Narkotiku pieredze epigenētiski inducē Fosb gēnu inducējamību žurku kodolā (2012)

KOMENTĀRI: Pierādījumi par to, ka deltafosb atstāj aiz pēdām ilgi pēc atgūšanās no atkarības. Īpaši atkarība izraisa epigenetiskas izmaiņas, kas izraisa daudz ātrāku deltafosb indukciju, kad notiek recidīvs. Tas izskaidro, kā recidīvs, pat pēc gadiem, var strauji saasināties līdz pilnīgai izpūšamajai valstij.



J Neurosci. Autora manuskripts; pieejams PMC 2013 janvārī 25.

 

Anotācija

ΔFosB, a Fosbs gēnu produkts, tiek ierosināts kodolkrāsās (NAc) un caudate putamen (CPu), atkārtoti pakļaujot ļaunprātīgu vielu, piemēram, kokaīna, iedarbību. Šī indukcija veicina gēnu ekspresijas un uzvedības anomāliju novirzes no atkārtotas zāļu iedarbības.

Šeit mēs izvērtējām, vai žurku ekspozīcija ar zālēm attālināti var izmainīt Fosbs gēnu, ko izraisa turpmāka kokaīna iedarbība. Mēs parādām, ka iepriekšēja hroniska kokaīna lietošana, kam seko ilgstoša atcelšana, palielina Fosbs NAc, ko apliecina lielāka ΔFosB mRNS akūta indukcija un ātrāka ΔFosB proteīna uzkrāšanās pēc atkārtotas kokaīna atkārtotas iedarbības. Šādas gruntētas nav Fosbs indukcija tika novērota CPu, faktiski sekojošā ΔFosB mRNS akūta indukcija tika nomākta CPu.

Šie neparasti modeļi Fosbs izteiksme ir saistīta ar hromatīna modifikācijām Fosbs gēnu promotors. Iepriekšēja hroniska kokaīna lietošana izraisa ilgstošu RNS polimerāzes II (Pol II) palielināšanos Fosbs veicinātājs tikai NAc, liekot domāt, ka Pol II „apstājas” Fosbs inducēšanai šajā reģionā pēc kokaīna atkārtotas iedarbības. Tad kokaīna izaicinājums izraisa Pol II izdalīšanos no gēnu promotora, ļaujot ātrāk Fosbs transkripcija. Kokaīna izaicinājums arī samazina represīvo histonu modifikācijas Fosbs reklamētājs NAc, bet palielina šādas represīvas zīmes un samazina CPu aktivizējošās atzīmes.

Šie rezultāti sniedz jaunu ieskatu hromatīna dinamikā Fosbs un atklāj jaunu mehānismu gruntēšanai Fosbs indukcija NAc pēc kokaīna atkārtotas iedarbības.

Ievads

Narkotiku atkarību raksturo kompulsīva narkotiku meklēšana un to lietošana, neskatoties uz nopietnām nelabvēlīgām sekāmKalivas et al., 2005; Hymans et al., 2006). Hroniska zāļu iedarbība izraisa nemainīgas gēnu ekspresijas izmaiņas vēdera striatumā (vai kodolkrūmos; NAc) un muguras striatumā (vai caudate putamen; CPu), striatāla struktūrās, kas saistītas ar narkotiku atlīdzību un atkarību (Freeman et al., 2001; Robinsons un Kolb, 2004; Shaham un Hope, 2005; Maze un Nestler, 2011). ΔFosB, atdalīts un stabils proteīns, ko kodē tiešais agrīnā gēns, \ t Fosbs, ir labi raksturots transkripcijas faktors, ko inducē NAc un CPu ar hronisku ekspozīciju praktiski visām ļaunprātīgas lietošanas zālēm, kur tas mediē sensibilizētas uzvedības reakcijas uz atkārtotu zāļu ievadīšanu. (Nestler, 2008). Tomēr, vai iepriekšēja hroniska iedarbība uz ļaunprātīgu narkotiku iedarbību maina turpmāko ΔFosB indukciju, nav zināms.

