Obese rats ലെ ആസക്തി പോലുള്ള പ്രതിഫലം പ്രതിഭാസവും compulsive ഭക്ഷണം കഴിക്കുന്ന ഡോപ്പാമൻ D2 റിക്സറുകൾ (2010)

അഭിപ്രായം: ഒരു മൃഗത്തിന് പരിധിയില്ലാത്ത ആക്സസ് നൽകുമ്പോൾ, ശക്തമായ പ്രകൃതിദത്ത ശക്തിപ്പെടുത്തൽ (വളരെ ഉത്തേജിപ്പിക്കുന്ന ഭക്ഷണം) ഡി 2 റിസപ്റ്ററുകളിൽ കുറവുണ്ടാക്കുമെന്ന് ഈ പഠനം തെളിയിക്കുന്നു. ഈ ഇടിവ് മിക്കവാറും എല്ലാ എലികളിലും കണ്ടു, വളരെ വേഗത്തിൽ സംഭവിച്ചു. “വളരെ രുചികരമായ” ഭക്ഷണം നീക്കം ചെയ്തപ്പോൾ എലികൾ സാധാരണ ച. കഴിക്കാൻ വിസമ്മതിച്ചു. “വളരെ രുചികരമായ” ഭക്ഷ്യ ഉപഭോഗവുമായി വൈദ്യുത ആഘാതങ്ങൾ ജോടിയാക്കിയിട്ടും എലികൾ (അവർക്ക് കഴിയുമ്പോൾ) തുടർന്നു.

• മുഴുവൻ പഠനവും

നട്ട് ന്യൂറോസി. 2010 മെയ്; 13(5): 635-641. ഓൺലൈനിൽ പ്രസിദ്ധീകരിച്ചു 2010 മാർച്ച് 28. ദോഇ:  10.1038 / nn.2519

വേര്പെട്ടുനില്ക്കുന്ന

ന്യൂറൽ റിവാർഡ് പ്രതികരണങ്ങളിൽ ക്രമേണ വഷളാകുന്ന കമ്മി ഉയർന്നുവരുന്നതിനൊപ്പം അമിതവണ്ണത്തിന്റെ വികാസവും ഞങ്ങൾ കണ്ടെത്തി. കൊക്കെയ്ൻ അല്ലെങ്കിൽ ഹെറോയിൻ ഉൽ‌പാദിപ്പിച്ച റിവാർഡ് ഹോമിയോസ്റ്റാസിസിലെ സമാനമായ മാറ്റങ്ങൾ‌ കാഷ്വലിൽ‌ നിന്നും നിർബന്ധിത മയക്കുമരുന്ന്‌ ഉപയോഗത്തിലേക്കുള്ള പരിവർത്തനത്തിന് നിർ‌ണ്ണായകമാണ്. അതനുസരിച്ച്, അമിതവണ്ണമുള്ളതും എന്നാൽ മെലിഞ്ഞതുമായ എലികളിലെ നിർബന്ധിത ഭക്ഷണം നൽകുന്ന സ്വഭാവം ഞങ്ങൾ കണ്ടെത്തി, ഇത് ഭക്ഷ്യയോഗ്യമായ ഭക്ഷണ ഉപഭോഗമായി കണക്കാക്കപ്പെടുന്നു, ഇത് പ്രതികൂലമായ അവസ്ഥയിലുള്ള ഉത്തേജനം തടസ്സപ്പെടുത്തുന്നതിനെ പ്രതിരോധിക്കും. മയക്കുമരുന്നിന് അടിമകളായ മനുഷ്യരിൽ റിപ്പോർട്ട് ചെയ്യപ്പെട്ടിട്ടുള്ളതുപോലെ, സ്‌ട്രീറ്റൽ ഡോപാമൈൻ ഡിഎക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ് റിസപ്റ്ററുകൾ (ഡി‌എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ്ആർ) അമിതവണ്ണമുള്ള എലികളിൽ നിയന്ത്രണവിധേയമാക്കി. മാത്രമല്ല, ലെന്റിവൈറസ്-മെഡിയേറ്റഡ് സ്ട്രൈറ്റൽ ഡിഎക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ്ആറുകളുടെ ആസക്തി ആസക്തി പോലുള്ള റിവാർഡ് കമ്മി വികസിപ്പിക്കുന്നതും എലികളിലെ നിർബന്ധിത-സമാനമായ ഭക്ഷണം തേടുന്നതും അതിവേഗം കൊഴുപ്പ് കൂടിയ ഭക്ഷണത്തിലേക്ക് വ്യാപിച്ചു. രുചികരമായ ഭക്ഷണത്തിന്റെ അമിത ഉപഭോഗം മസ്തിഷ്ക റിവാർഡ് സർക്യൂട്ടുകളിൽ ആസക്തി പോലുള്ള ന്യൂറോഡാപ്റ്റീവ് പ്രതികരണങ്ങളെ പ്രേരിപ്പിക്കുകയും നിർബന്ധിത ഭക്ഷണത്തിന്റെ വികാസത്തെ പ്രേരിപ്പിക്കുകയും ചെയ്യുന്നുവെന്ന് ഈ ഡാറ്റ തെളിയിക്കുന്നു. അതിനാൽ സാധാരണ ഹെഡോണിക് സംവിധാനങ്ങൾ അമിതവണ്ണത്തിനും മയക്കുമരുന്നിനും അടിമപ്പെടാം.

അവതാരിക

ഭക്ഷണത്തെ ആനന്ദവും പ്രതിഫലവും സ്വാധീനിക്കുന്നു, ഭക്ഷണ പ്രതിഫലം ലഭിക്കുന്നത് ഉപഭോഗത്തെ ശക്തമായി പ്രേരിപ്പിക്കും 1, 2. എന്നിരുന്നാലും, അമിതവണ്ണത്തിന് കാരണമാകുന്ന ഹെഡോണിക് സംവിധാനങ്ങൾ കൃത്യമായി മനസ്സിലാക്കാൻ കഴിയുന്നില്ല. അപായ ലെപ്റ്റിൻ കുറവുള്ള ഹൈപ്പർഫാഗിക് മനുഷ്യരിൽ, മസ്തിഷ്ക റിവാർഡ് സർക്യൂട്ടുകളുടെ പ്രധാന ഘടകങ്ങളായ ഡോർസൽ, വെൻട്രൽ സ്ട്രിയാറ്റം എന്നിവയിലെ പ്രവർത്തനം ഭക്ഷണത്തിന്റെ 3 ചിത്രങ്ങളോടുള്ള പ്രതികരണമായി ഗണ്യമായി വർദ്ധിക്കുന്നു, കൂടാതെ ലെപ്റ്റിൻ റീപ്ലേസ്‌മെന്റ് തെറാപ്പി സ്ട്രൈറ്റൽ ആക്റ്റിവിറ്റിയും ഭക്ഷണ റിപ്പോർട്ടിന്റെ സ്വയം റിപ്പോർട്ടുചെയ്യലും ഇഷ്ടപ്പെടുന്നു . ഭക്ഷണ സ്വഭാവത്തിന്റെ ഹെഡോണിക് വശങ്ങളിൽ സ്ട്രിയാറ്റം പ്രധാനമാണെന്ന് ഇത് സൂചിപ്പിക്കുന്നു. മെലിഞ്ഞ നിയന്ത്രണങ്ങളുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ അമിതവണ്ണമുള്ള വ്യക്തികളിൽ ഉയർന്ന രുചികരമായ ഭക്ഷണത്തോടുള്ള പ്രതികരണമായി സ്ട്രൈറ്റത്തിന്റെ സജീവമാക്കൽ മൂർച്ഛിക്കുന്നുവെന്ന് അടുത്തിടെ കാണിച്ചു. മാത്രമല്ല, മുതുകിലെ സ്ത്രിഅതുമ് എന്ന ഹ്യ്പൊഫുന്ച്തിഒന് ദീർഘകാല ശരീരഭാരം ഏറ്റവും ദ്ര്ദ്൨-അന്ക്ക്൧ ജീൻ സൂത്രവാക്യം ഫലങ്ങൾ കുറഞ്ഞു ഏത് സ്ത്രിഅതല് ദ്൨ര് പ്രകടിപ്പിക്കുന്നതിനും സമ്പത്തു ആശ്രിതത്വം ദിസൊര്ദെര്സ്൪, 3 പ്രെദിസ്പൊസെ വ്യക്തികൾക്ക് കാണിച്ചിട്ടുണ്ട് എന്ന തകിഅ അല്ലെലെ വ്യക്തികൾ പ്രഖ്യാപിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു ഇവയും സമാനമായ നിരീക്ഷണങ്ങളും റിവാർഡ് പ്രോസസ്സിംഗിലെ അപര്യാപ്തത അമിതവണ്ണത്തിന്റെ വികാസത്തിന് ഒരു പ്രധാന അപകട ഘടകമായിരിക്കാമെന്നും റിവാർഡ് ഹൈപ്പോസെൻസിറ്റിവിറ്റി 4 നികത്താൻ അമിതവണ്ണമുള്ള ആളുകൾ നിർബന്ധിത ഭക്ഷണം നിർബന്ധമായും കഴിക്കാമെന്നും നിർദ്ദേശത്തിന് കാരണമായി. റിവാർഡ് പ്രോസസ്സിംഗിലെ കുറവുകൾ ഘടനാപരമാണെന്നും അമിതവണ്ണത്തിന് മുമ്പുള്ളതാണോ എന്നതും വ്യക്തമല്ല, അല്ലെങ്കിൽ അമിതമായ ഭക്ഷണത്തിന്റെ അമിത ഉപഭോഗം പ്രതിഫലത്തിന്റെ അപര്യാപ്തതയ്ക്ക് കാരണമാകുമെന്നും അതുവഴി ഭക്ഷണത്തിലൂടെയുള്ള അമിതവണ്ണത്തിന് കാരണമാകുമോ എന്നും വ്യക്തമല്ല.

