Neuroniniai aktyvacijos modeliai, esantys bazolateralinėje migdolos įtakoje žiurkės akumuliacinio opioidų varomojo ir apetiško riebaus maitinimo elgesiui (2015 m.) - BINGE MECHANISMAS

Neurosci elgesys. Autoriaus rankraštis; pasiekiama PMC 2015 m. gruodžio 1 d.

Paskelbta galutine redaguota forma:

PMCID: PMC4658266

NIHMSID: NIHMS724902

Galutinę leidėjo redaguotą šio straipsnio versiją galite rasti tinklalapyje Behav Neurosci
 

Abstraktus

Šiame tyrime buvo tiriamas migdolinio kūno vaidmuo tarpininkaujant unikaliam šėrimo modeliui, kurį lemia intra-acumbens (Acb) opioidų aktyvacija žiurkėms. Laikinas bazolaterinio migdolinio kūno (BLA) inaktyvavimas, naudojant GABAA agonisto muscimolį, neleidžia vartoti daugiau opioidų suvartojus Acb viduje selektyvaus µ-opioidų agonisto D-Ala2, NMe-Phe4, Glyol5-enkefalino (DAMGO), tačiau palieka galimybę valgyti. elgesys nepakitęs, ypač pasibaigus vartojimui. Vienas iš aiškinimų yra tas, kad BLA inaktyvavimas selektyviai blokuoja nervinę veiklą, kuri yra DAMGO skatinama visiško (vartojimo), bet ne apetito (požiūrio) elgesio priežastis. Šiuose eksperimentuose naudojamasi šiuo laikinu vartojimo atsiribojimu ir elgsenos požiūriu, siekiant ištirti su jais susijusią nervų veiklą. Suleidus Acb fiziologinį tirpalą arba DAMGO, su BLA muscimol arba be jo, žiurkėms buvo suteikta galimybė 2 valandas gauti ribotą kiekį riebios dietos. Iš karto po šėrimo žiurkės buvo paaukotos ir smegenyse buvo tiriami nervinio aktyvumo modeliai svarbiuose smegenų regionuose, kurie, kaip žinoma, reguliuoja tiek apetitą, tiek visavertį šėrimą. Rezultatai rodo, kad intra-Acb DAMGO vartojimas padidino c-Fos aktyvaciją oreksino neuronuose pagumburio periforninėje srityje ir kad šį aktyvacijos padidėjimą blokuoja BLA muscimol inaktyvacija. Intra-Acb DAMGO vartojimas žymiai padidino c-Fos aktyvaciją dopaminerginiuose ventralinės tegmentinės srities neuronuose, palyginti su fiziologinio tirpalo kontrolėmis, o BLA inaktyvacija neturėjo įtakos šiam padidėjimui. Apskritai šie duomenys pateikia pagrindinę grandinę, kuri gali tarpininkauti selektyviam BLA poveikiui vairuojant visavertį, bet ne apetitą skatinantį šėrimo elgesį hedoniškai pagrįsto maitinimosi elgesio modelyje.

Raktiniai žodžiai: motyvuotas elgesys, sistemų ir grandinių analizė, laboratorinis elgesys (apetitiškas / aversinis), gyvūnų modelis, opioidų maitinimo nervinio aktyvavimo modelis

Paskirstytas tinklas, prisidedantis prie opioidų sukelto šėrimo tarp intra-acumbens (Acb), buvo plačiai ištirtas (; ; ; ), o bazolaterinio migdolinio kūno (BLA) indėlis buvo ypač įdomus. Laikinas BLA inaktyvavimas naudojant GABAA agonistas muscimol apsaugo nuo didelio riebalų kiekio padidėjimo po selektyvaus µ-opioidų agonisto D-Ala2, NMe-Phe4, Glyol5-enkefalino (DAMGO) įvedimo į Acb, tačiau BLA inaktyvacija neturi įtakos padidėjusiam šėrimui, kurį sukelia ūminis. 24 valandų maisto trūkumas (). Ši BLA įtaka konkrečiai tarpininkaujant hedoninio šėrimo modeliui buvo toliau apibūdinta siekiant parodyti, kad BLA inaktyvacija užkirto kelią padidėjusiam suvartojimui, kurį sąlygojo intra-Acb DAMGO, tačiau nepakito padidėjusio elgesio su maistu elgesys, ypač pasibaigus dietai. Nors išsamesnį šių duomenų apibūdinimą ir interpretavimą pateikė Atrodo, kad BLA inaktyvavimas trukdo tik riebaus maitinimosi vartojimo fazei, bet ne maisto vartojimo fazei, kurią lemia Acb opioidų aktyvinimas.

Istoriškai naudingas elgesys buvo suskirstytas į a apetitas fazė, apimanti elgseną, susijusią su malonių stimulų, tokių kaip maistas, paieška ir vartojimo fazė, kuri apima elgesį, pvz., maisto vartojimą (; ). Šis skirtumas buvo stebimas dešimtmečius ir išlieka populiarus šiandien, kai vystosi motyvacijos teorijos, susijusios su maistu ir kitais atlygiais (; ; ; ; ). Bandymai apibrėžti fiziologiją, kuria grindžiamos šios skirtingos motyvuoto elgesio fazės, apėmė modelius, kuriuose gydymas trukdė vienos fazės raiškai, nedarant įtakos kitai.; ; ; ). Šiame tyrime nagrinėjama pagrindinė unikalaus maitinimosi modelio fiziologija, kai baigiamasis ir apetitinis etapas buvo atskirtas.

Šiuose eksperimentuose buvo tiriami nerviniai veiklos modeliai, kuriais grindžiamas apetitinis ir visavertis maitinimosi elgesys, kurį skatina intra-Acb DAMGO. Pirma, pirminė išvada () buvo pakartotas siekiant nustatyti antrojo eksperimento prielaidą, įskaitant poreikį nustatyti tinkamą ribotos dietos kiekį, kurį reikia pateikti antrajame tyrime. Antrojo eksperimento metu, po kiekvienos iš keturių skirtingų gydymo vaistais sąlygų, visiems tiriamiesiems buvo suteikta prieiga prie riboto kiekio riebios dietos, suteikiant kiekvienai gydymo grupei, išskyrus tik DAMGO gydytą grupę, pasiekti sotumo jausmą (ty kiekiai stebimi pagal skelbimą). lib sąlygos iš 1 eksperimento). Iškart po 2 valandų maitinimo sesijos žiurkės buvo paaukotos, kad užfiksuotų nervinės veiklos modelius, susijusius su rodomais elgesio modeliais. Ankstesni duomenys parodė, kad visas suvartojimas ir priartėjimo prie maisto piltuvėlio elgsena įvyksta per pirmąsias 30 bandymo seanso minučių po visų procedūrų, tačiau intra-Acb DAMGO, su BLA inaktyvacija arba be jos, per paskutines 90 min. iš 2 valandų bandymo sesijos (). Todėl nervų veikla, susijusi su motyvacija požiūris ir vartoti turėtų būti atstovaujama žiurkėms, gydomoms intra-Acb DAMGO be BLA inaktyvacijos. Priešingai, žiurkių, gydomų intra-Acb DAMGO su BLA inaktyvacija, nervinio aktyvumo modeliai turėtų atspindėti vienodą motyvaciją požiūris, bet atspindi sumažėjusią motyvaciją vartoti.

