DeltaFosB ekspresija yra susijusi su susilpnėjusiu kokainu, sukeltu sacharino suvartojimo slopinimu pelėms. (2009)

Visiškas tyrimas

Elgesio neurosci. 2009 balandis; 123 (2): 397-407.

„Freet CS“, „Steffen C“, „Nestler EJ“, „Grigson PS“.

Šaltinis

Pensilvanijos valstybinio universiteto medicinos koledžo neurologų ir elgesio mokslų katedra, Hershey, PA 17033, JAV. [apsaugotas el. paštu]

Abstraktus

Graužikai slopina sacharino vartojimą, kai jis derinamas su piktnaudžiavimo narkotikais (Goudie, Dickins ir Thornton, 1978 m; „Risinger & Boyce“, 2002 m). Anot autorių, manoma, kad šį reiškinį, vadinamą atlygio palyginimu, tarpininkavo numatant atlygintinas vaisto savybes (PS Grigson, 1997; PS Grigson & CS Freet, 2000 m). Nors dar reikia atrasti daug ką dėl atlygio ir priklausomybės neuroninių pagrindų, žinoma, kad per didelis xFosB ekspresija susijęs su padidėjusia jautrumu vaistams ir paskata. Atsižvelgdami į tai, autoriai teigė, kad per didelis xFosB ekspresija taip pat turėtų palaikyti didesnį vaistų sukeltą natūralaus atlygio nuvertinimą. Norėdami patikrinti šią hipotezę, NSE-tTA × TetOp-ΔFosB pelės (Chen ir kt., 1998), esant normaliam ar per daug ekspresuotam ΔFosB striatumoje, buvo galima patekti į sacharino lazdelę, po to švirkščiant druskos tirpalą, 10 mg / kg kokaino arba 20 mg / kg kokaino. Priešingai nei buvo spėjama anksčiau, FFosB per didelis ekspresija buvo siejama su kokaino sukeltu silpnintu sacharino vartojimo slopinimu. Hipotezuojama, kad ΔFosB padidėjimas ne tik padidina vaisto atlygio vertę, bet ir sacharino lapelio atlygio vertę.

Raktiniai žodžiai: atlygio palyginimas, natūralus atlygis, transgeninės pelės, CTA, suvartojimas

ΔFosB yra transkripcijos veiksnių grupės „Fos“ narys, sulaukęs daug dėmesio kaip galimo ilgalaikio neuronų plastiškumo, stebimo priklausomybėje nuo narkotikų, molekulinio jungiklio (McClung ir kt., 2004; Nestler, Barrot & Self, 2001 m; Nestleris, Kelzas ir Chenas, 1999 m). ΔFosB gali homodimerizuotis (Jorissen ir kt., 2007) arba heterodimerizuoti naudojant JunD (ir mažesniu mastu - JunB); Hiroi ir kt., 1998; Perez-Otano, Mandelzys ir Morganas, 1998 m), kad susidarytų aktyvatoriaus baltymo-1 kompleksai (Chen ir kt., 1995; Curran & Franza, 1988 m; Nestler ir kt., 2001). Tada aktyvatoriaus baltymas-1 jungiasi prie aktyvatoriaus baltymo-1 sutarimo vietos (TGAC / GTCA), kad skatintų ar slopintų įvairių genų, įskaitant, bet neapsiribojant, dinorfinu, AMPA gliutamato receptorių subvienetą GluR2, ciklinu priklausomą kinazę 5, transkripciją. , ir branduolinis faktorius kappa B (Chen, Kelz, Hope, Nakabeppu ir Nestler, 1997 m; Dobrazanski ir kt., 1991; Nakabeppu ir Nathansas, 1991 m; Yen, Išmintis, Tratneris ir Verma, 1991 m). Buferio branduoliuose ΔFosB padidėjimas slopina dinorfino transkripciją (McClung ir kt., 2004, bet pamatyti Anderssonas, Westinas ir Cenci, 2003 m), bet skatina „GluR2“ (Kelz & Nestler, 2000 m), nuo ciklino priklausoma kinazė 5 (McClung & Nestler, 2003 m) ir branduolinis faktorius kappa B (Ang et al., 2001). Nustatyta, kad daugelio šių genų (ir (arba) jų produktų) manipuliacija daro įtaką jautrumui piktnaudžiavimo narkotikais. Pvz., Per didelis GluR2 ekspresas, naudojant virusų sukeltą genų perdavimą žiurkėms, arba dinorfino blokavimas, kurį sukelia κ-receptorių antagonistas Nor-BNI pelėms, padidina atitinkamai kokaino ir morfino teigiamą poveikį (Kelz ir kt., 1999; Zachariou ir kt., 2006).

Keletas veiksnių gali pakelti ΔFosB smegenyse, o pakilimas gali būti specifinis regionui. Lėtinis stresas, antipsichoziniai vaistai ir piktnaudžiavimo vaistai padidina ΔFosB nugaros (caudate – putamen) ir vidurinio striatumo (Atkins ir kt., 1999; Perrotti ir kt., 2004, 2008). Ventraliniame striatumyje (ty branduolio akumuliatoriuose), tačiau kiekvienas iš šių veiksnių diferencijuotai padidina ΔFosB tam tikrų tipų ląstelėse. Pvz., Dėl lėtinio streso padidėja ΔFosB dynorfino + / medžiagos P + ir enkefalino + pogrupiuose vidutinio smaigalio dopamino neuronų vidurinėje žarnoje (Perrotti ir kt., 2004). Antipsichoziniai vaistai padidina ΔFosB enkefalino + dopamino neuronuose vidurinėje žarnoje (Atkins ir kt., 1999; Hiroi & Graybiel, 1996 m), o piktnaudžiavimo narkotikai padidina ΔFosB dynorfin + / medžiagos P + dopamino neuronuose vidurinėje striatoje (Moratalla, Elibol, Vallejo ir Graybiel, 1996 m; Nye, Hope, Kelz, Iadarola ir Nestler, 1995 m; Perrotti ir kt., 2008). Būtent pastarąjį ΔFosB išraiškos modelį nugaros striatumoje ir dynorfin + / medžiagos P + dopamino neuronuose branduolio akumuliatoriuose šiame straipsnyje vadiname „striatos“ išraiška (jei nenurodyta kitaip), nes būtent šis išraiškos modelis yra yra labiausiai susiję su natūraliais apdovanojimais, narkotikais, piktnaudžiavimu ir priklausomybėmis (Colby, Whisler, Steffen, Nestler ir Self, 2003; McClung ir kt., 2004; Olausson ir kt., 2006; Werme ir kt., 2002), ir būtent šis išraiškos modelis aptinkamas transgeninėse pelėse, naudojamose mūsų tyrimuose (Kelz ir kt., 1999).

Įdomu tai, kad ΔFosB padidėjimas dėl narkotikų vartojimo reikalauja lėtinio, o ne ūmaus poveikio (McClung ir kt., 2004; Nye ir kt., 1995; „Nye & Nestler“, 1996 m). Taigi, nors dėl ūmaus vaistų poveikio greitai padidėja daugybė „Fos“ šeimos baltymų, pavyzdžiui, c-Fos ir FosB, striatumoje.Daunais & McGinty, 1994 m; B. Hope, Kosofsky, Hymanas ir Nestleris, 1992 m; Persico, Schindler, O'Hara, Brannock ir Uhl, 1993 m; Shengas ir Greenbergas, 1990 m), ΔFosB padidėja tik labai nedaug („Nestler“, „2001a“; Nestler ir kt., 1999). Tačiau sukūręs ΔFosB yra gana stabilus ir jo in vivo pusinės eliminacijos laikas yra daugiau nei 1 savaitę, palyginti su 10 – 12 hr kitais Fos baltymais (Chen ir kt., 1997). Šis stabilumas leidžia lėtai kauptis ΔFosB nuolat veikiant vaistui. Palyginti su kitais „Fos“ baltymais, laikui bėgant atsakas buvo jautrus (Hope ir kt., 1992, 1994; Moratalla ir kt., 1996; Nye ir kt., 1995). Taigi lėtinis vaisto poveikis leidžia ΔFosB pasiekti tokį lygį, kad jis galėtų paveikti genų raišką ir tapti tinkamu elgsenai.

Daugėja literatūros, įrodančios, kad padidėjęs ofFosB padidina piktnaudžiavimo narkotikais atlygį. Pavyzdžiui, pelėms, turinčioms padidėjusį ΔFosB striatumoje, pirmenybė teikiama su vaistais susijusioms vietoms, modeliuojamoms atsižvelgiant į sąlygotos vietos pasirinkimą.Kelz ir kt., 1999). Pelėms, kurių padidėjęs ΔFosB (taip pat padidėja ir narkotikų vartojimas, ir motyvacija vartoti narkotikus),Colby ir kt., 2003). Nors buvo padaryta pažanga suprantant ΔFosB poveikį daugeliu priklausomybės nuo narkotikų aspektų, viena netirta sritis yra ΔFosB poveikis narkotikų sukeltai natūralių naudų devalvacijai. Žmonėms šis reiškinys pasireiškia sumažėjusia motyvacija dėl darbo, draugų, šeimos ir piniginės naudos (pvz., Goldstein ir kt., 2006, 2008; Jonesas, Casswellas ir Zhangas, 1995 m; Nair ir kt., 1997; Santolaria-Fernandez ir kt., 1995).