അമിതവണ്ണവും അമിതവണ്ണമുള്ളവരുമായ വ്യക്തികളുടെ നിർവചിക്കുന്ന സ്വഭാവം, അറിയപ്പെടുന്ന നെഗറ്റീവ് ആരോഗ്യവും സാമൂഹിക പ്രത്യാഘാതങ്ങളും ഉണ്ടായിരുന്നിട്ടും അവർ അമിതമായി ഭക്ഷണം കഴിക്കുന്നത് തുടരുന്നു എന്നതാണ്. വാസ്തവത്തിൽ, അമിതഭാരമുള്ള പല വ്യക്തികളും തങ്ങളുടെ ഭക്ഷണ ഉപഭോഗം പരിമിതപ്പെടുത്താനുള്ള ആഗ്രഹം പ്രകടിപ്പിക്കുന്നുണ്ടെങ്കിലും അവരുടെ ഉപഭോഗം നിയന്ത്രിക്കാൻ പാടുപെടുകയും energy ർജ്ജ ആവശ്യകതകൾക്കപ്പുറം ആവർത്തിച്ച് കഴിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു. 7, 8. നെഗറ്റീവ് ഫലങ്ങളോട് വിവേകമില്ലാത്ത തീറ്റ സ്വഭാവത്തിന്റെ വികസനം മനുഷ്യ മയക്കുമരുന്നിന് അടിമകളായി കാണപ്പെടുന്ന നിർബന്ധിത മയക്കുമരുന്ന് ഉപയോഗത്തിന് സമാനമാണ്, ഇത് നെഗറ്റീവ് പരിണതഫലങ്ങൾക്ക് സമാനമാണ് 9. എലികളിലെ മസ്തിഷ്ക റിവാർഡ് സിസ്റ്റങ്ങളുടെ സംവേദനക്ഷമതയെ അടിസ്ഥാനമാക്കി കൊഴുപ്പ് കൂടിയ ഉയർന്ന കൊഴുപ്പ് ഉള്ള ഭക്ഷണത്തിലേക്ക് വിപുലമായ ആക്സസ് ഉണ്ടാക്കുന്നതിന്റെ ഫലങ്ങൾ ഞങ്ങൾ ഇവിടെ അന്വേഷിച്ചു. ഡയറ്റ്-ഇൻഡ്യൂസ്ഡ് ഹെഡോണിക് ഡിസ്റെഗുലേഷനും നിർബന്ധിത ഭക്ഷണം തേടുന്നതിന്റെ ആവിർഭാവവും തമ്മിലുള്ള ബന്ധവും ഞങ്ങൾ പരിശോധിച്ചു. അവസാനമായി, ഈ ആസക്തി പോലുള്ള പെരുമാറ്റ പ്രതികരണങ്ങളിൽ സ്‌ട്രാറ്റിയൽ D2R- കൾക്കുള്ള പങ്ക് ഞങ്ങൾ അന്വേഷിച്ചു.

അമിതവണ്ണമുള്ള എലികളിലെ ആസക്തി പോലുള്ള പ്രതിഫല കമ്മി

കൊഴുപ്പ് കൂടിയ കൊഴുപ്പ് ഭക്ഷണത്തിലേക്കുള്ള നിയന്ത്രിത അല്ലെങ്കിൽ വിപുലീകൃത ആക്സസ്സിന്റെ ഫലങ്ങൾ പരിശോധിക്കുന്നതിന്, ഞങ്ങൾ ലാറ്ററൽ ഹൈപ്പോഥലാമസിൽ ബൈപോളാർ ഉത്തേജിപ്പിക്കുന്ന ഇലക്ട്രോഡ് ഉപയോഗിച്ച് പുരുഷ വിസ്റ്റാർ എലികളെ (300−350 ഗ്രാം) തയ്യാറാക്കി 10-14 ഡി വരെ ഒരു പ്രത്യേക-ട്രയലിൽ പരിശീലിപ്പിച്ചു സ്ഥിരമായ റിവാർഡ് പരിധി സ്ഥാപിക്കുന്നതുവരെ നിലവിലെ-ത്രെഷോൾഡ് ബ്രെയിൻ സ്റ്റിമുലേഷൻ റിവാർഡ് (ബിഎസ്ആർ) നടപടിക്രമം. ബി‌എസ്‌ആർ നടപടിക്രമത്തിൽ, ഇൻ‌വെല്ലിംഗ് ഉത്തേജക ഇലക്ട്രോഡിലൂടെ പ്രതിഫലദായകമായ വൈദ്യുത സ്വയം ഉത്തേജനം നേടുന്നതിന് എലികൾ ശക്തമായി പ്രതികരിക്കുന്നു, സ്വയം ഉത്തേജക സ്വഭാവം നിലനിർത്തുന്ന ഏറ്റവും കുറഞ്ഞ ഉത്തേജന തീവ്രത റിവാർഡ് ത്രെഷോൾഡ് 4 എന്ന് വിളിക്കുന്നു. അടിസ്ഥാന സാഹചര്യങ്ങളിൽ റിവാർഡ് ത്രെഷോൾഡുകൾ സ്ഥിരവും മാറ്റമില്ലാതെ തുടരുന്നതുമായതിനാൽ, ഈ നടപടിക്രമം മസ്തിഷ്ക റിവാർഡ് സിസ്റ്റങ്ങളുടെ പ്രതികരണശേഷിയുടെ ഒരു സെൻസിറ്റീവ് അളവ് നൽകുന്നു. സ്ഥിരമായ ബി‌എസ്‌ആർ ത്രെഷോൾഡുകൾ സ്ഥാപിച്ചതിനുശേഷം (തുടർച്ചയായ മൂന്ന് സെഷനുകളിലുടനീളമുള്ള പരിധികളിൽ <10% വ്യതിയാനം എന്ന് നിർവചിച്ചിരിക്കുന്നു), ഞങ്ങൾ മൂന്ന് ഗ്രൂപ്പുകൾക്ക് എലികളെ അനുവദിച്ചു, അത് ശരാശരി ശരീരഭാരത്തിലോ ഗ്രൂപ്പുകൾ തമ്മിലുള്ള റിവാർഡ് ത്രെഷോൾഡുകളിലോ വ്യത്യാസമില്ല. മനുഷ്യ ഉപഭോഗത്തിന് എളുപ്പത്തിൽ ലഭ്യമാകുന്ന രുചികരമായ energy ർജ്ജ-ഇടതൂർന്ന ഭക്ഷണം അടങ്ങിയ 'കഫറ്റീരിയ-ശൈലി' ഭക്ഷണത്തിലേക്ക് മൂന്ന് ഗ്രൂപ്പുകൾക്കും വ്യത്യസ്ത ആക്സസ് നൽകി (ഓൺലൈൻ രീതികൾ കാണുക). എലികൾക്ക് 10 മണിക്കൂർ (ച ow- മാത്രം എലികൾ; n = 0), 9 മണിക്കൂർ (നിയന്ത്രിത-ആക്സസ് എലികൾ; n = 1), അല്ലെങ്കിൽ 11–18 മണിക്കൂർ (എക്സ്റ്റെൻഡഡ്-ആക്സസ് എലികൾ; n = 23) പ്രതിദിനം ഭക്ഷണത്തിലേക്ക് പ്രവേശനം ഉണ്ടായിരുന്നു തുടർച്ചയായി 11 ദിവസം. എലികളിലെ ഭക്ഷണക്രമത്തിൽ അമിതവണ്ണമുണ്ടാക്കാൻ കഫറ്റീരിയ ഡയറ്റുകൾ അറിയപ്പെടുന്നു. എല്ലാ എലികൾക്കും സ്റ്റാൻഡേർഡ് ലബോറട്ടറി ച ow യിലേക്കുള്ള പരസ്യ ആക്സസ് ഉണ്ടായിരുന്നു, റിവാർഡ് ത്രെഷോൾഡുകൾ, ശരീരഭാരം, കലോറി ഉപഭോഗം എന്നിവ ഉടനീളം രേഖപ്പെടുത്തിയിട്ടുണ്ട്.

