Okseksinas tarpininkauja lytinio elgesio inicijavimui lytiniu požiūriu naivių žiurkių patelėms, tačiau nėra lemiamas seksualinės veiklos (2011) veiksnys.

Horm Behav. Autoriaus rankraštis; pasiekiama PMC 2011 rugpjūčio 1 d.

Paskelbta galutine redaguota forma:

PMCID: PMC2917508

Galutinę leidėjo redaguotą šio straipsnio versiją galite rasti tinklalapyje Horm Behav

Žr. Kitus PMC straipsnius citata paskelbtas straipsnis.

Eiti į:

Abstraktus

Pagumburio neuropeptidas oreksinas skatina susijaudinimą, miegą ir natūraliai naudingą elgesį, įskaitant maisto vartojimą. Vyrų seksualinį elgesį keičia oreksino receptorių-1 agonistai arba antagonistai, o tai rodo oreksino-A vaidmenį šiame natūraliai naudingame elgesyje. Tačiau šiuo metu neaiškus specifinis endogeninio oreksino-A arba B vaidmuo skirtinguose vyrų seksualinio elgesio elementuose. Todėl dabartiniuose tyrimuose buvo naudojami neuronų aktyvacijos ir oreksino ląstelių specifinių pažeidimų žymenys, siekiant patikrinti hipotezę, kad oreksinas yra labai svarbus seksualinei motyvacijai ir žiurkių patinų veiklai. Pirma, cFos ekspresija oreksino neuronuose buvo įrodyta po to, kai buvo pristatyta imli arba neimli patelė be tolesnio aktyvinimo įvairiais poravimosi elementais. Be to, oreksino funkcinis vaidmuo buvo išbandytas naudojant oreksino-B konjuguotą saporiną, dėl kurio pagumburyje atsirado oreksino ląstelių kūno pažeidimų. Pažeidimai buvo padaryti seksualiai naiviems patinams, o vėlesnis seksualinis elgesys buvo užfiksuotas keturių poravimosi bandymų metu. Per pirmuosius, bet ne vėlesnius poravimosi bandymus, patinams, kuriems buvo pažeista liga, buvo sutrumpėjusios delsos prisitvirtinti ir suartėti, o tai rodo, kad pažeidimai palengvino seksualinio elgesio pradžią seksualiai naiviems, bet nepatyrusiems patinams. Taip pat pažeidimai neturėjo įtakos patyrusių vyrų seksualinei motyvacijai, nustatyta atliekant kilimo ir tūpimo tako testus. Galiausiai, padidinto ir labirinto bandymai parodė sumažėjusį nerimą panašų elgesį pažeistiems patinams, o tai patvirtina oreksino vaidmenį nerimo, susijusio su pradiniu naivų gyvūnų patelių poveikiu, poveikiu. Apskritai šios išvados rodo, kad oreksinas nėra labai svarbus patinų seksualinei veiklai ar motyvacijai, tačiau gali turėti įtakos naivių gyvūnų susijaudinimui ir nerimui, susijusiam su seksualiniu elgesiu.

Raktiniai žodžiai: oreksinas, hipokretinas, seksualinis elgesys, kopuliacija, nervų aktyvacija, motyvacija, pagumburis, naujumas, susijaudinimas, nerimas

Įvadas

Oreksinas, taip pat žinomas kaip hipokretinas, yra pagumburio neuropeptidas, labai svarbus maitinantis.de Lecea ir kt., 1998; Sakurai ir kt.; 1998 m, Sakurai, 2006; Benoit ir kt., 2008 m) susijaudinimas ir miegas (Chemelli ir kt., 1999; Lin ir kt., 1999, Sakurai, 2007; Furlong ir Carrive, 2007 m; Furlong ir kt., 2009; Carter et al., 2009). Oreksino neuronai yra lokalizuoti šoninėje pagumburio srityje (LHA) ir periforninėje dorsomedialinėje pagumburio dalyje (PFA-DMH) ir gamina du neuropeptidus – oreksiną-A ir B.de Lecea ir kt., 1998; Sakurai ir kt., 1998). Nustatyta, kad oreksino neuronai projektuojasi į smegenų struktūras, dalyvaujančias tarpininkaujant susijaudinimui, įskaitant locus coeruleus, tuberomammilarinį branduolį ir peduculopontininį tegmentinį branduolį.Peyron ir kt., 1998; Haganas ir kt., 1999; Horvath ir kt., 1999; Baldo ir kt., 2003). Oreksinas taip pat buvo susijęs su atlygiu ir motyvacija, ypač susijusiu su piktnaudžiavimu maistu ir narkotikais (Aston-Jones ir kt., 2009a; Aston-Jones ir kt., 2009bĮrodyta, kad oreksino neuronai apdovanoja susijusias smegenų struktūras mezolimbinėje sistemoje, įskaitant ventralinę tegmentinę sritį (VTA) ir nucleus accumbens (NAc).Peyron ir kt., 1998; „Fadel and Deutch“, „2002“; Martin ir kt., 2002; Baldo ir kt., 2003). Oreksino neuronus aktyvuoja sąlyginiai kontekstiniai ženklai, susiję su maisto ir vaistų atlygiu (Harris ir kt., 2005; de Lecea ir kt., 2006; Choi ir kt., 2010) ir įrodyta, kad jie vaidina atlygį pagrįstą maitinimosi elgseną (Choi ir kt., 2010). Be to, intracerebroventrikulinis (ICV) arba intraperitoninis oreksino receptoriaus 1 (ORX1) antagonisto vartojimas sumažina motyvaciją skaniai valgyti (Thorpe ir kt., 2005; Nair ir kt., 2008), kadangi ICV orexin-A administravimas gali atkurti šią motyvaciją (Boutrel ir kt., 2005).

Oreksino vaidmuo kituose pasitenkinimo elgesiuose šiuo metu neaiškus, nors keli tyrimai rodo, kad oreksinas gali kontroliuoti žiurkių patinų seksualinį elgesį. Anksčiau buvo įrodyta, kad oreksino neuronai aktyvuojami kopuliuojant žiurkių patinams.Muschamp ir kt., 2007). Be to, oreksino-A įvedimas į medialinę priešoptinę sritį (mPOA) pagerino seksualinę veiklą, kurią patvirtina sumažėjęs delsimas atsistoti ir įsiskverbti į vidų, taip pat padidėjęs prisitvirtinimo ir intromisijos dažnis.Gulia ir kt., 2003). Priešingai, ICV oreksino-A vartojimas susilpnino seksualinę motyvaciją, nes sumažino moterų pirmenybę, nors tik labai seksualiai motyvuotiems vyrams.Bai ir kt., 2009 m). Tyrimai, kuriuose buvo naudojami ORX1 antagonistai, taip pat parodė prieštaringus duomenis, nes sisteminis ORX1 antagonisto vartojimas šiek tiek pablogino lytinę veiklą, padidindamas latentinį intromitavimą, nedarant įtakos kitiems seksualinio elgesio parametrams.Muschamp ir kt., 2007), o ORX1 antagonisto ICV vartojimas neturėjo jokios įtakos seksualinei motyvacijai (Bai ir kt., 2009 m). Kartu šie tyrimai rodo, kad eksogeninio oreksino-A vartojimas turi įtakos seksualinei veiklai ir motyvacijai; tačiau endogeninis oreksinas gali nevaidinti svarbaus vaidmens tarpininkaujant seksualiniam elgesiui (Bai ir kt., 2009 m). Todėl šio tyrimo tikslas buvo nustatyti, ar endogeninis oreksinas yra būtinas žiurkių patinų seksualinei motyvacijai ir našumui.

Pirmiausia buvo nustatyta, kada seksualinio elgesio metu suaktyvėja oreksino neuronai, tikrinant hipotezę, kad oreksino neuronai aktyvuojami įvedus apdovanojantį stimulą. Be to, kadangi buvo įrodyta, kad seksualinė patirtis daro įtaką seksualinei veiklai (Dewsbury, 1969) ir naudingas seksualinio elgesio savybes (Tenk ir kt., 2009), buvo nustatyta, ar seksualinė patirtis turi įtakos oreksino neuronų aktyvacijai poravimosi metu. Galiausiai buvo išbandyta, ar oreksinas vaidina svarbų vaidmenį seksualinėje motyvacijoje ir veikloje, naudojant specifinius oreksino neuronų pažeidimus.

Medžiagos ir metodai

Suaugę Sprague Dawley žiurkių patinai (200–250 g) buvo gauti iš Harlan (Indianapolis, IN) arba Charles River Laboratories (Sherbrooke, Kvebekas, Kanada) ir buvo laikomi atskirai arba poromis, atsižvelgiant į individualų eksperimentą (žr. toliau) plexiglas narvuose. Kolonijos kambarys buvo palaikomas 12/12 atvirkštiniu šviesos ir tamsos ciklu (šviesa išjungiama 10 val.), buvo galima gauti maisto ir vandens. ad libitum išskyrus elgesio testo metu. Sprague-Dawley žiurkių patelės buvo gautos iš Harlan (Indianapolis, IN) arba Charles River Laboratories (Sherbrooke, Kvebekas, Kanada) buvo dvišališkai pašalintos kiaušidės ir implantuotos po oda 5% 17-β-estradiolio benzoato silastinėmis kapsulėmis. Seksualinis imlumas buvo sukeltas po oda progesterono injekcijomis (500 µg 0.1 ml sezamo aliejaus) maždaug 4 valandas prieš poravimosi seansus. Visas procedūras patvirtino Sinsinačio universiteto ir Vakarų Ontarijo universiteto Gyvūnų priežiūros komitetai ir jos atitinka Nacionalinio sveikatos instituto ir Kanados gyvūnų priežiūros tarybos nustatytas gaires. Visi elgsenos testai buvo atlikti per pirmąją tamsiosios fazės pusę esant silpnam raudonam apšvietimui, išskyrus atvejus, kai nurodyta kitaip.

