ΔFosB pārmērīgas ekspresijas ietekme uz opioīdu un kanabinoīdu receptoru izraisīto signālu pārraidi kodolkrūtīs (2011)

Neirofarmakoloģija. 2011 Dec;61(8):1470-6. doi: 10.1016/j.neuropharm.2011.08.046.

Sim-Selley LJ, Cassidy MP, Sparta A, Zachariou V, Nestler EJ, Selley DE.

avots

Farmācijas un toksikoloģijas katedra un Narkotiku un alkohola izpētes institūts, Virdžīnijas Sadraudzības Universitātes Medicīnas skola, Ričmonds, VA 23298, ASV.

Anotācija

Stabils transkripcijas faktors ΔFosB tiek ierosināts kodolā accumbens (NAc), lietojot hronisku iedarbību uz vairākām ļaunprātīgas lietošanas vielām, un ΔFosB transgēnā ekspresija striatumā uzlabo morfīna un kokosa atalgojuma īpašības.e. Tomēr šo novērojumu mehāniskais pamats ir nepilnīgi saprotams. Mēs izmantojām bitransgēnu peles modeli ar inducējamu ΔFosB ekspresiju dopamīna D (1) receptoru / dinorfīnu saturoši striatāla neironi, lai noteiktu ΔFosB izpausmes ietekmi uz opioīdu un kanabinoīdu receptoru signalizāciju NAc. Rezultāti parādīja, ka opioīdu mediētā G-proteīna aktivitāte un adenililciklāzes inhibīcija tika uzlabota pelēm, kas izteica ΔFosB. Līdzīgi tika palielināta arī adenililciklāzes kappa opioīdu inhibīcija ΔFosB ekspresējošajās pelēs.. Turpretī kanabinoīdu receptoru izraisītā signalizācija neatšķīrās starp osFosB un kontroles pelēm pārmērīgi izteiktajām pelēm. TŠie rezultāti liecina, ka opioīdu un kanabinoīdu receptoru signalizācija ir diferencēti modulēta ar ΔFosB ekspresiju, un norāda, ka ΔFosB ekspresija var izraisīt dažas tās sekas, izmantojot pastiprinātu mu un kappa opioīdu receptoru signalizāciju NAc.

atslēgvārdi: G-proteīns, adenililciklāze, striatums

1. Ievads

Opioīdu receptorus un kannabinoīdu CB1 receptoriem (CB1R) ir neirobioloģiskie mērķi diviem plaši lietotiem zāļu klasēm, kas ietver morfīnu, heroīnu un recepšu opioīdus un marihuānu (Δ9-tetrahidrokanabinolu (THC)). Opioīdu un kanabinoīdu akūtās sekas ietekmē ar G-proteīnu saistītie receptori, kas galvenokārt aktivizē Gi / o olbaltumvielas un ražo pakārtoto efektoru atbildes reakcijas, piemēram, adenililciklāzes \ tBērni, 1991, Childers et al., 1992, Howlett et al., 2002). Δ motors, atmiņas traucējumi un psihoaktīvie efekti9-THC ražo CB1R (Huestis, et al., 2001, Zimmer et al., 1999), kas ir plaši izplatītas smadzenēs, ar augstu bazālo gangliju, hipokampu un smadzeņu līmeni (Herkenham et al., 1991). Lielākā daļa klīniski nozīmīgu un ļaunprātīgi izmantotu opioīdu medikamentu analgētisko un atalgojošo iedarbību galvenokārt izraisa mu opioīdu receptori (MOR) (Matthes et al., 1996), kas bagātinātas ar limbisko sistēmu un smadzeņu šūnu (Mansour et al., 1994). Mesolimbiskajai sistēmai, kas sastāv no dopamīnerģiskām projekcijām no ventrālā tegmentāla apgabala (VTA) līdz kodoliem (NAc), ir svarīga loma opioīdu un kanabinoīdu atalgojošajā iedarbībā (Bozarth un Wise, 1984, Vaccarino et al., 1985, Zangen et al., 2006), kā arī citas ļaunprātīgas narkotikas (Koob un Volkow, 2010). Turklāt endogēnas opioīdu un kannabinoīdu sistēmas ir iesaistītas vairāku psihoaktīvo narkotiku grupu atalgojuma iedarbībā (Maldonado et al., 2006, Trigo et al., 2010). Tādējādi ir svarīgi izskaidrot mehānismus, ar kuriem opioīdi un CB1R signalizācija tiek regulēta NAc.

Galvenais jautājums narkotiku lietošanas jomā ir bijis identificēt olbaltumvielas, kas mijiedarbojas ar psihoaktīvo narkotiku pāreju no akūtas uz ilgtermiņa. AP-1 transkripcijas faktors ΔFosB ir īpaši interesants, jo tas ir stabils saīsināts splice variants, kas ir fosb gēnu, kas uzkrājas, atkārtoti iedarbojoties uz ļaunprātīgas izmantošanas vai dabisku atlīdzību \ tMcClung et al., 2004, Nestler, 2008, Nestler et al., 1999). Mēs esam konstatējuši, ka ΔFosB tiek ierosināts smadzenēs pēc atkārtotas morfīna iedarbības, Δ9-THC, kokaīns vai etanols, katram medikamentam rodas unikāls ΔFosB ekspresijas reģionālais modelis (Perrotti et al., 2008). Konsekventi konstatējot narkotikas, tika konstatēts, ka ΔFosB bija ļoti inducēts striatumā, kur visas četras zāles izraisīja ΔFosB NAc kodolā un visi, izņemot ΔF9-THC nozīmīgi izraisīja izteiksmi NAc apvalkā un caudāta-putamenā.

Farmakoloģiskie pētījumi parādīja, ka dopamīna D vienlaicīga lietošana1 receptoru (D1R) antagonists SCH 23390 bloķēja ΔFosB indukciju NAc un caudāta-putamenā pēc periodiskas kokaīna vai morfīna ievadīšanas, kas liecina par D potenciālo nozīmi.1R ekspresējošie neironi (Muller un Unterwald, 2005, Nye et al., 1995). ΔFosB indukcijas ietekme uz zāļu mediēto uzvedību ir pētīta, izmantojot bitransgēnu peles, kas ekspresē ΔFosB specifiskās NAc un dorsālās striatuma neironu populācijās (Chen et al., 1998). Peles, kas ekspresē ΔFosB dinamorfīnā / D1R pozitīvie neironi NAc un dorsālā striatumā (līnija 11A) uzrāda mainīgas reakcijas pret ļaunprātīgu narkotiku lietošanu, jo īpaši paaugstinātu jutīgumu pret kokaīna vai morfīna iedarbību (Colby et al., 2003, Kelz et al., 1999, Zachariou et al., 2006). Šīs izmaiņas notika, ja netika mainītas MOR vai dažādu G-proteīnu apakšvienību koncentrācijas. Tomēr dinamofīna mRNS līmenis tika samazināts ΔFosB ekspresējošo peles NAc (Zachariou et al., 2006), kas liecina, ka viens FosB mērķis ir gēns, kas kodē endogēno opioīdu peptīdu. ΔFosB indukcija var izraisīt arī uzvedības izmaiņas, regulējot receptoru signalizāciju NAc, bet šī iespēja nav pētīta. Tāpēc šajos pētījumos tika izmantots bitransgēnu peles modelis, lai noteiktu, vai ΔFosB pārmērīga ekspresija dinamorfīnā / D \ t1R saturošas striatāla neironi maina MOR-mediēto G-proteīnu aktivitāti un MOR- un KOR-mediēto adenililciklāzes inhibīciju NAc. ΔFosB ietekme uz CB1R-mediēta G-proteīna aktivitāte tika novērtēta arī tāpēc, ka Δ9-THC ievadīšana izraisa ΔFosB NAc (Perrotti et al., 2008) un ir zināms, ka endokannabinoīdu sistēma regulē smadzeņu atalgojuma shēmas (\ tGardner, 2005, Maldonado et al., 2006), bet ΔFosB ietekme uz endokannabinoīdu sistēmu nav pētīta.

