Endogēno opioīdu izraisītais dopamīnerģisko neironu neiroplastiskums vēdera apvidū ietekmē dabisko un opiātu atlīdzību (2014)

KOMENTĀRI: Jūsu darbs IR Klientu apkalpošana DeltaFosB pētījumi mēs bieži atsaucamies uz visiem kodols accumbens (atlīdzības centrs), un konstatēja, ka sekss diezgan lielā mērā iedarbina tos pašus smadzeņu mehānismus kā mets un kokaīns. No šī paša pētnieka nozīmīgā pētījuma (Dabas un zāļu apbalvojuma likums par kopīgiem neironu plastiskuma mehānismiem ar ΔFosB kā galveno mediatoru (2013)):

Tādējādi dabiskā un zāļu atlīdzība ne tikai saplūst vienā un tajā pašā nervu ceļā, bet arī vienā un tajā pašā molekulārajā starpniekā un, iespējams, tajos pašos Nucleus Accumbens neironos, lai ietekmētu abu atlīdzību veidu stimulēšanu un vēlmi.

Atņemšana: met, kokaīns un sekss visu to pašu nervu šūnu atalgojuma centrā (nucleus accumbens) dara tāpat kā jebkura citur smadzenēs. Tas izjauca parasto runas punktu, ka dabas atlīdzības un narkotikas atšķiras mehānismos un sekās.

Šajā jaunajā pētījumā tika pārbaudīts, ko dzimums nodara VTA. VTA ir vieta, kur sākas dopamīnu ražojošās nervu šūnas - un tās sazarojas ar accumbens kodolu, frontālo garozu un amygdala. Būtībā VTA ir mūsu dopamīna lielākās daļas avots (avots). Skatiet šos divus atalgojuma ķēdes attēlus: Pic1, Pic2

Pētnieki atklāja, ka sekss (kulminācija) izraisa VTA šūnu struktūru īslaicīgu sarukšanu (vīriešiem). Šūnu ķermeņi un to dendriti sastāv no smadzeņu pelēkās vielas. Tieši tas ir atkarīgs no heroīna atkarības no VTA (ne vienreizēja heroīna lietošana, bet hronīna hroniska lietošana). Ņemiet vērā, ka tas pats samazinās VTA šūnu ķermeņi notiek cilvēka heroīna atkarīgajiem.

Dzimumu izraisīta šūnu saraušanās ilgst vismaz 7 dienas. 30 dienās dzimuma izraisītās pārmaiņas bija normalizējušās, bet pētnieki novērtēja tikai 1, 7 un 30 dienas.

Šūnu ķermeņu saraušanās heroīna atkarībā izraisa zemāku dopamīna līmeni accumbens kodolā - vai to, ko mēs saucam desensibilizācija. Pētnieki žurkām ievadīja morfiju, lai novērtētu viņu reakciju (pēc dzimuma), taču nekas nenotika. Parasti žurkām morfijs ļoti patīk, bet šeit tās uz laiku tika desensibilizētas. Īsāk sakot, pēc ejakulācijas žurku atalgojuma shēma nereaģēja uz zemo heroīna līmeni. Pētnieki pieļāva, ka, lai izraisītu “normālu” žurku reakciju, būs nepieciešamas lielākas devas.

Rezumējot - sekss (uz laiku) VTA dara tieši to pašu, ko atkarība no heroīna: dopamīnu ražojošo nervu šūnu ķermeņu saraušanās. Tas noved pie zemāka dopamīna līmeņa atlīdzības centrā un mazāk reaģēšanas uz narkotikām - un žurku smadzeņu atjaunošanās prasa vismaz 7 dienas.

 

J Neurosci. 2014 Jun 25;34(26):8825-36. doi: 10.1523 / JNEUROSCI.0133-14.2014.

Krūzes KK1, Coppens CM2, Beloate LN3, Fuller J2, Van S2, Frohmader KS2, Laviolette SR2, Lehman MN4, Coolen LM5.

Anotācija

Dabiskā atlīdzība un ļaunprātīgas izmantošanas narkotikas saplūst ar mezolimbisko ceļu un aktivizē kopīgo nervu plastiskuma mehānismu kodolā. Hroniska iedarbība uz opiātiem inducē plastiskumu ventrālās tegmentālās zonas (VTA) dopamīnerģiskajos neironos, kas regulē morfīna atalgojuma toleranci.

Šeit mēs pārbaudām hipotēzes, ka endogēno opioīdu atbrīvošanās no VTA izraisa VTA dopamīna šūnu morfoloģiskās izmaiņas vīriešu kārtas žurkām, kas savukārt regulē pieredzes izraisītas seksuālās uzvedības pastiprināšanos.

Pirmkārt, seksuālā pieredze samazināja VTA dopamīna soma lielumu 1 un 7 dienas, bet ne 30 dienas pēc pēdējās pārošanās sesijas. Šo efektu bloķēja naloksons pirms katras pārošanās sesijas; tādējādi VTA dopamīna šūnu plastiskums bija atkarīgs no endogēno opioīdu iedarbības.

Savukārt VTA plastiskums bija saistīts ar mainītu opiātu atlīdzību, jo seksuāli pieredzējuši vīrieši neizveidoja nosacītu vietu priekšroku 0.5 mg / kg morfīna lietošanai.

Pēc tam tika noskaidrots, vai endogēnā opioīdu darbība mediē seksuālu atalgojumu un atmiņu tēviņiem, kas ārstēti ar naloksonu pārošanās pieredzes laikā, vai nu sistēmiski, vai VTA ietvaros. Naloksons neaizkavēja sākotnējo pieredzi, kas izraisīja seksuālās uzvedības atvieglošanu vairākkārtējās pārošanās sesijās, vai nosacītu vietu izvēli pārošanai. Tomēr ārstēšana ar naloksonu mazināja ilgstošas ​​pieredzes izraisītas seksuālās uzvedības un neirālās aktivācijas veicināšanas izpausmes mesolimbiskajās zonās, ko izraisīja pārošanās saistītās konditorejas norādes.

Kopā šie dati liecina, ka endogēni opioīdi pārošanās laikā izraisa nervu plastiskumu VTA dopamīna neironos, kas šķiet kritiski morfīna atalgojumam un ilgtermiņa atmiņai par dabisku atalgojumu.

 

Ievads

Dabisko atalgojuma uzvedību nodrošina mesokortikolimbiska sistēma (Meisel un Mullins, 2006; Hoebel et al., 2009; Frohmader et al., 2010a; Pitchers et al., 2010a; Young et al., 2011; Blum et al., 2012). Ļaunprātīgas narkotikas izraisa nervu izmaiņas šajā sistēmā, kas savukārt veicina narkotiku lietošanu (Hymans et al., 2006; Nestler, 2012). Mēs iepriekš noteicām, ka pieredze ar dabisku atalgojuma uzvedību, ti, seksuālā pieredze vīriešu kārtas žurkām, izraisa arī nervu plastiskumu kodolkrāsās (NAc), ieskaitot paaugstinātu dendritisko muguriņu (Pitchers et al., 2010a) un deltaFosB (Pitchers et al., 2013). Savukārt šī dzimuma izraisītā plastiskums ir būtisks, lai sekotu pieredzei sekojošā pārošanā, kas izpaužas kā seksuālās uzvedības uzsākšanas un izpildes atvieglošana (Pitchers et al., 2010b, 2012, 2013). Turklāt dzimumattiecības maina reakciju uz psihostimulantiem, ieskaitot lokomotoriskās aktivitātes jutīgumu un paaugstinātu atalgojumu (Frohmader et al., 2010a; Pitchers et al., 2010a, 2013).

NAc ir viens no dopamīnerģisko neironu ventrālās tegmentālās zonas (VTA) mērķa posmam. VTA dopamīna neironi tiek aktivizēti pārošanās laikā un pēc pakļaušanas dzimumattiecību prognozētajiem rādītājiem (Balfour et al., 2004; Frohmader et al., 2010a), izmantojot endogēno opioīdu peptīdu (EOP), kas saistās pie μ-opioīdu receptoriem (MOR; Matthews un vācu valoda, 1984; Johnson un North, 1992; Klitenick et al., 1992; Ikemoto et al., 1997; Balfour et al., 2004). Līdz ar to pakļaušana seksuālai uzvedībai paredzētām kondicionētām cues izraisa EOP un VTA dopamīna šūnu aktivācijas atbrīvošanu, kas veicina seksuālo motivāciju (Mitchell un Stewart, 1990; van Furth et al., 1995; van Furth un van Ree, 1996) un dopamīna izdalīšanās NAc (Fiorino et al., 1997).

Atkārtota eksogēno opiātu iedarbība izraisa morfoloģiskas izmaiņas VTA (\ tMazei-Robison et al., 2011; Mazei-Robison un Nestler, 2012), samazināts VTA dopamīna neironu lielums (Sklair-Tavron et al., 1996; Spiga et al., 2003; Chu et al., 2007; Russo et al., 2007; Mazei-Robison et al., 2011), samazināts neirofilamenta proteīnu līmenis (\ tBeitner-Johnson et al., 1992), palielināta dopamīna šūnu uzbudināmība un samazināta axoplazmas transportēšana un dopamīna izlaide NAc (\ tBeitner-Johnson et al., 1992; Mazei-Robison et al., 2011). Šīs VTA dopamīna neironu pārmaiņas izraisa morfīna atalgojuma toleranci un ir īslaicīgas, jo tās izkliedējas mēneša laikā pēc zāļu atturēšanās (Russo et al., 2007). Pašlaik nav skaidrs, vai VTA dopamīna neironu plastiskums ir unikāls opiātu iedarbībai, vai arī, ja tos rada arī EOP atbrīvošana dabiskās atalgojuma uzvedības laikā.

Šeit mēs pārbaudām hipotēzi, ka dabiskā atalgojuma pieredze izraisa neiroplastiku, kas ir līdzīga opiātu izraisītajai neiroplastikai, un tādējādi opiāti saplūst ar plastiskuma mehānismu, kas ir būtisks dabiskai atalgojuma uzvedībai un atalgojuma atmaksāšanai. Mēs pārbaudām, vai seksuālā pieredze vīriešu kārtas žurkām samazina VTA dopamīna neironu soma lielumu, izmantojot procesu, kas ir atkarīgs no EOP darbības VTA. Turklāt mēs pētām, vai EOP izraisītas izmaiņas VTA dopamīna neironos ir saistītas ar dabiskās atalgojuma uzvedību un stimulu piesaistes piešķiršanu signāliem, kas saistīti ar dabisko atlīdzību, vienlaikus radot savstarpēju toleranci pret morfīna atlīdzību.

Materiāli un metodes

Dzīvnieki

Pieaugušo tēviņu Sprague-Dawley žurkas (200 – 225 g) ieguva no Charles River un visos eksperimentos izmitināja pāros mākslīgi apgaismotās telpās ar gaismas / tumšā cikla 12 h ciklu (izgaismojās 10: 00 AM, izņemot morfīna tolerances eksperimentu , 5: 00 PM) izgaismojas. Pārtika un ūdens bija pieejami ad libitum izņemot uzvedības testēšanas laikā. Sievietēm ar stimuliem tika veikta ovarektomācija un subkutāni implantētas ar 5% 17-β-estradiola benzoāta SILASTIC kapsulām (1.98 mm iekšējais diametrs, 0.5 cm garums, Dow-Corning). Progesterona injekcijas (subkutāni, 500 μg 0.1 ml sezama eļļas) tika ievadītas 3 – 6 h pirms testēšanas, lai izraisītu seksuālu uztveramību. Visas procedūras apstiprināja Rietumu Ontario Universitāte un Mičiganas Universitātes Dzīvnieku aprūpes komitejas, un tās atbilst Kanādas Dzīvnieku aprūpes padomei un Nacionālajiem veselības institūtiem, kuros pētījumos iesaistīti mugurkaulnieki.

VTA dopamīna soma izmēra izmaiņas

Ikdienas pārošanās sesijas.

Lai izpētītu dopamīna neironu soma lieluma izmaiņu laika gaitu VTA, seksuāli pieredzējuši un naivi dzīvnieki tika nogalināti 1, 7 vai 31 d (n = 5 – 8 grupā) pēc pēdējās pārošanās (pieredzes) vai apstrādes (naivs). Seksuāli pieredzējušās grupas tika saskaņotas seksuālās uzvedības laikā pēdējās pārošanās sesijas laikā, kā arī kopējais ejakulāciju skaits piecās sesijās (vidējais 5 katrai grupai) un neatšķīrās nevienā seksuālās uzvedības parametrā.

Pārošanās sesijas.

Seksuāli naivi vīrieši tika iekļauti vienā no diviem eksperimentāliem apstākļiem: seksuāli naivs vai seksuāli pieredzējis. Seksuāli pieredzējušiem dzīvniekiem tika atļauts piecas reizes pēc kārtas sakārtot sievietes taisnstūra testā (60 × 45 × 50 cm), līdz parādās ejakulācija vai līdz 1 h (atkarībā no tā, kas notika pirmais). Būri tika rūpīgi iztīrīti ar 70% etanola šķīdumu, un starp pārošanās sesijām pievienoja svaigu pakaišu. Seksuālā uzvedība tika veikta tumšās fāzes laikā (2 – 6 h pēc tumsas sākuma). Tikai tādi dzīvnieki, kas ejakulēti vismaz četru piecu pārošanās sesiju laikā, tika uzskatīti par seksuāli pieredzējušiem un iekļauti eksperimentos. Tika novērotas visas pārošanās sesijas un reģistrēta seksuālā uzvedība. Stiprinājumu skaits (M) intromīziju (IM), mount latency (ML; laiks no sievietes ieviešanas līdz pirmajam stiprinājumam), intromissiona latentums (IL; laiks no sievietes ievadīšanas līdz pirmajai intromīzijai) un ejakulācijas latentums (EL; laiks, sākot no pirmās ievadīšanas līdz ejakulācijai) tika \ tAgmo, 1997). Naivi dzīvnieki tika ievietoti tīrā testa būrī 1 h vienlaicīgi ar seksuāli pieredzējušiem vīriešiem, kuri pāroja vienā telpā, tādā veidā, ka tie bija pakļauti tālām sieviešu smaržām un līdzīgiem traucējumu un vides novitātes līmeņiem kā pieredzējušiem vīriešiem.