Mūsų duomenys rodo, kad ši niokojanti priklausomybės pasekmė žmonėms gali būti modeliuojama graužikams, naudojant atlygio palyginimo paradigmą (Grigson & Twining, 2002 m). Šioje paradigmoje prieiga prie kitokio skonio sacharino užuominos yra prieinama prie piktnaudžiavimo narkotikų, tokių kaip morfinas ar kokainas. Esant tokioms aplinkybėms, žiurkės ir pelės, vengdamos vartoti vaistą, vengia skonio savybių (Grigson, 1997; Grigson & Twining, 2002 m; „Risinger & Boyce“, 2002 m). Remiantis atlygio palyginimo hipoteze, bent jau iš pradžių poravus su piktnaudžiavimo narkotikais, natūralaus atlygio užuominos išvengiama (žr. Wheeler ir kt., 2008), nes virškinamojo stimulo blyškumas yra reikšmingas, palyginti su stipriai veikiančiomis vaisto savybėmis (Grigson, 1997). Ši nuomonė skiriasi nuo ilgalaikio sąlyginio noro išvengti skonio (CTA) duomenų, tai yra, nuomonė skiriasi nuo pasiūlymo, kad žiurkės vengia vartoti skonio ženklą, nes prognozuoja pavojingas vaistų savybes (Nachmanas, Lesteris ir Le Magnenas, 1970 m; Riley & Tuck, 1985 m).

Jei atlygio palyginimo hipotezė yra teisinga, bet kuri sąlyga ar aplinkybė, padidinanti suvoktą atlygio už vaistą vertę, turėtų padėti išvengti mažesnio sacharino užuominos. Taigi, vaistams jautrios Lewis žiurkės po sacharino ir kokaino porų labiau vengia sacharino užuominų nei mažiau jautrios Fischerio žiurkės (Grigson & Freet, 2000 m). Sprague – Dawley žiurkės taip pat labiau vengia skonio ženklų, suporuotų su kokainu ar sacharoze, po chroninio gydymo morfinu (Grigson, Wheeler, Wheeler ir Ballard, 2001 m). Įdomu tai, kad tiek anksčiau negydytos Lewis žiurkės, tiek Sprague – Dawley žiurkės, kurioms anksčiau buvo taikomas lėtinis morfino gydymas, padidino ΔFosB branduolio akumuliatoriuose (Haile, Hiroi, Nestler ir Kostenas, 2001 m; „Nye & Nestler“, 1996 m). Eksperimentas 1 tiesiogiai tiria ΔFosB vaidmenį narkotikų sukeltame sąlyginio stimulo (CS) suvartojimo slopinime, įvertinant kokaino sukeltą sacharino lazdelės suvartojimo slopinimą pelėse, kurios per daug išreiškia šį transkripcijos faktorių striatumoje.

Eksperimentuokite 1

Ankstesni tyrimai parodė, kad pelės slopina skonio ženklų vartojimą kartu su piktnaudžiavimo narkotikais panašiai, kaip pastebėta žiurkėms („Risinger & Boyce“, 2002 m; Schroy, 2006). Panašiai kaip su žiurkėmis atliktais tyrimais, šiuose tyrimuose buvo naudojamas ribotas vandens patekimas ir CSN (0.15%) sacharino tirpalas.Bachmanovas, Tordoffas ir Beauchampas, 2001 m; Tordoff & Bachmanov, 2003 m). Šių eksperimentų metu buvo užgniaužtas sacharininio lazdelės vartojimas, kai buvo galima sušvirkšti 10 mg / kg kokaino (DBA / 2 pelėms) arba 20 mg / kg kokaino (DBA / 2 ir C57BL / 6 pelėms). ) kokainas („Risinger & Boyce“, 2002 m; Schroy, 2006). Todėl eksperimente 1 buvo įvertintas 0.15% sacharino užuominos, suvartotos kartu su fiziologiniu tirpalu, 10 mg / kg kokaino arba 20 mg / kg kokaino, vartojimas vandenyje netekusiose NSE-tTA × TetOp-ΔFosB A linijos pelėse. Šios suaugusios transgeninės pelės (SJL × C57BL / 6 fonas) demonstruoja selektyvų ΔFosB ekspresiją striatumoje pašalinant doksicikliną iš vandens (Chen ir kt., 1998). Remdamiesi duomenimis, gautais su žiurkėmis, mes hipotezavome, kad ΔFosB padidėjimas šiose pelėse sustiprins teigiamą vaisto poveikį ir taip palengvins vaisto sukeltą sacharino lazdelės suvartojimo slopinimą, palyginti su normalia ΔFosB kontrole.

Metodas

Tematika

Tiriamieji buvo 60 patinai NSE-tTA × TetOp-ΔFosB A linijos bitransgeninės pelės. Pelės buvo gautos gyvūnėlių skyriuje Teksaso universiteto Pietvakarių medicinos centre Dalase, Teksase, ir buvo laikomos geriamajame vandenyje laikant 100 μg doksiciklino / ml. Šis metodas palaiko visišką transgeninės ΔFosB ekspresijos slopinimą ir taip leidžia normaliai vystytis (kaip aprašyta 6.1 punkte) Chen ir kt., 1998). Pelės buvo gabenamos į gyvūnų skyrių Pensilvanijos valstijos medicinos universiteto koledže Hershey mieste, Pensilvanijoje, ir buvo laikomos karantine 2 mėnesius (visos pelės buvo laikomos doksiciklinu gabenimo ir karantino metu). Išlaisvinus karantiną, pusė pelių (n = 30), buvo pašalintas doksiciklinas, ir ΔFosB perviršiui buvo leista tęstis 8 savaites prieš bandymą - laiką, reikalingą maksimaliam ΔFosB veikimui (McClung & Nestler, 2003 m). Likusios pelės (n = 30) išliko doksiciklinas visą tyrimų laiką. Pelės, kurios eksperimento pradžioje svėrė nuo 31.2 g iki 45.0 g, buvo laikomos atskirai standartiniuose, skaidriuose plastikiniuose narvuose, kontroliuojamose temperatūros (21 ° C) gyvūnų globos įstaigose, naudojant 12-hr šviesos-tamsos ciklą (lemputės įjungtos) 7: 00 am). Visos eksperimentinės manipuliacijos buvo atliktos 2 hr (9: 00 am) ir 7 hr (2: 00 pm) į lengvąją ciklo fazę. Pelėms buvo suteikta laisva prieiga prie sauso Harlan Teklad graužikų dietos (W) 8604 ir vandens, išskyrus atvejus, kai buvo nurodyta kitaip.

Aparatūra

Visos eksperimentinės manipuliacijos buvo atliktos namų narvuose. DH buvo naudojamos modifikuotos Mohro graduotos pipetės2O ir sacharino prieiga. Pipetės buvo paverčiamos į stiklinius cilindrus, pašalinant kūginius galus. Tada cilindro apačioje buvo įdėtas guminis kamštis su nerūdijančio plieno snapeliu, įkištu per centrą, ir panašus guminis kamštis (atėmus snapelį) uždarė cilindro viršutinę dalį. DH įleidimas2O ir sacharinas buvo užrašyti 1 / 10 ml.

Procedūra

Visi tiriamieji buvo sveriami vieną kartą per dieną viso tyrimo metu. Išleidus karantiną ir, kaip aprašyta, ΔFosB peraugimo pelės (n = 30) buvo pašalinta iš 100 μg / ml doksiciklino. Šioms pelėms buvo suteiktas netaisytas dH2O likusiam tyrimui ir kitai pelių pusei (n = 30), ΔFosB normalios grupės, tęsė doksicikliną. Po 8 savaičių, kai osFosB buvo ekspresuojama, buvo įvertintas pradinis vandens suvartojimas. Pradiniam matavimui visos pelės buvo įtrauktos į vandens trūkumo grafiką, kurį sudarė prieiga prie dH2O (su doksiciklinu arba be jo, priklausomai nuo gydymo grupės) 1 val., Pradedant nuo 9: 00 am, ir 2 valandoms, prasidedantiems 2: 00 pm. Pradinis suvartojimas ir kūno svoris buvo registruojami 1 savaitę. Tyrimo metu visoms pelėms buvo suteikta 1 val. Prieiga prie 0.15% sacharino ryte, po to nedelsiant atlikta intraperitoninė druskos injekcija (n = 10 / ląstelė), 10 mg / kg kokaino (n = 10 / ląstelė) arba 20 mg / kg kokaino (n = 10 / langelis). Skonio ir skonio poros įvyko kas 48 val. Per penkis tyrimus. Norėdami palaikyti hidrataciją, visiems tiriamiesiems buvo suteikta 2 val. Prieiga prie dH2O arba 100 μg / ml doksiciklino kiekvieną popietę ir 1 val. Prieiga prie dH2O arba 100 μg / ml doksiciklino kiekvieną rytą tarp kondicionavimo bandymų, kaip nurodyta grupėje. Sacharinas buvo gautas iš „Sigma“ chemijos kompanijos, Sent Luise, MO, o kokaino HCl pateikė Nacionalinis piktnaudžiavimo narkotikais institutas. Sacharino tirpalas buvo pateiktas kambario temperatūroje.

