Psichiatrija. 2014; 5: 170.
Paskelbta internete 2014 Dec 8. doi: 10.3389 / fpsyt.2014.00170
PMCID: PMC4258993
Laurence Lalanne,1,2,† Gulebru Ayranci,1,3,† Brigitte L. Kieffer,3 ir Pierre-Eric Lutz3,*
Abstraktus
Komorbidumas yra pagrindinė psichiatrijos problema, kuri ypač susijusi su sunkesniais simptomais, ilgesne ligos trukme ir didesniu paslaugų panaudojimu. Todėl svarbiausių komorbidumo grupių nustatymas ir pagrindinių patofiziologinių mechanizmų tyrimas yra svarbūs žingsniai gerinant psichikos sveikatos priežiūrą. Šioje apžvalgoje mes sutelkiame dėmesį į dažną priklausomybės ir depresijos ryšį. Visų pirma apibendriname daugybę ikiklinikinių modelių įrodymų, rodančių, kad opioidų neuromoduliacinės sistemos narys kappa opioidinis receptorius (KOR) yra pagrindinis dalyvis reguliuojant ir atlygio, ir nuotaikos procesus. Dabartiniai duomenys rodo, kad KOR moduliuoja sutampančius neuroninius tinklus, jungiančius smegenų kamieno monoaminerginius branduolius su priekinės smegenų limbinės struktūros. Piktnaudžiavimo ir natūralių dirgiklių narkotikų savybės, taip pat stresinių patirčių neurobiologiniai poveikiai, stipriai sąveikauja KOR signalo lygiu. Priklausomybės modeliuose KOR įtaką stiprina stresoriai ir kritiškai kontroliuoja vaistų paiešką ir atkrytį. Depresijos paradigmose KOR signalizacija reaguoja į įvairius stresorius ir tarpininkauja nevilties reakcijas. Iš viso KOR yra prototipinis komorbidumo substratas, pagal kurį gyvenimo patirtis sutampa su bendrais smegenų mechanizmais, kad sukeltų elgesio sutrikimus ir padidėtų rizika, kad psichopatologija yra skirtinga, bet sąveikauja.
Įvadas
Priklausomybė ir depresija yra lėtiniai recidyviniai sutrikimai, turintys katastrofiškų pasekmių asmenims ir jų socialinei aplinkai (1). Lėtinis piktnaudžiavimo narkotikais poveikis, taip pat ilgalaikis abstinencijos iš šių vaistų stipriai siejamas su nuleista nuotaika ir neigiama emocine būsena. Atvirkščiai, kai kuriems žmonėms depresijos nuotaika stipriai skatina euforinių psichoaktyvių medžiagų vartojimą, tai procesas, vadinamas savireguliavimu. Atitinkamai, epidemiologiniai tyrimai aiškiai parodė, kad priklausomybė nuo depresijos yra sunki ir2, 3). Kartu su šia sergamumu yra didesnė funkcinė negalia, ilgesnė ligos trukmė, mažesnė socialinė kompetencija ir didesnis paslaugų panaudojimas. Todėl patofiziologinių mechanizmų supratimas, susijęs su komorbidumu, turi reikšmingą terapinį poveikį.
Šioje apžvalgoje bus aptarta daugybė įrodymų, kurie sukaupė dokumentuoti kappa opioidų receptorių (KOR) kaip svarbų substrato priklausomybės ir depresijos sutrikimų substratą. KOR priklauso opioidų sistemai - neuromoduliacinei sistemai, kuri yra plačiai išreikšta centrinėse ir periferinėse nervų sistemose. Opioidų sistema susideda iš trijų G sujungtų opioidinių receptorių: mu (MOR), delta (DOR) ir kappa (KOR), kurios fiziologinėmis sąlygomis aktyvuoja endogeninių peptidų šeima, kad slopintų neuroninį aktyvumą. Tarp opioidinių peptidų, dinorfinų (kuriuos koduoja. \ T Pdyn genas) pirmiausia aktyvuoja KOR ir turi labai mažą afinitetą MOR arba DOR. Priešingai, kiti opioidiniai peptidai (endorfinas ir enkefalinai) menkai sąveikauja su KOR. Todėl dinamorino / KOR signalizacijos kelias sudaro atskirą procesą opioidų sistemoje (4, 5).
Opioidiniai receptoriai griežtai reguliuoja motyvacinius procesus ir yra laikomi svarbiais psichikos sutrikimų veikėjais, kuriems būdingas atlygio sutrikimas, pvz., Priklausomybė ir depresija (6, 7). Kelios išsamios apžvalgos neseniai apibendrino duomenis apie MOR ir DOR vaidmenį šiuose sutrikimuose ir prireikus bus trumpai paminėti (6, 8-11). Mūsų tikslas yra pateikti skaitytojui istorinę ir neuro-anatominę perspektyvą apie tai, kur, kada ir kaip KOR yra įdarbinami priklausomybės ir streso psichopatologijos graužikų modeliuose (12-16). Pirma, apibendrinsime, kaip KOR laipsniškai atsirado kaip antisubsidijų sistema, kuri koduoja disforiją ir riboja piktnaudžiavimo narkotikų motyvacines savybes. Antra, parodysime, kad KOR įdarbinama ir aktyvuojama stresinės patirties metu, taip prisidedant prie depresinių būsenų atsiradimo (10, 17, 18). Galiausiai aptarsime du pagrindinius aspektus, kaip šie KOR vaidmenys priklausomybėje, su stresu susijusiame elgesyje ir depresijoje turi reikšmingų pasekmių supratimui apie komorbidumą. Viena vertus, parodysime, kad streso sukeltas KOR signalizacijos įdarbinimas yra stiprus vaistų paieškos ir recidyvuojančio elgesio sukėlėjas. Kita vertus, mes apibendrinsime duomenis apie KOR funkciją konkrečiame depresijos panašaus elgesio kontekste, atsirandantį lėtinio piktnaudžiavimo narkotikais metu, taip pat narkotikų abstinencijos metu (19-21).
Kaip patofiziologinis komorbidumo substratas, KOR yra perspektyvus farmakologinis tikslas (10, 18). Šiuo metu atliekami klinikiniai tyrimai, kuriais siekiama įvertinti KOR antagonistus kaip depresijos gydymą.22), ypač priklausomiems pacientams, sergantiems sergamomis depresinėmis sąlygomis (\ t23, 24). Remiantis graužikų tyrimais, aptarsime terapinių strategijų, orientuotų į KOR, potencialą.
Kappa opioidų receptorius: anti-premijos, disforinė sistema
Susidomėjimas dėl KOR farmakologijos istoriškai kilo iš tikimybės sukurti analgetinius junginius, neturinčius klasikinio MOR agonistų, pvz., Morfino, piktnaudžiavimo potencialo. Deja, ankstyvieji žmogaus tyrimai, tiriantys KOR agonistų savybes, pranešė apie stiprų disforinį ir psichomimetinį poveikį (25, 26). Nors šie rezultatai aiškiai sumažino terapinį KOR potencialą skausmo gydymui, jie taip pat paragino ikiklinikinius tyrėjus ištirti šiuos intriguojančius disforinius efektus.
Yra žinoma, kad MOR aktyvinimas sukelia euforiją žmogui ir gamina armijas gyvūnų modeliuose. Todėl mokslininkai teigė, kad MOR ir KOR gali turėti priešingą poveikį reguliuojant motyvacinius procesus, galbūt per bendrus neuronų kelius. Ši sistema iš pradžių buvo ištirta naudojant sąlyginį vietos pasirinkimą (CPP) arba sąlyginį vietos vengimą (CPA). Šiame Pavlovijos kondicionavimo paradigmoje vaistas yra pakartotinai suporuotas su aplinkos stimulų rinkiniu, kuris palaipsniui įgyja teigiamų (CPP) arba neigiamų (CPA) motyvacinių savybių. Po pakartotinių kondicionavimo sesijų gyvūnas vėliau pasižymi pirmenybe ar vengimu pakartotinai paveikti aplinkos dirgiklius (jei nėra vaisto), elgesį, kuris priklauso nuo mokymosi, motyvacinių ir hedoninių mechanizmų. Šipenbergo ir Hertzo žiurkių tyrimas (27) pranešė, kad, kaip hipotezė, sisteminis KOR agonisto vartojimas U69593 arba morfinas davė priešingą poveikį, atitinkamai gamindamas CPA ir CPP. Nors morfino sukeltas CPP atspindi jos stiprinančias savybes, KOR sukeltas CPA parodė, kad šis receptorius gali būti anti-atlyginimo mechanizmas, kuris prisideda prie dviejų krypčių motyvacijos ir hedoninio tono reguliavimo.
