Gliukokortikoidai FosB / ΔFosB ekspresijos reguliavimas, kurį sukelia lėtinis opiatų poveikis smegenų streso sistemoje (2012)

PLoS One ". 2012; 7 (11): e50264. doi: 10.1371 / journal.pone.0050264. Epub 2012 Nov 21.
 

Šaltinis

Mursijos universiteto Medicinos universiteto Farmakologijos katedros ląstelių ir molekulinės farmakologijos grupė.

Abstraktus

Lėtinis piktnaudžiavimo narkotikų vartojimas iš esmės keičia stresą reaguojančią sistemą. Pakartotinis morfino poveikis sukelia transkripcijos faktoriaus ΔFosB kaupimąsi, ypač smegenų srityse, susijusiose su atlygiu ir stresu. Nuolatinis ΔFosB poveikis tiksliniams genams gali vaidinti svarbų vaidmenį piktnaudžiavimo narkotikų sukeliamame plastikume. Naujausi duomenys rodo, kad su stresu susiję hormonai (pvz., Gliukokortikoidai, GC) gali sukelti smegenų įtampos sistemos adaptacijas, kurios gali turėti įtakos genų ekspresijos ir transkripcijos faktorių pokyčiams. Šiame tyrime buvo išnagrinėtas GC vaidmuo reguliuojant FosB / ΔFosB tiek hipotalaminėse, tiek ekstralipalaminėse smegenų streso sistemose priklausomai nuo morfino. Tuo tikslu FosB / ΔFosB ekspresija buvo matuojama kontrolinėse (apgaulėmis valdomose) ir adrenalektomizuotose (ADX) žiurkėse, kurios po 10 dienų nuo morfino gydymo priklausė opiatams. Šlamštui veikiančiose žiurkėse po lėtinio morfino vartojimo FosB / ΔFosB buvo sukeltas visose tiriamose smegenų streso srityse: branduolys accumbens (apvalkalas), stria terminalis (BNST), centrinis amygdala (CeA), hipotalaminis paraventrikulinis branduolys (PVN) ir branduolys vienišų trakto noradrenerginių ląstelių grupei (NTS-A (2)). Adrenalektomija susilpnino padidėjusią FosB / ΔFosB gamybą, pastebėtą po lėtinio morfino ekspozicijos NAc, CeA ir NTS. Be to, ADX sumažino FosB / ΔFosB ekspresiją BNST, PVN ir CeA CRH teigiamuose neuronuose. Panašūs rezultatai buvo gauti NTS-A (2) TH-teigiamuose neuronuose ir NAc pro-dinorfinų teigiamuose neuronuose. Šie duomenys rodo, kad neuroadaptacija (apskaičiuota kaip FosB / ΔFosB kaupimasis) opiatams smegenų srityse, susijusiose su stresu, yra moduliuojama GC, palaikant sąsają tarp smegenų streso hormonų ir priklausomybės.

Įvadas

Opiatiniai vaistai, tokie kaip morfinas, yra veiksmingi analgetikai, naudojami daugelio ūminių ir lėtinių skausmų gydymui. Tačiau rimtas nepageidaujamas poveikis, pvz., Tolerancija ir nutraukimas, prisideda prie opiatų priklausomybės ir riboja jų vartojimą. Be to, per pastaruosius kelerius metus padidėjo opiatų (heroino, morfino) ne medicininis naudojimas. Vis didėjantys įrodymai apima įvairius genų reguliavimo mechanizmus (įskaitant epigenetinius, molekulinius, ląstelinius ir grandinės lygius), kai piktnaudžiavimo vaistai sukelia smegenis, nurodant galimą priklausomybės terapijos terapinę strategiją. [1]-[4].

Svarbiausias narkotikų vartojimo srities klausimas buvo nustatyti baltymus, kurie tarpininkauja perėjimą nuo ūminio iki ilgalaikio šių vaistų poveikio. Ypač domina priklausomybės tyrimas yra transkripcijos faktorių Fos šeima. Šiai šeimai priklauso c-Fos, Fra-1 ir Fra-2, FosB ir ΔFosB, sutrumpintas pilno ilgio FosB splice variantas [5]. Priešingai nei kiti „Fos“ šeimos nariai, ΔFosB yra smarkiai sukeltas smegenyse po ūminio vaisto vartojimo, bet dėl ​​jo neįprastos ilgos pusinės eliminacijos periodo, praėjus kelioms savaitėms, net mėnesiams, nutraukus narkotikų vartojimą. Kaip rezultatas, ΔFosB koncentracija palaipsniui kaupiasi su pakartotiniu vaisto poveikiu [6], [7], rodo, kad ΔFosB gali būti mechanizmas, kuriuo piktnaudžiavimo vaistai sukelia ilgalaikius genų ekspresijos modelio pokyčius ilgai po to, kai vaistas bus pašalintas. [8].

Buvo pranešta, kad kartotinis kokaino, amfetamino, kannabinoidų ar morfino ekspozicija lemia ΔFosB padidėjimą smegenų srityse, susijusias su teigiamu sustiprėjusiu vaistų poveikiu, pvz., Branduolių accumbens (NPc), prefrontalinės žievės ir nugaros striatum. Siūloma, kad šis padidėjimas yra neuroadaptacija, dėl kurios padidėja jautrumas piktnaudžiavimui narkotikais ir pažeidžiamumas, siekiant sukurti būdingą priklausomybės elgesį [9]-[13]. Neseniai mes parodėme, kad jis yraFosB / ΔFosB lygių didinimas po lėtinio morfino vartojimo ne tik apsiriboja atlyginimų sistema, bet taip pat vyksta smegenų streso sistemoje (kuri buvo susijusi su neigiamu sustiprinančiu vaistų poveikiu), taip pat vienintelio trakto branduolyje-A2 noradrenerginė ląstelių grupė (NTS-A2, pagrindinė noradrenerginė sistema, sukelianti streso neurocirkuliaciją) [14]. Atsižvelgiant į šiuos rezultatus, keletas lėtinio streso formų taip pat sukelia ΔFosB NAc ir kitose smegenų srityse [15], [16].

Priklausomybė yra sudėtingas sutrikimas, nes daugelis veiksnių prisideda prie šio neurologinio sutrikimo vystymosi ir palaikymo. Vienas iš veiksnių yra stresas, kuris buvo susijęs su konkrečiais narkomanijos aspektais [17]-[21]. Tiek hipotalaminis-hipofizės-antinksčių (HPA, pirminis endokrininės streso kelio) ašis, tiek ekstremipalalinis streso sistema (kuri apima išplėstą amygdalą ir NTS-A2) yra reguliuojami lėtiniu vaistų, turinčių priklausomybės potencialą, vartojimu [14], [22]. Be to, HPA ašies atsakas yra panašus po streso stimuliatorių ir ūminio piktnaudžiavimo narkotikais [23], [24], padidėjęs kortikotropino atpalaidavimo hormonas (CRH), adrenokortikotropinis hormonas (AKTH) ir gliukokortikoidų (GC) išsiskyrimas. Tjo atsakas palengvina prisitaikymą prie ūmų aplinkos pokyčių, bet taip pat gali sukelti elgesio patologijas lėtinių streso sąlygų, pvz., priklausomybės ir depresijos, metu. [25]. Tyrimai dar neištyrė sąsajos tarp GC ir morfino priklausomybės sukeltų FosB / ΔFosB indukcijos smegenų streso sistemoje. Todėl įvertinome GC įtaką FosB / ΔFosB ekspresijai po nuolatinio morfino skyrimo smegenų streso srityse. Norėdami išspręsti šį klausimą, pirmiausia išnagrinėjome dvišalių adrenalektomijos (ADX) poveikį FosB / ΔFosB imunoreaktyvumui (IR) pagrindiniuose streso sistemos branduoliuose, priklausomose nuo morfino priklausomų žiurkių.

