Okseksinas tarpininkauja lytinio elgesio inicijavimui lytiniu požiūriu naivių žiurkių patelėms, tačiau nėra lemiamas seksualinės veiklos (2011) veiksnys.

Hormas Behavas. Autoriaus rankraštis; galima įsigyti PMC 2011 rugpjūčio 1.

Paskelbta galutine redaguota forma:

PMCID: PMC2917508

Galutinę leidėjo redaguotą šio straipsnio versiją galite rasti tinklalapyje Horm Behav

Žr. Kitus PMC straipsnius citata paskelbtas straipsnis.

Eiti į:

Abstraktus

Pagumburio neuropeptidas oreksinas tarpininkauja susijaudinus, miegant ir natūraliai pasitenkinant, įskaitant maistą. Vyrų seksualinį elgesį keičia oreksino receptorių-1 agonistai ar antagonistai, o tai rodo oreksino A vaidmenį šiame natūraliai naudingame elgesyje. Tačiau konkretus endogeninio oreksino-A ar B vaidmuo skirtinguose vyrų seksualinio elgesio elementuose nėra aiškus. Todėl dabartiniuose tyrimuose buvo naudojami neuronų aktyvavimo ir oreksino ląstelių specifinių pažeidimų žymekliai, siekiant patikrinti hipotezę, kad oreksinas yra kritinės žiurkių patinų seksualinės motyvacijos ir veiklos rodiklis. Pirma, cFos ekspresija oreksinų neuronuose buvo įrodyta pateikus priimančią ar nepriimtiną moterį, toliau nesuaktyvinant skirtingų poravimosi elementų. Toliau, naudojant oreksino B konjuguotą saporiną, buvo patikrintas oreksino funkcinis vaidmuo, dėl kurio atsirado pogumburio oreksino ląstelių kūno pažeidimai. Pažeidimai buvo padaryti lytiškai naivų vyrų, o vėliau lytinis elgesys buvo užfiksuotas keturių poravimosi tyrimų metu. Pirmajame, bet ne vėlesniame poravimosi bandyme pažeidę vyrai parodė sutrumpėjusį montavimo ir intrigos latentiškumą, kurie rodo, kad pažeidimai palengvino seksualinio elgesio pradėjimą seksualiai naiviems, bet nepatyrusiems vyrams. Ligos taip pat neturėjo įtakos patyrusių vyrų seksualinei motyvacijai, kurią nustatė bandymai su tūpimo taku. Galiausiai padidėjusio pliuso labirinto testai parodė, kad pažeistiems vyrams būdingas mažesnis į nerimą panašus elgesys, oreksinas vaidina nerimą, susijusį su pradiniu naivių gyvūnų patelės poveikiu. Apskritai, šie radiniai rodo, kad oreksinas neturi lemiamos reikšmės vyrų lytinėms savybėms ar motyvacijai, tačiau gali vaidinti sujaudinimą ir nerimą, susijusį su naivių gyvūnų seksualiniu elgesiu.

Raktiniai žodžiai: oreksinas, hipokretinas, seksualinis elgesys, kopuliacija, nervų aktyvinimas, motyvacija, pagumburys, naujovė, susijaudinimas, nerimas

Įvadas

Oreksinas, dar žinomas kaip hipokretinas, yra pagumburio neuropeptidas, kritiškas maitinantis (de Lecea ir kt., 1998; Sakurai ir kt. 1998, Sakurai, 2006; Benoit ir kt., 2008) susijaudinimas ir miegas (Chemelli ir kt., 1999; Lin ir kt., 1999, Sakurai, 2007; „Furlong and Carrive“, „2007“; Furlong ir kt., 2009; Carter et al., 2009). Oreksino neuronai yra lokalizuoti šoninėje pagumburio srityje (LHA) ir periforniniame dorsomedialiniame pagumburyje (PFA-DMH) ir sukuria du neuropeptidus - oreksiną A ir B (de Lecea ir kt., 1998; Sakurai ir kt., 1998). Įrodyta, kad Orexin neuronai veikia smegenų struktūras, dalyvaujančias tarpininkaujant susijaudinimui, įskaitant lokusinį kaulagyslę, tuberomammalinį branduolį ir pedukulopontino pagrindinį branduolį (Peyron ir kt., 1998; Haganas ir kt., 1999; Horvath ir kt., 1999; Baldo ir kt., 2003). Oreksinas taip pat buvo susijęs su atlygiu ir motyvacija, ypač susijusiais su maistu ir vaistais nuo piktnaudžiavimo (Aston-Jones ir kt., 2009a; Aston-Jones ir kt., 2009b) ir oreksino neuronai, kaip pavyzdys, apdovanoja susijusias smegenų struktūras mezolimbolinėje sistemoje, įskaitant ventinį pagrindinį plotą (VTA) ir branduolio akumuliatorius (NAc) (Peyron ir kt., 1998; „Fadel and Deutch“, „2002“; Martin ir kt., 2002; Baldo ir kt., 2003). Oreksino neuronus suaktyvina sąlyginės kontekstinės užuominos, susijusios su maisto ir vaistų teikiama nauda (Harris ir kt., 2005; de Lecea ir kt., 2006; Choi ir kt., 2010) ir buvo įrodyta, kad jie vaidina vaidmenį, atsižvelgiant į atlygį, maitinantis (Choi ir kt., 2010). Oreksino receptoriaus 1 (ORX1) antagonisto vartojimas intracerebroventrikuliniu (ICV) arba intraperitonealiniu būdu sumažina motyvaciją gerti maistą (Thorpe ir kt., 2005; Nair ir kt., 2008), kadangi ICV orexin-A administracija gali atkurti šią motyvaciją (Boutrel ir kt., 2005).

Oreksino vaidmuo kitoje naudingoje elgsenoje šiuo metu nėra aiškus, nors keli tyrimai parodė, kad oreksinas vaidina žiurkių patinų seksualinį elgesį. Anksčiau buvo įrodyta, kad oreksino neuronai suaktyvinami kopuliuojant žiurkes patinus (Muschamp ir kt., 2007). Be to, įvedus orexin-A į medialinę preoptinę sritį (mPOA), padidėjo lytinis potraukis, kurį parodo sumažėjęs pritvirtinimo ir įsibrovimo latentas, padidėjęs pritvirtinimo ir įsibrovimo dažnis (Gulia ir kt., 2003). Orexin-A vartojimas pagal ICV susilpnino seksualinę motyvaciją sumažindamas moterų pasirinkimą, nors tik labai seksualiai motyvuotiems vyrams (Bai ir kt., 2009). Tyrimai, kuriuose naudojami ORX1 antagonistai, taip pat parodė prieštaringus duomenis, nes sisteminis ORX1 antagonisto paskyrimas šiek tiek pablogino seksualinę veiklą, padidindamas intrigos latenciją, nepaveikdamas kitų seksualinio elgesio parametrų (Muschamp ir kt., 2007), o ORX1 antagonisto vartojimas ICV neturėjo įtakos seksualinei motyvacijai (Bai ir kt., 2009). Šie tyrimai kartu rodo, kad išorinio oreksino A vartojimas turi įtakos lytinėms savybėms ir motyvacijai; tačiau endogeninis oreksinas gali neatlikti svarbaus vaidmens tarpininkaujant seksualiniam elgesiui (Bai ir kt., 2009). Todėl šio tyrimo tikslas buvo nustatyti, ar endogeninis oreksinas yra būtinas žiurkių patinų seksualinei motyvacijai ir veiklai užtikrinti.

Pirmiausia buvo nustatyta, kada seksualinio elgesio metu suaktyvėja oreksino neuronai, išbandžius hipotezę, kad oreksino neuronai suaktyvinami įvedant atlygintiną stimulą. Be to, kaip įrodyta, kad seksualinė patirtis daro įtaką seksualiniam rezultatui (Dewsbury, 1969) ir seksualinę elgseną teikiančios naudingos savybės (Tenk ir kt., 2009), buvo nustatyta, ar seksualinė patirtis turi įtakos oreksino neurono aktyvavimui poravimosi metu. Galiausiai buvo patikrinta, ar oreksinas vaidina lemiamą reikšmę seksualinei motyvacijai ir našumui, naudojant oreksino neuronų specifinius ląstelių kūno pažeidimus.

Medžiagos ir metodai

Suaugę Sprague Dawley žiurkių patinai (200 – 250g) buvo gauti iš Harlan (Indianapolis, IN) arba Charles River Laboratories (Sherbrooke, Kvebekas, Kanada) ir buvo laikomi atskirai arba poromis, atsižvelgiant į individualų eksperimentą (žr. Žemiau) Plexiglas narvuose. Kolonijos kambarys buvo palaikomas 12 / 12 atvirkštinio šviesos-tamsos ciklu (šviesa užgesta ties 10 am) ir buvo maisto bei vandens ad libitum išskyrus elgesio testų metu. Moteriškos „Sprague-Dawley“ žiurkės buvo gautos iš Harlan (Indianapolis, IN) arba Charles River Laboratories (Sherbrooke, Kvebekas, Kanada) buvo iš abiejų pusių pašalintos kiaušidėmis ir implantuotos po oda 5% 17-β-estradiolio benzoato silastinėmis kapsulėmis. Lytinį potraukį sukėlė poodinės progesterono injekcijos (500 μg 0.1ml sezamo aliejaus) maždaug 4 val. Prieš poravimosi seansus. Visas procedūras patvirtino Sinsinačio universiteto ir Vakarų Ontarijo universiteto gyvūnų priežiūros komitetai ir jos atitinka Nacionalinio sveikatos instituto ir Kanados gyvūnų globos tarybos nustatytas gaires. Visi elgesio testai buvo atlikti pirmoje tamsiosios fazės pusėje, esant silpnai raudonai apšviestam, išskyrus atvejus, kai nurodyta kitaip.