Neuroninis aktyvumas buvo ištirtas smegenų regionuose, kurie, kaip žinoma, tarpininkauja apetitiniam ir užbaigtam elgesiui, įskaitant ventralinę tegmentinę sritį (VTA), nugaros medialinį pagumburį (DMH), pagumburio periforninę sritį (PeF) ir šoninį pagumburio (LH); ; ). Intra-Acb DAMGO vartojimas padidina c-Fos ekspresiją periforniniuose pagumburio neuronuose, todėl ši išraiška reikalauja oreksino signalizacijos VTA (). Visi šie ir kiti duomenys rodo, kad šis skanumo sukelto maitinimosi per Acb µ-opioidų receptorių aktyvinimo modelis gali įdarbinti PeF oreksino neuronus ir sustiprinti oreksino signalizaciją VTA viduje, o tai savo ruožtu gali moduliuoti DA ištekėjimą į Acb ir mPFC, skatindamas maitinimosi elgesį. (). Bus ištirtas BLA aktyvinimo poveikis, būtinas norint stebėti Acb DAMGO didelio riebalų vartojimo padidėjimą, bet ne elgseną su dideliu riebalų kiekiu.

Metodai

Žiurkės

Trisdešimt šeši suaugę Sprague-Dawley žiurkių patinai (Harlan Sprague-Dawley, Inc., Indianapolis, IN), sveriantys 300–400 g, buvo laikomi poromis plexiglas narveliuose kontroliuojamoje kolonijos patalpoje 22 °C temperatūroje. Žiurkės buvo laikomos 12 valandų šviesos ir tamsos ciklu, o visi eksperimentai buvo atlikti šviesioje fazėje (0700–1900) nuo 1200 iki 1500 val. Jei nenurodyta kitaip, žiurkės turėjo laisvą prieigą prie laboratorinio maisto ir geriamojo vandens. prieš eksperimentą ir jo metu. Grupėse buvo 6–8 žiurkės. Visos eksperimentinės procedūros buvo atliktos pagal Misūrio universiteto institucinio gyvūnų priežiūros ir naudojimo komiteto patvirtintus protokolus.

Chirurgija

Žiurkės buvo anestezuojamos ketamino ir ksilazino mišiniu (atitinkamai 90 mg/kg ir 9 mg/kg; Sigma, Sent Luisas, MO), o 2 kreipiamųjų nerūdijančio plieno kaniulių rinkiniai (23 dydžio, 10 mm) buvo nukreipti sterotaksiniu būdu. abipus Acb šerdies ir šoninio apvalkalo bei BLA ribos ir pritvirtintas prie kaukolės nerūdijančio plieno varžtais ir lengvai kietinama derva (Dental Supply of New England, Boston). Po operacijos į kreipiamąsias kaniules buvo dedami vieliniai stiletai, kad būtų išvengta okliuzijos. Numatytų vietų koordinatės yra šios: Acb: AP, +1.4; ML, ±2.0; DV,-7.8; BLA: AP,-2.8; ML, ±4.7; DV, -8.6 (DV koordinatė reiškia 12.5 mm injektoriaus adatos įdėjimą, kuri tęsiasi 2.5 mm kaniulės pilvo kryptimi).

Aparatūra

Maitinimo elgsenos vertinimas buvo atliktas kambaryje, atskirtame nuo kolonijos patalpos aštuoniose plexiglas (30.5 cm × 24.1 cm × 21.0 cm) maitinimo kamerose (Med Associates, St. Albans, VT). Žiurkės turėjo prieigą prie vandens ad libitum ir maždaug 35 g skanaus maisto, išskyrus tuos atvejus, kai tai buvo nurodyta. Maitinimo kamerose buvo įrengti keturi infraraudonųjų spindulių judėjimo spinduliai, esantys 6 cm atstumu vienas nuo kito per kameros ilgį ir 4.3, XNUMX cm virš grindų. Maisto bunkerio automatizuotos svarstyklės stebėjo maisto suvartojimą. Papildomas infraraudonųjų spindulių spindulys, apimantis maisto bunkerio įėjimą, nustatė kiekvieno galvos įėjimo į bunkerį skaičių ir trukmę. Maisto bunkeris ir vandens butelis buvo toje pačioje kameros sienos pusėje (priešinguose kampuose), o nuimamas atliekų dėklas buvo po baro grindimis. Matavimai apėmė lokomotorinį aktyvumą (horizontaliųjų spindulių pertraukų skaičių), bunkerio įėjimo trukmę (vidutinė pluošto pertraukimo prie bunkerio įėjimo trukmė), bunkerio įėjimus (spindulio pertrūkių skaičių prie įėjimo į bunkerį) ir sunaudotą kiekį ( suvartotos dietos gramai). Testavimo laikotarpius sudarė elgesio stebėjimas maitinimo kamerose kompiuteriu, kuriame veikia Med-PC programinė įranga (Med Associates IV versija, St. Albans, VT).