Rezultatai ir DISKUSIJA

CS suvartojimas

Suvartojimas ir kūno svoris buvo analizuojami naudojant 2 × 3 × 5 mišrią faktorinę analizę dispersijų (ANOVA) kintamajam gydymui (normalus ir palyginti su ΔFosB padidėjimu), vaistu (fiziologiniu tirpalu, 10 mg / kg kokaino arba 20 mg / kg kokaino) ir bandymai (1 – 5). Post hoc testai buvo atlikti, kur įmanoma, naudojant Neuman-Keuls testus su .05 alfa. Stebėjimas 1 pav parodo, kad per didelis osFosB ekspresija striatumoje yra susijęs su kokaino sukelto sacharininio lazdelės suvartojimo sumažėjimu, o ne padidinimu.

1 pav 

Vidutinis (± SEM) 1% sacharino suvartojimas (ml / 0.15 val.) Po penkių porų sušvirkštimo į pilvaplėvės ertmę fiziologinio tirpalo, 10 mg / kg kokaino arba 20 mg / kg kokaino NSE-tTA × TetOp-ΔFosB A linijos pelėms. normalus (kairysis skydelis) arba padidėjęs ...

Šį stebėjimą palaikė atlikusi reikšmingos gydymo × vaisto × tyrimų sąveikos post hoc analizę, F(8, 212) = 2.08, p <.04. Konkrečiai, post hoc Newman-Keuls testų rezultatai parodė, kad nors 10 mg / kg kokaino dozė buvo neveiksminga mažinant CS suvartojimą abiejose gydymo grupėse (p >, 05), 20 mg / kg dozė buvo mažiau veiksminga pelėms, kurių ΔFosB ekspresija buvo padidėjusi (žr. 1 pav, dešinysis skydelis). T. y., Nors gydymas 20 mg / kg kokaino doze žymiai sumažino sacharino lazdelės suvartojimą, palyginti su kiekvienos grupės tirpalu, gydomu fiziologiniu tirpalu 2 – 5 tyrimuose (ps <.05), pelės su padidėjusia ΔFosB ekspresija suvartojo žymiai daugiau sacharino užuominos, kuri buvo suporuota su 20 mg / kg kokaino, nei įprasta ekspresuojanti kontrolė. Šis elgesio modelis buvo reikšmingas 3–5 bandymuose ( ps <.05).

Kūno svoris

Nei per didelis ΔFosB ekspresija striatumoje, nei vaisto ekspozicija reikšmingai nepakeitė kūno svorio. Šią išvadą pagrindė nesvarbus pagrindinis gydymo poveikis, F <1 arba vaistas, F(2, 53) = 1.07, p = .35. Pagrindinis tyrimų poveikis buvo reikšmingas, F(5, 265) = 10.54, p <.0001, tai rodo, kad kūno svoris pakito per kelis bandymus. Galiausiai, nors 2 × 3 × 6 pakartotinės priemonės ANOVA atskleidė reikšmingą gydymo × vaisto × tyrimų sąveiką, F(10, 265) = 4.35, p <.01, post hoc testų rezultatai nebuvo reikšmingi.

Rytinis vandens suvartojimas

Ryte suvartojama dH2O (ml / h) dienomis tarp kondicionavimo bandymų (pradinis, bandymai W1-W4) pateikiami 2 pav (viršutinė kairė ir dešinė plokštės).

2 pav 

Vidutinis (± SEM) dH suvartojimas2O ryte (ml / 1 hr; viršutinės plokštės) ir popiet (ml / 2 hr; apatinės plokštės) NSE-tTA × TetOp-ΔFosB Line A pelėse, kurių ΔFosB yra normalus (kairiajame skydelyje) arba padidėjęs (dešinėje pusėje). striatumoje ...

2 × 3 × 5 mišrus faktorinis ANOVA parodė, kad nei ΔFosB per didelis ekspresija striatumoje, nei vaisto ekspozicija reikšmingai nepakeitė rytinio dH2O suvartojimas, kaip rodo nesvarbus gydymas × Vaistas × Tyrimų sąveika (F <1). Be to, nei pagrindinis gydymo poveikis, F <1 arba vaistas, F(2, 53) = 2.55, p = .09, nei gydymas × vaistų sąveika, F(8, 212) = 1.57, p = .14, buvo statistiškai reikšmingas.

Popietinis vandens paėmimas

DH įleidimas2O 2-hr prieigos laikotarpiui po pietų visiems bandymams pateiktas 2 pav (apatinė kairė ir dešinė plokštės). Pagrindinis gydymo poveikis nebuvo reikšmingas (F <1), o tai rodo, kad per didelis ΔFosB ekspresija neturėjo įtakos popietiniam dH2O suvartojimas apskritai. Tačiau pagrindinis narkotiko poveikis įgavo statistinę reikšmę, F(2, 53) = 7.95, p <.001, kaip ir gydymo × vaisto × bandymų sąveika, F(18, 477) = 2.12, p <.005. Post hoc šio trijų krypčių ANOVA testai atskleidė tą popietę dH2O suvartojimas 10 mg / kg kokaino grupėse reikšmingai nesiskyrė nuo fiziologinio tirpalo kontrolinių grupių (ps> .05). Tačiau popietė dH2O suvartojimas buvo žymiai padidintas 20 mg / kg grupėse, palyginti su jų fiziologinio tirpalo kontrolinėmis grupėmis. Šis poveikis buvo reikšmingas atliekant kondicionavimo tyrimus, kuriuose pelės vengė sacharino lazdelės ryte (ty, pelių 3, 4 ir 5 tyrimai). esant normaliam ΔFosB ir 4 ir 5 bandymai su pelėmis, kurių ΔFosB yra padidėjęs, ps <.05).

Eksperimentuokite 2

Eksperimento 1 rezultatai buvo priešingi tiems, kurie buvo prognozuojami remiantis anksčiau paskelbtais duomenimis. Pelėms, turinčioms padidėjusią ΔFosB ekspresiją, buvo išvengta mažesnio, o ne didesnio sacharininio lapelio po pakartotinių sacharino ir kokaino porų. Šiems duomenims yra daugybė galimų paaiškinimų. Atsižvelgiant į literatūrą, akivaizdžiausia yra tai, kad ši paradigma yra jautri vengiančioms, o ne teikiančioms pasitenkinimą vaistų savybėmis (Nachman ir kt., 1970; Riley Tuck, „1985“). Padidėjęs ΔFosB gali ne tik padidinti reagavimą į naudingas vaistų savybes, bet ir sumažinti reakciją į nepageidaujamas vaisto savybes. Tokiu atveju gali būti tikimasi, kad pelės, turinčios padidėjusį ΔFosB, parodys mažesnius LiCl sukeltus CTA nei pelės, turinčios normalią ΔFosB išraišką. Norint patikrinti šią hipotezę, tos pačios pelės buvo paleistos pagal standartinę sąlygojamo skonio vengimo paradigmą, kuriai jie gavo 1 hr prieigą prie naujojo 0.1 M NaCl tirpalo, ir iškart po to jiems buvo įšvirkšta į pilvaplėvės ertmę druskos tirpalas, 0.018 M LiCl arba 0.036 M LiCl.

Metodas

Tematika

Tiriamieji buvo 58 (29 per daug ekspresuoti ΔFosB ir 29 normalūs ΔFosB) patinai NSE-tTA × TetOp-ΔFosB Line A pelės, naudojamos eksperimente 1. Pelėms buvo paskirta pusiausvyra tolygiai paskirstant ankstesnę sacharino – fiziologinio tirpalo arba sacharino – kokaino patirtį tarp grupių. Tyrimo metu pelės eksperimentinėje grupėje apytiksliai 17 savaites striaumoje oFosB ekspresija buvo ekstensyvios, o eksperimento pradžioje visos pelės svėrė tarp 31.7 ir 50.2. Jie buvo apgyvendinti atskirai ir prižiūrimi, kaip aprašyta aukščiau.

Aparatūra

Aparatas buvo toks pat, kaip aprašytasis eksperimentas 1.

Procedūra

Visi tiriamieji buvo sveriami vieną kartą per dieną viso tyrimo metu. Pradiniam matavimui visos pelės buvo įtrauktos į aukščiau aprašytą vandens trūkumo grafiką (1 hr am ir 2 pm), su doksiciklinu arba be jo, kaip paskirta grupei. Bazinė linija ir kūno svoris buvo registruojami 1 savaitę. Tyrimo metu visoms pelėms buvo suteikta 1 val. Prieiga prie 0.1 M NaCl ryte, po to nedelsiant atlikta intraperitoninė druskos injekcija (n = 9 / ląstelė), 0.018 M LiCl (n = 10 / ląstelė) arba 0.036 M LiCl (n = 10 / langelis). Žiurkėms slopinantis 0.009 M LiCl dozės poveikis buvo panašus į 10 mg / kg kokaino dozės poveikį (Grigson, 1997). Tačiau atsižvelgiant į ankstesnę pelių patirtį atliekant eksperimentą 1 ir įrodymų, kad tokia ankstesnė patirtis gali sulėtinti vėlesnio CS nesąlygoto stimulo (JAV) susivienijimo vystymąsi ir (arba) pasireiškimą (Twining ir kt., 2005), mes panaudojome šiek tiek didesnes LiCl dozes (0.018 M ir 0.036 M). Skonio ir skonio poros įvyko kas 48 val. Per penkis tyrimus. Visiems tiriamiesiems buvo suteikta 2 val. Prieiga prie dH2O arba 100 μg / ml doksiciklino kiekvieną popietę ir 1 val. Prieiga prie dH2O arba 100 μg / ml doksiciklino kiekvieną rytą tarp kondicionavimo bandymų. NaCl buvo gautas iš Fisher Chemical, Pitsburgas, PA; LiCl buvo gautas iš „Sigma Chemical Company“, Sent Luisas, MO. NaCl tirpalas buvo pateiktas kambario temperatūroje.