Kitas žingsnis buvo tirti pagrindinius neurocheminius substratus, ankstyvaisiais tyrimais, kuriais buvo tiriama, kaip KOR gali reguliuoti mezolimbinį kelią (pav. (Figure1) .1). Šis kelias susideda iš dopaminerginių (DA) neuronų, esančių vidurinės smegenų ventralinės tegmentacijos srityje (VTA), ir projektuojant į priekines smegenų limbines struktūras, įskaitant ventralinę striatumą [arba branduolį accumbens (NAc)] ir prefroninę žievę (PFC). Gyvūnų ir žmonių duomenys aiškiai parodė, kad narkomanija (ir nuotaikos sutrikimai, žr. 2 dalį) siejasi su dideliais smegenų DA apdovanojimų grandinės sutrikimais (28), kuri paprastai nuspėja ir koduoja aplinkos stimulų ir gamtinių pranašumų svarbą. Dabar klasikinė „vieninga“ priklausomybės teorija teigia, kad iš esmės visi piktnaudžiavimo vaistai didina DA transliaciją NAc, o tai yra pagrindinis jų atlygio savybių poveikis.29). Šioje eilutėje daugelis tyrimų nuolat parodė, kad ūminis stiprinantis morfino poveikis priklauso nuo dezinfekcijos, ty DA neuronų aktyvacijos. Ši dezinfekcija vyksta aktyvuojant MOR, išreikštą GABAerginių interneuronų, esančių daugiausia VTA [VTA, arba RMTg, žr. (30, 31)], bet ir VTA ir NAc (32). Priešingai, sumažėjusi DA signalizacija buvo hipotezė, kad ji bus atsakinga už KOR-tarpinės aviacijos kodavimą. Naudojant mikrodializę, Spanagel ir kolegos (33) parodė, kad DA išskyrimas NAc buvo sumažintas infuzuojant KOR agonistą į NAc, bet ne į VTA (farmakologiniai agentai, naudojami kiekviename tyrime, aptartame šioje apžvalgoje, yra apibendrinti lentelėse). Lentelės11-3). Be to, KOR antagonisto (ir BNI) infuzija į NAc padidino DA išskyrimą, o tai rodo, kad dinorfinai toniškai mažina DA neurotransmisiją šiame regione. Pastaruoju metu labiausiai įtikinamų įrodymų, įtvirtinančių DA neuronus, sukėlė nerimą.12) iš genetiškai modifikuotų pelių, naudojant Cre-lox rekombinacijos sistemą (\ t34). Bals-Kubik et al. pasinaudojo knockino pele, ekspresuojančia Cre-rekombinazę, transkripcijos kontroliuojant DA transporterio endogeninį promotorių [DAT, specifinis DA neuronų žymuo (35)]. Šios pelės buvo auginamos su kitu knockin pele, turinčia sąlyginę „plūduriuojančią“ KOR alelį, taip pasiekiant specifinę KOR deleciją DA neuronuose (DAT KOR-cKO). Elgesio lygiu KOR-indukuota CPA buvo panaikinta DAT KOR-cKO pelėse ir atkurta po virusinės tarpinės KOR pakartotinės ekspresijos VTA (12).
Tuo pačiu metu tyrėjai atliko smegenų analizę regionuose, kuriuose įdarbinus KOR gali potencialiai koduoti baimę. Vietinės KOR aktyvacijos poveikis buvo įvertintas keliose srityse, naudojant CPA paradigmą (49). KOR agonisto U50,488H infuzija NAc buvo pakankama, kad sukeltų patikimą CPA, atitinkančią požiūrį, kad KOR aktyvacija šiame regione sumažina DA išskyrimą. Stebėtina, kad PFC, šoninės hipotalamos ir VTA (bet ne materia nigra ir dorsal striatum) infuzijos turėjo panašų poveikį, o tai rodo, kad kelios KOR grupės gali reguliuoti motyvaciją ir hedoninį toną. Šie rezultatai taip pat rodo, kad VTA KOR aktyvinimas sukelia CPA, jei nėra jokių NAc DA išsiskyrimo pokyčių [žr. Pirmiau minėtus neurocheminius duomenis (33)], tai reiškia, kad dalyvauja kitas smegenų regionas, gaunantis DA inervaciją (ty PFC, žr. toliau). Be DA perdavimo reguliavimo, KOR išraiška ir funkcija dabar tiriama daugelyje kitų smegenų regionų, naudojant graužikų tyrimus, susijusius su atlygiu ir nuotaika [pvz., Stria terminalo lovos branduolys, BNST, amygdala, locus coeruleus (LC), žr. toliau].
Kitas svarbus tikslas buvo nustatyti, kurie neuronų ląstelių tipai yra kontroliuojami KOR. Elektroninės mikroskopijos metodai (50, 51) nustatė, kad NAc pusėje AK-imunoreaktyvių axonų taip pat išreiškė DAT. Įdomu tai, kad šiame tyrime nustatyta, kad beveik vienas trečdalis (29%) šių KOR-imunoreaktyvių axonų buvo DAT-neigiami, bet susisiekė su išankstiniais DAT-teigiamų neuronų terminalais, o tai rodo, kad mezolimbinis kelias yra reguliuojamas NAc lygiu afferentiniai neuronai, išreiškiantys KOR. Remiantis naujausiais įrodymais (16), tikėtina, kad ne DAerginiai KOR-teigiami neuronai yra bent iš dalies serotonerginiai (5-HT). Gali būti, kad 5-HT neuronų išreikšti KOR gali tarpininkauti DA / 5-HT kryžminiu ryšiu NAc, ir yra mechanizmas, kuris prisideda prie sąveikos tarp nuotaikos ir atlygio, taip pat tarp priklausomybės ir depresijos (žr. Toliau). Nacionalinės kontrolės institucijos lygmeniu (52), taip pat yra įrodymų, kad KOR priklauso nuo glutamato išsiskyrimo moduliacijos, o tai leidžia manyti, kad šis receptorius gali būti išreikštas prieš sinaptinį glutamaterginių žievės neuronų, kurie tankiai inervuoja NAc. Mūsų žiniomis, pastarojo KOR fondo elgesio aktualumas nebuvo sprendžiamas. Galiausiai PFC (53), KOR daugiausia buvo ant sinchroninių terminalų, galinčių atitikti DAerginius įėjimus, nors šių neuronų neurocheminė tapatybė nebuvo įvertinta.
Kiti tyrėjai naudojo elektrofiziologiją ir imunohistochemiją, kad nustatytų KOR ekspresuojančius neuronus. KOR-selektyvaus agonisto taikymas VTA sumažino spontaninį neuronų pogrupio aktyvumą (54). Ši KOR-tarpinė inhibicija pasireiškė tik DA ląstelėse, kaip parodė imunoreaktyvumas tirozino hidroksilazei (greičio ribojimo fermentas DA sintezei ir kitas DA neuronų žymeklis). Tada buvo sujungtos elektrofiziologijos, retrogradinės sekos ir mikrodializės, kad būtų galima įvertinti, ar DA neuronai, nukreipiantys į NAc arba PFC, yra skirtingai reguliuojami KOR (55). Šie elegantiški eksperimentai atskleidė, kad vietinė KOR aktyvacija VTA hiperpolarizuotuose PFC nukreipiančiuose DA neuronuose, bet neturėjo įtakos NAc nukreipiančioms DA neuronams. Atitinkamai DA išleidimas buvo sumažintas PFC, bet ne NAc, kai VTA KOR aktyvinimas.
Apskritai šie rezultatai atitinka ankstesnius CPA ir mikrodializės tyrimus ir siūlo modelį, pagal kurį VTA KORs nekontroliuoja NAc DA tono, bet moduliuoja DA išleidimą PFC, kad gautų CPA. Anksčiau aprašytos DAT KOR-cKO pelės neseniai pateikė tvirtus pastarosios hipotezės įrodymus. Tejeda ir kt. nustatė, kad KOR agonisto infuzija PFC sumažėjo DA perpildymas laukinių tipų (WT), bet ne DAT KOR-cKO pelėse (13), patvirtinantis, kad PFC perduodama DA kontroliuoja KOR. Svarbu tai, kad autoriai tada tiesiogiai ištyrė PFC KOR elgsenos svarbą disforijai žiurkėms. KOR antagonisto infuzija į PFC buvo pakankama, kad būtų užkirstas kelias KOR agonistui sukeltai CPA, aiškiai nurodant limbinę žievę kaip būtiną šio elgesio poveikio substratą.
Šių įvairių metodologinių metodų rezultatai taip pat rodo, kad NAc projektuojantys DA neuronai išreiškia KOR prieš sinapsinius terminalus, bet ne soma ir dendrituose (33), o PFC-projektuojantys DA neuronai išreiškia KOR abiejuose skyriuose (13, 54, 55) (Pav. \ T (Figure1) .1). Molekuliniu lygmeniu šiuo metu nežinoma, kaip DA neuronai gali kontroliuoti KOR prekybą skirtingomis ląstelėmis kaip jų projekcinių tikslų funkcija. Mes spėliojame, kad kiekvienos srities VTA gali būti susijęs su elektrofiziologinio grįžtamojo ryšio tipu (žadinantis iš žievės, slopinantis nuo striatrijos vidutinio spyglių neuronų). Taip pat gali būti įtraukti ląstelių autonominiai procesai, turintys skirtingus transkriptominius profilius NAc ir PFC projektuojančiuose DA neuronuose, dėl kurių atsiranda skirtingų KOR postransliacinių modifikacijų ir prekyba. Kad eksperimentiškai būtų sprendžiama pastaroji hipotezė, technologinės pažangos dabar leidžia tyrėjams atskirti transkriptą iš neuronų populiacijų, turinčių bendrą ląstelių kūno vietą, tačiau su skirtingomis projekcijomis (56). Alternatyviai, retrogradinis atsekimas gali būti susietas su knockino reporterių pelėmis, ekspresuojančiomis opioidinius receptorius, susiliejant su fluorescuojančiais proteinais [tokios pelės šiuo metu yra prieinamos mu ir delta, bet ne kappa, opioidiniai receptoriai (57, 58)].