Procedūra

Vaistų mikroinjekcija

D-Ala2, NMe-Phe4, Glyol5-enkefalinas (DAMGO; Research Biochemicals, Natick, MA) ir muscimolis (Sigma, St. Louis, MO) buvo ištirpinti steriliame 0.9, 0.9% fiziologiniame tirpale. Transporto priemonės kontrolė visada buvo sterilus 10 % fiziologinis tirpalas. Infuzijos buvo tiekiamos naudojant mikropavaros siurblį (Harvard Apparatus, South Natick, MA), sujungtą polietileno vamzdeliais (PE-12.5), o žiurkės buvo švelniai laikomos rankoje. Buvo naudojami trisdešimt trijų dydžių 2.5 mm purkštukai, kurie tęsiasi 0.32 mm už kreipiamųjų kaniulių galo. Injekcijos greitis buvo 0.16 µl/min Acb ir 93 µl/min BLA, o bendra infuzijos trukmė buvo 0.5 s, atitinkamai 0.25 µl ir XNUMX µl. Dar viena minutė buvo skirta difuzijai.

dizainas

Eksperimentuokite 1

Taikant individualų dizainą, visos žiurkių grupės gavo kiekvieną iš keturių vaistų derinių keturias atskiras gydymo dienas priešinga tvarka. Visi abiejų eksperimentų elgesio tyrimai buvo pradėti praėjus 1 savaitei po operacijos Med-Associates maisto suvartojimo stebėjimo kamerose. Šiose kamerose žiurkėms buvo suteikta prieiga prie dietos 2 valandas per dieną 6 dienas iš eilės. 5 dth dieną buvo įdėtas 10 mm purkštukas ir paliktas 2 min., neįpurškiant tūrio. 6 dth dieną buvo įdėtas 12.5 mm injektorius ir 93 s švirkščiamas fiziologinis tirpalas. Kiekvieną bandymo dieną į BLA buvo infuzuojama muscimolis (20 ng/0.25 µl vienoje pusėje abipusiai) arba fiziologinis tirpalas, o po to iš karto DAMGO (0.25 mg/0.5 µl vienoje pusėje abipusiai) arba fiziologinis tirpalas į Acb, todėl buvo keturi galimi gydymo būdai. deriniai. 2 valandų trukmės bandymo sesija prasidėjo iškart po paskutinės injekcijos, o žiurkėms ad libitum buvo suteikta prieiga prie riebios dietos. Tarp gydymo dienų buvo mažiausiai 1 diena.

Eksperimentuokite 2

Keturios žiurkių grupės, naudojant tarp tiriamųjų dizainą, kurių kiekviena turi dvišales kaniules, nukreiptas į Acb ir BLA. Žiurkėms buvo suteikta prieiga prie dietos šiose kamerose 2 valandas per dieną 6 dienas iš eilės, o injekcijos procedūros buvo identiškos 1 eksperimentui, tačiau kiekviena žiurkė gautų tik 1 iš 4 galimų vaistų derinių. Daug riebalų turinčios dietos vartojimas 6-ą pradinio gydymo dieną buvo naudojamas siekiant subalansuoti gydymo paskyrimą vaistais, kad būtų užtikrintas panašus pradinis kontrolės suvartojimo modelis. 8 dienąth dieną gyvūnams buvo suteiktas 1 iš 4 galimų vaistų gydymas ir 8 g skanaus maisto 2 valandas.

Histologinis kaniulės įdėjimo patikrinimas

Iš karto po 2 valandų šėrimo gyvūnai buvo išimti iš šėrimo kamerų, giliai anestezuoti ketaminu ir ksilazinu (90 mg/kg ir 9 mg/kg) ir perfuzuoti per širdį. Smegenys buvo pašalintos ir panardintos į formaliną (10%) per naktį 4 ° C temperatūroje, o po to apsaugotos nuo krio, perkeliant į sacharozės tirpalą (20%) 4 ° C temperatūroje. Užšaldyti serijiniai pjūviai (50 µm) buvo surinkti per visą injekcijos vietą, pritvirtinti ant želatinizuotų stiklelių ir nudažyti krezilo violetine spalva. Tada buvo ištirtas kaniulės įdėjimo profilių tikslumas, o žiurkių, kurių kaniulė buvo ne vietoje, duomenys į analizę nebuvo įtraukti.

Imunohistochemistry

Smegenys buvo supjaustytos 40 µm storio griežinėliais ir laikomos 0.1, 7.4 M fosfato buferiniame tirpale (PB, pH 4, 3) 10 ° C temperatūroje. Laisvai plaukiojantis imunofluorescencinis dažymo protokolas buvo toks: Pjūviai buvo plaunami (10 × 0.3 min.) PBS. Nespecifinės surišimo vietos buvo blokuojamos naudojant blokuojantį tirpalą [100% normalaus ožkos serumo (Jackson Immuno Research, West Grove, PA) ir 2% Triton X-1 (Sigma) mišinį PBS] 5000 valandas. Tada sekcijos buvo inkubuojamos kokteilių mišinyje, kuriame yra triušio anti-c-Fos antikūnų (4: 30; Calbiochem) ir vištienos anti-tirozino hidroksilazės (VTA) arba pelės anti-oreksino-A (pagumburio). Pjūviai buvo plaunami (0.05 × 20 min.) PBS, kuriame yra 2, 555% Tween-488 (PBST). Tada sekcijos buvo inkubuojamos 1 valandas blokuojančiame buferyje su antrinių antikūnų kokteiliu: Alexa Fluor 500 ožkos anti-triušio IgG ir Alexa Fluor 4 ožkos anti-vištienos IgG (Invitrogen). Visi antriniai antikūnai buvo naudojami rekomenduojamoje koncentracijoje 30:2. Pjūviai buvo plaunami (10 × 4 min.) PBST ir PB (4 × XNUMX min.). Sekcijos buvo sumontuotos ant itin šalto stiklelių (VWR International, JAV) ir leista išdžiūti kambario temperatūroje, apsaugotoje nuo šviesos. Naudojant ProLong Anti-fade montavimo rinkinį (Invitrogen), griežinėliai buvo uždengti ir laikomi XNUMX °C temperatūroje. Visos inkubacijos buvo atliekamos kambario temperatūroje, išskyrus pirminių antikūnų, kurie buvo inkubuoti XNUMX ° C temperatūroje. Siekiant kontroliuoti imunohistocheminės reakcijos pokyčius, skirtingų gydymo grupių audiniai buvo reagavo kartu. Be to, kontroliniuose eksperimentuose, kuriuose nebuvo pirminių antikūnų, dažymo nebuvo.

Elgsenos statistinė analizė

1 eksperimento metu visos šėrimo priemonės viso 2 valandų seanso metu ir įvairiomis gydymo sąlygomis buvo analizuojamos naudojant dviejų faktorių ANOVA (Acb Treatment X Amygdala Treatment), kiekvieno faktoriaus lygiai buvo arba nešiklis, arba vaistas. . 2 eksperimento metu visos šėrimo priemonės buvo analizuojamos naudojant dviejų veiksnių ANOVA (Acb Treatment X Amygdala Treatment), kiekvieno faktoriaus lygiai buvo arba nešiklis, arba vaistas.