2. Materiāli un metodes

2.1. Reaģenti

[35S] GTPyS (1250 Ci / mmol), [a-32P] ATP (800 Ci / mmol) un [3H] cAMP (26.4 Ci / mmol) iegādājās no PerkinElmer (Shelton, CT). ATP, GTP, IKP, cAMP, liellopu seruma albumīns, kreatīna fosfokināze, papaverīns, imidazols un WIN-55212-2 tika iegādāti no Sigma Aldrich (Sentluisa, MO). GTPyS iegādājās no Roche Diagnostic Corporation (Čikāga, IL). DAMGO nodrošināja Narkomānijas apkarošanas valsts institūta Narkotiku piegādes programma (Rockville, MD). Econo-1 scintilācijas šķidrums tika iegūts no Fisher Scientific (Norcross, GA). Ekolīta scintilācijas šķidrums tika iegūts no ICN (Costa Mesa, CA). Visas pārējās ķīmiskās vielas iegūst no Sigma Aldrich vai Fisher Scientific.

2.2. Peles

Tika izveidoti vīriešu bituģenēzes peles, kas iegūtas no NSE-tTA (līnija A) × TetOp-AFosB (līnija 11), kā aprakstīts Kelz et al. (Kelz et al., 1999). Bitransgēnās peles tika veidotas un audzētas doksiciklīnam (100 µg dzeramajā ūdenī), lai nomāktu transgēnu ekspresiju. 8 nedēļu vecumā doksiciklīns tika izlaists no ūdens uz pusi peles, lai ļautu transgēnu ekspresiju, bet atlikušās peles tika saglabātas doksiciklīnā, lai nomāktu transgēnu. Smadzenes tika savāktas 8 nedēļas vēlāk - laiks, kad ΔFosB transkripcijas efekti ir maksimāli (McClung un Nestler, 2003). Tika izmantota otra transgēnu peles līnija, kurā Δc-Jun, dominējošais negatīvais c-Jun antagonists, ir izteikts D \ t1R / dynorfīns un D2Striatuma, hipokampusa un parietālās garozas R / enkefalīna šūnas (Peakman et al., 2003). C-Jun un saistītās jūnija ģimenes olbaltumvielas dimerizējas ar Fos ģimenes proteīniem un saistās ar mērķa gēnu AP-1 vietu, lai regulētu transkripciju. Tomēr c-Jun N-gala saīsināšana (Δc-Jun) padara kompleksu transkripcionāli neaktīvu un spēj traucēt aktīvo AP-1 kompleksu DNS saistīšanu. Vīriešu bituģenēzes peles, kas iegūtas no NSE-tTA (līnija A) × TetOp-FLAG-Δc-Jun (E līnija), tika radītas, kā aprakstīts Peakman et al. (Peakman et al., 2003). Bitransgēnās peles tika veidotas un audzētas doksiciklīnam (100 µg dzeramajā ūdenī), lai nomāktu transgēnu ekspresiju. Kucēni tika atdalīti 3 nedēļās, genotipizēti un sadalīti grupās, ar pusēm saglabājās doksiciklīnu saturošs ūdens un puse no parastā dzeramā ūdens, lai izraisītu FLAG-Δc-Jun izteiksmi. Smadzenes tika savāktas 6 nedēļas vēlāk - laiks, kad tika izmērīti maksimālie FLAG-Δc-Jun līmeņi (Peakman et al., 2003). Visas dzīvnieku procedūras tika veiktas saskaņā ar Valsts Veselības rokasgrāmatu laboratorijas dzīvnieku kopšanai un lietošanai.

2.3. Membrānas sagatavošana

Smadzenes tika uzglabātas –80 ° C temperatūrā līdz pārbaudes dienai. Pirms testa katras smadzenes tika atkausētas, un NAc tika atdalīts uz ledus. Katrs paraugs tika homogenizēts 50 mM Tris-HCl, 3 mM MgCl2, 1 mM EGTA, pH 7.4 (membrānas buferis) ar 20 sitieniem no stikla homogenizatora pie 4 ° C. Homogenātu centrifugēja pie 48,000 × g 4 ° C temperatūrā 10 min, atkārtoti suspendē membrānas buferšķīdumā, atkal centrifugē pie 48,000 × g 4 ° C temperatūrā 10 min un atkārtoti suspendē 50 mM Tris-HCl, 3 mM MgCl2, 0.2 mM EGTA, 100 mM NaCl, pH 7.4 (testa buferis). Proteīnu līmenis tika noteikts ar Bradfordas metodi (Bradforda, 1976) kā standartu lieto liellopu seruma albumīnu (BSA).

2.4. Agonistu stimulēts [35S] GTPγS iesiešana

Membrānas 10 minūtes iepriekš inkubēja 30 ° C temperatūrā ar adenozīna deamināzi (3 mU / ml) testa buferī. Pēc tam membrānas (5 – 10 µg proteīns) 2 h inkubēja 30 ° C temperatūrā testa buferī, kas satur 0.1% (w / v) BSA, 0.1 nM [35S] GTPyS, 30 µM ​​IKP un adenozīna deamināze (3 mU / ml) ar un bez atbilstošas ​​DAMGO vai WIN55,212-2 koncentrācijas. Nespecifiska saistība tika mērīta ar 20 µM ​​GTPyS. Inkubācija tika pārtraukta, filtrējot caur GF / B stikla šķiedras filtriem, kam sekoja 3 mazgāšana ar 3 ml ledus aukstu 50 mM Tris-HCl, pH 7.4. Saistītā radioaktivitāte tika noteikta, izmantojot šķidruma scintilācijas spektrofotometriju pēc filtru nakts ekstrahēšanas Econo-1 scintilācijas šķidrumā.