Eksperimentinis dizainas

cFos ekspresijos tyrimai

Žiurkių patinai (n = 48) buvo laikomi atskirai, o pusė gyvūnų seksualinės patirties įgijo namų narve per 5 du kartus per savaitę poravimosi sesijas. Poravimosi testai buvo atlikti namų narve, siekiant pašalinti susijaudinimo ir cFos ekspresiją, kurią sukelia kitoje poravimosi arenoje ir sąlyginių ženklų, susijusių su ankstesniu poravimu, poveikis (Balfour ir kt., 2004). Priimančioji patelė buvo įleista į namų narvą, o patinams buvo leista poruotis iki vienos ejakuliacijos arba 60 minutes. Kiekvieno testo metu buvo stebimas seksualinis elgesys. Buvo užregistruotas bendras tvirtinimų ir įsibrovimų skaičius, taip pat vėlavimai į pirmąjį tvirtinimą ir įsibrovimai (laikas nuo priimančios moters pateikimo iki pirmojo tvirtinimo ar įsibrovimo) ir ejakuliacija (laikas nuo pirmojo įsibrovimo iki ejakuliacijos). (Agmo, 1997). Likusi pusė gyvūnų liko seksualiai naivūs. Šie gyvūnai buvo laikomi toje pačioje patalpoje, kurioje patyrė seksualiai patyrę vyrai, buvo tvarkomi ir buvo veikiami kvapų ir garsų, susijusių su poravimu, tačiau jie neturėjo poros. Nauji ir patyrę gyvūnai buvo suskirstyti į 6 eksperimentines grupes (n = 4 kiekvienoje grupėje). Į 6 nebenaudotas ir patyrusias grupes įeina: Kontroliuoti vyrai, kurie nėra veikiami seksualinio elgesio (namų narve); patinai, kurie 15 minutes buvo paveikti namų narve nepriimtinų patelių (moteris prieš moteris). Patinai galėjo ištirti ir bendrauti, tačiau nesisielojo dėl moteriško jautrumo stokos; patinai, veikiami imlios patelės kvapo, 15 minutėms dedami į vielinio tinklo dėžutę ant namų narvo viršaus (erzinanti moteris); patinai, kuriems buvo pritvirtintos atramos, bet nebuvo trukdoma įsibrovimui ar ejakuliacijai su vaginiai užmaskuotomis patelėmis (Mount); vyrai, kurie rodė tik tvirtinimus ir įsibrovimus (įsiskverbimas); patinai, poravęsi prie vienos ejakuliacijos (ejakuliacija). Praėjus valandai po tyrimo pabaigos, vyrai buvo paaukoti, kad išanalizuotų cFos raišką. Lytiškai patyrusios grupės buvo suderintos pagal seksualinio elgesio parametrus ir prieš galutinį testą tarp grupių nebuvo reikšmingų skirtumų. Be to, per paskutinį testą nebuvo jokių reikšmingų skirtumų tarp naivių ir patyrusių grupių montavimų skaičiaus ir įsibrovimų.

Perfuzijos: cFos išraiška

Visi vyrai buvo giliai anestezuoti natrio pentobarbitoliu (270 mg / ml) ir transkardialiai perfuzuoti 4% paraformaldehidu (500 ml; PFA). Po perfuzijos smegenys buvo nedelsiant pašalintos ir po valandos fiksuotos tame pačiame fiksatoriuje, po to perkeltos į 20% sacharozės tirpalą, kad būtų apsaugotas krioprotektorius. Smegenys buvo padalytos ant užšaldančio mikrotomo (Microm, Walldorf, Vokietija) vainikinėse 35 µm atkarpose ir surinktos 4 lygiagrečiose atkarpose kriopreparatų tirpale (30% sacharozės 0.1 M PB, turinčiame 30% etilenglikolio ir 0.01% natrio azido) ir laikomos. –20 ° C temperatūroje iki tolimesnio apdorojimo.

Imunohistochemistry

Visos inkubacijos buvo atliktos kambario temperatūroje švelniai maišant. Laisvai plaukiojančios sekcijos buvo plaunamos plaunant 0.1M druskos tirpalu buferiniu natrio fosfatu (PBS). Skyriai buvo užblokuoti 1% H2O2 (30% pradinis tirpalas) PBS 10 minutes, po to vėl plačiai plaunamas PBS. Skyriai buvo inkubuojami su inkubavimo tirpalu (PBS, kuriame yra 0.1% galvijų serumo albumino ir 0.4% Triton X-100) 1 valandą. Pirminės antikūnų inkubacijos buvo atliktos inkubaciniame tirpale per naktį kambario temperatūroje. Po dažymo sekcijos buvo skalaujamos PBS, montuojamos ant pliuso įkrautų stiklelių ir uždengiamos dibutilftalato ksilolu (DPX).

cFos / Orexin

Vienoje pjūvių serijoje buvo apdorotas cFos ir oreksinas. Sekcijos buvo inkubuojamos per naktį su triušio išaugintu antikūnu, atpažįstančiu cFos (triušio anti-cFos, sc-52; 1: 10 000, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA), po kurio sekė 1 valandos inkubacijos su biotiniluotu ožkos anti-triušiu (1: 500). , Vector Laboratories, Burlingame, CA) ir avidino krienų peroksidazės kompleksas (1: 1000, ABC rinkinys, Vector Laboratories, Burlingame, CA). Skyriai buvo inkubuojami 10 minutes 0.02% diaminobenzidine (DAB) (Sigma, Sent Luisas, MO) 0.1M fosfato buferyje (PB), kuriame yra 0.012% vandenilio peroksido ir 0.08% nikelio sulfato, gaunant melsvai juodos reakcijos produktą. Po to sekcijos buvo inkubuojamos per naktį su triušio išaugintu antikūnu, atpažįstančiu Orexin-A (triušio anti-orexin-A, H-003 – 30; 1: 20 000, Phoenix Pharmaceuticals, Burlingame, CA), po kurio sekė 1 valandos inkubacija su biotiniluotu ožkos antioksinu. - triušis ir ABC, kaip aprašyta aukščiau. Galiausiai pjūviai buvo inkubuojami 10 minutes su 0.02% DAB 0.1M PB, kuriame yra 0.012% vandenilio peroksido, gaudami rausvai rudą reakcijos produktą.

Visi antikūnai buvo apibūdinti anksčiau (Chen ir kt., 1999; Satoh ir kt., 2004; Solomon ir kt., 2007). Imunohistocheminiai patikrinimai apėmė pirminių antikūnų praleidimą, Western blot analizę, parodančią tinkamo svorio atskiras juostas (cFos), ir imunohistocheminio oreksino signalo praradimą su oreksino B-saporino pažeidimais (orexin).

Duomenų analizė

cFos / Orexin

Neuronai, pažymėti oreksinu ar oreksinu ir cFos, buvo suskaičiuoti dvišališkai trijuose reprezentatyviuose gyvūno pjūviuose, apie kuriuos žinoma, kad juose yra maksimalus oreksinų neuronų populiacijos skaičius (Sakurai ir kt., 1998) apimanti nuo –2.3 mm iki –3.6 mm nuo bregmos (Paxinos ir Watson, 1998) (1 pav), naudodamas piešimo vamzdelį, pritvirtintą prie „Leica“ mikroskopo (Leica Microsystems; Wetzlar, Vokietija), stebinčiu, aklinu į eksperimentines grupes. PFA-DMH ir LHA buvo nubrėžti atsižvelgiant į fornix vietą (1a pav). Buvo apskaičiuoti oFExin neuronų, išreiškiančių cFos, procentai ir kiekvieno gyvūno pusrutulio vidurkis, apskaičiuotos grupių vidurkiai. Statistinis reikšmingumas tarp grupių buvo nustatytas naudojant dvipusį ANOVA su seksualine patirtimi ir seksualiniu elgesiu paskutinio testo metu kaip veiksnius, po kurių sekė Fišerio LSD testai su 95% patikimumo lygiu.

1 pav 

Oreksino neuronų vieta pagumburyje. (A) Oreksino neuronų anatominė vieta pagumburyje. (Paxinos ir Watson, 1998), Mastelio juosta: 200 µm. (B) Pavieniai paženklinti oreksino neuronai PFA-DMH nesuderintame kontroliniame gyvūne. (C) Oreksinas ...