Smegenų streso sistemos aktyvumą skatina daugybė neurotransmiterių / neuromoduliatorių. CRH yra pagrindinis neuropeptidas, reguliuojantis streso sistemos aktyvumą, ir buvo teigiama, kad jis prisideda prie jau esamo pažeidžiamumo, kai narkotikų vartojimas yra priklausomas ir vėliau pažeidžiamas recidyvas [26]. AšBe to, gausus darbas palaiko NTS-A svarbą2 smegenų įtampos sistemos apsinuodijimas narkomanijoje ir esminis noradrenalino (NA) vaidmuo neurotransmiteriu, moduliuojančiu šį neurocirkuliaciją [27]. Galiausiai, reikšmingi įrodymai rodo, kad ūminio ir lėtinio vaisto vartojimo metu striatume ir amygdaloje veikia dinamorfino ekspresija [28]. Atsižvelgiant į šiuos faktus, šio tyrimo tikslas buvo nustatyti GC vaidmenį FosB / ΔFosB ekspresijai specifinėse smegenų įtampos sistemos grupėse priklausomybės nuo morfino metu.

rezultatai

Adrenalektomijos poveikis kūno svorio padidėjimui ir plazmos AKTH bei kortikosterono koncentracijai priklausomose nuo morfino žiurkėms

Prieš atlikdami imunodetacijos tyrimus, įvertinome lėtinio gydymo morfinu veiksmingumą. Šiuo tikslu gyvūnų svoris buvo užregistruotas granulių implantavimo dieną ir žudymo dieną (10 diena). Dvipusis ANOVA atskleidė reikšmingą pagrindinį poveikį kūno svorio padidėjimui adrenalektomijai [F (1,47)]=13.24, p=0.0007), morfino gydymas [F (1,47)=281.05, p<0.0001] ir ADX ir morfino gydymo sąveika [F (1,47)]=4.13, p=0.0479]. Pagal ankstesnes išvadas [29], [30], post-hoc analizė parodė, kad abu ir ADX grupės, priklausančios nuo morfino, reikšmingai (p<0.001) mažesnis svorio padidėjimas (−13.75 ± 5.0 g, n=12; 3.84 ± 2.45 g, n=13), palyginti su šunimis ir ADX gyvūnais, vartojusiais placebą (44.58 ± 1.7 g, n=12; 49.57 ± 2.4 g, n=12), kuris buvo priskirtas šiems gyvūnams sumažėjusiam maisto suvartojimui [29].

Siekiant patikrinti adrenalektomijos veiksmingumą, hormonų koncentracija buvo matuojama plazmoje. Dvipusė ANOVA, tirianti adrenalektomijos ir morfino poveikį AKTH ir kortikosterono koncentracijai plazmoje, parodė didelį adrenalektomijos poveikį [ACTH: F (1,18)=68.12, p<0.0001; kortikosteronas: F (1,45)=10.42, p=0.0023). Kaip tikėtasi, Newmanas post-hoc bandymas parodė (S1), kad placebu (n=6) - ir morfinas (n=4) -ADX žiurkių ACTH koncentracija plazmoje buvo didesnė (p<0.001), palyginti su apgaubtais gyvūnais dviem vertinamais gydymais (placebo, n=6; ir morfinas, n=6). Kortikosterono koncentracijos plazmoje tarp ADX-placebo (n=14) ir ADX-morfinas (n=13). Kortikosterono koncentracija gydomose ADX morfino žiurkėse buvo reikšminga (p<0.01), mažesnis nei matyti mama-morfine (n=10). Nematyti reikšmingų pokyčių šlamšto morfino grupėje, lyginant su placebu (n=12).

Adrenalektomija diferencijuoja morfino priklausomybės sukeltą FosB / ΔFosB smegenų streso sistemoje

Kontroliniams gyvūnams (placebą implantuotoms žiurkėms) visose streso sąveikos smegenų sistemos srityse buvo nustatyta silpna FosB / ΔFosB-IR ekspresija. Lėtinis morfino gydymas sukėlė FosB / ΔFosB atsiradimą visose tiriamose smegenų srityse. NAc (apvalkalas), dvipusis ANOVA parodė reikšmingą pagrindinį adrenalektomijos poveikį [F (1,16)]=6.44, p=0.0220] ir lėtinis morfino gydymas [F (1,16)=19.98, p=0.0004]. „Newman-Keuls“ post hoc testas parodė:2A – E pav), kad morfinu gydytų žiurkių organizme reikšmingai (p <0.01) padidėjo FosB / ΔFosB ekspresija. Nuo morfino priklausomose ADX žiurkėse reikšmingai (p <0.05) sumažėjo FosB / ΔFosB baltymų ekspresija NAc. Dvipusis ANOVA BNST parodė reikšmingą pagrindinį ilgalaikio gydymo morfinu poveikį [F (1,16)=48.92, p<0.0001]. Post hoc analizė parodė padidėjimą (p<0.001) FosB / ΔFosB gyvūnuose, priklausančiuose nuo apgaulės ir ADX morfino, nurodant, kad FosB / ΔFosB reguliavimas buvo susijęs su lėtine ekspozicija morfinu, nepriklausomai nuo GC koncentracijos (2F – J pav). FosB / ΔFosB dvikryptis ANOVA CeA parodė reikšmingą adrenalektomijos poveikį [F (1,15)]=20.51, p=0.0004] ir morfino apdorojimas [F (1,15)=27.52, p<0.0001]. Post hoc bandymas parodė reikšmingą (p <0.01) FosB / ΔFosB koncentracijos padidėjimą fiktyvios morfino žiurkėms, palyginti su fiktyviosiomis placebo žiurkėmis, kuris susilpnėjo (p <0.01) nuo ADX priklausomos nuo morfino grupės (2K – O pav). Be to, ADX placebu granuliuotose žiurkėse nustatyta mažesnė FosB / ΔFosB koncentracija (p <0.01) nei fiktyvioje placebo grupėje.

2 pav  

Adrenalektomija diferencijuoja FosB / ΔFosB baltymų ekspresiją smegenų streso sistemose.

Dvikryptis ANOVA, tiriantis adrenalektomijos ir morfino poveikį FosB / ΔFosB ekspresijai PVM (parvocelulinis padalijimas), parodė reikšmingą morfino gydymo poveikį [F (1,16)=16.31, p<0.0001]. Post hoc analizė parodė didelę (3A – E pav) padidėjimas (p<0.05) iš FosB / ΔFosB-IR į PVM iš abiejų ir ADX morfino apdorotų žiurkių. NTS-A2 katecholaminerginių ląstelių grupė, dvipusis ANOVA atskleidė pagrindinį morfino gydymo poveikį [F (1,11)=76.33, p<0.0001]. Post hoc analizė parodė didelę (3F – J pav) FosB / ΔFosB-IR padidėjimas šlamšto morfino žiurkėse, lyginant su placebo grupe (p \ t<0.001), kuris susilpnėjo (p <0.05) ADX priklausomoje nuo morfino grupėje.

3 pav  

Adrenalektomijos poveikis FosB / ΔFosB baltymų ekspresijai PVM ir NTS-A2 nuo morfino priklausomų žiurkių.

Lėtinė morfino ekspozicija sukelia FosB / ΔFosB ekspresiją į CRH Neuronus PVM, BNST ir CeA. Gliukokortikoidų įtaka

Dvikryptis ANOVA FosB / ΔFosB-teigiamiems / CRH-teigiamiems neuronams BNST parodė pagrindinį adrenalektomijos poveikį [F (1,20)=64.43, p<0.0001] ir reikšminga adrenalektomijos ir morfino gydymo sąveika [F (1,20)]=6.80, p=0.0169]. PVM, dvipusis ANOVA atskleidė didelį adrenalektomijos poveikį [F (1,19)=11.35, p=0.0032]. FosB / ΔFosB-teigiamų / CRH-teigiamų neuronų dvikryptis ANOVA CeA parodė reikšmingą pagrindinį adrenalektomijos poveikį [F (1,20)]=106.85, p<0.0001], morfino gydymas [F (1,20)=7.33, p=0.0136] ir reikšminga sąveika tarp adrenalektomijos ir vaistinio preparato prieš gydymą [F (1,20)]=7.07, p=0.0151]. 4 paveikslai, , 5,5, ,66 rodyti reprezentatyvius BNST, PVN ir CeA sekcijų vaizdus nuo apgaulingų ar ADX kontrolinių ir morfino priklausomų žiurkių. Post hoc analizė atskleidė, kad daugelis FosB / ΔFosB-teigiamų neuronų BNST (P<0.01; 4E), PVN (p<0.05; 6E) ir CeA (p<0.01; 6E) šlamšto morfino žiurkėms, lyginant su placebu grupe. Be to, FOSB / ΔFosB-teigiamų neuronų, ekspresuojančių CRH, skaičius ADX placebu granuliuotų žiurkių ir morfino priklausomose žiurkėse buvo žymiai mažesnis trijuose branduoliuose, lyginant su atitinkamu gydymu šlamšto gyvūnais, kaip parodyta 4 paveikslai, , 5,5, ,66 (BNST: p<0.01 vs placebo; p<0.001 vs apgaulė plius morfinas; PVN: p<0.05 vs placebo; p<0.001 vs apgaulė plius morfinas; CeA: p<0.001 ir placebas, palyginti su šlamštu plius morfinu).