Skaičiavimo procedūros, vaizdavimas ir statistinė analizė

Kiekybiniam imunoreaktyvumo ekspresijos įvertinimui pagumburyje (įskaitant šoninį pagumburį, periforninę sritį, dorsomedialinį pagumburį) ir VTA, buvo išanalizuoti trys anatomiškai lygiagrečios audinio gabalai iš kiekvieno pusrutulio (iš viso 6 viename regione) ir apskaičiuotas vidurkis. Visi vaizdai buvo sukurti naudojant 4 × arba 10 × objektyvą su konfokaliniu mikroskopu, naudojant vaizdo gavimo programinę įrangą Slidebook 4.3 (Intelligent Imaging Innovations, Denver, CO). Priklausomai nuo konkretaus regiono, fluorescencinis imunoreaktyvumas 40 µm pjūvyje buvo vaizduojamas tik c-Fos, c-Fos / TH arba c-Fos / OrexinA pažymėtuose kanaluose, atskirtuose išskirtiniu slenksčiu. Tada vaizdai buvo rodomi visame ekrane, naudojant „Java“ pagrįstą viešąją nemokamą programinę įrangą „ImageJ“ (Nacionaliniai sveikatos institutai, Bethesda, MD, JAV), kaip vaizdo apdorojimo ir analizės programą, leidžiančią pažymėti kiekvieną atskirą neuroną ir teigiamai nudažyti kiekvieną kanalą. skaičiuojami aklai gydytis. Neuronai buvo klasifikuojami kaip tik c-Fos, tik peptidai arba dvigubai pažymėti, atsižvelgiant į pirmiau minėto fono antikūnų reakcijos produkto buvimą ląstelės branduolyje.

Visos sritys buvo pažymėtos ir sudarytos naudojant Žiurkės smegenų atlasą (Paxinos & Watson, 1998). Ventralinė tegmentinė sritis ir tirozino hidroksilazė; pasirinktos sekcijos buvo nuo –5.2 iki –5.5 mm priešais bregmą. Kiekviename lygyje abiejuose pusrutuliuose buvo skaičiuojama sritis, kurioje yra tirozino hidroksilazės (TH-IR) ląstelės ir c-Fos-IR. Pagumburis ir Orexin-A; pasirinktos sekcijos buvo nuo –2.8 iki –3.3 mm priešais bregmą. Pagumburio sritis (nuo –2.8 iki –3.3 mm), kurioje buvo oreksino-A teigiamų ląstelių, buvo padalinta į tris sritis nuo medialinės iki šoninės. Visos ląstelės viduje, ventralinės ir nugaros prie fornix buvo įtrauktos į vidurinį regioną, pažymėtą kaip perifornical (PeF). Oreksinu A pažymėtos ląstelės, esančios šone nuo šio regiono, buvo įtrauktos į šoninį pagumburį (LH), o medialinės iš fornikso buvo medialinėje grupėje (DMH), kuri sutapo su dorsomedialiniu pagumburiu. Neuronai buvo skaičiuojami abiejuose pusrutuliuose.

rezultatai

Visi gydymo efektai nurodomi atsižvelgiant į vaisto arba nešiklio vartojimo vietą (ty intra-Acb DAMGO). Kadangi visoms žiurkėms taip pat buvo suteikta prieiga prie riebios dietos ir jos buvo suvartotos ribotas kiekis, visi susiję šėrimo elgsenos pokyčiai (1 ir 2 pavyzdys) ir nervų aktyvacijos modeliai (2 pavyzdys) būtinai yra kiekvieno atitinkamo vaisto bendras poveikis. gydymas ir vartojama dieta.

Maitinimo elgesys

Eksperimentuokite 1

BLA inaktyvavimo įtaka didelio riebumo šėrimo elgesiui, kurį lemia intra-Acb DAMGO vartojimas.

Vartojimas

Kaip parodyta 1aANOVA, atlikta su maisto suvartojimo duomenimis, atskleidė reikšmingą pagrindinį gydymo Acb poveikį (F(1, 7) = 13.9, p < ,01), gydymas BLA (F(1, 7) = 8.6, p < ,05), ir Acb × BLA gydymo sąveika (F(1, 7) = 8.9, p < .05). Post-hoc analizė parodė, kad gydymas Acb DAMGO + vidinis BLA fiziologiniu tirpalu lėmė žymiai didesnį suvartojimo lygį (p < 05), palyginti su abiem kontroliniu gydymu (vidinis Acb fiziologinis tirpalas + intra-BLA fiziologinis tirpalas; intra-Acb fiziologinis tirpalas + intra-BLA muscimolis), ir gydymas intra-BLA muscimoliu blokavo šį padidėjimą (p <.05).

1 pav 

Elgesio tyrimas: A) Suvartotos riebios dietos kiekis (prieiga ad libitum), B) bendra maisto bunkerio patekimo trukmė, C) bendras maisto bunkerio įėjimų skaičius ir lokomotorinio aktyvumo skaičiai (ty horizontalus pluošto lūžis). Buvo atlikti 4 gydymo būdai ...
Maisto bunkerio patekimo trukmė

Kaip parodyta 1bANOVA, atlikta su maisto bunkerio įvedimo trukmės duomenimis, atskleidė reikšmingą pagrindinį gydymo Acb poveikį (F(1, 7) = 36.3, p < ,001), gydymas BLA (F(1, 7) = 12.1, p < ,05), ir Acb × BLA gydymo sąveika (F(1, 7) = 16.5, p < .005). Post-hoc analizė atskleidė, kad gydymas Acb DAMGO + intra-BLA muscimol lėmė žymiai ilgesnę bendrą maisto bunkerio patekimo trukmę, palyginti su visais kitais gydymo būdais (p < 001), be jokio kito gydymo, kuris reikšmingai skiriasi vienas nuo kito.

Maisto bunkerio įrašai

Kaip parodyta 1cANOVA, atlikta su maisto bunkerio įvedimo duomenimis, atskleidė reikšmingą pagrindinį gydymo Acb poveikį (F(1, 7) = 10.6, p < 05), o gydymas BLA priartėjo prie reikšmingumo (F(1, 7) = 3.89, p = 08), ir Acb × BLA gydymo sąveika (F(1, 7) = 7.9, p < .05). Post-hoc analizė atskleidė, kad gydymas intraAcb DAMGO + intra-BLA muscimol lėmė žymiai daugiau maisto produktų patekimo į piltuvą, palyginti su visais kitais gydymo būdais (p < 05), be jokio kito gydymo, kuris reikšmingai skiriasi vienas nuo kito.