Oreksino pažeidimo tyrimai

Chirurgija

Patinai buvo apgyvendinti atskirai ir jiems buvo atlikta viena prieš bandymą poravimosi sesija su imančia moterimi prieš pažeidimo ir fiktyvią operaciją. Seksualinis elgesys buvo užfiksuotas, kaip aprašyta aukščiau, ir grupės buvo derinamos pagal poruotinio elgesio parametrus. Patinų patinai buvo anestezuojami izofluranu (Abbot Laboratories, St. Laurent, Kvebekas, Kanada), naudojant „Surgivet Isotec4“ dujų aparatą („Smiths Medical Vet Division“, Markhamas, Ontarijas, Kanada) ir patalpinti į stereotaksinį aparatą („Kopf Instruments“, Tujunga, CA). su dujine kauke, uždengiančia nosį ir burną, kad būtų išlaikyta anestezija. Buvo padaryta įpjova, kad būtų galima išaiškinti kaukolę ir lambdą bei bregmą ir buvo nustatyta, kad jos yra lygios. Kaukolėje buvo išgręžta skylė dremelio grąžtu („Dremel“, „Racine“, WI) ir stiklinėmis mikropipetėmis („40µm“ skersmuo, „World Precision Instruments Inc“, Sarasota, FL), užpildytomis tiksliniu toksinu orexin-B saporinu (IT-20, Advanced). Taikymo sistemos, San Diegas, CA; 200ng / µL PBS); arba nekonjuguotas toksinas BLANK-saporin (IT-21, Advanced Targeting Systems, San Diegas, CA; 200ng / µL PBS; fiktyvi kontrolė) buvo nuleistas į pagumburį. Įrodyta, kad šis tikslinis toksinas turi didelį afinitetą ląstelėms, ekspresuojančioms oreksino receptorius 2 (ORX2), ir žymiai mažesnį afinitetą ląstelėms, ekspresuojančioms ORX1 (Geraščenko ir kt., 2001) ir buvo įrodyta, kad jis specifiškai pašalina pagumburio oreksino neuronus (Frederickas-Duusas ir kt., 2007). Dvišalės 1 µL infuzijos (2 viename pusrutulyje) buvo sušvirkštos šiomis koordinatėmis: AP = −2.8 ir −3.2; ML = 0.7 ir 0.8; DV = −9.0 (Paxinos ir Watson, 1998). Po kiekvienos infuzijos adata buvo palikta vietoje 3 minutes, kad būtų galima difuzija. Adatos lėtai buvo pašalintos, o žaizdos buvo užrišamos žaizdų spaustukais. Praėjus dviem savaitėms po pažeidimo operacijos, keturių poravimosi tyrimų metu visi vyrai buvo tikrinami dėl seksualinės patirties, o po to jiems buvo atliktas kilimo ir tūpimo takas ir (arba) padidintas pliuso labirintas (žr. Žemiau). Operacijos buvo atliekamos trimis skirtingomis grupėmis, atskirtomis keliomis savaitėmis, kad kiekvienoje grupėje būtų pakankamai gyvūnų.

Seksualinis elgesys

Visi vyrai buvo tikrinami dėl seksualinio elgesio per 4 poravimo sesijas, kas antrą dieną vykdant namų narve. Kiekvieno seanso metu vyrai buvo poruojami su imančiąja moterimi iki vienos ejakuliacijos arba 60 minutes, atsižvelgiant į tai, kas įvyko anksčiau. Poravimosi pobūdis buvo užfiksuotas, kaip aprašyta aukščiau, taip pat buvo apskaičiuotas kopuliacijos efektyvumas [įsibrovimų skaičius / (įklotų skaičius + įsibrovimų skaičius]]. Statistiniai lytinio potraukio parametrų skirtumai buvo lyginami tarp pažeidimų ir fiktyvių grupių kiekviename tyrime, naudojant vienpusį ANOVA su pažeidimo chirurgija kaip faktorių, ir Fišerio LSD testą su 95% pasikliovimo lygiu, arba, kai tinkama, neparametriniai testai buvo atlikti naudojant Kruskal-Wallis vienpusė ANOVA su pažeidimo chirurgija kaip faktorius ir Dunno testas su 95% patikimumo lygiu. Be to, kiekvienos grupės duomenys buvo lyginami su duomenimis prieš operaciją, naudojant suporuotus t-testus.

Seksualinė motyvacija: Bėgimo tako testas

Ištyrus seksualinį elgesį, pogrupyje dabar seksualiai patyrusių vyrų buvo patikrinta lytinė motyvacija, naudojant tiesią kilimo ir tūpimo taką (MED Associates Inc., St. Albans, VT) (120 cm ilgio; Lopez ir kt., 1999). Patinai priprato prie kilimo ir tūpimo tako aparato per du vėlesnius 10 minutės bandymus, kurie buvo atlikti tą pačią dieną. Vėliau buvo atlikti du bandymai. Pirmojo bandymo metu stimuliatorius (patelė, patelė ar patelė) buvo įdėtas į tikslo dėžutę su perforuotomis daliklėmis tako pabaigoje. Ventiliatorius buvo naudojamas norint stimuliuoti gyvūnų kvapus patino link. Eksperimentiniai vyrai buvo sudėti į starto dėžę, durys buvo atidarytos, kad būtų galima patekti į kilimo ir tūpimo taką, ir buvo užfiksuotas laikas pasiekti tikslo dėžutę. Pasiekę tikslo langelį, patinams buvo suteikta 30 sekundžių sąveikauti su stimuliuojančiu gyvūnu už ekrano. Po 1 valandos įvyko identiškas antrasis bandymas. Tarp bandymų 1 ir 2 bandymų statistinis reikšmingumas tarp tikslų, kad būtų pasiekta tikslo dėžutė, buvo analizuojamas naudojant suporuotus t-testus, kurių patikimumo lygis 95%. Statistinis reikšmingumas tarp grupių buvo nustatytas naudojant vienpusį ANOVA su pažeidimo chirurgija kaip veiksnį, po kurio sekė Fišerio LSD testai su 95% patikimumo lygiu.

Į nerimą panašus elgesys: padidėjęs labirintas

Tirti vyrai, kuriems dabar taikoma seksualinė patirtis, pogrupyje buvo tiriamas elgesys, panašus į nerimą, siekiant išsiaiškinti, ar oreksino pažeidimų poveikis seksualinei veiklai ar motyvacijai atsirado dėl nerimo ar susijaudinimo pokyčių. Patinai buvo apšviesti apšviestoje patalpoje, apšviestoje fazėje, esant padidintam labirinto aparatui (EPM; MED Associates Inc., St. Albans, VT). EPM sudarė 4 rankos, kurių kiekvieno ilgis 50 cm tęsėsi nuo centrinės sankryžos ir buvo padidintas 75 cm. Dvi labirinto rankos buvo atviros išorinei aplinkai, o kitos dvi buvo aptvertos tamsia 40 cm aukščio danga. Gyvūnai buvo dedami į EPM ir stebimi penkias minutes. Laikas, praleistas atviroje ir uždaroje grupėse, ir bendras kiekvienos rankos įėjimų skaičius buvo užfiksuotas naudojant foto pluošto matricas. Statistinis reikšmingumas tarp grupių buvo nustatytas naudojant vienpusį ANOVA su pažeidimu kaip faktorių, po kurio sekė Fišerio LSD testai su 95% pasikliovimo lygiu.

Perfuzijos ir poravimosi sukeltos cFos

Atlikus visus elgesio testus, visi vyrai buvo giliai patepti natrio pentobarbitoliu (270mg / ml) ir transkardialiai perfuzuoti 500 ml 4% PFA, kad būtų galima patikrinti pažeidimą, kaip aprašyta anksčiau. Be to, norint ištirti oreksino pažeidimų poveikį poravimosi sukeltai cFos ekspresijai, šamų ir pažeidimų patinų grupės poruojasi iki vienos ejakuliacijos. Praėjus valandai po ejakuliacijos, vyrams buvo atlikta transkardialinė perfuzija su 4% PFA, kaip aprašyta aukščiau. Pusė šios grupės vyrų nebuvo supažindinti su moterimis ir buvo perpūsti iš namų narvelio, kad galėtų tarnauti kaip nepamatuota kontrolė.

Imunohistochemistry

Smegenys buvo padalytos naudojant užšaldantį mikrotomą 4 lygiagrečių 35 µm vainikinių pjūvių serijose ir laikomos taip, kaip aprašyta aukščiau. Pažeidimo patikrinimui viena pjūvių serija su pagumburiu iš visų pažeidimo eksperimentų buvo pažymėta vienkartine oreksino etikete, naudojant tą patį triušio anti-oreksino-A ir DAB protokolą, aprašytą aukščiau. Vienoje porcijoje iš poravimosi gautų gyvūnų grupių buvo dažytos cFos ir oreksinas, kaip aprašyta aukščiau.

Pažeidimo patikrinimas

Kiekviename gyvulyje oreksino neuronų, kuriems nėra reaguojančių į oreksiną, skaičius buvo suskaičiuotas dvišaliu būdu PFA-DMH ir LHA 3 skyriuose, išreiškiančiuose maksimalų oreksino ląstelių skaičių neoperacinėse kontrolėse, nuo –2.3 mm iki –3.6 mm nuo bregmos, kaip aprašyta aukščiau. Kiekvienam gyvūnui buvo apskaičiuotos vidutinės pusrutulio ląstelės ir apskaičiuotos grupių vidurkiai. Neapdoroti kontroliniai gyvūnai (iš „cFos“ eksperimentų) buvo naudojami nepažeistam / pradiniam oreksino neuronų skaičiui nustatyti, o duomenys išreikšti procentais, palyginti su neoperatyviniais kontroliniais vyrais (2 pav). Patinai, turintys mažiau nei 20% oreksino ląstelių, palyginti su kontroliniais gyvūnais, kuriems nebuvo atlikta operacija, buvo įtraukti į pažeidimo grupę. Gyvūnai, turintys daugiau nei 20%, bet mažiau nei 80%, buvo įtraukti į dalinio pažeidimo grupę. Kontrolinė kontrolė reikšmingų oreksino ląstelių skaičiaus pokyčių neturėjo. Statistinis reikšmingumas tarp fiktyvių, dalinio ir visiško pažeidimo gyvūnų buvo apskaičiuotas naudojant vienpusį ANOVA ir Fišerio LSD testą su 95% pasikliovimo lygiu.