4 pav  

Adrenalektomija susilpnino FosB / ΔFosB baltymų ekspresiją BNST CRH teigiamuose neuronuose.
5 pav  

Adrenalektomija susilpnino FosB / ΔFosB baltymų ekspresiją PVN CRH teigiamuose neuronuose.
6 pav  

Adrenalektomija antagonizuota FosB / ΔFosB baltymų ekspresija CeA CRH teigiamuose neuronuose.

BNST lygiu dviejų krypčių ANOVA CRH-teigiamų neuronų skaičiui parodė, kad yra pagrindinis ADX poveikis [F (1,20)=103.92, p <0.0001], taip pat lėtinis morfinas [F (1,20)=4.35, p <0.05]. Kaip parodyta Lentelė 1, Newman – Keuls post-hoc testas atskleidė, kad ADX placebu ir morfinu granuliuotose žiurkėse CRH neuronai buvo mažesni (p <0.001) nei grupių, kurios priklausė nuo fiktyvaus placebo ar nuo morfino. PVN metu dvipusis ANOVA parodė reikšmingą adrenalektomijos poveikį [F (1,19)=11.35, p=0.0032]. Dvikryptis ANOVA visoms CRH neuronams CeA lygiu parodė reikšmingą ADX poveikį [F (1,20)=240.09, p <0.0001] ir pagrindinė ADX ir lėtinio morfino sąveika [F (1,20)=4.49, p=0.0467]. Lentelė 1 pavaizduota, kad buvo pastebimai sumažėjęs CRH neuronų kiekis CeA iš ADX placebo arba morfino gydytų žiurkių. Lentelė 1 taip pat rodo, kad lėtinis morfino poveikis sukelia CRH teigiamų neuronų padidėjimą (p <0.05) esant BNST ir CeA lygiams.

Lentelė 1  

Lentelė 1. Adrenalektomijos poveikis CRN-teigiamų neuronų skaičiui BNST, PVN ir CeA, pro-DYN-teigiamuose neuronuose NAc ir TH-teigiamuose neuronuose NTS, su placebu arba morfinu granuliuotiems gyvūnams.

Adrenalektomijos įtaka FosB / ΔFosB į DYN-teigiamus neuronus NAc (Shell)

Nenustatyta jokių reikšmingų pro-DYN-teigiamų ląstelių, kurios kartu su ekspresija FosB / ΔFosB išreiškia NAc (lukštais), skaičių po lėtinio morfino poveikio (Pav 7) dėl placebo grupės. Dvikryptis ANOVA FosB / ΔFosB-teigiamiems / pro-DYN-teigiamiems neuronams NAc (lukštais) parodė pagrindinį ADX poveikį [F (1,19)=10.11, p=0.0049]. Kaip parodyta 7C, FosB / ΔFosB-teigiamų neuronų, kurie kartu ekspresuoja D-DNR, priklausomai nuo ADX morfino priklausomoms žiurkėms, skaičius buvo reikšmingas (p<0.05) mažesnis, palyginti su atitinkamu gydymu gyvūnais. Kaip parodyta Lentelė 1, ADX nesukėlė jokių pokyčių bendroje DYN ląstelėje iš NAc (lukšto).

7 pav  

Adrenalektomijos poveikis FosB / ΔFosB baltymų ekspresijai NAc (lukšto) pro-DYN-teigiamuose neuronuose ir NTS TH teigiamuose neuronuose iš morfino priklausomų žiurkių.

Adrenalektomija slopina morfino priklausomybės sukeltą FosB / ΔFosB į TH-teigiamus neuronus NTS-A2 Noradrenerginė ląstelių grupė

Dvikryptis ANOVA FOSB / ΔFosB-teigiamiems / TH-teigiamiems neuronams NTS-A2 parodė pagrindinį ADX poveikį [F (1,15)=64.86, p<0.0001], morfino gydymas [F (1,15)=29.62, p<0.0001] ir reikšminga sąveika tarp adrenalektomijos ir morfino gydymo [F (1,15)]=19.24, p=0.0005]. Newman-Keuls post-hoc bandymas rodo, kad daugelis FosB / ΔFosB-teigiamų neuronų buvo išreikšti TH išreikšti NTS (p<0.001; 7F) šlamšto morfino žiurkėms. Be to, FosB / AFosB-teigiamų neuronų, ekspresuojančių TH į ADX morfino priklausomas žiurkes, skaičius buvo žymiai mažesnis (p<0.001), lyginant su atitinkamu gydymu fiktyviais gyvūnais, kaip parodyta 7F. Kita vertus, kaip parodyta Lentelė 1, ADX nesukėlė viso THT teigiamų neuronų pokyčių NTS.

Diskusija

Dabartiniai rezultatai pirmą kartą parodė, kad smegenų GC signalizacija moduliuoja lėtinę morfino administravimo sukeltą FosB / ΔFosB ekspresiją smegenų streso sistemoje konkrečiu būdu.

Konverguotos įrodymų eilutės rodo, kad stresas padidina priklausomybės elgesio riziką [18]. Nuolatiniai streso stimulai keičia sintezę, ekspresiją ir signalizaciją su stresu susijusiuose keliuose (pvz., CRH, GC, NA ir tt). Be to, piktnaudžiavimo vaistai veikia streso kelius, dėl kurių pasikeičia genų ekspresija, o signalizacijos poveikis yra susijęs su atlygio ir su stresu susijusiomis molekulėmis [31]. Stresas ir piktnaudžiavimas narkotikais dalijasi neuronų aktyvacijos sutampančiais modeliais centrinėje nervų sistemoje, todėl atsiranda tiesioginė geno ekspresija.

Išsamiai aprašyta, kad priklausomybę sukeliančios medžiagos ir lėtiniai stresiniai stimulai didina transkripcijos faktoriaus ΔFosB ekspresiją pagrindiniuose branduoliuose, dalyvaujančiuose jų teigiamame stiprinime. [12], [13], [32], [33], ir buvo pasiūlyta, kad nuolatinis ΔFosB poveikis tiksliniams genams gali vaidinti svarbų vaidmenį plėtojant priklausomybę apibūdinančias adaptacijas. [9], [34]. Tačiau mažai žinoma apie ΔFosB ekspresiją smegenų streso sistemoje po ilgai trunkančio piktnaudžiavimo narkotikais arba molekulinių morfino sukeltų ΔFosB kaupimosi su stresu susijusiose srityse.

Šiame tyrime ištyrėme GC įtraukimą į morfino sukeltą FosB / ΔFosB ekspresiją hormoninėje streso sistemoje (HPA ašyje), kuri yra kontroliuojama CRH į PVM, taip pat ekstremipothalamic streso sistemose (įskaitant išplėstas amygdalas; [35]), tarpininkaujant CRH ir kitoms su stresu susijusioms sistemoms (įskaitant NA ir dinamorfiną; [19]).