2.5. Adenililciklāzes tests

Membrānas (5 – 25 µg proteīns) iepriekš inkubēja ar adenozīna deamināzi, kā aprakstīts iepriekš, pēc tam 15 min inkubēja 30 ° C temperatūrā 1µM forskolīna klātbūtnē vai bez tā, ar vai bez DAMGO, U50,488H vai WIN55,212-2. 50 µM ​​ATP, [α-32P] ATP (1.5 µCi), 0.2 mM DTT, 0.1% (w / v) BSA, 50 µM ​​cikliskā AMP, 50 µM ​​GTP, 0.2 mM papaverīns, 5 mM fosfokreatīns, 20 vienības / ml kreatīna fosfokināzes un adenozīna deamināze (3 mU / ml) galīgajā 100 µl tilpumā. Šajos apstākļos kopā [α-32P] cAMP atgūts parasti bija mazāks par 1% no kopējā pievienotā daudzuma [α-32P] ATP katrā paraugā. Reakcija tika pārtraukta, vārot 3 min un [32P] Cikliskā AMP tika izolēta ar Salomonas divkāršo kolonnu (Dowex un alumīnija oksīdu) metodi (Salomons, 1979). [3H] cAMP (10,000 dpm) tika pievienots katrai caurulei pirms kolonnas hromatogrāfijas kā iekšēja standarta. Radioaktivitāte tika noteikta ar šķidruma scintilācijas spektrofotometriju (efektivitāte 45%. \ T 3H) pēc 4.5 ml eluāta izšķīdināšanas 14.5 ml ekolīta scintilācijas šķidruma.

2.6. Datu analīze

Ja vien nav norādīts citādi, dati tiek ziņoti kā vidējās vērtības ± SE 4 – 8 atsevišķiem eksperimentiem, no kuriem katrs tika veikts trīs eksemplāros. Tīkls stimulēts [35S] GTPγS saistība tiek aprēķināta kā agonistu stimulēta saistīšanās mīnus bazālā saistīšanās. Neto forskolīna stimulēta adenililciklāzes aktivitāte ir definēta kā forskolīna stimulēta aktivitāte - bazālā aktivitāte (pmol / mg / min). Forskolīna stimulētās adenililciklāzes aktivitātes inhibīcijas procents ir definēts kā (neto forskolīna stimulēta aktivitāte, ja nav agonistu - neto forskolīna stimulēta aktivitāte agonista / neto forskolīna stimulētas aktivitātes klātbūtnē, ja nav agonistu) × 100. Visas līknes un statistiskās analīzes tika veiktas, izmantojot Prism 4.0c (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA). Koncentrācijas-efekta līknes tika analizētas ar iteratīvu nelineāru regresiju, lai iegūtu EK50 un Emaks vērtības. Koncentrācijas un ietekmes datu statistiskā nozīmība tika noteikta ar divvirzienu dispersijas analīzi (ANOVA), izmantojot galvenos faktorus, izmantojot agonistu devu un gēnu indukciju (ieslēgtu vai izslēgtu). Līknes piemērotības vērtību statistiskā nozīmība (Emaks vai EK50) tika noteikts ar nesapārotu studentu t-testu, izmantojot Welch korekciju vai kvadrātsaknes datu transformāciju, ja nepieciešams, lai labotu nevienādās dispersijas (kas noteiktas ar F-testu) EK50 vērtības.

3. Rezultāti

3.1. ΔFosB ekspresijas ietekme uz opioīdu un kanabinoīdu receptoru izraisītu G-proteīnu aktivāciju

Lai noteiktu, vai MOR- vai CB1R-mediētā G-proteīna aktivācija tika mainīta, inducējama ΔFosB transgēnā ekspresija NAc, agonistu stimulēta [35S] GTPγS saistīšanās tika pārbaudīta izolētās membrānās, kas sagatavotas no šī bitransgēnu peles reģiona, kas nosacīti ekspresēja (ΔFosB on) vai neizpauž ΔFosB transgēnu. MOR selektīvā enkefalīna analoga DAMGO tika izmantota, lai aktivizētu MOR, un kanabinoīda aminoalkilindols WIN55,212-2 tika izmantots, lai aktivizētu CB1R. Šiem ligandiem iepriekš bija pierādīts, ka tie ir pilni agonisti pie MOR un CB1R, attiecīgi (Breivogels uc, 1998, Selley et al., 1997). Nebija iespējams pārbaudīt KOR-mediētu G-proteīnu aktivitāti, jo signāls ir pārāk zems grauzēju smadzenēs (Childers et al., 1998). Rezultāti parādīja, ka gan DAMGO, gan WIN55,122-2 veicina koncentrācijas atkarīgu G-proteīna aktivitātes stimulāciju NAc no ΔFosB off un ΔFosB uz pelēm (Skaitlis 1). DAMGO stimulētajai aktivitātei (Attēls 1A), koncentrācijas un ietekmes datu divvirzienu ANOVA atklāja būtiskas galvenās ΔFosB statusa (p <0.0001, F = 22.12, df = 1) un DAMGO koncentrācijas (p <0.0001, F = 29.65, df = 5) galvenās sekas bez nozīmīga mijiedarbība (p = 0.857, F = 0.387, df = 5). Koncentrācijas-ietekmes līkņu nelineārā regresijas analīze atklāja ievērojami lielāku DAMGO Emaks vērtība ΔFosB uz pelēm (Emaks = 73 ± 5.2% stimulācija) attiecībā pret ΔFosB pie pelēm (Emaks = 56 ± 4.1% stimulācija; p <0.05 atšķiras no ΔFosB pelēm pēc Studenta t-testa). DAMGO EC50 ΔFosB uz osFosB un pelēm nav atšķirīgas vērtības (302 ± 72 nM pret 212 ± 56 nM, attiecīgi p = 0.346).

Skaitlis 1 

ΔFosB izpausmes ietekme uz agonistu stimulētu [35S] GTPγS saistošs NAc. Membrānas no AFosB ekspresējošām (ΔFosB on) vai kontroles (ΔFosB off) pelēm pārbaudīja, kā aprakstīts metodēs, kurās izmanto dažādas koncentrācijas ...

Atšķirībā no rezultātiem, kas iegūti ar MOR agonistu DAMGO, ar kannabinoīdu agonistu WIN55,212-2 netika novērotas AFosB statusa atkarīgas G-proteīna aktivācijas atšķirības.Attēls 1B). WIN55,212-2 koncentrācijas un ietekmes datu divvirzienu ANOVA atklāja būtisku WIN55,212-2 koncentrācijas galveno efektu (p <0.0001, F = 112.4, df = 7), bet ne ΔFosB statusu (p = 0.172) , F = 1.90, df = 1), un mijiedarbība nenotika (p = 0.930, F = 0.346, df = 7). Līdzīgi, ΔFosB statuss neietekmēja WIN55,212-2 Emaks vērtības (103 ± 6% pret 108 ± 8% stimulāciju ΔFosB un pelēm, p = 0.813 pēc studenta t-testa) vai EC50 vērtības (103 ± 20 nM, salīdzinot ar 170 ± 23 nM ΔFosB on un off pelēm, attiecīgi p = 0.123).