Lokomotorinis aktyvumas

Kaip parodyta 1cANOVA, atlikta su maisto bunkerio įvedimo duomenimis, atskleidė reikšmingą pagrindinį gydymo Acb poveikį (F(1, 7) = 23.5, p < 005), bet nėra pagrindinio gydymo BLA poveikio (F(1, 7) = 1.4, p > 05), ir nėra Acb × BLA gydymo sąveikos (F(1, 7) = 056, p > .05).

Eksperimentuokite 2

BLA inaktyvacijos įtaka didelio riebumo maitinimosi elgesiui ir nervų aktyvacijos modeliams, kuriuos lemia intra-Acb DAMGO vartojimas.

Gydymo vaistais paskirtį atsvėrė didelis riebalų suvartojimas iš 6th pradinio lygio diena. Šie suvartojimo kiekiai buvo tokie: SAL-SAL, 5.1 g; SAL-DAM, 4.9g; MUSCAS-SAL, 4.9g; MUSC-DAM, 4.8g.

Vartojimas

Kaip parodyta 2aANOVA, atlikta su maisto vartojimo duomenimis, atskleidė reikšmingą pagrindinį gydymo Acb poveikį (F(3, 24) = 26.60, p < 001), bet gydymo BLA poveikio nėra (F(3, 24)= 0.02, ns) arba Acb × BLA gydymo sąveika (F(3, 24) = 0.61, ns).

2 pav 

Elgesio tyrimas: a) Suvartotos riebios dietos kiekis (punktyrinė linija rodo ribotą 8 g prieigą); b) maisto bunkerio įėjimų skaičius, c) bendra maisto bunkerio patekimo trukmė ir d) lokomotorinio aktyvumo skaičiavimai (ty horizontalaus pluošto pertrūkiai). 4 procedūros ...
Maisto bunkerio įrašai

Kaip parodyta 2bANOVA, atlikta bendram bunkerio įėjimų skaičiui per visą maitinimo seansą, atskleidė reikšmingą pagrindinį gydymo Acb poveikį (F(3, 24) = 8.55, p < .01), bet gydymo BLA gydymo efekto nėra (F(3, 24)= 1.68, ns) arba Acb × BLA gydymo sąveika (F(3, 24) = 0.39, ns).

Maisto bunkerio patekimo trukmė

Kaip parodyta 2cANOVA, atlikta pagal bendrą visų bunkerio įėjimų trukmę per visą maitinimo seansą, atskleidė reikšmingą pagrindinį gydymo Acb poveikį (F(3, 24) = 12.45, p = 001), bet gydymo BLA poveikio nėra (F(3, 24) = 62, ns) arba Acb × BLA gydymo sąveika (F(3, 24) = 0.07, ns).

Lokomotorinis aktyvumas

Kaip parodyta 2dANOVA, atlikta bendram judėjimo aktyvumui šėrimo metu, atskleidė reikšmingą pagrindinį gydymo Acb poveikį (F(3, 24) = 12.93, p = 001), bet gydymo BLA poveikio nėra (F(3, 24) = 198, ns) arba Acb × BLA gydymo sąveika (F(3, 24) = 0.61, ns).

Imunohistochemistry

Ventral Tegmental Area

Kaip parodyta 3aANOVA, atlikta su c-Fos IR ląstelėmis VTA, atskleidė reikšmingą gydymo Acb poveikį (F(3, 24) =,25.67 p < 001), bet jokio gydymo BLA poveikio (F(3, 24) = 1.13, ns) arba sąveika tarp gydymo būdų (F(3, 24) = 2.80, ns). ANOVA, atlikta su procentais TH-IR ląstelių, kurios rodo c-Fos IR, atskleidė gydymo Acb poveikį (F(3, 24) = 6.33, p < 05), bet jokio gydymo BLA poveikio TH- procentinei daliai. IR ląstelės, kuriose rodomas c-Fos IR (F(3, 24) = 07, ns), nėra reikšmingos sąveikos tarp gydymo (F(3, 24) = 63, ns).

3 pav 

a) VTA ląstelių, ekspresuojančių c-Fos IR, skaičius; b) VTA TH-IR ląstelių, ekspresuojančių c-Fos IR, procentas. c) Ląstelių, ekspresuojančių c-Fos-IR, skaičius pagumburio periforninėje srityje (PeF) d) PeF Orexin-A IR ląstelių, ekspresuojančių c-Fos-IR, procentas. 4 procedūros ...

Periforninis pagumburis

Kaip parodyta 3bANOVA, atlikta su c-Fos IR PeF (išanalizuotas regionas, pavaizduotas 5b pav.), atskleidė reikšmingą gydymo Acb poveikį (F(3, 24) = 30.78, p < ,001), gydymas BLA (F(3, 24) = 30.52, p < 001) ir Acb × BLA gydymo sąveika (F(3, 24) = 8.75, p < .01). ANOVA, atlikta OrxA-IR ląstelių, kurios rodo c-Fos IR procentą, atskleidė reikšmingą gydymo Acb poveikį (F(3, 24) = 55.85, p < ,001), gydymas BLA (F(3, 24) = 23.52, p < 001), o Acb × BLA gydymo sąveika (F(3, 24) = 14.32, p < .001). 5a ir 5b paveiksluose post hoc analizė rodo, kad BLA inaktyvacija žymiai sumažina intra-Acb DAMGO sukeltą c-Fos ekspresiją ir sumažina oreksino ląstelių, ekspresuojančių c-Fos, skaičių.p <.05).

Dorsomedialinis pagumburis

Kaip parodyta Lentelė 1ANOVA, atlikta c-Fos IR ląstelių skaičiui DMH, atskleidė reikšmingą gydymo intra-Acb poveikį (F(3, 24) = 20.19, p < 001), bet jokio gydymo intra-BLA poveikio. F(3, 24) = 1.63, ns) arba Acb × BLA gydymo sąveika (F(3, 24) = 0.05, ns). ANOVA, atlikta OrxA-IR ląstelių, kurios rodo c-Fos IR procentą, atskleidė reikšmingą gydymo Acb (F(3, 24) = 13.39, p < 001), gydymo BLA (F(3, 24) =) poveikį. 5.85, p < 05), bet nėra Acb × BLA gydymo sąveikos (F(3, 24) = 89, p = 36).

Lentelė 1 

Ląstelių, ekspresuojančių c-Fos-IR, skaičius (iš viso) šoninėje pagumburio ir dorsomedialinėje pagumburio dalyje ir PeF Orexin-A IR ląstelių, ekspresuojančių c-Fos-IR, procentas (% oreksino-A). Buvo atlikti 4 gydymo būdai, įskaitant intra-Acb DAMGO arba fiziologinį tirpalą (SAL). ...