Mēs nesen pieņēmām, ka hromatīna modifikācijas, reaģējot uz hronisku zāļu iedarbību, var mainīt specifisku gēnu inducējamību mērķa smadzeņu reģionos (Robison un Nestler, 2011). Arvien vairāk pierādījumu liecina, ka ļaunprātīgas lietošanas narkotikas pēc hroniskas lietošanas maina hromatīna struktūru un transkripcijas pieejamību, izmantojot daudzu veidu modifikācijas, tostarp fosforilēšanu, acetilēšanu un histonu astes metilēšanu. Jaunāks darbs šūnu kultūras sistēmās ir vērsts uz RNS polimerāzes II (Pol II) piesaisti „inducējamo” gēnu promotoram pirms to izpausmes, Pol Pol II pastāvīgi piesaistoties pie tuvākajiem promotora reģioniem un ap transkripcijas sākuma vietu (TSS ) “apstājies” stāvoklī (Core un Lis, 2008; Nechaev un Adelman, 2008). Tiek uzskatīts, ka iestrēgušā Pol II aktivizēšana ir atbildīga par tās aizbēgšanu no promocijas un TSS reģioniem un to transkripcijas šiem „gruntētajiem” gēniem (Zeitlinger et al., 2007; Saha et al., 2011; Bataille et al., 2012).

Šeit mēs parādām, ka iepriekšēja hroniska kokaīna iedarbība, kam seko pagarināts zāļu izdalīšanās periods, maina AUC induciblitāti Fosbs gēnu uz turpmāko kokaīna ievadīšanu, un NAc tiek sagatavots indukcijai, kamēr CPu nav. Pēc tam mēs identificējam atšķirīgus hromatīna parakstus Fosbs gēnu promotors NAc un CPu, kas ir saistīti ar šādu. \ t Fosbs gēnu, tostarp apturēto Pol II pieņemšanu darbā Fosbs proksimālais promotors tikai NAc, kā arī izmaiņas vairākos aktivizējošos vai represīvos histona modifikācijās abos smadzeņu reģionos. Šie rezultāti sniedz jaunu ieskatu hromatīna dinamikā Fosbs gēnu promotors un pirmo reizi norāda mehānismu, ar kuru tiek pārtraukta Pol II prime Fosbs lielākai aktivizēšanai NAc pēc kokaīna atkārtotas iedarbības.

Materiāli un metodes

Dzīvnieki

Vīriešiem Sprague Dawley žurkas (250 – 275 g; Charles River Laboratories), ko izmantoja visos eksperimentos, tika pārī novietotas klimatā kontrolētā telpā ar 12 hr gaismas / tumšā cikla laikā (apgaismojums pie 7 AM) ar piekļuvi pārtikai un ūdens ad libitum. Visi dzīvnieki tika ievietoti divas reizes dienā desmit dienas ar kokaīnu (15 mg / kg, ip) vai fizioloģisko šķīdumu (ip) viņu mājās. Dzīvnieku eksperimentus Sinajas kalnos apstiprināja Dzīvnieku kopšanas un lietošanas komiteja (IACUC).

Lokomotoru mērījumi

Dzīvnieki tika pieradināti kustības kamerā pirmajā dienā 1 hr un pēc tam tika kontrolēti lokomotorās aktivitātes pēc sāls šķīduma injekcijas, izmantojot Photobeam darbības sistēmu (San Diego Instruments). Pēc 1 hr pieradināšanas katru dienu lokomotīvju kamerās 15 dienas tika ievadīts kokaīns (2 mg / kg, ip), un dzīvnieki tika pārraudzīti, lai konstatētu lokomotorisko aktivitāti 1 hr.

Imūnhistoķīmija

Pēc pēdējās zāļu iedarbības dzīvnieki tika pilnveidoti 24 hr. ΔFosB / FosB imunoreaktivitāte tika noteikta, kā aprakstīts (Perrotti et al., 2004). Western blotting apstiprināja, ka visas ΔFosB / FosB līdzīgās imūnoreaktivitātes reakcijas novēroja 24 hr vai ilgāk pēc kokaīna injekciju atspoguļošanas ΔFosB, un FosB nebija nosakāms (nav parādīts).

RNS izolācija, reversā transkripcija un PCR

NAc un dorsolateral / dorsomedial CPu divpusēji 12 gabarīta perforatori tika iegūti, kā aprakstīts (Perrotti et al., 2004), saldēti sausā ledā un apstrādāti saskaņā ar publicētajiem \ tCovington et al., 2011). ΔFosB un FosB mRNS tika mērīta, izmantojot kvantitatīvu PCR (qPCR) ar izoforma specifiskiem ΔFosB un FosB primeriem (Alibhai et al., 2007). ΔFosB un FosB mRNS līmenis tika normalizēts līdz GAPDH mRNS līmenim, ko neietekmēja kokaīna iedarbība (nav parādīts).