Imunofluorescences marķēšana.

Dzīvnieki tika dziļi anestezēti, izmantojot nātrija pentobarbitālu (270 mg / kg, ip) un perfūzēti intrakardiāli ar 50 ml 0.9% sāls šķīdumu, kam sekoja 500 ml 4% paraformaldehīda 0.1 m nātrija fosfāta buferšķīdumā (PB). Smadzenes tika noņemtas un pēc tam pievienotas 1 h istabas temperatūrā (RT) tajā pašā fiksatorā un pēc tam iegremdētas 20% saharozē un 0.01% nātrija azīdā 0.1 m PB uzglabāšanai 4 ° C. Koronālās sekcijas tika sagrieztas pie 35 μm uz sasalšanas mikrotomas (H400R, Microm) un tika savāktas četrās paralēlās sērijās krioprotektanta šķīdumā (30% saharoze, 30% etilēnglikols 0.1 m PB), pēc tam uzglabājot 20 ° C. Visas inkubācijas tika veiktas RT ar vieglu maisīšanu un plašu skalošanu ar 0.1 m PBS, pH 7.35, starp inkubācijām. Sekcijas tika pakļautas 1% H2O2 10 min, lai iznīcinātu endogēnās peroksidāzes, tad bloķēta 1 h inkubācijas šķīdumā (PBS +: PBS, kas satur 0.4% Triton X-100; Sigma-Aldrich) un 0.1% liellopu seruma albumīnu (Jackson Immuno Research Laboratories). Tālāk sekcijas tika inkubētas uz nakti RT ar peles tirozīna hidroksilāzes (TH) antivielām (1: 20 000; Millipore). Pēc primārās antivielu inkubācijas sekcijas tika inkubētas AlexaFluor 555 konjugētā kazu anti-peles antivielā (1: 100; Invitrogen, Eugene, OR) 30 min. Visbeidzot, sekcijas tika nomazgātas ar 0.1 m PB, uzstādītas uz Superfrost Plus stikla priekšmetstikliņiem, žāvētas un pārklātas ar gelvatolu, kas satur anti-fading aģentu 1,4-diazabiciklo (2,2) oktānu (DABCO; 50 mg / ml, Sigma-Aldrich; Lennette, 1978).

Datu analīze: neironu soma lielums.

THT imunoreaktīvo (IR) neironu attēli VTA tika ņemti ar 40 × palielinājumu trīs rostralos līdz caudal līmeņiem (Balfour et al., 2004). Atšķirības starp šūnām dažādos līmeņos netika konstatētas. TH-IR neironu soma izmērs tika analizēts, izmantojot ImageJ (National Health Institute of Health). Vidējais laukums, perimetrs un apkārtraksts tika mērīti, kā aprakstīts Sklair-Tavron et al. (1996). Tika analizēts vidējais 25 šūnu skaits katram dzīvniekam (apvienojot visus 3 VTA līmeņus) un tika iekļautas tikai šūnas ar skaidri redzamu kodolu. Katram dzīvniekam tika aprēķināts vidējais laukums, perimetrs un apkārtraksts. Statistiskai analīzei tika izmantota divvirzienu ANOVA [faktori: seksuālā pieredze (seksuālā pieredze vai sekss naivs) un laiks (1, 7 vai 31 d)], kam sekoja post hoc salīdzinājumi, izmantojot Holm-Sidak metodi ar nozīmīguma līmeni 0.05.

VTA nav dopamīna izmaiņas

Divreiz nedēļas pārošanās sesijas.

Lai pārbaudītu, vai ir nepieciešama seksuāla pieredze ikdienas pārošanās sesijās, lai samazinātu TH-IR neironu soma lielumu, tika analizēti piecu nedēļu laikā pārošanās laikā dzīvojošu dzīvnieku VTA dopamīna neironi. Pārošanās sesijas bija iepriekš aprakstītās, bet 2.5 nedēļu laikā. Pēc pēdējās pārošanās vai apstrādes tika ievāktas smadzenes 7 d.

Imunoperoksidāzes marķēšana.

Turklāt tika pārbaudīts, vai, izmantojot jutīgas krāsošanas metodes ar imunoperoksidāzes un hromogēna noteikšanu, būtu iespējams vizualizēt arī TH-IR soma lieluma izmaiņas. Perfūzija un audu apstrāde bija iepriekš aprakstītā rīcība. Pēc ārstēšanas ar 1% H2O2 un PBS +, sekcijas tika inkubētas uz nakti RT ar peles poliklonālo tirozīna hidroksilāzes (TH) antivielu (1: 20 000; Millipore). Pēc primārās antivielu inkubācijas sekcijas tika inkubētas ar biotīna konjugētu kazu anti-trušu IgG (1 h, 1: 500 PBS +; Vector Laboratories), avidīna-biotīna-mārrutku peroksidāzi (1 h, ABC elite; 1: 1 000 PBS Vector Laboratories) un 3,3'-diaminobenzidīna tetrahidrogēnhlorīds (10 min, 0.02%, DAB; Sigma-Aldrich) ar niksa sulfātu (0.02% 0.1 m PB) ar ūdeņraža peroksīdu (0.015%). Sekcijas tika rūpīgi nomazgātas 0.1 m PB, lai izbeigtu reakciju un piestiprinātu kodētā Superfrost plus stikla priekšmetstikliņiem (Fisher) ar 0.3% želatīnu ddH.2O. Pēc dehidratācijas visi slaidi tika pārklāti ar DPX stiprinājumu (dibutilftalāta ksilolu; Sigma-Aldrich).

Datu analīze: neironu soma lielums.

TH-IR šūnām tika analizēts laukums, perimetrs un cirkulārums, kā aprakstīts iepriekš. Turklāt tika analizētas TH-IR šūnas Essenti nigra (SN) tajās pašās sadaļās, kuras tika izmantotas VTA TH-IR šūnu analīzei. Visbeidzot, pēc VTA un SN TH-IR šūnu analīzes, sekcijas tika kontrastētas, izmantojot krezilvioletu, un šūnas, kas nebija TH-IR, tika analizētas, izmantojot tās pašas metodes, kas aprakstītas iepriekš. Atšķirības starp naivām un pieredzējušām grupām tika salīdzinātas, izmantojot divpakāpju Studentu grupas t testus ar nozīmīguma līmeni 0.05.

Naloksona ietekme uz pieredzes izraisītu dopamīna soma lieluma samazināšanu

Lai noteiktu, vai MOR ir bijusi nozīme seksuālās pieredzes izraisītajās dopamīna neironu soma lieluma izmaiņās, seksuālās uzvedības laikā MOR tika bloķēti. Puse no dzīvniekiem ieguva seksuālu pieredzi, bet otra puse tika apstrādāta, bet palika seksuāli naivi. Seksuāli pieredzējušiem dzīvniekiem tika atļauts pārdzīvot 5 dienas pēc kārtas. Seksuāli pieredzējušās un naivās grupās dzīvnieki tika ārstēti ar neselektīvu MOR antagonistu naloksonu (10 mg / kg, sc; Sigma-Aldrich, izšķīdināts 0.9% sāls šķīdumā) vai sāls šķīdumu 30 min pirms ievadīšanas sievietēm (pieredzējuši) vai pirms lietošanas (naivs); tādējādi radot četras eksperimentālas grupas: seksuāli naivs sāls šķīdums (Naive Sal), seksuāli naivs naloksons (Naive NLX), seksuāli pieredzēts sāls šķīdums (Exp Sal) un seksuāli pieredzējis naloksons (Exp NLX; n = 5 – 8 grupā). Naloksona terapijai nebija statistiski nozīmīgas ietekmes uz jebkuru seksuālās uzvedības parametru, uz kādu no 5 d, un naloksona un sāls šķīduma grupām bija identiska seksuālā pieredze. Visi dzīvnieki tika nogalināti ar intracardiālo perfūziju 7 d pēc pēdējās pārošanās. Sekcija, imūnhistoķīmija un datu analīze (divvirzienu ANOVA; faktori: seksuālā pieredze un zāļu ārstēšana) dopamīna soma lielumam tika veikti, kā aprakstīts iepriekš.

Morfīna kondicionēta vieta

Eksperimentālais dizains.

Agrāk, Russo et al. (2007) parādīja hronisku morfīnu, kas izraisa toleranci pret morfīna atalgojumu. Tā kā seksuālā pieredze un hroniskā morfīna VTA ietekmē līdzīgu dopamīna neironu soma lieluma samazināšanos, dzimuma izraisīto morfoloģisko izmaiņu funkcionālā nozīme tika pārbaudīta attiecībā uz morfīna atlīdzību. Seksuāli pieredzējuši un naivi dzīvnieki tika sadalīti sešās dažādās eksperimentālās grupās (n = 9 – 13 katrā grupā), pamatojoties uz seksuālo uzvedību (seksuāli naivs vai pieredzējis) un morfīna devu (0.5, 5.0 vai 10.0 mg / kg, ip) un testēja morfīna izraisītas nosacītas vietas preferences (CPP).

Morfīns-CPP.

Kondicionēšana notika 1 d pēc pēdējās pārošanās sesijas un grupas tika saskaņotas seksuālai izpildei pēdējās pārošanās sesijas laikā. Izmantotā CPP paradigma sastāvēja no pretestības, kondicionēšanas dienām un pēcpārbaudes, un aparāts tika balstīts uz Tenk et al. (2009). Īsāk sakot, CPP aparāts (MED Associates) sastāvēja no trim atšķirīgām kamerām. Starp katru sesiju aparāts tika rūpīgi iztīrīts ar 70% etanola šķīdumu, lai samazinātu ieilgušos ožas signālus. Lai noteiktu individuālās vēlmes, tika veikts iepriekšējs tests, kura laikā dzīvniekiem 15 minūtes tika dota brīva piekļuve visam aparātam. Dzīvnieki kā grupa neuzrādīja būtisku priekšroku konkrētai kamerai, bet katram atsevišķam dzīvniekam sākotnēji bija neliela priekšroka. Žurkas, kuras priekšnoteikuma laikā izrādīja ievērojamu priekšroku vienai no kamerām (atšķirība starp katrā kamerā pavadīto laiku> 200 s; <5% dzīvnieku), tika izslēgtas no pētījuma. Kondicionēšanas laikā zāles tika savienotas pārī ar sākotnēji vēlamo vai nepiedāvāto kameru, izmantojot objektīvu paradigmu (Tzschentke, 2007) un dzīvnieki bija tikai 30 min. Dzīvniekus no rīta ievadīja fizioloģisko šķīdumu (ip) (9: 00 AM līdz 12: 00 PM) un tikai ar sāls šķīduma savienojumu. Pēcpusdienā (1: 00 – 4: 00 PM) dzīvnieki tika injicēti ar morfīnu (ip, 0.5 mg / kg, 5.0 mg / kg vai 10.0 mg / kg; morfīna sulfāts, izšķīdināts 0.9% sāls šķīdumā, Johnson Matthey) un norobežots. uz morfīna pāra kameru. Dzīvnieki tika pakļauti divām kondicionēšanas dienām. Nākamajā dienā (3 d pēc pēdējās pārošanās dienas) notika pēcpārbaude, kas bija procesuāli identiska pretestam. Statistiskai analīzei morfīna pāra kamerā pavadītais laiks pēc testa tika salīdzināts ar laiku, kas pavadīts sāļu pārī esošajā kamerā seksuāli naivu vai pieredzējušu vīriešu pēc testa laikā katrā devā, izmantojot pārī t pārbaude. p <0.05 tika uzskatīts par statistiski nozīmīgu. Papildu seksuāli naivu un pieredzējušu dzīvnieku kontroles grupas saņēma fizioloģisko šķīdumu gan pārī, gan nesapārotajās kamerās, lai kalpotu kā negatīva kontrole. Nevienai grupai netika konstatētas atšķirības starp pavadīto laiku.

Sistēmiskās naloksona ietekme uz pieredzes izraisītu seksuālās uzvedības veicināšanu

Eksperimentālais dizains.

Seksuālā pieredze sekmē seksuālās uzvedības veicināšanu vismaz 1 mēnesī (Pitchers et al., 2012). Lai analizētu MOR bloķēšanas ietekmi uz pieredzes izraisītu seksuālās uzvedības veicināšanu, seksuāli pieredzējuši dzīvnieki pirms piecām secīgām pārošanās sesijām saņēma naloksonu vai sāls šķīdumu (n = 12 katrs), kā aprakstīts iepriekš. Nedēļu pēc pēdējās pārošanās notika pēdējais pārošanās tests, kura laikā visiem dzīvniekiem tika atļauts līdz vienam ejakulācijai vai līdz 1 h. Pirms pārošanās pēdējā testa dienā naloksona vai sāls šķīduma ārstēšana netika veikta. Pārošanās parametri tika salīdzināti, lai noteiktu, vai naloksons ietekmēja abu dzimumu pieredzes izraisītu pārošanās atvieglošanu (1 diena pret 5 dienu) vai saglabājot šo atvieglojumu (diena 5 pret testu), izmantojot divvirzienu ANOVA [faktori: ārstēšana (sāls šķīdums pret naloksonu) ) un dienu (diena 1, diena 5 vai tests)] un Holm – Sidak metodi post hoc salīdzinājumi. Visiem statistikas testiem, \ t p <0.05 tika uzskatīts par statistiski nozīmīgu.