ച ow- മാത്രം അല്ലെങ്കിൽ നിയന്ത്രിത-ആക്സസ് ഗ്രൂപ്പുകളുമായി (ചിത്രം 1a) താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ കഫറ്റീരിയ ഭക്ഷണത്തിലേക്ക് വിപുലമായ ആക്സസ് ഉള്ള എലികളിൽ ഭാരം ഗണ്യമായി വർദ്ധിച്ചു. ച ow- മാത്രം എലികളുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ ഭാരം നിയന്ത്രിത-ആക്സസ് എലികളിൽ വർദ്ധനവുണ്ടായെങ്കിലും ഈ ഫലം സ്ഥിതിവിവരക്കണക്കിലെത്തിയില്ല. എക്സ്റ്റെൻഡഡ് ആക്സസ് എലികളിലെ അമിതവണ്ണത്തിന്റെ വികസനം മസ്തിഷ്ക റിവാർഡ് ഫംഗ്ഷനിലെ വഷളായ കമ്മിയുമായി അടുത്ത ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു, ഇത് ക്രമേണ ഉയർത്തിയ ബിഎസ്ആർ പരിധിയിൽ പ്രതിഫലിക്കുന്നു (ചിത്രം 1b). മൂന്ന് ഗ്രൂപ്പുകളിൽ (സപ്ലിമെന്ററി ചിത്രം. 1) ബി‌എസ്‌ആറിനായുള്ള പ്രതികരണ ലേറ്റൻസികളിൽ വ്യത്യാസങ്ങളൊന്നും കണ്ടെത്തിയിട്ടില്ലാത്തതിനാൽ, പെരുമാറ്റ പ്രകടനത്തിലെ അപാകതകൾ ഈ നിരീക്ഷണത്തിന് കാരണമാകില്ല. ഇൻട്രാവൈനസ് കൊക്കെയ്ൻ അല്ലെങ്കിൽ ഹെറോയിൻ സ്വയംഭരണങ്ങളിലേക്കുള്ള വിപുലീകൃതവും എന്നാൽ പരിമിതപ്പെടുത്താത്തതുമായ എലികളിൽ ബ്രെയിൻ റിവാർഡ് ഫംഗ്ഷനിലെ സമാന കുറവുകൾ റിപ്പോർട്ട് ചെയ്യപ്പെട്ടിട്ടുണ്ട്. 12, 13, 14. അതിനാൽ, കൊഴുപ്പ് കൂടിയ ഉയർന്ന കൊഴുപ്പ് ഉള്ള ഭക്ഷണത്തിലേക്കുള്ള ആക്സസ് മസ്തിഷ്ക റിവാർഡ് ഫംഗ്ഷനിലെ ആസക്തി പോലുള്ള കുറവുകൾക്ക് കാരണമാകും, ഇത് അമിതമായി ഭക്ഷണം കഴിക്കുന്നതിനും അമിതവണ്ണത്തിന്റെ വികാസത്തിനും കാരണമാകുന്ന പ്രചോദനത്തിന്റെ ഒരു പ്രധാന ഉറവിടമായി കണക്കാക്കപ്പെടുന്നു. 1.

ചിത്രം 1: ഒരു കഫറ്റീരിയ ഭക്ഷണത്തിലേക്ക് വിപുലമായ ആക്സസ് ഉള്ള എലികളിലെ ശരീരഭാരം, പ്രതിഫലം എന്നിവ.

(എ) ച ow- മാത്രം, നിയന്ത്രിത-ആക്സസ്, എക്സ്റ്റെൻഡഡ് ആക്സസ് എലികളിലെ ശരാശരി (± സെം) ഭാരം (ആക്സസ് × ദിവസത്തെ ഇടപെടൽ: എഫ് 39,702 = 7.9, പി <0.0001; * പി <0.05 ച ow- മാത്രം ഗ്രൂപ്പുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ, പോസ്റ്റ് ഹോക് ടെസ്റ്റ്). (ബി) അടിസ്ഥാന റിവാർഡ് ത്രെഷോൾഡുകളിൽ നിന്നുള്ള ശരാശരി (± സെം) ശതമാനം മാറ്റം (ആക്സസ് × സമയ ഇടപെടൽ: എഫ് 78,1092 = 1.7, പി <0.0005; * പി <0.05 ച ow- മാത്രം ഗ്രൂപ്പുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ, പോസ്റ്റ് ഹോക് ടെസ്റ്റ്).