Western blotting

NAc un CPu perforatori tika savākti, kā aprakstīts iepriekš, un apstrādāti Western blotting, kā aprakstīts (Covington et al., 2011), izmantojot antivielas pret ERK44 / 42 [ekstracelulāro signālu regulētu kināzi-44 / 42] un fosfoERK44 / 42 (pERK), AKT [timomas vīrusa proto-onkogēnu] un p-AKT, SRF (seruma reakcijas koeficients) un pSRF, CREB [cAMP atbildes elementa saistošais proteīns] un pCREB. Katrā joslā iepildītais olbaltumvielu daudzums tika normalizēts līdz aktīna vai tubulīna līmenim, ko kokaīna iedarbība neietekmēja.

Hromatīna imunoprecipitācija (ChIP)

Tikko sagatavoti NAc un CPu perforatori tika sagatavoti ChIP, kā aprakstīts (Maze et al., 2010). Katrs eksperimentālais stāvoklis tika analizēts trīs eksemplāros no neatkarīgām dzīvnieku grupām. Katram ChIP paraugam divpusēji NAc un CPu perforatori tika apvienoti no piecām žurkām (10 perforatori). Antivielas, kas izmantotas specifisku histonu modifikāciju veikšanai, ir tādas pašas kā publicētās (\ tMaze et al., 2010); antivielas pret Pol II, kas fosforilēts tā karboksilterminālā domēna (CTD) atkārtotā reģiona (Pol II-pSer5) Ser5, ieguva no abcam 5131. Tika izstrādāti četri ChIP gruntu komplekti Fosbs (Lazo et al., 1992; Mandelzys et al., 1997): 1F: GTACAGCGGAGGTCTGAAGG, 1R: GAGTGGGATGAGATGCGAGT; 2F: CATCCCACTCGGCCATAG, 2R: CCACCGAAGACAGGTACTGAG; 3F: GCTGCCTTTAGCCAATCAAC, 3R: CCAGGTCCAAAGAAAGTCCTC; 4F: GGGTGTTTGTGTGTGAGTGG, 4R: AGAGGAGGCTGGACAGAACC. Kromatīna modifikāciju līmeņi tiek salīdzināti ar ievadītās DNS modifikācijām (Maze et al., 2010).

Statistiskā analīze

Visas norādītās vērtības ir vidējās ± sem. Locomotorās aktivitātes un šūnu skaitīšanas dati tika analizēti ar divvirzienu ANOVA, ārstēšanu un injekciju kā faktoru. qPCR eksperimenti laika posmā tika analizēti ar vienvirziena ANOVA, ārstējot kā faktoru. Kad tika novēroti nozīmīgi galvenie efekti (p <0.05), Bonferroni post-hoc testi tika veikti, lai salīdzinātu ar dzīvniekiem, kuri iepriekš nebija ārstēti ar fizioloģisko šķīdumu (^ skaitļos) un dzīvniekiem, kuri iepriekš nebija ārstēti ar kokaīnu (* skaitļos). Western blotēšanas un ChIP datiem tika izmantoti nesaistītie studentu t-testi ar vairāku salīdzinājumu korekcijām.

rezultāti

Greater Fosb inducējamība ar kokainu ārstētiem žurkām NAc, bet ne CPu

Izpētīt iepriekšēja hroniska kokaīna kursa ietekmi, kam seko ilgstošs zāļu lietošanas pārtraukšanas periods. \ T Fosbs gēnu, reaģējot uz nākamo kokaīna izaicinājumu, žurkām, kuras iepriekš ievadīja ip divas reizes dienā ar sāls šķīdumu vai kokaīnu (15 mg / kg) 10 dienām, tika dota zāļu devas pēc 28 izņemšanas dienas (1A). Vispirms mēs izmērījām lokomotorās atbildes reakcijas vienā dzīvnieku grupā, lai apstiprinātu lokomotorisko sensibilizāciju ar iepriekšēju kokaīna iedarbību, kas ir paredzama zāļu lietošanas ilglaicīga ietekme. Kokaīna un pieredzējušiem žurkām bija līdzvērtīga sākotnējā lokomotoriskā aktivitāte, un kokaīna iedarbība tika novērsta pret iepriekš neārstētiem dzīvniekiem, palielinot to kustību (1B. Atkārtoti pasākumi divvirzienu ANOVA, apstrāde: F1,66 = 30.42, p <0.0001; kokaīna izaicinājums: F2,66= 58.39, p <0.0001; ārstēšana x kokaīna izaicinājums: F2,66= 8.56, p = 0.0005, Bonferroni pēcpārbaudes ^p <0.001). Šī kokaīna izsaukšana izraisīja ievērojami lielāku kustību aktivitāti, ti, sensibilizāciju, ar kokainu pieredzējušām žurkām (Bonferroni pēcpārbaudes * p <0.001).