Dynorphin / KOR kelio aktyvumas DA neurotransmisijoje ir CPA turi akivaizdžių pasekmių, susijusių su priklausomybe susijusiam elgesiui, kaip pastebėta įvairiuose piktnaudžiavimo narkotikais savireguliacijos paradigmose [žr. (59) išsamią peržiūrą]. KOR agonistai priklausomai nuo dozės priklausomai nuo žiurkių ir pelių sumažina morfino \ t60, 61). Etanoliui buvo nustatytas panašus KOR aktyvacijos slopinimas (62-64), kokainas (61, 65-68), nikotinas (69) ir kanapės (70), ir jie buvo susiję su sumažėjusiu vaistų sukeliamu DA išskyrimu (pvz., kokainu, žr.71); etanolis, žr. (72)). Pasauliniu mastu šie rezultatai suteikia patikimų įrodymų, kad KOR slopina poveikį piktnaudžiavimo narkotikų poveikiui, ir naujausi rezultatai rodo, kad gali būti paveiktos ir natūralios naudos, pvz., Socialinės sąveikos. Prerijų pelekuose, monogaminėse graužikų rūšyse, porų porų ryšių palaikymas priklauso nuo agresyvaus elgesio išraiškos naujiems konspektams. Įdomu tai, kad ši „socialinio elgesio“ forma buvo įrodyta, kad ją tarpininkauja KOR signalizacija NAc (73). Graužikams socialinis vaidmuo yra labai ištirtas, natūraliai pasireiškiantis elgesys, įdarbinantis DA neuronus ir sukeliantis stiprų sustiprinimą. Sisteminis KOR aktyvavimas sumažino socialinį žaidimą abiejose žiurkėse (74, 75) ir pelėms (76). Šie faktai yra svarbūs mūsų supratimui apie žmogaus depresiją, nes anhedonija, ar pasikeitęs kasdienio gyvenimo stimulų savybių suvokimas (įskaitant socialinę sąveiką), yra šios būklės bruožas. Todėl, nors KOR priklausomas moduliavimas ir atlygis iš pradžių buvo konceptualizuotas ir ištirtas priklausomybės paradigmose, dabar tampa aišku, kad ji taip pat turi didelį poveikį nuotaikos sutrikimams (17, 18). CPA atspindi kelių neurobiologinių mechanizmų sąveiką, atitinkančią tris psichologinius konstruktus: mokymąsi, motyvaciją ir hedoniją. Intra-cranialinė savireguliacija (ICSS) yra dar viena paradigma, vertinanti šiuos tris aspektus: šiame operantų kondicionavime gyvūnai išmoksta savarankiškai administruoti trumpus elektrinius impulsus į tam tikrus smegenų regionus (dažniausiai medialinį smegenų pluoštą).77)). Nustatyta, kad sisteminis KOR aktyvinimas sukelia anhedonišką būklę ICSS, kaip rodo padidėjusi stimuliacijos riba (78). Pastarajame darbe stimuliacinis elektrodas buvo įdėtas į šoninį hipotalamą, sustiprinantį ankstesnius įrodymus, kad KOR priklauso nuo reguliuojamo hedoninės būsenos, esančios už NAc ribų (49). Be to, Potter ir kt. Tyrinėjo KOR agonistų sukeltos ICSS moduliacijos kinetiką po ūminių ir pakartotinių injekcijų (79). KOR agonistas Salvinorinas-A padidino stimuliacijos slenkstį, ir šis ūminis poveikis išliko kasdien injekcijomis per 8 paros laikotarpį. Įdomu tai, kad pakartotinės injekcijos taip pat sukėlė vėluojamą ir priešingą poveikį, kaip rodo sumažėjusi ICSS stimuliavimo slenkstis 24 h po injekcijos, o tai rodo, kad priešininko procesai (80, 81).
Neuroninis kelias, galintis susieti hipotalaminę KOR veiklą su DA transmisija ir atlygiu, buvo prastai ištirtas. Naujausi elegantiški duomenys, naudojant elektronų mikroskopiją, elektrofiziologiją, ICSS ir kokaino savarankišką administravimą (47, 48), rodo antagonistinę sąveiką tarp oreksino ir dinorfino peptiderginių sistemų. Hipokretino / oreksino sistema susideda iš neuronų, kilusių iš šoninės hipotalamos ir išsikišusių į kelias mezolimbines struktūras (82). Svarbu tai, kad oreksinas ir dinorfinas veikė kaip bendrai siųstuvai hipotalamo neuronuose (47): abu peptidai bendrai lokalizuojasi sinaptiniuose pūsleliuose, ir kartu išsiskiria po elektrinės hipotalaminės stimuliacijos. Autoriai taip pat parodė, kad oreksinas ir dinorfinas veikia VTA, skatindami ir slopindami atitinkamai DA neuronų susijaudinimą, tokiu būdu dviem kryptimis moduliuojant atlygį (ICSS eksperimentuose) ir savarankiškai vartojant kokainą (ir galbūt kitus piktnaudžiavimo narkotikus). ). Daugelyje ląstelių (65%) VTA nustatyta, kad jie yra bendri orexino ir dinorfino tikslai. Remiantis ankstesniais įrodymais, būsimi eksperimentai gali išbandyti hipotezę, kad VTA DA neuronai, išreiškiantys tiek KOR, tiek ir oreksino receptorius, pirmenybę teikia PFC, o ne NAc.
Apskritai duomenys apie KOR funkciją reguliuojant atlygį pabrėžia, kad svarbu įvertinti visą peptidų ir neurotransmiterių spektrą, išreikštą palei mezolimbinį kelią ir susijusias neuronų grandines. Nustatyti, kaip šis tinklas dinamiškai vystosi lėtinėmis patologinėmis sąlygomis, bus įdomi pastanga.
Kappa opioidų receptorius: streso sistema, susijusi su depresijos patofiziologija
Kartu su šiais atlyginimų tyrimais, naujausi duomenys parodė, kad KOR taip pat kontroliuoja emocinius atsakus, ypač patiriant stresą. Farmakologiniai tyrimai su graužikais rodo, kad dinamorino / KOR sistema reguliuoja nuotaikos elgesį. Žiurkėms sisteminis KOR agonistų ir antagonistų vartojimas parodė, kad priverstinio plaukimo (FS) ir išmoktų bejėgiškumo (LH) bandymuose atitinkamai pasireiškė ir antidepresantai panašūs poveikiai [žr. (10, 41-45) peržiūrai]. Suderinus su CPA tyrimais, sisteminis KOR aktyvavimas sumažino DA atpalaidavimą ventraliuose (44, 83), nugaros (84, 85) ir striatalų regionai, o KOR agonisto vietinė NAc injekcija imitavo prodepresantą panašų sisteminio gydymo poveikį (86). Šie duomenys taip pat patvirtina, kad nuo KAN priklausomas DA moduliavimas yra susijęs ir su nuotaikos ir priklausomybės veiksmais (28). Įdomu tai, kad KOR priklausomi prodepresantai panašūs poveikiai gali būti keičiami pagal lytį (87), svarbus aspektas, nes depresijos paplitimas yra didesnis moterims. Naudodamiesi ICSS, autoriai nustatė, kad KOR agonisto sukeltas ICSS stimuliavimo slenkstinis padidėjimas buvo didesnis nei vyriškos patelės. Šis poveikis buvo nepriklausomas nuo cirkuliuojančių gonadų hormonų kiekio, ir jo priežastis nebuvo lyties skirtumai tarp agonisto farmakokinetikos. Atvirkščiai, korinio agonisto sukeltos neuronų aktyvacijos lyties skirtumai, kaip matyti iš c-fos dažymo, buvo rasti BNST ir PVN, bet ne NAc ar amygdala. Todėl, be mesolimbinio kelio, taip pat gali pasireikšti su lytimi susijęs KOR priklausomas hedoninio tono reguliavimas BNST ir PVN lygmeniu, dvi streso reakcijas ir emocijas valdančios struktūros.
Be farmakologinių tyrimų, orientuotų į KOR, taip pat yra įrodymų, kad dinorfinai suteikia endogeninį nuotaikos požymių toninį reguliavimą (43, 88). NAc, žinoma, kad vidutinio spygliuočio neuronai, ekspresuojantys DA D1-receptorių, sintezuoja ir atpalaiduoja dinamorfinus, kontroliuojamus cAMP atsako elemento surišimo baltymo (CREB). Atitinkamai, transgeninių pelių, kurie pernelyg išreiškia dominuojančią neigiamą CREB formą, NAc koncentracijoje prodynorfinų kiekis sumažėjo. Šis poveikis buvo susijęs su sumažėjusiu elgesio nevilimu LH paradigmoje. Neseniai atliktas tyrimas pranešė apie tai Pdyn nulaužimas (virusinės išraiškos anti-Pdyn trumpo plaukų segtuvo RNR) sumažėjo depresija panašus elgesys FS \ t46).