Pamatojoties uz līkņu formu un to, ka mūsu iepriekšējie pētījumi ir parādījuši divfāzu WIN55,212-2 koncentrācijas-iedarbības līknes smadzenēs (Breivogels uc, 1999, Breivogels uc, 1998), WIN55,212-2 līknes arī tika analizētas, izmantojot divu vietu modeli. Vidējo rādītāju analīze liecināja par nelielu piemērotības labuma uzlabošanos, izmantojot divu vietu modeli (R2 = 0.933 un 0.914, kvadrātu summa = 3644 un 5463 ΔFosB on un off pelēm, attiecīgi), salīdzinot ar vienas vietas modeli (R2 = 0.891 un 0.879, kvadrātu summa = 6561 un 6628 ΔFosB on un off pelēm, attiecīgi). Tomēr nav konstatētas būtiskas atšķirības starp ΔFosB on un off pelēm ne E, nemaks vai EK50 augsto vai zemo potenciālu vietu vērtības (Papildu tabula 1), lai gan bija tendence uz zemāku EK50 lielā spēka vietā pelēm ar ΔFosB uz (EC50augsts = 28.0 ± 10.6 nM), salīdzinot ar ΔFosB off (EC50augsts = 71.5 ± 20.2 nM; p = 0.094). Turklāt ΔFosB statuss neietekmēja bazālo [35S] GTPγS saistīšanās NAc membrānās (253 ± 14 pret 226 ± 14 fmol / mg attiecīgi ΔFosB un pelēm, p = 0.188). Šie dati liecina, ka AFosB inducējamā transgēnā ekspresija pelēm NAc palielināja MOR-mediētu G-proteīnu aktivāciju, būtiski neietekmējot CB1R-mediēta vai bazāla G-proteīna aktivitāte.

3.2. ΔFosB ietekme uz opioīdu un kanabinoīdu receptoru izraisītu adenililciklāzes inhibīciju \ t

Novērtēt ΔFosB inducējamās transgēnās ekspresijas ietekmi uz MOR un CB pakārtotās efektora aktivitātes modulāciju1R, 1 µM ​​forskolīna stimulēta adenililciklāzes aktivitātes inhibīcija tika pētīta NAc membrānās. Papildus MOR un CB1R-mediēta adenililciklāzes aktivitātes inhibīcija, KOR aktivitātes ietekme tika pētīta arī ar KOR-selektīvo pilno agonistu U50,488 (Zhu et al., 1997), jo iepriekšējie rezultāti parādīja, ka dinorfīna mRNS bija ΔFosB mērķis bitransgēnu modelī (Zachariou et al., 2006). Rezultāti parādīja, ka DAMGO, U50,488 un WIN55,212-2 katrs radīja adenililciklāzes aktivitātes koncentrācijas atkarību gan ΔFosB, gan ΔFosB uz pelēm (Skaitlis 2). DAMGO koncentrācijas un ietekmes datu divvirzienu ANOVA (Attēls 2A) atklāja būtiskus galvenos ΔFosB statusa (p = 0.0012, F = 11.34, df = 1) un DAMGO koncentrācijas (p <0.0001, F = 29.61, df = 6) efektus, bet nozīmīgas mijiedarbības (p = 0.441, F = 0.986) , df = 6). DAMGO koncentrācijas-ietekmes līkņu nelineārā regresijas analīze atklāja ievērojami zemāku DAMGO EC50 vērtība ΔFosB pelēm (101 ± 11 nM), salīdzinot ar ΔFosB ārpus pelēm (510 ± 182 nM, p <0.05 pēc studenta t-testa). Tomēr būtiskas atšķirības DAMGO E nebijamaks vērtības (20.9 ± 1.26% pret 19.8 ± 1.27% inhibīciju ΔFosB on un off pelēm, p = 0.534).

Skaitlis 2 

ΔFosB ekspresijas ietekme uz adenililciklāzes aktivitātes inhibīciju NAc. Membrānas no AFosB ekspresējošām (ΔFosB on) vai kontroles (AFosB off) pelēm analizēja, kā aprakstīts metodēs 1 µM ​​klātbūtnē. ...

KOR-mediēta adenililciklāzes inhibīcija atšķiras arī kā ΔFosB inducējamās transgēnu ekspresijas funkcija (Attēls 2B). U50,488 0.0006 koncentrācijas un ietekmes datu divvirzienu ANOVA parādīja būtiskas galvenās ΔFosB statusa (p = 14.53, F = 1, df = 50,488) un U0.0001 26.48 koncentrācijas (p <3, F = 0.833, df = 0.289) galvenās sekas , bez būtiskas mijiedarbības (p = 3, F = 50,488, df = XNUMX). Koncentrācijas-ietekmes līkņu nelineārā regresijas analīze atklāja lielāku UXNUMX XNUMX Emaks vērtība ΔFosB pelēm (18.3 ± 1.14% inhibīcija), salīdzinot ar ΔFosB izslēgtajām pelēm (12.5 ± 2.03% inhibīcija; p <0.05 atšķiras no ΔFosB pēc Studenta t-testa), bez būtiskas atšķirības U50,488 XNUMX EC50 vērtības (310 ± 172 nM, salīdzinot ar 225 ± 48 nM ΔFosB on un off pelēm, attiecīgi p = 0.324).

Atšķirībā no MOR un KOR novērotajiem efektiem, kaņabinoīdu agonists WIN55212-2 neuzrādīja nozīmīgu inducējamas transgēnu ΔFosB ekspresijas ietekmi uz adenililciklāzes inhibīciju.Attēls 2C). WIN55,212-2 koncentrācijas-ietekmes datu divvirzienu ANOVA parādīja nozīmīgu zāļu koncentrācijas efektu (p <0.0001, F = 23.6, df = 2), bet ne ar ΔFosB statusu (p = 0.735, F = 0.118, df = 1), kā arī nebija nozīmīgas mijiedarbības (p = 0.714, F = 0.343, df = 2). Turklāt, ja nebija agonista, ΔFosB statuss neietekmēja bazālo vai forskolīna stimulēto adenililciklazes aktivitāti. Bāzes adenililciklāzes aktivitāte bija 491 ± 35 pmol / mg / min ΔFosB pelēm, salīdzinot ar 546 ± 44 ΔFosB izslēgtām pelēm (p = 0.346 pēc Studenta t-testa). Tāpat adenililciklāzes aktivitāte 1 µM forskolīna klātbūtnē bija 2244 ± 163 pmol / mg / min ΔFosB pelēm, salīdzinot ar 2372 ± 138 pmol / mg / min ΔFosB pie pelēm (p = 0.555).

3.3. ΔcJun ietekme uz opioīdu un kanabinoīdu receptoru izraisītu adenililciklāzes inhibīciju \ t