Skaitlis 1  

Iepriekšējas hroniskas kokaīna iedarbības ietekme uz lokomotorisko aktivitāti un Fosbs indukcija NAc un CPu pēc zāļu atkārtotas iedarbības

Lai novērtētu šīs kokaīna pirmapstrādes shēmas ietekmi uz ΔFosB ekspresiju NAc un CPu, mēs izmērījām ΔFosB proteīnu ar imūnhistoķīmiskām metodēm 24 hr pēc kokaīna neārstētiem un kokaīna pieredzējušiem dzīvniekiem ārstējot ar 0, 1, 3 vai 6 ikdienas kokaīna izaicinājumu injekcijas (15 mg / kg; skatīt 1A). Kā iepriekš noteikts (Nye et al., 1995), 3 kokaīna injekcijas bija pietiekamas, lai nozīmīgi izraisītu ΔFosB proteīnu neārstētu dzīvnieku NAc un CPu, un tās uzkrāšanās saglabājās nozīmīga pēc 6 dienas kokaīna injekcijām (1C. Atkārtoti pasākumi divvirzienu ANOVA, NAc kodols, apstrāde: F1,28= 23.5, p <0.0001; kokaīna izaicinājums: F3,28= 49.16, p <0.0001; ārstēšana x kokaīna izaicinājums: F3,28= 6.83, p = 0.0014; NAc apvalks, apstrāde: F1,28= 18.69, p <0.0001; kokaīna izaicinājums: F3,28= 31.52, p <0.0001; ārstēšana x kokaīna izaicinājums: F3,28= 3.21, p <0.05; CPu, ārstēšana: F1,28= 9.47, p <0.001; kokaīna izaicinājums: F3,28= 19.74, p <0.0001; ārstēšana x kokaīna izaicinājums: F3,28= 0.94, p> 0.05. NAc kodolā, apvalkā un CPu Bonferroni pēcpārbaudes ^p <0.05). Kokaīnā pieredzējušiem dzīvniekiem nebija pierādījumu par nepārtrauktu ΔFosB indukciju NAc vai CPu pēc 28 dienu pārtraukšanas, saskaņā ar iepriekšējiem ziņojumiem, ka ΔFosB signāls līdz šim brīdim pilnībā izkliedējas (Nye et al., 1995), iemesls šim laika posmam tika izmantots šajā pētījumā. Tomēr pārsteidzoši, ka kokainu pieredzējušām žurkām, kas saņēma 3 vai 6 kokaīna injekcijas injekcijas, bija ievērojami lielāka ΔFosB proteīna indukcija NAc, kas ir acīmredzama gan kodolu, gan čaumalu apakšreģionos (1C. Bonferroni pēcpārbaudes * p <0.05). Turpretī CPu netika novērota šāda lielāka ΔFosB olbaltumvielu indukcija; tā vietā ekvivalenta ΔFosB indukcija tika novērota šajā reģionā pēc 3 vai 6 dienu ilgas kokaīna izaicināšanas injekcijām žurkas, kas iepriekš nebija lietojušas kokaīnu un kurām nebija pieredzes (1C).

Lai iegūtu priekšstatu par NAc un CPu transkripcijas izmaiņām, reaģējot uz kokaīna izaicinājumu, mēs pētījām AFosB un FosB mRNS transkriptu inducējamības laika gaitu (45, 90 un 180 min), ievadot vienu kokaīnu vai sāls šķīdumu. pēc 28 izņemšanas dienām (skatīt. \ t 1A). Salīdzinot ar sālsūdens izaicinājumu, kokaīna izaicinājums izraisīja strauju AFosB un FosB mRNS līmeņa paaugstināšanos visos triju laika posmos gan ar NAc, gan CPu grupā, kas nav iepriekš ārstēti ar kokaīnu.1D. Atkārtoti pasākumi vienā virzienā ANOVA uz laika punktu; Bonferroni pēcpārbaudes ^p <0.05). NAc gadījumā mēs novērojām lielāku ΔFosB un FosB mRNS indukciju dzīvniekiem ar kokaīnu, kuri bija pieredzējuši kokaīnu, salīdzinot ar dzīvniekiem, kas iepriekš nebija lietojuši kokaīnu, pēc kokaīna izsaukšanas, efekts bija ievērojams 90 minūšu laikā, savukārt, pretēji ΔFosB un FosB mRNS inducējamība CPu bija ievērojami samazinājies dzīvniekiem ar kokaīnu (1D. Bonferroni pēcpārbaudes %p = 0.08, * p <0.05).