Neseniai parodėme, kad lėtinė morfino administracija septynias dienas padidino FosB / ΔFosB ekspresiją išplėstiniame amygdala, PVN ir NTS-A2 [14]. Remiantis šiais duomenimis, dabartiniai rezultatai rodo, kad lėtinis morfino vartojimas sukėlė FosB / ΔFosB padidėjimą CeA, BNST ir NAc (lukštais), taip pat PVM ir NTS-A2. Išplėstinė amygdala buvo siejama su narkotikų atlygiu. Iš tikrųjų, visi pagrindiniai piktnaudžiavimo vaistai aktyvuoja dopaminerginį perdavimą iš VTA į NAc (korpusą) ir CeA. Įrodyta, kad toks aktyvavimas ir iš to kylantis teigiamas piktnaudžiavimo medžiagų poveikis yra susijęs su GC veiksmais GR, esančių VTA. [28]. Remdamiesi šia hipoteze, mūsų rezultatai rodo, kad FosB / ΔFosB-IR NAc (korpusas) ir CeA buvo susilpninti ADX gyvūnuose, o tai gali reikšti, kad tarp AP-1 transkripcijos faktorių ir GR morfino priklausomybės metu buvo susikalbėta. [36]. Priešingai nei pastebėtas ADX poveikis FosB ekspresijai NAc ir CeA, dabartiniai rezultatai rodo, kad lėtinis morfinas padidino Fos / ΔFosB ekspresiją PVM ir BNST GC nepriklausomu būdu.

Keli smegenų streso sistemos neurotransmiteriai, tokie kaip CRH, NA ir DYN, buvo susiję su priklausomybės procesui būdingomis aversinėmis būsenomis. [35], [37]-[39]. Dabartiniai duomenys parodė, kad lėtinė morfino ekspozicija sukėlė reikšmingą Fos / ΔFosB ekspresijos padidėjimą CRH turinčiuose neuronuose BNST, CeA ir PVN. Transkripcijos faktorių Fos šeima gali veikti ciklo AMP atsako elementų (CRE) vietose [40]. Reikšmingi įrodymai rodo, kad ΔFosB gali veikti kaip transkripcijos repressorius arba aktyvatorius [40], [41]. Gatsižvelgiant į tai, kad CRH genas turi CRE motyvą savo promotoriaus sekoje, gali būti pasiūlyta, kad FosB / ΔFosB kaupimasis CRH neuronuose gali tarpininkauti dėl morfino sukeltų CRH lygių pokyčių, kaip pranešta apie kokaino poveikį [42], ypač CeA ir BNST, kur pirmą kartą pranešėme apie CRH-teigiamų neuronų skaičiaus padidėjimą morfino priklausomybės metu. Remiantis šia hipoteze, CRS mRNR kiekio padidėjimas buvo aprašytas CeA po lėtinio morfino vartojimo. [43]. Tačiau po chroniško morfino gydymo CRH-teigiamų neuronų skaičius buvo nepakitęs. Šie rezultatai atitinka ankstesnius duomenis, rodančius, kad lėtinė morfino ekspozicija nesukelia PVM CRH hnRNR pokyčių [44]. Kadangi PVN CRH išraiška reguliuojama GC [45]ir atsižvelgiant į tai, kad šis darbas ir kiti [29], [44] parodė, kad lėtinis opiatų poveikis nekeičia kortikosterono išsiskyrimo, atrodo logiška, kad lėtinis morfino vartojimas nekeičia CRH ląstelių skaičiaus.

Periferinis kortikosterono vartojimas padidina CRH mRNR ekspresiją CeA ir BNST [46], [47]. Be to, ADX sumažino CRH išraišką CeA [48], [49]. Atitinkamai, mes pastebėjome, kad po adrenalektomijos BNST ir CeA metu CRN neuronų skaičius padidėjo priklausomai nuo morfino. Atsižvelgiant į tai, kad Fos / ΔFosB padidėjimas CRH neuronuose priklausomybės nuo morfino metu buvo susilpnintas ADX gyvūnuose, gali būti pasiūlyta Fos / ΔFosB vaidmuo reguliuojant CRH ekspresiją GC išplėstoje amygdaloje. Kita vertus, gerai žinoma, kad GC neigiamai reguliuoja CRH geno ekspresiją PVM [45]. Sutinku, dabartiniai duomenys aiškiai parodė, kad adrenalektomija panaikino Fos / ΔFosB-IR padidėjimą CRH turinčiuose neuronuose morfino priklausomybės metu šiame branduolyje.

Šiame tyrime imunocheminiai duomenys parodė, kad lėtinis morfino gydymas žymiai padidino Fos / ΔFosB dažymą NTS-A2, kuris sumažėjo po ADX. Ištyrę FosB / ΔFosB išreikštą specifinę nervų populiaciją, mes nustatėme tvirtą Fos / ΔFosB-IR padidėjimą TH (greičio ribojantį fermentą katecholamino sintezėje) teigiamuose neuronuose. Įrodyta, kad NA atlieka pagrindinį vaidmenį priklausomybėje [50]. Ankstesniame darbe lėtinė morfino ekspozicija sukėlė TH koncentracijos padidėjimą NTS-A2 [14], [29]. Yra žinoma, kad TH genas savo promotoriuje turi AP-1 vietą [51]. Mūsų rezultatai gali reikšti, kad FosB / ΔFosB dalyvauja opiatų sukeliamame TH lygių padidėjime NTS-A2. Brainstem noradrenerginių ląstelių grupė išreiškia aukštą GC receptorių lygį (GR). Buvo įrodyta, kad GC turi leistiną vaidmenį noradrenerginėje neurotransmisijoje [29], [30], [52]. Atitinkamai, GR antagonistų skyrimas paveikė kelis NA aktyvumo aspektus, įskaitant TH aktyvaciją ir neuronų aktyvumą [30]. Dabartiniai rezultatai parodė, kad po ADX sumažėjo T-teigiamų ląstelių, ekspresuojančių FOSB / ΔFosB, kiekis NTS-A2. Atsižvelgiant į tai, kad adrenalektomija blokavo TH baltymų kiekio padidėjimą NTS-A2 priklausomybės nuo morfino metu [29]ir kad GRE / AP-1 vieta buvo aprašyta TH geno promotoriuje [53], mūsų duomenys gali parodyti ΔFosB kaip tarpininką GC poveikiui noradrenerginiam poveikiui NTS-A2 priklausomybės nuo opiatų metu.

DYN buvo postuluotas kaip galimas ΔFosB tikslinis genas [54], [55]. Mūsų rezultatai rodo, kad lėtinė morfino ekspozicija reikšmingai nepakeitė FosB / ΔFosB ekspresijos pro DNR ekspresuojančius neuronus (lukštas)). DYN ekspresijos AFosB reguliavimas, Zachariou et al [33] pranešė apie nedidelį, bet reikšmingą DYN mRNR kiekio sumažėjimą NAc iš AFosB pernelyg ekspresuojančių pelių, todėl postulavo, kad šis transkripcijos faktorius slopina DYN ekspresiją. Mūsų duomenimis negalima daryti išvados, kad lėtinis morfinas modifikuoja DYN ekspresiją per FosB / ΔFosB aktyvumą, atsižvelgiant į tai, kad mūsų rezultatai buvo gauti baltymų lygiu.

Buvo teigiama, kad DYN / kappa opioidų sistema, atrodo, skatina prieš depresiją panašias būsenas, kuriose yra pasipiktinimo elementų. Šis aversinis atsakas gali apimti tarpusavio sąveiką su NAc, DA ir extrahipothalamic CRH sistema [35]. Tačiau mažai žinoma apie galimą GC reguliavimą DYN ekspresijai NAc. Siūloma, kad ΔFosB NAc, iš dalies dėl represijos DYN, padidintų jautrumą morfino ir kokaino naudingam poveikiui ir sukelia atsparumą stresui [9], [33]. Mūsų duomenys patvirtina GC vaidmenį reguliuojant teigiamą stiprinantį morfino poveikį, kurį sąlygoja mezokortikolimbinė DA sistema, atsižvelgiant į tai, kad ADX žiurkių NAc sumažėja FosB / ΔFosB / pro-DYN-teigiamų neuronų skaičius. Šie poveikiai gali būti tiesiogiai susiję su GR, kurie yra per visą mezolimbinį atlygio kelią, arba netiesiogiai per CRH projekcijas, atsirandančias iš CeA ir (arba) BNST į VTA ir NAc, kurios yra nepakankamai aktyvuotos per morfino priklausomybę ADX žiurkėms.