Rezultatai ir DISKUSIJA

CS suvartojimas

Įsiurbimas buvo analizuojamas naudojant 2 × 3 × 5 mišrų faktorinį ANOVA kintamąjį gydymą (normalus ir oFosB per didelis ekspresija), vaistą (fiziologinis tirpalas, 0.018 M LiCl arba 0.036 M LiCl) ir bandymus (1 – 5). Post hoc testai buvo atlikti, kur įmanoma, naudojant Neumano – Keulso testus su .05 alfa. Per didelis ΔFosB ekspresijos poveikis LiCl CTA mokymuisi parodytas 3 pav.

3 pav 

Vidutinis (± SEM) 1 M NaCl (ml / 0.1 val.) Suvartojimas po penkių porų suleidžiant į pilvaplėvės ertmę fiziologinio tirpalo, 0.018 M LiCl arba 0.036 M LiCl NSE-tTA × TetOp-ΔFosB A linijos pelėms su normaliomis (kairysis skydelis). ) arba padidėjęs (dešinysis skydelis) ...

ANOVA rezultatai parodė didelę vaistų sąveiką su vaistais, F(8, 204) = 5.08, p <.001, parodydamas, kad visos pelės, nepaisant ΔFosB išraiškos, išvengė NaCl CS, kuris buvo suporuotas su ligą sukeliančiu agentu LiCl, suvartojimo, palyginti su fiziologiniu tirpalu gydomiems asmenims. Skirtingai nuo aukščiau aprašytų kokaino duomenų, trijų krypčių ANOVA nesiekė statistinio reikšmingumo (F <1). Be to, nebuvo jokio reikšmingo gydymo poveikio (ty, doksis ar vanduo; F <1), gydymas × bandomoji sąveika (F <1), arba gydymas × sąveika su vaistais (F <1). Net ir tokiu atveju, duomenų, parodytų 3 pav rodo, kad LiCl, kaip ir kokaino, slopinamasis poveikis galėjo būti mažesnis per daug ekspresuojančioms ΔFosB pelėms. Taigi, mes pakartotinai analizavome gydymo grupes, naudodami 3 × 5 mišrius faktorinius ANOVA, skirtingus vaistus ir tyrimus. Šių ANOVA rezultatai patvirtino reikšmingą vaistų su vaistais × tyrimų sąveiką normaliems, F(8, 100) = 3.48, p <.001 ir per daug išreikštas, F(8, 108) = 2.19, p <.033, ΔFosB pelės. Post-hoc testai parodė, kad normalioms pelėms 3–5 bandymuose ir 3–4 bandymuose per daug ekspresuojančioms pelėms reikšmingai sumažėjo CS suvartojimas didesne LiCl doze.ps <.05).

Nepaisant santykinai didelio mėginio dydžio, LiCl duomenys yra įvairesni nei buvo kokaino duomenys eksperimente 1. Kintamumas parodytas 3 pav greičiausiai susijęs su fiziologinio tirpalo ar kokaino istorija 1 eksperimente. Stengdamiesi patikrinti šią hipotezę, mes iš naujo analizavome LiCl CTA duomenis naudodami 2 × 2 × 3 × 5 mišraus faktoriaus ANOVA kintamos anamnezės (druskos tirpalas prieš kokainą), gydymą (normalus ir palyginti su ΔFosB ekspresija), vaistą (druskos tirpalą, 0.018). M LiCl arba 0.036 M LiCl) ir bandymai (1 – 5). Paprastumo dėka kokaino istorija atspindėjo pelių, turinčių 10 mg / kg ir 20 mg / kg dozių kokaino, patirties vidurkį. Panašiai kaip pirminės analizės rezultatai, keturių krypčių sąveika taip pat nesugebėjo įgyti statistinio reikšmingumo, F(8, 180) = 1.34, p = .22. Tuomet sacharino – druskos tirpalo arba sacharino – kokaino porų istorija tikriausiai prisideda prie duomenų kintamumo, tačiau poveikis nėra vienodas, o istorijos faktoriaus įtraukimas nėra naudingas norint atskleisti statistiškai reikšmingus LiCl- indukuota CTA tarp normalių ΔFosB pelių ir pelių, kurių xFosB yra per daug ekspresuota. Apibendrinant, LiCl slopina NaCl CS įsisavinimą ir, nors yra tendencija, kad per daug ekspresuojančios ΔFosB pelės gali šiek tiek sumažėti, skirtumas tarp gydymo grupių artėjo prie statistinės reikšmės.

Apibendrinus, 1 ir 2 eksperimentų rezultatai rodo, kad pelės, turinčios padidėjusį ΔFosB, po sacharino ir kokaino porų suvartoja žymiai daugiau sac sacrino CS ir linkusios sunaudoti daugiau NaCl CS po NaCL – LiCl porų. Polinkis vartoti daugiau su vaistu susijusių CS (ypač 1 eksperimente) gali būti padidėjęs jautrumas sacharino ir (arba) NaCl CS apdovanojimo savybėmis, nes padidėjęs ΔFosB lygis yra susijęs su padidėjęs reagavimas į kitus natūralius privalumus, pvz., maisto granules (Olausson ir kt., 2006) ir važiavimas ratu (Werme ir kt. 2002). Eksperimentu 3 tiriama, ar šios pelės, turinčios padidėjusį ΔFosB kiekį strigose, geriau reaguoja į sacharozės ir druskos koncentracijos intervalų, teikiančių dvejų butelių, bandymus su vandeniu.

Eksperimentuokite 3

Eksperimentas 3 buvo skirtas ištirti hipotezę, kad sumažėjęs CS suvartojimo slopinimas per daug išreiškiančiomis ΔFosB pelėmis eksperimente 1 atsirado dėl padidėjusio ne tik piktnaudžiavimo narkotikų, bet ir už natūralaus sacharino atlygio vertės suvokiamos naudos vertės. Norėdami įvertinti šią hipotezę, mes panaudojome vieno buteliuko ir dviejų butelių suvartojimo testus, kad ištirtume, ar ΔFosB perdėtai raiška daro naudingą (sacharozės) stimulą. Be to, atsižvelgiant į tendenciją, kad šios pelės per daug sunaudoja NaCl CS po NaCl – LiCl porų eksperimente 2, mes taip pat panaudojome vieno ir dviejų butelių įsiurbimo testus, norėdami ištirti padidėjusio ΔFosB poveikį suvartojamoms įvairių koncentracijų koncentracijoms. labiau „neutralūs“ NaCl tirpalai. Buvo tiriamos trys NaCl (0.03 M, 0.1 M ir 0.3 M) ir sacharozės (0.01 M, 0.1 M ir 1.0 M) koncentracijos. Buvo iškelta hipotezė, kad jei ΔFosB padidėjimas padidina natūralios naudos teigiamą vertę, sacharozės suvartojimas turėtų būti didesnis eksperimentinėse pelėse, palyginti su kontrolinėmis.

Metodas

Tematika

Tiriamieji buvo 28 (14 per daug ekspresuoti ΔFosB ir 14 normalūs ΔFosB) patinai NSE-tTA × TetOp-ΔFosB Line A pelės, naudojamos eksperimente 1. Tyrimo metu pelės eksperimentinėje grupėje apytiksliai 25 savaites turėjo per didelę ΔFosB ekspresiją striatumoje. Be to, pelės turėjo ankstesnės patirties dėl sacharino ir sacharozės porų nesėkmingo išankstinio kontrasto eksperimento (parametrai, palaikantys išankstinį pelių kontrastą, vis dar tiriami). Pelės eksperimento pradžioje svėrė nuo 31.5 iki 54.5 g. Jie buvo laikomi ir prižiūrimi, kaip aprašyta anksčiau.

Aparatūra

Aparatas buvo toks pat, kaip aprašytas eksperimente 1.

Procedūra

Visi tiriamieji buvo sveriami vieną kartą per dieną. Per 4 dienos pripratimo laikotarpį kiekviena pelė gavo 1 val. Prieigą prie dH2O ryte ir 2 val. Prieiga po pietų. Viso eksperimento metu pelės su padidėjusia ΔFosB (n = 14) gauta dH2O, kad kiekvieną dieną po pietų rehidratuotųsi, ir pelėms įprastu ΔFosB (n = 14) gavo 100 μg / ml doksiciklino. Kaip skoniai buvo naudojamos trys NaCl (0.03 M, 0.1 M ir 0.3 M) ir sacharozės (0.01 M, 0.1 M ir 1.0 M) koncentracijos. Kiekviena koncentracija pelėms buvo pateikta rytinio 1-hr periodo metu 3 iš eilės. Pirmosios 2 dienos buvo degustato pristatymas viename buteliuke, o 3rd diena susideda iš dviejų butelių degustato ir dH pristatymo.2O. Butelių padėtis buvo subalansuota, kairėn ir dešinėn, grupėse ir per dviejų butelių bandymo sesijas. Tirpalai buvo pateikti didėjančia tvarka, o prieš sacharozę buvo patikrintas NaCl suvartojimas. Dvi dH2Tarp NaCl ir sacharozės tyrimų buvo atlikti tik O bandymai. Suvartojimas buvo matuojamas kiekvieną dieną iki 1 / 10 ml.