Kokaīna pieredzējušu žurku augšupejošo signālu ceļu raksturojums NAc un CPu

Viens no iespējamiem izskaidrojumiem par izmainīto. \ T Fosbs NAc un CPu gēns pēc iepriekšēja hroniska kokaīna kursa ir tāds, ka attālināta kokaīna ekspozīcijas vēsture var izraisīt ilgstošas ​​izmaiņas signalizācijas ceļos, kas atrodas augšup pa straumi. Fosbs gēnu indukcija tādā veidā, ka kokaīna izaicinājums pēc tam inducē gēnu aberranta pakāpē. Lai izpētītu šo hipotēzi, mēs analizējām abus transkripcijas faktorus - SRF un CREB, kas nesen tika pierādīti, lai būtu nepieciešami ΔFosB kokaīna indukcijai šajos smadzeņu reģionos (Vialou et al., 2012) kopā ar proteīnu kināzēm, ERK un AKT, kas saistītas arī ar kokaīna iedarbību (\ tValjent et al., 2000; Lu et al., 2006; Boudreau et al., 2009). Mēs nespējām noteikt jebkādas izmaiņas šo dažādo proteīnu kopējā vai fosforilētajā līmenī, kas varētu izskaidrot izmainīto inducibilitāti. Fosbs novērotas, ieskaitot izmaiņas SRF, CREB vai AKT (2B, C). PKRF un pCREB izmaiņu trūkums NAc, reaģējot uz kokaīna izaicinājumu, atbilst nesenajam ziņojumam, kurā konstatēts, ka tikai hronisks kokaīns izraisīja būtisku ietekmi (Vialou et al., 2012).

Skaitlis 2  

Iepriekšējas hroniskas kokaīna iedarbības ietekme uz augšupējās molekulārās signalizācijas kaskādēm NAc un CPu

Narkotiku un CPu gadījumā, kas nav iepriekš ārstēti ar dzīvniekiem, 20 min pēc sākotnējās zāļu iedarbības (2A), viena kokaīna lietošanas problēma mazina pERK42 / 44 \ t2B, C. Divu astes Studenta t-tests: * p <0.05). Iepriekš ir ziņots par pERK līmeņa paaugstināšanos šajos reģionos pēc akūtas kokaīna lietošanas (Valjent et al., 2000). To ir grūti salīdzināt ar citiem dokumentiem, kuros aplūkota ERK fosforilācija NAc, pārtraucot atkārtotas kokaīna injekcijas (Boudreau et al., 2007; Shen et al., 2009), tāpat kā mūsu pētījumā pERK tika noteikts pēc 28 izņemšanas dienām un pēc kokaīna vai sāls šķīduma. Salīdzinājumā ar iepriekš neārstētiem medikamentiem, kuri pirmo reizi piedzīvoja kokaīnu, kokaīna lietošanas laikā atkārtoti lietojot kokainu, pēc 28 lietošanas pārtraukšanas dienas, ievērojami palielinājās pERK42 / 44 līmenis CPu (2B, C. Divu astes studentu t-tests: * p <0.05).

Kromatīna ainava pie Fosb gēna promotors NAc un CPu ar kokainu pieredzējušiem žurkām

Pēc tam mēs pētījām, vai ir izmaiņas Fosbs gēnu inducējamība ir saistīta ar izmaiņām tās hromatīna struktūrā. ChIP tika veikta ar NAc un CPu, izmantojot antivielas, kas vērstas pret trim labi raksturotām histona modifikāciju formām: histona H4 (H3K3me4) Lys3 trimetilēšanu, kas saistīta ar gēnu aktivizāciju, un H3K27me3 un H3K9me2, kas saistīti ar gēnu represijām. Pēc 28 atcelšanas dienām mēs analizējām ar kokaīnu neārstētas un pieredzējušās žurkas bez kokaīna injekcijas vai bez tās, ar dzīvniekiem vēlāk pārbaudot 1 hr.3A). NAc nav konstatētas nekādas būtiskas izmaiņas attiecībā uz kādu no šiem trim histona modifikācijām Fosbs gēnu promotors bez kokaīna izaicinājuma, lai gan bija tendence samazināt H3K9me2 līmeņus (3B-D. Divu astoņu studentu t-tests. #p = 0.2, salīdzinot ar attiecīgajām narkotiku apkarošanas kontrolēm). Šis efekts kļuva nozīmīgs pēc kokaīna lietošanas un bija specifisks gēna proksimālajam promotora reģionam (3C. * p <0.05). Kaut arī dažos gēnos H3K9me2 līmenis ir ļoti zems, Fosbs gēnu promotors uzrāda ievērojamus šīs zīmes līmeņus NAc kontroles apstākļos (Maze et al., 2010, dati nav parādīti). Pretstatā tam, CPu, mēs atklājām nelielu, bet ievērojamu H3K4me3 saistīšanās samazināšanos un palielinājās H3K27me3 saistošajā vietnē Fosbs veicinātājs bez kokaīna izaicinājuma, sekas, kas zaudētas pēc \ t3D. * p <0.05).