ഭക്ഷണ സ്വഭാവം വിശദമായി പരിശോധിച്ചപ്പോൾ (ചിത്രം 2), ദൈനംദിന ദൈനംദിന കലോറി ഉപഭോഗം ച ow- മാത്രം നിയന്ത്രിത-ആക്സസ് എലികൾ തമ്മിൽ സമാനമാണെന്ന് ഞങ്ങൾ കണ്ടെത്തി (ചിത്രം 2a, d). ഇതിനു വിപരീതമായി, വിപുലീകൃത ആക്സസ് ഉള്ള എലികളിലെ മൊത്തം കലോറി ഉപഭോഗം നിയന്ത്രിത-ആക്സസ്, ച ow- മാത്രം എലികളുടെ ഇരട്ടിയാണ് (ചിത്രം 2a, d). നിയന്ത്രിത-ആക്സസ്, ച ow- മാത്രം എലികൾ ഏകദേശം ഒരേ കലോറി ഉപഭോഗം (ചിത്രം 2a, d) നിലനിർത്തിയിട്ടുണ്ടെങ്കിലും, നിയന്ത്രിത-ആക്സസ് എലികൾക്ക് അവരുടെ ദൈനംദിന കലോറിയുടെ ~ 33% മാത്രമേ ച ow യിൽ നിന്ന് ലഭിച്ചിട്ടുള്ളൂ (ചിത്രം 2b, d) അവർ അമിത ഭക്ഷണം നൽകുന്ന സ്വഭാവം വികസിപ്പിച്ചെടുക്കുകയും കഫറ്റീരിയ ഡയറ്റ് എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് (ചിത്രം 66d) ലേക്കുള്ള 1 h ആക്സസ് സെഷനിൽ അവരുടെ ദൈനംദിന കലോറി ഉപഭോഗത്തിന്റെ ~ 15% ഉപയോഗിക്കുകയും ചെയ്തു. വിപുലീകൃത-ആക്സസ് എലികൾ‌ അവരുടെ മൊത്തം കലോറി ഉപഭോഗത്തിന്റെ ഒരു ചെറിയ ഭാഗം (~ 2%) ച ow യിൽ നിന്ന് നേടി (ചിത്രം 5b); അവർ മിക്കവാറും ഭക്ഷണശാലകൾ കഴിച്ചു (ചിത്രം 2d). ച ow- മാത്രം എലികളുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ നിയന്ത്രിതവും വിപുലീകൃതവുമായ ആക്സസ് ഗ്രൂപ്പുകളിലെ ഭക്ഷണ മുൻ‌ഗണനയിലെ മാറ്റം കൊഴുപ്പ് കഴിക്കുന്നതിലെ വർദ്ധനവിൽ പ്രതിഫലിച്ചു (ചിത്രം 2c, അനുബന്ധ ചിത്രം 2). മുമ്പത്തെ റിപ്പോർ‌ട്ടുകൾ‌ക്ക് അനുസൃതമായി, എക്സ്റ്റെൻ‌ഡ് ആക്‍സസ് എലികളിൽ‌ കാലക്രമേണ കഫറ്റീരിയ ഡയറ്റ് ഉപഭോഗം കുറയുന്ന പ്രവണതയുണ്ടായി. കാലക്രമേണ കഫറ്റീരിയ ഭക്ഷണത്തിന്റെ ഭാഗമായി നൽകുന്ന ഭക്ഷ്യവസ്തുക്കളുടെ രുചിയോടുള്ള സഹിഷ്ണുതയുടെ വികാസത്തെ ഇത് പ്രതിഫലിപ്പിച്ചേക്കാം. എന്നിരുന്നാലും, സ്റ്റാൻഡേർഡ് ച ow വിനെതിരെയുള്ള കഫറ്റീരിയ ഡയറ്റിനുള്ള മുൻഗണന ഈ എലികളിൽ സ്ഥിരമായി ഉയർന്നതാണ് (സപ്ലിമെന്ററി ചിത്രം. 2). കൊഴുപ്പ് കൂടിയ കൊഴുപ്പ് ഉള്ള ഭക്ഷണത്തിലേക്കുള്ള ആക്സസ് നീട്ടിയതും എന്നാൽ പരിമിതപ്പെടുത്താത്തതും ആസക്തി പോലുള്ള പ്രതിഫല കമ്മി, അമിത ഭക്ഷണം, ഹോമിയോസ്റ്റാറ്റിക് എനർജി ബാലൻസ് നഷ്ടപ്പെടൽ എന്നിവയ്ക്ക് കാരണമാകുമെന്ന് ഈ ഡാറ്റ തെളിയിക്കുന്നു. ഇതിനു വിപരീതമായി, രുചികരമായ ഭക്ഷണത്തിലേക്കുള്ള പരിമിത പ്രവേശനം അമിത ഉപഭോഗ രീതികൾക്ക് കാരണമാകുമെങ്കിലും ഹോമിയോസ്റ്റാറ്റിക് എനർജി ബാലൻസിനെയോ മസ്തിഷ്ക പ്രതിഫല പ്രവർത്തനത്തെയോ തടസ്സപ്പെടുത്തുന്നില്ല. എന്നിരുന്നാലും, തുടർച്ചയായി 16 ൽ കൂടുതൽ കഫറ്റേരിയ ഭക്ഷണത്തിലേക്കുള്ള പ്രവേശനം നിയന്ത്രിക്കുന്നത് ഗണ്യമായ ഭാരം വർദ്ധിപ്പിക്കാനും മസ്തിഷ്ക റിവാർഡ് ഫംഗ്ഷനെ തടസ്സപ്പെടുത്താനും സാധ്യതയുണ്ട്.

ചിത്രം 2: ഒരു കഫറ്റീരിയ ഭക്ഷണത്തിലേക്ക് വിപുലമായ ആക്സസ് ഉള്ള എലികളിലെ ഉപഭോഗ രീതികൾ.

(എ) ച ow- മാത്രം, നിയന്ത്രിത-ആക്സസ്, എക്സ്റ്റെൻഡഡ് ആക്സസ് എലികളിൽ ദിവസേനയുള്ള കലോറി ഉപഭോഗം (ആക്സസ്: F1,324 = 100.6, പി <0.0001; സമയം: F18,324 = 7.8, പി <0.0001; ആക്സസ്. × സമയ ഇടപെടൽ: ച ow- മാത്രം ഗ്രൂപ്പുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ F18,324 = 4.6, പി <0.0001; * പി <0.05, പോസ്റ്റ് ഹോക് ടെസ്റ്റ്). (ബി) ച ow യിൽ നിന്നുള്ള പ്രതിദിന കലോറി ഉപഭോഗം (± സെം) (പ്രവേശനം: F2,504 = 349.1, പി <0.0001; സമയം: F18,504 = 5.9, പി <0.0001; ആക്സസ് × സമയ ഇടപെടൽ: F36,504 = 3.52, പി <0.0001; * പി <0.05 ച ow- മാത്രം ഗ്രൂപ്പുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ, പോസ്റ്റ് ഹോക് ടെസ്റ്റ്). (സി) കൊഴുപ്പിൽ നിന്നുള്ള പ്രതിദിന കലോറി ഉപഭോഗം (± സെം) (പ്രവേശനം: F2,486 = 118.7, പി <0.0001; സമയം: F18,486 = 8.8, പി <0.0001; ആക്സസ് × സമയ ഇടപെടൽ: F36,486 = 6.2, പി <0.0001; * പി <0.05 ച ow- മാത്രം ഗ്രൂപ്പുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ, പോസ്റ്റ് ഹോക് ടെസ്റ്റ്). (d) 40 ദിവസത്തെ ആക്സസ് കാലയളവിൽ, ശരാശരി (± സെം) മൊത്തം കലോറി ഉപഭോഗവും ച ow വിൽ നിന്ന് മാത്രം ഉപയോഗിക്കുന്ന കലോറിയും താരതമ്യം (ആക്സസ്: F2,54 = 25.0, പി <0.0001; കലോറി ഉറവിടം: F2,54 = 1235.2, പി <0.0001; ആക്സസ് × കലോറി ഉറവിട ഇടപെടൽ: എഫ് 2,54 = 485.7, പി <0.0001; *** പി <0.001 ച ow- മാത്രം ഗ്രൂപ്പിലെ മൊത്തം കലോറിയുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ, ### പി <0.001 ഒരേ കൂട്ടം എലികൾ, പോസ്റ്റ് ഹോക് ടെസ്റ്റ്).

40 d ന് ശേഷം, എലികൾക്ക് രുചികരമായ ഭക്ഷണത്തിലേക്ക് പ്രവേശനം അനുവദിച്ചില്ല, പക്ഷേ സാധാരണ ലബോറട്ടറി ച to യിലേക്ക് പരസ്യമായി പ്രവേശനം തുടർന്നു. ഈ നിർബന്ധിത 'വിട്ടുനിൽക്കൽ' കാലയളവിൽ പ്രതിഫല പരിധിയും ച ഉപഭോഗവും ഞങ്ങൾ ദിവസേന വിലയിരുത്തി. റിവാർഡ് ത്രെഷോൾഡുകളിലെ ഉയർച്ച കുറഞ്ഞത് 2 ആഴ്ചയെങ്കിലും എക്സ്റ്റെൻഡഡ് ആക്സസ് എലികളിൽ രുചികരമായ ഭക്ഷണത്തിലേക്ക് ആക്സസ് ഇല്ലാതിരുന്നപ്പോൾ തുടർന്നു (ചിത്രം 3 എ). സ്വയം നിയന്ത്രിത കൊക്കെയ്ൻ 48 ൽ നിന്ന് വിട്ടുനിൽക്കുന്ന എലികളിൽ റിപ്പോർട്ട് ചെയ്യപ്പെടുന്ന റിവാർഡ് ഫംഗ്ഷനിലെ താരതമ്യേന ക്ഷണികമായ (h 13 എച്ച്) കമ്മിയുമായി ഇത് വ്യത്യാസപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു. വിപുലീകൃത ആക്സസ് എലികളിൽ കലോറി ഉപഭോഗം (ചിത്രം 3 ബി), ശരീരഭാരം ക്രമേണ കുറയുന്നു (ചിത്രം 3 സി), നിയന്ത്രിത-ആക്സസ് എലികളിൽ ഒരു പരിധിവരെ, ഈ വിട്ടുനിൽക്കൽ കാലഘട്ടത്തിൽ, മുമ്പത്തെ റിപ്പോർട്ടുകൾ 11, 15. വിട്ടുനിൽക്കലിന്റെ 14 ഡിക്ക് ശേഷം എലികൾ കൊല്ലപ്പെടുകയും ക്രസീൽ വയലറ്റ് സ്റ്റെയിനിംഗ് ഉപയോഗിച്ച് ഇലക്ട്രോഡ് പ്ലേസ്മെന്റുകൾ നിർണ്ണയിക്കുകയും ചെയ്തു (ചിത്രം 3 ഡി).