Šoninis hipotalamas

Kaip parodyta Lentelė 1ANOVA, atlikta c-Fos IR ląstelių skaičiui LH, neatskleidė jokio Acb ((F(3,24) = 11, ns) ar gydymo BLA poveikio ((F(3, 24 = 6.82, p <). 05) ir jokios sąveikos (F(3,24) = 26, ns). ANOVA, atlikta OrxA-IR ląstelių, kurios rodo c-Fos IR procentą, neatskleidė reikšmingo gydymo Acb poveikio (F(3, 24) ) = 64, ns), gydymas BLA (F(3, 24) = 08, ns) arba gydymo sąveika (F(3, 24) = 77, ns.)

Diskusija

Esant ad libitum didelio riebalų kiekio prieigos sąlygoms, BLA inaktyvavimas sumažino padidėjusį didelio riebalų suvartojimo kiekį, kurį sukelia intra-Acb DAMGO, o perdėtas požiūris į maisto piltuvą liko nepakitęs, patvirtindamas ankstesnę ataskaitą (). Antrasis eksperimentas ištyrė tuos pačius reiškinius, tačiau esant ribotoms riebios dietos prieigos sąlygoms, leidžiančioms visoms gydymo grupėms, išskyrus tik intra-Acb DAMGO gydytą grupę, pasiekti sotumo jausmą (ty suvartoti kiekius, pastebėtus ad lib sąlygomis 1 tyrime). Intra Acb fiziologiniu tirpalu gydyti gyvūnai, su BLA inaktyvacija arba be jo, vartojo panašų riebios dietos kiekį ir elgėsi panašiai, kaip buvo prognozuota. Dvi ypač svarbios gydymo grupės, vartojusios intra-Acb DAMGO su BLA inaktyvacija arba be jos, per pirmąsias 30 val. bandymo sesijos 2 minučių vartojo beveik visą riebią dietą ir rodė identiškus apetito elgesio modelius (ty skaičių). maisto bunkerio įvedimų, maisto bunkerio patekimo trukmę) per paskutines 90 min., kaip prognozuota. Gydymas Acb DAMGO padidino tiek maisto bunkerio metodų skaičių, tiek trukmę, nepaisant BLA inaktyvacijos, palyginti su abiem Acb fiziologiniu tirpalu gydytomis grupėmis, kaip buvo pranešta anksčiau (). Svarbu, kaip pastebėta 1 eksperimente ir anksčiau (, ), naudojant intra-Acb DAMGO be BLA inaktyvavimo, suvartojimo lygis yra bent dvigubai didesnis nei numatytas ribotos prieigos sąlygomis. Todėl žiurkių, kurios buvo gydomos intra-Acb DAMGO be BLA inaktyvacijos, nervinio aktyvumo modeliai turėtų atspindėti ir motyvaciją požiūris ir vartoti papildomo maisto, nei buvo galima. Priešingai, nervinio aktyvumo modeliai žiurkėms, gydomoms intra-Acb DAMGO, kai BLA inaktyvuota, turėtų atspindėti padidėjusį motyvaciją požiūris maistas, bet sumažėjusi motyvacija vartoti papildomo maisto, palyginti su žiurkėmis, gydytomis intra-Acb DAMGO be BLA inaktyvacijos. Tai labai svarbu ne tik projektavimo pagrindimui, bet ir dabartinių duomenų interpretavimui. Galimas dietos lygis buvo pasirinktas ne tik tam, kad suvartojimo lygis būtų ribotas visose grupėse, bet ir siekiant užtikrinti, kad kiekvienoje gydymo grupėje, išskyrus tik DAMGO grupę, žiurkės pasiektų arba beveik pasisotintų (kaip nustatyta 1 ir ankstesniame eksperimente). išvados, žr ).

Intra-Acb DAMGO vartojimas reikšmingai padidino VTA c-Fos IR dopaminerginiuose neuronuose, palyginti su kontroliniu gydymu fiziologiniu tirpalu, o intra-BLA muscimol vartojimas neturėjo įtakos šiam padidėjimui. Ankstesni tyrimai rodo, kad c-Fos IR padidėjimas VTA ir ypač VTA dopamino (DA) neuronuose vaidina pagrindinį vaidmenį skatinant atlygį, motyvaciją ir priklausomybę nuo narkotikų.; ; ). Dopamino antagonistų įvedimas į Acb blokuoja apetitą skatinantį elgesį su maistu, tačiau neturi jokios įtakos alkio sukeltam valgymui.) arba Acb DAMGO riebalų suvartojimas (). Dopamino agonistų vartojimas į Acb padidina laipsnišką atsaką į maisto stiprintuvą, bet neturi įtakos laisvam maitinimui (). Šie ir kiti duomenys rodo, kad abiejose gydymo grupėse, vartojusiose intra-Acb DAMGO, su BLA inaktyvacija ir be jos, pastebėtas perdėtas apetito skatinantis elgesys su maistu yra susijęs su padidėjusiu VTA dopaminerginių neuronų aktyvumu.

PeF oreksino-A neuronų aktyvumo modelis sutampa su vartojimo modeliais, kurie paprastai stebimi po tų pačių gydymo efektų esant ad lib prieigos sąlygoms (, ), naudojant intra-Acb DAMGO, suvartojama daugiau nei bet kuris kitas gydymas. Mes taip pat nustatėme, kad intra-Acb DAMGO padidino DMH c-Fos aktyvumą, nepaisant gydymo BLA, tačiau tik intra-DAMGO padidino oreksino neuronų, ekspresuojančių c-Fos, dalį, palyginti su kontrole. Nepaisant jo vaidmens DAMGO sukeltame maitinimosi elgesyje (; ), DAMGO reikšmingai nepadidino LH c-Fos aktyvumo, nors neleido gyvūnams pasiekti sotumo.