Papildu kontroles eksperimenti

Sistēmiskā naloksons testa dienā.

Lai pierādītu, ka izmainītā seksuālā uzvedība galīgajā pārošanās testa dienā nebija saistīta ar naloksona neesamību, mēs galīgajā pārošanās dienā ievadījām naloksonu vai sāls šķīdumu dzīvniekiem, kuri saņēma pārošanos ar naloksonu, kamēr viņi ieguva seksuālu pieredzi. Konkrēti, visi dzīvnieki saņēma naloksona injekciju (10 mg / kg, sc) 30 min pirms pārošanās uz vienu ejakulāciju 5 secīgu dienu laikā. 7 d testa dienā aptuveni puse dzīvnieku saņēma naloksona injekciju (10 mg / kg, \ t n = 7) vai sāls šķīdums (n = 6) 30 min pirms uzņemošās sievietes ievadīšanas. Novērota un reģistrēta seksuālā uzvedība. Pārošanās parametri tika salīdzināti, lai noteiktu, vai naloksons ietekmēja abu dzimumu pieredzes izraisītu pārošanās atvieglošanu (1 diena pret 5 dienu) vai saglabājot šo atvieglojumu (diena 5 pret testu), izmantojot divvirzienu ANOVA [faktori: ārstēšana (sāls šķīdums pret naloksonu) ) un dienu (1 diena, diena 5 vai tests)] un Holm-Sidak metodi post hoc salīdzinājumi. Visiem statistikas testiem, \ t p <5% tika uzskatīti par statistiski nozīmīgiem.

Naloksona ietekme uz īslaicīgu atvieglinātas seksuālās uzvedības izpausmi.

Naloksona (10 mg / kg, sc) terapijas ietekme pārošanās laikā tika pārbaudīta pēc sekojošas seksuālās uzvedības pēdējā pārošanās testa dienā, kas tika veikta tikai pēc 1 d pēc pēdējās pārošanās (sāls šķīdums). n = 5; naloksons, n = 4).

Sistēmiska naloksona pirmapstrāde.

Lai noskaidrotu, vai atkārtota naloksona ārstēšana vien izraisa seksuālās uzvedības traucējumus 7 d pēc pēdējās ārstēšanas, seksuāli naivie dzīvnieki saņēma piecas dienas naloksona (10 mg / kg, sc) vai sāls šķīduma injekcijas pēc kārtas pirms pārošanās testa 7 d pēc naloksona. vai sāls šķīdums. Šajā pēdējā testa dienā dzīvnieki neinjicēja. Seksuāla uzvedība tika novērota un reģistrēta, kā aprakstīts iepriekš. Pārošanās parametri tika salīdzināti starp grupām, izmantojot nesaistītus t testus. Visiem statistikas testiem, \ t p <5% tika uzskatīti par statistiski nozīmīgiem.

Sistēmiska naloksona un dzimuma atlīdzība.

Viena iespēja naloksona mīkstinošajai iedarbībai uz atvieglotās seksuālās izturēšanās parādīšanu ir tā, ka naloksons bloķē seksuālās uzvedības labvēlīgo iedarbību. Lai pārbaudītu šo iespēju, CPP paradigma tika veikta pēc seksuālas uzvedības tūlīt pēc naloksona vai fizioloģiskā šķīduma injekcijas vīriešiem, kuriem nav iepriekšējas seksuālas pieredzes. CPP procedūra bija līdzīga iepriekš aprakstītajai morfīna-CPP, ieskaitot pirmstestu, kondicionēšanas dienas un pēctestu.

Seksu uzvedība tika savienota ar sākotnēji neizmantoto kameru. Pretējā veidā katrs dzīvnieks saņēma naloksona injekciju (\ tn = 12) vai sāls šķīdums (n = 11) 30 min, pirms saņemat piekļuvi uztverošai sievietei. Vidējais pārošanās ilgums bija ∼13 min. Vienu minūti pēc ejakulācijas dzīvnieks tika ievietots pārī esošajā kamerā 30 min. Otrajā kondicionēšanas dienā dzīvnieki saņēma naloksona vai fizioloģiskā šķīduma injekciju (atkarībā no tā, kas saņemts pirms pārošanās), un tika ievietoti nesalīdzinātā kamerā 30 min. Pēc tam tika veikta pēcpārbaude, kas bija identiska pretestam. Lai noteiktu kameras izvēli, tika salīdzināts laiks, kas pavadīts pārī esošajā kamerā pirms testa un pēc testa. Statistikas analīzei ir savienots pārī t testus izmantoja, lai salīdzinātu priekšroku un atšķirības rādītājus, un laiku pārī esošajā kamerā pirmsstesta un pēcpārbaudes laikā, lai noteiktu, vai seksuālai uzvedībai tika izveidots nozīmīgs CPP. p <0.05 tika uzskatīts par nozīmīgu.

Iekšējā VTA naloksona ietekme uz pieredzes izraisītu seksuālās uzvedības veicināšanu

Eksperimentālais dizains.

Lai noteiktu, vai EOP rīcība tieši VTA bija atbildīga par seksuālās pieredzes izraisīto izmaiņu ietekmi uz seksuālo uzvedību, dzīvnieki pirms piecām ikdienas pārošanās sesijām veica VTA infūziju ar naloksonu vai sāls šķīdumu. Uzvedības paradigma bija līdzīga sistēmiskajam naloksona eksperimentam. Seksuāli pieredzējušiem dzīvniekiem 5 secīgu dienu laikā tika atļauts līdz vienam ejakulācijai vai līdz pat 1 h. Piecpadsmit minūtes pirms sievietes uzņemšanas, vīriešu kārtas žurkas saņēma divpusējas infūzijas ar naloksonu (10 μg / μl uz puslodes; 0.5 μl tilpums; izšķīdināts 0.9% sāls šķīdumā) vai sāls šķīdumu (0.5 μl uz puslodi). Divpusējas mikroinjekcijas tika ievadītas ar 0.5 μl / min plūsmas ātrumu 1 min intervālā, kam sekoja papildu 1 min, ievadot injekcijas kanulu difūzijai. Pēc tam injicēšanas kanna tika nomainīta ar šļakatu un putekļu vāciņu. Viena nedēļa pēc pēdējās pārošanās dienas (testa diena) visi dzīvnieki vēlreiz pāroja ejakulāciju bez naloksona vai sāls šķīduma infūzijas. Skaitlis 3A iezīmē eksperimentālo dizainu. Datu analīze tika veikta, kā aprakstīts sistēmiskajā naloksona eksperimentā.

Cannulation operācija.

Vīriešu žurkas tika anestēzētas ar intravenozu injekciju (0.1 ml / kg) ketamīnu (0.87 mg / ml) un ksilazīnu (0.13 mg / ml) un ievietoja stereotaksiskajā aparātā (Kopf Instruments). Divpusēji 21 gabarīta vadotnes kanāli (Plastics One) tika nolaisti caur nelieliem urbumiem galvaskausā smadzenēs pret VTA pie -4.8 mm AP, ± 0.75 mm ML no bregmas un −7.8 mm DV no galvaskausa augšas saskaņā ar Paxinos un Watson (2013). Kaņepes tika nostiprinātas ar zobu akrilu, kas piestiprinājās trijām skrūvēm galvā. Dzīvniekiem tika piešķirts 2 nedēļas atveseļošanās periods, un tie tika ārstēti katru dienu, lai pierastu pie uzvedības un injekcijas procedūrām, kas tika izmantotas uzvedības testos.

Cannula izvietojuma pārbaude.

Kanilu novietojums tika pārbaudīts, izmantojot TH-imūnfilmu, lai apstiprinātu, ka VTA tika precīzi mērķēts. Analīzē tika iekļauti tikai dzīvnieki ar atbilstošiem izvietojumiem (galīgie grupas izmēri: pieredzējis sāls šķīdums) n = 8; pieredzējis naloksons n = 6). Trīs papildu dzīvnieki, kas saņēma intra-VTA naloksona injekcijas, kas tika veiktas ārpus VTA, tika sagrupētas „neatbildētā” injekciju grupā. Neatbildētā grupa tika analizēta atsevišķi, lai kalpotu kā anatomiskas kontroles un Mann-Whitney U Tika izmantots tests, lai salīdzinātu uzvedību pēdējā testa dienā ar pieredzējušiem naloksona un sāls šķīduma \ t

Pārošanās saistīta konteksta cue izraisīta pERK izteiksme

Eksperimentālais dizains.

Ir pierādīts, ka iedarbība uz būru, kurā vīrieši ieguva pārošanās pieredzi, izraisa MOR aktivāciju VTA un nervu aktivitāti VTA un NAc (Balfour et al., 2004). Līdz ar to pārošanās vide kalpo kā nosacīta dzimumattiecību prognoze. Pašreizējais pētījums pārbaudīja, vai MOR aktivācija seksuālās pieredzes laikā ir nepieciešama turpmākai kondicionētai cue-inducētai nervu aktivizācijai. Naloksons vai sāls šķīdums tika ievadīts sistēmiski (ip) 30 min pirms ievietošanas pārošanās arēnā un uztverošas sievietes ievešana pārošanai (pieredzējušiem) vai pirms kontroles manipulācijām, kas sastāvēja no ievietošanas apstrādes būrī bez sievietes (neitrāla) vide, naivi). Tādējādi tika izveidotas četras eksperimentālās grupas: Naive Sal, Naive NLX, Exp Sal ​​un Exp NLX. Vienu nedēļu pēc pēdējās pārošanās sesijas, puse no katras grupas dzīvniekiem bija pakļauti pārošanās būrim (Exp vīriešiem: ar dzimumu saistītām kondicionētām norādēm) vai pārvietošanās būrim (naiviem vīriešiem: nesalīdzināmi / neitrāli), bet otra puse nebija pakļauta jebkuras norādes un tā vietā palika mājas būrī (lai noteiktu pERK izpausmi). Šī eksperimentālā paradigma veidoja 8 grupas: Naive Sal-No Cue, Naive Sal + Cue, Naive NLX-No Cue, Naive NLX + Cue, Exp Sal-No Cue, Exp Sal ​​+ Cue, Exp NLX-No Cue, Exp NLX + Cue (n = 4, izņemot Naive NLX-No Cue, n = 3). Dzīvnieki tika perfuzēti 10 – 15 min pēc iedarbības. Kontroles dzīvnieki tika izņemti no viņu mājas būros un vienlaicīgi tika perfūzēti.

Imūnhistoķīmija.

Sekcija un imūnhistoķīmija tika veikta, kā aprakstīts iepriekš. Šeit mēs izmantojām trušu poliklonālu antivielu pret p42 un p44 MAP kināzēm ERK1 un ERK2 (pERK; 1: 4 000; šūnu signalizācijas tehnoloģija). Primārā antiviela ir plaši raksturota literatūrā (Roux un Blenis, 2004; Murphy un Blenis, 2006; Frohmader et al., 2010b). Turklāt primārās antivielas izlaišana novērsa visu žurku smadzeņu audu imunoreaktivitāti un Western blot analīzi, atklājot divas joslas pie atbilstošām molekulmasām.

Datu analīze.

pERK-imunoreaktīvās (-IR) šūnas tika skaitītas vairākos smadzeņu reģionos, izmantojot kameras lucida zīmēšanas cauruli, kas piestiprināta \ t Leica DMRD mikroskops: NAc [kodols (C) un apvalks (S); 400 × 600 μm; mediālā prefrontālā garoza; mPFC; priekšējā cingulācija (ACA); prelimbiska garoza (PL); infralimbiskā garoza (IL); 600 × 800 μm katrs], caudate – putamen (CP; 800 × 800 μm) un basolaterālā amygdala (BLA; 900 × 1200 μm; Balfour et al., 2004; Frohmader et al., 2010b; Pitchers et al., 2010b). Divas sekcijas tika skaitītas uz smadzeņu reģionu, un šūnu skaits standarta analīzes apgabalos tika aprēķināts kā šūnu skaits uz mm2. Divi skaitļi tika aprēķināti katram dzīvniekam, aprēķinot grupas līdzekļus. Grupu vidējie rādītāji seksuāli pieredzējušās vai naivās grupās tika salīdzināti, izmantojot divvirzienu ANOVA [faktori: narkotiku ārstēšana (NLX vai Sal) un cue (cue vai no cue)], kam sekoja post hoc salīdzinājumi, izmantojot Holm-Sidak vai Mann – Whitney summas testus, ja nepieciešams, ar nozīmīguma līmeni p <0.05. Seksuāli pieredzējušu dzīvnieku NAc apvalkā bija vērojama spēcīga tendence uz faktoru nozīmīgumu, un tādējādi tika veikti pāru salīdzinājumi, lai salīdzinātu tikai fizioloģiskā šķīduma (Sal-No Cue) un fizioloģiskā šķīduma (Sal + Cue) grupas.

Attēli.

