / mg / min). Forskolino stimuliuojamo adenililo ciklazės aktyvumo procentinis slopinimas apibrėžiamas kaip (grynas forskolino stimuliuojamasis aktyvumas, kai nėra agonisto - grynas forskolino stimuliuojamasis aktyvumas, kai agonistas / neto forskolino stimuliuojamas aktyvumas nėra agonistas) × 100. Visos kreivės ir statistinės analizės buvo atliktos naudojant Prism 4.0c (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA). Koncentracijos ir poveikio kreivės buvo analizuojamos taikant iteracinę netiesinę regresiją, kad gautų EB₅₀ ir E_daugiausia vertės. Koncentracijos ir poveikio duomenų statistinis reikšmingumas buvo nustatytas dviejų krypčių dispersijos analize (ANOVA), naudojant pagrindinius veiksnius naudojant agonistų dozę ir genų indukciją (įjungimą arba išjungimą). Statistinė kreivės atitikties reikšmė (E_daugiausia arba EB₅₀) buvo nustatytas nesuporuoto dviejų uodegų studento t-testu, naudojant Welcho korekciją arba kvadratinės šaknies duomenų transformaciją, jei reikia, kad būtų galima ištaisyti nelygias EC dispersijas (nustatytas F-testu).₅₀ vertės.

3. Rezultatai

3.1. ΔFosB ekspresijos poveikis opioidų ir kanabinoidų receptorių sukeltai G-baltymų aktyvacijai

Norėdami nustatyti, ar MOR- ar CB₁R-medijuojamas G-baltymų aktyvinimas buvo pakeistas indukuotu transgeniniu ΔFosB ekspresija NAc, stimuliuojant agonistą [³⁵S] GTPγS surišimas buvo ištirtas izoliuotose membranose, paruoštose iš šio bitransgeninių pelių regiono, sąlygiškai ekspresuojančio (ΔFosB į) arba neparodydamas (ΔFosB off) ΔFosB transgeno. MOR selektyviam enkefalino analogui DAMGO buvo naudojamas aktyvuoti MOR ir kanabinoido aminoalkilindolis WIN55,212-2 buvo naudojamas CB aktyvavimui₁R. Šie ligandai anksčiau buvo įrodyti, kad jie yra visiškai agonistai MOR ir CB₁R, atitinkamai (Breivogelis ir kt., 1998, Selley et al., 1997). Nebuvo įmanoma ištirti KOR-tarpininkaujančio G-baltymo aktyvumo, nes signalas yra per mažas graužikų smegenyse (Childers ir kt., 1998). Rezultatai parodė, kad tiek DAMGO, tiek WIN55,122-2 koncentracija priklauso nuo G-baltymų aktyvumo NAc iš ΔFosB ir ΔFosB pelėms (1 pav). DAMGO skatinamai veiklai (Pav. 1A), koncentracijos-poveikio duomenų dvipusis ANOVA atskleidė reikšmingą pagrindinį ΔFosB būklės (p <0.0001, F = 22.12, df = 1) ir DAMGO koncentracijos (p <0.0001, F = 29.65, df = 5) poveikį be reikšminga sąveika (p = 0.857, F = 0.387, df = 5). Netiesinė koncentracijos ir poveikio kreivių regresijos analizė parodė žymiai didesnę DAMGO E_daugiausia reikšmė ΔFosB pelėms (E_daugiausia = 73 ± 5.2% stimuliacija), palyginti su ΔFosB ne pelėmis (E_daugiausia = 56 ± 4.1% stimuliacija; p <0.05 skiriasi nuo ΔFosB pelėms pagal Studento t testą). DAMGO EC₅₀ ΔFosB ir AFosB ne pelių skirtumai (302 ± 72 nM, palyginti su 212 ± 56 nM, atitinkamai, p = 0.346).

ΔFosB ekspresijos įtaka stimuliuojamai agonistui [³⁵S] GTPγS surišimas NAc. Iš FosB ekspresuojančių (ΔFosB įjungtų) arba kontrolinių (ΔFosB išjungtų) pelių membranos buvo tiriamos taip, kaip aprašyta metoduose, kuriuose naudojamos skirtingos koncentracijos ...

Priešingai nei gauti rezultatai, gauti naudojant MOR agonistą DAMGO, su kannabinoidiniu agonistu WIN55,212-2 nebuvo pastebėti nuo FFBB priklausantys G-baltymų aktyvinimo skirtumai.Pav. 1B). Dvipusis WIN55,212-2 koncentracijos ir poveikio duomenų ANOVA atskleidė reikšmingą pagrindinį WIN55,212-2 koncentracijos poveikį (p <0.0001, F = 112.4, df = 7), bet ne ΔFosB statusą (p = 0.172) , F = 1.90, df = 1) ir sąveikos nebuvo (p = 0.930, F = 0.346, df = 7). Panašiai nebuvo jokio ΔFosB statuso poveikio WIN55,212-2 E_daugiausia reikšmės (103 ± 6%, palyginti su 108 ± 8% stimuliacija ΔFosB įjungta ir išjungta pelėms, p = 0.813 pagal studentų t-testą) arba EC₅₀ reikšmės (103 ± 20 nM, palyginti su 170 ± 23 nM ΔFosB įjungtas ir išjungtas pelėms, p = 0.123).