Pagumburis ilgą laiką buvo laikomas autonominės energijos homeostazės reguliavimo centru; įskaitant maitinimo reguliavimą, susijaudinimą ir atlygį (, ). Yra žinoma, kad neuronai, ekspresuojantys oreksigeninius peptidus oreksiną-A ir melaniną koncentruojantį hormoną (MCH), tankiai apgyvendina šonines pagumburio sritis.), ypač periforninėje srityje. Nustatyta, kad daug riebios dietos suvartojimą skatina centralizuotai vartojamas oreksinas-A () yra blokuojamas prieš tai vartojant opioidų antagonisto naloksono (), rodo opioidų ir oreksino peptidų sąveiką tarpininkaujant skanaus maisto vartojimui. Intra-VTA oreksino-A vartojimas taip pat sužadina dopamino neuronus (Borgland ir kt., 2006). Oreksino signalizacijos blokavimas VTA sumažina DAMGO sukeltą maitinimą riebia dieta (), tačiau nežinoma, kiek tai susiję su apetito elgesio mažinimu, kuris gali prisidėti prie padidėjusio vartojimo. Todėl dabartinė išvada, kad padidėjęs VTA dopaminerginis aktyvumas po intra-Acb DAMGO nebuvo paveiktas BLA inaktyvacijos, nepaisant to, kad sumažėjo PeF oreksino aktyvumas, padidina tiek apetito, tiek visiško maitinimosi fazių elgesio apibūdinimo svarbą. Be to, šie duomenys pateikia patikrinamas hipotezes, leidžiančias tirti PeF oreksino ir VTA dopaminerginio moduliavimo įtaką opioidų skatinamam požiūriui ir užbaigtoms maitinimo fazėms.

Šiame tyrime buvo naudojama ribota prieiga prie dietos (ty turimi gramai), kad būtų galima kontroliuoti skirtingą vartojimo lygį po įvairių gydymo vaistų. Tyrimas taip pat apribojo vieną dietą; todėl išlieka galimybė, kad opioidų varomas maitinimas kitomis skaniomis dietomis gali būti reguliuojamas panašiai. Daug riebalų turinčios dietos pasirinkimą lėmė ankstesnės susijusio tinklo charakteristikos, kaip paaiškėjo, kad Acb DAMGO šėrimas dideliu riebumu (; peržiūrai), ypač BLA vaidmenį (, ). Nežinoma, ar šios išvados būdingos riebiai mitybai, ar jos taip pat būtų stebimos naudojant alternatyvią dietą. Įdomu tai, kad neseniai atliktas tyrimas parodė, kad net ir tarp labai skanių dietų c-fos aktyvacijos modeliai labai skiriasi pagrindiniuose mezokortikolimbinės grandinės maitinimosi reguliavimo regionuose.). Norint nustatyti, ar dabartinės išvados būdingos riebioms dietoms, reikės atlikti tolesnius tyrimus.

Apibendrinant galima pasakyti, kad šie duomenys suteikia įžvalgos apie tai, kaip BLA reaguoja į Acb opioidų aktyvavimą, kad būtų skatinamas vartojimas, bet ne elgesys, susijęs su riebia dieta. Duomenys rodo, kad intra-Acb DAMGO skatinamas vartojimo elgesys gali būti dėl padidėjusio oreksino-A neuronų aktyvumo PeF, o padidėjęs požiūris į maistą yra susijęs su padidėjusiu VTA dopaminerginiu aktyvumu, o BLA aktyvinimas reikalingas tik norint stebėti. vartojimo fazė. Šie duomenys leidžia geriau suprasti du atskirtus maitinimosi būdus gerai apibūdintame šėrimo modelyje. Šis tyrimas praplečia mūsų žinias apie nervų grandines, kurios yra svarbios skoniu skatinamam maitinimui, ir turi įtakos suprasti netinkamą maitinimosi elgesį, susijusį su nutukimo ir priklausomybės nuo maisto vystymusi.

​

4 pav 

Scheminiai linijų brėžiniai, pritaikyti iš Paxinos & Watson (1998) atlaso, vaizduojantys vainikines dalis, kuriose yra analizuotų smegenų sričių, išdėstytų mėlynoje srityje (pilkoje srityje) ir padidintos tiesiai žemiau. Regionai: (A) ventralinė tegmentinė sritis, VTA; (B) dorsomedialinis ...

Padėka

Autoriai norėtų padėkoti Nacionalinio piktnaudžiavimo narkotikais instituto dotacijai DA024829 MJW.

Išnašos

Autoriai pareiškia, kad nėra interesų konflikto.