Skaitlis 3  

Iepriekšējas hroniskas kokaīna iedarbības ietekme uz epigenetisko gruntēšanu. \ T Fosbs gēnu NAc un CPu

Pēc tam mēs pētījām Pol II saistošos Fosbs gēns, pamatojoties uz jaunākajiem konstatējumiem šūnu kultūrā, ka Pol II apstāšanās TSSs, ko raksturo tā fosforilācija Ser 5 tās CTD atkārtošanās reģionā, ir saistīta ar gēnu primēšanu (skatīt ievadu). Tādējādi mēs analizējām Pol II-pSer5 saistošos Fosbs četros atšķirīgos gēnu reģionos (3B). Šī analīze atklāja Pol II-pSer5 nozīmīgu bagātināšanos Fosbs gēnu, kas atrodas tuvākajā promocijas reģionā, un ap to TSS NAc ar kokainu pieredzējušiem dzīvniekiem pēc ilgstošas ​​atsaukšanas, ja nav kokaīna, salīdzinot ar kontroles līdzekļiem (3E. * p <0.05). Šī bagātināšanās nebija redzama divos Gēnu ķermeņa reģionos Fosbs, kas atbilst Pol II apstādināšanai, kas aprakstīta vienkāršākās eksperimentālās sistēmās. Interesanti, ka pēc kokaīna izaicinājuma Pol II-pSer5 saistīšanās joprojām liecināja par bagātināšanas pazīmēm, lai gan tās vairs nav ievērojami Fosbs proksimālais veicinātāja reģions (3E. %p = 0.1), bet atgriezās kontroles līmeņos TSS. CPu rezultāti bija daudz mainīgāki, un nav novērota skaidra Pol II-pSer5 saistīšanās tendence.

diskusija

Šis pētījums sniedz jaunu ieskatu ilgstošā regulējumā Fosbs nedēļas pēc atkārtotas kokaīna iedarbības pārtraukšanas. Mēs parādām, ka iepriekšēja hroniska kokaīna lietošana padara Fosbs gēnu, kas ir inducējams NAc, kas izraisa ātrāku ΔFosB uzkrāšanos pēc atkārtotas zāļu iedarbības. Ņemot vērā to, ka pārsvarā ir pierādījumi, ka ΔFosB indukcija NAc vidē ietekmē sensibilizētas reakcijas uz kokaīnu (Nestler, 2008), mūsu konstatējumi atklāj jaunu mehānismu šādu sensibilizētu reakciju ātrākai atjaunošanai pēc ilgstošas ​​atsaukšanas.

Mēs parādām, ka uzlabotā ΔFosB indukcija NAc ir saistīta ar hromatīna izmaiņām Fosbs gēnu, kas sagaidāms, ka tas veicinās lielāku indukciju. Tādējādi mēs parādām palielinātu Pol II saistīšanos ar gēna proksimālo promotoru un TSS reģioniem, kas ir pēc 4 nedēļu pārtraukšanas no iepriekšējas hroniskas kokaīna lietošanas. Šāda Pol II bagātināšana TSS tiek ātri zaudēta, ja tiek izaicināts kokaīns, un Fosbs indukcija, kas atbilst modelim šūnu kultūrā, kas apturēja Pol II izdalīšanos no TSS pēc gēnu aktivācijas (skatīt ievadu). Kokaīna izaicinājums arī izraisa strauju H3K9me2 - gēnu represiju zīmes - samazināšanos uz Fosbs veicinātājs. Pretstatā tam, mēs atklājām, ka nav ilgstošu vairāku transkripcijas faktoru vai to augšupejošo kināžu indukcijas, par kurām ir zināms, ka tās ir Fosbs kokaīna indukcija. Šie rezultāti apstiprina mūsu hipotēzi, ka pastiprināta ΔFosB indukcija NAc ir saistīta ar epigenetisko primēšanu. Fosbs gēnu, nevis ar augšupvērstu notikumu regulēšanu.