Apibendrinant, šiame tyrime pateikiami įrodymai, kad GC yra labai svarbūs FosB / ΔFosB kaupimui smegenų įtampos sistemose po lėtinio morfino poveikio, o tai gali sukelti ilgalaikius genų ekspresijos modelio pokyčius su stresu susijusiose srityse. Šie rezultatai taip pat rodo, kad oposo priklausomybės metu FosB / ΔFosB gali prisidėti prie priklausomybės nuo GC priklausomybės nuo smegenų streso sistemos plastiškumo pokyčių. Reikia atlikti tolesnius tyrimus, siekiant nustatyti ląstelių ląstelių mechanizmus, pagal kuriuos lėtiniai opiatai sukelia FosB / ΔFosB pasirinktuose su stresu susijusiuose regionuose, taip pat mechanizmas, atsakingas už morfino sukeltos FosB / ΔFosB ekspresijos slopinimą GC.

Metodai

medžiagos

Kortikosteronas ir cholesterolis buvo įsigyti iš „Sigma Chemical Co.“ (St Louis, MO, JAV). Kortikosterono granules gamino dr. Mártonas Vajna (Farmacijos administracijos katedra, Semmelweis universiteto Farmacijos universitetas, Budapeštas, Vengrija). Morfino bazės (Alcaliber Laboratories, Madrid, Ispanija) granulės arba laktozė (kontrolė) buvo paruoštos Farmacijos ir farmacijos technologijos katedroje (Granados mokykla, Ispanija). Pentobarbitalas buvo įsigytas iš Hospira (Hoofdorp, Nyderlandai). Ketamino chlorhidratas ir ksilazinas buvo įsigyti iš „Labs“. Merial (Lionas, Prancūzija) ir Labs. Calier (Barselona, ​​Ispanija).

gyvūnai

Atvykus į kambarį, vyriškos Sprague-Dawley žiurkės (220 – 240 g eksperimento pradžioje; Harlan, Barselona, ​​Ispanija) buvo patalpintos porose narvuose (ilgis, 45 cm; plotis, 24 cm; aukštis, 20 cm). kontroliuojamoje temperatūroje (22 ± 2 ° C) ir drėgmei (50 ± 10%), laisvai patekti į vandenį ir maistą (Harlan Teklad standartinis graužikų česnakas; Harlan Interfauna Ibérica, Barselona, ​​Ispanija). Gyvūnai buvo pritaikyti prie standartinio 12 h šviesos ir tamsos ciklo (šviesa įsijungia: 08 h 00 min –20 h 00 min) prieš 7 dienas prieš eksperimentų pradžią. Visos chirurginės ir eksperimentinės procedūros buvo atliktos pagal 24 1986 (86 / 609 / EEC) Europos Bendrijų Tarybos direktyvą, patvirtintą vietinių gyvūnų tyrimų komitetų (REGA ES300305440012). Tyrimą patvirtino Mursijos universiteto bioetikos komitetas (RD 1201 / 2005) ir Ministerio de Ciencia y Tecnología (SAF / FEDER 2009-07178), Ispanija.

Adrenalektomija

Žiurkės buvo dvišaliai adrenalektomuotos ir implantuotos kortikosterono granulės, kad būtų užtikrintas mažas, bet stabilus GC kiekis. [29]. Žiurkės buvo dvišaliai adrenalektomizuotos (ADX) per nugaros metodą pagal 90 mg / kg ketamino chlorhidrato ir 8 mg / kg xylazin (ip) anesteziją ir implantuotos po oda lėtai atpalaiduojančiomis kortikosterono granulėmis operacijos metu. Steroidinių granulių (25 mg kortikosterono ir 75 mg cholesterolio) sudėtis buvo pasirinkta siekiant užtikrinti stabilią kortikosterono koncentraciją, atitinkančią cirkadinį mažesnį lygį iki 20 d po implantacijos. [56]. ADX žiurkės su kortikosterono pakaitalu (ADX ir kortikosterono) nepadidina kortikosterono koncentracijos plazmoje. [56]. Po operacijos ADX ir kortikosterono žiurkės turėjo laisvą pasirinkimą išgerti izotoninį fiziologinį tirpalą (0.9% NaCl), kad pakeistų nusodrinto natrio druską, o ne aldosterono praradimą dėl adrenalektomijos. Kontrolinės žiurkės buvo veikiamos ta pačia chirurgine procedūra (apgaule) be antinksčių išnykimo. Sham ir ADX plius kortikosterono žiurkėms buvo leista atsigauti po operacijos 5 d prieš morfino priklausomybės procedūrą. Sėkmingą dvišalę adrenalektomiją patvirtino kortikosterono ir AKTH koncentracija plazmoje ir ADX gyvūnų post-mortem tyrimas.

Narkotikų gydymas ir eksperimentinė procedūra

Praėjus penkioms dienoms po operacijos, žiurkės buvo implantuotos su dviem 75 mg morfino granulėmis lengvosios eterio anestezijos metu. Kontrolinės žiurkės gavo placebo granules, kurių sudėtyje yra laktozės. Nustatyta, kad ši procedūra sukelia pastovią morfino koncentraciją plazmoje, pradedant praėjus kelioms valandoms po granulių implantacijos ir visiškai nutraukus sindromą po ūminio opioidų antagonistų injekcijos. [57]. Priklausomybė nuo morfino pasiekiama 24 h po granulių implantavimo ir išliko pastovi 15 dienoms. [58]. Praėjus dešimčiai dienų po morfino ar placebo granulių implantacijos, žiurkės buvo nužudytos. Keturios eksperimentinės sąlygos, tiriamos HPA ašies aktyvumui (kortikosterono ir AKTH koncentracija plazmoje), FosB / AFosB ekspresija, CRH ekspresija, DYN ekspresija, TH ekspresija ir FosB / AFosB ekspresija į CRH-, DYN- ir TH-teigiamus neuronus buvo: i) apgaulingas placebas; (ii) šlamšto morfino; iii) ADX-placebo; (iv) ADX-morfinas. Žiurkių svorio padidėjimas buvo patikrintas gydymo metu, siekiant užtikrinti, kad morfinas būtų tinkamai išgautas iš granulių, nes žinoma, kad ilgalaikis morfino gydymas sukelia kūno svorio padidėjimą, kurį sukelia mažesnis kalorijų kiekis [29].

Smegenų perfuzija ir sekcija

Žiurkės buvo giliai anestezuotos perdozavus pentobarbitalio (100 mg / kg ip) ir perfuzijos transcardialiai su fiziologiniu tirpalu po fiksavimo, turinčio paraformaldehido (4% paraformaldehido 0.1 M borato buferyje, pH 9.5). Nuėmus perfuzuotas smegenis, jos buvo užfiksuotos 3 h tame pačiame fiksatoriuje ir laikomos 4 ° C PBS, kuriame yra 10% sacharozės, kol koroniniai pjūviai (30-µm storis) buvo nupjauti rostrocaudally užšaldantį mikrotomą , Vokietija). Paxinos ir Watson atlasas (2007) [59] buvo naudojamas skirtingiems žiurkių smegenų regionams identifikuoti: NAc (apvalkalas), BNST, PVN, CeA ir NTS-A2 (1 pav). Sekcijos buvo apsaugotos nuo karščio ir laikomos -20 ° C temperatūroje iki naudojimo.

1 pav  

Scheminiai koroninių sekcijų, rodančių smegenų sritis (stačiakampius), kuriuose FosB / ΔFosB teigiami branduoliai buvo skaičiuojami NAc (apvalkalas), BNST, CeA, PVN ir NTS, brėžiniai [59].