Nuorodos

  1. Badiani A, Leone P, Noel MB, Stewart J. Ventral tegmental area opioidmekanismis and modulation of ingestive elheys. Smegenų tyrimai. 1995;670(2):264–276. [PubMed]
  2. Baldo BA, Sadeghian K, Basso AM, Kelley AE. Selektyvaus dopamino D1 arba D2 receptorių blokados poveikis nucleus accumbens subregionuose nurijimo elgesiui ir susijusiam motoriniam aktyvumui. Behav Brain Res. 2002 m. gruodžio 2 d.;137(1–2):165–177. [PubMed]
  3. Baldo BA, Pratt WE, Will MJ, Hanlon EC, Bakshi VP, Cador M. Motyvacijos principai, kuriuos atskleidžia įvairios neurofarmakologinių ir neuroanatominių substratų funkcijos, kuriomis grindžiamas maitinimosi elgesys. Neurosci Biobehav Rev. 2013 lapkritis;37 (9 Pt A):1985–1998. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  4. Ball GF, Balthazart J. Kiek naudingas mūsų supratimui apie neuroendokrininę seksualinio elgesio kontrolę apetitinis ir išsamus skirtumas? Horm Behav. 2008 m. vasario mėn.;53(2):307–311. autoriaus atsakymas 315-8. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  5. Berridge KC. Motyvacijos sampratos elgesio neuromoksluose. Fizinis elgesys. 2004 balandis;81(2):179–209. Apžvalga. [PubMed]
  6. Berridge KC. „Patinka“ ir „nori“ maisto apdovanojimai: smegenų substratai ir vaidmenys valgymo sutrikimuose. Fiziologija ir elgesys. 2009;97(5):537–550. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  7. Cason AM, Smith RJ, Tahsili-Fahadan P, Moorman DE, Sartor GC, Aston-Jones G. Oreksino / hipokretino vaidmuo siekiant atlygio ir priklausomybės: nutukimo pasekmės. Fiziologija ir elgesys. 2010;100(5):419–428. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  8. Clegg DJ, Air EL, Woods SC, Seeley RJ. Valgymas, kurį sukelia oreksinas-A, bet ne melaniną koncentruojantis hormonas, priklauso nuo opioidų. Endokrinologija. 2002;143(8):2995–3000. [PubMed]
  9. Craigas W. Apetitas ir priešiškumas kaip instinktų sudedamosios dalys. Biologinis biuletenis. 1918;34:91–107. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  10. Data Y, Ueta Y, Yamashita H, Yamaguchi H, Matsukura S, Kangawa K, Sakurai T, Yanagisawa M, Nakazato M. Oreksinai, oreksigeniniai pagumburio peptidai, sąveikauja su autonominėmis, neuroendokrininėmis ir neuroreguliacinėmis sistemomis. Proc Natl Acad Sci USA. 1999;96(2):748–753. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  11. Dela Cruz JA, Coke T, Karagiorgis T, Sampson C, Icaza-Cukali D, Kest K, Ranaldi R, Bodnar RJ. c-Fos indukcija mezotelencefalinio dopamino kelio projekcijos taikiniuose ir nugaros juostoje po žiurkių cukrų ir riebalų suvartojimo. Brain Res Bull. 2015 m. vasario mėn.;111:9–19. [PubMed]
  12. Laukai HL, Hjelmstad GO, Margolis EB, Nicola SM. Ventralinės tegmentinės srities neuronai išmoko apetito elgseną ir teigiamą sustiprinimą. Kasmetinė neurologijos apžvalga. 2007;30:289–316. [PubMed]
  13. Hanlon EC, Baldo BA, Sadeghian K, Kelley AE. Padidėjęs maisto suvartojimas arba maisto ieškantis elgesys, kurį sukelia GABAerginis, opioidinis ar dopaminerginis branduolio branduolio stimuliavimas: ar tai alkis? Psichofarmakologija (Berlis), 2004 m. kovas; 172(3):241–247. [PubMed]
  14. Harris GC, Aston-Jones G. Sužadinimas ir atlygis: oreksino funkcijos dichotomija. Neurologijos tendencijos. 2006;29(10):571–577. [PubMed]
  15. Ikemoto S, Panksepp J. Disociacijos tarp apetitinių ir užbaigiamųjų reakcijų farmakologinėmis manipuliacijomis su atlygiu susijusiais smegenų regionais. Neurosci elgesys. 1996 balandis;110(2):331–345. [PubMed]
  16. Jager G, Witkamp RF. Endokanabinoidų sistema ir apetitas: maisto atlygio svarba. Nutr Res Rev. 2014 Jun 2;27(1):172–185. [PubMed]
  17. Jennings JH, Ung RL, Resendez SL, Stamatakis AM, Taylor JG, Huang J, Veleta K, Kantak PA, Aita M, Shilling-Scrivo K, Ramakrishnan C, Deisseroth K, Otte S, Stuber GD. Pagumburio tinklo dinamikos vizualizavimas apetitiniam ir tobulam elgesiui. Ląstelė. 2015 m. sausio 29 d.;160(3):516–527. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  18. Kalra SP, Dube MG, Pu S, Xu B, Horvath TL, Kalra PS. Sąveikaujantys apetitą reguliuojantys keliai reguliuojant hipotalaminį kūno svorį. Endokrininės sistemos apžvalgos. 1999;20(1):68–110. [PubMed]
  19. Kelley AE, Baldo BA, Pratt WE, Will MJ. Kortikostriatinė-pagumburio grandinė ir maisto motyvacija: energijos, veiksmų ir atlygio integravimas. Fizinis elgesys. 2005 m. gruodžio 15 d.;86(5):773–795. [PubMed]
  20. Lorenzas K. Lyginamasis metodas tiriant įgimtus elgesio modelius. Symp. Soc. Exp. Biol. 1950;4:221–268.
  21. Nicola SM, Deadwyler SA. Nucleus accumbens neuronų sudeginimo greitis priklauso nuo dopamino ir atspindi kokaino ieškančio elgesio laiką žiurkėms, laikantis laipsniško stiprinimo grafiko. J Neurosci. 2000 liepos 15 d.;20(14):5526–5537. [PubMed]
  22. Parkas TH, Carr KD. Neuranatominiai Fos tipo imunoreaktyvumo modeliai, kuriuos sukelia skanus maistas ir suporuota aplinka druskos tirpalu ir naltreksonu gydomoms žiurkėms. Smegenų tyrimai. 1998;805:169–180. [PubMed]
  23. Will MJ, Franzblau EB, Kelley AE. Nucleus accumbens mu-opioidai reguliuoja riebios dietos vartojimą aktyvuodami paskirstytą smegenų tinklą. J Neurologijos. 2003;23(7):2882–2888. [PubMed]
  24. Will MJ, Franzblau EB, Kelley AE. Migdolinis kūnas yra labai svarbus opioidų sukeltam besaikiam riebalų valgymui. Neuroreportas. 2004;15(12):1857–1860. [PubMed]
  25. Will MJ, Pratt WE, Kelley AE. Farmakologinis didelio riebumo maitinimo, kurį sukelia ventralinio striatumo opioidų stimuliacija, apibūdinimas. Fizinis elgesys. 2006 m. rugsėjo 30 d.;89(2):226–234. [PubMed]
  26. Will MJ, Pritchett CE, Parker KE, Sawani A, Ma H, Lai AY. Migdolinio kūno dalyvavimo tarpininkaujant opioidų sukelto maitinimosi elgsenos elgsenos apibūdinimas. Elgesio neuromokslai. 2009;123(4):781–793. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  27. Yamanaka A, Kunii K, Nambu T, Tsujino N, Sakai A, Matsuzaki I, Miwa Y, Goto K, Sakurai T. Orexin-induced food intake include neuropeptide Y pathway. Smegenų tyrimai. 2000;859(2):404–409. [PubMed]
  28. Zhang M, Kelley AE. Geresnis didelio riebalų kiekio maisto vartojimas po striatalų stimuliacijos stimuliuojant mikroskopiją: mikroinjekcijos kartografavimas ir fos ekspresija. Neurologija. 2000; 99 (2): 267 – 277. [PubMed]
  29. Zhang M, Kelley AE. Sacharino, druskos ir etanolio tirpalų suvartojimas padidėja infuzuojant mu opioidinį agonistą į nucleus accumbens. Psychopharmacology (Berl), 2002;159(4):415–423. [PubMed]
  30. Zhang M, Balmadrid C, Kelley AE. Nucleus accumbens opioidinis, GAbaerginis ir dopaminerginis skanaus maisto motyvacijos moduliavimas: kontrastingi efektai, atskleisti progresyvaus santykio tyrime su žiurkėmis. Neurosci elgesys. 2003 balandis;117(2):202–211. [PubMed]
  31. Zheng H, Patterson LM, Berthoud HR. Oreksino signalizacija ventralinėje tegmentalinėje srityje reikalinga didelio riebumo apetitui, kurį sukelia opioidų stimuliacija nucleus accumbens. J iš Neurologijos. 2007;27(41):11075–11108. [PubMed]