Tika iegūti ļoti atšķirīgi rezultāti par CPu. Nebija pierādījumu par Pol II apstāšanos Fosbs ar kokainu ārstētiem žurkām pirms kokaīna lietošanas, lai gan bija nelieli, bet nozīmīgi histona modifikācijas, kas atbilst gēnu represijām: palielinājās H3K27me3 saistīšanās un samazinājās H3K4me3 saistīšanās. Nav arī izmaiņas augšupejošajos transkripcijas faktoros vai kināzēs, kas atbilst samazinātajam Fosbs indukcija. Šie rezultāti liecina, ka pēc hroniskas kokaīna lietošanas epigenetiskās modifikācijas mazina Fosbs gēnu inducējamība CPu, atšķirībā no gruntēšanas, kas redzama NAc. Tomēr, lai gan šie efekti atsāk ΔFosB mRNS indukciju pēc atkārtotas iedarbības uz kokaīnu, ΔFosB proteīna uzkrāšanās nav zudusi. Šim paradoksam pamatā esošais mehānisms tagad prasa turpmāku izmeklēšanu.

Vispārīgi runājot, mūsu rezultāti atbalsta modeli, kurā izmaiņas hromatīna ainavā noteiktos gēnos, reaģējot uz hronisku kokaīna ievadīšanu, kalpo, lai sāktu vai izjauktu šos gēnus turpmākai indukcijai pēc atkārtotas zāļu iedarbības. Šādas hromatīna izmaiņas, kuras var uzskatīt par “epigenetiskām rētām”, tiktu izlaistas gēnu gēnu stabila stāvokļa analīzēs. Šādā veidā atkarības epigēnuma raksturojums sola atklāt jaunu informāciju par slimības molekulāro patoģenēzi, kuru var iegūt jaunu ārstēšanas metožu izstrādei.

Pateicības

Šo darbu atbalstīja Nacionālā narkotiku lietošanas institūta dotācijas.