Tā kā AFosB pastiprinātā transgēnā ekspresija palielināja inhibējošā signāla transdukciju no MOR un KOR uz adenililciklāzi NAc, bija svarīgi noteikt, vai dominējošais negatīvais ΔFosB-mediētās transkripcijas inhibitors modulētu opioīdu receptoru signalizāciju pretējā veidā. Lai atrisinātu šo jautājumu, forskolīna stimulētas adenililciklāzes aktivitātes inhibēšanu ar DAMGO un U50,488 pētīja membrānās, kas sagatavotas no bitransgēnu pelēm, kas nosacīti izteica ΔcJun. Rezultāti neuzrādīja ΔcJun ekspresijas nozīmīgu ietekmi uz MOR vai KOR adenililciklāzes aktivitātes inhibīciju (Skaitlis 3). DAMGO koncentrācijas-ietekmes līkņu divvirzienu ANOVA uzrādīja nozīmīgu DAMGO koncentrācijas galveno efektu (p <0.0001, F = 20.26, df = 6), bet ne ar ΔcJun statusu (p = 0.840, F = 0.041, df = 1) un nebija nozīmīgas mijiedarbības (p = 0.982, F = 0.176, df = 6). Tāpat nebija būtiskas atšķirības Emaks vai EK50 vērtības starp pelēm ar ΔcJun on (Emaks = 23.6 ± 2.6%; EK50 = 304 ± 43 nM) vai ΔcJun off (Emaks = 26.1 ± 2.5%, p = 0.508; EK50 = 611 ± 176 nM, p = 0.129). Līdzīgi rezultāti tika novēroti ar U50,488 0.0001, tātad koncentrācijas-ietekmes līkņu divvirzienu ANOVA uzrādīja ievērojamu koncentrācijas efektu (p <11.94, F = 6, df = 0.127), bet ne ar ΔcJun statusu (p = 2.391 , F = 1, df = 0.978), un nozīmīgas mijiedarbības nebija (p = 0.190, F = 6, df = XNUMX). Tāpat nebija būtisku atšķirību Emaks vai EK50 vērtības starp pelēm ar ΔcJun on (Emaks = 14.8 ± 2.9%; EK50 = 211 ± 81 nM) vai izslēgts (Emaks = 16.7 ± 1.8%, p = 0.597; EK50 = 360 ± 151 nM, p = 0.411).

Skaitlis 3 

ΔcJun ekspresijas ietekme uz adenililciklāzes aktivitātes inhibīciju NAc. Membrānas no AJJun ekspresējošām (ΔcJun on) vai kontroles (ΔcJun off) pelēm inkubēja DAMGO (A), U50,488H (B) vai WIN55,212-2 klātbūtnē. ...

ΔcJun ekspresija arī būtiski neietekmēja adenililciklāzes inhibīciju NAc, ko veic kanabinoīdu agonists. WIN55,212-2 koncentrācijas efekta līkņu divvirzienu ANOVA uzrādīja būtisku WIN55,212-2 koncentrācijas galveno efektu (p <0.0001, F = 15.53, df = 6), bet ne genotipu (p = 0.066, F = 3.472, df = 1) un nozīmīgas mijiedarbības nebija (p = 0.973, F = 0.208, df = 6). Tāpat arī WIN55,212-2 E nebija būtisku atšķirībumaks vērtības (13.0 ± 2.3% un 13.6 ± 0.9% inhibīcija ΔcJun attiecīgi pret pelēm, p = 0.821) un vai EC50 vērtības (208 ± 120 nM un 417 ± 130 nM attiecīgi ΔcJun, salīdzinot ar pelēm, p = 0.270). Tādējādi, lai gan bija neliela tendence samazināt WIN55,212-2 potenciālu pelēm, kas ekspresēja ΔJJun, transgēns būtiski nemainīja adenililciklāzes kanabinoīdu inhibīciju. Turklāt ΔcJun statusa ietekme uz bazālo vai forskolīna stimulēto adenililciklāzes aktivitāti netika konstatēta. Bāziskā adenililciklāzes aktivitāte bija 1095 ± 71 pmol / mg / min un 1007 ± 77 pmol / mg / min (p = 0.403) pelēm ar ΔcJun ieslēgšanu vai izslēgšanu. Adenililciklāzes aktivitāte, ko stimulēja 1 µM ​​forskolīns, bija 4185 ± 293 pmol / mg / min, salīdzinot ar 4032 ± 273 pmol / mg / min (p = 0.706) pelēm ar ΔcJun ieslēgšanu vai izslēgšanu.

3.4. Diskusija

Šī pētījuma rezultāti atklāja pastiprinātu MOR-mediētu G-proteīnu aktivāciju un adenililciklāzes inhibīciju pelēm, kurām ir inducējama ΔFosB ekspresija dinorfīnā / D, NAc.1R satur neironus. ĀFosB ekspresējošo pelēm NAc palielināja arī KOR-mediēto adenililciklāzes aktivitātes inhibīciju, kas liecina, ka ΔFosB regulē endogēno opioīdu sistēmu NAc. DAMGO Emaks vērtība bija lielāka MOR stimulētajai [35S] GTPγS saistošs un tā EK50 adenililciklāzes inhibīcijas gadījumā ≥FosB pārmērīgi ekspresējošās pelēs, salīdzinot ar kontroles pelēm. Šie atklājumi liecina par iespēju, ka receptoru rezerve efektoru modulācijai, bet ne G-proteīna aktivācija pārbaudītajos testa apstākļos. FosB ekspresija liecina, ka KOR agonista maksimālā adenililciklāzes inhibīcija ietekmēja zemu receptoru rezervi KOR-mediētas atbildes reakcijai, kas atbilst zemiem KOR saistīšanās vietu līmeņiem peles smadzenēs (Unterwald et al., 1991). Turpretim CB1ΔFosB ekspresija neietekmēja R-mediēto G-proteīnu aktivitāti un adenililciklāzes inhibīciju, norādot, ka opioīdu un kanabinoīdu sistēmas atšķiras no atbildes uz ΔFosB šajās NAc neironās.

ΔFosB ietekme uz opioīdu receptoru izraisīto signalizāciju atbilst mūsu iepriekšējam ziņojumam, ka ΔFosB ekspresija striatumā izmainīja akūtas un hroniskas morfīna iedarbības (Zachariou et al., 2006). Viens no šiem pētījumiem bija pelēm ar ΔFosB transgēnu ekspresiju dinamorīnā / D1R striatāla neironi bija jutīgāki pret morfīnu vietā, kas bija kondicionēšanā nekā kontroles. Turklāt šo efektu atdarināja ΔFosB vīrusu mediēta izpausme, specifisku injekciju ievadot NAc. Šie novērojumi saskan ar pašreizējiem rezultātiem, kas liecina par pastiprinātu MOR signalizāciju NAc.

Mēs iepriekš identificējām gēnu kodējumu dinorfīns kā AFosB mērķis un ierosināja, ka samazināts dinorfīns atbilstu morfīna paaugstinātajām atalgojuma īpašībām ΔFosB bitransgēnās pelēs (Zachariou et al., 2006). Šie rezultāti rāda, ka ΔFosB ekspresējošās pelēs palielinās adenililciklāzes KOR-mediēta inhibīcija NAc, kas varētu liecināt par kompensējošu KOR jutības palielināšanos pēc samazināta dinamorfīna. Iepriekšējie pētījumi ir parādījuši, ka KOR tika regulēta dažās prodynorfīna knockout pelēm, ieskaitot NAc, dažos smadzeņu reģionos.Clarke et al., 2003).