Remiantis kreivių forma ir tuo, kad ankstesniuose tyrimuose buvo parodytos dvifazės WIN55,212-2 koncentracijos ir poveikio kreivės smegenyse (Breivogelis ir kt., 1999, Breivogelis ir kt., 1998), WIN55,212-2 kreivės taip pat buvo analizuojamos naudojant dviejų vietų modelį. Vidutinių duomenų analizė parodė, kad dvejopo modelio modelis (R² = 0.933 ir 0.914, kvadratų suma = 3644 ir 5463 ΔFosB įjungimo ir išjungimo pelėse, atitinkamai), palyginti su vieno objekto modeliu (R² = 0.891 ir 0.879, kvadratų suma = 6561 ir 6628 ΔFosB įjungimo ir išjungimo pelėse, atitinkamai). Tačiau tarp E ΔFosB ir pelių nebuvo pastebėta jokių reikšmingų skirtumų_daugiausia arba EB₅₀ didelio arba mažo potencialo svetainių reikšmės (Papildoma lentelė 1), nors buvo mažesnė EB tendencija₅₀ atFosB on (EC₅₀aukštas = 28.0 ± 10.6 nM), palyginti su ΔFosB išjungta (EC₅₀aukštas = 71.5 ± 20.2 nM; p = 0.094). Be to, ΔFosB būsenos poveikis baziniam [[³⁵S] GTPγS surišimas NAc membranose (253 ± 14, palyginti su 226 ± 14 fmol / mg ΔFosB įjungtas ir išjungtas pelėms, p = 0.188). Šie duomenys rodo, kad indukuojamoji ΔFosB transgeninė ekspresija pelių NAc padidino MOR-tarpininkaujamą G-baltymų aktyvaciją, bet neturėjo reikšmingos įtakos CB₁R-tarpinis arba bazinis G baltymų aktyvumas.

3.2. ΔFosB poveikis opioidų ir kanabinoidų receptorių sukeltai adenililciklazės slopinimui \ t

Įvertinti ΔFosB indukuojamo transgeninio ekspresijos poveikį MOR ir CB veikimo efektoriaus aktyvumo moduliavimui₁R, 1 µM forskolino stimuliuojamo adenililo ciklazės aktyvumo slopinimas buvo tiriamas NAc membranose. Be MOR ir CB₁R-tarpininkaujanti adenililo ciklazės aktyvumo slopinimas, KOR aktyvumo poveikis taip pat buvo tiriamas naudojant KOR-selektyvų pilną agonistą U50,488 (Zhu ir kt., 1997), nes ankstesni rezultatai parodė, kad dinorfino mRNR buvo ΔFosB tikslas bitransgeniniame modelyje (Zachariou ir kt., 2006). Rezultatai parodė, kad kiekvienas DAMGO, U50,488 ir WIN55,212-2 sukėlė priklausomą nuo adenililo ciklazės aktyvumo inhibiciją ir ΔFosB, ir ΔFosB pelėms (2 pav). DAMGO koncentracijos ir poveikio duomenų dvipusis ANOVA (Pav. 2A) atskleidė reikšmingą pagrindinį ΔFosB būklės (p = 0.0012, F = 11.34, df = 1) ir DAMGO koncentracijos (p <0.0001, F = 29.61, df = 6) poveikį, tačiau reikšmingos sąveikos (p = 0.441, F = 0.986) , df = 6). Netiesinė DAMGO koncentracijos ir poveikio kreivių regresinė analizė parodė žymiai mažesnę DAMGO EC₅₀ vertė ΔFosB pelėms (101 ± 11 nM), palyginti su ΔFosB ne pelėms (510 ± 182 nM, p <0.05 pagal studento t testą). Tačiau DAMGO E reikšmingo skirtumo nebuvo_daugiausia reikšmės (20.9 ± 1.26%, palyginti su 19.8 ± 1.27% inhibicija ΔFosB įjungtas ir išjungtas pelėms, p = 0.534).

ΔFosB ekspresijos įtaka adenililciklazės aktyvumo slopinimui NAc. Iš FosB ekspresuojančių (ΔFosB įjungtų) arba kontrolinių (ΔFosB išjungtų) pelių membranos buvo tiriamos, kaip aprašyta metoduose, dalyvaujant 1 µM ...

KOR-tarpininkaujanti adenililo ciklazės slopinimas taip pat skyrėsi kaip indukuojamo ΔFosB transgeninės ekspresijos funkcija (Pav. 2B). U50,488 0.0006 koncentracijos ir poveikio duomenų dvikryptis ANOVA parodė reikšmingą pagrindinį ΔFosB būklės poveikį (p = 14.53, F = 1, df = 50,488) ir U0.0001 26.48 koncentraciją (p <3, F = 0.833, df = 0.289) , be reikšmingos sąveikos (p = 3, F = 50,488, df = XNUMX). Netiesinė koncentracijos ir poveikio kreivių regresijos analizė parodė didesnę UXNUMX XNUMX E_daugiausia pelių ΔFosB vertė (18.3 ± 1.14% slopinimas), palyginti su ΔFosB ne pelėmis (12.5 ± 2.03% slopinimas; p <0.05 skiriasi nuo ΔFosB pagal Studento t testą), be reikšmingo skirtumo U50,488 XNUMX EC₅₀ reikšmės (310 ± 172 nM, palyginti su 225 ± 48 nM ΔFosB įjungtas ir išjungtas pelėms, p = 0.324).