Duomenų analizė

Duomenys buvo analizuojami naudojant t bandymai su .05 alfa.

Rezultatai ir DISKUSIJA

Du butelių bandymų duomenys buvo informatyviausi, todėl jie pateikiami čia (žr 4 pav). Pradinis vieno butelio vandens suvartojimas taip pat parodomas kaip atskaitos taškas.

4 pav 

NaCl (viršutinės plokštės) ir sacharozės (apatinės plokštės) koncentracijos intervalo vidurkis (± SEM) (ml / 1 val.), Palyginti su dH2O NSE-tTA × TetOp-ΔFosB A linijos pelėms, kurių ΔFosB yra normalus (kairiajame skydelyje) arba padidėjęs (dešinėje pusėje). ...

NaCl pirmenybė

Apskritai, CTA mokymosi į 0.1 M NaCl tirpalą istorija po porų su santykinai mažomis LiCl dozėmis nesutrukdė išreikšti pirmenybės norėjimo funkcijas didėjančioms NaCl koncentracijoms, kai buvo tiriama įsiurbimo bandyme. Pelėms, kurių normalus ΔFosB (viršutinis kairysis skydelis), dviejų žemiausių NaCl (0.03 M ir 0.1 M) koncentracijų suvartojimas nesiskyrė nuo dH2O dviejų butelių bandymuose (ps> .05). Didžiausia NaCl koncentracija (0.3 M) buvo žymiai mažiau pageidaujama nei dH2O (p <.0001), atitinkantis šios koncentracijos aversinį pobūdį (Bachmanovas, Beauchampas ir Tordoffas, 2002 m). Pelėms, kurių padidėjęs ΔFosB (viršutinis dešinysis skydelis), panašus vaizdas buvo akivaizdus ir su NaNC 0.3 M koncentracija (p <.01), nurodant, kad ΔFosB padidėjimas reikšmingai nepakeitė atsako į šį aversinį stimulą. Vis dėlto kitoks modelis įvyko esant mažesnei NaCl koncentracijai. Konkrečiai, žiurkėms su padidėjusia ΔFosB ekspresija buvo pirmenybė mažesnėms 0.03 M ir 0.1 M2O dviejų butelių bandymuose (ps <.03). Tada ΔFosB padidėjimas gali pakeisti mažesnės NaCl koncentracijos pasirinkimą iš neutralios į pageidaujamą.

Sacharozės pirmenybė

Analizuojama naudojant t priklausomų mėginių tyrimai parodė, kad pelėms su normalia ΔFosB mažiausios sacharozės koncentracijos (0.01 M) suvartojimas reikšmingai nesiskyrė nuo dH2O (p = .82). Priešingai, 0.1 M ir 1.0 M sacharozės koncentracijos buvo reikšmingai teikiamos, palyginti su dH2O (ps <.0001). Pelėms, kurių ΔFosB yra padidėjęs, sacharozei buvo teikiama didesnė pirmenybė nei dH2O visose tirtose koncentracijose (ps <.02). Ši išvada patvirtina išvadą, kad ΔFosB padidėjimas padidina natūralaus atlygio teikiamą pirmenybę.

Bendra diskusija

Šio straipsnio duomenys rodo, kad ΔFosB padidėjimas striatumoje yra susijęs su kokaino sukeltu susilpnintu sacharino slopinimu. Ši išvada prieštarauja mūsų pradinei prognozei, kad toks padidėjimas turėtų palengvinti slopinantį kokaino poveikį. Tiksliau, ΔFosB padidėjimas padidina narkotinių medžiagų, kuriomis piktnaudžiaujama, teikiamą naudą (Colby ir kt., 2003; Kelz et al. 1999), o gyvūnai, turintys priklausomybės fenotipą arba anksčiau gydyti lėtiniu morfinu (abu padidina ΔFosB), rodo didesnį vaistų sukeltą sacharino vartojimo slopinimą, palyginti su kontrolinėmis medžiagomis (Grigson & Freet, 2000 m; Grigson ir kt., 2001). Vis dėlto svarbu pažymėti, kad ankstesnių eksperimentų dalyviai turėjo ne tik padidėjusį ΔFosB, bet ir daugybę neuronų adaptacijų, atsirandančių dėl narkotikų vartojimo ar priklausomybės fenotipo („Nestler“, „1995“, 2001b; „Nestler & Aghajanian“, 1997 m). Šios papildomos adaptacijos neabejotinai prisidėjo prie elgesio ir pateikė galimą painiavą bandant aiškinti ΔFosB vaidmenį per se narkotikų sukeliamame CS vartojimo slopinime. Šiuose eksperimentuose ši painiava buvo kontroliuojama (ty, visi tiriamieji buvo vienodi, išskyrus ΔFosB padidėjimą), leidžiančius tiksliau aiškinti ΔFosB vaidmenį šiame reiškinyje. Kaip minėta aukščiau, dabartiniai duomenys rodo, kad kokaino sukeliamas sacharino vartojimo slopinimas vyksta esant padidėjusiam striatos ΔFosB, tačiau poveikis silpnėja, palyginti su kontrolinėmis medžiagomis. Tada ΔFosB padidėjimas striatumoje sumažina, o ne sustiprina kokaino sukeltą sacharino suvartojimą.

Yra keletas sušvelninto efekto aiškinimų, kuriuos galima gana greitai atmesti. Pirma, įmanoma, kad padidėjęs ΔFosB sumažino teigiamą kokaino vertę. Tai atrodo mažai tikėtinas paaiškinimas, atsižvelgiant į išsamią literatūrą, siejančią padidėjusį FosB su padidėjusia kokaino ir kitų narkotikų piktnaudžiavimo narkotikais naudos vertės padidėjimui (Colby ir kt., 2003; Kelz ir kt., 1999; McClung & Nestler, 2003 m; McClung ir kt., 2004; Nestler ir kt., 2001, 1999). Antra, susilpnėjimas gali atspindėti rūšių skirtumus tarp vaistų sukelto slopinimo ir ΔFosB elgesio poveikį. Vėlgi, literatūra nepalaiko šios galimybės, nes žiurkės ir pelės demonstruoja panašias vaistų sukeltos CS vartojimo slopinimo tendencijas (Grigson, 1997; Grigson & Twining, 2002 m; „Risinger & Boyce“, 2002 m) ir elgesio sensibilizavimas naudojant ΔFosB (Kelz ir kt., 1999; Olausson ir kt., 2006; Werme ir kt., 2002; Zachariou ir kt., 2006). Galiausiai, įmanoma, kad padidėjęs ΔFosB gali sukurti bendrą asociacinį deficitą, kuris sumažintų kokaino sukeltą sacharino vartojimo slopinimą. Ši galimybė taip pat neatrodo tikėtina, nes tokio pobūdžio sutrikimų nematyti mokantis ar atliekant operatyvų elgesį (Colby ir kt., 2003) ir LiCl sukeltos CTA gavimas reikšmingai nesiskyrė kaip ΔFosB ekspresijos funkcija eksperimente 2. „FFosB“ per daug ekspresuojančios pelės taip pat normaliai elgiasi „Morris“ vandens labirinte ir pasirinktoje vietoje (Kelz ir kt., 1999).

Dar vieną galimybę iškelia tradicinis CTA duomenų aiškinimas eksperimente 1. T. y., Jei kokaino sukeltas sacharininio lapelio vartojimo slopinimas buvo skatinamas dėl nepageidaujamų vaistų savybių, darytina išvada, kad padidėjęs ΔFosB bent iš dalies sumažino šių bauginančių vaisto savybių poveikį. Tiesą sakant, yra įrodymų, kad piktnaudžiavimo narkotikai turi neigiamų savybių. Įrodyta, kad kokainas sukelia paniką, pavyzdžiui, atsakymus į skrydį (Blanchardas, Kaawaloa, Hebertas ir Blanchardas, 1999 m) ir gynybinis elgesys (Blanchard & Blanchard, 1999 m) pelėse. Nepaisant to, dauguma įrodymų rodo, kad piktnaudžiavimo narkotikai slopina CS vartojimą naudodamiesi narkotikų savybėmis (Grigson & Twining, 2002 m; Grigson, „Twining“, „Freet“, „Wheeler“ ir Geddesas, 2008 m). Pvz., Skrandžio ir thalamus pažeidimai (Grigson, Lyuboslavsky ir Tanase, 2000 m; Reilly & Pritchard, 1996 m; Scalera, Grigson ir Norgren, 1997 m; Schroy ir kt., 2005), skonio talamokortikolio kilpa (Geddesas, Hanas ir Grigsonas, 2007 m) ir salų žievė (Geddesas, Hanas, Baldwinas, Norgrenas ir Grigsonas, 2008 m; Mackey, Keller ir van der Kooy, 1986 m) sutrikdo sacharinų lazdelės slopinimą sacharozės ir piktnaudžiavimo narkotikais būdu, bet ne LiCl. Panašiai, selektyvieji žiurkių kamienai demonstruoja skirtingą piktnaudžiavimo narkotikų ar sacharozės JAV slopinimą, bet ne JAV LiCl (Glowa, Shaw ir Riley, 1994 m; Grigson & Freet, 2000 m). Panaši disociacija buvo įrodyta ir manipuliuojant nepritekliaus būsena (Grigson, Lyuboslavsky, Tanase ir Wheeler, 1999 m) ir žiurkėms, turinčioms lėtinį morfino anamnezę (Grigson ir kt., 2001). Be to, eksperimentuose 3 ir 2 ΔFosB padidėjimas atitinkamai neturėjo įtakos nei besąlygiškam, nei sąlyginiam atsakui į aversyvius dirgiklius. Taigi, palyginti su normaliomis pelėmis, pelės, turinčios padidėjusį FFosB, parodė panašų pasipriešinimą stipriam 0.3 M NaCl tirpalui 3 eksperimente ir statistiškai panašų pasipriešinimą LiCl siejamai CS eksperimente 2.