Atšķirībā no ΔFosB, ΔJJJ, kas ir dominējošais negatīvs ΔFosB saistošā partnera cJun mutants, transgēnā ekspresija nemainīja MOR vai KOR agonistu adenililciklāzes inhibīciju. Šie rezultāti liecina, ka ΔFosB ekspresijas bāzes līmenis, kas ir salīdzinoši zems, neietekmē nozīmīgu lomu opioīdu receptoru signalizācijas uzturēšanā šādā signāla pārraides līmenī NAc. Tas, ka morfīna kondicionētais atalgojuma efekts tika samazināts par ΔcJun izteiksmi mūsu iepriekšējā pētījumā (Zachariou et al., 2006) vai nu ierosina, ka ΔFosB morfīna indukcija kondicionēšanas procedūras laikā ir svarīga, lai regulētu uzvedības reakcijas uz zālēm vai ka ΔFosB transkripcijas efekti, kas neietekmē opioīdu receptoru proksimālo signalizāciju, var ietekmēt opioīdu atlīdzību. Jebkurā gadījumā šī pētījuma rezultāti skaidri parāda, ka: kad ΔFosB ekspresija ir paaugstināta virs bazālā līmeņa striatāla dinamorīnā / D1R-ekspresējošie neironi, ir spēcīgs MOR un KOR savienojuma pieaugums pret adenililciklāzes inhibīciju NAc.

Mehānismi, ar kuriem MOR- un KOR-starpniecības signāli tiek pastiprināti ar ΔFosB pārmērīgu ekspresiju, ir neskaidri, bet mēs iepriekš esam parādījuši, ka MOR līmeņi, ko novērtē [3H] naloksona saistīšanās ΔFosB NAc atšķiras pret pelēm (Zachariou et al., 2006). Tajā pašā pētījumā konstatēts, ka Gαi1 un 2 proteīna līmenis šajā reģionā netika ietekmēts ar ΔFosB ekspresiju. Tomēr iepriekšējās gēnu ekspresijas masīvu analīzes parādīja, ka Gαo mRNS tika palielināts ΔFosB NAc ar pelēm (McClung un Nestler, 2003). Turpmākajos pētījumos būs interesanti visaptveroši izpētīt transgēnās ΔFosB ekspresijas ietekmi uz G-olbaltumvielu apakšvienības ekspresiju, kā arī daudzu G-proteīna modulējošo proteīnu ekspresiju.

Interesanti, ka ΔFosB ekspresija nepalielina CB1R-mediētā signalizācija NAc. Ir iespējams, ka izmaiņas CB1R signalizācija notiek atsevišķā neironu populācijā, kas ir aizklāta visā NAc preparātā. Piemēram, Δ ievadīšana9- THC ievērojami inducēja ΔFosB NAc kodolā, bet ne apvalkā (Perrotti et al., 2008). Indeed, ir pierādīts, ka izaicinājums ar Δ9-THC pēc atkārtotas Δ ievadīšanas9-THC palielināja dopamīna izdalīšanos NAc kodolā, bet samazināja izdalīšanos čaulā (Cadoni et al., 2008). Svarīgi arī atzīmēt, ka bitransgēnu peles 11A līnija ekspresē ΔFosB tikai dinamorfīnā / D1R pozitīvs vidēja spriedzes neirons, bet CB1R ir izteikti gan dinorfīnā / D1R un enkefalīns / D2R pozitīvi striatāla neironi (Hohmann un Herkenham, 2000), kā arī par kortikālo aferentu termināliem (Robbe et al., 2001). FosB-mediētās transkripcijas dominējošā negatīvā regulatora ΔcJun ekspresija arī būtiski neietekmēja kanabinoīdu receptoru signalizāciju, lai gan ΔcJun ir inducējami izteikts abos D1 un D2- šajās pelēs vidēji smailu neironu populācijas;Peakman et al., 2003). Tomēr ir iespējams, ka bazālā ΔFosB ekspresija ir pietiekami zema, ka ΔcJun neietekmēs receptoru signalizāciju, kā to liecina rezultāti ar MOR un KOR. Ir arī iespējams, ka CB1R signalizācija ir nedaudz pastiprināta ar bazālo ΔFosB ekspresiju tā, ka turpmāka ΔFosB izteiksmes palielināšana vai tās darbību bloķēšana ar ΔcJun bija tikai neliela iedarbība, kas nesasniedza statistiskās nozīmības līmeni. Netiešo atbalstu šai interpretācijai var redzēt, salīdzinot WIN55,212-2 EC50 vērtības starp pelēm, kas ekspresē ΔcJun pret ΔFosB. WIN55,212-2 EK attiecība50 adenililciklāzes inhibīcijas vērtība pelēm ar inducētu ΔcJun ekspresiju savai EK50 G-olbaltumvielu aktivācijas vērtība pelēm ar inducētu ΔFosB ekspresiju bija 4.0, bet tāda pati attiecība pelēm, neinducējot nevienu transgēnu, bija 1.2.

Alternatīvi, kannabinoīdi var izraisīt ΔFosB ekspresiju bez tiešas ietekmes uz CB1R signalizācija. Šajā scenārijā kanabinoīdi varētu modulēt reakciju uz citu zāļu psihoaktīvo iedarbību, izmantojot ΔFosB-mediēto transkripcijas regulējumu. In faktiski Δ ievadīšana9-THC rada savstarpēju sensibilizāciju pret opioīdiem un amfetamīnu (\ tCadoni et al., 2001, Lamarque et al., 2001), saskaņā ar šo hipotēzi. Turklāt tika ziņots, ka atkārtota kanabinoīdu agonista CP55,940 lietošana palielina MOR-mediēto G-proteīnu aktivāciju NAc, līdzīgi kā pelēm, kas šajā pētījumā inducēja ΔFosB.Vigano et al., 2005). ΔFosB izpausmes ietekme uz Δ9-THC mediēta uzvedība nav novērtēta, bet pašreizējie rezultāti neizslēdz mijiedarbību. Šī un mūsu iepriekšējā pētījuma rezultāti (Zachariou et al., 2006) uzrāda ΔFosB izraisītās izmaiņas MOR un KOR / dynorphin striatumā. Δ pozitīvā ietekme9-THC, mērot ar vietu izvēli, tiek atcelti MOR nulles pelēm, bet KOR svītrojums Δ9- THC vietas pretestība un atklāts Δ9-THC vietas izvēle (Ghozland et al., 2002). Līdzīgi, nosacīta vieta pret Δ9-THC trūkst pro-dynorphin knockout, salīdzinot ar savvaļas tipa pelēm (Zimmer et al., 2001). Šie dati liecina, ka Δ9-THC varētu būt vairāk atalgojošs pēc ΔFosB indukcijas un tam sekojošas MOR signalizācijas indukcijas ar dinorfīna ekspresijas samazināšanos.

Kopumāy, šī pētījuma rezultāti parādīja, ka ΔFosB ekspresija D1R / dinamorfīnu pozitīvi striatāla neironi pastiprināja MOR- un KOR-mediēto signālu G-proteīna mediētā adenililciklāzes aktivitātes inhibīcijas līmenī NAc. Šis konstatējums atbilst pētījumiem, kas pierāda endogēnās opioīdu sistēmas nozīmi atalgojumā (Trigo et al., 2010), un nodrošina potenciālu mehānismu ΔFosB-mediēto ietekmi uz atalgojumu. Turpretim CB1R-mediētā signalizācija NAc būtiski neietekmēja striatāla ΔFosB ekspresiju pārbaudītajos apstākļos, lai gan ir nepieciešami papildu pētījumi, lai noteiktu ΔFosB indukcijas ietekmi uz endokannabinoīdu sistēmu.