Skirtingai nuo efektų, pastebėtų naudojant MOR ir KOR, nepavyko reikšmingo indukuojamo transgeninio ΔFosB ekspresijos poveikio kanabinoidų agonisto WIN55212-2 adenililo ciklo slopinimui.Pav. 2C). Dviejų krypčių WIN55,212-2 koncentracijos ir poveikio duomenų ANOVA parodė reikšmingą vaisto koncentracijos poveikį (p <0.0001, F = 23.6, df = 2), bet ne ΔFosB statusą (p = 0.735, F = 0.118, df = 1), taip pat nebuvo reikšmingos sąveikos (p = 0.714, F = 0.343, df = 2). Be to, nebuvo jokio ΔFosB būklės poveikio baziniam ar forskolino stimuliuojamam adeniliciklazės aktyvumui, nesant jokio agonisto. Bazinio adenililo ciklazės aktyvumas ΔFosB pelėms buvo 491 ± 35 pmol / mg / min, palyginti su 546 ± 44 ΔFosB ne pelėms (p = 0.346 pagal Studento t testą). Panašiai, adenililo ciklazės aktyvumas, esant 1 µM forskolino, buvo 2244 ± 163 pmol / mg / min ΔFosB pelėse, palyginti su 2372 ± 138 pmol / mg / min ΔFosB ne pelėse (p = 0.555).

3.3. ΔcJun poveikis opioidų ir kanabinoidų receptorių sukeltai adenililciklazės slopinimui

Kadangi indukuotoji transgeninė AFBB inhibitoriaus signalo transdukcija iš MOR ir KOR į adenililo ciklazę NAc, buvo įdomu nustatyti, ar dominuojantis ΔFosB-medijuojamo transkripcijos inhibitorius priešingai, moduliuoja opioidų receptorių signalizavimą. Siekiant išspręsti šį klausimą, forskolino stimuliuojamo adenililo ciklazės aktyvumo slopinimas DAMGO ir U50,488 buvo tiriamas membranose, pagamintose iš bitų genų pelių NAc, sąlygiškai ekspresuojančios ΔJJun. Rezultatai parodė, kad ΔcJun ekspresijos reikšmingas poveikis MOR arba KOR adenililo ciklazės aktyvumui slopina (3 pav). DAMGO koncentracijos ir poveikio kreivių dviejų krypčių ANOVA parodė reikšmingą pagrindinį DAMGO koncentracijos poveikį (p <0.0001, F = 20.26, df = 6), bet ne ΔcJun statusą (p = 0.840, F = 0.041, df = 1) reikšmingos sąveikos nebuvo (p = 0.982, F = 0.176, df = 6). Panašiai nebuvo jokio reikšmingo E skirtumo_daugiausia arba EB₅₀ reikšmės tarp pelių su ΔcJun įjungta (E_daugiausia = 23.6 ± 2.6%; EB₅₀ = 304 ± 43 nM) arba ΔcJun išjungtas (E_daugiausia = 26.1 ± 2.5%, p = 0.508; EB₅₀ = 611 ± 176 nM, p = 0.129). Panašūs rezultatai buvo gauti naudojant U50,488, kad koncentracijos ir poveikio kreivių dvipusis ANOVA parodė reikšmingą koncentracijos poveikį (p <0.0001, F = 11.94, df = 6), bet ne ΔcJun statusą (p = 0.127) , F = 2.391, df = 1) ir reikšmingos sąveikos nebuvo (p = 0.978, F = 0.190, df = 6). Taip pat nebuvo reikšmingų E skirtumų_daugiausia arba EB₅₀ reikšmės tarp pelių su ΔcJun įjungta (E_daugiausia = 14.8 ± 2.9%; EB₅₀ = 211 ± 81 nM) arba išjungta (E_daugiausia = 16.7 ± 1.8%, p = 0.597; EB₅₀ = 360 ± 151 nM, p = 0.411).

ΔcJun ekspresijos įtaka adenililciklazės aktyvumo slopinimui NAc. Membranos iš AJJun ekspresuojančių (ΔcJun on) arba kontrolinių (ΔcJun off) pelių buvo inkubuojamos dalyvaujant DAMGO (A), U50,488H (B) arba WIN55,212-2 ...