FosB / ΔFosB imunohistochemija

Skirsniai buvo apdoroti imunohistochemijai, kaip aprašyta Núñez et al [29]. Trumpai užblokavus 0.3% H2O2 ir 2% normalių ožkų serumo (Sigma, USA) audinių sekcijos buvo inkubuojamos pirminiame anti-FosB / ΔFosB antiserume (triušio polikloninis, # sc-48, Santa Cruz biotechnologija, Santa Cruz, CA, USA; 1[santykis]1000). Šiame tyrime naudojamas pirminis antikūnas nediskriminuoja FosB ir jo stabilaus jungimo varianto ΔFosB. Nustatyta, kad pakartotinis FosB sukeliančių dirgiklių poveikis desensitizuoja ūminį FosB indukciją. [15], [40], [60]. Taigi, skirtumai tarp FosB / ΔFosB dažymo morfino iš anksto apdorotose ir nekontroliuojamose žiurkėse gali būti aiškinami kaip pirmiausia atspindintys ΔFosB kaupimosi skirtumus. Antigenai buvo vizualizuoti įprastu avidin-biotino-imunoperoksidazės protokolu (Vectastain ABC Elite Kit; Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA). 3,3'-diaminobenzidino tetrahidrochlorido (DAB; Sigma, USA) reakcija buvo sustiprinta nikelio amonio sulfatu. Skiltys buvo sumontuotos ant chromo-aliuminio želatinos dengtų skaidres, dehidratuotos ir padengtos.

Dvigubas žymėjimas FosB / ΔFosB-imunoreaktyvių branduolių ir CRH-, TH- ir DYN-teigiamų neuronų imunohistochemija

FosB / ΔFosB-TH dvigubo žymėjimo atveju kiekvienos žiurkės audinių sekcijos kiekvienoje gydymo grupėje buvo apdorotos FosB / ΔFosB imunoreaktyvumui, naudojant DAB nikelio intensyvinimą ir tada TH buvo nustatytas tik naudojant DAB chromogeną. FosB / ΔFosB imuninis dažymas buvo atliktas kaip aprašyta anksčiau. Po FosB / AFosB dažymo, sekcijos buvo nuplaunamos PBS, apdorojamos 2% normaliu ožkų serumu ir po to inkubuojamos per naktį su triušio polikloniniu anti-TH antikūnu (AB152, Chemicon, USA; 1[santykis]6000) kambario temperatūroje. Buvo laikomasi tų pačių pirmiau aprašytų imunohistocheminių procedūrų. TH antikūnų ir peroksidazės kompleksas buvo sukurtas DAB. Sekcijos buvo sumontuotos ant chromo-aliuminio želatinos dengtų skaidrių ir uždengtos.

FosB / ΔFosB-CRH ir FosB / ΔFosB-pro-DYN dvigubo žymėjimo atveju šis procesas buvo toks pat, kaip aprašyta anksčiau FosB / ΔFosB-TH. Norint aptikti DYN ekspresuojančius neuronus NAc, buvo panaudota antigeno paieškos procedūra, inkubuojant smegenų sekcijas citrato buferyje (10 mM citrinų rūgštis, 0.05% Tween 20, pH 6.0) 60 ° C temperatūroje prieš 20. Pirminį anti-CRH triušio antiserumą maloniai suteikė Wylie W. Vale (The Salk Institute, La Jolla, CA, JAV) ir buvo naudojamas 1[santykis]500 72 h praskiedimas 4 ° C temperatūroje. Pro-DYN pirminis antikūnas įsigytas iš Neuromics (# GP10110, Neuromics, Edina, MN, USA) ir praskiestas 1[santykis]2000 (72 h, 4 ° C).

Vaizdo analizė

Vaizdai buvo užfiksuoti naudojant „Leica“ mikroskopą (DM 4000B; Leica), prijungtą prie vaizdo kameros (DFC290, Leica). FosB / ΔFosB teigiami ląstelių branduoliai skaičiuojami naudojant kompiuterinę atvaizdų analizės sistemą (QWIN, Leica). NTS-A ribos2BNST, CeA, NAc (apvalkalas) ir parvoceliulinis PVM padalijimas buvo aprašyti ir užfiksuotas teigiamų profilių skaičius. FosB / ΔFosB branduolinių profilių skaičius dominuojančių ląstelių grupių ribose buvo skaičiuojamas dvišaliu būdu nuo keturių iki penkių sekcijų iš kiekvieno žiurkės ir vidurkiu, siekiant gauti vieną vertę kiekvienai žiurkei. Kad išvengtumėte stebėtojo šališkumo, visus skyrius kiekybiškai įvertino apakintas tyrėjas. Bendras skirtingų smegenų regionų skaičius skaičiuojamas kaip vidurkis ± SEM.

TH-, CRH- ir DYN-teigiamų ląstelių ir FosB / ΔFosB dvigubų dažytų profilių kiekybinis nustatymas

Teigiami branduoliai FosB / ΔFosB imunoreaktyvumui buvo nustatyti naudojant tą pačią įprastinę šviesos mikroskopiją, aprašytą aukščiau, ir skaičiuojant padidinimą x40. FosB / ΔFosB-teigiamos CRH, TH arba DYN ląstelės buvo identifikuojamos kaip ląstelės su rudais citozoliniais nuosėdomis CRH-teigiamo, TH-teigiamo ir DYN-teigiamo dažymo ir mėlynos / tamsos branduolio dažymo FosB / ΔFosB atveju. Kvadratinis laukas (195 µm) buvo užfiksuotas užfiksuotam vaizdui, kad būtų naudojamas kaip atskaitos sritis. Dvigubai pažymėtų dvigubo žymėjimo neuronų skaičius skaičiuojamas nuo keturių iki penkių sekcijų iš kiekvieno gyvūno, esančio PVM, BNST ir CeA, CRH neuronams, NTS TH neuronams ir NAc DYN neuronams. Į analizę taip pat buvo įtrauktos CRH, TH ir DYN teigiamos ląstelės be matomo branduolio (FosB / AFosB-neigiamos CRH, TH arba DYN ląstelės).

Radioimmunoanalizė

Kraujas surenkamas į ledu aušinamus mėgintuvėlius, turinčius 5% EDTA, ir tada jis buvo centrifuguojamas (500 g; 4 ° C; 15 min). Plazmos buvo atskirtos, padalintos į dvi dalis ir laikomos -80 ° C temperatūroje, kol buvo ištirta kortikosterono ar AKTH. Kortikosterono ir AKTH koncentracija plazmoje buvo apskaičiuota naudojant specifinius kortikosterono ir AKTH antikūnus žiurkėms ([125I] -CORT ir [125I] -ACTH RIA; MP Biomedicals, Orangeburg, NY, JAV). Tyrimo jautrumas buvo 7.7 ng / ml kortikosteronui ir 5.7 pg / ml ACTH.

Statistinė analizė

Duomenys pateikiami kaip vidurkis ± SEM ir analizuojami naudojant „GraphPad Prism“ statistinį paketą (San Diegas, CA, JAV). Duomenys buvo analizuojami dviejų krypčių dispersijos analize (ANOVA) su gydymu (placebu, morfinu) ir chirurgija (apgaulė, ADX) kaip nepriklausomi kintamieji. Newman – Keuls post-hoc testas buvo naudojamas atskirų grupių palyginimams. Skirtumai, kai ap <0.05, buvo laikomi reikšmingais.

Pagalbinė informacija

Pav. S1

Adrenalektomijos (ADX) poveikis kraujo plazmos AKTH (A) ir kortikosterono (B) koncentracijai kontroliniuose ir morfino gydomuose gyvūnuose. Chirurginės ADX padidino AKTH koncentraciją tiek placeboje, tiek morfine gydomomis žiurkėmis, tuo tarpu sumažėjusi kortikosterono koncentracija plazmoje gydytų morfino žiurkių. Duomenys rodo ACTH ir kortikosterono koncentracijos plazmoje vidurkį ± SEM 10 dienų gydymo placebu arba morfinu. *** p<0.001, palyginti su placebu; ++p<0.01, + + +p<0.001 prieš sham-morfiną.

(TIF)

Padėka

Dėkojame dr. Mártonui Vajnai ir Anna Földes iš Semmelweis universiteto (Budapeštas, Vengrija) už kortikosterono granulių paruošimą.