2 pav 

Pažeidimo patikrinimas. Reprezentatyvūs vaizdai, rodantys oreksino (A) ir MCH (B) ląsteles fiktyvaus pažeidimo gyvūnui, įpuršktam BLANK-saporino. Reprezentatyvūs vaizdai, rodantys oreksino ląstelių (C), bet nepažeistų MCH ląstelių (D) netekimą oreksino sušvirkščiamo gyvūno pažeidime ...

Pažeidimo specifiškumas

Norint patikrinti, ar pažeidimai buvo apriboti vien tik oreksino neuronais, viena sekcijų sekcija, kurioje buvo hipotalamas iš fiktyvių ir pažeistų gyvūnų pogrupio (n = 20), buvo apdorota melanocitus sukoncentruojančio hormono (MCH), hipotalaminio peptido, turinčio sutampančią vietą (bet ne kolokalizacija) su oreksino neuronais (Broberger ir kt., 1998), naudojant triušio išaugintą antikūną, atpažįstantį MCH (triušio anti-MCH, H-070-47; 1: 150 000, Phoenix Pharmaceuticals, Burlingame, CA) ir DAB, kaip aprašyta anksčiau. MCH neuronai išreiškia ORX1 (Bäckberg ir kt., 2002), bet ne ORX2 (Volgin ir kt., 2004) ir po gydymo oreksinu B-saporinu reikšmingai nesumažėja (Frederickas-Duusas ir kt., 2007). MCH imunoreaktyviosios ląstelės buvo suskaičiuotos dvišaliu būdu dviem gyvūno skyriais (fiktyvusis: n = 7; pažeidimas n = 5), naudojant alternatyvius skyrius, analizuotus dėl oreksino neuronų. Pažeidimai reikšmingai nesumažino MCH neuronų skaičiaus nei PFA-DMH, nei LHA (Lentelė 1; 2b pav., D; PFA-DMH: p = 0.47; LHA: p = 0.33). Be to, poravimosi sukelta cFos ekspresija buvo suskaičiuota dvišališkai viename reprezentatyviame gyvūno pjūvyje (šešėlis: n = 4; pažeidimas n = 3), naudojant alternatyvius pjūvius, palyginti su tais, kuriuose analizuojami oreksino neuronai. Pažeidimai neturėjo įtakos poravimosi sukeltai cFos ekspresijai PFA-DMH ar LHA (Lentelė 1; PFA-DMH: p = 0.53; LHA: p = 0.82). Galiausiai, reprezentatyvios sekcijos, naudojamos oreksino ląstelių skaičiavimui (gyvūnams: fiktyvus: n = 6; pažeidimas: n = 6), buvo Nissl, kontresuotos naudojant krezilio violetinę medžiagą (5 g krezilio violetinės acetato (C-5042, Sigma, Sent Luisas, MO), 0.5 g natrio acetato trihidrato (S209, „Thermo Fisher Scientific“, Otava, Ontarijas, Kanada), 1L dvigubai distiliuoto vandens su ledine acto rūgštimi (AX0073-6, EMD Chemicals, Misisauga, Ontarijas, Kanada), esant pH: 3.14). Nissl dažytų neuronų skaičius buvo atliktas standartinėse analizės vietose (250 µm × 200 µm) bendroje oreksino neuronų vietoje. Nissl dažytų neuronų skaičius nesiskyrė tarp fiktyvių ir pažeidimų grupių (Lentelė 1; PFA-DMH: p = 0.23; LHA: p = 0.33).

Lentelė 1 

Pažeidimo specifiškumo patikrinimas: Nissl, MCH ar poravimosi sukeltų cFos dažytų neuronų skaičiaus analizė parodė, kad apskritai nėra reikšmingų neuronų praradimo, MCH ląstelių ar poravimosi sukeltos nervų aktyvacijos PFA-DMH ar ...

Kadangi buvo įrodyta, kad oreksino trūkumas prisideda prie pelių narkolepsijos (Chemelli ir kt., 1999), šunys (Lin ir kt., 1999) ir žmonėms (Siegel, 1999; Nishino ir kt., 2000; Peyron ir kt., 2000; Thannickal ir kt., 2000) gyvūnai buvo stebimi siekiant įsitikinti, kad nėra narkoleptinio fenotipo. Gyvūnai buvo stebimi per visą elgesio testą, apie kurį pranešta šiame tyrime, ir jie neturėjo jokių narkolepsijos požymių.

Poravimosi sukelta cFos ekspresija pažeidžiamiems gyvūnams

CFos-imunoreaktyviųjų ląstelių skaičius buvo suskaičiuotas abipusiai 3 pjūviuose kiekvienam gyvūnui standartinėse analizės srityse ventrinėje pagrindinėje srityje (VTA; 900 × 900 µm), mPOA (400 × 600 µm); branduolio akumuliatorių (NAc) šerdis ir apvalkalas (400 × 600 µm) ir medialinės prieš frontalinės žievės (mPFC) preliminarūs, infralimbiniai ir priekiniai cinguliuoti subregionai (600 × 800 μm per subregioną) stebimais aklais į eksperimentines grupes . Skaičiuojami kiekvieno gyvūno vidurkiai ir apskaičiuojami grupių vidurkiai. Statistinis reikšmingumas buvo apskaičiuotas naudojant dvipusį ANOVA su seksualine patirtimi ir pažeidimu kaip veiksnius, po kurių sekė Fišerio LSD testas su 95% patikimumo lygiu.

rezultatai

Oreksino neuronų aktyvacija lytinio elgesio metu

Didelis cFos ekspresijos padidėjimas oreksinų neuronuose pastebėtas po lytinio elgesio tiek PFA-DMH (F(5,31) 63.4; p <0.001; 3a pav) ir LHA (F(5,31) 10.4; p <0.001; 3b pav) be jokios seksualinės patirties. Tikslingai, tiek seksualiai naiviems, tiek patyrusiems gyvūnams visos eksperimentinės vyrų grupės, turinčios skirtingus lytinio elgesio parametrus (ištyrusios patelės, žalingų patelių kvapai, ekspozicija, įsiskverbimas ar ejakuliacija), parodė vienodą cFos indukciją, palyginti su namiškiais. narvuose, kuriuose didesnis PFA-DMH suaktyvintų oreksino ląstelių procentas (60 – 80%), palyginti su LHA (14 – 33%), be skirtumų tarp eksperimentinių grupių. Šie rezultatai leidžia manyti, kad oreksino neuronai suaktyvinami patekus į dirgiklius moteriai, o seksualinės veiklos metu jie nebeaktyvinami. Be to, aktyvacija nepriklauso nuo stimuliuojančio moters stimulo, nes tiek nepriimtinos, tiek imlios moterys suaktyvino seksualiai patyrusius vyrus.

3 pav 

Oreksino neuronai, esantys PFA-DMH (A) ir LHA (B), išreiškė cFos pagal visus poravimosi elgesio su naiviais ir patyrusiais gyvūnais parametrus. Santrumpos: HC, namų narvas; AF: moteriškė; EF, graži moteris; M, kalnas; IM, įsiskverbimas; E, ejakuliacija. ...

Oreksino pažeidimų poveikis

Seksualinis elgesys

Oreksino pažeidimai palengvino seksualinį elgesį (kalto delsimas: F(2,47) 3.962; p = 0.034; įsilaužimo latentinis laikas: H = 9.104; p = 0.011). Pirmojo poravimosi tyrimo metu pažeidimų patinai parodė trumpesnį montavimo vėlavimą ir įsibrovimą, palyginti su fiktyviais gyvūnais (montavimo latencija: p = 0.03; įsiskverbimo latentas: p = 0.01; 4a – b paveikslas) ir palyginti su latentinėmis reikšmėmis po operacijos poravimosi metu (montavimo latencija: p = 0.02; įsiskverbimo latentas: p = 0.03; duomenys nepateikti). Dalinio pažeidimo vyrai reikšmingai nesiskyrė nuo fiktyvių vyrų ir nė viena grupė nesiskyrė nuo priešoperacijos poravimosi tyrimo. Pažeidimų įtaka montavimui ir įsiskverbimo latencijos buvo susilpnintos atsižvelgiant į seksualinę patirtį, nes nė vieno iš vėlesnių tyrimų metu (grupių 4 parodyta 4a – b paveikslas). Ejakuliacijos latencijos (4c pav), tvirtinimų skaičius (4d pav) ir įsibrovimai (4e pav), taip pat kopuliacijos efektyvumas (4f pav) reikšmingai nesiskyrė tarp grupių nei vieno iš tyrimų metu, nei kiekvienos grupės tarp pirmojo poravimosi tyrimo ir tyrimo prieš operaciją.