ΔcJun ekspresija taip pat reikšmingai neveikė adenililo ciklazės slopinimo NAc kanabinoidų agonistu. Koncentracijos efekto kreivių dvikryptis ANOVA parodė reikšmingą pagrindinį WIN55,212-2 koncentracijos poveikį (p <55,212, F = 2, df = 0.0001), bet ne genotipą (p = 15.53, F = 6, df = 0.066) ir reikšmingos sąveikos nebuvo (p = 3.472, F = 1, df = 0.973). Panašiai nebuvo jokių reikšmingų skirtumų WIN0.208-6 E_daugiausia vertės (13.0 ± 2.3% ir 13.6 ± 0.9% slopinimas ΔcJun, palyginti su pelėmis, p = 0.821) ir (arba) EC₅₀ reikšmės (208 ± 120 nM ir 417 ± 130 nM ΔcJun, palyginti su pelėmis, p = 0.270). Taigi, nors pelės, ekspresuojančios ΔJJun, sumažėjo WIN55,212-2 veiksmingumo sumažėjimo tendencija, transgenas reikšmingai nekeičia kanabinoidų adenililo ciklazės slopinimo. Be to, ΔcJun statuso poveikis baziniam arba forskolino stimuliuojamam adenililo ciklazės aktyvumui nebuvo. Bazinis adenililo ciklazės aktyvumas buvo 1095 ± 71 pmol / mg / min ir 1007 ± 77 pmol / mg / min (p = 0.403), atitinkamai, pelėms su ΔcJun įjungimu arba išjungimu. Adenililo ciklazės aktyvumas, stimuliuojamas 1 µM forskolino, buvo 4185 ± 293 pmol / mg / min, palyginti su 4032 ± 273 pmol / mg / min (p = 0.706), atitinkamai, pelėms su ΔcJun įjungimu arba išjungimu.

3.4. Diskusija

Šio tyrimo rezultatai parodė, kad padidėjo MOR-medijuojamos G-baltymų aktyvacijos ir adenililciklazės slopinimas pelių, kurių indukuojama ΔFosB ekspresija dinorfinu / D, NAc.₁R turintys neuronų. MedFosB ekspresuojančių pelių NAc taip pat sustiprino KOR-tarpininkaujamą adenililo ciklazės aktyvumo slopinimą, o tai rodo, kad ΔFosB reguliuoja endogeninę opioidų sistemą NAc. DAMGO E_daugiausia vertė buvo didesnė MOR skatinamai [³⁵S] GTPγS privalomasis ir jo EB₅₀ reikšmė buvo mažesnė adenililo ciklazės slopinimo atveju, FosB per daug ekspresuojančiose pelėse, lyginant su kontrolinėmis pelėmis. Šie rezultatai rodo, kad receptorių rezervas gali būti efektorinis moduliavimas, bet ne G-baltymų aktyvinimas tiriamomis sąlygomis. Nustatyta, kad ΔFosB ekspresija paveikė maksimalią adenililo ciklazės inhibiciją KOR agonistu, rodo mažą receptorių rezervą KOR-tarpininkaujančiam atsakui, atitinkantį žemus KOR surišimo vietų lygius pelės smegenyse (Unterwald ir kt., 1991). Priešingai, CB₁ΔFosB ekspresija nepaveikė R-medijuojamo G baltymo aktyvumo ir adenililo ciklo slopinimo. rodo, kad opioidų ir kanabinoidų sistemos skiriasi savo atsaku į ΔFosB šiuose NAc neuronuose.

ΔFosB poveikis opioidų receptorių sukeltam signalizavimui atitinka mūsų ankstesnę ataskaitą, kad ΔFosB ekspresija striatume pakeitė ūminį ir lėtinį morfino poveikį (Zachariou ir kt., 2006). Viena šio tyrimo išvada buvo ta, kad pelės, turinčios transgeninę ΔFosB ekspresiją dinorfinu / D₁R striatų neuronai buvo jautresni morfinui, o ne kontrolei. Be to, šis efektas buvo imituotas virusiniu būdu sukeltai ΔFosB ekspresijai vietose specifiniu injekcijos būdu į NAc. Šie stebėjimai atitinka dabartinius rezultatus, rodančius didesnę MOR signalizaciją NAc.

Mes anksčiau identifikavome genų kodavimą dinorfinas kaip AFosB taikinys, ir pasiūlė, kad sumažintas dinamorfinas atitiktų padidėjusias morfino savybes ΔFosB bitransgeninėse pelėse. (Zachariou ir kt., 2006). Dabartiniai rezultatai rodo, kad osFosB ekspresuojančiose pelėse didina adenililo ciklazės KOR-medijuotą slopinimą NAc, o tai gali atspindėti kompensacinį KOR jautrumo padidėjimą po sumažėjusio dinamorfino. Ankstesni tyrimai parodė, kad KOR tam tikruose smegenų regionuose prodynorfino nukritimo pelėse, įskaitant NAc, padidėjo (Clarke ir kt., 2003).

Priešingai nei ΔFosB, ΔJJJ, dominuojančio neigiamo ΔFosB surišimo partnerio cJun neigiamo, suskaidyto mutanto, transgeninė ekspresija nepakeičia MOR arba KOR agonistų adenililo ciklazės slopinimo. Šie rezultatai rodo, kad baziniai ΔFosB ekspresijos lygiai, kurie yra palyginti maži, neturi reikšmingo vaidmens palaikant opioidų receptorių signalizaciją tokiu signalo perdavimo signalo lygiu NAc. Tai, kad mūsų ankstesniame tyrime sąlygojo morfino naudingo poveikio sumažėjimas ΔcJun išraiška (Zachariou ir kt., 2006) rodo, kad ΔFosB morfino indukcija kondicionavimo procedūros metu yra svarbi reguliuojant elgesio atsaką į vaistą arba kad ΔFosB transkripcijos poveikis, išskyrus opioidinių receptorių proksimalinį signalizavimą, gali turėti įtakos opioidų atlygiui. Bet kuriuo atveju šio tyrimo rezultatai aiškiai parodo, kad: kai ΔFosB ekspresija yra padidėjusi virš bazinio lygio striatų dinamorine / D₁R-ekspresuojantys neuronai, stipriai padidėja MOR ir KOR sujungimas su adenililciklazės slopinimu NAc.