Finansavimo ataskaita

Šiam darbui pritarė šios stipendijos: Ministerio de Ciencia e Imnovación (SAF / FEDER 2009-07178 ir SAF / FEDER 2010-17907), Ispanija; Red de Trastornos Adictivos (RD06 / 0001 / 1006 ir RD06 / 0001 / 1001), Ispanija; „Fundación Séneca“, „Agencia Regional de Ciencia y Tecnología Región de Murcia“ (15405 / PI10), Ispanija. DG-P remia stipendiją iš „Ministerio de Ciencia e Innovación“ (AP2009-2379). Finansuotojai neturėjo jokio vaidmens studijų planavimo, duomenų rinkimo ir analizės, sprendimo skelbti ar rengti rankraštį.

Nuorodos

1. Volkow ND, Skolnick P (2012) Nauji vaistai medžiagų vartojimo sutrikimams: iššūkiai ir galimybės. Neuropsychopharmacology 37: 290-292. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
2. Robison AJ, Nestler EJ (2011) Transkripcijos ir epigenetiniai priklausomybės mechanizmai. Nat Rev Neurosci 12: 623-637. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
3. Hutchison ER, Okun E, Mattson MP (2009) MikroRNR potencialas nervų sistemos pažeidimuose, degeneracijoje ir taisyme. Neuromolekulinė med 11: 153-161. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
4. Li MD, van der Vaart AD (2011) MikroRNR priklausomybėje: prisitaikymo tarpininkai? Mol Psichiatrija 16: 1159-1168. [PubMed]
5. Mumberg D, Lucibello FC, Schuermann M, Muller R (1991) Alternatyvus fosB transkriptų sujungimas lemia diferencijuotai ekspresuojančias mRNR, koduojančias funkciniu požiūriu antagonistinius baltymus. Genes Dev 5: 1212-1223. [PubMed]
6. Chen J, Kelz MB, Hope BT, Nakabeppu Y, Nestler EJ (1997) Lėtiniai FOS susiję antigenai: stabilūs ΔFosB variantai, sukeltos smegenų lėtiniu gydymu. J Neuroscience 17: 4933-4941. [PubMed]
7. Moratalla R, Elibol B, Vallejo M, Graybiel AM (1996) Indukuojamų Fos-Jun baltymų ekspresijos Striatume tinklo lygio pokyčiai lėtinio kokaino gydymo ir nutraukimo metu. Neuronas 17: 147-156. [PubMed]
8. Chao J, Nestler EJ (2004) Narkomanijos molekulinė neurobiologija. Metinė medicinos apžvalga 55: 113-132.
9. Muschamp JW, Nemeth CL, Robison AJ, Nestler EJ, Carlezon J (2012) ΔFosB stiprina kokaino poveikį, tuo pačiu sumažindamas pro-depresinį poveikį kappa-opioidų receptorių agonistui U50488. Biologinė psichiatrija 71: 44-50. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
10. Gago B, Suárez-Boomgaard D, Fuxe K, Brené S, Reina-Sánchez MD ir kt. (2011) Ūminio ir tęstinio morfino gydymo poveikis transkripcijos faktoriaus ekspresijai žiurkių caudatinio putameno subregionuose. Pažymėtas moduliavimas pagal D4 receptorių aktyvaciją. Smegenų raiška 1407: 47-61. [PubMed]
11. Kaplan GB, Leite-Morris KA, Fan WY, Jaunas AJ, Guy MD (2011) Opiatų jautrinimas sukelia FosB / ΔFosB ekspresiją priešakinėje žievėje, Striatoje ir Amygdala smegenų regionuose. PLoS ONE 6: e23574. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
12. Nye HE, Nestler EJ (1996) Lėtinių morfino įvedimas žiurkių smegenyse sukelia lėtinių fosfatinių antigenų. Mol Pharmacol 49: 636-645. [PubMed]
13. McClung CA, Nestler EJ, Zachariou V (2005) Genų ekspresijos reguliavimas pagal lėtinę morfiną ir morfiną pasitraukiant iš lokusų Ceruleus ir Ventral Tegmental srityje. J Neuroscience 25: 6005-6015. [PubMed]
14. Núñez C, Martín F, Földes A, Laorden ML, Kovács KJ, et al. (2010) FosB / ΔFosB indukcija smegenų streso sistemose, susijusioms su morfino priklausomybe ir nutraukimu. Žurnalas "Neurochemistry" 114: 475-487. [PubMed]
15. Perrotti LI, Hadeishi Y, Ulery PG, Barrot M, Monteggia L, et al. (2004) ΔFosB indukcija su lydinčia smegenų struktūra po lėtinio streso. J Neuroscience 24: 10594-10602. [PubMed]
16. Vialou V, Robison AJ, LaPlant QC, Covington HE, Dietz DM, et al. (2010) ΔFosB smegenų atlyginimų grandinėse tarpininkauja atsparumui stresui ir antidepresantams. Nat Neurosci 13: 745-752. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
17. Ambroggi FC, Turiault M, Milet A, Deroche-Gamonet V, Parnaudeau S, et al. (2009) Stresas ir priklausomybė: gliukokortikoidų receptoriai dopaminoceptiniuose neuronuose palengvina kokaino paiešką. Nat Neurosci 12: 247-249. [PubMed]
18. Sinha R (2008) Lėtinis stresas, narkotikų vartojimas ir pažeidžiamumas priklausomybei. Ann NY Acad Sci 1141: 105-130. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
19. Koob GF, Volkow ND (2010) Nepriklausomybės neurocirkuliacija. Neuropsychopharmacology 35: 217-238. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
20. Koob G, Kreek MJ (2007) Stresas, vaistų atlyginimų kelių reguliavimas ir perėjimas prie priklausomybės nuo narkotikų. Aš esu psichiatrija 164: 1149-1159. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
21. Koob GF, Le Moal M (2008) Neurobiologiniai mechanizmai priešų motyvaciniams procesams priklausomybėje. Phil Trans R Soc B 363: 3113-3123. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
22. Koob GF (2006) Priklausomybės neurobiologija: neuroadaptacinis vaizdas, susijęs su diagnoze. Polinkis 101: 23-30. [PubMed]
23. Carrasco GA, Van de Kar LD (2003) Neuroendokrininė streso farmakologija. Europos farmakologijos žurnalas 463: 235-272. [PubMed]
24. „Piazza PV“, „Le Moal M“ (1997) Gliukokortikoidai kaip biologinis atlygio substratas: fiziologinės ir patofiziologinės pasekmės. Smegenų tyrimų apžvalgos 25: 359-372. [PubMed]
25. Cleck JN, Blendy JA (2008) Blogesnis dalykas - neigiamas streso poveikis narkomanijai. J Clin Invest 118: 454-461. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
26. Goodman A (2008) Priklausomybės neurobiologija. Integruota apžvalga. Biochem Pharmocol 75: 266-322. [PubMed]
27. Dunn AJ, Swiergiel AH (2008) Kortikotropino atpalaiduojančio faktoriaus ir noradrenalino vaidmuo reaguojant į stresą ir šių dviejų sistemų tarpusavio ryšiai. Europos farmakologijos žurnalas 583: 186-193. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
28. Koob GF, Le Moal M (2008) Priklausomybė ir smegenų priešgaisrinės apsaugos sistema. Ann Rev Physiol 59: 29-53.
29. Núñez C, Földes A, Pérez-Flores D, García-Borrón JC, Laorden ML ir kt. (2009) Padidėjęs gliukokortikoidų kiekis yra atsakingas už tirozino hidroksilazės (TH) mRNR ekspresijos, fosforilinimo ir fermentų aktyvumo indukciją vienintelio trakto branduolyje (NTS-A2) morfino pašalinimo metu.. endokrinologija 150: 3118-3127. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
30. Navarro-Zaragoza J, Hidalgo JM, Laorden ML, Milanés MV (2012) Gliukokortikoidų receptoriai dalyvauja opiatų nutraukimo sukeltoje žiurkių NTS noradrenerginio aktyvumo stimuliacijoje ir somatiniuose morfino nutraukimo požymiuose. „Br J Pharmacol“ DOI: 10.1111 / j.1476–5381.2012.01918.x .