4 pav 

Orexin pažeidimai sutrumpino vėlavimo laiką, kad būtų galima juos sumontuoti, ir įsiskverbimas į seksualiai naivius vyrus 1 tyrimo metu. Oreksino pažeidimai neturėjo įtakos poravimuisi per 4 bandymą, kai vyrai įgijo seksualinės patirties. (A) Latentumo nustatymas. (B) Įsibrovimo delsos. (C) Ejakuliacija ...
KTT bandymas

Oreksino pažeidimai neturėjo įtakos seksualinei motyvacijai, įvertintai tiesiu kilimo ir tūpimo tako bandymu lytinius santykius patyrusiems vyrams. Per du bandomuosius tyrimus pažeidimo patinai antrame tyrime, palyginti su pirmuoju tyrimu, bėgo žymiai greičiau link estroškos moters (p = 0.03; 5 pav). Toks padidėjęs bėgimo laikas rodo seksualinę motyvaciją (Lopez ir kt., 1999). Dalinis pažeidimas ir fiktyvūs vyrai taip pat greičiau bėgo link estroškos moters per 2 (p = 0.03), nors tai nepadarė reikšmingumo fiktyviems vyrams (p = 0.052). Nė viena iš grupių nepasižymėjo padidintu greičiu bėgimo link moteriškos lyties ar patino metu 2. Be to, nei bandymo 1, nei bandymo 2 metu nebuvo pastebėta jokių reikšmingų skirtumų tarp šamų, dalinių ir pažeidimų vyriškių greičio bėgti link bet kurio gyvūno stimuliavimo, parodant bendrojo aktyvumo skirtumus ant tako.

5 pav 

Oreksino pažeidimai neturėjo įtakos seksualinei motyvacijai lytinius santykius patyrusių vyrų. Parodyta, kad per bėgimo tako bandymą abiejų bandymų 1 ir 2 metu reikia pasiekti estroos moterį. * rodo reikšmingą sutrumpėjimo laiką, per kurį moteris pasiekia bandomąjį 2, palyginti su ...
Į nerimą panašus elgesys

Iki šiol gauti rezultatai rodo, kad pažeidimai gali palengvinti seksualinio elgesio su naiviais gyvūnais pradėjimą, nes tai gali turėti įtakos reakcijai į naujumą ir (arba) į nerimą panašų elgesį, kai vyrai susiduria su nauja patele. Palaikydami pažeidimą, vyrai parodė sumažėjusį į nerimą panašų elgesį su EPM, vertindami kaip sumažintą uždarose rankose praleisto laiko procentą (p = 0.012; 6 pav) ir padidėjęs praleistų rankų laiko procentas (p = 0.023; 6 pav), palyginti su netikrais vyrais. Daliniai pažeidimai neturėjo reikšmingo poveikio. Šie duomenys papildomai patvirtina, kad pažeidimas sumažino į nerimą panašų elgesį.

6 pav 

Oreksino pažeidimai sumažino į nerimą panašų elgesį padidėjusiame labirinte. Pažeistiems vyrams sumažėjo laikas, praleistas uždarose rankose (kairėje), ir padidėjo laikas, praleistas atvirose rankose (dešinėje). * žymi reikšmingą skirtumą ...
„cFos“ išraiška

Siekiant įvertinti, ar endogeninis oreksinas prisideda prie poravimosi sukeltų neuronų aktyvacijos oreksinuose inervuotuose smegenų regionuose, atlikta poravimosi sukeltos cFos ekspresijos VTA, NAc šerdyje ir apvalkale, mPOA ir mPFC analizė. Lyginant tiek su pažeidimais, tiek su pasklidusiais vyrais, poravimasis padidino cFos visose analizuotose smegenų srityse, palyginti su nesubrendusiomis kontrolinėmis grupėmis (Lentelė 2). Pažeidimai nepaveikė nervų aktyvacijos, nes fiktyvūs ir pažeidžiami gyvūnai nesiskyrė nuo pradinės padėties ar poravimosi sukeltos cFos ekspresijos.

Lentelė 2 

Poravimasis sukėlė cFos fiktyviose, dalinėse ir pažeidimų grupėse, palyginti su tos pačios pažeidimo būklės neporinėmis kontrolinėmis medžiagomis.

Diskusija

Šiais tyrimais buvo tiriamas endogeninio oreksino vaidmuo žiurkių patinų lytiniuose santykiuose ir motyvacijoje. Buvo nustatyta, kad oreksinas nėra būtinas nei seksualinei motyvacijai, nei pasirodymui. Oreksino neuronai aktyvuojami moteriško stimulo dėka, nepriklausomai nuo moters hormoninės būklės ar vyro seksualinės patirties. Be to, endogeninio oreksino pašalinimas atliekant specifinius oreksino ląstelių pažeidimus sumažino į nerimą panašų elgesį ir palengvino seksualinį elgesį seksualiai naiviems vyrams. Taigi šio tyrimo rezultatai patvirtina oreksino vaidmenį jaudinantis (de Lecea ir kt., 2006; Harris ir Aston-Jones, 2006; Sakurai, 2007; Boutrel ir kt., 2009; „Furlong and Carrive“, „2009“; Furlong ir kt., 2009) ir nerimas (Suzuki ir kt., 2005; Davis ir kt., 2009; Li ir kt., 2010), tačiau nepalaiko kritinio oreksino vaidmens seksualinėje motyvacijoje ar vaidmenyje.

Šių tyrimų rezultatai papildomai paaiškina endogeninio oreksino vaidmenį ir akivaizdžius prieštaringus ankstesnių tyrimų duomenis, tiriančius oreksino vaidmenį vyrų lytiniame elgesyje, naudojant farmakologines priemones. Intrageninio oreksino A infuzijos mPOA metu padidino seksualinį susijaudinimą ir pagerino lytinį potraukį, o tai rodo, kad oreksinas gali veikti mPOA, kad padidintų seksualinio elgesio motyvaciją ir efektyvumą (Gulia ir kt., 2003). Tačiau, priešingai, ICV infuzijos su orexin-A susilpnino seksualinę motyvaciją ir susijaudinimą (Bai ir kt., 2009), o oreksino receptorių antagonistas neturėjo jokio poveikio seksualiniam susijaudinimui (Bai ir kt., 2009), nurodant endogeninį oreksiną gali nepaveikti seksualinės motyvacijos. Galiausiai buvo įrodyta, kad ORX1 blokada sisteminėmis injekcijomis tik šiek tiek pablogina kopuliacinę veiklą (Muschamp ir kt., 2007). Iš šių prieštaringų tyrimų galima padaryti keletą išvadų. Pirmiausia, egzogeninio oreksino-A vartojimas gali paveikti elgesį, tačiau ORX1 blokada neturi esminio poveikio, o tai rodo, kad endogeninis oreksinas vaidina nedidelį vaidmenį reguliuojant vyrų seksualinį elgesį (Bai ir kt., 2009). Dabartiniai rezultatai patvirtina šią galimybę. Dabartiniai tyrimai, naudojant oreksino ląstelėms būdingus pažeidimus, pašalina oreksiną, rodo, kad endogeninis oreksinas nėra būtinas seksualinei motyvacijai ar atlikimui, kaip rodo „Bai“ ir kt. (2009). Tačiau svarbu pažymėti, kad oreksino pažeidimų įtakos lytinėms motyvacijoms kilimo ir tūpimo tako metu gali trūkti dėl to, kad gyvūnai buvo įgiję seksualinės patirties prieš atlikdami seksualinės motyvacijos testus, todėl kilimo ir tūpimo tako bandymas galėjo būti nepakankamas. į vyrų seksualinę patirtį. Būsimi eksperimentai gali išnagrinėti šį įspėjimą išbandydami oreksino pažeidimų poveikį seksualinei motyvacijai naiviems vyrams.

Taip pat yra įmanoma, kad du oreksino ligadai ir du oreksino receptorių potipiai (ORX1 ir ORX2; Sakurai ir kt., 1998) gali reguliuoti seksualinį elgesį priešingomis kryptimis. Taikant oreksino ląstelių pažeidimo metodus, šiame tyrime buvo pašalinti abiejų oreksino receptorių potipių (oreksino-A ir B) ligandai. Du receptorių potipiai yra išreikšti skirtingose ​​smegenų srityse (Trivedi ir kt., 1998; Marcus ir kt., 2001) ir buvo įrodyta, kad jie skirtingai reguliuoja lazdelės sukeltų kokaino paieškų atmintį (Smith et al., 2009). Ankstesniuose seksualinio elgesio tyrimuose daugiausia dėmesio buvo skiriama oreksino A ir ORX1 vaidmeniui (žr. Diskusiją aukščiau). Tyrimuose iki šiol naudojamas oreksino receptorių antagonistas SB334867 konkrečiai nukreiptas į ORX1, kuris turi didelį afinitetą oreksinui A ir žymiai mažesnį afinitetą oreksinui B (Sakurai ir kt., 1998). Panašiai ankstesniuose tyrimuose oreksinas-A buvo naudojamas kaip egzogeninis oreksinas (Gulia ir kt., 2003; Bai ir kt., 2009). Ateities tyrimai reikalingi ištirti oreksino-B ir ORX2 vaidmenį reguliuojant vyrų seksualinį elgesį.