Nepaisant šių įrodymų, neseniai atliktame tyrime mes gavome įrodymų, kad kokaino sukeltas sacharino lazdelės vartojimo slopinimas yra susijęs su sąlygotos bauginančios būsenos atsiradimu (Wheeler ir kt., 2008). Mes hipotezuojame, kad bauginančią būseną didžiąja dalimi įtakoja lažybų sukeltas atsitraukimas (Grigson ir kt., 2008; Wheeler ir kt., 2008). Tuomet gali būti svarstoma, kad ΔFosB padidėjimas striatumoje lemia tai, kad mažiau išvengiama su vaistu siejamų lazdelių, nes vaistas palaiko mažiau lazda sukeltą abstinenciją. Nors ir įmanoma, šią išvadą taip pat atrodo sunku sutikti, nes žiurkėms didesnis priešinimasis KS (matuojant padidėjusį aversiško skonio reaktyvumo elgesį) yra susijęs su padidėjusiu jautrumu vaistui (Wheeler ir kt., 2008). Taigi, naudodamiesi šia logika, būsime priversti daryti išvadą, kad pelės, turinčios padidėjusį ΔFosB, yra jautresnės vaisto teikiamoms savybėms, kaip buvo parodyta, tačiau jos taip pat pasižymi mažesniu norų sukeltu potraukiu ar pasitraukimu. Tai atrodo mažai tikėtina.

Labiau heuristinis paaiškinimas dėl susilpnėjusio efekto dabartiniais duomenimis yra tas, kad nors ΔFosB padidėjimas padidino šių pelių teigiamą kokaino poveikį, jis taip pat padidino suprantamą sacharino atlygintinę vertę. Jei ΔFosB padidintų sacharino ir kokaino absoliučią atlygio vertę panašiai, tai, kaip teigiama Weberio įstatyme, sacharino atlygio vertės padidėjimas būtų didesnis (palyginti su kokainu) (ty jautrumas suvokiamam pokyčiui atvirkščiai priklauso nuo absoliučio stimulų stiprumo). ; Weberis, 1846). Toks santykinio CS skonio padidėjimas sumažintų santykinį atlygių skirtumą ir sušvelnintų atlygio palyginimo efektą (Flaherty Rowan, „1986“; Flaherty, Turovsky ir Krauss, 1994 m). Šį aiškinimą papildomai pagrindžia literatūra, parodanti, kad ΔFosB padidėjimas padidina atsaką už natūralų naudą. Pvz., Važiuojant ratu (Werme ir kt., 2002) ir maisto granulių motyvacija (Olausson ir kt., 2006) padidėja padidėjus ΔFosB. Be to, 3 eksperimente gauti duomenys taip pat rodo, kad padidėjus ΔFosB, pirmenybė teikiama sacharozei (0.03 M, 0.1 M ir 0.3 M) ir mažesnėms NaCl (0.01 ir 0.1 M) koncentracijoms dviejų butelių bandymuose su vandeniu.

Šio eksperimento tikslas buvo įvertinti padidėjusio ΔFosB poveikį atlygio palyginimo paradigmoje - procedūroje, pagal kurią buvo siekiama modeliuoti narkotikų sukeltą natūralų atlygį narkomanams nuvertinant (Grigson, 1997, 2000, 2002; Grigson & Twining, 2002 m; Grigson ir kt., 2008). Priklausomybė turi sudėtingą elgesio fenotipą, ir daugelis veiksnių yra susiję su priklausomybės elgesio raiška. Tačiau remiantis dabartine literatūra, atrodo, kad ΔFosB padidėjimas, kurį sukelia lėtinis piktnaudžiavimo narkotinėmis medžiagomis poveikis, gali sujaudinti teigiamą šio narkotiko poveikį (Colby ir kt., 2003; Kelz ir kt., 1999) ir reaguojant į natūralų atlygį (Olausson ir kt., 2006; Werme ir kt. 2002). Šis straipsnis paaiškina ΔFosB poveikį šių apdovanojimų sąveikai. Atrodo, kad ΔFosB padidėjimas nėra būtinas dėl vaistų sukeltos sacharino vertės nuvertinimo. Tiesą sakant, kontrolinės pelės tinkamai slopino sacharino užuominos vartojimą. Atvirkščiai, mūsų duomenys rodo, kad ΔFosB padidėjimas striatumoje gali užkirsti kelią šiam reiškiniui, sumažindamas suprantamą atlygio vertės skirtumą tarp natūralių apdovanojimų ir narkotikų. Tokiu būdu pelės, turinčios šį fenotipą, gali būti geriau apsaugotos nuo narkotikų, kai jos pasižymi gyvybinga natūralia nauda. Dėl prieigos prie sacharino branduolys kaupia dopamino reakciją į pradinę morfino injekciją Sprague – Dawley žiurkėms (Grigson & Hajnal, 2007 m) ir trumpa kasdienė galimybė gauti malonų sacharozės tirpalą sumažina žiurkių norą dirbti kokaino įsigijimo pradžioje (Svyravimai, 2007) Taigi, nors ΔFosB padidėjimas gali sukelti žiurkėms ir pelėms elgesį su narkotikais, jei nėra alternatyvių apdovanojimų, tai gali apsaugoti tiriamąjį nuo narkotikų vartojimo, jei yra tinkamas natūralus atlygis.

Padėka

Šį tyrimą rėmė Visuomenės sveikatos tarnybos subsidijos DA09815 ir DA024519 bei PA valstybinis tabako atsiskaitymo fondas 2006 – 07.