Digitālie attēli tika uzņemti, izmantojot CCD kameru (Macrofire, Optronics), kas pievienota a Leica mikroskops (DM5000B) ar fiksētiem kameras iestatījumiem. Attēli tika importēti Adobe Photoshop 9.0 programmatūrā. Attēli nekādā veidā nav mainīti, izņemot spilgtuma un kontrastu pielāgošanu.

rezultāti

Seksu pieredzes izraisītas izmaiņas VTA dopamīna šūnās

Seksuālā pieredze izraisīja VTA dopamīna soma lieluma samazināšanos (Fig. 1A – C). Seksuālā pieredze ievērojami samazināja VTA TH-IR šūnu soma laukumu un perimetru (laukums: F(1,31) = 23.068, p <0.001; perimetrs, F(1,31) = 18.225, p <0.001). Bija arī galvenā nozīmīgā laika ietekme (apgabals: F(2,31) = 6.377, p = 0.005; perimetrs, F(2,31) = 4.389, p = 0.021) un ievērojama mijiedarbība starp pieredzi un laiku (laukums: F(2,31) = 5.284, p = 0.011; perimetrs, F(2,31) = 4.347, p = 0.022). Pāris salīdzinājums atklāja, ka pēc pēdējās seksuālās uzvedības dienas seksuāli pieredzējušiem dzīvniekiem TH-IR šūnu platība un perimetrs ievērojami samazināja 1 un 7 d, salīdzinot ar seksuāli naivām kontrolēm [Fig. 1B, platība: p = 0.002 (1 d), p <0.001 (7 d); C, perimetrs: p = 0.009 (1 d), p <0.001 (7 d)]. Seksuālās uzvedības ietekme izkliedējās, kad sekoja atalgojuma atturēšanās periods, kad TH-IR neironu somas lielums pēc pēdējās pārošanās sesijas atgriezās sākotnējā līmenī 31 d (Fig. 1B, platība: p = 0.798; C, perimetrs: p = 0.785). Seksuālās pieredzes izraisītās izmaiņas nav konstatētas apkārtrakstos nevienā no laika punktiem (Fig. 1D). VTA dopamīna soma izmēra samazinājums nebija atkarīgs no ikdienas pārošanās, jo piecu divreiz nedēļas pārošanās laikā pārošanās pieredze radīja arī samazinātu VTA dopamīna soma lielumu (Fig. 2A,B, EH, platība: p = 0.004; perimetrs: p <0.001). Turpretī dzimuma pieredze neietekmēja TH-IR somas lielumu substantia nigra (Fig. 2C, I – J, platība: p = 0.13; perimetrs: p = 0.16), kā arī nav mainījies soma izmērs blakus esošajos VTA ne-TH-IR neironos (Fig. 2D, EH, platība: p = 0.46; perimetrs: p = 0.45).

Skaitlis 1. 

Endogēnās opioīdu izraisītās soma lieluma izmaiņas VTA dopamīna neironiem. A, VTA dopamīna neironu reprezentatīvie attēli no seksuāli naiviem un pieredzējušiem dzīvniekiem, parādot soma izmēra samazinājumu 7 d pēc pēdējās pārošanās. Mēroga josla, 5 μm. Kvantitatīvie dati, kas liecina, ka seksuālā pieredze (Exp, black bars) izraisīja ievērojamu teritorijas samazinājumuB; μm2) un perimetru (C; μm) VTA dopamīna šūnu, 1 d (Naive, Exp; n = 6) un 7 d (Naivs, n = 5; Exp, n = 6), bet ne 31 d (Naivs, n = 6; Exp, n = 8) pēc pēdējās pārošanās, salīdzinot ar seksuāli naivām kontrolēm (naivām, baltām joslām). Pieredzējušiem vīriešiem platība tika samazināta līdz 84%, salīdzinot ar naivām 1 vai 7 d. Pieredzējušās grupās perimetrs tika samazināts līdz 91.6 un 90%, salīdzinot ar 1 un 7 d resp. Nebija ietekmes uz apkārtraksts (D). Šis dopamīna šūnu plastiskums apgabalā (\ tE) un perimetru (F) tika novērsta ar naloksonu (NLX, n = 8), bet ne sāls šķīdumu (Sal, n = 7) ārstēšana pārošanās laikā, 7 d pēc pēdējās pārošanās, salīdzinot ar seksuāli naivām kontrolēm (Sal, n = 5; NLX, n = 6). Dati ir vidējais ± SEM; * norāda uz būtisku atšķirību, salīdzinot ar to pašu dienu seksuāli naivām kontrolēm (B, C) vai salīdzinot ar seksuāli naivām, kas ārstētas ar sāls šķīdumu, un ar seksuāli pieredzējušiem naloksona \ tE, F).

Skaitlis 2. 

Seksuālā pieredze nesamazināja soma lielumu nigra dopamīna neironiem vai VTA nondopamīna neironiem. VTA TH-IR neironu somas apgabals (A; μm2) un perimetru (B; μm) seksuāli naivos (baltos) un pieredzējušos (melnos) dzīvniekos, kas guvuši pieredzi, pārošanās divas reizes nedēļā, nevis secīgu dienu laikā. Substantia nigra TH-IR soma apgabals (C) un VTA bez TH-IR soma apgabala (D) seksuāli naivos (baltos) un pieredzējušos (melnos) dzīvniekos. Dati ir vidējais ± SEM; * norāda uz būtisku atšķirību salīdzinājumā ar seksuāli naivām kontrolēm. Reprezentatīvi attēli, kuros redzami seksuāli naivi VTA (brūni) neironi (E) un pieredzējuši (F) vīrieši. G, H, Lielāks palielinājuma attēls neironam, ko norāda bultiņa E un F attiecīgi. Nissl krāsoti neironi šajos attēlos ir attēloti zilā krāsā. Reprezentatīvi attēli, kuros redzami seksuāli naivu TH-IR neironi (I) un pieredzējuši (J) vīrieši. Mērogu joslas: E-J, 20 μm.

VTA dopamīna neironu dzimuma pieredzes izraisīta soma lieluma samazināšana ir atkarīga no opioīdu receptoru aktivācijas

Seksuālās pieredzes izraisīto VTA dopamīna neironu soma lieluma samazināšanos bloķēja neelektīvais MOR antagonists naloksons, ko ievada pirms katras pārošanās sesijas. Naloksona terapija pirms pārošanās sesijām būtiski ietekmēja platību (F(1,22) = 4.738, p = 0.041) un virzās uz būtisku ietekmi uz perimetru (F(1,22) = 2.892, p = 0.052). Teritorijai tika konstatēta nozīmīga mijiedarbība starp pieredzi un naloksona terapiju.F(1,22) = 5.578, p = 0.027) un perimetru (F(1,22) = 8.167, p = 0.009). Pāro salīdzinājumi parādīja, ka pēc pēdējās pārošanās sesijas ar pēdējo pārošanās sesiju, seksuālā pieredze sāls šķīduma ārstēšanai ar dzīvniekiem nozīmīgi samazināja VTA dopamīna neironu platību un perimetru, salīdzinot ar sātēm, kas ārstētas ar seksuāli naivām (Fig. 1E, platība: p = 0.018; F, perimetrs: p = 0.007). Turpretim seksuāli pieredzējuši naloksona ārstētie dzīvnieki neatšķīrās no naloksona ārstētiem naiviem (Fig. 1E, platība: p = 0.483; F, perimetrs: p = 0.330). Turklāt, salīdzinot ar pieredzējušiem naloksona dzīvniekiem, ievērojami samazinājās pieredzējušo sāļu dzīvnieku soma.Fig. 1E, platība: p = 0.002; F, perimetrs: p = 0.002). Šis naloksona efekts bija specifisks seksuālai pieredzei, jo naloksona terapija vien neietekmēja TH-IR šūnu soma lielumu seksuāli nezināmiem naloksona ārstētiem tēviņiem, salīdzinot ar sāls šķīdumu ārstētiem pacientiemFig. 1E,F). Turklāt šī naloksona ietekme uz pieredzes izraisītu soma lieluma samazināšanu nebija saistīta ar naloksona ietekmi uz seksuālo uzvedību, jo pārošanās uzvedība naloksona un sāls šķīduma ārstētiem vīriešiem būtiski neatšķīrās, izņemot ilgāku laiku, lai uzsāktu pārošanos pēc ejakulācijas (pēc ejakulācijas intervāla) ar naloksonu ārstētiem vīriešiem pirmajā un piektajā pārošanās \ tp = 0.03 un p Attiecīgi 0.004). Katrā no piecām pārošanās sesijām gan sālsūdens, gan naloksona apstrādātie vīrieši kopulējās ar ejakulāciju.

Seksuālās pieredzes izraisīta morfīna atalgojuma pielaide

Seksuālās pieredzes ietekme uz VTA dopamīna soma lielumu, veicot EOP darbību VTA, ir līdzīga tām, kas ziņotas par eksogēniem opiātiem (Sklair-Tavron et al., 1996; Russo et al., 2007). Tāpēc tika pārbaudīts, vai dabiskās atlīdzības izraisītais VTA dopamīna šūnu plastiskums ietekmē atalgojumu par opiātu morfīnu. Patiešām, seksuālā pieredze izraisīja morfīna atalgojuma pielaidi, līdzīgu hronisku opiātu iedarbībai (Russo et al., 2007). Seksuāli pieredzējuši vīrieši nespēja attīstīt CPP 0.5 mg / kg morfīna devai; tā kā seksuāli naivas tēviņi veidoja CPP šai devai, kā norādīts pēc tam, kad pēc testa tika iztērēts lielāks laiks morfīna pārī esošajā kamerā;Fig. 3; p = 0.039). Gan seksuāli naivās, gan pieredzējušās grupas veica ievērojami lielāku laiku morfīna pārī esošajā kamerā, salīdzinot ar sāls-pārī savienoto kameru ar lielākām morfīna devām: 5.0 mg / kg (Fig. 3; Naivi: p = 0.029; Exp: p 0.012) un 10.0 mg / kg (Fig. 3; Naivi: p <0.001; Derīguma termiņš: p = 0.002).

Skaitlis 3. 

Seksuālās pieredzes ietekme uz morfīna atlīdzību. Laiki, kas pavadīti sālsūdenī (Sal) vai morfīnā pāris (Mor; 0.5, 5 vai 10 mg / kg ķermeņa svara) kamerās seksuāli naivā (Naive, n = 10 – 13) vai pieredze (Exp, n = 9 – 13) vīriešiem. Dati, kas norādīti kā vidējie ± SEM; * norāda uz būtisku atšķirību, salīdzinot ar Sal-pārī esošo kameru vienā un tajā pašā dzīvniekā. NS, nav nozīmīgs.

Seksu pieredzes izraisīta pārošanās uzvedības veicināšana ir atkarīga no opioīdu receptoru aktivācijas

Līdz šim iegūtie rezultāti liecina, ka EOP, kas darbojas VTA 5 ikdienas īsās pārošanās sesijās, izraisa VTA dopamīna neironu plastiskumu, kas ir līdzīgs hroniskas morfīna vai heroīna pašpārvaldes iedarbībai (Russo et al., 2007; Mazei-Robison et al., 2011). Mēs pieņēmām, ka VTA dopamīna soma lieluma samazināšana ir būtiska atalgojuma apguvei un īpaši seksa pieredzes veicināšanai seksuālās uzvedības veicināšanā attiecībā uz motivāciju un sniegumu. Šī hipotēze tika pārbaudīta, bloķējot MOR, izmantojot naloksonu pārošanās laikā, un pārbaudot ietekmi uz seksuālās uzvedības veicināšanu, ko izraisīja seksuālā pieredze piecu ikdienas pārošanās sesiju laikā. Dati ir atspoguļoti Skaitlis 4 tikai pirmajiem un piektajiem pārošanās sesijām, jo ​​tie ir dati, kas vislabāk atspoguļo pieredzes izraisīto pārošanās uzvedību. Turklāt naloksona terapijas ilgstošas ​​sekas pārošanās sesiju laikā tiek pārbaudītas, balstoties uz pieredzes izraisītu pārošanās uzvedības atvieglošanu, beidzot pārošanās testu 1 nedēļā vēlāk. Skaitlis 4A parāda eksperimentālo dizainu. Pārošanās sesijas ietekme uz visiem dzimuma uzvedības parametriem bija nozīmīga (mount latency: F(2,55) = 11.286, p <0.001; intromission latentums: F(2,55) = 8.767, p <0.001; ejakulācijas latentums: F(2,55) = 10.368, p <0.001) un naloksona apstrāde uz latentiem, lai uzstādītu (F(1,55) = 6.585, p = 0.013) un intromission (F(1,55) = 7.863, p = 0.007). Pāro salīdzinājumi parādīja, ka ārstēšana ar naloksonu ietekmēja seksuālo uzvedību pirmā pārošanās sesijas laikā, jo naloksona dzīvniekiem bija ievērojami garāki latentuma rādītāji līdz pirmajam stiprinājumam (p = 0.002) un intromission (p = 0.002), salīdzinot ar sāls šķīdumiem pirmajā pārošanās dienā. Šī naloksona ietekme uz sākotnējo seksuālo uzvedību tika mazināta seksuālās pieredzes dēļ un netika novērota nevienā no nākamajām pārošanās sesijām (Tabula 1). Turklāt naloksona ievadīšana pirms katras piecas pārošanās sesijas neizslēdza seksuālās uzvedības sākotnējo veicināšanu ar seksuālo pieredzi. Atbilstoši seksuālās pieredzes pastiprinošajai iedarbībai, vīriešiem ar sāls šķīdumu parādījās mazāks latentums, lai varētu piestiprināt (Fig. 4B; p = 0.032) \ tFig. 4C; p = 0.033) un ejakulācija (Fig. 4D; p <0.001) piektās pārošanās sesijas laikā, salīdzinot ar pirmo pārošanās sesiju, kas liecināja par seksuālās uzvedības atvieglošanu. Līdzīgi ar naloksonu ārstētiem vīriešiem bija ievērojami īsāki latentuma periodi (Fig. 4B; p <0.001), intromisija (Fig. 4C; p <0.001) un ejakulācija (Fig. 4D; p = 0.017) piektajā vietā salīdzinājumā ar pirmo dienu. Turklāt piektajā pārošanās laikā naloksona ārstētie vīrieši neatšķīrās no fizioloģiskā šķīduma kontroles jebkurā no latentiem.

Skaitlis 4. 