Pētījumu galvenie aspekti

  • MOR signalizācija tiek uzlabota peles kodolos, kas ekspresē ΔFosB
  • KOR pastiprina adenililciklāzi arī pelēm, kas ekspresē ΔFosB
  • ΔFosB izpausme nemaina CB1R signalizācija kodolā

Pateicības

Autori pateicas Hengjunam Viņam, Jordānam Koksam un Aaronam Tomarhioi par tehnisko palīdzību ar [35S] GTPγS saistīšanās testi. Šo pētījumu atbalstīja USPHS dotācijas DA014277 (LJS), DA10770 (DES) un P01 DA08227 (EJN).

Zemsvītras piezīmes

Izdevēja atruna: Šis ir PDF fails, kurā nav publicēta manuskripta, kas ir pieņemts publicēšanai. Kā pakalpojums mūsu klientiem sniedzam šo rokraksta agrīno versiju. Manuskripts tiks pakļauts kopēšanu, apkopošanu un iegūto pierādījumu pārskatīšanu, pirms tas tiek publicēts tā galīgajā citējamajā formā. Lūdzu, ņemiet vērā, ka ražošanas procesa laikā var rasties kļūdas, kas var ietekmēt saturu, un attiecas uz visiem žurnālam piemērojamiem juridiskajiem atrunas.