Be emocinių atsakų, duomenys rodo, kad dinamorino / KOR sistemos aktyvumą stiprina stresas. Nustatyta, kad ūmus, bet ne lėtinis suvaržymo stresas jautrina KOR priklausomą CPA (89). Be to, pakartotinis FS streso poveikis sukėlė prodepresantą panašų poveikį, kurį užblokavo KOR antagonistas ir BNI, ir jo nebuvo. Pdyn KO pelės (90). Be to, buvo įrodyta, kad dinamorfinai moduliuoja pakartotinai priklausomą nuo streso priklausantį aversinį kondicionavimą (37). Pelės, apmokytos susieti tam tikrą kvapą su FS stresu, stipriai vengė šio kvapo. Šis vengimo elgesys nebuvo pastebėtas Pdyn KO pelėms, ir buvo užblokuota WT pelėse iš anksto gydant KOR antagonistu. Panašiai WT pelėse buvo pakartotinai suporuotas kontekstas, susietas su kojomis; tačiau vėl šis efektas nebuvo Pdyn KO pelėms ir užkertant kelią KOR antagonistui. Svarbu tai, kad autoriai parodė, kad centrinės nervų sistemos kortikotropino atpalaidavimo faktoriaus (CRF) išsiskyrimas yra pagrindinis įvykis, atsakingas už streso sukeltą dinamorino / KOR sistemos įdarbinimą. Rezultatai parodė, kad sisteminė CRF injekcija sukėlė KOR fosforilinimą, kaip nustatyta naudojant fosfo-KOR antikūną. Be to, streso sukeltas CPA (imituojamas sistemine arba intracerebroventrikuline CRF arba CRF injekcija)2-receptoriaus agonistas Urokortinas III) nebuvo Pdyn KO pelės ir užblokavo ne BNI pirminis apdorojimas. Po streso poveikio keliose smegenų struktūrose, įskaitant bazolaterinę amygdalą, hipokampą, dorsalinę raphe, VTA ir NAc, buvo nustatyta KOR aktyvacija ir fosforilinimas. Iš viso šie duomenys rodo, kad, kai CRF stimuliuoja dinamorfino išsiskyrimą, atsiranda disforinė įtampa.37).
Stresas yra sudėtingas fiziologinis procesas, turintis pirmiausia prisitaikomąją vertę, tačiau tai gali sukelti patologinius įvykius per ilgą ir pernelyg didelį stresą. Pastaruoju metu buvo tirta sąveika tarp streso ir KOR, naudojant sudėtingesnius ir etologiškai svarbius depresijos modelius. Iš esmės, specifinių gyvūnų konfrontacija gali sukelti reikšmingų pasekmių išteklių kontrolei, prieigai prie draugų ir socialinėms pozicijoms. Pavyzdžiui, rezidento – įsibrovėlio socialinio pralaimėjimo paradigma (91) yra natūralus modelis, pasižymintis stipriomis agresyviomis sąveikomis, kurios yra nenuspėjamos ir neišvengiamos, todėl sukelia keletą anhedonijos tipo simptomų, tokių kaip sumažėjęs seksualinis užsiėmimas ir sumažėjęs sacharozės poreikis (52). McLaughlin ir kolegos pirmieji atskleidė dinorfinų ir KOR vaidmenį persvarstant socialinio streso poveikį (92). Pelėms, veikiančioms pakartotinius socialinius pralaimėjimus per 3 dienas, buvo būdingas nugalėtas postūrinis atsakas, taip pat padidėjęs nociceptinis slenkstis arba streso sukelta analgezija (SIA, pastebėta uodegos nutraukimo latentinio tyrimo metu). Abu aspektai buvo užkirsti kelią pelėms, kurios buvo apdorotos KOR antagonistu arba neturėjo Pdyn genas. Kitas svarbus socialinio pralaimėjimo modelio bruožas yra tas, kad jo poveikis žiurkėms ir tarp inbredų pelių pasižymi dideliu kintamumu tarp individų, todėl gyvūnai paprastai gali būti suskirstyti į jautrias ir atsparias grupes (93). Pagal šią liniją, pasak Bérubé et al. (94), dinorfinų ekspresijos lygiai NAc skiriasi nuo jautrių ir atsparių Sprague – Dawley žiurkių. Padidėjusi dinorfino mRNR koncentracija (išmatuota qPCR) buvo nustatyta jautrių žiurkių ventralinėje striatume (NAc lukštais, suderinta su ankstesniais pelių duomenimis), o stebėtinai padidėjęs lygis buvo pastebėtas elastingų individų nugaros striatume, o tai rodo, kad DA ir dinorphin ir KOR nuotaika gali būti sudėtingesnė nei tikėtasi. Norint pagrįsti šią hipotezę, reikės papildomų tyrimų. Kita vertus, kitame tyrime nenustatyta, kad socialiai nugalėtų Long – Evans žiurkių dinorfino koncentracija VTA ar NAc nekinta.95). Šių dviejų tyrimų neatitikimas gali būti paaiškintas skirtingomis panaudotomis padermėmis arba dėl to, kad pastarasis tyrimas nesiskiria nuo elastingų ir jautrių Long – Evans žiurkių. Pažymėtina, Nocjar et al. (95) nustatyta, kad nykstančių žiurkių hipotalamoje sumažėjo dinamorfinas-A, taip pat sumažėjo oreksinų A ir B. Todėl bendras šių dviejų antagonistinių peptidų VTA DA neuronų aktyvumo reguliavimas gali būti susijęs su pralaimėjimo sukeltu KOR priklausomu socialiniu pasipriešinimu ir būti pažeistas po socialinio pralaimėjimo.
Mes anksčiau aptarėme (1 dalis), kaip KOR gali rodyti diferencinę ląstelių lokalizaciją dviejose VTA DA neuronų populiacijose, nukreipiančiose į NAc arba PFC. Neseniai paskelbtoje ataskaitoje teigiama, kad šis anatominis disociacija gali būti svarbi siekiant suprasti lėtinio socialinio pralaimėjimo poveikį. Chaudhury ir kolegos (96) parodė, kad selektyvus VTA DA neuronų slopinimas atitinkamai nukreiptas į NAc arba PFC, skatino atsparumą arba jautrumą pakartotiniam socialiniam pralaimėjimui. Dėl savo selektyvios ląstelės lokalizacijos yra viliojanti spėlioti, kad KOR gali tarpininkauti prodepresantui panašius simptomus, sukeltus slopinant VTA-PFC DA kelią.
Be DAerginio signalizavimo, nauji rezultatai rodo, kad 5-HT transliaciją taip pat gali moduliuoti KOR streso ir socialinio pralaimėjimo modeliuose. Elektrofiziologiniai eksperimentai (97, 98) iš pradžių parodė, kad KOR reguliuoja 5-HT neuronus nugaros raphe branduolio (DRN), pagrindinio 5-HT smegenų branduolio lygyje. Svarbu tai, kad gelbėjimo eksperimentai parodė, kad selektyvi KOR ekspresija KOR KO pelių DRN yra pakankama, kad būtų atkurta CPA, sukelta infuzija KOR agonistui (38). Kartu su ankstesniais rezultatais šie rezultatai rodo, kad KOR yra PFC ir KOR, išreikšti DRN esančiuose neuronuose, kurie nukreipti į NAc (kurie gali būti 5-HT neuronai), yra reikalingi ir pakankami, kad būtų išraiškos. KOR agonistų sukeltas pasipiktinimas. Molekuliniu lygiu buvo įrodyta, kad ūmus socialinis pralaimėjimas sukelia KOR ir p38α kinazės fosforilinimą DRN (14). P38α įdarbinimas 5-HT neuronuose yra būtinas, nes pralaimėjimo sukeltas socialinis vengimas buvo panaikintas CKO pelėse, kuriose p38α yra specialiai ištrintas iš serotonino transporterio (SERT) ekspresuojančių neuronų (p38α-cKOSERT). Fosforilintas p38α savo ruožtu skatina SERT perkėlimą į plazmos membraną, tokiu būdu padidindamas 5-HT pakartotinį įsisavinimą ir greičiausiai skatindamas socialinį vengimą. Elektrofiziologiniai įrašai smegenų gabaliukuose (40) taip pat parodė, kad KOR aktyvacija slopina DRN 5-HT neuronų sužadinamumą per du mechanizmus: iš anksto sinaptinį glutamaterginių įėjimų slopinimą ir post-sinaptinę G baltymų suintensyvinamų kalio kanalų (GIRK) stimuliaciją. Pakartotinis FS streso poveikis mažina postaktapinį, bet ne iš anksto sinchroninį KOR aktyvacijos poveikį. Svarbu tai, kad streso sukeltas KOR-tarpinės GIRK srovės slopinimas buvo panaikintas p38α-cKOSERT pelėms. Galiausiai, naujausi įrodymai rodo, kad KOR ir DA ir 5-HT neuronų reguliavimas NAc lygmeniu gali susilieti, kad sukeltų disforinę ir depresiją. Pakartotinis FS stresas selektyviai padidino SERT paviršiaus ekspresiją ventraliniame stiatume, bet ne kituose tiriamuose regionuose (dorsalinė striatuma, hipokampu, PFC, amygdala arba DRN). Šį streso poveikį SERT apsaugojo farmakologinis KOR signalizacijos blokavimas NAc, bet ne DRN (16). Apskritai, įtempta patirtis įdarbina CRF-Dynorhin-KOR-p38α-GIRK signalizacijos kaskadą DRN 5-HT neuronuose, taip pat KOR aktyvavimą NAc. Šie molekuliniai pritaikymai savo ruožtu sąlygoja SERT funkcijos reguliavimą NAc ir galiausiai įtakoja DA funkciją, kad sukeltų elgsenos simptomus. Ar panašus DRN signalizavimas taip pat yra susijęs su ilgesniu nuotaikos sutrikimu, ypač atsižvelgiant į lėtinį piktnaudžiavimą narkotikais (3 dalis), dar reikia nustatyti.
Be 5-HT ir DA grandinių, kitos galimos KOR priklausomos nuotaikos reguliavimo vietos, be kita ko, yra hipokampo neurogenezė ir noradrenerginis (NA) perdavimas. Viena ataskaita parodė, kad žiurkėms antidepresantui panašus KOR antagonisto ir BNI poveikis (99), susijusi su hipokampu, taip pat kitose struktūrose (pvz., priekinėje žievėje, amygdaloje, hipokampe ir endopiriforminėje žievėje), padidėjusiam BDNF mRNR lygiui, neurotrofiniam faktoriui, kontroliuojančiam sinaptinį plastiškumą ir neurogenezę. Norint geriau suprasti šios KOR / BDNF sąveikos svarbą, reikalingi tolesni tyrimai.