Dabartinis tyrimas patikrino ilgalaikio oreksino praradimo poveikį. Muschamp et al. (2007) pasiūlė, kad ilgalaikis oreksino kiekio sumažėjimas po kastracijos gali sukelti seksualinės motyvacijos ir veiklos praradimą. Ši hipotezė buvo paneigta dabartinių išvadų, nes oreksino ląstelių pažeidimai nesumažino seksualinės motyvacijos ar veiklos. Gali būti, kad ilgalaikis oreksino praradimas dabartiniame tyrime galėjo sąlygoti kompensacinius mechanizmus, nors poravimosi sukeltos nervų aktyvacijos pokyčiai grandinėje, tarpininkaujančioje seksualinio elgesio metu, nebuvo nustatyti. Nepaisant to, akivaizdu, kad sumažėjęs oreksino kiekis arba jo trūkumas neužkerta kelio seksualiniam elgesiui. Be to, dabartinio tyrimo rezultatai nepatvirtina pagrindinio oreksino vaidmens sukeliant cFos ekspresiją seksualiniu elgesiu. Aiškiai nustatyta, kad oreksinas prisideda prie VTA neuronų aktyvacijos (Korotkova ir kt., 2003; Borgland et al., 2006; Narita ir kt., 2006; Vittoz et al., 2008). Tačiau oreksino ląstelių pažeidimai neužblokavo poravimosi sukeltų nervų aktyvacijos VTA ar kituose analizuojamuose su atlygiu susijusiuose smegenų regionuose, nepaisant to, kad fiktyviuose vyruose yra oreksino-imunoreaktyvių skaidulų, esančių arti aktyvuotų neuronų. Taigi poravimosi sukeltas nervų aktyvinimas šiuose smegenų regionuose neatrodo priklausomas nuo oreksino veikimo.

Šiek tiek netikėtas dabartinio tyrimo atradimas buvo oreksino pažeidimų poveikis palengvinant seksualinio elgesio atvejus seksualiai naiviems, bet nepatyrusiems gyvūnams. Įrodyta, kad tai koreliuoja su į nerimą panašaus elgesio sumažėjimu. Todėl oreksino pažeidimų poveikis seksualinei motyvacijai ir darbingumui gali būti antrinis, palyginti su jo poveikiu nerimui ir susijaudinimui. Iš tikrųjų ankstesni tyrimai rodo oreksino vaidmenį nerimo srityje, nes ICV orexin-A infuzija pelėms sumažino EPM atvirų rankų laiką (Suzuki ir kt., 2005). Orexin-A infuzija į paraventrikulinį žiurkių patalo thalamus branduolį sumažino laiką, praleistą atvirojo lauko kameros centre, ir sumažino naujų objektų tyrinėjimą, tai rodo, kad oreksinas gali būti susijęs su nerimą primenančiu elgesiu (Li ir kt., 2010). Be to, dominuojančios žiurkių patinėliai, kuriems būdinga didesnė rizika, atsižvelgiant į EPM, padidino ORX1 mRNR kiekį mPFC (Davis ir kt., 2009). Įrodyta, kad oreksinas keičia atsaką į stresą (Ida ir kt., 1999; Ida ir kt., 2000), o oreksino receptorių stimuliacija padidina kortikotropinų atpalaidavimo faktoriaus išsiskyrimą (Al-Barazanji ir kt., 2001; Singareddy ir kt., 2006), kortikosteroono (Ida ir kt., 2000; Kuru ir kt., 2000) ir adrenokortikotropinis hormonas (Kuru ir kt., 2000). Oreksino antagonistai šiuo metu yra klinikiniuose tyrimuose, skirti gydyti nemigą - sutrikimą, kuris dažnai būna kartu su nerimo sutrikimais („Sullivan“ ir „Neria“, 2009) ir hipotezuojama, kad oreksino antagonistai gali būti naudojami nerimo sutrikimams gydyti (Mathew et al., 2008). Atsižvelgiant į tai, kad daugėja įrodymų, kad oreksinas vaidina nerimą ir susijaudinimą, atrodo, kad oreksino pažeidimai gali palengvinti seksualinio elgesio pradėjimą naiviems vyrams, nes sumažėja į nerimą panašios reakcijos, susijusios su naujo stimulo, ty moters, įvedimu.

Po PFA-DMH ir LHA patyrusių gyvūnų seksualinį susijaudinimą ir seksualinį elgesį pastebimas reikšmingas oreksino neuronų aktyvavimas, atitinkamai, oreksino ląstelių 60 – 80% ir 14 – 33% išreiškiant atitinkamai cFos. Yra daugybė įrodymų, patvirtinančių oreksino neuronų funkcijos dichotomiją oreksino ląstelių populiacijoje, kai PFA-DMH yra kritiškai susijęs su susijaudinimu, o LHA ​​- kritiška dėl elgesio, susijusio su atlygiu (Harris ir kt., 2005; Harris ir Aston-Jones, 2006, „Aston-Jones“, „2009a“). Taigi PFA-DMH oreksino ląstelių suaktyvinimas moteriško stimulo pagrindu patvirtina hipotezę, kad oreksinas yra suaktyvinamas ir yra kritiškai svarbus susijaudinimui, įskaitant seksualinį susijaudinimą naiviems ir patyrusiems vyrams, ir nerimą, susijusį su nauju moterų dirgikliu naiviems vyrams. Tačiau PFA-DMH ląstelės buvo suaktyvintos panašiu lygiu, nepriklausomai nuo vyrų patirties ir moters hormoninės būklės, kas rodo, kad PFA-DMH ląstelės buvo suaktyvinamos bendrojo susijaudinimo metu, o ne konkrečiai dėl seksualinio susijaudinimo. Be to, mūsų tyrimai nevisiškai patvirtina, kad egzistuoja visiškai dichotominė oreksino ląstelių populiacija, nes buvo reikšmingai suaktyvinta LHA po visų lytinio susijaudinimo ir atlikimo parametrų poveikio, nepriklausomai nuo to, ar elgesys buvo susijęs su atlygiu. Taigi, patyrusiems vyrams, paveiktiems patekusiai moteriai, oreksino ląstelių aktyvacija LHA buvo lygi, palyginti su patyrusiais vyrais, kurie kopuliavo ejakuliacijai. Tačiau tik pastaroji grupė sudarys sąlyginę vietą poravimuisi (Tenk ir kt., 2009); rodo, kad kopuliacija ejakuliacija yra labiau naudinga nei kiti poravimosi elementai. Dabartiniame tyrime nebuvo konkrečiai patikrintas oreksino vaidmuo lytiniuose santykiuose; todėl norint išspręsti šį klausimą reikalingi būsimi tyrimai.

Apibendrinant, šių tyrimų rezultatai rodo, kad oreksinas neturi lemiamos reikšmės nei seksualinei veiklai, nei motyvacijai. Buvo įrodyta, kad oreksino ląstelių pažeidimai mažina nerimą, o tai rodo, kad endogeninis oreksinas didina nerimą. Be to, oreksino pašalinimas palengvino seksualiai naivių vyrų seksualinį elgesį, o tai rodo, kad endogeninis oreksinas gali slopinti poravimosi pradėjimą, galbūt padidindamas nerimą reaguodamas į naują stimulą, ty moterį. Šios išvados išsamiau išaiškina seksualinės veiklos ir nerimo nervų grandinę ir prideda prie vis gausėjančios literatūros apie oreksino vaidmenį tarpininkaujant susijaudinimui ir nerimui.

Padėka

Šis tyrimas buvo remiamas iš Nacionalinių sveikatos institutų (R01 DA014591), Kanados sveikatos tyrimų institutų (RN 014705) ir Kanados nacionalinių mokslų ir inžinerinių tyrimų tarybos (Discovery Grant (341710)) subsidijų LMC.

Išnašos

Leidėjo atsisakymas: Tai PDF failas iš neregistruoto rankraščio, kuris buvo priimtas paskelbti. Kaip paslauga mūsų klientams teikiame šią ankstyvą rankraščio versiją. Rankraštis bus kopijuojamas, užrašomas ir peržiūrimas gautas įrodymas, kol jis bus paskelbtas galutinėje cituotojoje formoje. Atkreipkite dėmesį, kad gamybos proceso metu gali būti aptiktos klaidos, kurios gali turėti įtakos turiniui, ir visi su žurnalu susiję teisiniai atsakymai.