Atsauces

  • Bozarth MA, Wise RA. Anatomiski atšķirīgi opiātu receptoru lauki veicina atalgojumu un fizisko atkarību. Zinātne. 1984;224: 516-517. [PubMed]
  • Bradfordas MM. Ātra un jutīga metode proteīnu mikrogramu daudzumu kvantitatīvai noteikšanai, izmantojot proteīnu un krāsu saistīšanas principu. Anal. Biochem. 1976;72: 248-254. [PubMed]
  • Breivogel CS, Childers SR, Deadwyler SA, Hampson RE, Vogt LJ, Sim-Selley LJ. Hroniska delta9-tetrahidrokannabinola terapija rada laika atkarīgu kanabinoīdu receptoru aktivēto G proteīnu zudumu smadzenēs. J. Neurochem. 1999;73: 2447-2459. [PubMed]
  • Breivogel CS, Selley DE, Childers SR. Kanabinoīdu receptoru agonista efektivitāte [35S] GTPγS saistīšanās ar žurku smadzeņu membrānām korelē ar agonistu izraisīto IKP afinitātes samazināšanos. J. Biol. Chem. 1998;273: 16865-16873. [PubMed]
  • Kadoni C, Pisanu A, Solinas M, Acquas E, Di Chiara G. Uzvedības sensibilizācija pēc atkārtotas Delta 9-tetrahidrokanabinola iedarbības un krustveida sensibilizācija ar morfīnu. Psihofarmakoloģija (Berl) 2001;158: 259-266. [PubMed]
  • Cadoni C, Valentini V, Di Chiara G. Uzvedības sensibilizācija pret delta 9-tetrahidrokanabinolu un krusteniskā sensibilizācija ar morfīnu: diferenciālas izmaiņas akmens čaulā un dopamīna transmisijā. J. Neurochem. 2008;106: 1586-1593. [PubMed]
  • Chen J, Kelz MB, Zeng G, Sakai N, Steffen C, Shockett PE, Picciotto MR, Duman RS, Nestler EJ. Transgeniski dzīvnieki ar inducējamu, mērķtiecīgu gēnu ekspresiju smadzenēs. Mol Pharmacol. 1998;54: 495-503. [PubMed]
  • Childers SR. Opioīdu receptoriem piesaistītie otrā kurjeri. Life Sci. 1991;48: 1991-2003. [PubMed]
  • Childers SR, Fleming L, Konkoy C, Marckel D, Pacheco M, Sexton T, Ward S. Opioīdu un kanabinoīdu receptoru inhibīcija adenililciklāzei smadzenēs. Ann. NY Akad. Sci. 1992;654: 33-51. [PubMed]
  • Childers SR, Xiao R, Vogt LJ, Sim-Selley LJ. Kappa opioīdu receptoru stimulācija [35S] GTPγS saistīšanās jūrascūciņu smadzenēs: pierādījumu trūkums kappa2- G proteīnu selektīva aktivācija. Biochem. Pharmacol. 1998;56: 113-120. [PubMed]
  • Clarke S, Zimmer A, Zimmer AM, Hill RG, Kitchen I. Mikro, delta un kappa-opioīdu receptoru reģionālā selektīva regulēšana, bet ne opioīdu receptoru tipa 1 receptori enkefalīna un dinorfīna knockout pelēm. Neirozinātne. 2003;122: 479-489. [PubMed]
  • Colby CR, Whisler K, Steffen C, Nestler EJ, Self DW. DeltaFosB pārmērīga ekspresija uz striatālu šūnu tipa specifiku palielina kokaīna stimulēšanu. J. Neurosci. 2003;23: 2488-2493. [PubMed]
  • Gardner EL. Endokannabinoīdu signalizācijas sistēma un smadzeņu atlīdzība: uzsvars uz dopamīnu. Pharmacol. Biochem. Behavs 2005;81: 263-284. [PubMed]
  • Ghozland S, Matthes HW, Simonin F, Filliol D, Kieffer BL, Maldonado R. Kanabinoīdu motivējošās sekas ietekmē mu-opioīdu un kappa-opioīdu receptori. J. Neurosci. 2002;22: 1146-1154. [PubMed]
  • Herkenham M, Lynn AB, Johnson MR, Melvin LS, de Costa BR, Rice KC. Kanabinoīdu receptoru raksturojums un lokalizācija žurku smadzenēs: kvantitatīvs in vitro autoradiogrāfijas pētījums. J. Neurosci. 1991;11: 563-583. [PubMed]
  • Hohmann AG, Herkenham M. Kanabinoīdu CB (1) receptoru mRNS lokalizācija žurku striatuma neironu apakšpopulācijās: divkāršā marķējuma in situ hibridizācijas pētījums. Sinapse. 2000;37: 71-80. [PubMed]
  • Howlett AC, Barth F, Bonner TI, Cabral G, Casellas P, Devane WA, Felder CC, Herkenham M, Mackie K, Martin BR, Mechoulam R, Pertwee RG. Starptautiskā farmakoloģijas savienība. XXVII. Kanabinoīdu receptoru klasifikācija. Farmakoloģiskais pārskats. 2002;54: 161-202.
  • Huestis MA, Gorelick DA, Heishman SJ, Preston KL, Nelson RA, Moolchan ET, Frank RA. CB1 selektīvā kanabinoīdu receptoru antagonista SR141716 smēķēto marihuānas efektu blokāde. Arch. Ģen. Psihiatrija. 2001;58: 322-328. [PubMed]
  • Kelz MB, Chen J, Carlezon WA, Jr, Whisler K, Gilden L, Beckmann AM, Steffen C, Zhang YJ, Marotti L, Self DW, Tkatch T, Baranauskas G, Surmeier DJ, Neve RL, Duman RS, Picciotto MR, Nestler EJ. Transkripcijas faktora deltaFosB ekspresija smadzenēs kontrolē jutību pret kokaīnu. Daba. 1999;401: 272-276. [PubMed]
  • Koob GF, Volkow ND. Narkotiku atkarība. Neuropsychopharmacology. 2010;35: 217-238. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  • Lamarque S, Taghzouti K, Simon H. Hroniska ārstēšana ar Delta (9) -tetrahidrokanabinolu pastiprina lokomotorisko reakciju uz amfetamīnu un heroīnu. Ietekme uz atkarību no narkotiku atkarības. Neirofarmakoloģija. 2001;41: 118-129. [PubMed]
  • Maldonado R, Valverde O, Berrendero F. Endokannabinoīdu sistēmas iesaistīšana narkomānijā. Tendences neurosci. 2006;29: 225-232. [PubMed]
  • Mansour A, Fox CA, Thompson RC, Akil H, Watson SJ. mu-opioīdu receptoru mRNS ekspresija žurku CNS: salīdzinājums ar mu-receptoru saistīšanu. Brain Res. 1994;643: 245-265. [PubMed]
  • Matthes HWD, Maldonado R, Simonin F, Valverde O, Slowe S, Kitchen I, Befort K, Dierich A, LeMeur M, Dolle P, Tzavara E, Hanoune J, Roques BP, Kieffer BL. Morfīna izraisītas analgēzijas zudums, atalgojuma efekts un atcelšanas simptomi pelēm, kurām nav µ-opioīdu receptoru gēna. Daba. 1996;383: 819-823. [PubMed]
  • McClung CA, Nestler EJ. Gēnu ekspresijas un kokaīna atlīdzības regulēšana ar CREB un DeltaFosB. Nat. Neurosci. 2003;6: 1208-1215. [PubMed]
  • McClung CA, Ulery PG, Perrotti LI, Zachariou V, Berton O, Nestler EJ. DeltaFosB: molekulārs slēdzis ilgstošai adaptācijai smadzenēs. Brain Res. Mol. Brain Res. 2004;132: 146-154. [PubMed]
  • Muller DL, Unterwald EM. D1 dopamīna receptori modulē deltaFosB indukciju žurku striatumā pēc periodiskas morfīna ievadīšanas. J. Pharmacol. Exp Ther. 2005;314: 148-154. [PubMed]
  • Nestler EJ. Pārskatīšana. Atkarības transkripcijas mehānismi: DeltaFosB loma. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 2008;363: 3245-3255. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  • Nestler EJ, Kelz MB, Chen J. DeltaFosB: molekulārais mediators ilgstošai nervu un uzvedības plastiskumam. Brain Res. 1999;835: 10-17. [PubMed]
  • Nye HE, Hope BT, Kelz MB, Iadarola M, Nestler EJ. Farmakoloģiskie pētījumi par hroniska FOS saistītā antigēna indukcijas ar kokainu regulēšanu striatumā un kodolskaldnē. J. Pharmacol. Exp Ther. 1995;275: 1671-1680. [PubMed]
  • Peakman MC, Colby C, Perrotti LI, Tekumalla P, Carle T, Ulery P, Chao J, Duman C, Steffen C, Monteggia L, Allen MR, krājumi JL, Duman RS, McNeish JD, Barrot M, Self DW, Nestler EJ , Schaeffer E. Inducible, smadzeņu specifiskā c-Jun dominējošā negatīvā mutanta ekspresija transgēnās pelēs samazina jutību pret kokaīnu. Brain Res. 2003;970: 73-86. [PubMed]
  • Perrotti LI, Weaver RR, Robison B, Renthal W, Maze I, Yazdani S, Elmore RG, Knapp DJ, Selley DE, Martin BR, Sim-Selley L, Bachtell RK, Self DW, Nestler EJ. DeltaFosB indukcijas smadzenēs atšķiras no ļaunprātīgas narkotikas. Sinapse. 2008;62: 358-369. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]
  • Robbe D, Alonso G, Duchamp F, Bockaert J, Manzoni OJ. Kanabinoīdu receptoru lokalizācija un darbības mehānismi peles kodola glutamatergiskās sinapsēs. J. Neurosci. 2001;21: 109-116. [PubMed]
  • Salomons Y. Adenilāta ciklāzes tests. Adv. Cikliskais nukleotīds Res. 1979;10: 35-55. [PubMed]
  • Selley DE, Sim LJ, Xiao R, Liu Q, Childers SR. Mu opioīdu receptoru stimulēts [35S] GTPγS saistīšanās ar žurku talamu un kultivētām šūnu līnijām: signālu transdukcijas mehānismi, kas pamato agonistu efektivitāti. Mol Pharmacol. 1997;51: 87-96. [PubMed]
  • Trigo JM, Martin-Garcia E, Berrendero F, Robledo P, Maldonado R. Endogēnā opioīdu sistēma: izplatīts substrāts narkotiku atkarībā. Narkotiku atkarība no alkohola. 2010;108: 183-194. [PubMed]
  • Unterwald EM, Knapp C, Zukin RS. Κ1 un κ2 opioīdu receptoru neuroanatomiskā lokalizācija žurkām un jūrascūciņām. Brain Res. 1991;562: 57-65. [PubMed]
  • Vaccarino FJ, Bloom FE, Koob GF. Opiātu receptoru blokāde ar kodolu samazina intravenozo heroīna atalgojumu žurkām. Psihofarmakoloģija (Berl) 1985;86: 37-42. [PubMed]
  • Vigano D, Rubino T, Vaccani A, Bianchessi S, Marmorato P, Castiglioni C, Parolaro D. Molekulārie mehānismi, kas iesaistīti asimetriskā mijiedarbībā starp kannabinoīdu un opioīdu sistēmām. Psihofarmakoloģija (Berl) 2005;182: 527-536. [PubMed]
  • Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, Cassidy MP, Kelz MB, Shaw-Lutchman T, Berton O, Sim-Selley LJ, Dileone RJ, Kumar A, Nestler EJ. DeltaFosB būtiska loma morfīna iedarbības kodolā. Nat. Neurosci. 2006;9: 205-211. [PubMed]
  • Zangen A, Solinas M, Ikemoto S, Goldberg SR, Wise RA. Divas smadzeņu vietas kanabinoīdu atlīdzībai. J. Neurosci. 2006;26: 4901-4907. [PubMed]
  • Zhu J, Luo LY, Li JG, Chen C, Liu-Chen LY. Klonēto cilvēka kappa opioīdu receptoru aktivizēšana ar agonistiem uzlabo [35S] GTPyS saistīšanos ar membrānām: ligandu potenciālu un efektivitātes noteikšana. J. Pharmacol. Exp Ther. 1997;282: 676-684. [PubMed]
  • Zimmer A, Valjent E, Konig M, Zimmer AM, Robledo P, Hahn H, Valverde O, Maldonado R. Delta-9-tetrahidrokanabinola disforu trūkums pelēm ar dinorfīna deficītu. J. Neurosci. 2001;21: 9499-9505. [PubMed]
  • Zimmer A, Zimmer AM, Hohmann AG, Herkenham M, Bonner TI. Paaugstināta mirstība, hipoaktivitāte un hipoalgesija CBNNXX kanabinoīdu receptoru knockout pelēm. Proc. Natl. Akad. Sci. ASV 1999;96: 5780-5785. [PMC bezmaksas raksts] [PubMed]