Eksperimentinis dizainas

cFos ekspresijos tyrimai

Žiurkių patinai (n=48) buvo laikomi atskirai, o pusė gyvūnų lytinės patirties įgijo namų narve per 5 poravimosi seansus du kartus per savaitę. Poravimosi testai buvo atlikti namų narve, kad būtų pašalintas susijaudinimas ir cFos ekspresija, kurią sukelia kitokia poravimosi arena ir sąlyginių ženklų, susijusių su ankstesniu poravimusi, poveikis (Balfour ir kt., 2004). Imli patelė buvo įvesta į namų narvą ir patinams leista poruotis iki vienos ejakuliacijos arba 60 minučių. Kiekvieno testo metu buvo stebimas seksualinis elgesys. Buvo užregistruotas bendras prisikėlimų ir įžangų skaičius, taip pat delsos iki pirmojo įsitvirtinimo ir įžangos (laikas nuo imlios moters pasirodymo iki pirmojo prisistatymo arba įžangos) ir ejakuliacija (laikas nuo pirmosios įžangos iki ejakuliacijos). (Agmo, 1997). Likusi pusė gyvūnų liko seksualiai naivūs. Šie gyvūnai buvo laikomi toje pačioje patalpoje kaip ir seksualiai patyrę patinai, buvo tvarkomi ir veikiami kvapų bei garsų, susijusių su poravimusi, tačiau nesiporavo. Naivūs ir patyrę gyvūnai buvo suskirstyti į 6 eksperimentines grupes (n = 4 grupėje). Į 6 naivias ir patyrusias grupes buvo įtrauktos: kontroliniai patinai, nesusiję su seksualiniu elgesiu (namų narvas); patinai, 15 minučių veikiami ne imli patelė namų narve (anestrozinė patelė). Patinai galėjo tyrinėti ir bendrauti, tačiau nesiporavo dėl patelių imlumo stokos; patinai, veikiami imlios patelės kvapų, patalpintų į vielinio tinklo dėžutę ant namų narvo 15 minučių (Estrous Female); patinai, kurie demonstravo antgalius, bet ne intromisijas ar ejakuliaciją su makšties kaukėmis patelėmis (Mountas); vyriškos lyties atstovai, kurie rodydavo tik apkabas ir įžangas (Intromission); ir patinai, kurie susiporavo su viena ejakuliacija (ejakuliacija). Praėjus valandai po bandymo pabaigos, patinai buvo paaukoti, kad būtų galima analizuoti cFos ekspresiją. Seksualiai patyrusios grupės buvo suderintos pagal seksualinio elgesio parametrus ir prieš galutinį testą reikšmingų skirtumų tarp grupių nebuvo. Be to, galutinio testo metu nebuvo reikšmingų skirtumų tarp naivių ir patyrusių grupių tvirtinimų skaičiumi ir įžangomis.

Perfuzijos: cFos ekspresija

Visi patinai buvo giliai anestezuoti natrio pentobarbitoliu (270 mg/ml) ir transkardiališkai perfuzuoti 4% paraformaldehidu (500 ml; PFA). Po perfuzijos smegenys buvo nedelsiant pašalintos ir vieną valandą fiksuotos tame pačiame fiksatoriuje, tada perkeltos į 20% sacharozės tirpalą, kad būtų apsaugota nuo šalčio. Smegenys buvo perpjautos ant šaldymo mikrotomo (Microm, Walldorf, Vokietija) 35 µm vainikinėse pjūviuose ir surinktos į 4 lygiagrečias dalis krioprotektanto tirpale (30 % sacharozės 0.1 M PB, kuriame yra 30 % etilenglikolio ir 0.01 % natrio azido) ir laikomos. –20°C temperatūroje iki tolesnio apdorojimo.

Imunohistochemistry

Visos inkubacijos buvo atliekamos kambario temperatūroje, švelniai maišant. Laisvai plūduriuojančios sekcijos buvo plačiai plaunamos 0.1, 1 M fiziologiniu tirpalu buferiniu natrio fosfatu (PBS). Sekcijos buvo užblokuotos XNUMX% H2O2 (30 % pradinis tirpalas) PBS 10 minučių, po to vėl gausiai nuplaunamas PBS. Sekcijos buvo inkubuojamos su inkubaciniu tirpalu (PBS, kuriame yra 0.1, 0.4% galvijų serumo albumino ir 100, 1% Triton X-XNUMX) XNUMX valandą. Pirminės antikūnų inkubacijos buvo atliktos inkubaciniame tirpale per naktį kambario temperatūroje. Po dažymo sekcijos buvo nuplaunamos PBS, pritvirtintos ant pripildytų stiklelių ir padengtos dibutilftalato ksilenu (DPX).

cFos / Orexin

Viena sekcijų serija buvo imuniniu būdu apdorota cFos ir oreksinui. Pjūviai buvo inkubuojami per naktį su triušiu išaugintu antikūnu, atpažįstančiu cFos (triušio anti-cFos, sc-52; 1:10 000, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA), po to 1 valandą inkubuojama su biotiniluotu ožkų anti-triušiu (1:500). , Vector Laboratories, Burlingame, CA) ir avidino krienų peroksidazės kompleksą (1:1000, ABC rinkinys, Vector Laboratories, Burlingame, CA). Pjūviai buvo inkubuojami 10 minučių 0.02% diaminobenzidine (DAB) (Sigma, Sent Luisas, MO) 0.1 M fosfatiniame buferyje (PB), kuriame yra 0.012% vandenilio peroksido ir 0.08% nikelio sulfato, todėl susidaro mėlynai juodas reakcijos produktas. Tada sekcijos buvo inkubuojamos per naktį su triušio išaugintu antikūnu, atpažįstančiu oreksiną-A (triušio anti-oreksinas-A, H-003–30; 1:20 000, Phoenix Pharmaceuticals, Burlingame, CA), po to 1 valandą inkubuojama su biotiniluotu ožkų antikūnu. -triušis ir ABC, kaip aprašyta aukščiau. Galiausiai sekcijos buvo inkubuojamos 10 minučių su 0.02, 0.1% DAB 0.012, XNUMX M PB, kuriame yra XNUMX, XNUMX% vandenilio peroksido, todėl susidaro rausvai rudas reakcijos produktas.

Visi antikūnai buvo apibūdinti anksčiau (Chen ir kt., 1999; Satoh ir kt., 2004; Solomonas ir kt., 2007 m). Imunohistocheminė kontrolė apėmė pirminių antikūnų praleidimą, Western blot analizę, rodančią atskiras atitinkamo svorio juostas (cFos), ir imunohistocheminio oreksino signalo praradimą su oreksino B-saporino pažeidimais (oreksinu).

Duomenų analizė

cFos / Orexin

Neuronai, pažymėti oreksinu arba oreksinu ir cFos, buvo skaičiuojami abipusiai trijose tipinėse kiekvieno gyvūno dalyse, kuriose, kaip žinoma, yra didžiausias oreksino neuronų populiacijos skaičius (Sakurai ir kt., 1998) apima nuo –2.3 mm iki –3.6 mm nuo bregmos (Paxinos ir Watson, 1998) (1 pav), naudojant traukimo vamzdelį, pritvirtintą prie Leica mikroskopo (Leica Microsystems; Wetzlar Vokietija), stebimas apakintas eksperimentinėms grupėms. PFA-DMH ir LHA buvo apibrėžti pagal fornix vietą (1a pav). Oreksino neuronų, ekspresuojančių cFos, procentai buvo apskaičiuoti ir apskaičiuoti kiekvieno gyvūno pusrutulyje, taip pat apskaičiuoti grupės vidurkiai. Statistinis reikšmingumas tarp grupių buvo nustatytas naudojant dvipusę ANOVA su seksualine patirtimi ir seksualiniu elgesiu paskutinio testo metu kaip faktoriai, po kurių buvo atlikti Fisher's LSD testai su 95% patikimumo lygiu.

1 pav 

Oreksino neuronų vieta pagumburyje. (A) Anatominė oreksino neuronų vieta pagumburyje. (Paxinos ir Watson, 1998), mastelio juosta: 200 µm. (B) Pavieniai pažymėti oreksino neuronai PFA-DMH nesuporuotame kontroliniame gyvūne. (C) Oreksinas ...