31. Renthal W, Nestler EJ (2008) Epigenetiniai narkomanijos mechanizmai. Molekulinės medicinos tendencijos 14: 341-350. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
32. Sim-Selley LJ, Cassidy MP, Sparta A, Zachariou V, Nestler EJ ir kt. (2011) ΔFosB viršsekspresijos įtaka opioidų ir kanabinoidų receptorių sukeltam signalizavimui branduolio akumbensuose. Neurofarmakologija 61: 1470-1476. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
33. Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, Cassidy MP, et al. (2006) Esminis ΔFosB vaidmuo branduolyje accumbens morfino veikloje. Nat Neurosci 9: 205-211. [PubMed]
34. Hyman SE, Malenka RC (2001) Priklausomybė ir smegenys: prievartos neurobiologija ir jos atkaklumas. Nat Rev Neurosci 2: 695-703. [PubMed]
35. Koob GF (2008) Smegenų streso sistemos vaidmuo priklausomybėje. Neuronas 59: 11-34. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
36. Deroche-Gamonet V, Sillaber I, Aouizerate B, Izawa R, Jaber M, et al. (2003) Gliukokortikoidų receptorius kaip galimas tikslas sumažinti kokaino vartojimą. J Neuroscience 23: 4785-4790. [PubMed]
37. Nestler EJ (2001) Ilgalaikio plastiškumo, priklausančio nuo priklausomybės, molekulinis pagrindas. Nat Rev Neurosci 2: 119-128. [PubMed]
38. Laorden ML, Ferenczi S, Pintér-Kübler B, González-Martín LL, Lasheras MC ir kt. (2012) Hipotalaminis Okseksas-A neuronas yra įtrauktas į smegenų streso sistemos reakciją į morfiną.. PLoS ONE 7: e36871. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
39. Navarro-Zaragoza J, Núñez C, Ruiz-Medina J, Laorden ML, Valverde O, et al. (2011) CRF (2) tarpininkauja padidėjusiam noradrenerginiam aktyvumui hipotalaminiame paraventriculiniame branduolyje ir neigiamoje morfino pasitraukimo iš žiurkių būklėje.. Br J Pharmocol 162: 851-862. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
40. McClung CA, Ulery PG, Perrotti LI, Zachariou V, Berton O ir kt. (2004) DFosB: molekulinis jungiklis ilgalaikiam prisitaikymui smegenyse. Molekulinės smegenų tyrimai 132: 146-154. [PubMed]
41. Nestler EJ (2008) Transkripciniai priklausomybės mechanizmai: DFosB vaidmuo. Phil Trans R Soc B 363: 3245-3255. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
42. Crespo JA, Manzanares J, Oliva JM, Corchero J, Garcia-Lecumberri C, et al. (2003) Kokaino savęs išnykimas sukelia kortikotropino atpalaiduojančio faktoriaus genų ekspresijos pokyčius hipoglikamo paraventrikuliniame branduolyje.. Molekulinės smegenų tyrimai 117: 160-167. [PubMed]
43. Maj M, Turchan J, Smialowska M, Przewlocka B (2003) Morfino ir kokaino įtaka CRF biosintezei žiurkės centriniame branduolyje. Neuropeptidai 37: 105-110. [PubMed]
44. Núñez C, Foldes A, Laorden ML, Milanes MV, Kovács KJ (2007) Su stresu susijusios hipotalaminės neuropeptido geno ekspresijos aktyvavimas morfino pasitraukimo metu. J Ncurochcm 101: 1060-1071. [PubMed]
45. Swanson LW, Simmons DM (1989) Diferenciniai steroidiniai hormonai ir neuronų įtaka paraventriculinio branduolio CRH ląstelių peptidų mRNR lygiui: hibridizacijos histocheminis tyrimas su žiurkėmis. J Comp Neurol 285: 413-435. [PubMed]
46. Makino S, Gold PW, Schulkin J (1994) Kortikosterono poveikis CRH mRNR ir turiniui stria terminalo lovos branduolyje; palyginimas su poveikiu centrinėje amygdalos branduolyje ir hipotalamo paraventrikuliniame branduolyje.. Smegenų raiška 657: 141-149. [PubMed]
47. Makino S, Gold PW, Schulkin J (1994) Kortikosterono poveikis kortikotropino atpalaiduojančio hormono mRNR centriniam branduoliui ir hipoglikamo paraventrikulinio branduolio parvoceluliniam regionui. Smegenų raiška 640: 105-112. [PubMed]
48. Viau V, Soriano L, Dallman MF (2001) Androgenai Alter Kortikotropinas atpalaiduojantis hormonas ir arginino vasopresino mRNR, esantis Forebrain vietose, žinomas kaip reguliuojamas aktyvumas hipotalaminės-hipofizės-antinksčių ašyje. Neuroendokrinologijos žurnalas 13: 442-452. [PubMed]
49. Palkovits M, Young WS, Kovács K, Tóth Z, Makara GB (1998) Kortikotropino atpalaiduojančio hormono geno ekspresijos pokyčiai centriniuose amigdaloidiniuose neuronuose po ilgalaikių paraventrikulinių pažeidimų ir adrenalektomijos. Neurologijos 85: 135-147. [PubMed]
50. Smith RJ, Aston-Jones G (2008) Noradrenerginis perdavimas išplėstoje amygdaloje: vaidmuo didinant vaistų vartojimą ir atkrytį užsitęsusio narkotikų susilaikymo metu. Smegenų struktūra 213: 43-61. [PubMed]
51. Sabban EL, Hiremagalur B, Nankova B, Kvetnanský R (1995) Katecholamino biosintezės fermentų streso sukeltos indukcijos molekulinė biologija. Ann NY Acad Sci 771: 327-338. [PubMed]
52. Roozendaal B, Okuda S, de Quervain DJF, McGaugh JL (2006) Gliukokortikoidai sąveikauja su emocijų sukeltu noradrenerginiu aktyvavimu, įtakodami skirtingas atminties funkcijas. Neurologijos 138: 901-910. [PubMed]
53. Rani CSS, Elango N, Wang SS, Kobayashi K, Strong R (2009) Aktyvatoriaus baltymo-1 panašios sekos, kaip gliukokortikoidų atsako elemento, identifikavimas žiurkių tirozino hidroksilazės genoje. Mol Pharmacol 75: 589-598. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
54. Hughes P, Dragunow M (1995) Tiesioginių ankstyvųjų genų indukcija ir neurotransmiterio reguliuojamos genų ekspresijos kontrolė nervų sistemoje. Pharmacol Rev 47: 133-178. [PubMed]
55. Kovacs GL, Telegdy G (1988) Hipotalamo-neurohipofizės neuropeptidai ir eksperimentinis narkomanija. Brain Res Bull 20: 893-895. [PubMed]
56. Kovács KJ, Földes A, Sawchenko PE (2000) Gliukokortikoidų neigiamas grįžtamasis ryšys selektyviai nukreipiamas į vazopresino transkripciją parvoceliuliniuose neurosekretoriniuose neuronuose. J Neuroscience 20: 3843-3852. [PubMed]
57. Frenois F, Cador M, Caille S, Stinus L, Le Moine C (2002) Naloksono nusodinto morfino pašalinimo motyvacinių ir somatinių komponentų neuronų koreliacijos. Eur J Neurosci 16: 1377-1389. [PubMed]
58. Auksas LH, Stinus L, Inturrisi CE, Koob GF (1994) Ilgalaikė tolerancija, priklausomybė ir susilaikymas po poodinės morfino granulių implantacijos žiurkėms. EUR J Pharmocol 253: 45-51. [PubMed]
59. Paxinos G. ir Watson C (2007) Žiurkės smegenys stereotaksinėse koordinatėse. Amsterdamas: Academic Press.
60. Perrotti LI, Weaver RR, Robison B, Renthal W, Maze I ir kt. (2008) Skirtingi FosB indukcijos modeliai smegenyse piktnaudžiavimo narkotikais. Synapse 62: 358-369. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]