Nuorodos

  1. Agmo A. Vyrų žiurkių lytinis elgesys. Brain Res Brain Res Protoc. 1997: 1: 203 – 209. [PubMed]
  2. Al-Barazanji KA, Wilson S, Baker J, Jessop DS, Harbuz MS. Centrinis oreksinas-A suaktyvina pagumburio-hipofizės-antinksčių ašį ir sąmoningoms žiurkėms stimuliuoja pagumburio kortikotropiną atpalaiduojantį faktorių ir arginino vazopresino neuronus. J Neuroendokrinolis. 2001; 13: 421 – 424. [PubMed]
  3. „Aston-Jones G“, Smith RJ, „Moorman DE“, Richardson KA. Šoninių pagumburio oreksino neuronų vaidmuo atlygio perdirbime ir priklausomybėje. Neurofarmakologija. „2009a“; „56“ yra „1“: 112 – 121. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  4. „Aston-Jones G“, „Smith RJ“, „Sartor GC“, „Moorman DE“, „Massi L“, „Tahsili-Fahadan P“, „Richardson KA“. Šoniniai pogumburio oreksino / hipokretino neuronai: vaidmuo ieškant atlygio ir priklausomybei. „Brain Res. 2009b; 1314: 74 – 90. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  5. Bai YJ, Li YH, Zheng XG, Han J, Yang XY, Sui N. Orexin A sumažina besąlygišką žiurkių patinų seksualinę motyvaciją. „Pharmacol Biochem Behav“. 2009; 91: 581 – 589. [PubMed]
  6. Bäckberg M, Hervieu G, Wilson S, Meister B. Oreksino receptorių-1 (OX-R1) imunoreaktyvumas chemiškai identifikuotuose pagumburio neuronuose: pagrindinis dėmesys skiriamas oreksinų tikslams, kontroliuojantiems maistą ir vandenį. Eur J. Neurosci. 2002; 15: 315 – 328. [PubMed]
  7. Baldo BA, Daniel RA, Berridge CW, Kelley AE. Oreksino / hipokretino ir dopamino-beta-hidroksilazės imunoreaktyvių pluoštų pasiskirstymas žiurkių smegenų regionuose, skatinantis susijaudinimą, motyvaciją ir stresą. J Comp Neurol. 2003: 464: 220 – 237. [PubMed]
  8. Balfour ME, Yu L, Coolen LM. Seksualinis elgesys ir su lytimi susiję aplinkos ženklai aktyvuoja mesolimbinę sistemą žiurkių patinams. Neuropsichofarmakologija. 2004: 29: 718 – 730. [PubMed]
  9. Benoit SC, Tracy AL, Davis JF, Choi D, Clegg DJ. Naujos oreksigeninių pagumburio peptidų funkcijos: nuo genų iki elgesio. Mityba. 2008; 24: 843 – 847. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  10. Borgland SL, Taha SASF, Fields HL, Bonci A. VTA oreksinas A yra labai svarbus norint sukelti sinapsinį plastiškumą ir elgsenos jautrinimą kokainui. Neuronas. 2006; 49 (4): 589 – 601. [PubMed]
  11. B gurkšnis, Cannella N, de Lecea L. Hipokretino vaidmuo skatinant žadinantį ir į tikslą orientuotą elgesį. „Brain Res. 2009 [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  12. B dalis, Kenny PJ, „Specio SE“, „Martin-Fardon R“, „Markou A“, „Koob GF“, „Lecea L.“ Hipokretino vaidmuo tarpininkaujant streso sukeltam kokaino vartojimo elgesio atkūrimui. „Proc Natl Acad Sci“, JAV A. 2005; 102: 19168 – 19173. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  13. Brobergeris C, „De Lecea L“, „Sutcliffe JG“, Hokfeltas T. Hipokretiną / oreksiną ir melaniną koncentruojančios hormonus ekspresuojančios ląstelės sudaro skirtingas graužikų šoninio pagumburio populiacijas: ryšį su neuropeptidu Y ir su agouti genų susijusiomis baltymų sistemomis. J Comp Neurol. 1998; 402: 460 – 474. [PubMed]
  14. Carter ME, Borg JS, de Lecea L. Smegenų hipokretinai ir jų receptoriai: aliostatinio susijaudinimo tarpininkai. Curr Opin Pharmacol. 2009; 9: 39 – 45. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  15. Chemelli RM, Willie JT, Sinton CM, Elmquist JK, Scammell T, Lee C, Richardson JA, Williams SC, Xiong Y, Kisanuki Y, Fitch TE, Nakazato M, Hammer RE, Saper CB, Yanagisawa M. Narcolepsy in orexin nokauto peles. : miego reguliavimo molekulinė genetika. Ląstelė. 1999; 98: 437 – 451. [PubMed]
  16. Chen CT, Dun SL, Kwok EH, Dun NJ, Chang JK. Oreksino A tipo imunoreaktyvumas žiurkių smegenyse. „Neurosci Lett“. 1999; 260: 161 – 164. [PubMed]
  17. Choi DL, Davis JF, Fitzgerald ME, Benoit SC. Oreksino-A vaidmuo maisto motyvacijos, atlyginimų pagrindu maitinamo elgesio ir maisto sukeltų neuronų aktyvacijos žiurkėse. Neurologija. 2010: 167: 11 – 20. [PubMed]
  18. Davis JF, Krause EG, Melhorn SJ, Sakai RR, Benoit SC. Dominuojančios žiurkės yra natūralios rizikos prisiėmėjos ir turi didesnę motyvaciją atlyginti už maistą. Neuromokslas. 2009; 162: 23 – 30. [PubMed]
  19. de Lecea L, Jones BE, Boutrel B, Borgland SL, Nishino S, Bubser M, DiLeone R. Priklausomybė ir susijaudinimas: alternatyvūs pagumburio peptidų vaidmenys. J. Neurosci. 2006; 26 (41): 10372 – 10375. [PubMed]
  20. de Lecea L, Kilduff TS, Peyron C, Gao X, Foye PE, Danielson PE, Fukuhara C, Battenberg EL, Gautvik VT, Bartlett FS, 2nd, Frankel WN, van den Pol AN, Bloom FE, Gautvik KM, Sutcliffe JG. Hipokretinai: hipotalamui specifiniai peptidai, turintys neuroekscitacinį aktyvumą. „Proc Natl Acad Sci“, JAV A. 1998; 95: 322 – 327. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  21. „Dewsbury DA“. Žiurkių (Rattus norvegicus) kopacinis elgesys kaip ankstesnės kopuliacijos patirties funkcija. Gyvūnų elgesys. 1969; 17: 217 – 223. [PubMed]
  22. Fadelis J, Deutch AY. Oreksino ir dopamino sąveikos anatominiai substratai: šoninės pagumburio projekcijos į ventralinę pagrindinę sritį. Neuromokslas. 2002; 111: 379 – 387. [PubMed]
  23. Frederickas-Duus D, Guyton MF, Fadelis J. Maisto sukeltas žievės acetilcholino išsiskyrimo padidėjimas reikalauja oreksino perdavimo. Neuromokslas. 2007; 149: 499 – 507. [PubMed]
  24. Furlong TM, Carrive P. Dėl neurotoksinių pažeidimų, esančių periferiniame hipotalame, panaikinamos sąlygotos baimės širdies ir kraujagyslių bei elgesio reakcijos į kontekstą, bet ne suvaržymas. „Brain Res. 2007; 1128: 107 – 119. [PubMed]
  25. Furlong TM, Vianna DM, Liu L, Carrive P. Hipokretinas / oreksinas prisideda prie kai kurių, bet ne visų, streso ir susijaudinimo formų raiškos. Eur J Neurosci. 2009; 8: 1603 – 1614. [PubMed]
  26. Geraščenko D, Kohls MD, Greco M, Waleh NS, Salin-Pascual R, Kilduff TS, Lappi DA, Shiromani PJ. Hipokretino-2-saporino šoninio pogumburio pažeidimai sukelia žiurkėms panašų į narkolepsinį miegą. J Neurosci. 2001; 21: 7273 – 7283. [PubMed]
  27. „Gulia KK“, „Mallick HN“, „Kumar“ VM. Orexin A (hypocretin-1) vartojimas medialinėje priešoptinėje srityje sustiprina žiurkių patinų seksualinį elgesį. Neuromokslas. 2003; 116: 921 – 923. [PubMed]
  28. Hagan JJ, Leslie RA, Patel S, Evans ML, Wattam TA, Holmes S, Benham CD, Taylor SG, Routledge C, Hemmati P, Munton RP, Ashmeade TE, Shah AS, Hatcher JP, Hatcher PD, Jones DN, Smith MI , „Piper DC“, „Hunter AJ“, „Porter RA“, „Upton N.“ Orexin A suaktyvina lokusinio kaušelio ląstelių degimą ir padidina žiurkės susijaudinimą. „Proc Natl Acad Sci“, JAV A. 1999; 96: 10911 – 10916. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  29. Harris GC, Aston-Jones G. Arouzija ir atlygis: oreksino funkcijos dichotomija. Tendencijos Neurosci. 2006: 29: 571 – 577. [PubMed]
  30. Harris GC, Wimmer M, Aston-Jones G. Šoninių pagumburio oreksino neuronų vaidmuo ieškant atlygio. Gamta. 2005; 437 (7058): 556 – 559. [PubMed]
  31. „Horvath TL“, „Peyron C“, „Diano S“, „Ivanov A“, „Aston-Jones G“, „Kilduff TS“, „van Den Pol AN“. Hipokretino (oreksino) aktyvacija ir sinapsinė inervacija lokus coeruleus noradrenerginėje sistemoje. J Comp Neurol. 1999; 415: 145 – 159. [PubMed]