Oreksino pažeidimų tyrimai

Chirurgija

Patinai buvo apgyvendinti individualiai ir jiems buvo atliktas vienas poravimosi seansas su imlia patele prieš pažeidimą ir fiktyvią operaciją. Seksualinis elgesys buvo užregistruotas, kaip aprašyta aukščiau, o grupės buvo suderintos pagal poravimosi elgesio parametrus. Žiurkių patinai buvo anestezuoti izofluranu (Abbot Laboratories, St. Laurent, Kvebekas, Kanada), naudojant Surgivet Isotec4 dujų aparatą (Smiths Medical Vet Division, Markham, Ontario, Kanada) ir patalpinti į stereotaksinį aparatą (Kopf Instruments, Tujunga, CA). su dujokauke, dengiančia nosį ir burną, kad būtų palaikoma anestezija. Buvo atliktas pjūvis, siekiant atskleisti kaukolę, o lambda ir bregma buvo rasta ir nustatyta, kad jos yra lygios. Kaukolėje buvo išgręžta skylė, naudojant dremel grąžtą (Dremel, Racine, WI) ir stiklines mikropipetes (40 µm skersmens, World Precision Instruments Inc, Sarasota, FL), užpildytas tiksliniu toksinu oreksino-B saporinu (IT-20, Advanced). Targeting Systems, San Diegas, CA; 200 ng/µL PBS); arba nekonjuguotas toksinas BLANK-saporinas (IT-21, Advanced Targeting Systems, San Diego, CA; 200 ng/µL PBS; fiktyvi kontrolė) buvo nuleistas į pagumburį. Įrodyta, kad šis tikslinis toksinas dideliu afinitetu jungiasi su ląstelėmis, ekspresuojančiomis oreksino receptorių 2 (ORX2), ir žymiai mažesniu afinitetu ląstelėms, ekspresuojančioms ORX1 (Geraščenka ir kt., 2001 m), ir buvo įrodyta, kad jis specifiškai pašalina oreksino neuronus iš pagumburio (Frederick-Duus ir kt., 2007 m). Dvišalės 1 µL infuzijos (2 į pusrutulį) buvo suleistos šiomis koordinatėmis: AP = -2.8 ir -3.2; ML = 0.7 ir 0.8; DV = –9.0 (Paxinos ir Watson, 1998). Po kiekvienos infuzijos adata buvo palikta 3 minutėms, kad būtų galima difuzija. Adatos buvo lėtai pašalinamos, o žaizdos uždaromos žaizdų segtukais. Praėjus dviem savaitėms po pažeidimo operacijos, visi patinai buvo tiriami dėl seksualinės patirties keturių poravimosi bandymų metu, o po to jiems buvo atliktas kilimo ir tūpimo tako ir (arba) pakilimo ir labirinto testas (žr. toliau). Operacijos buvo atliekamos trijose skirtingose ​​​​grupėse, atskirtose keliomis savaitėmis, kad būtų pasiektas pakankamas gyvūnų skaičius vienoje grupėje.

Seksualinis elgesys

Visų patinų seksualinis elgesys buvo tikrinamas per 4 poravimosi seansus, atliekamus kas antrą dieną namų narve. Kiekvieno seanso metu patinai poravosi su imlia patele iki vienos ejakuliacijos arba 60 minučių, atsižvelgiant į tai, kas įvyko anksčiau. Poravimosi elgsena buvo užregistruota taip, kaip aprašyta aukščiau, taip pat buvo apskaičiuotas kopuliacijos efektyvumas [įvedimų skaičius / (montavimo skaičiai + intromissionų skaičiai)]. Statistiniai seksualinės veiklos parametrų skirtumai buvo lyginami tarp pažeistų ir fiktyvių grupių kiekviename tyrime, naudojant vienpusį ANOVA su pažeidimo operacija kaip veiksniu ir Fisher's LSD testu su 95% pasikliovimo lygiu arba, kai tinkama, buvo atlikti neparametriniai testai naudojant Kruskal-Wallis vienpusė ANOVA su pažeidimo operacija kaip veiksnys ir Dunn testas su 95% pasikliovimo lygiu. Be to, kiekvienos grupės duomenys buvo lyginami su duomenimis prieš operaciją, naudojant suporuotus t testus.

Seksualinė motyvacija: kilimo ir tūpimo tako testas

Atlikus seksualinio elgesio testus, dabar seksualiai patyrusių vyrų pogrupis buvo tiriamas dėl seksualinės motyvacijos, naudojant tiesaus kilimo ir tūpimo tako aparatą (MED Associates Inc., St. Albans, VT) (120 cm ilgio); Lopez ir kt., 1999). Patinai priprato prie kilimo ir tūpimo tako aparato per du sekančius 10 minučių bandymus, atliktus tą pačią dieną. Toliau buvo atlikti du bandomieji bandymai. Pirmojo bandymo metu stimuliuojantis gyvūnas (ruja patelė, anestruojanti patelė ar patinas) buvo patalpintas į vartų dėžę su perforuotomis pertvaromis kilimo ir tūpimo tako gale. Stimuliuojančių gyvūnų kvapus į patiną nukreipė ventiliatorius. Eksperimentiniai patinai buvo patalpinti į starto dėžę, atidarytos durelės, kad būtų galima patekti į kilimo ir tūpimo taką, o laikas iki tikslo dėžės buvo užfiksuotas. Pasiekę tikslo langelį, patinai turėjo 30 sekundžių bendrauti su už ekrano esančiu stimuliuojančiu gyvūnu. Po 1 valandos sekė identiškas antrasis bandymas. Statistinis reikšmingumas tarp laiko, kai buvo pasiektas tikslo langelis tarp 1 ir 2 bandymų, buvo analizuojamas naudojant suporuotus t testus su 95 % patikimumo lygiu. Statistinis reikšmingumas tarp grupių buvo nustatytas naudojant vienpusę ANOVA su pažeidimo chirurgija kaip veiksniu, po kurio buvo atlikti Fisher's LSD testai su 95% pasikliovimo lygiu.

Į nerimą panašus elgesys: pakilęs plius labirintas

Dabar seksualiai patyrusių vyrų pogrupis buvo išbandytas dėl į nerimą panašaus elgesio, siekiant nustatyti, ar oreksino pažeidimų poveikis seksualinei veiklai ar motyvacijai atsirado dėl nerimo ar susijaudinimo pokyčių. Šviesos fazės pabaigoje patinai buvo veikiami pakelto plius labirinto aparatu (EPM; MED Associates Inc., St. Albans, VT) ryškiai apšviestoje patalpoje. EPM sudarytas iš 4 50 cm ilgio rankų, besitęsiančių nuo centrinės sankryžos ir buvo pakeltas 75 cm. Dvi labirinto atšakos buvo atviros išorinei aplinkai, o kitos dvi buvo aptvertos tamsiomis 40 cm aukščio dailylentėmis. Gyvūnai buvo patalpinti į EPM ir stebimi penkias minutes. Laikas, praleistas atvirose ir uždarose rankose, ir bendras įėjimų į kiekvieną ranką skaičius buvo užfiksuotas naudojant fotospindulių matricas. Statistinis reikšmingumas tarp grupių buvo nustatytas naudojant vienpusį ANOVA su pažeidimu kaip veiksniu, po kurio buvo atlikti Fisher's LSD testai su 95% pasikliovimo lygiu.

Perfuzijos ir poravimosi sukeltos cFos

Atlikus visus elgsenos tyrimus, visi patinai buvo giliai anestezuoti natrio pentobarbitoliu (270 mg/ml) ir buvo perfuzuoti 500 ml 4% PFA, kad būtų patikrintas pažeidimas, kaip aprašyta anksčiau. Be to, norint patikrinti oreksino pažeidimų poveikį poravimosi sukeltai cFos ekspresijai, fiktyvių ir pažeistų patinų grupės poravosi iki vienos ejakuliacijos. Praėjus valandai po ejakuliacijos, patinai buvo perfuzuoti 4% PFA, kaip aprašyta aukščiau. Pusė šios grupės patinų nebuvo supažindinti su patelėmis ir buvo perfuzuojami iš namų narvo, kad būtų naudojami kaip nesuporuoti kontroliniai gyvūnai.

Imunohistochemistry

Smegenys buvo suskirstytos į 4 lygiagrečias 35 µm vainikinių pjūvių serijas naudojant šaldantį mikrotomą ir saugomos, kaip aprašyta aukščiau. Pažeidimo patikrinimui viena sekcijų, kuriose yra pagumburio iš visų pažeidimo eksperimentų, serija buvo paženklinta oreksinu, naudojant tą patį aukščiau aprašytą triušio anti-orexin-A ir DAB protokolą. Viena poringų gyvūnų sekcijų serija buvo nudažyta cFos ir oreksinu, kaip aprašyta aukščiau.