Kappa opioidų receptorius depresijos ir priklausomybės sąsajoje
Mes apibendrinome KOR vaidmenį reguliuojant atlygio procesus (1 dalis) ir streso reakcijų bei emocinių būsenų (2 dalis) moduliavime. Remiantis šiais duomenimis, kelios grupės neseniai ištyrė, kaip KOR gali tarpininkauti priklausomybės ir depresijos sąveikai. Šių dviejų sutrikimų santykis greičiausiai yra dviejų krypčių: priklausomiems pacientams kyla didelė nerimo ar depresijos sutrikimų rizika, o atvirkščiai, depresija sergantiems pacientams dažnai piktnaudžiaujama vaistais, kad jie galėtų gydyti savo depresinius simptomus. Abu aspektai šiuo metu sprendžiami gyvūnų modeliuose.
Streso jautrumas, atkrytis ir depresinių simptomų atsiradimas priklausomiems asmenims
Streso sukeltas atkrytis priklausomybės metu
CPP ir narkotikų savarankiško administravimo graužikų modeliai buvo plačiai naudojami tiriant įvairius atkryčio sukėlėjus arba pakartotinai pradedant vartoti vaistus. Po pakartotinio gydymo ar stabilaus vaisto savarankiško vartojimo, gyvūnai pakartotinai eksponuojami CPP ar operacinių kamerų, nesant vaisto, todėl vaistų ieškojimas ir instrumentinis atsakas nebėra sustiprintas ir palaipsniui išnyksta, procesas vadinamas kaip išnykimas. Svarbu tai, kad, pasibaigus išnykimui, recidyvas gali būti pradėtas pakartotinai (ty „gruntuojant“) į piktnaudžiavimo vaistu (narkotikų sukeltą atstatymą) arba veikiant ūminiam stresui (streso sukeltam atstatymui). Klasikinė stresinė patirtis yra pagrindiniai rizikos veiksniai, lemiantys depresijos atsiradimą (100) ir priklausomybę (101) sutrikimai. Be to, piktnaudžiavimo vaistai stiprina įvairių stresorių neurobiologinius ir elgesio efektus, kurie savo ruožtu gali sustiprinti piktnaudžiavimo narkotikų poveikį užburtoje aplinkoje (žr. Žemiau streso sukeltą CPP atkūrimą).102). Todėl priklausomybė ir stresas glaudžiai sąveikauja, o pagrindiniai neurobiologiniai mechanizmai yra veiksniai, prisidedantys prie priklausomybės ir su stresu susijusios psichopatologijos sergamumo.
Remiantis turimais įrodymais, įtikinančiais KOR streso poveikiu (2 dalis), tyrėjai toliau tiria šio receptoriaus vaidmenį, kurį sukėlė įtempių atstatymas. Apskritai, rezultatai rodo, kad KOR signalizacija kritiškai tarpininkauja dėl įvairių piktnaudžiavimo narkotikų atsinaujinimo. Žiurkėms iš anksto gydymas KOR antagonistu (arba JDTic ar norn BNI) žymiai sumažino streso sukeltą (koją), bet ne dėl kokaino sukeltą kokaino savarankiško vartojimo atkūrimą (41). Pelėms panašios išvados buvo gautos tiek streso, tiek vaisto sukeltam kokaino atkūrimo tyrimui, naudojant CPP tyrimą [naudojant naują sistemiškai aktyvų KOR peptiderginį antagonistą su trumpu veikimo laikotarpiu (103)]. Be to, ūminio ar kartotinio streso ekspozicija atstatė kokaino CPP WT, bet ne KOR arba Pdyn KO pelės, nei po farmakologinio KOR blokados (104). Stresas ir KOR taip pat sąveikauja su kokaino ir konteksto asociatyvios būklės lygiais: stresas yra klasikinis, kad sustiprina kokaino CPP, ir šis efektas imituojamas sisteminiu KOR aktyvinimu (105). Todėl KOR tarpininkauja streso / kokaino sąveikai pradinės vaisto ekspozicijos metu, taip pat po išnykimo.
Kartu su kokaino duomenimis, genetiniai ir farmakologiniai metodai parodė, kad streso sukeltas etanolio vartojimo atstatymas panašiai priklauso nuo dinamorfino ir KOR tiek CPP, tiek savarankiško vartojimo paradigmose (106). Šie rezultatai patvirtina mintį, kad KOR yra priklausomybę sukeliantis agentas streso metu, priešingai nei jo slopinantis poveikis ūmiai stiprinančioms piktnaudžiavimo vaistų savybėms (žr. 1 dalį). Kaip bus aptarta žemiau, norint paaiškinti šį akivaizdų paradoksą, reikės sistemingai nustatyti, kurios KOR populiacijos įdarbinamos visose smegenyse po streso įvykių (ir po centrinio CRH ir sisteminių kortikosteroidų išsiskyrimo), ir kaip šis streso sukeltas signalizavimas skiriasi nuo KOR aktyvinimo ( endogeninių dinorfinų arba sisteminių farmakologinių agentų), anksčiau negydytų gyvūnų.
Neuro-anatominiu lygmeniu keliose piktnaudžiavimo narkotikose ir streso sąlygose nustatyti faktai leidžia manyti, kad streso sukeltas narkomanijos atkūrimas priklauso nuo daugialypės KOR ir monoaminerginių sistemų sąveikos, taip pat į keletą priešakinių limbinių struktūrų. DRN rezultatai atitinka anksčiau minėtus duomenis apie KOR priklausančią CPA. Po sąlyčio su p38α naikinimu 5-HT neuronuose, kaip parodyta naudojant p38α-cKO, buvo panaikintas socialinio streso sukeltas kokaino CPP atstatymas.SERT pelės (14). Nikotino priklausomybės kontekste buvo įrodyta, kad FS streso sukeltas dinamorino / KOR signalizacijos aktyvavimas stiprina nikotino CPP (20), kuris gali būti užkirstas kelias infuzijos būdu ir ne BNI amygdaloje. Pastarosiose smegenų struktūroje neseniai atlikti tyrimai atskleidė, kurie neuronai išreiškia KOR (žr. Toliau). Būtina atlikti papildomus tyrimus, kad būtų galima įvertinti, kur KOR-teigiami amygdalos neuronai siunčia projekcijas, ir ar nikotino receptorių reguliavimas, tiesioginis nikotino kiekis, atsiranda šiame ar kitame smegenų regione po streso poveikio.
Funkcinė sąveika tarp NA transliacijos ir dinamorino / KOR sistemos taip pat prisideda prie streso sukeltos narkotikų paieškos atkūrimo. Anatominiai tyrimai iš pradžių parodė, kad KOR yra išreikštas keliose ląstelių dalyse LC, pagrindiniame NA smegenų branduolyje. Šviesos ir elektronų mikroskopija parodė, kad KOR akivaizdžiai lokalizuojasi su vezikuliniu glutamato transporteriu ir CRF (107), taip pat su preprodynorinu (108), LC ašies terminaluose. KOR taip pat išreiškiama LC NA neuronais, nes KOR-imunoreaktyvumas buvo nustatytas TH-teigiamuose somatodendritiniuose procesuose (108). Elektrofiziologiniai įrašai parodė, kad KOR aktyvinimas LC stabiliai susilpnina neuronų aktyvavimą, gaunamą įdarbinant eksitatorinius arba CRF teigiamus įėjimus. Priešingai, KOR aktyvacija neturėjo įtakos spontaniniam LC neuronų aktyvumui (107), o tai rodo, kad KOR agonistai dažniausiai įdarbina prieš sinaptines KOR bazines sąlygas. Elgsenos lygmeniu neseniai buvo tiriamos KOR / NA sąveikos, susijusios su savarankišku heroino vartojimu (109). Sisteminė Yohimbine injekcija buvo naudojama atkryčio nusodinimui, remiantis šio junginio savybe aktyvuoti HPA ašį ir NA neuronus (veikiantys kaip antagonistas α2 NN inhibitorių autoreceptoriai). Rezultatai parodė, kad Yimbimbine sukėlė reikšmingą atkūrimą kontrolinėse žiurkėse, bet ne žiurkėms, kurios buvo apdorotos KOR antagonistu ir BNI. Kadangi šiame tyrime buvo naudojamas sisteminis Yohimbine ir nor-BNI vartojimas, sunku daryti išvadą, ar pastebėtas poveikis atsirado dėl KOR blokados LC, ar kitame smegenų regione po Yohimbine sukeltos streso sistemos aktyvacijos (galbūt sukeldama plačiai paplitusį). CRF ir dinamorfino išsiskyrimas). Kita naujausia ataskaita išskaidė šiuos mechanizmus su geresne anatomine raiška, pasinaudodama paprastesniu KOR agonistų sukeltos kokaino CPP atkūrimo modeliu (39). KOR blokada, pasirinktinai LC, iš dalies užkirto kelią KOR sukeltam atstatymui. Nuosekliai, išgelbėjus KOR korinio pelės LC pelių dalimi, iš dalies atstatytas KOR priklausantis CPP atkūrimas. Kaip ir kitos monoaminerginės grandinės (110, 111), fiziologinis NA neuronų aktyvumas priklauso nuo daugelio receptorių potipių, įskaitant inhibitorinį α2-autoreceptoriai ir post synaptic β1- ir β2-heteroreceptoriai. Selektyvūs farmakologiniai agentai buvo naudojami siekiant parodyti, kad NA neuronų (α) slopinimas2- receptorių agonistas), arba NA veikimo blokavimas po sinapsinio β1- receptoriai (β1-antagonistas), abu potencialus KOR sukeltas atstatymas. Šie rezultatai rodo modelį, pagal kurį streso ir KOR-tarpininkaujamas NA neuronų slopinimas prisideda prie atkryčio ir atitinka ankstesnius duomenis, rodančius, kad LC KOR aktyvacija lokaliai mažina neuronų aktyvumą. Įdomu tai, kad tiek kokaino sukeltas kokaino CPP atstatymas, tiek KOR sukeltas CPA nebuvo paveikti NA signalizacijos manipuliacijos, o tai rodo, kad KOR / NA sąveika selektyviai tarpininkauja dėl su narkotikais susijusios streso aspektų. Anksčiau minėtame tyrime Yohimbine nusodino recidyvą, nors jis laikomas tiek HPA, tiek NA neuronų aktyvatoriumi. Suderinus abu tyrimus, galima spėlioti, kad šie pradiniai Yohimbine stimuliaciniai efektai gali būti stebimi ir galiausiai neutralizuojami CRF ir KOR sukeltomis LC NA neuronų inhibicijomis, dėl kurių atsiranda recidyvas. Galiausiai, šie duomenys kelia keletą klausimų būsimiems tyrimams: kaip CRF receptoriai ir KOR sąveikauja LC? Kokie molekuliniai signalizacijos keliai įdarbinami LC neuronuose po KOR aktyvinimo ir ar jie yra panašūs į aprašytus DRN? Kokios priekinės struktūros yra paveiktos LC KOR aktyvavimo metu?