  32. Ida T, Nakahara K, Katayama T, Murakami N, Nakazato M. Apetitą stimuliuojančio neuropeptido, oreksino ir neuropeptido Y šoninių smegenų kraujotakos injekcijų poveikis įvairiai žiurkių elgsenai. „Brain Res. 1999; 821: 526 – 529. [PubMed]
  33. Ida T, Nakahara K, Murakami T, Hanada R, Nakazato M, Murakami N. Galimas oreksino dalyvavimas streso reakcijose žiurkėms. Biochem Biophys Res Commun. 2000; 270: 318 – 323. [PubMed]
  34. Korotkova TM, Sergeeva OA, Eriksson KS, Haas HL, Brown RE. Ventiliacinio faktorinės srities dopaminerginių ir nondopaminerginių neuronų sužadinimas oreksinais / hipokretinais. J Neurosci. 2003; 23 (1): 7 – 11. [PubMed]
  35. „Kuru M“, „Ueta Y“, „Serino R“, „Nakazato M“, „Yamamoto Y“, „Shibuya I“, „Yamashita H.“. Centralizuotai vartojamas oreksinas / hipokretinas aktyvina žiurkių HPA ašį. Neuroreport. 2000; 11: 1977 – 1980. [PubMed]
  36. Li Y, Li S, Wei C, Wang H, Sui N, Kirouac GJ. Emocinio elgesio pokyčiai, atsirandantys dėl oreksino mikroinjekcijų talamalo paraventrikuliniame branduolyje. „Pharmacol Biochem Behav“. 2010; 95: 121 – 128. [PubMed]
  37. Lin L, Faraco J, Li R, Kadotani H, Rogers W, Lin X, Qiu X, de Jong PJ, Nishino S, Mignot E. Miego sutrikimo šunų narkolepsiją sukelia hipokretino (oreksino) receptoriaus 2 geno mutacija. . Ląstelė. 1999; 98: 365 – 376. [PubMed]
  38. Lopez HH, Olster DH, Ettenberg A. Seksualinė motyvacija patinų patinams: pirminių paskatų ir kopuliacinės patirties vaidmuo. Hormas Behavas. 1999; 36: 176 – 185. [PubMed]
  39. Marcus JN, Aschkenasi CJ, Lee CE, Chemelli RM, Saper CB, Yanagisawa M, Elmquist JK. Oreksino receptorių 1 ir 2 diferencinė raiška žiurkių smegenyse. J Comp Neurol. 2001; 435: 6 – 25. [PubMed]
  40. Martin G, Fabre V, Siggins GR, de Lecea L. Hipokretinų sąveika su neurotransmiteriais branduolyje accumbens. Reguliavimas 2002: 104: 111 – 117. [PubMed]
  41. „Mathew SJ“, „Price RB“, „Charney DS“. Naujausi nerimo sutrikimų neurobiologijos pasiekimai: naujų vaistų poveikis. Am J Med Genet C Semin Med Genet. 2008; 148C: 89 – 98. [PubMed]
  42. „Muschamp JW“, „Dominguez JM“, „Sato SM“, „Shen RY“, „Hull EM“. Hipokretino (oreksino) vaidmuo vyrų seksualiniame elgesyje. J Neurosci. 2007; 27: 2837 – 2845. [PubMed]
  43. Nair SG, Golden SA, Shaham Y. Hipokretino 1 receptorių antagonisto SB 334867 diferencinis poveikis labai riebaus maisto savaiminiam vartojimui ir maisto, kurio siekiama žiurkėms, atstatymui. Br J Pharmacol. 2008; 154: 406 – 416. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  44. Narita M, Nagumo Y, Hashimoto S, Khotib J, Miyatake M, Sakurai T, Yanagisawa M, Nakamachi T, Shioda S, Suzuki T. Tiesioginis oreksinerginių sistemų dalyvavimas aktyvinant mezolimbinio dopamino kelią ir su juo susijęs morfino sukeltas elgesys. J Neurosci. 2006; 26: 398 – 405. [PubMed]
  45. Nishino S, Ripley B, Overeem S, Lammers GJ, Mignot E. Hipokretino (oreksino) trūkumas žmogaus narkolepsijoje. Lancetas. 2000; 355: 39 – 40. [PubMed]
  46. Paxinos G, Watson C. Stereotaksinių koordinačių žiurkės smegenys. San Diegas, Kalifornija: akademinė spauda; 1998.
  47. Peyron C, Faraco J, Rogers W, Ripley B, Overeem S, Charnay Y, Nevsimalova S, Aldrich M, Reynolds D, Albin R, Li R, Hungs M, Pedrazzoli M, Padigaru M, Kucherlapati M, Fan J, Maki R , Lammers GJ, Bouras C, Kucherlapati R, Nishino S, Mignot E. Mutacija ankstyvosios narkolepsijos atveju ir hipokretino peptidų apibendrinto nebuvimo žmogaus narkolepsinėse smegenyse atveju. Nat Med. 2000; 6: 991 – 997. [PubMed]
  48. Peyron C, Tighe DK, van den Pol AN, de Lecea L, Heller HC, Sutcliffe JG, Kilduff TS. Neuronai, turintys hipokretino (oreksino) projektą į kelias neuronų sistemas. J Neurosci. 1998: 18: 9996 – 10015. [PubMed]
  49. Sakurai T. Oreksinų ir oreksinų receptorių vaidmuo centriniame šėrimo elgesio ir energetinės homeostazės reguliavime. CNS „Neurol Disord“ vaistų tikslai. 2006; 5: 313 – 325. [PubMed]
  50. Sakurai T. Oreksino (hipokretino) nervinė grandinė: miego ir budrumo palaikymas. Nat Rev Neurosci. 2007; 8: 171 – 181. [PubMed]
  51. „Sakurai T“, „Amemiya A“, „Ishii M“, „Matsuzaki I“, „Chemelli RM“, „Tanaka H“, „Williams SC“, „Richardson JA“, „Kozlowski GP“, „Wilson S“, „Arch JR“, „Buckingham RE“, „Haynes AC“, „Carr SA“, „Annan RS“, „McNulty DE“, „Liu WS“. , Terrett JA, Elshourbagy NA, Bergsma DJ, Yanagisawa M. Oreksinai ir oreksinų receptoriai: hipotalaminių neuropeptidų ir su G baltymais sujungtų receptorių šeima, reguliuojanti šėrimo elgseną. Ląstelė. 1998; 92: 573 – 585. [PubMed]
  52. Satoh S, Matsumura H, Fujioka A, Nakajima T, Kanbayashi T, Nishino S, Shigeyoshi Y, Yoneda H. FOS ekspresija oreksino neuronuose po musopimolinės perfuzijos priešoptinėje srityje. Neuroreport. 2004; 15: 1127 – 1131. [PubMed]
  53. Siegel JM. Narkolepsija: pagrindinis hipokretinų (oreksinų) ląstelių vaidmuo. 1999; 98: 409 – 412. [PubMed]
  54. Singareddy R, Uhde T, Commissaris R. Diferencinis hipokretinų poveikis vien tik triukšmui ir potencialiems stulbinantiems atsakams. Physiol Behav. 2006; 89: 650 – 655. [PubMed]
  55. Smith RJ, Žr. RE, Aston-Jones G. Oreksino / hipokretino signalizacija esant oreksino 1 receptoriui reguliuoja iššaukiamą kokaino paiešką. Eur J Neurosci. 2009; 30: 493 – 503. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  56. Saliamonas A, De Fanti BA, Martinezas JA. Periferinis grelinas sąveikauja su oreksino neuronais, perduodamas gliukozę. Regul Pept. 2007; 144: 17 – 24. [PubMed]
  57. Sullivan GM, Neria Y. Farmakoterapija potrauminio streso sutrikimo metu: atsitiktinių imčių kontroliuojamų tyrimų duomenys. „Curr Opin“ tiria narkotikus. 2009; 10: 35 – 45. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  58. Suzuki M, Beuckmann CT, Shikata K, Ogura H, Sawai T. Orexin-A (hypocretin-1) gali dalyvauti kuriant į nerimą panašų elgesį. „Brain Res. 2005; 1044: 116 – 121. [PubMed]
  59. Tenk CM, Wilson H, Zhang Q, Kitchers KK, Coolen LM. Seksualinis atlygis žiurkių patinams: seksualinės patirties poveikis sąlyginėms vietovės nuostatoms, susijusioms su ejakuliacija ir intromis. Horm Behav. 2009: 55: 93 – 97. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  60. Thannickal TC, Moore RY, Nienhuis R, Ramanathan L, Gulyani S, Aldrich M, Cornford M, Siegel JM. Sumažėjęs hipokretino neuronų skaičius žmogaus narkolepsijoje. Neuronas. 2000; 27: 469 – 474. [PubMed]
  61. „Thorpe AJ“, „Cleary JP“, „Levine AS“, „Kotz CM“. Centralizuotai vartojamas oreksinas A padidina žiurkių saldžiųjų granulių motyvaciją. Psichofarmakologija (Berl) 2005; 182: 75 – 83. [PubMed]
  62. „Trivedi P“, „Yu H“, „MacNeil DJ“, „Van der Ploeg LH“, „Guan XM“. Oreksino receptorių mRNR pasiskirstymas žiurkės smegenyse. FEBS Lett. 1998; 438: 71 – 75. [PubMed]
  63. Vittoz NM, Schmeichel B, Berridge CW. Hipokretinas / oreksinas pirmiausia suaktyvina kaukolės kaukolės vidurinės skrandžio srities dopamino neuronus. Eur J Neurosci. 2008; 28: 1629 – 1640. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  64. Vienos ląstelės RT-PGR geno ekspresijos profiliavimas ūmiai, Volgin DV, Swan J, Kubin L. disocijuoti ir imunocitochemiškai identifikuoti centriniai neuronai. J. Neurosci metodai. 2004; 136: 229 – 236. [PubMed]