Pažeidimo patikrinimas

Kiekviename gyvūne oreksino neuronų, imunoreaktyvių oreksinui, skaičius buvo skaičiuojamas abipusiai PFA-DMH ir LHA 3 skyriuose, išreiškiančiose maksimalų oreksino ląstelių skaičių nechirurginėje kontrolėje, nuo –2.3 mm iki –3.6 mm nuo bregmos, kaip aprašyta aukščiau. Ląstelių pusrutulyje vidurkis buvo apskaičiuotas kiekvienam gyvūnui ir apskaičiuoti grupės vidurkiai. Nechirurginiai kontroliniai gyvūnai (iš cFos eksperimentų) buvo naudojami nepažeistiems / pradiniam oreksino neuronų skaičiui nustatyti, o duomenys išreiškiami procentais, palyginti su nechirurginiais kontroliniais patinais (2 pav). Patinai, turintys mažiau nei 20% oreksino ląstelių, palyginti su nechirurginiais kontroliniais gyvūnais, buvo įtraukti į pažeidimo grupę. Gyvūnai, turintys daugiau nei 20%, bet mažiau nei 80%, buvo įtraukti į dalinių pažeidimų grupę. Apsimetinė kontrolė neturėjo reikšmingų oreksino ląstelių skaičiaus pokyčių. Statistinis reikšmingumas tarp fiktyvių, dalinių ir visiškų pažeidimų gyvūnų buvo apskaičiuotas naudojant vienpusį ANOVA ir Fisher's LSD testą su 95% pasikliovimo lygiu.

2 pav 

Pažeidimo patikrinimas. Reprezentatyvūs vaizdai, rodantys oreksino (A) ir MCH (B) ląsteles fiktyviai pažeistame gyvūne, sušvirkščiame BLANK-saporino. Reprezentatyvūs vaizdai, rodantys oreksino ląstelių praradimą (C), bet nepažeistas MCH ląsteles (D) pažeistame gyvūne, kuriam buvo sušvirkštas oreksinas ...

Pažeidimo specifiškumas

Siekiant patikrinti, ar pažeidimai apsiribojo oreksino neuronais, viena sekcijų serija, kurioje buvo hipotalamus iš netikrų ir pažeistų gyvūnų pogrupio (n = 20), buvo imunologiškai apdorotas melanocitus koncentruojančiam hormonui (MCH), pagumburio peptidui, kurio vieta persidengia (bet ne). kolokalizacija) su oreksino neuronais (Broberger ir kt., 1998), naudojant triušio išaugintą antikūną, atpažįstantį MCH (triušio anti-MCH, H-070-47; 1:150 000, Phoenix Pharmaceuticals, Burlingame, CA) ir DAB, kaip aprašyta anksčiau. MCH neuronai išreiškia ORX1 (Bäckberg ir kt., 2002), bet ne ORX2 (Volginas ir kt., 2004 m), ir po gydymo oreksinu B-saporinu jos reikšmingai nesumažėja (Frederick-Duus ir kt., 2007 m). MCH imunoreaktyvios ląstelės buvo skaičiuojamos abipusiai dviejose kiekvieno gyvūno sekcijose (fiktyvi: n = 7; pažeidimas n = 5), naudojant alternatyvias pjūvius nei analizuojami oreksino neuronai. Pažeidimai reikšmingai nesumažino MCH neuronų skaičiaus nei PFA-DMH, nei LHA (Lentelė 1; 2b, d pav; PFA-DMH: p = 0.47; LHA: p=0.33). Be to, poravimosi sukelta cFos ekspresija buvo skaičiuojama dvišaliu būdu vienoje reprezentatyvioje kiekvieno gyvūno sekcijoje (fiktyvi: n = 4; pažeidimas n = 3), naudojant alternatyvius skyrius, nei analizuoti oreksino neuronams. Pažeidimai neturėjo įtakos poravimosi sukeltai cFos ekspresijai PFA-DMH arba LHA (Lentelė 1; PFA-DMH: p = 0.53; LHA: p=0.82). Galiausiai, reprezentatyvūs skyriai, naudojami oreksino ląstelių skaičiui (gyvūnai: netikri: n = 6; pažeidimas: n = 6), buvo nudažyti Nissl, naudojant krezilo violetinį (5 g krezilo violetinio acetato (C-5042, Sigma, St. Louis, MO), 0.5 g natrio acetato trihidrato (S209, Thermo Fisher Scientific, Otava, Ontarijas, Kanada), 1 l dvigubai distiliuoto vandens su ledine acto rūgštimi (AX0073-6, EMD Chemicals, Mississauga, Ontarijas, Kanada), esant pH: 3.14). Nissl dažytų neuronų skaičiavimai buvo atlikti standartinėse analizės srityse (250 µm × 200 µm) bendroje oreksino neuronų vietoje. Nissl dažytų neuronų skaičius netikros ir pažeidimo grupėse nesiskyrė (Lentelė 1; PFA-DMH: p = 0.23; LHA: p=0.33).

Lentelė 1 

Pažeidimo specifiškumo patikrinimas: neuronų, nudažytų dėl Nissl, MCH arba poravimosi sukeltų cFos, skaičiaus analizė parodė, kad apskritai nebuvo reikšmingo neuronų praradimo, MCH ląstelių ar poravimosi sukeltos nervų aktyvacijos PFA-DMH arba ...

Kadangi buvo įrodyta, kad oreksino trūkumas pelėms prisideda prie narkolepsijos (Chemelli ir kt., 1999), šunys (Lin ir kt., 1999) ir žmonėms (Siegel, 1999; Nishino ir kt., 2000; Peyron ir kt., 2000; Thannickal ir kt., 2000) buvo stebimi gyvūnai, siekiant užtikrinti, kad nebūtų narkoleptinio fenotipo. Gyvūnai buvo stebimi visų šiame tyrime nurodytų elgesio testų metu ir neturėjo jokių narkolepsijos požymių.

Poravimosi sukelta cFos ekspresija pažeistiems gyvūnams

CFos imunoreaktyvių ląstelių skaičius buvo skaičiuojamas abipusiai 3 skyriuose vienam gyvūnui standartinėse analizės srityse ventralinėje tegmentinėje srityje (VTA; 900 × 900 µm), mPOA (400 × 600 µm); Nucleus accumbens (NAc) šerdis ir apvalkalas (400 × 600 µm) ir medialinės priekinės žievės (mPFC) prelimbinis, infralimbinis ir priekinis cingulinis subregionai (600 × 800 µm viename subregione), kurį stebėjo apakinti eksperimentinėms grupėms. . Skaičiai buvo apskaičiuoti kiekvienam gyvūnui ir apskaičiuoti grupės vidurkiai. Statistinis reikšmingumas buvo apskaičiuotas naudojant dvipusę ANOVA su seksualine patirtimi ir pažeidimais kaip veiksniais, po kurių buvo atliktas Fisher's LSD testas su 95% patikimumo lygiu.

rezultatai

Oreksino neuronų aktyvacija seksualinio elgesio metu

Po seksualinio elgesio buvo pastebėtas reikšmingas cFos ekspresijos padidėjimas oreksino neuronuose tiek PFA-DMH (F).(5,31) 63.4; p<0.001; 3a pav) ir LHA (F(5,31) 10.4; p<0.001; 3b pav), be seksualinės patirties poveikio. Tiksliau, tiek seksualiai naiviems, tiek patyrusiems gyvūnams visose eksperimentinėse patinų grupėse, turinčiose skirtingus seksualinio elgesio parametrus (anestrozinės patelės tyrimas, rujos patelių kvapų poveikis, tvirtinimo, intromisijos ar ejakuliacijos rodymas), cFos indukcija buvo vienoda, palyginti su namuose. narveliuose, kuriuose PFA-DMH aktyvuota daugiau oreksino ląstelių (60–80 %), palyginti su LHA (14–33 %), be skirtumų tarp eksperimentinių grupių. Šie rezultatai rodo, kad oreksino neuronai aktyvuojami po patelės dirgiklio poveikio be tolesnio aktyvinimo lytinio akto metu. Be to, aktyvacija nepriklauso nuo moteriško stimulo stimuliavimo, nes ir neimlios, ir imlios patelės sukėlė aktyvavimą seksualiai patyrusiems vyrams.

3 pav 

Oreksino neuronai PFA-DMH (A) ir LHA (B) išreiškė cFos pagal visus naivių ir patyrusių gyvūnų poravimosi elgesio parametrus. Santrumpos: HC, namų narvas; AF: anestrozinė patelė; EF, ruja patelė; M, kalnas; IM, Įžanga; E, ejakuliacija. ...

Oreksino pažeidimų poveikis

Seksualinis elgesys

Oreksino pažeidimai palengvino seksualinį elgesį (padidėjęs latentinis laikotarpis: F(2,47) 3.962; p=0.034; įvedimo delsa: H=9.104; p=0.011). Pirmojo poravimosi bandymo metu pažeidimo patinėliai pasižymėjo trumpesniu uždelsimu prisitvirtinti ir suartėti, palyginti su fiktyviais gyvūnais (padėjimo latencija: p=0.03; intromission latencija: p=0.01; 4a – b paveikslas) ir palyginti su latentiniais laikotarpiais per poravimosi prieš operaciją bandymą (padėjimo latencija: p = 0.02; įvedimo latencija: p = 0.03; duomenys nerodomi). Patinai su daliniais pažeidimais reikšmingai nesiskyrė nuo fiktyvių patinų ir nė viena grupė nesiskyrė nuo priešoperacinio poravimosi tyrimo. Pažeidimų poveikis prisikėlimo ir intromissiono delsai buvo susilpnintas dėl seksualinės patirties, nes nebuvo jokių skirtumų tarp grupių nė vieno iš tolesnių bandymų metu (4 bandymas parodytas 4a – b paveikslas). Ejakuliacijos delsa (4c pav), laikiklių skaičius (4d pav) ir įžanga (4e pav), taip pat kopuliacijos efektyvumą (4f pav) reikšmingai nesiskyrė tarp grupių nė vieno tyrimo metu arba kiekvienoje grupėje tarp pirmojo poravimosi tyrimo ir testo prieš operaciją.

