Metamfetamīna aktivēto Fos ekspresējošo neironu molekulāro izmaiņu noteikšana no viena žurka muguras striatuma, izmantojot fluorescences aktivētu šūnu šķirošanu (FACS) (2013)

Metamfetamīns un citas zāles aktivizē nelielu daļu visu smadzeņu neironu. Mēs iepriekš izstrādājām uz fluorescences aktivētu šūnu šķirošanas (FACS) metodi, lai raksturotu molekulāras izmaiņas, ko izraisa selektīvi aktivētos neironos, kas ekspresē neirālās aktivitātes marķieri Fos. Tomēr šai metodei ir nepieciešams apvienot paraugus no daudzām žurkām. Tagad mēs aprakstām modificētu FACS balstītu metodi, lai raksturotu molekulāras izmaiņas Fos ekspresējošās dorsālās striatāla neironos no viena žurka, izmantojot multipleksu pirms amplifikācijas stratēģiju.

Fos un NeuN (neironu marķieris) imūnhistoķīmija norāda, ka 5-6% no muguras striatuma neironiem tika aktivizēti 90 min pēc akūtas metamfetamīna injekcijas (5 mg / kg, ip), bet mazāk nekā 0.5% neironu tika aktivizēti ar sāls šķīdumiem.

Mēs izmantojām FACS, lai atdalītu NeuN-iezīmētos neironus Fos-pozitīvos un Fos-negatīvos neironos un novērtētu mRNS ekspresiju, izmantojot RT-qPCR no pieciem Fos-pozitīviem neironiem. Metamfetamīns izraisīja 3-20 reižu pieaugumu tieši agrīniem gēniem, homer-2, c-fos, fosB un tā izoforām (ΔfosB un jauna izoforma ΔfosB-2) Fos-pozitīvos, bet ne Fos-negatīvos neironus. Tūlītēja agrīna gēnu mRNS indukcija bija 10 reizes zemāka vai tukša, ja to novērtēja nešķirotu paraugu veidā no viena dorsālā striatuma homogenāta. Mūsu modificētā metode ļauj izpētīt unikālas molekulāras izmaiņas neironiem, kurus aktivē narkotikas vai ar narkotikām saistītie norādījumi sarežģītos atkarības modeļos.

Metamfetamīns un citas zāles aktivizē nelielu daļu visu smadzeņu neironu. Mēs šeit ziņojam par pilnveidotu metodi, lai raksturotu molekulāras izmaiņas, ko izraisa selektīvi aktivētos neironos, kas ekspresē neirālās aktivitātes marķieri Fos. Mēs izmantojām FACS kopā ar mērķtiecīgu PCR iepriekšējo amplifikāciju, lai novērtētu akūtu metamfetamīna izraisītu gēnu ekspresiju no tikai 5 Fos ekspresējošiem neironiem no viena žurka dorsālā striatuma. Metamfetamīns izraisīja 3-20 reižu pieaugumu tūlītējiem agrīnajiem gēniem (IEG) Fos-pozitīvajos, bet ne Fos-negatīvajos neironos. Mērķtiecīga PCR iepriekšēja amplifikācija ļauj izpētīt unikālās molekulārās izmaiņas neironiem, kurus aktivē narkotikas vai ar narkotikām saistītie norādījumi sarežģītos atkarības modeļos.

Publicēts 2013. Šis raksts ir ASV valdības darbs un ir publiski pieejams ASV.