Endogēniem opioīdiem ir izšķiroša loma seksuālās uzvedības veicināšanā. A, Eksperimentālais dizains. B-D, Seksuālās uzvedības parametri vīriešiem, kas ārstēti ar sāls šķīdumu (Sal, baltie stieņi, \ t n = 11) vai naloksons (NLX; melnās joslas, n = 12) ar sistēmisku ievadīšanu. Parādītie dati ir aizkavēšanās uzstādīšanai (B; sekundes), intromission (C; sekundes) un ejakulācija (D; sekundes) 1 un 5 dienās piecu secīgu pārošanās dienu laikā. Turklāt dati par galīgo pārošanās testu tiek parādīti, 7 d pēc piektās pārošanās sesijas. Dati ir norādīti kā vidējie ± SEM; + norāda nozīmīgu atšķirību starp 1 un 5 dienām ārstēšanas laikā; * norāda būtisku atšķirību starp testēšanas dienu un 5 dienu ārstēšanas laikā; # norāda ievērojamu atšķirību starp naloksona un sāls grupas grupām dienas laikā.

Skatīt šo tabulu: 

Tabula 1. 

Naloksona ievadīšana pirms pārošanās palielinājās latentiem, lai uzmontētu un iekļūtu tikai pirmajā pārošanās dienā

Turpretī naloksona terapija seksuālās pieredzes sesijas laikā traucēja pieredzes izraisītas seksuālās uzvedības veicināšanu pēdējā pārošanās testa dienā. Testa diena tika veikta 7 d pēc pēdējās pārošanās, ja nebija naloksona injekcijas. Sāls šķīduma ārstēšanā iesaistītajiem vīriešiem parādījās gaidāmā pieredzes izraisītā seksuālās uzvedības veicināšana. Konkrētāk, aizkavēšanās, kas saistīta ar uzstādīšanu, intromīziju un ejakulāciju, neatšķīrās starp piekto pārošanās sesiju un pēdējo testa dienu (Fig. 4B – D). Tā kā ar naloksonu ārstētiem tēviņiem novēroja ievērojamu latentuma palielināšanos,Fig. 4B; p = 0.033), intromission (Fig. 4C; p = 0.036) un ejakulācija (Fig. 4D; p = 0.049) testa dienā, salīdzinot ar piekto pārošanās sesiju. Testa dienā naloksona dzīvnieki tika uzskatīti par ievērojami lēnākiem nekā vīriešiem ar sāls šķīdumu, kā parādīts ilgākos latentos, lai to varētu piestiprināt (Fig. 4B; p = 0.017) un intromission (Fig. 4C; p = 0.043). Tādējādi naloksona terapija bloķēja pieredzes izraisītas seksuālās uzvedības uzturēšanu, bet ne sākotnējo attīstību. Šie atklājumi liecina par EOP izraisītas VTA dopamīna neironu plastiskuma kritisko lomu dabiskās atlīdzības uzvedības pastiprinājuma ilgtermiņa izpausmē.

Tika veikti vairāki papildu kontroles eksperimenti, lai noteiktu, vai opioīdu receptoru blokādes ietekme uz seksuālās uzvedības ilgstošas ​​pastiprināšanas zaudējumu bija neatkarīga no naloksona lietošanas trūkuma pēdējā pārošanās testa dienā (Fig. 5A,B), bija specifiski ilgstošas, bet ne īstermiņa uzturēšanas palīglīdzekļu \ tFig. 5E,F), ko izraisīja tikai naloksona iedarbība katru dienu (\ tFig. 5C,D), un to neizraisīja seksuālas atlīdzības zaudēšana naloksona ārstētiem vīriešiem (\ tFig. 5G,H). Pirmkārt, lai pierādītu, ka izmainītā seksuālā uzvedība galīgajā pārošanās testā nebija saistīta ar naloksona neesamību, naloksons vai sāls šķīdums tika ievadīts pēdējā pārošanās testa dienā dzīvniekiem, kas saņēma pārošanos ar naloksonu, kamēr viņi ieguva seksuālu pieredzi (Fig. 5A). Pārošanās dienā bija ievērojama galvenā ietekme uz latentiem uzFig. 5B; F(2,27) = 30.031, p = 0.038) un intromission (Tabula 2; F(2,27) = 10.686, p = 0.048). Pārošanās dienas galvenā ietekme uz latentiem uz ejakulāciju nebija \ tTabula 2; F(2,27) = 2.388, p = 0.109) Līdzīgi kā aprakstīts iepriekš, ārstēšana naloksona laikā pārošanās laikā neietekmēja seksuālās uzvedības veicināšanu pirmajās piecās seksuālās pieredzes sesijās. Abas grupas (sālsūdens un naloksona grupas, kas ārstētas, izmantojot galīgo pārošanās testu, abas saņēma naloksonu pārošanās laikā) parādīja, ka 5 dienā seksuālā uzvedība bija labāka nekā 1 dienā un parādīja ievērojami īsāku latentumu pirmajai stiprināšanai (Fig. 5B; sāls šķīdums: p = 0.033; naloksons: p = 0.014) un intromission (Tabula 2; sāls šķīdums: p = 0.034; naloksons: p = 0.026). Dzīvniekiem, kas pēdējo pārošanās dienu laikā saņēma naloksonu vai sāls šķīdumu, bija garāks latentums (Fig. 5B; sāls šķīdums: p = 0.018; naloksons: p = 0.029) un intromission (Tabula 2; sāls šķīdums: p = 0.019; naloksons: p = 0.020), salīdzinot ar piekto pārošanās dienu. Tādēļ naloksona vai fizioloģiskā šķīduma ievadīšana testēšanas dienā tieši pirms pārošanās neietekmēja naloksona terapijas ietekmi seksuālās pieredzes sesijās un ilgstoša seksuālās uzvedības atvieglošana bija identiska tam, kas parādīts dzīvniekiem, kuri nesaņēma injekciju. pēdējā pārošanās testa dienā (Fig. 4).

Skaitlis 5. 

Endogēni opioīdi ir svarīgi, lai ilgtermiņā izpaustu seksuālās uzvedības veicināšanu. A, Eksperimentālais dizains eksperimentam ar NLX iedarbību testa dienā. BPēc piecu secīgu dienu pārošanās un pēdējās pārošanās testa dienas (tests) pēc sāls šķīduma (pelēkā krāsā) vai naloksona (melnā) injekcijas, 1 un 5 dienās piestipriniet latentumu. Dati ir vidējais ± SEM. * norāda ievērojamu atšķirību starp 1 dienu un 5 dienu ārstēšanas laikā. # norāda būtisku atšķirību starp testēšanas dienu un dienu 5 ārstēšanas laikā. CEksperimentālā eksperimenta projektēšana, lai pārbaudītu tikai naloksona pirmapstrādes ietekmi bez seksuālas pieredzes pārošanās uzvedībā. D, Noslēdziet latentumu pēdējā pārošanās testa dienā, 7 dienas pēc 5 dienas vai nu sālsūdens, vai naloksona injekcijas bez pārošanās. Dati ir vidējais ± SEM. EEksperimentāls eksperimenta plānojums, lai pārbaudītu, vai naloksona ārstēšana ietekmēja seksuāli pieredzējušu dzīvnieku īslaicīgu parādīšanos. F, Piecu secīgu dienu pārošanās un pēdējās pārošanās testa dienas 1 dienā un 5 dienā, 1 dienā, 5 dienā, jāievieto sāls (pelēka) vai naloksona (melna) injekcija. Dati ir vidējais ± SEM. * norāda ievērojamu atšķirību starp 1 dienu un 5 dienu ārstēšanas laikā. GEksperimentālais eksperimenta projekts, lai pārbaudītu, vai naloksona terapija bloķē seksuālās uzvedības atalgojošo ietekmi. H, Laiks, kas pavadīts pārošanās pāra kamerā (sekundēs) pretestācijas laikā (balts) un pēc testa (melns) dzīvniekiem, kuri pirms pārošanās saņēma naloksonu vai sāls šķīdumu. Dati ir vidējais ± SEM; * norāda ievērojamu atšķirību salīdzinājumā ar pretestību.

Skatīt šo tabulu: 

Tabula 2. 

Parādītie dati ir aizkavēšanās intromīzijai un ejakulācijai (sekundēs) no veiktajiem kontroles eksperimentiem, lai noteiktu, vai MOR blokādes ietekme uz seksuālās uzvedības ilgstošas ​​pastiprināšanas zudumu notika neatkarīgi no naloksona ievadīšanas trūkuma pēdējā pārošanās testa dienā

Lai noskaidrotu, vai naloksona terapija bija saistīta ar seksuālo pieredzi un nav atkārtota ar naloksonu per se, kas izraisīja seksuālās uzvedības traucējumus 7 d pēc pēdējās ārstēšanas, seksuāli naivi dzīvnieki saņēma piecas naloksona vai sāls šķīduma injekcijas katru dienu pirms galīgā pārošanās testa 7 d vēlāk (Fig. 5C). Nav konstatētas būtiskas atšķirības attiecībā uz pārošanas parametru starp sālsūdens un naloksona iepriekš apstrādātām grupām (Fig. 5D; mount latency; intromission latency: sāls šķīdums 139.7 ± 40.3 vs naloksons 121.83 ± 42.55; ejakulācijas latentums: sāls šķīdums 887.9 ± 70.0 vs naloksons 1050.8 ± 327.31). Šie rezultāti liecina, ka naloksons vien nepietiek, lai izmainītu sekojošu seksuālo uzvedību, līdzīgi kā naloksona ietekme uz VTA dopamīna neironu plastiskumu.

Mēs hipotētiski, ka naloksona ārstēšana seksuālās pieredzes iegūšanas laikā traucē seksuālās uzvedības veicināšanas seksa ilglaicīgu izpausmi. Lai to vēl vairāk pārbaudītu, naloksona terapijas ietekme pārošanās laikā tika pārbaudīta pēc sekojošas seksuālās uzvedības pēdējā pārošanās testa laikā, kas tika veikts tikai 1 d pēc pēdējās pārošanās (eksperimentālais plānojums; Fig. 5E). Pārošanās dienā uz kalna bija būtiska galvenā ietekme.Fig. 5F; F(2,20) = 19.780, p <0.001) un intromisijas latentumi (Tabula 2; F(2,20) = 19.041, p <0.001). Nebija nozīmīgas dienas galvenās ietekmes uz ejakulācijas latentumu (Tabula 2; F(2,20) = 3.042, p = 0.070). Līdzīgi kā aprakstīts iepriekš, visi vīrieši (neskatoties uz sāls vai naloksona terapiju) parādīja seksuālās uzvedības atvieglošanu piecu seksuālās pieredzes sesiju laikā, kas tika apzīmētas ar ievērojami īsākiem latentiem.Fig. 5F; sāls šķīdums: p = 0.002; naloksons: p = 0.018) un intromission (Tabula 2; sāls šķīdums: p = 0.006; naloksons: p = 0.009) 5 dienā salīdzinājumā ar 1 dienu. Līdzīgi, testēšanas dienā tika pierādīta atvieglota seksuālā uzvedība, salīdzinot ar 1 dienu, ko uzrādīja ievērojami īsāks latentums (Fig. 5F; sāls šķīdums: p = 0.001; naloksons: p = 0.020) un intromission (Tabula 2; sāls šķīdums: p = 0.004; naloksons: p = 0.009). Vēl svarīgāk ir tas, ka naloksona terapija pārošanās laikā būtiski neietekmēja dzimumattiecību izraisītu seksuālās uzvedības veicināšanu, pārbaudot 1 d pēc dzimuma pieredzes, neatkarīgi no naloksona terapijas šajā pēdējā pārošanās testa dienā.

Visbeidzot, mēs pārbaudījām iespēju, ka naloksona mīkstinošā ietekme uz atvieglotas seksuālās uzvedības ilgtermiņa izpausmēm ir saistīta ar naloksona bloķējošo iedarbību uz seksuālās uzvedības labvēlīgajām īpašībām. Tomēr naloksons, kas ievadīts tieši pirms pārošanās, nemainīja CPP veidošanos pārošanās laikā (Fig. 5G), kas liecina, ka ārstēšana ar naloksonu nemaina seksuālo atlīdzību. Gan sālsūdens, gan naloksona grupās veidojās nozīmīgs CPP seksuālai uzvedībai, kā to pierāda ievērojami palielināts laiks, kas pavadīts dzimuma pārī.Fig. 5H; sāls šķīdums: p = 0.038; naloksons: p = 0.002) pēc testa, salīdzinot ar pretestību. Tādēļ naloksons nelabvēlīgi neietekmē seksuālās uzvedības saglabāšanu, bloķējot ar seksuālo uzvedību saistīto atalgojumu.

Seksuālās uzvedības veicināšana ir atkarīga no EOP darbības VTA

Lai apstiprinātu, ka EOP darbojas tieši VTA, lai veicinātu ilglaicīgu seksuālās uzvedības veicināšanu, eksperimentālais dizains, kas izklāstīts Skaitlis 3A naloksona infūzijas, nevis sistēmiskas injekcijas. Rezultāti bija identiski iepriekš aprakstītajai sistēmiskai ievadīšanai. Pārošanās dienā bija nozīmīga ietekme uz visiem seksuālās uzvedības parametriem (Fig. 6A, mount latency: F(2,33) = 4.494, p = 0.019; B, intromission latency: F(2,33) = 4.042, p = 0.027; C, ejakulācijas latentums: F(2,33) = 5.309, p = 0.010) un iekšēja VTA naloksona ārstēšana ar latentiem, lai \ tF(1,33) = 7.345, p = 0.011) un intromission (F(1,33) = 6.126, p = 0.019). Intra-VTA naloksons neļāva novērst sākotnējo pieredzi, kas izraisīja seksuālās uzvedības veicināšanu 5 d laikā, jo naloksona ārstētajiem vīriešiem parādījās samazināta latentuma iestāšanās (Fig. 6A; p = 0.001), intromission (Fig. 6B; p <0.001) un ejakulācija (Fig. 6C; p = 0.001) 5 dienā salīdzinājumā ar 1 dienu. Pieaugušajiem piektajā dienā naloksona ārstētiem tēviņiem neatšķīrās no vīriešiem ar sāls šķīdumu. Intra-VTA naloksona terapija, tāpat kā sistēmiska ievadīšana, izraisīja ievērojamu palielināšanos (Fig. 6A; p <0.001) un intromisijas latentumi (Fig. 6B; p <0.001) pirmajā pārošanās dienā, salīdzinot ar vīriešiem, kuri ārstēti ar fizioloģisko šķīdumu, kas netika novērots turpmākajās pārošanās sesijās (kuru laikā ar naloksonu un fizioloģisko šķīdumu ārstētie vīrieši neatšķīrās). Viens negaidīts novērojums bija tāds, ka šajā eksperimentā vīrieši, kuri ārstēti ar fizioloģisko šķīdumu, neuzrādīja statistiski nozīmīgu montāžas vai intromisijas latentuma atvieglošanu (kā parādīts visos iepriekš aprakstītajos eksperimentos), un tikai ejakulācijas latentums bija saīsināts piektajā dienā, salīdzinot ar pirmo dienu (fizioloģiskais šķīdums: p = 0.001).