4 pav 

Oreksino pažeidimai sutrumpino lytiškai naivių patinų delsą ir sutrumpino intromisiją per 1 tyrimą. Oreksino pažeidimai neturėjo įtakos poravimuisi 4 tyrimo metu, patinams įgijus seksualinės patirties. (A) Kalno delsa. (B) Įžangos delsa. (C) Ejakuliacija ...
Kilimo ir tūpimo tako bandymas

Oreksino pažeidimai neturėjo įtakos seksualinei motyvacijai, įvertintai atliekant tiesioginį seksualiai patyrusių vyrų kilimo ir tūpimo tako testą. Dviejų bandymų metu pažeidimo patinai antrojo tyrimo metu bėgo daug greičiau link rujos patelės, palyginti su pirmuoju tyrimu (p=0.03; 5 pav). Toks ilgesnis veikimo laikas rodo seksualinę motyvaciją (Lopez ir kt., 1999). Daliniai pažeidimai ir fiktyvūs patinai taip pat greičiau bėgo link rujos patelės 2 tyrimo metu (p=0.03), nors tai nepasiekė reikšmės fiktyviems vyrams (p=0.052). Nė viena grupė neparodė didesnio greičio bėgti link anestzuojančios patelės ar patino 2 bandymo metu. Be to, nepastebėta jokių reikšmingų skirtumų tarp fiktyvių, dalinių ir pažeistų patinų greičio bėgti link bet kurio stimuliuojančio gyvūno nei 1, nei 2 bandyme. rodo, kad nėra skirtumų bendroje veikloje ant kilimo ir tūpimo tako.

5 pav 

Oreksino pažeidimai neturėjo įtakos lytiškai patyrusių vyrų seksualinei motyvacijai. Rodomas laikas, per kurį reikia pasiekti rują patelę atliekant bandymą kilimo ir tūpimo tako 1 ir 2 bandymų metu. * reiškia reikšmingą laiko, skirto pasiekti patelę 2 bandyme, sutrumpėjimą, palyginti su ...
Į nerimą panašus elgesys

Iki šiol gauti rezultatai rodo, kad pažeidimai gali palengvinti naivių gyvūnų seksualinio elgesio pradžią, nes gali turėti įtakos reakcijoms į naujumą ir (arba) nerimą panašų elgesį, kai patinai susiduria su nauja patele. Pagalba, pažeidimo patinėliai pasižymėjo sumažėjusiu į nerimą panašų elgseną atliekant EPM, ty sumažėjusį laiko, praleisto uždarose rankose, procentą (p=0.012; 6 pav) ir padidintas laiko procentas ant atvirų rankų (p=0.023; 6 pav), palyginti su apsimestiniais vyrais. Daliniai pažeidimai reikšmingo poveikio neturėjo. Šie duomenys dar labiau patvirtina, kad pažeidimas sumažino į nerimą panašų elgesį.

6 pav 

Oreksino pažeidimai sumažino į nerimą panašų elgesį padidintame plius labirinte. Laiko, praleisto uždarose rankose (kairėje), procentas sumažėjo, o laiko atvirose rankose (dešinėje) procentas padidėjo pažeistų vyrų. * žymi reikšmingą skirtumą ...
cFos išraiška

Norint įvertinti, ar endogeninis oreksinas prisideda prie poravimosi sukeltos neuronų aktyvacijos oreksino inervuotose smegenų srityse, buvo atlikta poravimosi sukeltos cFos ekspresijos VTA, NAc šerdyje ir apvalkale, mPOA ir mPFC analizė. Tiek pažeistų, tiek fiktyvių patinų poravimasis reikšmingai padidino cFos visose analizuojamose smegenų srityse, palyginti su nesusiporavusiais kontroliniais gyvūnais (Lentelė 2). Pažeidimai neturėjo įtakos nervų aktyvacijai, nes netikri ir pažeisti gyvūnai nesiskyrė nei pradine, nei poravimosi sukelta cFos ekspresija.

Lentelė 2 

Poravimosi sukeltas cFos fiktyvios, dalinės ir pažeidimo grupėse, palyginti su tos pačios pažeidimo būklės neporavimosi kontrolėmis.

Diskusija

Šiais tyrimais buvo tiriamas endogeninio oreksino vaidmuo žiurkės patinų seksualinei veiklai ir motyvacijai. Nustatyta, kad oreksinas nėra būtinas seksualinei motyvacijai ar veiklai. Vietoj to, oreksino neuronus aktyvuoja moters dirgiklis, nepriklausomai nuo moters hormoninės būklės ar vyro seksualinės patirties. Be to, endogeninio oreksino pašalinimas dėl oreksino ląstelėms būdingų pažeidimų sumažino į nerimą panašų elgesį ir palengvino seksualinio elgesio pradžią seksualiai naiviems vyrams. Taigi šio tyrimo rezultatai patvirtina oreksino vaidmenį susijaudinime (de Lecea ir kt., 2006; Harris ir Aston-Jones, 2006; Sakurai, 2007; Boutrel ir kt., 2009; Furlong ir Carrive, 2009 m; Furlong ir kt., 2009) ir nerimas (Suzuki ir kt., 2005; Davis ir kt., 2009 m; Li ir kt., 2010), tačiau nepalaiko esminio oreksino vaidmens seksualinėje motyvacijoje ar veikloje.

Šių tyrimų rezultatai dar labiau paaiškina endogeninio oreksino vaidmenį ir akivaizdžius prieštaringus ankstesnių tyrimų, tiriančių oreksino vaidmenį vyrų seksualiniame elgesyje, naudojant farmakologines priemones, rezultatus. Intra-mPOA eksogeninio oreksino-A infuzijos padidino seksualinį susijaudinimą ir pagerino seksualinę veiklą, o tai rodo, kad oreksinas gali veikti mPOA, didindamas seksualinio elgesio motyvaciją ir efektyvumą.Gulia ir kt., 2003). Tačiau, priešingai, ICV oreksino-A infuzijos susilpnino seksualinę motyvaciją ir susijaudinimą (Bai ir kt., 2009 m), o oreksino receptorių antagonistas neturėjo jokio poveikio seksualiniam susijaudinimui (Bai ir kt., 2009 m), tai rodo, kad endogeninis oreksinas gali neturėti įtakos seksualinei motyvacijai. Galiausiai buvo įrodyta, kad ORX1 blokada sisteminėmis injekcijomis tik nežymiai pablogina kopuliacijos veiklą (Muschamp ir kt., 2007). Iš šių prieštaringų tyrimų galima padaryti keletą išvadų. Pirma, egzogeninio oreksino-A naudojimas gali turėti įtakos elgesiui, tačiau ORX1 blokada neturi didelio poveikio, o tai rodo nedidelį endogeninio oreksino vaidmenį reguliuojant vyrų seksualinį elgesį.Bai ir kt., 2009 m). Dabartiniai rezultatai patvirtina šią galimybę. Dabartiniai tyrimai, kuriuose naudojamas oreksino pašalinimas per oreksino ląstelėms būdingus pažeidimus, rodo, kad endogeninis oreksinas nėra būtinas seksualinei motyvacijai ar veiklai, kaip teigiama Bai ir kt. (2009). Tačiau svarbu pažymėti, kad oreksino pažeidimų poveikio seksualinei motyvacijai kilimo ir tūpimo tako trūkumas gali būti susijęs su tuo, kad gyvūnai buvo įgiję seksualinės patirties prieš seksualinės motyvacijos tyrimą, todėl poveikio trūkumas kilimo ir tūpimo tako bandyme galėjo būti dėl to. į vyrų seksualinę patirtį. Būsimi eksperimentai gali išspręsti šį įspėjimą, tikrindami oreksino pažeidimų poveikį naivų vyrų seksualinei motyvacijai.

Taip pat gali būti, kad du oreksino ligandai ir du oreksino receptorių potipiai (ORX1 ir ORX2; Sakurai ir kt., 1998) gali reguliuoti seksualinį elgesį priešingomis kryptimis. Taikant oreksino ląstelių pažeidimo metodus, šiame tyrime buvo pašalinti abiejų oreksino receptorių potipių (oreksino-A ir B) ligandai. Du receptorių potipiai yra išreikšti skirtingose ​​smegenų srityse (Trivedi ir kt., 1998; Marcus ir kt., 2001) ir buvo įrodyta, kad jie skirtingai reguliuoja atmintį, kai ieškoma kokaino.Smith et al., 2009). Ankstesni seksualinio elgesio tyrimai daugiausia buvo skirti oreksino-A ir ORX1 vaidmeniui (žr. diskusiją aukščiau). Iki šiol tyrimuose naudotas oreksino receptorių antagonistas SB334867 yra konkrečiai skirtas ORX1, kuris turi didelį afinitetą oreksinui-A ir žymiai mažesnį afinitetą oreksinui-B.Sakurai ir kt., 1998). Oreksinas-A taip pat buvo naudojamas kaip egzogeninis oreksinas ankstesniuose tyrimuose (Gulia ir kt., 2003; Bai ir kt., 2009 m). Norint ištirti oreksino-B ir ORX2 vaidmenį reguliuojant vyrų seksualinį elgesį, reikia atlikti būsimus tyrimus.