ചിത്രം 3: ഒരു കഫറ്റേരിയ ഭക്ഷണത്തിലേക്ക് വിപുലമായ ആക്സസ് ഉള്ള എലികളിൽ വിട്ടുനിൽക്കുമ്പോൾ സ്ഥിരമായ റിവാർഡ് ഡിഫൻഷനും ഹൈപ്പോഫാഗിയയും.

(എ) ഉയർന്ന കൊഴുപ്പ് ഉള്ള ഭക്ഷണരീതിയിൽ നിന്ന് വിട്ടുനിൽക്കുമ്പോൾ ബേസ്‌ലൈൻ റിവാർഡ് ത്രെഷോൾഡുകളിൽ (± സെം) നിന്നുള്ള ശരാശരി ശതമാനം മാറ്റം (ആക്സസ്: എഫ് 2,112 = 3.7, പി <0.05; സമയം: എഫ് 4,112 = 2.3, പി> 0.05; * പി <0.05 ച ow- മാത്രം ഗ്രൂപ്പുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ, പോസ്റ്റ് ഹോക് ടെസ്റ്റ്). (ബി) ഉയർന്ന കൊഴുപ്പ് ഉള്ള ഭക്ഷണത്തിലേക്ക് (ബേസ്‌ലൈൻ) പ്രവേശനത്തിന്റെ അവസാന ദിവസത്തിലും ശരാശരി ച ow മാത്രം ലഭ്യമാകുമ്പോൾ 14 ഡി വിട്ടുനിൽക്കുമ്പോഴും ശരാശരി കലോറി ഉപഭോഗം (± സെം) (ആക്സസ്: എഫ് 2,168 = 41.7, പി <0.0001 ; സമയം: F6,168 = 65.6, പി <0.0001; ആക്സസ് × സമയ ഇടപെടൽ: F12,168 = 38.3, പി <0.0001; * പി <0.05 ച ow- മാത്രം ഗ്രൂപ്പുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ, പോസ്റ്റ് ഹോക് ടെസ്റ്റ്). (സി) ഉയർന്ന കൊഴുപ്പ് ഉള്ള ഭക്ഷണത്തിലേക്ക് (ബേസ്‌ലൈൻ) പ്രവേശിച്ച അവസാന ദിവസത്തെ ശരീരഭാരവുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ ശരാശരി ശരീരഭാരത്തിൽ (± സെം) മാറ്റം വരുത്തുക, കൂടാതെ 14 ഡി വിട്ടുനിൽക്കുന്ന സമയത്ത് സാധാരണ ച ow മാത്രം ലഭ്യമാകുമ്പോൾ (പ്രവേശനം: എഫ് 1,126 = 37.2, പി <0.0001; സമയം: എഫ് 7,126 = 3.1, പി <0.01; ആക്സസ് × സമയ ഇടപെടൽ: എഫ് 7,126 = 40.9, പി <0.0001; * പി <0.05 ച ow- മാത്രം ഗ്രൂപ്പുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ, പോസ്റ്റ് ഹോക് ടെസ്റ്റ്). (ഡി) ച ow- മാത്രം (ത്രികോണങ്ങൾ), നിയന്ത്രിത-ആക്സസ് (സ്ക്വയറുകൾ), എക്സ്റ്റെൻഡഡ് ആക്സസ് (സർക്കിളുകൾ) എലികളുടെ ലാറ്ററൽ ഹൈപ്പോതലാമസിലെ ബിഎസ്ആർ ഉത്തേജിപ്പിക്കുന്ന ഇലക്ട്രോഡുകളുടെ സ്ഥാനത്തിന്റെ ചരിത്രപരമായ പുനർനിർമ്മാണം.

അമിതവണ്ണമുള്ള എലികളിലെ സ്ട്രിയാറ്റൽ D2Rs: റിവാർഡ് കമ്മിയിലെ പങ്ക്

രുചികരമായ കഫറ്റീരിയ ഭക്ഷണത്തിന്റെ അമിത ഉപഭോഗം സ്ട്രൈറ്റൽ ഡി 2 ആർ സാന്ദ്രത കുറയ്‌ക്കാമെന്ന അനുമാനത്തെ ഞങ്ങൾ അടുത്തതായി പരീക്ഷിച്ചു, ഇത് ആസക്തി പോലുള്ള റിവാർഡ് ഹൈപ്പോസെൻസിറ്റിവിറ്റി വികസിപ്പിക്കുന്നതിന് കാരണമാകുന്നു. ച ow- മാത്രം ഗ്രൂപ്പുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ (പി <0.05) വിപുലീകൃത-ആക്സസ് എലികളിൽ ശരീരഭാരത്തിൽ സ്ഥിതിവിവരക്കണക്കിൽ ഗണ്യമായ വർദ്ധനവുണ്ടാകുന്നതുവരെ ച ow- മാത്രം, നിയന്ത്രിത-ആക്സസ്, എക്സ്റ്റെൻഡഡ് ആക്സസ് എലികളുടെ ഒരു പുതിയ കൂട്ടത്തിന് കഫറ്റീരിയ ഭക്ഷണത്തിലേക്ക് പ്രവേശനം അനുവദിച്ചു. ; ചിത്രം 4 എ). നിയന്ത്രിത-ആക്സസ് അല്ലെങ്കിൽ ച ow- മാത്രം എലികളെ അപേക്ഷിച്ച് വിപുലീകരിച്ച ആക്സസ് എലികളിൽ ഡി 70 ആർ ന്റെ ഗ്ലൈക്കോസൈലേറ്റഡ് (k 2 കെ‌ഡി‌എ) മെംബ്രൻ-ബ bound ണ്ട് രൂപത്തിന്റെ സ്ട്രിയറ്റൽ എക്സ്പ്രഷൻ കുറവാണ് (ചിത്രം 4 ബി; ഓൺലൈൻ രീതികൾ കാണുക). ശരീരഭാരത്തിന്റെ (ഭാരം അല്ലെങ്കിൽ ഭാരം) ശരാശരി വിഭജനത്തിന്റെ അടിസ്ഥാനത്തിൽ ഓരോ ആക്സസ് ഗ്രൂപ്പിലെയും എലികളെ ഞങ്ങൾ രണ്ട് ഉപഗ്രൂപ്പുകളായി വിഭജിച്ചപ്പോൾ, ശരീരഭാരവും സ്ട്രൈറ്റൽ ഡി 2 ആർ എക്സ്പ്രഷനും തമ്മിലുള്ള വ്യക്തമായ വിപരീത ബന്ധം ഞങ്ങൾ കണ്ടെത്തി (ചിത്രം 4 എ, സി). ഡി 39 ആർ (സപ്ലിമെന്ററി ചിത്രം 51) 2 ന്റെ അൺ‌ഗ്ലൈക്കോസൈലേറ്റഡ് പക്വതയില്ലാത്ത (~ 4 kDa), ഇടയ്ക്കിടെ ഗ്ലൈക്കോസൈലേറ്റഡ് സൈറ്റോപ്ലാസ്മിക് (~ 17 kDa) രൂപങ്ങളുടെ സ്ഥിതിവിവരക്കണക്കിൽ കാര്യമായ കുറവുണ്ടായില്ലെന്ന് ഞങ്ങൾ കണ്ടെത്തി, ഇത് വിപുലീകൃത-ആക്സസ് എലികളിലെ സ്ട്രൈറ്റൽ ഡി 2 ആർ എക്സ്പ്രഷൻ ആയിരിക്കുമെന്ന് സൂചിപ്പിക്കുന്നു. പോസ്റ്റ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ സംവിധാനങ്ങളിലൂടെ നിയന്ത്രിക്കുന്നു.

ചിത്രം 4: ശരീരഭാരം സ്ട്രൈറ്റൽ D2R ലെവലുകളുമായി വിപരീതമായി ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു.