Nuorodos

  1. Andersson M, Westin JE, Cenci MA. Į striatralinį DeltaFosB panašų imunoreaktyvumą ir prodynorphin mRNR lygį po to, kai buvo nutrauktas lėtinis dopaminomimetinis gydymas. Europos neuromokslo žurnalas. 2003; 17: 661 – 666. [PubMed]
  2. Ang E, Chen J, Zagouras P, Magna H, Holland J, Schaeffer E ir kt. Branduolio faktoriaus-kappaB indukcija branduolių akumuliatoriuose lėtiniu kokaino vartojimu. Neurochemijos žurnalas. 2001; 79: 221 – 224. [PubMed]
  3. Atkins JB, Chlan-Fourney J, Nye HE, Hiroi N, Carlezon WA, Jr, Nestler EJ. Tam tikram regionui būdinga deltaFosB indukcija pakartotinai skiriant tipinius arba netipinius antipsichozinius vaistus. Sinapsė. 1999; 33: 118 – 128. [PubMed]
  4. „Bachmanov AA“, „Beauchamp GK“, „Tordoff MG“. 2 pelių kamienai savanoriškai suvartoja NaCl, KCl, CaCl4 ir NH28Cl tirpalus. Elgesio genetika. 2002; 32: 445 – 457. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  5. „Bachmanov AA“, „Tordoff MG“, „Beauchamp GK“. „C57BL / 6ByJ“ ir „129P3 / J“ pelių saldiklis. Cheminiai pojūčiai. 2001; 26: 905 – 913. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  6. Blanchard DC, Blanchard RJ. Kokainas sustiprina gynybinį elgesį, susijusį su baime ir nerimu. Neurologijos ir biologinės elgsenos apžvalgos. 1999; 23: 981–991. [PubMed]
  7. Blanchard RJ, Kaawaloa JN, Hebert MA, Blanchard DC. Pelės gynybos bandymo baterijoje kokainas sukelia paniką primenančius skrydžio atsakymus. Farmakologijos biochemija ir elgesys. 1999; 64: 523 – 528. [PubMed]
  8. Chen J, Kelz MB, Hope BT, Nakabeppu Y, Nestler EJ. Lėtiniai su Fos susiję antigenai: stabilūs deltaFosB variantai, kuriuos sukelia lėtinis gydymas smegenyse. „Neuroscience“ žurnalas. 1997; 17: 4933 – 4941. [PubMed]
  9. Chen J, Kelz MB, Zeng G, Sakai N, Steffen C, Shockett PE ir kt. Transgeniniai gyvūnai su indukuojama tiksline genų ekspresija smegenyse. Molekulinė farmakologija. 1998; 54: 495 – 503. [PubMed]
  10. Chen J, Nye HE, Kelz MB, Hiroi N, Nakabeppu Y, Hope BT ir kt. Delta FosB ir į FosB panašių baltymų reguliavimas atliekant elektrokonvulsinius traukulius ir gydymą kokainu. Molekulinė farmakologija. 1995; 48: 880 – 889. [PubMed]
  11. „Colby CR“, „Whisler K“, „Steffen C“, „Nestler EJ“, „Self DW“. Specifinis strijaus ląstelių tipo DeltaFosB ekspresija sustiprina kokaino paskatą. „Neuroscience“ žurnalas. 2003; 23: 2488 – 2493. [PubMed]
  12. Curran T, Franza BR., Jr Fos ir Jun: AP-1 ryšys. Ląstelė. 1988; 55: 395 – 397. [PubMed]
  13. Daunais JB, McGinty JF. Ūmus ir lėtinis kokaino vartojimas skirtingai keičia striatos opioidų ir branduolių transkripcijos faktoriaus mRNR. Sinapsė. 1994; 18: 35 – 45. [PubMed]
  14. Dobrazanski P, Noguchi T, Kovary K, Rizzo CA, Lazo PS, Bravo R. Abu fosB geno FosB produktai ir jo trumpoji forma FosB / SF yra transkripcijos fibroblastų aktyvatoriai. Molekulinė ir ląstelių biologija. 1991; 11: 5470 – 5478. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  15. „Flaherty CF“, Rowan GA. Tarpusavyje vykstantys ir kartu numatomi sacharinų tirpalų kontrastai. Eksperimentinės psichologijos žurnalas: Gyvūnų elgesio procesai. 1986; 12: 381 – 393. [PubMed]
  16. Flaherty CF, Turovsky J, Krauss KL. Santykinė hedoninė vertė moduliuoja išankstinį kontrastą. Fiziologija ir elgesys. 1994; 55: 1047–1054. [PubMed]
  17. Geddes RI, Han L, Baldwin AE, Norgren R, Grigson PS. Gintariniai izoliuotosios žievės pažeidimai sutrikdo vaisto sukeltą, bet ne ličio chlorido sukeltą sąlyginio dirgiklio suvartojimo slopinimą. Elgesio neuromokslas. 2008; 122: 1038 – 1050. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  18. Geddes RI, Han L, Grigson PS. Glaistomos talamokortikolio kilpos pažeidimai blokuoja vaisto sukeltą natūralaus sacharino atlygio vertės nuvertėjimą, paliekant nepažeistą instrumentinį atsaką už vaistą. Apetitas. 2007; 49: 292 – 311.
  19. „Glowa JR“, „Shaw AE“, „Riley AL“. Kokaino sukeltos sąlygotos skonio noros: palyginimas tarp LEW / N ir F344 / N žiurkių kamienų. Psichofarmakologija (Berlynas) 1994; 114: 229 – 232. [PubMed]
  20. Goldstein RZ, Cottone LA, Jia Z, Maloney T, Volkow ND, Squires NK. Rūšiuoto piniginio atlygio poveikis pažintinių įvykių galimybėms ir jaunų sveikų suaugusiųjų elgesiui. Tarptautinis psichofiziologijos žurnalas. 2006; 62: 272 – 279. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  21. „Goldstein RZ“, „Parvaz MA“, „Maloney T“, „Alia-Klein N“, „Woicik PA“, „Telang F“ ir kt. Kompromisinis jautrumas piniginiam atlygiui dabartiniams kokaino vartotojams: ERP tyrimas. Psichofiziologija. 2008; 45: 705 – 713. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  22. Goudie AJ, Dickins DW, Thornton EW. Kokaino sukeltas sąlygotas potraukis žiurkėms. Farmakologijos biochemija ir elgesys. 1978; 8: 757 – 761. [PubMed]
  23. Grigson PS. Sąlyginis skonio norėjimas ir narkotikai, kuriais piktnaudžiaujama: Aiškinimas iš naujo. Elgesio neuromokslas. 1997; 111: 129 – 136. [PubMed]
  24. Grigson PS. Piktnaudžiavimo narkotikai ir atlygio palyginimas: trumpa apžvalga. Apetitas. 2000; 35: 89 – 91. [PubMed]
  25. Grigson PS. Kaip narkotikai šokoladui: atskiri atlygiai, moduliuoti bendrais mechanizmais? Fiziologija ir elgesys. 2002; 76: 389–395. [PubMed]
  26. Grigson PS, Freet CS. Slopinamasis sacharozės ir kokaino, bet ne ličio chlorido, poveikis yra stipresnis Lewis nei Fišerio žiurkėms. Įrodymai apie atlygio palyginimo hipotezę. Elgesio neuromokslas. 2000; 114: 353 – 363. [PubMed]
  27. Grigson PS, Hajnal A. Kartą per daug: Sąlyginiai pokyčiai akumuliatorių dopamino sudėtyje po vienos sacharino ir morfino poros. Elgesio neuromokslas. 2007; 121: 1234 – 1242. [PubMed]
  28. Grigson PS, Lyuboslavsky P, Tanase D. Dvišaliai virškinamojo talamo pažeidimai sutrikdo morfino, bet ne LiCl sukeltą įsisavinimo slopinimą žiurkėms: įrodymai dėl sąlygotos skonio norėjimo hipotezės. Smegenų tyrimai. 2000; 858: 327 – 337. [PubMed]
  29. Grigson PS, Lyuboslavsky PN, Tanase D, Wheeler RA. Vandens trūkumas apsaugo nuo morfino, bet ne dėl LiCl sukelto, sacharozės suvartojimo slopinimo. Fiziologija ir elgesys. 1999; 67: 277–286. [PubMed]
  30. Grigson PS, Twining RC. Kokaino sukeltas sacharino vartojimo slopinimas: narkotikų sukeltos natūralios naudos nuvertinimo modelis. Elgesio neuromokslas. 2002; 116: 321 – 333. [PubMed]
  31. Grigson PS, Twining RC, Freet CS, Wheeler RA, Geddes RI. Vaistų sukeltas sąlygoto stimulo vartojimo slopinimas: atlygis, baimė ir priklausomybė. In: Reilly S, Schachtman T, redaktoriai. Sąlyginis skonio norėjimas: elgesio ir nervų procesai. Niujorkas: Oxford University Press; 2008. 74 – 90 psl.
  32. „Grigson PS“, „Wheeler RA“, „Wheeler DS“, „Ballard SM“. Lėtinis morfino gydymas padidina slopinamąjį sacharozės ir kokaino, bet ne ličio chlorido, poveikį sacharino suvartojimui Sprague-Dawley žiurkėms. Elgesio neuromokslas. 2001; 115: 403 – 416. [PubMed]
  33. „Haile CN“, „Hiroi N“, „Nestler EJ“, „Kosten TA“. Skirtingi elgesio atsakai į kokainą yra susiję su mezolimbinių dopamino baltymų dinamika žiurkėms Lewis ir Fischer 344. Sinapsė. 2001; 41: 179 – 190. [PubMed]
  34. „Hiroi N“, „Graybiel AM“. Netipiniai ir tipiniai neurolepsiniai vaistai sukelia aiškias transkripcijos faktoriaus išraiškos striatumoje programas. Lyginamosios neurologijos žurnalas. 1996; 374: 70 – 83. [PubMed]
  35. Hiroi N, Marekas G. J., Brown JR, Ye H, Saudou F, Vaidya VA ir kt. Esminis fosB geno vaidmuo atliekant lėtinius elektrokonvulsinius traukulius molekuliniuose, ląsteliniuose ir elgesio veiksmuose. „Neuroscience“ žurnalas. 1998; 18: 6952 – 6962. [PubMed]
  36. „Hope B“, „Kosofsky B“, „Hyman SE“, „Nestler EJ“. Greito ankstyvojo geno ekspresijos reguliavimas ir AP-1 prisijungimas prie žiurkių branduolių, gautų lėtinio kokaino pagalba. Nacionalinės mokslų akademijos leidiniai, JAV. 1992; 89: 5764 – 5768. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  37. „Hope BT“, „Nye HE“, „Kelz MB“, „Self DW“, „Iadarola MJ“, „Nakabeppu Y“ ir kt. Ilgalaikio AP-1 komplekso, sudaryto iš pakitusių į fosą panašių baltymų, indukcija smegenyse lėtiniu kokainu ir kitomis lėtinėmis procedūromis. Neuronas. 1994; 13: 1235 – 1244. [PubMed]