Dabartinis tyrimas išbandė ilgalaikio oreksino praradimo poveikį. Muschamp ir kt. (2007) teigė, kad ilgalaikis oreksino mažinimas po kastracijos gali sukelti seksualinės motyvacijos ir veiklos praradimą. Šią hipotezę paneigia dabartiniai atradimai, nes oreksino ląstelių pažeidimai nesumažino seksualinės motyvacijos ar veiklos. Gali būti, kad ilgalaikis oreksino praradimas dabartiniame tyrime galėjo sukelti kompensacinius mechanizmus, nors nebuvo aptikta jokių poravimosi sukeltos nervų aktyvacijos pokyčių grandinėje, kuri tarpininkauja seksualiniam elgesiui. Nepaisant to, aišku, kad sumažėjęs oreksino kiekis arba jo trūkumas netrukdo seksualiniam elgesiui. Be to, dabartinio tyrimo rezultatai nepatvirtina didelio oreksino vaidmens skatinant cFos ekspresiją seksualiniu elgesiu. Buvo aiškiai nustatyta, kad oreksinas prisideda prie VTA neuronų aktyvavimo (Korotkova ir kt., 2003; Borgland et al., 2006; Narita ir kt., 2006; Vittoz ir kt., 2008 m). Tačiau oreksino ląstelių pažeidimai neužblokavo poravimosi sukeltos nervų aktyvacijos VTA ar jokiuose kituose ištirtuose smegenų regionuose, susijusiuose su atlygiu, nepaisant oreksino imunoreaktyvių skaidulų, esančių arti suaktyvintų neuronų fiktyviuose patinuose. Taigi, poravimosi sukeltas nervų aktyvavimas šiuose smegenų regionuose nepriklauso nuo oreksino veikimo.

Šiek tiek netikėta šio tyrimo išvada buvo oreksino pažeidimų poveikis seksualinio elgesio palengvinimui seksualiai naiviems, bet nepatyrusiems gyvūnams. Įrodyta, kad tai koreliuoja su nerimą primenančio elgesio sumažėjimu. Todėl oreksino pažeidimų poveikis seksualinei motyvacijai ir veiklai gali būti antraeilis, palyginti su jo poveikiu nerimui ir susijaudinimui. Iš tiesų, ankstesni tyrimai parodė, kad oreksinas turi įtakos nerimui, nes ICV oreksino-A infuzija sumažino pelių EPM atvirų rankų laiką.Suzuki ir kt., 2005). Oreksino-A infuzija į žiurkių patinų talamo paraventrikulinį branduolį sumažino laiką, praleistą atviros lauko kameros centre, ir sumažino naujų objektų tyrinėjimą, o tai rodo, kad oreksinas gali būti susijęs su į nerimą panašaus elgesio formavimu.Li ir kt., 2010). Be to, dominuojančių žiurkių patinų, kurie padidino riziką dėl EPM, padidėjo ORX1 mRNR kiekis mPFC (Davis ir kt., 2009). Taip pat įrodyta, kad oreksinas keičia atsaką į stresą (Ida ir kt., 1999; Ida ir kt., 2000), o oreksino receptorių stimuliavimas padidina kortikotropino atpalaiduojančio faktoriaus išsiskyrimą (Al-Barazanji ir kt., 2001; Singareddy ir kt., 2006 m), kortikosteroono (Ida ir kt., 2000; Kuru ir kt., 2000) ir adrenokortikotropinis hormonas (Kuru ir kt., 2000). Oreksino antagonistai šiuo metu atliekami klinikiniuose tyrimuose, skirtuose nemigai gydyti – sutrikimui, kuris dažnai būna kartu su nerimo sutrikimais.Sullivan ir Neria, 2009 m), ir yra hipotezė, kad oreksino antagonistai gali būti naudojami nerimo sutrikimams gydyti (Mathew et al., 2008). Atsižvelgiant į vis daugiau įrodymų apie oreksino vaidmenį nerimo ir susijaudinimo srityje, atrodo, kad oreksino pažeidimai gali palengvinti naivių vyrų seksualinio elgesio pradžią, nes sumažina į nerimą panašias reakcijas, susijusias su naujo stimulo, ty moterų, įvedimu.

Reikšmingas oreksino neuronų aktyvavimas buvo pastebėtas po seksualinio susijaudinimo ir seksualinio elgesio tiek seksualiai naiviems, tiek patyrusiems gyvūnams tiek PFA-DMH, tiek LHA, atitinkamai 60–80% ir 14–33% oreksino ląstelių ekspresuoja cFos. Yra daugybė įrodymų, patvirtinančių oreksino neuronų funkcijos dichotomiją oreksino ląstelių populiacijoje, kai PFA-DMH yra labai svarbus susijaudinimui, o LHA ​​yra labai svarbus elgesiui, susijusiam su atlygiu.Harris ir kt., 2005; Harris ir Aston-Jones, 2006, Aston-Jones, 2009a). Taigi, PFA-DMH oreksino ląstelių aktyvinimas moters dirgikliu patvirtina hipotezę, kad oreksinas yra aktyvuojamas ir yra labai svarbus susijaudinimui, įskaitant seksualinį susijaudinimą naiviems ir patyrusiems vyrams, ir nerimą, susijusį su nauju moterišku stimulu naiviems vyrams. Tačiau PFA-DMH ląstelės buvo aktyvuotos iki panašaus lygio, nepriklausomai nuo patinų patirties ir patelės hormoninės būklės, o tai rodo, kad PFA-DMH ląstelės buvo aktyvuotos bendro susijaudinimo metu, o ne konkrečiai dėl seksualinio susijaudinimo. Be to, mūsų tyrimai visiškai nepatvirtina, kad egzistuoja visiškai dichotominė oreksino ląstelių populiacija, nes po visų seksualinio susijaudinimo ir veiklos parametrų poveikio LHA ​​buvo reikšmingai suaktyvinta, nepaisant to, ar elgesys buvo susijęs su atlygiu. Taigi, patyrę patinai, susidūrę su anestrozine patele, parodė vienodą oreksino ląstelių aktyvacijos lygį LHA lyginant su patyrusiais vyrais, kurie kopuliavo su ejakuliacija. Tačiau tik pastaroji grupė sudarys sąlyginę poravimosi vietos pirmenybę (Tenkas ir kt., 2009 m); tai rodo, kad poravimasis su ejakuliacija yra naudingesnis nei kiti poravimosi elementai. Dabartinis tyrimas nebuvo specialiai išbandytas oreksino vaidmens seksualiniam atlygiui; todėl norint išspręsti šį klausimą, reikalingi būsimi tyrimai.

Apibendrinant galima pasakyti, kad šių tyrimų rezultatai rodo, kad oreksinas nėra labai svarbus seksualinei veiklai ar motyvacijai. Vietoj to, buvo įrodyta, kad oreksino ląstelių pažeidimai mažina nerimą, o tai rodo, kad endogeninis oreksinas prisideda prie nerimo didinimo. Be to, pašalinus oreksiną, lytiškai naiviems patinams buvo lengviau pradėti lytinį elgesį, o tai rodo, kad endogeninis oreksinas gali slopinti poravimosi pradžią, galbūt padidindamas nerimą reaguojant į naują dirgiklį, ty patelę. Šios išvados dar labiau paaiškina nervų grandinę, susijusią su seksualine veikla ir nerimu, ir papildo vis daugiau literatūros apie oreksino vaidmenį tarpininkaujant susijaudinimui ir nerimui.

Padėka

Šis tyrimas buvo paremtas Nacionalinių sveikatos institutų (R01 DA014591), Kanados sveikatos tyrimų institutų (RN 014705) ir Kanados nacionalinės mokslų ir inžinerinių tyrimų tarybos (Discovery Grant (341710) LMC) dotacijomis.

Išnašos

Leidėjo atsisakymas: Tai PDF failas iš neregistruoto rankraščio, kuris buvo priimtas paskelbti. Kaip paslauga mūsų klientams teikiame šią ankstyvą rankraščio versiją. Rankraštis bus kopijuojamas, užrašomas ir peržiūrimas gautas įrodymas, kol jis bus paskelbtas galutinėje cituotojoje formoje. Atkreipkite dėmesį, kad gamybos proceso metu gali būti aptiktos klaidos, kurios gali turėti įtakos turiniui, ir visi su žurnalu susiję teisiniai atsakymai.