(എ) ശരീരഭാരത്തിന്റെ ശരാശരി വിഭജനത്തെ അടിസ്ഥാനമാക്കി ച ow- മാത്രം, നിയന്ത്രിത-ആക്സസ്, എക്സ്റ്റെൻഡഡ് ആക്സസ് എലികളെ ഓരോ ആക്സസ് അവസ്ഥയ്ക്കും രണ്ട് ഗ്രൂപ്പുകളായി തിരിച്ചിരിക്കുന്നു: ലൈറ്റ് (എൽ) അല്ലെങ്കിൽ ഹെവി (എച്ച്). (ബി) വെസ്റ്റേൺ ബ്ലോട്ടിംഗ് ഉപയോഗിച്ച് അളക്കുന്ന ഓരോ ഗ്രൂപ്പിലെയും എല്ലാ എലികളിൽ നിന്നും ഡി 2 ആർ ലെവലിൽ നിന്നും മുഴുവൻ സ്ട്രൈറ്റൽ കോംപ്ലക്സും ശേഖരിച്ചു. മെംബ്രൻ-അനുബന്ധ D2R ബാൻഡ് 70 kDa ആയി പരിഹരിച്ചു, കൂടാതെ പ്രോട്ടീൻ-ലോഡിംഗ് നിയന്ത്രണം ചുവടെ പ്രദർശിപ്പിക്കും (β-actin, 43 kDa). പൂർണ്ണ ദൈർ‌ഘ്യമുള്ള ഇമ്യൂണോബ്ലോട്ടുകൾ‌ അനുബന്ധ ചിത്രം 12 ൽ‌ കാണിച്ചിരിക്കുന്നു. (സി) ച ow- മാത്രം, നിയന്ത്രിത-ആക്‍സസ്, എക്സ്റ്റെൻഡഡ്-ആക്സസ് എലികളുടെ സ്ട്രൈറ്റത്തിലെ ഡി 2 ആർ ന്റെ ആപേക്ഷിക അളവ് ഡെൻസിറ്റോമെട്രി ഉപയോഗിച്ച് കണക്കാക്കി (F2,6 = 5.2, പി <0.05, പ്രധാനം ആക്‌സസ് പ്രഭാവം; ച ow- മാത്രം-എൽ ഗ്രൂപ്പുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ * പി <0.05, ** പി <0.01).

അടുത്തതായി, മസ്തിഷ്ക റിവാർഡ് ഫംഗ്ഷനിലേക്കുള്ള സ്ട്രൈറ്റൽ ഡിഎക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ്ആറിൽ ഡയറ്റ്-ഇൻഡ്യൂസ്ഡ് റിഡക്ഷനുകളുടെ പ്രവർത്തനപരമായ പ്രസക്തി പരിശോധിക്കുന്നതിന്, ഡി‌എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്ആർ (ലെന്റി-ഡിഎക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ്ആർ‌എസിനെ തകർക്കുന്നതിനായി ഒരു ഹ്രസ്വ ഹെയർ‌പിൻ ഇടപെടുന്ന ആർ‌എൻ‌എ (എസ്ആർ‌എൻ‌എ) നൽകുന്നതിന് ഞങ്ങൾ ഒരു ലെന്റിവൈറൽ വെക്റ്റർ രൂപകൽപ്പന ചെയ്യുകയും സാധൂകരിക്കുകയും ചെയ്തു; 2 ഉം അനുബന്ധ ചിത്രം 2). കഫറ്റീരിയ ഭക്ഷണത്തിലേക്ക് വിപുലമായ പ്രവേശനം അനുവദിച്ച ഉടൻ തന്നെ ലെന്റി-ഡിഎക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ്ആർ‌എസുമായി ചികിത്സിച്ച എലികളിൽ റിവാർഡ് പരിധി വർദ്ധിക്കാൻ തുടങ്ങി, അതേസമയം താരതമ്യേന ഹ്രസ്വ കാലയളവിൽ ശൂന്യമായ ലെന്റിവൈറസ് വെക്റ്റർ (ലെന്റി-കൺട്രോൾ) ഉപയോഗിച്ച് ചികിത്സിച്ച എക്സ്റ്റെൻഡഡ് ആക്സസ് എലികളിൽ റിവാർഡ് പരിധി മാറ്റമില്ലാതെ തുടർന്നു. കഫറ്റീരിയ ഡയറ്റിലേക്കുള്ള ആക്സസ് (2 d; ചിത്രം 5a). ടാസ്ക് പ്രകടനത്തിലെ അപര്യാപ്തതകൾക്ക് ഈ പ്രഭാവം ദ്വിതീയമല്ലെന്ന് കാണിക്കുന്ന എലികളുടെ രണ്ട് ഗ്രൂപ്പുകളിലും പ്രതികരണ ലേറ്റൻസികൾ മാറ്റമില്ല (സപ്ലിമെന്ററി ചിത്രം. 5). ഒരേ കാലയളവിൽ മാത്രം ച ow വിന് പ്രവേശനമുള്ള ലെന്റി-ഡിഎക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ്ആർ‌എസ് അല്ലെങ്കിൽ ലെന്റി-കൺ‌ട്രോൾ ഉപയോഗിച്ച് ചികിത്സിച്ച എലികളിലും റിവാർഡ് ത്രെഷോൾ‌ഡുകൾ‌ മാറ്റമില്ല. (ചിത്രം 2b).

എല്ലാ എലികൾക്കും സ്റ്റാൻഡേർഡ് ച ow യിലേക്ക് മാത്രം പ്രവേശനമുണ്ടായിരുന്നപ്പോൾ, അധിക എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് ഡി വിട്ടുനിൽക്കുന്ന സമയത്ത് പരിധി സ്ഥിരമായി ഉയർത്തുന്നു (അനുബന്ധ ചിത്രം. എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്). അതിനാൽ സ്‌ട്രാറ്റിയൽ D15R ന്റെ നോക്ക്ഡ down ൺ ഡയറ്റ്-ഇൻഡ്യൂസ്ഡ് റിവാർഡ് ഹൈപ്പോഫംഗ്ഷന്റെ അപകടസാധ്യത വർദ്ധിപ്പിച്ചുവെങ്കിലും ബ്രെയിൻ റിവാർഡ് സിസ്റ്റങ്ങളുടെ അടിസ്ഥാന പ്രവർത്തനത്തിൽ മാറ്റം വരുത്തിയില്ല.

ചിത്രം 5: സ്ട്രൈറ്റൽ D2R എക്സ്പ്രഷന്റെ ലെന്റിവൈറസ്-മെഡിയേറ്റഡ് നോക്ക്ഡ down ൺ.