Neseniai synaptic plastiškumas tapo dar vienu analizės lygiu, siekiant geriau suprasti KOR-tarpininkaujamą narkotikų paieškos atkūrimą. Remiantis ankstesniais įrodymais, kad: (i) stresas trukdo ilgalaikiam potencialui stiprinti (LTP, ilgalaikio sinaptinio perdavimo tarp dviejų neuronų forma) VTA ir kad (ii) KOR reguliuoja mezolimbinį kelią (2 dalis) , naujausioje ataskaitoje buvo ištirtas KOR moduliavimas VTA kaip streso funkcija (112). Rezultatai parodė, kad sisteminė KOR farmakologinė blokada užkirto kelią streso sukeltai LTP slopinimui GABAergic sinapse (LTPGASR), bet ne streso sukeltas sužadinimo sinapsų potencialas VTA. KOR aktyvinimas VTA buvo pakankamas, kad imituotų streso poveikį ir blokuotų LTPGASR DA neuronuose. Svarbu tai, kad VTA ir BNI infuzijos, prieš į FS stresą, buvo įrodyta, kad užkirsti kelią streso sukeltam kokaino savarankiško vartojimo atkūrimui. Ta pati tyrėjų grupė dar apibūdino streso / KOR sąveikos kinetiką (113) žiūrint į KOR ir gliukokortikoidų receptorių (GR), kuris aktyvuojamas stresinės patirties metu ir sisteminio endogeninio kortikosteroidų išsiskyrimo. Po FS streso GR buvo laikinai įdarbintas (per 1 dieną), o bent 4 dienų toninis aktyvavimas buvo būtinas norint tarpininkauti ilgalaikiam streso poveikiui LTP.GASR DA neuronuose. Nuosekliai blokuoja KOR signalizaciją po FS stresas neleido atgauti kokaino savarankiškai. Pasaulyje šie du tyrimai rodo, kad GR- ir KOR priklausoma LTP blokadaGASR DA neuronuose svarbiausia tarpininkauja streso sukeltas narkomanijos atkūrimas. Remiantis šiais duomenimis, tikėtina, kad streso atsako ir priklausomybės modeliuose modeliavimo procesai gali pasireikšti ir keliuose smegenų regionuose po KOR aktyvinimo.
Apskritai, Dynorphin / KOR sistema yra kritiškai susijusi su recidyvu įvairiose gyvūnų paradigmose ir piktnaudžiavimo narkotikuose, taikant sudėtingas sąveikas su 5-HT, DA ir NA signalizacija. Pradinėse situacijose ūminis KOR aktyvinimas slopina piktnaudžiavimo narkotikų stiprinančias savybes (1 dalis). Priešingai, duomenys apie graužikus rodo, kad žmonėms įdarbinant KOR įtemptos gyvenimo patirties metu gali būti skatinamas narkomanų atgavimas iš priklausomų asmenų, bandančių pasiekti narkotikų susilaikymą, ir todėl gali prisidėti prie priklausomybės palaikymo.
Depresinių simptomų atsiradimas priklausomiems asmenims
Padidėjęs streso reaktyvumas ilgą laiką veikiant vaistams nuo piktnaudžiavimo ir susilaikant nuo jo, prisideda prie depresinių simptomų atsiradimo, kurie gali išsivystyti į lėtines ligas, nepriklausomai nuo priklausomybės sutrikimo.
Nustatyta, kad nuolatinis piktnaudžiavimo narkotikais poveikis stiprina endogeninį signalizavimą per KOR. Kartotinis kokaino poveikis padidino dinorfinų koncentraciją žiurkių striatume ir materia nigra (\ t114). Panašiai pailgėjo heroino savarankiškas vartojimas Pdyn ekspresija NAc apvalkale ir centriniame amygdalos branduolyje, be jokio poveikio Penk, genas, koduojantis enkefalino opioidinius peptidus, veikiančius geriau esant MOR ir DOR (115). Lėtinis alkoholis taip pat buvo susijęs su padidėjusia dinorfino ekspresija ir išsiskyrimu NAc (116, 117) ir amygdala (118). Kaip jau minėta, padidėjęs dinamorfino išsiskyrimas NAc gali įvykti per cAMP – CREB signalizacijos kelią (119). Atitinkamai, piktnaudžiavimo narkotikais didėja DA išskyrimas NAc, todėl padidėja ir ilgai aktyvuojamas DA D1 receptorius, receptorius, kuris susieja su stimuliuojančiu Gs- baltymai. Tai savo ruožtu padidina cAMP susidarymą ląstelėse ir padidina CREB prisijungimą prie genomo atsako elementų, todėl padidėja ekspresija. Pdyn genas. Šie atradimai buvo pagrįsti žmonių priekinės žievės regionuose, kurie, panašiai kaip ir NAc, gauna tankų DA inervaciją. Atliekant tyrimą, tiriant post mortem audinius iš 14 alkoholikų ir 14 sveikų kontrolinių preparatų, padidėjo Pdyn mRNR ir dinamorfinų peptidai A ir B buvo pastebėti dorsolateriniame PFC, taip pat padidėjęs KOR mRNR orbito-priekinėje žievėje, tuo tarpu kitų opioidinių peptidų ir receptorių pokyčių nerasta (120) šiuose regionuose.
Dėl savo tvirtos prodepresantų panašios veiklos (2 dalis) padidėjusi dinamorino / KOR sistemos ekspresija po ilgai trunkančio piktnaudžiavimo narkotikais buvo susijusi su ūminiu ūminio pasitraukimo simptomais, taip pat į depresijos simptomų atsiradimą ilgą laiką nutraukimo fazės arba susilaikymas. Neigiamas poveikis skatina narkotikų vartojimą (hipotezę „savaiminis vaistas“), tokiu būdu stiprinant vaistų paiešką ir prisidedant prie priklausomybės sunkumo. Be to, vaistų sukeltas emocinis sutrikimas taip pat gali sukelti pažeidžiamiems asmenims depresinius sutrikimus, atsirandančius nepriklausomai nuo pradinio piktnaudžiavimo narkotikais. Graužikų modeliuose ūminis pašalinimas iš lėtinio etanolio poveikio yra susijęs su neigiamomis emocinėmis būsenomis [žr. (121-124), įskaitant elgesio bruožus, paprastai apibūdinamus kaip nerimas (125) arba depresija (126)]. Tikėtina, kad abu šie emocinių atsakų aspektai sąveikauja (127-129) ir kad nutraukimo sukeltas nerimo panašus elgesys gali sustiprinti depresinį simptominį gydymą. Žiurkėms priklausomybė nuo etanolio gali būti nustatoma lėtiniu ir pasyviu etanolio skystos dietos poveikiu (125) arba etanolio garams (\ t130). Wistar žiurkėms (125), buvo įrodyta, kad priklausomybė pasireiškia kaip padidėjęs nerimo elgesys (kaip vertinamas padidėjusio plius labirinto testu) ūminio nutraukimo metu, ir šis poveikis buvo užblokuotas sisteminiu gydymu KOR antagonistu ir BNI. Kissler ir kt. (130) taip pat pastebėjo, kad ūminis ištraukimas iš priklausomybės nuo etanolio susietas su padidėjusiu alkoholio operantų savarankišku vartojimu ir 22-kHz ultragarso vokalizacijų padidėjimu, kuris reiškia „etologiškai pagrįstas elgesys, kuris lengvai diskriminuoja neigiamas emocines valstybes"(131). Šie elgsenos pokyčiai, susiję su padidėjusiu Dynorphin-A imunoreaktyvumu centrinės amygdalos (CeA) kapsuliniame regione ir padidėjusi agonistinė stimuliuojama G baltymų jungtis [matuojant klasikiniu [35S] -GTPγS metodas (132)]. Nustatyta, kad KOR blokada CeA neleidžia didinti etanolio savarankiško vartojimo priklausomoms žiurkėms. Šio vietinio manipuliavimo poveikis ultragarso vokalizacijai nebuvo įvertintas; tačiau tikėtina, kad CeA KOR signalizacija gali prisidėti prie neigiamo poveikio po lėtinio etanolio poveikio. Srovės grandinės lygmeniu, KOR nustatymas amygdaloje ir jo fiziologinė svarba tik pradedamas vertinti, o naujausi rezultatai rodo, kad receptorius daugiausia aptinka GABAerginių neuronų priešterapinius terminalus (133). Nuosekliai, KOR agonisto ir antagonisto skyrimas į amygdala žiurkių audinių gabalus, atitinkamai sumažėjo ir padidėjo GABAerginis perdavimas [miniatiūriniai IPSC,21)]. Stebėtina, kad šie du junginiai turėjo atvirkštinį poveikį po kasdieninių kokaino savarankiško vartojimo, ir atitinkamai sukėlė padidėjusį ir sumažintą GABAerginį aktyvumą. Šie poveikiai buvo pastebėti tik žiurkėms, kurios padidino kokaino vartojimą per ilgas (6 h) savęs vartojimo sesijas, bet ne žiurkėms, turinčioms stabilų kokaino vartojimą trumpų (1 h) sesijų metu. Todėl, nors lėtinis piktnaudžiavimo vaistais poveikis stiprina dinamorino / KOR signalizaciją, taip pat įmanoma, kad kontrolės praradimas dėl vaisto vartojimo gali konkrečiai modifikuoti KOR aktyvavimo poveikį konkrečioms neuronų grandinėms (kaip čia parodyta CeA) galbūt dėl KOR tipo ekspresuojančių ląstelių tipų pokyčių arba KOR ląstelių lokalizacijos. Elgesio lygmeniu CeA mikro-infuzija ne-BNI susilpnino padidėjusį nerimą panašų elgesį (gynybinio laidojimo paradigmoje), kuri buvo pastebėta pasitraukiant iš lėtinių, eksperimentiškai atliktų kokaino injekcijų. Nors šis KOR blokados poveikis taip pat turėtų būti išbandytas pagal savanorišką kokaino vartojimą, šie rezultatai aiškiai rodo, kad amygdala KOR kontroliuoja emocinį atsaką kokaino vartojimo nutraukimo metu.