Nuorodos

  1. Agmo A. Vyrų žiurkių lytinis elgesys. Brain Res Brain Res Protoc. 1997: 1: 203 – 209. [PubMed]
  2. Al-Barazanji KA, Wilson S, Baker J, Jessop DS, Harbuz MS. Centrinis oreksinas-A aktyvuoja pagumburio-hipofizės-antinksčių ašį ir sąmoningose ​​žiurkėse stimuliuoja pagumburio kortikotropino atpalaidavimo faktorių ir arginino vazopresino neuronus. J Neuroendokrinolis. 2001;13:421–424. [PubMed]
  3. Aston-Jones G, Smith RJ, Moorman DE, Richardson KA. Šoninių pagumburio oreksino neuronų vaidmuo apdorojant atlygį ir priklausomybę. Neurofarmakologija. 2009a;56 Suppl 1:112–121. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  4. Aston-Jones G, Smith RJ, Sartor GC, Moorman DE, Massi L, Tahsili-Fahadan P, Richardson KA. Šoniniai pagumburio oreksino / hipokretino neuronai: vaidmuo siekiant atlygio ir priklausomybės. Brain Res. 2009b;1314:74–90. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  5. Bai YJ, Li YH, Zheng XG, Han J, Yang XY, Sui N. Orexin A susilpnina besąlyginę seksualinę žiurkių patinų motyvaciją. Pharmacol Biochem Behav. 2009;91:581–589. [PubMed]
  6. Bäckberg M, Hervieu G, Wilson S, Meister B. Oreksino receptoriaus-1 (OX-R1) imunoreaktyvumas chemiškai identifikuotuose pagumburio neuronuose: sutelkite dėmesį į oreksino taikinius, susijusius su maisto ir vandens suvartojimo kontrole. Eur J. Neurosci. 2002;15:315–328. [PubMed]
  7. Baldo BA, Daniel RA, Berridge CW, Kelley AE. Oreksino / hipokretino ir dopamino-beta-hidroksilazės imunoreaktyvių pluoštų pasiskirstymas žiurkių smegenų regionuose, skatinantis susijaudinimą, motyvaciją ir stresą. J Comp Neurol. 2003: 464: 220 – 237. [PubMed]
  8. Balfour ME, Yu L, Coolen LM. Seksualinis elgesys ir su lytimi susiję aplinkos ženklai aktyvuoja mesolimbinę sistemą žiurkių patinams. Neuropsichofarmakologija. 2004: 29: 718 – 730. [PubMed]
  9. Benoit SC, Tracy AL, Davis JF, Choi D, Clegg DJ. Naujos oreksigeninių pagumburio peptidų funkcijos: nuo genų iki elgesio. Mityba. 2008;24:843–847. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  10. Borgland SL, Taha SASF, Fields HL, Bonci A. Oreksinas A VTA yra labai svarbus sinapsinio plastiškumo ir elgesio jautrinimo kokainui indukcijai. Neuronas. 2006;49(4):589–601. [PubMed]
  11. Boutrel B, Cannella N, de Lecea L. Hipokretino vaidmuo skatinant susijaudinimą ir į tikslą orientuotą elgesį. Brain Res. 2009 [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  12. Boutrel B, Kenny PJ, Specio SE, Martin-Fardon R, Markou A, Koob GF, de Lecea L. Hipokretino vaidmuo tarpininkaujant streso sukeltam kokaino ieškančio elgesio atkūrimui. Proc Natl Acad Sci US A. 2005;102:19168–19173. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  13. Broberger C, De Lecea L, Sutcliffe JG, Hokfelt T. Hipokretiną / oreksiną ir melaniną koncentruojančios hormonus ekspresuojančios ląstelės sudaro atskiras populiacijas graužikų šoniniame pagumburyje: ryšys su neuropeptido Y ir agouti genų baltymų sistemomis. J Comp Neurol. 1998;402:460–474. [PubMed]
  14. Carter ME, Borg JS, de Lecea L. Smegenų hipokretinai ir jų receptoriai: alostatinio susijaudinimo mediatoriai. Curr Opin Pharmacol. 2009;9:39–45. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  15. Chemelli RM, Willie JT, Sinton CM, Elmquist JK, Scammell T, Lee C, Richardson JA, Williams SC, Xiong Y, Kisanuki Y, Fitch TE, Nakazato M, Hammer RE, Saper CB, Yanagisawa M. Narkolepsija oreksino pašalintose pelėse : miego reguliavimo molekulinė genetika. Ląstelė. 1999;98:437–451. [PubMed]
  16. Chen CT, Dun SL, Kwok EH, Dun NJ, Chang JK. Į oreksiną A panašus imunoreaktyvumas žiurkės smegenyse. Neurosci Lett. 1999;260:161–164. [PubMed]
  17. Choi DL, Davis JF, Fitzgerald ME, Benoit SC. Oreksino-A vaidmuo maisto motyvacijos, atlyginimų pagrindu maitinamo elgesio ir maisto sukeltų neuronų aktyvacijos žiurkėse. Neurologija. 2010: 167: 11 – 20. [PubMed]
  18. Davis JF, Krause EG, Melhorn SJ, Sakai RR, Benoit SC. Dominuojančios žiurkės natūraliai rizikuoja ir rodo didesnę motyvaciją gauti atlygį už maistą. Neurologijos. 2009;162:23–30. [PubMed]
  19. de Lecea L, Jones BE, Boutrel B, Borgland SL, Nishino S, Bubser M, DiLeone R. Priklausomybė ir susijaudinimas: alternatyvūs pagumburio peptidų vaidmenys. J. Neurosci. 2006;26(41):10372–10375. [PubMed]
  20. de Lecea L, Kilduff TS, Peyron C, Gao X, Foye PE, Danielson PE, Fukuhara C, Battenberg EL, Gautvik VT, Bartlett FS, 2nd, Frankel WN, van den Pol AN, Bloom FE, Gautvik KM, Sutcliffe JG. Hipokretinai: pagumburiui būdingi peptidai, turintys neurožadinamąjį aktyvumą. Proc Natl Acad Sci US A. 1998;95:322–327. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  21. Dewsbury DA. Žiurkių (Rattus norvegicus) kopuliacinis elgesys priklauso nuo ankstesnės kopuliacijos patirties. Anim Behav. 1969;17:217–223. [PubMed]
  22. Fadel J, Deutch AY. Oreksino ir dopamino sąveikos anatominiai substratai: šoninės pagumburio projekcijos į ventralinę tegmentinę sritį. Neurologijos. 2002;111:379–387. [PubMed]
  23. Frederick-Duus D, Guyton MF, Fadel J. Maisto sukeltas žievės acetilcholino išsiskyrimo padidėjimas reikalauja oreksino perdavimo. Neurologijos. 2007;149:499–507. [PubMed]
  24. Furlong TM, Carrive P. Neurotoksiniai pažeidimai, kurių centre yra periforninis pagumburis, panaikina sąlyginės baimės, bet ne suvaržymo, širdies ir kraujagyslių bei elgesio reakciją į kontekstą. Brain Res. 2007;1128:107–119. [PubMed]
  25. Furlong TM, Vianna DM, Liu L, Carrive P. Hipokretinas/oreksinas prisideda prie kai kurių, bet ne visų streso ir susijaudinimo formų išraiškos. Eur J Neurosci. 2009;8:1603–1614. [PubMed]
  26. Gerashchenko D, Kohls MD, Greco M, Waleh NS, Salin-Pascual R, Kilduff TS, Lappi DA, Shiromani PJ. Hipokretino-2-saporino šoninio pagumburio pažeidimai sukelia į narkoleptinį poveikį panašų žiurkės miego elgesį. J Neurosci. 2001;21:7273–7283. [PubMed]
  27. Gulia KK, Mallick HN, Kumar VM. Oreksino A (hipokretino-1) panaudojimas medialinėje preoptinėje srityje sustiprina žiurkių patinų seksualinį elgesį. Neurologijos. 2003;116:921–923. [PubMed]
  28. Hagan JJ, Leslie RA, Patel S, Evans ML, Wattam TA, Holmes S, Benham CD, Taylor SG, Routledge C, Hemmati P, Munton RP, Ashmeade TE, Shah AS, Hatcher JP, Hatcher PD, Jones DN, Smith MI , Piper DC, Hunter AJ, Porter RA, Upton N. Orexin A suaktyvina locus coeruleus ląstelių paleidimą ir padidina žiurkės susijaudinimą. Proc Natl Acad Sci US A. 1999;96:10911–10916. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  29. Harris GC, Aston-Jones G. Arouzija ir atlygis: oreksino funkcijos dichotomija. Tendencijos Neurosci. 2006: 29: 571 – 577. [PubMed]
  30. Harris GC, Wimmer M, Aston-Jones G. Šoninių pagumburio oreksino neuronų vaidmuo ieškant atlygio. Gamta. 2005; 437 (7058): 556 – 559. [PubMed]
  31. Horvath TL, Peyron C, Diano S, Ivanov A, Aston-Jones G, Kilduff TS, van Den Pol AN. Hipokretino (oreksino) aktyvinimas ir locus coeruleus noradrenerginės sistemos sinaptinė inervacija. J Comp Neurol. 1999;415:145–159. [PubMed]