(എ) ലെന്റി-ഡി 2 ആർ‌എസ് അമിതമായി സമ്മർദ്ദം ചെലുത്തിയ സ്ട്രൈറ്റൽ ഏരിയകളുടെ ഗ്രാഫിക്കൽ പ്രാതിനിധ്യം. ഇടത് സ്‌ട്രാറ്റിയൽ അർദ്ധഗോളത്തിലെ പച്ച സർക്കിളുകൾ വൈറൽ കഷായങ്ങൾ ടാർഗെറ്റുചെയ്‌ത സ്ഥലങ്ങളെ പ്രതിനിധീകരിക്കുന്നു. ലെന്റി-ഡി 2 ആർ‌എസ് എലിയുടെ തലച്ചോറിൽ നിന്നുള്ള ഗ്രീൻ ഫ്ലൂറസെന്റ് പ്രോട്ടീനിനായുള്ള (ജി‌എഫ്‌പി) വലത് സ്ട്രൈറ്റൽ അർദ്ധഗോളത്തിലെ പച്ച കറ. (ബി) ലെന്റി-ഡി 2 ആർ‌ഷ് എലികളുടെ സ്ട്രിയാറ്റത്തിൽ ഡി 2 ആർ എക്സ്പ്രഷന്റെ കുറവുണ്ടായ പ്രതിനിധി ഇമ്യൂണോബ്ലോട്ട്. പൂർണ്ണ ദൈർഘ്യമുള്ള ഇമ്യൂണോബ്ലോട്ടുകൾ അനുബന്ധ ചിത്രം 13. ൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നു. (സി) ഡെൻസിറ്റോമെട്രി ഉപയോഗിച്ച് കണക്കാക്കിയ ലെന്റി-കൺട്രോൾ, ലെന്റി-ഡി 2 ആർ‌ഷ് എലികളുടെ സ്ട്രൈറ്റത്തിലെ ആപേക്ഷിക അളവ് (* പി <2 ലെന്റി-കൺട്രോൾ ഗ്രൂപ്പുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ, പോസ്റ്റ് ഹോക് ടെസ്റ്റ് ). (d) ലെന്റി-ഡി 0.05 ആർ‌എസ് വെക്റ്റർ സ്ട്രൈറ്റത്തിലെ ഗ്ലിയൽ സെല്ലുകളുടെ അണുബാധ കണ്ടെത്തിയില്ല. ഗ്രീൻ സ്റ്റെയിനിംഗ് വൈറസിൽ നിന്നുള്ള ജി‌എഫ്‌പി; ചുവപ്പ് എന്നത് ആസ്ട്രോസൈറ്റ് മാർക്കർ ഗ്ലിയൽ ഫൈബ്രില്ലറി അസിഡിക് പ്രോട്ടീൻ (GFAP); സെൽ ന്യൂക്ലിയുകൾ നീലനിറത്തിലുള്ള DAPI സ്റ്റെയിനിംഗ് ഉപയോഗിച്ച് ഹൈലൈറ്റ് ചെയ്യുന്നു. വെളുത്ത അമ്പടയാളങ്ങൾ ഗ്ലൈയോസിസിന്റെ പ്രാദേശികവൽക്കരിച്ച പ്രദേശത്തെ സൂചിപ്പിക്കുന്നത് സ്ട്രൈറ്റത്തിൽ വൈറസ് കുത്തിവച്ച സ്ഥലത്ത് മാത്രമാണ്, വൈറസ് വ്യാപിച്ച ചുറ്റുമുള്ള ടിഷ്യൂകളിലല്ല. ഈ പ്രദേശത്ത് പോലും, ജ്യോതിശാസ്ത്രത്തിൽ ഒന്നും തന്നെ ജി‌എഫ്‌പി പോസിറ്റീവ് അല്ല. മാഗ്‌നിഫൈഡ് ഇമേജിലെ മഞ്ഞ അമ്പടയാളങ്ങൾ കണ്ടെത്തിയ സാധാരണ ജി‌എഫ്‌പി-നെഗറ്റീവ് ആസ്ട്രോസൈറ്റുകളെ എടുത്തുകാണിക്കുന്നു. (ഇ) ലെന്റി-ഡി 2 ആർ‌എസ് വെക്റ്റർ സ്ട്രൈറ്റത്തിൽ ഉയർന്ന അളവിലുള്ള ന്യൂറോണൽ അണുബാധ. വൈറസിൽ നിന്നുള്ള ജി‌എഫ്‌പി ആണ് പച്ചനിറത്തിലുള്ള സ്റ്റെയിനിംഗ്; ചുവപ്പ് ന്യൂറോണൽ ന്യൂക്ലിയർ മാർക്കർ ന്യൂൻ; സെൽ ന്യൂക്ലിയുകൾ നീലനിറത്തിലുള്ള DAPI സ്റ്റെയിനിംഗ് ഉപയോഗിച്ച് ഹൈലൈറ്റ് ചെയ്യുന്നു. മാഗ്‌നിഫൈഡ് ഇമേജിലെ മഞ്ഞ അമ്പടയാളങ്ങൾ സ്ട്രൈറ്റത്തിലെ ജി‌എഫ്‌പി-പോസിറ്റീവ്, ന്യൂൻ-പോസിറ്റീവ് ന്യൂറോണുകളെ ഹൈലൈറ്റ് ചെയ്യുന്നു. (എഫ്) ലെന്റി-ഡി 2 ആർ‌എച്ച് എലികളുടെ സ്ട്രൈറ്റത്തിൽ വൈറസ് ബാധിച്ച (ജി‌എഫ്‌പി-പോസിറ്റീവ്) ന്യൂറോണിന്റെ ഉയർന്ന മാഗ്നിഫിക്കേഷൻ ചിത്രം, ഇത് ഇടത്തരം സ്പൈനി ന്യൂറോണുകളുടെ സാധാരണ രൂപാന്തര സവിശേഷതകൾ കാണിക്കുന്നു.

ചിത്രം 6: സ്ട്രാറ്ററ്റൽ D2R ന്റെ നോക്ക്ഡ down ൺ ഒരു കഫറ്റീരിയ ഭക്ഷണത്തിലേക്ക് വിപുലമായ ആക്സസ് ഉള്ള എലികളിലെ അപര്യാപ്തതയ്ക്ക് പ്രതിഫലം നൽകാനുള്ള സാധ്യത വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നു.

(എ) ലെന്റി-കൺട്രോൾ, ലെന്റി-ഡി 2 ആർ‌ഷ് എലികളിലെ അടിസ്ഥാന റിവാർഡ് ത്രെഷോൾഡുകളിൽ നിന്നുള്ള ശരാശരി (± സെം) ശതമാനം മാറ്റം, തുടർച്ചയായി 14 ദിവസത്തേക്ക് കഫറ്റീരിയ ഭക്ഷണത്തിലേക്ക് പ്രവേശനം വർദ്ധിപ്പിച്ചു (വൈറസ്: എഫ് 1,156 = 5.9, പി <0.05; സമയം: സമയം: F13,156 = 2.2, പി <0.05; വൈറസ് × സമയ ഇടപെടൽ: F13,156 = 2.2, പി <0.05; # പി <0.05, ഇന്ററാക്ഷൻ ഇഫക്റ്റ്). . (സി) 2 ഡി ച ow സമയത്ത് മാത്രം എലികളുടെ കലോറി ഉപഭോഗം അല്ലെങ്കിൽ വിപുലീകൃത ആക്സസ് (ആക്സസ്: F14 = 2,28, *** പി <135.6). (d) 0.0001 d ച ow മാത്രം അല്ലെങ്കിൽ വിപുലീകൃത ആക്സസ് സമയത്ത് ശരാശരി (± sem) ശരീരഭാരം (ആക്സസ്: F14 = 2,28, P <96.4; *** P <0.0001, ആക്സസ്സിന്റെ പ്രധാന ഫലം).

ചൗ-മാത്രം അല്ലെങ്കിൽ എക്സ്റ്റെൻഡഡ്-ആക്സസ് സാഹചര്യങ്ങളിൽ (സപ്ലിമെന്ററി അത്തി. 6, 6) ലെന്റി-ഡിഎക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ്ആർ‌എസിലും അനുബന്ധ ലെന്റി-കൺ‌ട്രോൾ ഗ്രൂപ്പുകളിലും കലോറിക് ഉപഭോഗവും (ചിത്രം 2c) ശരീരഭാരവും (ചിത്രം 8d) സമാനമാണെന്ന് ഞങ്ങൾ കണ്ടെത്തി. അതിനാൽ, രുചികരമായ ഭക്ഷണം ഉപഭോഗത്തിന് സ available ജന്യമായി ലഭ്യമാകുമ്പോൾ, സ്ട്രാറ്ററ്റൽ ഡിഎക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ്ആർ നോക്ക്ഡ down ൺ കഫറ്റീരിയ ഭക്ഷണത്തിനോ മുൻ‌ഗണന കലോറി ഉപഭോഗത്തിനോ മാറ്റം വരുത്തിയില്ല.