Pakartotinai apsinuodijimo ir pasitraukimo cikluose, kurie apibūdina priklausomybę, kai kurie aplinkos ženklai palaipsniui siejasi su neigiamomis emocinėmis būsenomis, o vėliau gali sukelti aversinį poveikį nepriklausomai nuo bet kokio vaisto poveikio (netgi įtraukiant tokius simptomus, kuriems būdingas nutraukimas).134)]. Šia linija Berger et al. (19) parodė, kad pašalinus iš priklausomybės nuo etanolio (dėl 22 savaitės priverstinio ekspozicijos etanolio garams), stiprėja oro pripūtimo sukeltos 2-kHz ultragarso vokalizacijos, ir šis poveikis buvo priklausomas nuo dozės priklausomybės nuo sisteminio KOR antagonizmo. Kitame eksperimentų rinkinyje autoriai siejo neutralų kvapą (migdolų kvapą), su aversyviomis sisteminės KOR aktyvacijos savybėmis. Įdomu tai, kad pakartotinis sąlytis su šiuo kondicionuojamu kvapu sustiprino etanolio operantą savarankiškai, priklausomai nuo žiurkių, ir šis poveikis buvo užblokuotas KOR sisteminėje blokadoje. Panašiai, žmonėms, pakartotinis ekspozicijos kontekstinio užuominų, kurie buvo pakartotinai suporuoti su nutraukimo sukeliamu neigiamu poveikiu, gali sukelti KOR priklausomą disforinę būseną ir stiprinti vaistų paiešką, taip prisidedant prie priklausomybės palaikymo ir depresinių simptomų atsiradimo.
Emocinės piktnaudžiavimo narkotikais pasekmės gerokai viršija ūminę nutraukimo fazę, kuri apibrėžiama kaip laikotarpis, per kurį vaistas pašalinamas iš organizmo. Neseniai atliktas tyrimas išnagrinėjo ilgalaikius KOR priklausomus pokyčius, susijusius su užsitęsusiu ištraukimu iš etanolio (135). Žiurkėms 25 – 30 paros metu buvo šeriami skysti alkoholiniai gėrimai, naudojant dviejų butelių pasirinkimo paradigmą. Praėjus šešioms savaitėms po etanolio pašalinimo, etanolio ir abstinencijose žiurkėms buvo sustiprintas nerimą keliantis elgesys (matuojamas iš karto po 20 min. Ribojimo streso padidinto plius labirinto). Šį poveikį prieš bandymą blokavo ne BNI prieš gydymą 24 h, o tai rodo, kad padidėjęs dinamorino / KOR sistemos atsparumas reakcijai gali išlikti labai ilgai po pradinio etanolio poveikio. Mūsų grupė neseniai išplėtė šį didėjantį piktnaudžiavimo opiatais įrodymų skaičių ir įtraukė Korą į emocinį trūkumą per ilgalaikį narkotikų abstinenciją pelėms. Pirmiausia parodėme, kad morfino susilaikymas palaipsniui lemia padidėjusio elgesio nevilties (uodegos suspensijos testo) atsiradimą ir socialinį pasitraukimą (136, 137). Abiem trūkumais buvo nustatyta 4 savaitės, bet ne 1 savaitė, po to, kai buvo atlikta lėtinė eksperimentinė didelė morfino dozė. Lėtinis per os gydymas antidepresantu Fluoksetinas (selektyvus serotonino reabsorbcijos inhibitorius) 4 savaitės abstinencijos periodo metu sukėlė morfino sukeltą deficitą. Be to, 5-HT metabolizmas (136) ir 5-HT1A receptorių funkcija (138) buvo reguliuojami morfino abstinencijos metu, ypač DRN, o tai rodo, kad 5-HT mechanizmai yra svarbūs. Stiprinant šį modelį, mes apibūdinome šiek tiek kitokį kinetinį modelį, naudojant heroiną (139): 4 savaitės abstinencijos metu heroino iš anksto apdorotose pelėse buvo aptikta tik socialinė pašalpa; 7 savaitės abstinencijos pradžioje šis pradinis simptomas buvo padidėjęs elgesio neviltis (FS teste). Svarbu tai, kad parodėme, kad šis stiprus socialinių sąveikų sumažėjimas (pastebėtas abiejų morfinų ir heroino susilaikymo atveju) priklauso nuo tiek MOR, tiek KOR aktyvinimo (139): šis fenotipas nebuvo: (i) cKO pelėse, kuriose MOR buvo specialiai ištrintas DRN prieš gydymą heroinu; ir (ii) konstitutinėse KOR KO pelėse. Atsižvelgiant į ankstesnius duomenis apie 5-HT ir DA sąveiką NAc lygiu KOR priklausomų CPA ir kokaino CPP modeliuose, įdomi galimybė yra ta, kad panašios monoamino sąveikos gali prisidėti prie emocinio sutrikimo opiatų susilaikymo metu, galbūt per panašias molekulines kaskadas .
Svarbus uždavinys būsimiems tyrimams bus ištirti emocinius panašumus, susijusius su sudėtingesniais priklausomybę sukeliančio elgesio modeliais. Filogeniniu ir transliacijos požiūriu ir naudojant savęs administravimo paradigmas, kelios grupės galėjo perkelti DSM-IV priklausomybės kriterijus į atkuriamus, narkotikų sukeltus elgesio sutrikimus, įskaitant kompulsinio narkotikų paieškos ir narkotikų vartojimo atsiradimą, nepaisant neigiamų pasekmių (140, 141). Mes spėliojame, kad tokie nerimą keliantys narkotikų vartojimo modeliai taip pat gali sukelti stipresnius ir ilgesnius emocinius trūkumus graužikams, ir jie gali būti geresni emocinio sergamumo, susijusio su priklausomybe, modeliai. Tokie metodai taip pat gali išreikšti matmenų požiūriu elgsenos bruožus, kurie ne tik prognozuoja perėjimą prie kompulsinio narkotikų vartojimo (pvz., Didelio impulsyvumo), bet ir emocinio sergamumo riziką.
Kartu sparčiai besiplečianti KOR literatūra skatino didelį susidomėjimą KOR antagonistų, kaip depresijos ir nerimo sutrikimų farmakoterapijos, kūrimu, taip pat streso reguliavimo gerinimu ir disforijos mažinimu priklausomybės kontekste. Nors kai kurie KOR ligandai neįrodė optimalių farmakologinių savybių, kiti įrodė, kad jie yra gyvybingi vaistiniai preparatai (142). Apibendrinant, KOR antagonistai gali (i) blokuoti streso sukeltą vaisto vartojimo stiprinimą, (ii) užkirsti kelią streso sukeltam recidyvui abstinencijos laikotarpiu ir (iii) apriboti neigiamas emocines būsenas per ūminį pasitraukimą ir ilgesnį abstinencijos laikotarpį. Nors ilgalaikiai stebėjimai ir gerai kontroliuojami tyrimai narkomanams yra metodiškai sudėtingi, šie rezultatai atitinka klinikinę ataskaitą, susijusią su depresijos opiatų pažeidėjais dėl naudingo buprenorfino, dvigubo MOR agonisto / KOR antagonisto, poveikio (palyginti su metadonu, gryno MOR agonisto) (\ t23); kitame tyrime nepavyko nustatyti šių dviejų junginių skirtumo (143). Intensyvus KOR farmakologijos tyrimas jau davė gausybę trumpųjų [Zyklopino (103), LY-2456302 (144, 145)] ir ilgalaikio veikimo (nor-BNI, GNTI, JDTic) antagonistai (146). Būsimieji tyrimai turės kruopščiai išanalizuoti jų atitinkamas signalizavimo savybes, priklausomai nuo struktūrinės konformacijos, kurią jie pasiekia su KOR, ty perspektyviu šališko agonizmo lauku [žr. (147-150)]. Palyginus KOR signalizaciją tarp graužikų ir žmonių rūšių, gali atsirasti papildomų specifinių savybių.151) arba kaip genetinių polimorfizmų funkcija (152-154). Be to, naujausia galimybė studijuoti žmogaus KOR in vivo, naudojant PET skenavimą su radioteritoriumi 11C-LY2795050 (155), yra perspektyvus. Ilgalaikėje perspektyvoje farmakogenominiai metodai gali numatyti individualizuotą gydymo būdą, orientuotą į KOR, todėl jie gali tapti veiksmingų klinikinių receptų raktu.