  38. Jones S, Casswell S, Zhang JF. Dėl su alkoholiu susijusių pravaikštų ir sumažėjusio produktyvumo Naujosios Zelandijos ekonominės išlaidos. Priklausomybė. 1995; 90: 1455 – 1461. [PubMed]
  39. Jorissen HJ, Ulery PG, Henry L, Gourneni S, Nestler EJ, Rudenko G. Transkripcijos faktoriaus DeltaFosB dimerizacijos ir DNR surišimo savybės. Biochemija. 2007; 46: 8360 – 8372. [PubMed]
  40. Kelz MB, Chen J, Carlezon WA, Jr, Whisler K, Gilden L, Beckmann AM ir kt. Transkripcijos faktoriaus deltaFosB ekspresija smegenyse kontroliuoja jautrumą kokainui. Gamta. 1999; 401: 272 – 276. [PubMed]
  41. Kelz MB, Nestler EJ. „DeltaFosB“: molekulinis jungiklis, palaikantis ilgalaikį nervų plastiškumą. Dabartinė nuomonė neurologijoje. 2000; 13: 715 – 720. [PubMed]
  42. Mackey WB, Keller J, van der Kooy D. Visceralinės žievės pažeidimai slopina sąlygotas morfino sukeliamas skonio noras. Farmakologijos biochemija ir elgesys. 1986; 24: 71 – 78. [PubMed]
  43. „McClung CA“, „Nestler EJ“. CREB ir DeltaFosB reguliuoja genų ekspresiją ir atlygį už kokainą. Gamtos neuromokslas. 2003; 6: 1208 – 1215. [PubMed]
  44. „McClung CA“, „Ulery PG“, „Perrotti LI“, „Zachariou V“, „Berton O“, „Nestler EJ“. „DeltaFosB“: molekulinis jungiklis ilgalaikiam prisitaikymui smegenyse. Smegenų tyrimai Molekuliniai smegenų tyrimai. 2004; 132: 146 – 154. [PubMed]
  45. „Moratalla R“, „Elibol B“, „Vallejo M“, „Graybiel AM“. Tinklo lygio pokyčiai indukuojamų Fos-Jun baltymų ekspresijoje striatumoje lėtinio kokaino gydymo ir nutraukimo metu. Neuronas. 1996; 17: 147 – 156. [PubMed]
  46. Nachman M, Lester D, Le Magnen J. Alkoholinis poveikis žiurkėms: kenksmingo narkotiko poveikio elgesys. Mokslas. 1970, birželio 5; 168: 1244 – 1246. [PubMed]
  47. „Nair P“, „Black MM“, „Schuler M“, „Keane V“, „Snow L“, „Rigney BA“ ir kt. Piktnaudžiaujančių moterimis kūdikių pirminės priežiūros sutrikimo rizikos veiksniai. Prievarta prieš vaikus ir jų nepriežiūra. 1997; 21: 1039 – 1051. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  48. Nakabeppu Y, Nathans D. Natūraliai sutrumpinta FosB forma, kuri slopina Fos / Jun transkripcijos aktyvumą. Ląstelė. 1991; 64: 751 – 759. [PubMed]
  49. „Nestler“ EJ. Priklausomybės būsenų molekuliniai pagrindai. Neuromokslininkas. 1995; 1: 212 – 220.
  50. „Nestler“ EJ. Ilgalaikio priklausomybės plastikos molekuliniai pagrindai. Gamta Apžvalgos Neuroscience. 2001a; 2: 119 – 128. [PubMed]
  51. „Nestler“ EJ. Priklausomybės molekulinė neurobiologija. Amerikos žurnalas apie priklausomybes. 2001b; 10: 201 – 217. [PubMed]
  52. „Nestler EJ“, Aghajanian GK. Priklausomybės molekuliniai ir ląsteliniai pagrindai. Mokslas. 1997 spalis 3; 278: 58 – 63. [PubMed]
  53. „Nestler EJ“, „Barrot M“, „Self DW“. „DeltaFosB“: nuolatinis molekulinis jungiklis priklausomybei gydyti. Nacionalinės mokslų akademijos leidiniai, JAV. 2001; 98: 11042 – 11046. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  54. Nestler EJ, Kelz MB, Chen J. DeltaFosB: ilgalaikio nervų ir elgesio plastiškumo molekulinis tarpininkas. Smegenų tyrimai. 1999; 835: 10 – 17. [PubMed]
  55. „Nye HE“, „Hope BT“, „Kelz MB“, „Iadarola M“, „Nestler EJ“. Koksino lėtinio su FOS susijusio antigeno indukcijos reguliavimas striatumoje ir branduolio akumuliatoriuose farmakologiniai tyrimai. „Farmakologijos ir eksperimentinės terapijos žurnalas“. 1995; 275: 1671 – 1680. [PubMed]
  56. Nye HE, Nestler EJ. Lėtinių fosų sukeltų antigenų indukcija žiurkių smegenyse lėtiniu morfino vartojimu. Molekulinė farmakologija. 1996: 49: 636 – 645. [PubMed]
  57. Olausson P, Jentsch JD, Tronson N, Neve RL, Nestler EJ, Taylor JR. „DeltaFosB“ branduolio akumuliatoriuose reguliuoja maistu sustiprintą instrumentinį elgesį ir motyvaciją. „Neuroscience“ žurnalas. 2006; 26: 9196 – 9204. [PubMed]
  58. Perezas-Otano I, Mandelzys A, Morganas JI. MPTP-parkinsonizmą lydi nuolatinė į delta-FosB panašaus baltymo ekspresija dopaminerginiuose keliuose. Smegenų tyrimai: molekuliniai smegenų tyrimai. 1998; 53: 41 – 52. [PubMed]
  59. Perrotti LI, Hadeishi Y, Ulery PG, Barrot M, Monteggia L, Duman RS ir kt. DeltaFosB indukcija su atlygiu susijusiose smegenų struktūrose po lėtinio streso. „Neuroscience“ žurnalas. 2004; 24: 10594 – 10602. [PubMed]
  60. „Perrotti LI“, „Weaver RR“, „Robison B“, „Renthal W“, „Maze I“, „Yazdani S“ ir kt. Skirtingi „DeltaFosB“ indukcijos smegenims narkotikai, vartojami piktnaudžiaujant. Sinapsė. 2008; 62: 358 – 369. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  61. „Persico AM“, „Schindler CW“, „O'Hara BF“, „Brannock MT“, „Uhl GR“. Smegenų transkripcijos faktoriaus išraiška: ūmaus ir lėtinio amfetamino ir injekcijos streso padariniai. Smegenų tyrimai: molekuliniai smegenų tyrimai. 1993; 20: 91 – 100. [PubMed]
  62. Reilly S, „Pritchard TC“. Gustavory talamus pažeidimai žiurkėje: II. Neigiamą ir apetitišką skonio palaikymą. Elgesio neuromokslas. 1996; 110: 746 – 759. [PubMed]
  63. Riley AL, Tuck DL. Sąlyginis skonio norėjimas: elgesio toksiškumo indeksas. Niujorko mokslų akademijos metraščiai. 1985; 443: 272 – 292. [PubMed]
  64. „Risinger FO“, „Boyce JM“. Skonio kondicionavimas ir sąlygoto skonio vengimas įgyti piktnaudžiavimo narkotikais DBA / 2J pelėms. Psichofarmakologija (Berlynas) 2002; 160: 225 – 232. [PubMed]
  65. Santolaria-Fernandez FJ, Gomez-Sirvent JL, Gonzalez-Reimers CE, Batista-Lopez JN, Jorge-Hernandez JA, Rodriguez-Moreno F ir kt. Narkomanų mitybos vertinimas. Priklausomybė nuo narkotikų ir alkoholio. 1995; 38: 11 – 18. [PubMed]
  66. „Scalera G“, „Grigson PS“, „Norgren R. Gustatory“ funkcijos, natrio potraukis ir sąlygotas skonio troškimas išgyvena Thalamic skonio srities eksitotoksinius pažeidimus. Elgesio neuromokslas. 1997; 111: 633 – 645. [PubMed]
  67. Schroy PL. Veiksniai, lemiantys individualų reagavimo į kokainą ir natūralios naudos skirtumus, palyginti atlygio palyginimo paradigmą. Pensilvanijos valstijos universitetas; „Hershey“: „2006“.
  68. „Schroy PL“, „Wheeler RA“, „Davidson C“, „Scalera G“, „Twining RC“, „Grigson PS“. Gigantinio thalamus vaidmuo numatant ir palyginant žiurkių teikiamą naudą bėgant laikui. Amerikos žurnalas apie fiziologiją reglamentuojanti, integracinė ir lyginamoji fiziologija. 2005; 288: R966 – R980. [PubMed]
  69. Sheng M, Greenberg ME. C-fos ir kitų neatidėliotinų ankstyvųjų genų reguliavimas ir funkcija nervų sistemoje. Neuronas. 1990; 4: 477 – 485. [PubMed]
  70. „Tordoff“ MG, Bachmanovo AA. Pelės skonio pasirinkimo testai: Kodėl tik du buteliai? Cheminiai pojūčiai. 2003; 28: 315 – 324. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  71. Twining RC. Naujo graužikų modelio sukūrimas sukėlė natūralios naudos nuvertinimą ir jo atitikimą narkomanijos ypatybėms. Pensilvanijos valstijos universitetas; „Hershey“: „2007“.
  72. Twining RC, Hajnal A, Han L, Bruno K, Hess EJ, Grigson PS. Ventiliacinio raktikaulio pažeidimai sutrikdo vaistus sukeliantį apetitą skatinantį poveikį, tačiau atsarginis palyginimas nėra didelis. Tarptautinis lyginamosios psichologijos žurnalas. 2005; 18: 372 – 396.
  73. Weberis EH. „Der Tastsinn und das Gemeingefuhl“. In: Wagner R, redaktorius. „Handworterbuch der Physiologie“ [Handworterbuch fiziologija] tomas 3. Braunšveigas, Vokietija: Vieweg; 1846. 481 – 588.pp psl. 709 – 728.
  74. Werme M, Messer C, Olson L, Gilden L, Thoren P, Nestler EJ ir kt. „Delta FosB“ reguliuoja ratų važiavimą. „Neuroscience“ žurnalas. 2002; 22: 8133 – 8138. [PubMed]
  75. „Wheeler RA“, „Twining RC“, „Jones JL“, „Slater JM“, „Grigson PS“, „Carelli RM“. Elgesio ir elektrofiziologiniai neigiamos įtakos rodikliai prognozuoja kokaino vartojimą savarankiškai. Neuronas. 2008; 57: 774 – 785. [PubMed]
  76. Jena J, „Wisdom RM“, „Tratner I“, „Verma“ IM. Alternatyvi sujungta FosB forma yra neigiamas Fos baltymų transkripcijos aktyvacijos ir transformacijos reguliatorius. Nacionalinės mokslų akademijos leidiniai, JAV. 1991; 88: 5077 – 5081. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  77. Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, Cassidy MP, Kelz MB ir kt. Esminis DeltaFosB vaidmuo kaupiantis branduoliui veikiant morfinui. Gamtos neuromokslas. 2006; 9: 205 – 211. [PubMed]