Skaitlis 6. 

Endogēni opioīdi VTA veicina pieredzes izraisītu seksuālās uzvedības veicināšanu un tās ilgtermiņa uzturēšanu. Seksuālās uzvedības parametri vīriešiem, kas ārstēti ar sāls šķīdumu (Sal, baltie stieņi, \ t n = 8) vai NLX (melnās joslas, n = 6), ievadot VTA. Parādītie dati ir aizkavēšanās uzstādīšanai (A), intromission (B) un ejakulācija (C) dienās 1 un 5 piecu secīgu pārošanās dienu laikā. Turklāt dati par pēdējo pārošanās testa dienu, 7 d ir parādīti 5 dienā bez sāls šķīduma vai naloksona injekcijas. Dati ir vidējais ± SEM; + norāda nozīmīgu atšķirību starp 1 un 5 dienām ārstēšanas laikā; * norāda būtisku atšķirību starp testēšanas dienu un 5 dienu ārstēšanas laikā; # norāda ievērojamu atšķirību starp naloksona un Sal grupām dienas laikā. Koronālo VTA sekciju (H, -4.60; I, -5.00; J, -5.25 no bregmas) shematisks rasējums, kas norāda VTA injekcijas vietas visiem dzīvniekiem 5 eksperimentā (sāls šķīdums; balts; naloksons, melns; neatbildēts, pelēks); izmantojot Swanson Brain Maps veidnes zīmējumus (Swanson, 2004). Kaņepes bija divpusējas, bet injekcijas vietas tiek attēlotas vienpusēji, lai tās būtu vieglāk prezentētas. fr, Fasciculus retroflexus; ML, Medial lemniscus; SN, materia nigra.

Intra-VTA naxolone terapija bloķēja seksuāli pieredzējušu tēviņu novēroto seksuālās uzvedības saglabāšanu, līdzīgi sistēmiskās naloksona iedarbībai. Konkrētāk, pēdējā testa dienā naloksona ārstētiem tēviņiem bija garāks latentums (Fig. 6A; p = 0.011), intromission (Fig. 6B; p = 0.010) un ejakulācija (Fig. 6C; p = 0.015), salīdzinot ar piekto pārošanās sesiju un salīdzinot ar vīriešiem ar sāls šķīdumu pēdējā testa dienā (Fig. 6A, p = 0.006; B, p = 0.008). Turpretim sāls šķīduma apstrādātie dzīvnieki latentos neatšķīrās, lai uzmontētu un iekļūtu starp pēdējo testa dienu un 5 pārošanās dienu. Šīs sekas bija specifiskas naloksona piegādei VTA, jo tēviņi ar kanulācijas vietām netālu, bet nebija vērsti uz VTA (Fig. 6D; n = 3) parādīja ilgstošu seksuālās uzvedības atvieglošanu, kas ir līdzīga sāls šķīduma ārstēšanai (ML, IL = 53 ± 6.245, EL = 389 ± 299.5 un būtiski atšķiras no naloksona dzīvniekiem, kas iegūti VTA galīgajā testēšanas dienā) IL: p = 0.029; EL: p = 0.0395).

EOP darbība ir nepieciešama dzimumiem saistītā kondensētā cue inducētā neironu aktivizācijā

Pamatojoties uz līdzšinējiem konstatējumiem, mēs esam pieņēmuši, ka EOP aktivācija VTA laikā pārošanās pieredzes un tam sekojošā VTA dopamīna soma lieluma samazināšanā ir būtiska, lai piešķirtu stimulējošu sajūtu pārošanai, kas saistīta ar atalgojumu, un līdz ar to arī seksuālās uzvedības veicināšanu. Lai pārbaudītu šo hipotēzi, tika pārbaudītas opioīdu receptoru bloķēšanas sekas pārošanās pieredzes laikā par neirālo aktivitāti, ko izraisa turpmāka pakļaušana nosacītām kontekstuālām norādēm, kas paredz seksuālo atlīdzību (ar dzimumu saistītās konteksta norādes). Seksuāli naivi dzīvnieki tika pakļauti arī vides norādēm, taču tie nebija saistīti ar iepriekšējo pārošanās pieredzi, tāpēc tie bija neitrāli. Visbeidzot, sākotnējie pERK līmeņi tika noteikti seksuāli pieredzējušās un naivās kontroles grupās, kas palika mājas būros un netika pakļautas nekādām norādēm (-No Cue). Iepriekšējo konstatējumu apstiprināšana un paplašināšana (Balfour et al., 2004) iedarbība uz konteksta rādītājiem, kas saistīti ar iepriekšējo dzimuma atlīdzību, ievērojami palielināja pERK izteiksmi seksuāli pieredzējušiem vīriešiem NAc (Fig. 7) un mPFC (Fig. 8A – C), bet neizraisīja neironu aktivāciju BLA (Fig. 8D) vai CPu (dati nav parādīti). Galvenās iedarbības sekas bija NAc kodolā (F(1,12) = 12.1941, p = 0.004), ACA (F(1,12) = 5.541, p = 0.038), un PL (F(1,12) = 5.241, p = 0.041) un naloksona terapija NAc kodolā (F(1,12) = 6.511, p = 0.025), ACA (F(1,12) = 15.242, p = 0.002), un PL (F(1,12) = 7.336, p = 0.019). NAc kodolā bija ievērojama mijiedarbība (F(1,12) = 10.107, p = 0.008), ACA (F(1,12) = 16.060, p = 0.002), PL (F(1,12) = 8.235, p = 0.014) un IL ((F(1,12) = 6.965, p = 0.022). Pirmkārt, pārošanās izraisītais Cue ekspozīcija ievērojami palielināja pERK sārmu ārstētiem seksuāli pieredzējušiem dzīvniekiem (Exp Sal ​​+ Cue), salīdzinot ar kontrolēm, kas netika pakļautas nekādām norādēm un ņemtas no mājas karkasa (Exp Sal-No Cue) NAc kodolā (Fig. 7A; p <0.001) un mPFC apakšreģioni ACA (Fig. 8A; p = 0.001), PL (Fig. 8B; p = 0.003) un IL (Fig. 8C; p = 0.029). Turpretim sāļskābes ārstētiem seksuāli naiviem dzīvniekiem konteksta norādes, kas nebija saistītas ar seksuālu atlīdzību, neizraisīja pERK nevienā no smadzeņu zonām (Naive Sal + Cue, salīdzinot ar naivu Sal-No Cue; Att. 7, 8), parādot, ka pERK indukcija ir raksturīga ar seksuālo pieredzi saistīto norādījumu iedarbībai. Turklāt seksuālā pieredze vien nemainīja sākotnējo pERK ekspresiju nevienā no smadzeņu reģioniem, jo ​​nebija atšķirību starp grupām, kas tika ņemtas no mājas būriem, neatkarīgi no tā, vai tās ir seksuāli naivas vai pieredzētas, un ārstētas ar sāls šķīdumu vai naloksonu.

Skaitlis 7. 

Endogēnai opioīdu iedarbībai ir nepieciešama neirāla aktivizācija NAc, ko izraisa ar dzimumu saistītās konditorejas norādes. PERK-IR šūnu skaits uz mm2 kodola accumbens kodolā (A) un apvalks (B) seksuāli naivos (baltos) un pieredzējušos (Exp; black) dzīvniekos, kuri pirms ārstēšanas tika ārstēti ar sistēmisku NLX vai sāls šķīdumu (Sal) pārošanās sesiju laikā (Exp vīriešiem) vai apstrādes sesijām (naiviem vīriešiem). Grupas tika pakļautas konteksta norādēm (Cue), kas bija pārošanās saistītas norādes Exp tēviņos un neitrālas norādes naivos dzīvniekos, vai ņemtas no mājas būrīšiem (No Cue; norāda Cue-etiķetes trūkums). Dati ir norādīti kā vidējie ± SEM; * norāda uz būtisku atšķirību, salīdzinot ar iepriekš apstrādātu sāls šķīdumu, kas nav pakļauts kontrolei (Naive Sal-No Cue un Exp Sal-No Cue); # norāda ievērojamu atšķirību, salīdzinot ar Sal apstrādāto Cue eksponēto Exp grupu (Exp Sal ​​+ Cue). Reprezentatīvi attēli pERK-IR šūnām uz mm2 seksuāli pieredzējušu tēviņu ar Sal (C, D) vai NLX (E, F), kas tika vai nu ņemti no mājas būrī (No Cue, C, E), vai pakļauti līdzīgiem saistītiem konteksta norādījumiem (Cue; D, F). N = 4 katrā grupā, izņemot Naive NLX (No Cue), n = 3. ac, priekšējā komisija. Mēroga josla, 100 μm.

Skaitlis 8. 

Naloksona ietekme uz pārošanās izraisīto pERK ekspresiju citos VTA mērķa reģionos. PERK-IR šūnu skaits uz mm2 seksuāli naivos (baltos) un pieredzējušos (Exp; black) dzīvniekos, kuri pirms ārstēšanas ar sistēmisku NLX vai sāls šķīdumu (Sal) pārošanās sesiju laikā tika pakļauti konteksta norādēm (Cue) vai mājas būrim (bez cues) ACA (A), PL (B), IL (C) un BLA (D). Dati ir vidējais ± SEM; * norāda uz būtisku atšķirību, salīdzinot ar iepriekš apstrādātu sāls šķīdumu, kas nav pakļauts kontrolei (Naive Sal-No Cue un Exp Sal-No Cue); # norāda ievērojamu atšķirību, salīdzinot ar Sal apstrādāta cue iedarbībai pakļautām seksuāli naivām kontrolēm (Naive Sal + Cue).

Lai pamatotu mūsu hipotēzi, ārstēšana ar naloksonu seksuālās pieredzes laikā ievērojami mazināja pERK indukciju ar dzimumiem saistītu norādījumu palīdzību. pERK ekspresija šajos naloksona ārstētajos pētītajos tēviņos (Exp NLX + Cue) neatšķīrās no sākotnējā pERK ekspresijas nevienā no seksuāli naivām vai pieredzējušām kontroles grupām, kas ņemtas no mājas būriem (Naive Sal-No Cue vai Naive NLX- No Cue). Turklāt pERK ekspresija ar naloksonu ārstētiem ar eksponētiem eksponētiem vīriešiem (Exp NLX + Cue) bija ievērojami zemāka, salīdzinot ar sāls šķīdumu ārstētiem, pieredzējušiem dzīvniekiem (Exp Sal ​​+ Cue) NAc serumā (Fig. 7A; p = 0.002) un mPFC apakšreģioni (Fig. 8A, ACA: p <0.001; B, PL: p = 0.002; C, IL: p = 0.015).

NAc apvalkā divvirzienu ANOVA analīze nesniedza statistiski nozīmīgu faktoru iedarbības un naloksona terapijas ietekmi. Tomēr pāris salīdzinājums parādīja, ka cue ekspozīcija inducēja pERK sēnītei apstrādātā seksuāli pieredzējušā grupā (Exp SAL + Cue), salīdzinot ar nekoncentrētu Saline naivu kontroles grupu (Fig. 7B; Naivs SAL-Cue: p = 0.0163).

diskusija

Pašreizējais pētījums parāda, ka EOP, kas darbojas VTA seksuālās uzvedības laikā, kas ir dabiska atlīdzības uzvedība, izraisīja spēcīgu, bet pārejošu VTA dopamīna šūnu soma lieluma samazināšanos. Soma lieluma samazināšanās netika novērota VTA ne-dopamīna neironos, ne arī dopamīna neironos tuvējā materiāla nigrā, norādot, ka šī pārmaiņa bija specifiska VTA dopamīna šūnām. Šis VTA dopamīna plastiskums ir līdzīgs tam, ko izraisa hroniska opiātu iedarbība (\ tSklair-Tavron et al., 1996; Russo et al., 2007; Mazei-Robison et al., 2011) un izraisīja līdzīgu toleranci pret eksogēno opiātu (morfīnu) atalgojumu. Mēs pierādījām, ka VTA dopamīna plastiskums ir būtisks ilgtermiņa (uzturēšanas), bet ne īstermiņa (attīstības), seksuālās uzvedības stiprināšanas un ar atalgojumu saistītu cueinducētu neirālu aktivitāti (pERK) VTA mērķa reģionos: NAc un mPFC. Šie atklājumi liecina par VTA dopamīna plastiskuma lomu dabiskās atalgojuma prognozes signālu vai atalgojuma atmaksāšanas stimulējošās īpašības ilgtermiņā.