Kai depresija prieš priklausomybę
Siekiant išspręsti depresijos ir priklausomybės ligų neurobiologinius mechanizmus, dar vienas papildomas požiūris į gyvūnų modelius yra ištirti, kaip depresijos formos valstybės gali sustiprinti piktnaudžiavimo narkotikų elgesio poveikį ir vartojimo modelius (36, 156). Palyginti su atvirkštiniu priežastiniu ryšiu, susijusiu su komorbidumu, vėlesnis aspektas buvo prastai ištirtas, o labai mažai tyrimų ištyrė galimą KOR vaidmenį.
Šiame kontekste esami rodikliai yra nenuoseklūs, o lėtiniai streso modeliai, susiję su depresija, susiję su padidėjusiu piktnaudžiavimo narkotikais poveikiu (jautrumo pasekmių būdams, kurie atitiktų žmonių bendravimą) arba sumažėjusiu poveikiu. Krishnan et al. (93) parodė, kad pelėms, kurios yra jautrios lėtiniam socialiniam pralaimėjimui, kuriančioms ilgalaikius depresinius požymius, įskaitant sumažėjusį sacharozės pasirinkimą ir socialinį vengimą, taip pat matyti, kad kokaino dozėmis, kurios nesustiprina neištirpusiose pelėse, arba įveikti bet elastingos pelės.
Lėtinis lengvas stresas yra dar vienas depresijos modelis, kuris grindžiamas nenuspėjamu graužikų poveikiu daugeliui lengvų stresorių, paprastai per 4 – 8 savaites. Šis modelis yra plačiai naudojamas dėl savo veido, konstrukcijos ir nuspėjamumo patikimumo (157-159). Dažniausiai pasitaikantis elgesys lėtinio švelnaus streso (CMS) eksperimentuose yra sumažėjęs sacharozės tirpalo arba anhedonijos preferencija (virš vandens). Atrodo, kad šis anhedoninis fenotipas apima ir stiprinančias piktnaudžiavimo narkotikų savybes, nes sumažėjęs amfetamino CPP (160) ir morfinas (161) buvo pranešta po žiurkių CMS. Stebėtina, kad mūsų žiniomis, nėra jokių tyrimų, susijusių su CMS poveikiu KOR KO pelėse: ar KOR ekspresija sustiprinta įtemptose WT pelėse? Kuriuose smegenų regionuose? Ar KOR KO pelės būtų apsaugotos nuo lėtinio streso poveikio? Šių spragų šalinimas literatūroje, Al-Hasani et al. neseniai išnagrinėjo trijų stresinių modalinių procesų, susijusių su CPP, pakartotinį poveikį: CMS, „subkronišką socialinį pralaimėjimą“ (trumpesnį 5 dienos socialinio pralaimėjimo formą) ir vieną ūmaus FS stresą (162). Rezultatai parodė, kad, kaip aprašyta anksčiau, ūminis stresas stiprina KOR-medijuojamą kokaino CPP atstatymą. Priešingai, buvo nustatyta, kad tiek CMS, tiek subhroninis socialinis pralaimėjimas susilpnina KOR agonistų priklausomą kokaino ir nikotino CPP atkūrimą. Kaip ir tikėtasi, CMS nepaveikė vaisto sukeltos kokaino arba nikotino CPP atkūrimo, o ankstesniais įrodymais apie specifinį KOR poveikį streso sukeltam recidyvui nebuvo. Šie priešpriešiniai rezultatai rodo, kad bent jau graužikų modeliuose CMS gali turėti apsauginį arba adaptyvų poveikį prieš narkotikų atkrytį, kuri yra prastai pritaikyta epidemiologiniams ir klinikiniams žmonėms.
Apskritai, mes spėliojame, kad panašūs į elgesį elgesys po CMS arba ilgalaikio socialinio pralaimėjimo gali sumažinti ūmias stiprinančias piktnaudžiavimo narkotikų savybes (vertinant pagal narkotikų vartojimo, išnykimo ir atkryčio vietovės pirmenybės paradigmas), galbūt sukeldamas nuo KOR priklausomą mechanizmą . Tuo pat metu streso sukeltas anhedonija taip pat gali sustiprinti kompulsinių vaistų vartojimą, kai vartojamas nuolatinis savanoriškas piktnaudžiavimo narkotikų vartojimas, taigi ir skatinant patekti į priklausomybę. Norėdami ištirti šią galimybę, būsimieji tyrimai idealiai derins dvi pažangių elgesio paradigmų grupes: pirmiausia CMS arba lėtinį socialinį pralaimėjimą, po to pratęsia operacinį narkotikų savarankišką administravimą. Dabar turimų CKO pelių gausa turėtų būti naudinga geriau suprasti KOR vaidmenį šiuose kombinuotuose ikiklinikiniuose komorbidumo metoduose.
Ateities kryptys ir išvados
Pagrindinis iššūkis ateityje bus atskleisti dinaminį endogeninės dinamorino / KOR sistemos pritaikymą, nes atsiranda ir vystosi nuotaikos ir atlygio sutrikimai. Šis klausimas yra labai klinikinis, atsižvelgiant į šių dviejų sąlygų chroniškumą. Visų pirma turimi įrodymai rodo, kad KOR daro daugybę kontrolinių pagrindinių monoaminų graužikams. Įdomu tai, kad priklausomybės tyrimai rodo, kad pakartotinis piktnaudžiavimas narkotikais sutrikdo abipusius grįžtamąjį grįžtamąjį ryšį tarp monoaminerginių branduolių, kurie gali tarpininkauti ilgalaikiam elgesio sutrikimui (163, 164). Ar tokie mechanizmai taip pat kenkia nuo KOR priklausomam nuotaikų reguliavimui, yra intriguojanti hipotezė, susijusi su komorbidumu.
Kumuliaciniai įrodymai Koro srityje neseniai paskatino gydytojus atlikti smegenų vaizdavimo tyrimus ir klinikinius tyrimus (22). Visai neseniai pirmasis PET-Scan tyrimas, kuriame buvo naudojamas radioaktyvus KOR antagonistas, sugebėjo įrodyti reikšmingą ir plačiai paplitusį KOR sutrikimą. in vivo pacientams, kenčiantiems nuo baimės ir disforinių simptomų po sunkios traumos poveikio (\ t165). Nors rezultatai gerai atitinka gyvūnų duomenis apie KOR ir mezolimbinį kelią, jie taip pat rodo, kad kiti smegenų regionai, kurie šiuo metu yra prastai ištirti ikiklinikiniuose nustatymuose, gali būti vienodai svarbūs (pvz., Talamus ir salų žievė). Reikia papildomų tyrimų, kad būtų galima toliau įvertinti KOR prieinamumą gerai apibūdintoms depresijos, priklausomybės ir bendrų ligonių grupėms. Galiausiai, farmakologiniu požiūriu, sparčiai besivystanti šališkos agonizmo (arba ligandų nukreiptos signalizacijos) sritis kelia didelių vilčių dėl KOR taikomųjų terapijų (149). Pagrindinis G-baltymų sujungtų receptorių srities tikslas yra nustatyti skirtingus signalizacijos kelius, galinčius valdyti specifinius elgesio atsakymus. Netolimoje ateityje tokie metodai greičiausiai padės vystyti antidepresantus, kurie veikia kaip KOR antagonistai ir neturintys galimo neigiamo poveikio (pvz., Hiperalgezijos).
Apibendrinant, šioje apžvalgoje apibendrinome daug įrodymų, patvirtinančių KOR vaidmenį reguliuojant atlygį ir nuotaiką. Mes taip pat aprašėme, kaip šis receptorius idealiai tinka tarp dviejų stiprių psichikos sutrikimų, priklausomybės ir depresijos sąveikai. Apskritai, ikiklinikiniai KOR tyrimai rodo, kaip transversiniai tyrimai, atliekami keliuose gyvūnų modeliuose, gali nustatyti smegenų mechanizmus, kurie prisideda prie transdiagnostinių patofiziologinių procesų, ir todėl yra pagrindiniai gydymo tikslai, susiję su bendru susirgimu, vienas svarbiausių pasaulinių psichikos problemų. sveikata.
Interesų konflikto pareiškimas
Autoriai teigia, kad tyrimas buvo atliktas nesant jokių komercinių ar finansinių santykių, kurie galėtų būti laikomi galimu interesų konfliktu.
Padėka
Autoriai dėkoja Dr. Laura Fiori už kritinį rankraščio skaitymą. Šį darbą palaikė „Agence Nationale de la Recherche“ („ANR-Abstinence“).
Nuorodos
;