Nežinomi mechanizmai, kuriais MOR- ir KOR-tarpinis signalizavimas yra padidintas ΔFosB overexpression, bet mes anksčiau parodėme, kad MOR lygiai, įvertinti [³H] naloksono surišimas, skiriasi nuo ΔFosB NAc, palyginti su pelėmis (Zachariou ir kt., 2006). Tame pačiame tyrime nustatyta, kad Gα_i1 ir 2 baltymų kiekiai šiame regione nebuvo paveikti ΔFosB ekspresijos. Tačiau ankstesnės genų ekspresijos masyvo analizės parodė, kad Gα_o mRNR buvo padidinta ΔFosB NAc, esant pelėms (McClung ir Nestler, 2003). Būsimuose tyrimuose bus įdomu išsamiai ištirti transgeninės AFosB ekspresijos poveikį G-baltymų subvieneto ekspresijai baltymų lygiu, taip pat daugelio G-baltymų moduliuojančių baltymų ekspresiją.

Įdomu tai, kad ΔFosB ekspresija nepadidino CB₁R-tarpinis signalizavimas NAc. Gali būti, kad pakeitimai CB₁R signalizacija vyksta atskiroje neuronų populiacijoje, kuri yra neaiški visame NAc preparate. Pavyzdžiui, Δ įvedimas⁹- THC žymiai sukėlė ΔFosB NAc šerdyje, bet ne apvalkale (Perrotti ir kt., 2008). ndeed, buvo įrodyta, kad iššūkis yra Δ⁹-THC po pakartotinio Δ vartojimo⁹-THC padidino dopamino išsiskyrimą NAc šerdyje, tačiau sumažėjo atpalaidavimas lukšte (Cadoni ir kt., 2008). Taip pat svarbu pažymėti, kad bitransgeninių pelių 11A linija ekspresuoja ΔFosB tik dinamorfinu / D₁R teigiami vidutiniai spiatumo neuronai, bet CB₁R yra išreikšti tiek dinorfinu / D₁R ir enkefalinas / D₂R teigiami striatrijos neuronai (Hohmann ir Herkenham, 2000), taip pat apie kortikinių afferentų terminalus (\ tRobbe ir kt., 2001). Dominuojančio ΔFosB-tarpininkaujančio transkripto, ΔcJun, neigiamo reguliatoriaus ekspresija taip pat neturėjo reikšmingo poveikio kanabinoidų receptorių signalizacijai, nors ΔcJun yra indukciškai išreikštas abiejuose D₁ ir D₂šiose pelėse yra vidutinio spyglių neuronų populiacijos;Peakman ir kt., 2003). Tačiau įmanoma, kad bazinė ΔFosB ekspresija yra pakankamai maža, kad ΔcJun nepaveiks receptorių signalizacijos, kaip teigiama rezultatuose, kurių rezultatai yra MOR ir KOR. Taip pat įmanoma, kad CB₁R signalizacija yra šiek tiek sustiprinta bazine ΔFosB išraiška, taigi, toliau didinant ΔFosB išraišką arba blokuojant jo veiksmus su ΔcJun, buvo tik nedidelis poveikis, kuris nepasiekė statistinio reikšmingumo lygio. Netiesioginę paramą šiam aiškinimui galima pamatyti lyginant WIN55,212-2 EC₅₀ reikšmės tarp pelių, ekspresuojančių ΔcJun, palyginti su ΔFosB. WIN55,212-2 EC santykis₅₀ adenililo ciklazės slopinimo pelėms, turinčios indukuotą ΔcJun ekspresiją į savo EB₅₀ G-baltymų aktyvacijos pelėms, kurių indukuota ΔFosB ekspresija, reikšmė buvo 4.0, tuo tarpu tas pats santykis pelėms be jokio transgeno indukcijos buvo 1.2.

Arba kanabinoidai gali sukelti ΔFosB ekspresiją be tiesioginio poveikio CB₁R signalizacija. Šiame scenarijuje kanabinoidai gali keisti jautrumą kitų vaistų psichoaktyviam poveikiui per tarpininkaujantį transkripcijos reguliavimą. In faktas, Δ įvedimas⁹-THC sukelia kryžminį jautrumą opioidams ir amfetaminui (Cadoni ir kt., 2001, Lamarque ir kt., 2001), atitinka šią hipotezę. Be to, buvo pranešta, kad pakartotinai vartojant kannabinoidų agonistą CP55,940 padidėja MOR tarpininkaujama G-baltymų aktyvacija NAc, panašiai kaip pelėms, kurios šiame tyrime indukuoja ekspresiją ΔFosB (Vigano ir kt., 2005). ΔFosB ekspresijos poveikis Δ⁹-THC tarpininkaujamas elgesys nebuvo įvertintas, tačiau dabartiniai rezultatai netrukdo sąveikai. Šio ir mūsų ankstesnio tyrimo rezultatai (Zachariou ir kt., 2006) rodo ΔFosB sukeltus MOR ir KOR / dynorphin pokyčius striatume. Dėkingas Δ poveikis⁹-THC, matuojant pagal vietovės pasirinkimą, panaikinamos MOR nulinės pelės, o KOR pašalinimas sumažėjo Δ⁹-THC vietos vengimas ir atskleidimas Δ⁹-THC vietos parinkimas (Ghozland ir kt., 2002). Panašiai, sąlyginis vietos vengimas Δ⁹-THC nedalyvauja pro-dynorphin knockout, lyginant su laukinio tipo pelėmis (Zimmer ir kt., 2001). Šie duomenys rodo, kad Δ⁹-THC gali būti naudingesnis po ΔFosB indukcijos ir dėl to atsirandančios MOR signalizacijos indukcijos, mažinant dinamorfino ekspresiją.