Ir labi dokumentēts, ka seksuālā pieredze sekmē sekojošu seksuālo uzvedību, ieskaitot ātrāku pārošanās uzsākšanu un paaugstinātu veiktspēju (Balfour et al., 2004; Pitchers et al., 2010a,b, 2012). Šī seksuālās uzvedības veicināšana vai nostiprināšana tiek saglabāta vismaz 28 d pēc pārošanās (Pitchers et al., 2012). Turklāt ir pierādīts, ka seksuālā uzvedība un nosacītie dzimumattiecību prognozes izraisa MOR internalizāciju VTA un izraisa neironu aktivāciju visā mezolimbiskajā sistēmā, ieskaitot VTA (dopamīna un nondopamīna neironus), NAc, PFC un BLA (Balfour et al., 2004, 2006). Ir labi zināms, ka VTA dopamīna neironiem ir būtiska loma atalgojuma stimulējošo stimulu apguvē un piešķiršanā (Berridge un Robinson, 1998; Berridge et al., 2009; Flagel et al., 2011) un ir būtiska atalgojuma prognozēšanai (Schultz, 2010). Pašreizējie atklājumi paplašina mūsu pašreizējās zināšanas, demonstrējot, ka atalgojuma izraisītā VTA neiroplastika ir būtiska šīm funkcijām un ir atkarīga no MOR aktivizācijas, ko veic EOP VTA. Pašlaik nav zināms, kurš EOP ir MOR ligands, kas VTA ietekmē vīriešu seksuālās uzvedības laikā. Kaut gan β endorfīns un enkefalīns ir bijuši saistīti ar stimulējošu motivāciju pārtikas pastiprinātājiem (Hayward et al., 2002), tas vēl jānosaka vīriešu seksuālajai uzvedībai. Mēs jau iepriekš esam parādījuši, ka β-endorfīna neironi nav aktivizēti pārošanās laikā, kā arī nepalielinās POMC mRNS; tādējādi liek domāt, ka β endorfīns nevar būt kritisks EOP, kas pārošanās laikā darbojas VTA.Davis et al., 2007). Šis VTA dopamīna plastiskums bija būtisks neironu darbībai mPFC, NAc un VTA pēc saskarsmes ar seksuālās atlīdzības prognozēšanas vides norādēm. Turklāt VTA dopamīna plastiskums bija izšķirošs, lai ilgtermiņā izpaustu seksuālās uzvedības palielināšanos un darbību. Turpretī seksuālās pieredzes izraisītā VTA neiroplastika nebija nepieciešama hedoniskai reakcijai, jo dzimuma atlīdzība (ko noteica CPP) un īstermiņa seksuālās motivācijas un snieguma veicināšana (seksuālās pieredzes laikā vai vēlāk 1 d) palika neskarta, neskatoties uz MOR blokādi pārošanās laikā (Mehrara un Baum, 1990). Tā vietā dati liecina, ka VTA dopamīna neiroplasticitāte mediē ilgāku laiku (7 d pēc pēdējās seksuālās pieredzes; Pitchers et al., 2012) dzimuma atlīdzības „vēlēšanās” izpausme un paaugstinātas motivētas atbildes uz pārošanās \ tMillers un Baums, 1987; Berridge un Robinson, 1998).

Seksuāli pieredzējuši dzīvnieki demonstrēja savstarpēju toleranci pret morfīna atalgojumu, līdzīgi kā ritenīšu iedarbība uz pelēm, vēl viena dabiska atalgojuma uzvedība, iedarbība, kas bloķēta ar naloksona terapiju (Lett et al., 2001, 2002) un kas ir atkarīgi no VTA dopamīna šūnu plastiskuma (pašreizējie konstatējumi). Līdzīgi kā dabiskie ieguvumi, atkārtota opiātu morfīna vai heroīna iedarbība izraisa pārejošu VTA dopamīna soma lieluma samazināšanos (Sklair-Tavron et al., 1996; Spiga et al., 2003; Russo et al., 2007; Mazei-Robison et al., 2011). Turklāt opiātu iedarbība ar īsiem zāļu lietošanas pārtraukuma periodiem izraisa atalgojuma toleranci, ko nosaka lielākas zāļu devas, lai veidotu atalgojuma asociācijas (Shippenberg et al., 1987; Russo et al., 2007) un izraisa pašpārvaldes dzīvniekus, lai palielinātu narkotiku lietošanu (\ tAhmed et al., 2000; Walker et al., 2003). Līdz ar to EOP un opiāti iedarbojas uz kopējiem neironu substrātiem, lai agrīnā izstāšanās laikā radītu atalgojuma toleranci, kas varētu atspoguļot kompensējošu homeostatisku mehānismu, lai novērstu atkārtotu iedarbību stimulāciju (Koob un Le Moal, 2005). Turpretī ilgstošas ​​opiātu zāļu atturēšanās laikā tolerance tiek mainīta pret jutīgumu pret narkotiku atalgojuma īpašībām (Harris un Aston-Jones, 2003; Aston-Jones un Harris, 2004; Harris un Gewirtz, 2004). Interesanti, ka seksuālajai pieredzei, kam seko 7-28 d dzimuma abstinences periods, konstatēts, ka tas izraisa psihostimulantu atalgojumu (Pitchers et al., 2010a), kas ir atkarīga no pārošanās izraisītas deltaFosB ekspresijas un dopamīna receptoru 1 aktivācijas NAc \ tPitchers et al., 2013). Līdz ar to seksuālās atlīdzības pieredze rada vienlaicīgu opiātu atalgojuma toleranci un psihostimulējošo atalgojuma jutīgumu, lai gan vēl ir jāpārbauda ilgāks dzimumtieksmes periods attiecībā uz morfīna atalgojuma pielaidi. Mēs uzskatām, ka šīs pretējās sekas uz narkotiku atlīdzību var būt saistītas ar dažādām nervu plastiskuma formām dažādās mezolimbiskās sistēmas jomās: VTA EOP darbība un dopamīna plastiskums ietekmē opiātu atalgojuma toleranci (pašreizējais pētījums), bet NAc deltaFosB ekspresija kontrolē psihostimulantu sensibilizāciju (Pitchers et al., 2013). Abi šie notikumi var veicināt narkotiku lietošanas palielināšanos (Ahmed un Koob, 1998, 1999; Ahmed et al., 2000, 2002, 2003; Walker et al., 2003).

Molekulārie mehānismi, ar kuriem EOP ietekmē VTA dopamīna neironus dabiskās atalgojuma uzvedības laikā, joprojām nav zināmi. IRS2-Akt-mTORC2 ceļš ir nozīmīgs samazināta soma lieluma starpnieks VTA, ko izraisa atkārtots morfīns (Jaworski et al., 2005; Russo et al., 2007; Mazei-Robison et al., 2011). Atkārtotas morfīna ievadīšanas izraisītās dopamīna neironu lieluma izmaiņas VTA var novērst, izmantojot smadzeņu radītā neirotrofiskā faktora (BDNF) iekšējās VTA infūzijas; Sklair-Tavron un Nestler, 1995). BDNF aktivizē šo ceļu, izmantojot TrkB signalizāciju (Russo et al., 2007), receptoru kināze ar augstu afinitāti pret BDNF un IRS2-Akt ceļa daļu (Serooģija un Gall, 1993; Numan un Seroogy, 1999) un izteikts uz dopamīna un GABA neironiem VTA. Dažādu IRS2-Akt ceļu komponentu pazemināšana, izmantojot vīrusu vektora gēnu pārneses tehnoloģiju, atdarina hroniska opiāta iedarbības ietekmi. Turklāt opiātu iedarbības ietekmi var izglābt, atjaunojot šo signalizācijas ceļu (Russo et al., 2007) un mTORC2 sastāvdaļas pārmērīga ekspresija novērš morfīna izraisītu VTA dopamīna soma samazināšanu (\ tMazei-Robison et al., 2011). Tāpēc iepriekšējā darbā, kurā tika pētīta hronisku opiātu iedarbība uz VTA dopamīna soma lielumu, redzams, ka morfīna izraisīta IRS2-Akt-mTOR ceļa pazemināšanās ir pietiekama un nepieciešama, lai panāktu šo efektu (Mazei-Robison un Nestler, 2012). Tādējādi ir vilinoši spekulēt, ka seksuālās pieredzes ietekme uz VTA dopamīna neiroplastiku ir līdzīgi ar BDNF un IRS2-Akt-mTORC2 ceļu.

Nobeigumā, pašreizējais pētījums parādīja, ka VTA neiroplastiskumu izraisa pieredze ar dabisku atalgojumu, jo īpaši ar atkārtotu vīriešu seksuālo uzvedību. Konkrētāk, EOP darbojas VTA, lai samazinātu dopamīna soma lielumu, kas tiek uzskatīts par saistītu ar palielinātu nervu uzbudināmību un mazāku dopamīna izlaidi, kas izraisa hipodopamīnerģisku sistēmu, un maina lecektisko sistēmu, kas darbojas, reaģējot uz norādēm, kas paredz seksuālu atlīdzību. Turklāt VTA neiroplastiskums ir izšķirošs stimulējošās motivācijas un atalgojuma atdevei, bet ne par seksuālās uzvedības hedonisko ietekmi. Visbeidzot, VTA neiroplastiskums, ko izraisa dabiska atalgojuma uzvedība, kam seko īss atalgojuma atturēšanās periods, ietekmē opiātu atlīdzību un tādējādi var ietekmēt neaizsargātību pret narkomānijas attīstību.

Zemsvītras piezīmes

  • Saņemts janvāris 12, 2014.
  • Saņemtā pārskatīšana maijs 17, 2014.
  • Pieņemts maijs 20, 2014.

  • Šo pētījumu atbalstīja Kanādas Veselības pētījumu institūta dotācijas LMC un dabaszinātņu un inženierzinātņu pētniecības padomei KKP

  • Autori deklarē nekādas konkurējošas finanšu intereses.

  • Korespondence jāadresē Dr Lique M. Coolen, Misisipi Universitātes Medicīnas centra, Fizioloģijas un biofizikas katedra, 2500 North State Street, Džeksons, MS 39216-4505. [e-pasts aizsargāts]

Atsauces

  1. ↵
    1. Agmo A

    (1997) Vīriešu žurkas seksuālā uzvedība. Brain Res Brain Res Protoc 1: 203-209.

  2. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Koob GF

    (1998) Pāreja no mērenas līdz pārmērīgai narkotiku lietošanai: izmaiņas hedoniskajā iestatījuma punktā. Zinātne 282: 298-300.

  3. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Koob GF

    (1999) Ilgstoša kokaīna pašapkalpošanās punkta palielināšanās pēc palielināšanās žurkām. Psihofarmakoloģija 146: 303-312.

  4. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Walker JR,
    3. Koob GF

    (2000) Pastāvīgi pieaugošā motivācija lietot heroīnu žurkām ar anamnēzē narkotiku eskalāciju. Neuropsychopharmacology 22: 413-421.

  5. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Kenny PJ,
    3. Koob GF,
    4. Markou A

    (2002) Neirobioloģiski pierādījumi par hedonisku allostāzi, kas saistīta ar kokaīna lietošanas pieaugumu. Nat Neurosci 5: 625-626.

  6. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Lin D,
    3. Koob GF,
    4. Parsons LH

    (2003) Kokaīna pašregulācijas pastiprināšanās nav atkarīga no izmainīta kokaīna izraisīta kodola accumbens dopamīna līmeņa. J Neirochem 86: 102-113.

  7. ↵
    1. Aston-Jones G,
    2. Harris GC

    (2004) Smadzeņu substrāti, lai palielinātu zāļu meklēšanu ilgstošas ​​atsaukšanas laikā. Neirofarmakoloģija 47: 167-179.

  8. ↵
    1. Balfour ME
    2. Yu L,
    3. Coolen LM

    (2004) Seksuālā uzvedība un ar dzimumu saistītie vides rādītāji aktivizē mesolimbisko sistēmu žurku tēviņiem. Neuropsychopharmacology 29: 718-730.

  9. ↵
    1. Balfour ME
    2. Brown JL,
    3. Yu L,
    4. Coolen LM

    (2006) Iespējamais efferentu devums no mediālās prefrontālās garozas uz neirālo aktivāciju pēc seksuālas uzvedības žurku tēviņiem. Neirozinātnes 137: 1259-1276.

  10. ↵
    1. Beitner-Johnson D,
    2. Guitart X,
    3. Nestler EJ

    (1992) Neirofilamenta olbaltumvielas un mesolimbiskā dopamīna sistēma: hroniskas morfīna un hroniskas kokaīna kopīga regulēšana žurku vēdera apvidū. J Neurosci 12: 2165-2176.

  11. ↵
    1. Berridge KC,
    2. Robinsons TE

    (1998) Kāda ir dopamīna loma atalgojumā: hedoniska ietekme, mācīšanās par atalgojumu vai stimuls? Brain Res Brain Res Rev 28: 309-369.

  12. ↵
    1. Berridge KC,
    2. Robinsons TE,
    3. Aldridge JW

    (2009) Atlīdzības komponentu atdalīšana: „patika”, „vēlas” un mācīšanās. Curr Opin Pharmacol 9: 65-73.

  13. ↵
    1. Blum K,
    2. Werner T,
    3. Carnes S
    4. Carnes P,
    5. Bowirrat A,
    6. Giordano J,
    7. Oscar-Berman M,
    8. Zelts M

    (2012) Sekss, narkotikas un roka 'n' roll: hipotēze par kopējo mezolimbisko aktivitāti kā atlīdzības gēnu polimorfismu funkcija. J Psihoaktīvās zāles 44: 38-55.

  14. ↵
    1. Chu NN,
    2. Zuo YF,
    3. Meng L,
    4. Lee DY,
    5. Han JS,
    6. Cui CL

    (2007) Perifēra elektriskā stimulācija nomainīja šūnu lieluma samazināšanos un palielināja BDNF līmeni vēdera zarnas zonā hroniskām morfīna ārstētām žurkām. Smadzenes Res 1182: 90-98.