Atsauces

  • Alibhai IN, Green TA, Potashkin JA, Nestler EJ. FosB un DeltafosB mRNS ekspresijas regulēšana: in vivo un in vitro pētījumi. Brain Res. 2007;1143: 22-33. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  • Bataille AR, Jeronimo C, Jacques PE, Laramee L, Fortin ME, Forest A, Bergeron M, Hanes SD, Robert F. Universāls RNS polimerāzes II CTD cikls ir apzīmēts ar kompleksiem starpspēļiem starp kināzi, fosfatāzes un izomerāzes enzīmiem gar gēniem. Mol šūna. 2012;45: 158-170. [PubMed]
  • Boudreau AC, Reimers JM, Milovanovic M, Wolf ME. Šūnu virsmas AMPA receptorus žurku kodolā palielinās kokaīna izdalīšanās laikā, bet pēc kokaīna izaicinājuma internalizējas saistībā ar mitogēna aktivēto proteīnu kināžu aktivācijas maiņu. J Neurosci. 2007;27: 10621-10635. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  • Boudreau AC, Ferrario CR, Glucksman MJ, Wolf ME. Signalizācijas ceļa pielāgojumi un jauni proteīna kināzes A substrāti, kas saistīti ar uzvedību ar kokaīnu. J Neirochem. 2009;110: 363-377. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  • Core LJ, Lis JT. Transkripcijas regulēšana, veicinot RNS polimerāzes II promotora-proksimālo pauzi. Zinātne. 2008;319: 1791-1792. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  • Covington HE, 3rd, Maze I, Sun H, Bomze HM, DeMaio KD, Wu EY, Dietz DM, Lobo MK, Ghose S, Mouzon E, Neve RL, Tamminga CA, Nestler EJ. Represīvo histonu metilēšanas loma kokaīna izraisītā neaizsargātībā pret stresu. Neirons. 2011;71: 656-670. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  • Freeman WM, Nader MA, Nader SH, Robertsons DJ, Gioia L, Mitchell SM, Daunais JB, Porrino LJ, Friedman DP, Vrana KE. Hroniskas kokaīna izraisītas pārmaiņas primāta kodolā, kas nav cilvēka primāts, uzkrāj gēnu ekspresiju. J Neirochem. 2001;77: 542-549. [PubMed]
  • Hyman SE, Malenka RC, Nestler EJ. Atkarības neironu mehānismi: ar atalgojumu saistītas mācīšanās un atmiņas loma. Annu Rev Neurosci. 2006;29: 565-598. [PubMed]
  • Kalivas PW, Volkow N, Seamans J. Nepārvaldāmā motivācija atkarībā: patoloģija prefrontāla-accumbens glutamāta transmisijā. Neirons. 2005;45: 647-650. [PubMed]
  • Lazo PS, Dorfman K, Noguchi T, Mattei MG, Bravo R. Struktūra un fosB gēna kartēšana. FosB samazina fosB veicinātāja darbību. Nucleic Acids Res. 1992;20: 343-350. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  • Lu L, Koya E, Zhai H, Hope BT, Shaham Y. ERK loma kokaīna atkarībā. Tendences neurosci. 2006;29: 695-703. [PubMed]
  • Mandelzys A, Gruda MA, Bravo R, Morgan JI. Nav pastāvīgi paaugstināta 37 kDa fos-saistītā antigēna un AP-1 līdzīgās DNS saistīšanās aktivitātes kātīnskābes apstrādātu fosB null peles smadzenēs. J Neurosci. 1997;17: 5407-5415. [PubMed]
  • Maze I, Nestler EJ. Atkarības epigenetiskā ainava. Ann NY akadēmijas Sci. 2011;1216: 99-113. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  • Maze I, Covington HE, 3rd, Dietz DM, LaPlant Q, Renthal W, Russo SJ, Mechanic M, Mouzon E, Neve RL, Haggarty SJ, Ren Y, Sampath SC, Hurd YL, Greengard P, Tarakhovsky A, Schaefer A, Nestler EJ. Histona metiltransferāzes G9a būtiska loma kokaīna izraisītā plastiskumā. Zinātne. 2010;327: 213-216. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  • Nechaevs S, Adelmans K. Promoderis-proksimālais Pol II: kad apstājas, tas paātrina lietas. Šūnu cikls. 2008;7: 1539-1544. [PubMed]
  • Nestler EJ. Pārskatīšana. Atkarības transkripcijas mehānismi: DeltaFosB loma. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 2008;363: 3245-3255. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  • Nye HE, Hope BT, Kelz MB, Iadarola M, Nestler EJ. Farmakoloģiskie pētījumi par hroniska FOS saistītā antigēna indukcijas ar kokainu regulēšanu striatumā un kodolskaldnē. J Pharmacol Exp Ther. 1995;275: 1671-1680. [PubMed]
  • Perrotti LI, Hadeishi Y, Ulery PG, Barrot M, Monteggia L, Duman RS, Nestler EJ. DeltaFosB indukcija ar smadzenēm saistītajās smadzeņu struktūrās pēc hroniska stresa. J Neurosci. 2004;24: 10594-10602. [PubMed]
  • Robinsons TE, Kolb B. Strukturālā plastiskums, kas saistīts ar ļaunprātīgas lietošanas narkotikām. Neirofarmakoloģija 47 Suppl. 2004;1: 33-46. [PubMed]
  • Robison AJ, Nestler EJ. Atkarības transkripcijas un epigenetiskie mehānismi. Nat Rev Neurosci. 2011;12: 623-637. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  • Saha, RN, Wissink, EM, Bailey, ER, Zhao, M, Fargo, DC, Hwang, JY, Daigle, KR, Fenn, JD, Adelman, K, Dudek, SM. Ātrās aktivitātes izraisītā Arc un citu IEG transkripcija balstās uz RNS polimerāzes II. Nat Neurosci. 2011;14: 848-856. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  • Shaham Y, Hope BT. Neuroadaptāciju loma recidīvā pret narkotiku meklēšanu. Nat Neurosci. 2005;8: 1437-1439. [PubMed]
  • Shen HW, Toda S, Moussawi K, Bouknight A, Zahm DS, Kalivas PW. Mainīts dendrīta mugurkaula plastiskums ar žurkām, kas izņemtas no kokaīna. J Neurosci. 2009;29: 2876-2884. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  • Valjent E, Corvol JC, C lappuses, Besson MJ, Maldonado R, Caboche J. Klātbūtne ar ekstracelulāro signālu regulēto kināzes kaskādi kokaīna atalgojuma īpašībām. J Neurosci. 2000;20: 8701-8709. [PubMed]
  • Zeitlinger J, Stark A, Kellis M, Hong JW, Nechaev S, Adelman K, Levine M, Young RA. RNS polimerāze, kas apstājas pie attīstības kontroles gēniem Drosophila melanogaster embrijā. Nat Genet. 2007;39: 1512-1516. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  • Vialou VF, Feng J, Robison AJ, Ferguson D, Scobie KN, Mazei-Robison M, Mouzon E, Nestler EJ. Lai panāktu ΔFosB kokaīna indukciju, abi ir nepieciešami seruma reakcijas faktora un cAMP atbildes elementa saistošie proteīni. J Neurosci. 2012 pieņemts. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]