Apibendrinanty, šio tyrimo rezultatai parodė, kad ΔFosB ekspresija D₁R / dinamorino teigiami striatrijos neuronai sustiprino MOR- ir KOR-tarpininkaujamą signalizaciją G-baltymų medijuojamo adenililciklazės aktyvumo slopinimo NAc lygiu. Ši išvada atitinka tyrimus, kurie parodė endogeninės opioidų sistemos vaidmenį už atlygį (Trigo ir kt., 2010) ir numatyti galimą ΔFosB sukelto poveikio atlygio mechanizmą. Priešingai, CB₁R-tarpininkaujamas signalizavimas NAc reikšmingai nepaveikė striatalo ΔFosB ekspresijos tiriamomis sąlygomis, nors reikia atlikti tolesnius tyrimus, siekiant nustatyti ΔFosB indukcijos poveikį endokannabinoidų sistemai.

Moksliniai tyrimai

MOR signalizacija yra sustiprinta pelių, išreiškiančių ΔFosB, branduoliuose
Taip pat padidėja adenililo ciklazės KOR slopinimas pelėse, ekspresuojančiose ΔFosB
ΔFosB išraiška nekeičia CB₁R signalizacija branduolyje accumbens

Papildoma medžiaga

01

Spauskite čia norėdami peržiūrėti.^{(45K, pdf)}

Padėka

Autoriai dėkoja Hengjunui, Jordanui Coksui ir Aaronui Tomarchiui už techninę pagalbą su [³⁵S] GTPγS surišimo tyrimai. Šis tyrimas buvo paremtas USPHS dotacijomis DA014277 (LJS), DA10770 (DES) ir P01 DA08227 (EJN).

Išnašos

Leidėjo atsisakymas: Tai PDF failas iš neregistruoto rankraščio, kuris buvo priimtas paskelbti. Kaip paslauga mūsų klientams teikiame šią ankstyvą rankraščio versiją. Rankraštis bus kopijuojamas, užrašomas ir peržiūrimas gautas įrodymas, kol jis bus paskelbtas galutinėje cituotojoje formoje. Atkreipkite dėmesį, kad gamybos proceso metu gali būti aptiktos klaidos, kurios gali turėti įtakos turiniui, ir visi su žurnalu susiję teisiniai atsakymai.