  15. ↵
    1. Davis BA,
    2. Fitzgerald ME
    3. Brown JL,
    4. Amstalden KA
    5. Coolen LM

    (2007) POMC neironu aktivācija vispārējā arousā, bet ne seksuālā uzvedībā žurku tēviņiem. Behav Neurosci 121: 1012-1022.

  16. ↵
    1. Fiorino DF,
    2. Coury A,
    3. Phillips AG

    (1997) Dinamiskajām izmaiņām kodolā dopamīna izplūde dzesēšanas efekta laikā žurku tēviņiem. J Neurosci 17: 4849-4855.

  17. ↵
    1. Flagel SB,
    2. Clark JJ,
    3. Robinsons TE,
    4. Mayo L,
    5. Czuj A,
    6. Willuhn I,
    7. Akers CA,
    8. Clinton SM
    9. Phillips PE,
    10. Akil H

    (2011) Dopamīna selektīva loma stimulēšanas un atalgojuma mācībās. daba 469: 53-57.

  18. ↵
    1. Frohmader KS,
    2. Ķepas KK,
    3. Balfour ME
    4. Coolen LM

    (2010a) Jauktas baudas: pārskats par narkotiku ietekmi uz seksuālo uzvedību cilvēkiem un dzīvnieku modeļiem. Horm Behav 58: 149-162.

  19. ↵
    1. Frohmader KS,
    2. Wiskerke J,
    3. Gudrs RA,
    4. Lehman MN
    5. Coolen LM

    (2010b) Metamfetamīns iedarbojas uz neironu subpopulācijām, kas regulē seksuālo uzvedību žurku tēviņiem. Neirozinātnes 166: 771-784.

  20. ↵
    1. Harris AC,
    2. Gewirtz JC

    (2004) Paaugstināts pārsteigums akūtas morfīna lietošanas laikā: opiātu izdalīšanās un trauksmes modelis. Psihofarmakoloģija 171: 140-147.

  21. ↵
    1. Harris GC,
    2. Aston-Jones G

    (2003) Mainīta motivācija un mācīšanās pēc opiātu atsaukšanas: pierādījumi par ilgstošu atalgojuma apstrādes regulēšanu. Neuropsychopharmacology 28: 865-871.

  22. ↵
    1. Hayward MD,
    2. Pintar JE,
    3. Zems MJ

    (2002) Selektīvs atalgojuma deficīts pelēm, kurām trūkst beta-endorfīna un enkefalīna. J Neurosci 22: 8251-8258.

  23. ↵
    1. Hoebel BG,
    2. Avena NM
    3. Bocarsly ME,
    4. Rada P

    (2009) Dabiskā atkarība: uzvedības un ķēdes modelis, kas balstīts uz cukura atkarību žurkām. J Addict Med 3: 33-41.

  24. ↵
    1. Hyman SE,
    2. Malenka RC,
    3. Nestler EJ

    (2006) Atkarības neironu mehānismi: ar atalgojumu saistītās mācīšanās un atmiņas loma. Annu Rev Neurosci 29: 565-598.

  25. ↵
    1. Ikemoto S,
    2. Kohl RR,
    3. McBride WJ

    (1997) GABA (A) receptoru blokāde priekšējā ventrālā tegmentālā zonā palielina dopamīna ekstracelulāro līmeni žurku kodolā. J Neirochem 69: 137-143.

  26. ↵
    1. Jaworski J,
    2. Spangler S
    3. Seeburgas DP,
    4. Hoogenraad CC,
    5. Sheng M

    (2005) Dendrīta arborizācijas kontrole ar fosfoinozidīda-3-kināzes-Akt-zīdītāju mērķi rapamicīna ceļā. J Neurosci 25: 11300-11312.

  27. ↵
    1. Johnson SW
    2. Ziemeļu RA

    (1992) Opioīdi stimulē dopamīna neironus ar vietējo interneuronu hiperpolarizāciju. J Neurosci 12: 483-488.

  28. ↵
    1. Klitenick MA
    2. DeWitte P,
    3. Kalivas PW

    (1992) Somatodendriska dopamīna izdalīšanās regulēšana ventrālā tegmentālā apgabalā ar opioīdiem un GABA: in vivo mikrodialīzes pētījums. J Neurosci 12: 2623-2632.

  29. ↵
    1. Koob GF,
    2. Le Moal M

    (2005) Atalgojuma neirocirkulācijas plastiskums un narkomānijas “tumšā puse”. Nat Neurosci 8: 1442-1444.

  30. ↵
    1. Lennette DA

    (1978) Uzlabots imunofluorescences mikroskopijas stiprinājums. Am J Clin Pathol 69: 647-648.

  31. ↵
    1. Lett BT,
    2. Grant VL,
    3. Koh MT

    (2001) Naloksons mazina nosacīto vietu izvēli, ko izraisa riteņa kustība žurkām. Physiol Behav 72: 355-358.

  32. ↵
    1. Lett BT,
    2. Grant VL,
    3. Koh MT,
    4. Flynn G

    (2002) Iepriekšēja pieredze riteņu darbībā rada savstarpēju toleranci pret morfīna atalgojošo efektu. Pharmacol Biochem Behav 72: 101-105.

  33. ↵
    1. Matthews RT
    2. Vācu DC

    (1984) Elektrofizioloģiskie pierādījumi par žurkām vēdera tegmentālās zonas dopamīna neironu ierosināšanu ar morfīnu. Neirozinātnes 11: 617-625.

  34. ↵
    1. Mazei-Robison MS
    2. Koo JW,
    3. Friedman AK,
    4. Lansink CS,
    5. Robison AJ,
    6. Vinish M,
    7. Krishnan V,
    8. Kim S,
    9. Siuta MA
    10. Galli A,
    11. Niswender KD,
    12. Appasani R
    13. Horvath MC,
    14. Neve RL,
    15. Worley PF,
    16. Snyder SH,
    17. Hurd YL,
    18. Uzmundrināt JF,
    19. Han MH,
    20. Russo SJ,
    21. un citi.

    (2011) mTOR signalizācijas un neironu aktivitātes loma morfīna inducētos pielāgojumos vēdera tegmentālās zonas dopamīna neironos. Neirons 72: 977-990.

  35. ↵
    1. Mazei-Robison MS
    2. Nestler EJ

    (2012) Opiātu izraisītais ventrālās tegmentālās zonas un lokusa coeruleus katekolamīna neironu molekulārais un šūnu plastiskums. Cold Spring Harb Perspect Med 2: a012070.

  36. ↵
    1. Mehrara BJ,
    2. Baum MJ

    (1990) Naloksons traucē žurku tēviņu izteiksmi, bet ne to iegūšanu, ko rada nosacītas vietas preferences reakcija uz estētisku sievieti. Psihofarmakoloģija 101: 118-125.

  37. ↵
    1. Meisel RL
    2. Mullins AJ

    (2006) Seksuālā pieredze sieviešu grauzējiem: šūnu mehānismi un funkcionālās sekas. Smadzenes Res 1126: 56-65.

  38. ↵
    1. Miller RL,
    2. Baum MJ

    (1987) Naloksons nomāc estētisko mātīšu pārošanos un kondicionēto vietu izvēli žurku tēviņos drīz pēc kastrācijas. Pharmacol Biochem Behav 26: 781-789.

  39. ↵
    1. Mitchell JB,
    2. Stewart J

    (1990) Vīriešu žurku seksuālās uzvedības veicināšana, kas saistīta ar opiātu VTA injekcijām. Pharmacol Biochem Behav 35: 643-650.

  40. ↵
    1. Murphy LO,
    2. Blenis J

    (2006) MAPK signāla specifika: pareizā vieta īstajā laikā. Trends Biochem Sci 31: 268-275.

  41. ↵
    1. Nestler EJ

    (2012) Narkotiku atkarības transkripcijas mehānismi. Clin Psychopharmacol Neurosci 10: 136-143.

  42. ↵
  • ↵
    1. Paxinos G,
    2. Watson C

    (2013) Žurku smadzenes stereotaksiskās koordinātās (Academic, Boston), Ed 7.

  • ↵
    1. Ķepas KK,
    2. Balfour ME
    3. Lehman MN
    4. Richtand NM
    5. Yu L,
    6. Coolen LM

    (2010a) Neiroplastiskums mesolimbiskajā sistēmā, ko izraisa dabiska atlīdzība un turpmāka atalgojuma atturēšanās. Biol Psihiatrija 67: 872-879.

  • ↵
    1. Ķepas KK,
    2. Frohmader KS,
    3. Vialou V
    4. Mouzon E,
    5. Nestler EJ
    6. Lehman MN
    7. Coolen LM

    (2010b) DeltaFosB kodolkrāsās ir izšķiroša nozīme seksuālās atlīdzības pastiprināšanā. Gēni Brena prāts 9: 831-840.

  • ↵
    1. Ķepas KK,
    2. Schmid S,
    3. Di Sebastiano AR
    4. Wang X,
    5. Laviolette SR,
    6. Lehman MN
    7. Coolen LM

    (2012) Dabas atalgojuma pieredze maina AMPA un NMDA receptoru sadalījumu un funkcijas kodolkrāsās. PLoS One 7: e34700.

  • ↵
    1. Ķepas KK,
    2. Vialou V
    3. Nestler EJ
    4. Laviolette SR,
    5. Lehman MN
    6. Coolen LM

    (2013) Dabas un narkotiku atlīdzība darbojas, izmantojot kopīgus neirozes plastiskuma mehānismus ar DeltaFosB kā galveno mediatoru. J Neurosci 33: 3434-3442.

  • ↵
    1. Roux PP,
    2. Blenis J

    (2004) ERK un p38 MAPK aktivētās proteīnu kināzes: proteīnu kināžu ģimene ar dažādām bioloģiskām funkcijām. Microbiol Mol Biol Rev 68: 320-344.

  • ↵
    1. Russo SJ,
    2. Bolanosa CA,
    3. Theobald DE,
    4. DeCarolis NA,
    5. Renthal W,
    6. Kumar A,
    7. Winstanley CA,
    8. Renthal NE,
    9. Wiley MD
    10. Self DW,
    11. Russell DS,
    12. Neve RL,
    13. Eisch AJ,
    14. Nestler EJ

    (2007) IRS2-Akt ceļš vidus smadzeņu dopamīna neironos regulē uzvedības un šūnu reakcijas uz opiātiem. Nat Neurosci 10: 93-99.

  • ↵
    1. Schultz W

    (2010) Dopamīna neironu vairākas funkcijas. F1000 Biol Rep 2: 2.

  • ↵
    1. Serooģija KB,
    2. Gall CM

    (1993) Neirotrofīnu ekspresija ar vidus smadzeņu dopamīnerģiskajiem neironiem. Exp Neurol 124: 119-128.

  • ↵
    1. Shippenberg TS,
    2. Bals-Kubik R
    3. Herz A

    (1987) Opioīdu motivācijas īpašības: pierādījums tam, ka delta-receptoru aktivizēšana veicina pastiprinājuma procesus. Smadzenes Res 436: 234-239.

  • ↵
    1. Sklair-Tavron L
    2. Nestler EJ

    (1995) Morfīna un neirotrofīnu, NT-3, NT-4 un BDNF opozējošās iedarbības uz lokusa coeruleus neironiem in vitro. Smadzenes Res 702: 117-125.

  • ↵
    1. Sklair-Tavron L
    2. Shi WX,
    3. SB josla,
    4. Harris HW
    5. Bunney BS,
    6. Nestler EJ

    (1996) Hroniska morfīna izraisa redzamas mesolimbiskās dopamīna neironu morfoloģijas izmaiņas. Proc Natl Acad Sci USA 93: 11202-11207.

  • ↵
    1. Spiga S,
    2. Serra GP
    3. Puddu MC,
    4. Foddai M,
    5. Diana M

    (2003) Morfīna izdalīšanās izraisītas anomālijas VTA: konfokālā lāzera skenēšanas mikroskopija. Eur J Neurosci 17: 605-612.

  • ↵
    1. Swanson LW

    (2004) Smadzeņu kartes: žurku smadzeņu struktūra (Academic, San Diego), Ed 3.

  • ↵
    1. Tenk CM,
    2. Wilson H
    3. Zhang Q,
    4. Ķepas KK,
    5. Coolen LM

    (2009) Seksuāla atlīdzība žurku tēviņiem: seksuālās pieredzes ietekme uz sasaistīto vietu preferencēm, kas saistītas ar ejakulāciju un intrūzijām. Horm Behav 55: 93-97.

  • ↵
    1. Tzschentke TM

    (2007) Atalgojuma mērīšana ar nosacīto vietu preferences (CPP) paradigmu: pēdējās desmitgades atjaunināšana. Addict Biol 12: 227-462.

  • ↵
    1. van Furth WR,
    2. van Ree JM

    (1996) Seksuāla motivācija: endogēno opioīdu iesaistīšanās vēdera apvalka zonā. Smadzenes Res 729: 20-28.

  • ↵
    1. van Furth WR,
    2. Wolterink G,
    3. van Ree JM

    (1995) Vīriešu seksuālās uzvedības regulēšana: smadzeņu opioīdu un dopamīna iesaistīšana. Brain Res Brain Res Rev 21: 162-184.

  • ↵
    1. Walker JR,
    2. Chen SA,
    3. Moffitt H
    4. Inturrisi CE,
    5. Koob GF

    (2003) Hroniska opioīdu iedarbība palielina heroīna pašregulāciju žurkām. Pharmacol Biochem Behav 75: 349-354.

  • ↵
    1. Young KA,
    2. Gobrogge KL,
    3. Liu Y,
    4. Wang Z

    (2011) Pāra līmēšanas neirobioloģija: ieskats no sociāli monogāmiem grauzējiem. Priekšējais Neuroendokrinols 32: 53-69.

    •