  32. Ida T, Nakahara K, Katayama T, Murakami N, Nakazato M. Apetitą skatinančio neuropeptido, oreksino ir neuropeptido Y šoninės smegenų skilvelių injekcijos poveikis įvairiai žiurkių elgesio veiklai. Brain Res. 1999;821:526–529. [PubMed]
  33. Ida T, Nakahara K, Murakami T, Hanada R, Nakazato M, Murakami N. Galimas oreksino įtraukimas į streso reakciją žiurkėms. Biochem Biophys Res Commun. 2000;270:318–323. [PubMed]
  34. Korotkova TM, Sergeeva OA, Eriksson KS, Haas HL, Brown RE. Ventrinės tegmentinės srities dopaminerginių ir nedopaminerginių neuronų sužadinimas oreksinais/hipokretinais. J Neurosci. 2003;23(1):7–11. [PubMed]
  35. Kuru M, Ueta Y, Serino R, Nakazato M, Yamamoto Y, Shibuya I, Yamashita H. Centriškai vartojamas oreksinas / hipokretinas aktyvuoja HPA ašį žiurkėse. Neuroreportas. 2000;11:1977–1980. [PubMed]
  36. Li Y, Li S, Wei C, Wang H, Sui N, Kirouac GJ. Emocinio elgesio pokyčiai, kuriuos sukelia oreksino mikroinjekcijos į talamo paraventrikulinį branduolį. Pharmacol Biochem Behav. 2010;95:121–128. [PubMed]
  37. Lin L, Faraco J, Li R, Kadotani H, Rogers W, Lin X, Qiu X, de Jong PJ, Nishino S, Mignot E. Miego sutrikimo šunų narkolepsiją sukelia hipokretino (oreksino) receptoriaus 2 geno mutacija . Ląstelė. 1999;98:365–376. [PubMed]
  38. Lopez HH, Olster DH, Ettenberg A. Seksualinė motyvacija žiurkės patinuose: pirminių paskatų ir kopuliacijos patirties vaidmuo. Horm Behav. 1999;36:176–185. [PubMed]
  39. Marcusas JN, Aschkenasi CJ, Lee CE, Chemelli RM, Saper CB, Yanagisawa M, Elmquist JK. Skirtinga 1 ir 2 oreksino receptorių ekspresija žiurkės smegenyse. J Comp Neurol. 2001;435:6–25. [PubMed]
  40. Martin G, Fabre V, Siggins GR, de Lecea L. Hipokretinų sąveika su neurotransmiteriais branduolyje accumbens. Reguliavimas 2002: 104: 111 – 117. [PubMed]
  41. Mathew SJ, Price RB, Charney DS. Naujausi nerimo sutrikimų neurobiologijos pasiekimai: naujos terapijos pasekmės. Am J Med Genet C Semin Med Genet. 2008;148C:89–98. [PubMed]
  42. Muschamp JW, Dominguez JM, Sato SM, Shen RY, Hull EM. Hipokretino (oreksino) vaidmuo vyrų seksualiniame elgesyje. J Neurosci. 2007;27:2837–2845. [PubMed]
  43. Nair SG, Golden SA, Shaham Y. Hipokretino 1 receptorių antagonisto SB 334867 diferencinis poveikis labai riebaus maisto savaiminiam vartojimui ir maisto, kurio siekiama žiurkėms, atstatymui. Br J Pharmacol. 2008; 154: 406 – 416. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  44. Narita M, Nagumo Y, Hashimoto S, Khotib J, Miyatake M, Sakurai T, Yanagisawa M, Nakamachi T, Shioda S, Suzuki T. Tiesioginis oreksinerginių sistemų dalyvavimas aktyvuojant mezolimbinį dopamino kelią ir su juo susijusį elgesį, kurį sukelia morfinas. J Neurosci. 2006;26:398–405. [PubMed]
  45. Nishino S, Ripley B, Overeem S, Lammers GJ, Mignot E. Hipokretino (oreksino) trūkumas sergant žmogaus narkolepsija. Lancetas. 2000;355:39–40. [PubMed]
  46. Paxinos G, Watson C. Žiurkės smegenys stereotaksinėse koordinatėse. San Diegas, CA: Academic Press; 1998 m.
  47. Peyronas C, Faraco J, Rogers W, Ripley B, Overeem S, Charnay Y, Nevsimalova S, Aldrich M, Reynolds D, Albin R, Li R, Hungs M, Pedrazzoli M, Padigaru M, Kucherlapati M, Fan J, Maki R , Lammers GJ, Bouras C, Kucherlapati R, Nishino S, Mignot E. Mutacija ankstyvos narkolepsijos ir generalizuoto hipokretino peptidų nebuvimo atveju žmogaus narkoleptinėse smegenyse. Nat Med. 2000; 6: 991–997. [PubMed]
  48. Peyron C, Tighe DK, van den Pol AN, de Lecea L, Heller HC, Sutcliffe JG, Kilduff TS. Neuronai, turintys hipokretino (oreksino) projektą į kelias neuronų sistemas. J Neurosci. 1998: 18: 9996 – 10015. [PubMed]
  49. Sakurai T. Oreksinų ir oreksino receptorių vaidmenys centriniame maitinimosi elgesio ir energijos homeostazės reguliavime. CNS neurono sutrikimo vaistų taikiniai. 2006;5:313–325. [PubMed]
  50. Sakurai T. Oreksino (hipokretino) nervinė grandinė: miego ir budrumo palaikymas. Nat Rev Neurosci. 2007; 8: 171 – 181. [PubMed]
  51. Sakurai T, Amemiya A, Ishii M, Matsuzaki I, Chemelli RM, Tanaka H, ​​Williams SC, Richardson JA, Kozlowski GP, Wilson S, Arch JR, Buckingham RE, Haynes AC, Carr SA, Annan RS, McNulty DE, Liu WS , Terrett JA, Elshourbagy NA, Bergsma DJ, Yanagisawa M. Oreksinai ir oreksino receptoriai: pagumburio neuropeptidų ir su G baltymu susietų receptorių šeima, reguliuojanti maitinimosi elgesį. Ląstelė. 1998;92:573–585. [PubMed]
  52. Satoh S, Matsumura H, Fujioka A, Nakajima T, Kanbayashi T, Nishino S, Shigeyoshi Y, Yoneda H. FOS ekspresija oreksino neuronuose po muscimol perfuzijos preoptinėje srityje. Neuroreportas. 2004;15:1127–1131. [PubMed]
  53. Siegel JM. Narkolepsija: pagrindinis hipokretinų (oreksinų) ląstelių vaidmuo. 1999;98:409–412. [PubMed]
  54. Singareddy R, Uhde T, Commissaris R. Diferencinis hipokretinų poveikis triukšmui, palyginti su sustiprintomis išgąsčio reakcijomis. Fizinis elgesys. 2006;89:650–655. [PubMed]
  55. Smith RJ, Žr. RE, Aston-Jones G. Oreksino/hipokretino signalizacija oreksino 1 receptoriuose reguliuoja užuominų sukeliamą kokaino ieškojimą. Eur J Neurosci. 2009;30:493–503. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  56. Solomon A, De Fanti BA, Martinez JA. Periferinis grelinas sąveikauja su oreksino neuronais per gliukostatinį signalą. Regulas Pept. 2007;144:17–24. [PubMed]
  57. Sullivan GM, Neria Y. Farmakoterapija sergant potrauminio streso sutrikimu: atsitiktinių imčių kontroliuojamų tyrimų įrodymai. Curr Opin Investig Drugs. 2009;10:35–45. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  58. Suzuki M, Beuckmann CT, Shikata K, Ogura H, Sawai T. Orexin-A (hipokretinas-1) gali būti susijęs su į nerimą panašaus elgesio formavimu. Brain Res. 2005;1044:116–121. [PubMed]
  59. Tenk CM, Wilson H, Zhang Q, Kitchers KK, Coolen LM. Seksualinis atlygis žiurkių patinams: seksualinės patirties poveikis sąlyginėms vietovės nuostatoms, susijusioms su ejakuliacija ir intromis. Horm Behav. 2009: 55: 93 – 97. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  60. Thannickal TC, Moore RY, Nienhuis R, Ramanathan L, Gulyani S, Aldrich M, Cornford M, Siegel JM. Sumažėjęs hipokretino neuronų skaičius žmogaus narkolepsijoje. Neuronas. 2000;27:469–474. [PubMed]
  61. Thorpe AJ, Cleary JP, Levine AS, Kotz CM. Centriniu būdu vartojamas oreksinas A padidina žiurkių motyvaciją saldžioms granulėms. Psichofarmakologija (Berlis), 2005;182:75–83. [PubMed]
  62. „Trivedi P“, „Yu H“, „MacNeil DJ“, „Van der Ploeg LH“, „Guan XM“. Oreksino receptorių mRNR pasiskirstymas žiurkės smegenyse. FEBS Lett. 1998; 438: 71 – 75. [PubMed]
  63. Vittoz NM, Schmeichel B, Berridge CW. Hipokretinas / oreksinas pirmiausia aktyvuoja kaudomedialinės ventralinės tegmentinės srities dopamino neuronus. Eur J Neurosci. 2008;28:1629–1640. [PMC nemokamas straipsnis] [PubMed]
  64. Volgin DV, Swan J, Kubin L. Single cell RT-PCR geno ekspresijos profiliavimas ūmiai. disocijuoti ir imunocitochemiškai identifikuoti centriniai neuronai. J. Neurosci metodai. 2004;136:229–236. [PubMed]