Nuorodos

Bozarth MA, Wise RA. Anatomiškai atskiri opiatų receptorių laukai tarpininkauja už atlygį ir fizinę priklausomybę. Mokslas. 1984;224: 516-517. [PubMed]
Bradfordo MM. Greitas ir jautrus metodas, skirtas kiekybiniam baltymų kiekio kiekiui nustatyti naudojant baltymų ir dažų rišimo principą. Anal. Biochem. 1976;72: 248-254. [PubMed]
Breivogel CS, Childers SR, Deadwyler SA, Hampson RE, Vogt LJ, Sim-Selley LJ. Lėtinė delta⁹-tetrahidrokanabinolio gydymas sukelia laiko priklausomą kanabinoidinių receptorių aktyvuotų G baltymų praradimą smegenyse. J. Neurochem. 1999;73: 2447-2459. [PubMed]
Breivogel CS, Selley DE, Childers SR. Kanabinoidų receptorių agonisto veiksmingumas stimuliuojant [³⁵S] GTPγS surišimas su žiurkės smegenėlių membranomis koreliuoja su agonistų sukeltu BVP afiniteto sumažėjimu. J. Biol. Chem. 1998;273: 16865-16873. [PubMed]
Cadoni C, Pisanu A, Solinas M, Acquas E, Di Chiara G. Elgesio jautrinimas po pakartotinio Delta 9-tetrahidrokanabinolio poveikio ir kryžminio jautrinimo morfinu. Psichofarmakologija (Berl) 2001;158: 259-266. [PubMed]
Cadoni C, Valentini V, Di Chiara G. Elgesio jautrinimas delta 9-tetrahidrokanabinoliui ir kryžminis jautrinimas morfinu: diferenciniai pakitimų ir pagrindinio dopamino perdavimo pokyčiai. J. Neurochem. 2008;106: 1586-1593. [PubMed]
Chen J, Kelz MB, Zeng G, Sakai N, Steffen C, Shockett PE, Picciotto MR, Duman RS, Nestler EJ. Transgeniniai gyvūnai su indukuotu tiksliniu genų ekspresija smegenyse. Mol. Pharmacol. 1998;54: 495-503. [PubMed]
Childers SR. Opioidų receptoriais susieti antriniai pasiuntiniai. Life Sci. 1991;48: 1991-2003. [PubMed]
„Childers SR“, „Fleming L“, „Konkoy C“, „Marckel D“, „Pacheco M“, „Sexton T“, „Ward S.“ opioidų ir kanabinoidų receptorių inhibavimas adenililo ciklazei smegenyse. Ann. NY Acad. Sci. 1992;654: 33-51. [PubMed]
Childers SR, Xiao R, Vogt LJ, Sim-Selley LJ. Kappa opioidų receptorių stimuliacija [³⁵S] GTPγS surišimas jūrų kiaulių smegenyse: įrodymų apie kapą trūkumas₂- selektyvus G-baltymų aktyvavimas. Biochem. Pharmacol. 1998;56: 113-120. [PubMed]
Clarke S, Zimmer A, Zimmer AM, Hill RG, Kitchen I. Mikro-, delta- ir kappa-opioidinių receptorių regioninis selektyvus reguliavimas, bet ne opioidinių receptorių tipo 1 receptoriai enkefalino ir dinorfino išjungimo pelių smegenyse. Neurologija. 2003;122: 479-489. [PubMed]
Colby CR, Whisler K, Steffen C, Nestler EJ, Self DW. Striatyvinė ląstelių tipo specifinė „DeltaFosB“ ekspresija padidina kokaino skatinimą. J. Neurosci. 2003;23: 2488-2493. [PubMed]
Gardner EL. Endokannabinoidų signalizavimo sistema ir smegenų atlygis: dėmesys dopaminui. Pharmacol. Biochem. Behav. 2005;81: 263-284. [PubMed]
Ghozland S, Matthes HW, Simonin F, Filliol D, Kieffer BL, Maldonado R. Kanabinoidų motyvacinį poveikį sukelia mu-opioidiniai ir kappa-opioidiniai receptoriai. J. Neurosci. 2002;22: 1146-1154. [PubMed]
Herkenham M, Lynn AB, Johnson MR, Melvin LS, de Costa BR, Rice KC. Kanabinoidinių receptorių apibūdinimas ir lokalizavimas žiurkių smegenyse: kiekybinis in vitro autoradiografinis tyrimas. J. Neurosci. 1991;11: 563-583. [PubMed]
Hohmann AG, Herkenham M. Kanabinoidinio CB (1) receptoriaus mRNR lokalizavimas žiurkių striatumo neuroniniuose pogrupiuose: dvigubo žymėjimo in situ hibridizacijos tyrimas. Sinapsija. 2000;37: 71-80. [PubMed]
Howlett AC, Barth F, Bonner TI, Cabral G, Casellas P, Devane WA, Felder CC, Herkenham M, Mackie K, Martin BR, Mechoulam R, Pertwee RG. Tarptautinė farmakologijos sąjunga. XXVII. Kanabinoidinių receptorių klasifikacija. Farmakologinė apžvalga. 2002;54: 161-202.
Huestis MA, Gorelick DA, Heishman SJ, Preston KL, Nelson RA, Moolchan ET, Frank RA. CB1 selektyvaus kanabinoidų receptorių antagonisto SR141716 sukeltos marihuanos poveikio blokada. Arch. Psichiatrija. 2001;58: 322-328. [PubMed]
Kelz MB, Chen J, Carlezon WA, Jr, Whisler K, Gilden L, Beckmann AM, Steffen C, Zhang YJ, Marotti L, Self DW, Tkatch T, Baranauskas G, Surmeier DJ, Neve RL, Duman RS, Picciotto MR, Duman RS Nestler EJ. Transkripcijos faktoriaus deltaFosB ekspresija smegenyse kontroliuoja jautrumą kokainui. Gamta. 1999;401: 272-276. [PubMed]
Koob GF, Volkow ND. Nepriklausomybės neurocirkuliacija. Neuropsychopharmacology. 2010;35: 217-238. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
Lamarque S, Taghzouti K, Simon H. Lėtinis gydymas Delta (9) -tetrahidrokanabinoliu padidina judėjimo reakciją į amfetaminą ir heroiną. Poveikis priklausomybei nuo narkomanijos. Neurofarmakologija. 2001;41: 118-129. [PubMed]
Maldonado R, Valverde O, Berrendero F. Endokannabinoidų sistemos dalyvavimas narkomanijoje. Tendencijos neurosci. 2006;29: 225-232. [PubMed]
Mansour A, Fox CA, Thompson RC, Akil H, Watson SJ. mu-opioidų receptorių mRNR ekspresija žiurkių CNS: palyginimas su mu-receptoriaus surišimu. Brain Res. 1994;643: 245-265. [PubMed]
Matthes HWD, Maldonado R, Simonin F, Valverde O, Slowe S, Kitchen I, Befort K, Dierich A, LeMeur M, Dolle P, Tzavara E, Hanoune J, Roques BP, Kieffer BL. Morfino sukeltos analgezijos praradimas, atlygio efektas ir nutraukimo simptomai pelėms, neturinčioms µ-opioidinių receptorių geno. Gamta. 1996;383: 819-823. [PubMed]
McClung CA, Nestler EJ. CREB ir DeltaFosB reguliuoja geno ekspresiją ir kokaino atlygį. Nat. Neurosci. 2003;6: 1208-1215. [PubMed]
McClung CA, Ulery PG, Perrotti LI, Zachariou V, Berton O, Nestler EJ. DeltaFosB: molekulinis jungiklis ilgalaikiam prisitaikymui smegenyse. Brain Res. Mol. Brain Res. 2004;132: 146-154. [PubMed]
Muller DL, Unterwald EM. D1 dopamino receptoriai moduliuoja deltaFosB indukciją žiurkių striatume po pertrūkio morfino skyrimo. J. Pharmacol. Exp. Ther. 2005;314: 148-154. [PubMed]
Nestler EJ. Peržiūra. Transkripcijos priklausomybės mechanizmai: DeltaFosB vaidmuo. Filosas. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 2008;363: 3245-3255. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
Nestler EJ, Kelz MB, Chen J. DeltaFosB: molekulinis mediatorius, turintis ilgalaikį nervų ir elgesio plastiškumą. Brain Res. 1999;835: 10-17. [PubMed]
Nye HE, Hope BT, Kelz MB, Iadarola M, Nestler EJ. Farmakologiniai tyrimai, susiję su lėtinio FOS susijusio antigeno indukcijos, kurią sukelia kokainas, reguliavimu striatum ir nucleus accumbens. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1995;275: 1671-1680. [PubMed]
Peakman MC, Colby C, Perrotti LI, Tekumalla P, Carle T, Ulery P, Chao J, Duman C, Steffen C, Monteggia L, Allen MR, Stock JL, Duman RS, McNeish JD, Barrot M, Self DW, Nestler EJ , Schaeffer E. Inducible, smegenų srities specifinė dominuojančio neigiamo c-Jun mutanto ekspresija transgeninėse pelėse mažina jautrumą kokainui. Brain Res. 2003;970: 73-86. [PubMed]
Perrotti LI, Weaver RR, Robison B, Renthal W, Maze I, Yazdani S, Elmore RG, Knapp DJ, Selley DE, Martin BR, Sim-Selley L, Bachtell RK, Self DW, Nestler EJ. Skirtingi DeltaFosB indukcijos modeliai smegenyse, naudojant narkotikus. Sinapsija. 2008;62: 358-369. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
Robbe D, Alonso G, Duchamp F, Bockaert J, Manzoni OJ. Kannabinoidinių receptorių lokalizacija ir veikimo mechanizmai pelės branduolio akumbensų glutamaterginiuose sinapse. J. Neurosci. 2001;21: 109-116. [PubMed]
Salomonas Y. Adenilato ciklazės tyrimas. Adv. Cyclic Nucleotide Res. 1979;10: 35-55. [PubMed]
Selley DE, Sim LJ, Xiao R, Liu Q, Childers SR. Mu opioidų receptorių stimuliuojamas [³⁵S] GTPγS surišimas žiurkių talamoje ir kultivuojamose ląstelių linijose. Mol. Pharmacol. 1997;51: 87-96. [PubMed]
Trigo JM, Martin-Garcia E, Berrendero F, Robledo P, Maldonado R. Endogeninė opioidų sistema: bendras narkomanijos substratas. Priklauso nuo alkoholio. 2010;108: 183-194. [PubMed]
Unterwald EM, Knapp C, Zukin RS. Neuroanatominė κ1 ir κ2 opioidinių receptorių lokalizacija žiurkių ir jūrų kiaulių smegenyse. Brain Res. 1991;562: 57-65. [PubMed]
Vaccarino FJ, Bloom FE, Koob GF. Branduolio accumbens opiatų receptorių blokada slopina intraveninį heroino atlygį žiurkėms. Psichofarmakologija (Berl) 1985;86: 37-42. [PubMed]
Vigano D, Rubino T, Vaccani A, Bianchessi S, Marmorato P, Castiglioni C, Parolaro D. Molekuliniai mechanizmai, susiję su asimetrine sąveika tarp kanapių ir opioidų sistemų. Psichofarmakologija (Berl) 2005;182: 527-536. [PubMed]
Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, Cassidy MP, Kelz MB, Shaw-Lutchman T, Berton O, Sim-Selley LJ, Dileone RJ, Kumar A, Nestler EJ. Esminis DeltaFosB vaidmuo branduolio akumbensuose morfino veikloje. Nat. Neurosci. 2006;9: 205-211. [PubMed]
Zangen A, Solinas M, Ikemoto S, Goldberg SR, Wise RA. Dvi smegenų vietos, skirtos už atlygį už kanapių vartojimą. J. Neurosci. 2006;26: 4901-4907. [PubMed]
Zhu J, Luo LY, Li JG, Chen C, Liu-Chen LY. Klonuotų žmogaus kappa opioidų receptorių aktyvinimas agonistais sustiprina [35S] GTPγS prisijungimą prie membranų: ligandų potencialo ir efektyvumo nustatymas. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1997;282: 676-684. [PubMed]
Zimmer A, Valjent E, Konig M, Zimmer AM, Robledo P, Hahn H, Valverde O, Maldonado R. Delta-9-tetrahidrokanabinolio disforo nebuvimas dinorfinų trūkumo pelėms. J. Neurosci. 2001;21: 9499-9505. [PubMed]
Zimmer A, Zimmer AM, Hohmann AG, Herkenham M, Bonner TI. Padidėjęs mirtingumas, hipoaktyvumas ir hipoalgesija, vartojant kannabinoidų CB1 receptorių išjungimo peles. Proc. Natl. Acad. Sci. JAV 1999;96: 5780-5785. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]