അമിതവണ്ണമുള്ള എലികളിൽ നിർബന്ധിത ഭക്ഷണം: സ്ട്രൈറ്റൽ D2R നായുള്ള റോൾ

കഫറ്റീരിയ ഭക്ഷണത്തിലേക്ക് വിപുലമായ ആക്സസ് ഉള്ള എലികളിൽ നിർബന്ധിത ഭക്ഷണം കഴിക്കുന്നത് ഉണ്ടാകാമെന്നും സ്ട്രാറ്ററ്റൽ ഡി 2 ആർ സിഗ്നലിംഗിലെ അപര്യാപ്തതകൾ ഈ ഫലത്തിന് കാരണമായേക്കാമെന്നും ഞങ്ങൾ അടുത്തതായി പരീക്ഷിച്ചു. വിപുലീകരിച്ച എലികളിൽ സ്ഥിതിവിവരക്കണക്കിൽ ഗണ്യമായ ഭാരം വർദ്ധിക്കുന്നത് വരെ ച ow- മാത്രം, നിയന്ത്രിത-ആക്സസ്, എക്സ്റ്റെൻഡഡ്-ആക്സസ് എലികളുടെ ഒരു പുതിയ കൂട്ടത്തിന്> 40 d വരെ കഫറ്റീരിയ ഭക്ഷണത്തിലേക്ക് പ്രവേശനം അനുവദിച്ചു (ച ow- മാത്രം എലികളുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ P <0.05; ഡാറ്റ അല്ല. കാണിച്ചിരിക്കുന്നു). എലികളുടെ മൂന്ന് ഗ്രൂപ്പുകളും സ്ഥിരമായി കഴിക്കുന്നത് വരെ ഒരു ഓപ്പറേറ്റീവ് ചേംബറിൽ 30-5 ഡി വരെ കഫറ്റീരിയ ഭക്ഷണത്തിലേക്ക് പ്രതിദിനം 7 മിനിറ്റ് പ്രവേശനം മാത്രമേ അനുവദിച്ചിട്ടുള്ളൂ (ദൈനംദിന ഉപഭോഗത്തിൽ <10% വ്യതിയാനം എന്ന് നിർവചിക്കപ്പെടുന്നു). ഓരോ ആക്സസ് അവസ്ഥയിലെയും പകുതി എലികൾ പിന്നീട് ഒരു ഷോട്ട് (കണ്ടീഷൻഡ് ഉത്തേജനം) ജോടിയാക്കി, ഫുട് ഷോക്ക് (ശിക്ഷിക്കപ്പെട്ട ഗ്രൂപ്പ്) വിതരണം ചെയ്യുന്നു, അതേസമയം ഓരോ ഗ്രൂപ്പിലെയും ശേഷിക്കുന്ന എലികൾ കാൽ വെളിച്ചത്തിന്റെ അഭാവത്തിൽ ക്യൂ ലൈറ്റിന് വിധേയമായി (ശിക്ഷിക്കപ്പെടാത്ത ഗ്രൂപ്പ് ). പരീക്ഷണ ദിവസം, രുചികരമായ ഭക്ഷണ ഉപഭോഗത്തിൽ മാത്രം ക്യൂ ലൈറ്റ് എക്സ്പോഷറിന്റെ ഫലങ്ങൾ ഞങ്ങൾ പരിശോധിച്ചു (ചിത്രം 7; ഓൺലൈൻ രീതികൾ കാണുക). വിപുലീകൃത-ആക്സസ് എലികളേക്കാൾ (ചിത്രം 30 എ, ബി) 7 മിനിറ്റ് ബേസ്‌ലൈൻ സെഷനുകളിൽ ശരാശരി കലോറി ഉപഭോഗം ച ow- മാത്രം, നിയന്ത്രിത-ആക്സസ് എലികളിൽ കൂടുതലാണെന്ന് ഞങ്ങൾ കണ്ടെത്തി. 30 മിനിറ്റ് ഇടവിട്ടുള്ള ആക്സസ് സെഷനുകളിൽ ച ow- മാത്രം, നിയന്ത്രിത-ആക്സസ് എലികൾ രുചികരമായ ഭക്ഷണത്തെ ആശ്രയിച്ചിരിക്കുന്നുവെന്ന് ഇത് സൂചിപ്പിക്കുന്നു, ഈ എലികൾ അവരുടെ ദൈനംദിന കലോറി ഉപഭോഗത്തിന്റെ 40-50% വരെ ഉപയോഗിച്ചു, അതായത് k 100 കിലോ കലോറി, ഈ സെഷനുകളിൽ (ചിത്രം 7 എ, ബി). ഇതിനു വിപരീതമായി, എക്സ്റ്റെൻഡഡ്-ആക്സസ് എലികൾ ഈ അമിത തീറ്റ സ്വഭാവം വികസിപ്പിക്കുന്നതിനെ പ്രതിരോധിക്കുന്നതായി തോന്നുന്നു, ഒരുപക്ഷേ> തുടർച്ചയായ 40 ദിവസത്തേക്ക് രുചികരമായ ഭക്ഷണത്തിലേക്ക് പരിധിയില്ലാതെ പ്രവേശിച്ചതിന്റെ ചരിത്രം മാറ്റാൻ താരതമ്യേന വഴങ്ങാത്ത ഭക്ഷണ രീതികൾ സ്ഥാപിച്ചതുകൊണ്ടാകാം. പരീക്ഷണ ദിവസത്തിൽ, അടിസ്ഥാന കാലയളവിലെ കഴിക്കലുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ ച ow- മാത്രം, നിയന്ത്രിത-ആക്സസ് അല്ലെങ്കിൽ എക്സ്റ്റെൻഡഡ് ആക്സസ് ഗ്രൂപ്പുകളിൽ നിന്നുള്ള ശിക്ഷിക്കപ്പെടാത്ത എലികളിൽ ക്യൂ ലൈറ്റ് റീപ്ലേയുടെ സ്ഥിതിവിവരക്കണക്കുകളുടെ പ്രാധാന്യമൊന്നും ഞങ്ങൾ നിരീക്ഷിച്ചില്ല (ചിത്രം 7 എ). അതിനാൽ ക്യൂ ലൈറ്റിന് മാത്രം പ്രചോദനാത്മകതയില്ല. ശിക്ഷിക്കപ്പെട്ട എലികളിൽ, ഷോക്ക്-ജോടിയാക്കിയ ക്യൂ ലൈറ്റ്, ച ow- മാത്രം, നിയന്ത്രിത-ആക്സസ് എലികളിൽ രുചികരമായ ഭക്ഷണം കഴിക്കുന്നത് ഗണ്യമായി കുറച്ചു. എന്നിരുന്നാലും, ക്യൂ ലൈറ്റിന് എക്സ്റ്റെൻഡഡ് ആക്സസ് എലികളിലെ രുചികരമായ ഭക്ഷണം കഴിക്കുന്നതിൽ യാതൊരു സ്വാധീനവും ഇല്ല, ഇത് പ്രതികൂല പ്രവചനങ്ങൾക്ക് പ്രതികൂലമായ പാരിസ്ഥിതിക സൂചനകളോട് അവയുടെ ഉപഭോഗം അശ്രദ്ധമാണെന്ന് കാണിക്കുന്നു. എക്സ്റ്റെൻഡഡ് ആക്സസ് എലികളിലെ അടിസ്ഥാന energy ർജ്ജ ഉപഭോഗം മറ്റ് ഗ്രൂപ്പുകളേക്കാൾ കുറവാണ്. എന്നിരുന്നാലും, സമാന സമയ കാലയളവുകളിൽ ച ow കഴിക്കുന്നത് വളരെ കുറവായതിനാൽ (ചിത്രം 7 ഡി), ഇത് ഞങ്ങളുടെ കണ്ടെത്തലുകളെ ആശയക്കുഴപ്പത്തിലാക്കുന്ന ഒരു 'ഫ്ലോർ ഇഫക്റ്റിനെ' പ്രതിനിധീകരിക്കാൻ സാധ്യതയില്ല. മയക്കുമരുന്ന് 18-ലേക്കുള്ള വിപുലീകൃത ആക്സസ് ചരിത്രമുള്ള എലികളിൽ കാണപ്പെടുന്ന നിർബന്ധിത കൊക്കെയ്ൻ എടുക്കുന്നതിന് സമാനമായ രീതിയിൽ എക്സ്റ്റെൻഡഡ് ആക്സസ് എലികളിൽ നിർബന്ധിത-പോലുള്ള ഭക്ഷണ സ്വഭാവം ഉയർന്നുവരുമെന്ന ആശയത്തെ ഞങ്ങളുടെ ഡാറ്റ പിന്തുണയ്ക്കുന്നു.

ചിത്രം 7: രുചികരമായ ഭക്ഷണത്തിനായി പ്രതികരിക്കുന്നതുപോലുള്ള പ്രതികരണം.

(എ) 30 മിനുട്ട് ദൈർഘ്യമുള്ള സെഷനുകളിലും ശിക്ഷാ ദിവസങ്ങളിലും എലികളിലെ രുചികരമായ ഭക്ഷണ ഉപഭോഗം, പരീക്ഷണ ദിവസം എലികൾ ഒരു ന്യൂട്രൽ കണ്ടീഷൻഡ് ഉത്തേജകത്തിന് വിധേയമാകുമ്പോൾ, മുമ്പ് ദോഷകരമായ കാൽ ഞെട്ടലുമായി ജോടിയാക്കിയിട്ടില്ല (ആക്സസ്: F2,20 ച ow- മാത്രം എലികളുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ = 5.2, പി <0.05; # പി <0.05). (ബി) 30 മിനുട്ട് ദൈർഘ്യമുള്ള സെഷനുകളിലും ശിക്ഷാ എലികളിലും രുചികരമായ ഭക്ഷണ ഉപഭോഗം, പരീക്ഷണ ദിവസം എലികൾ ഒരു കണ്ടീഷൻഡ് ഉത്തേജനത്തിന് വിധേയമായപ്പോൾ മുമ്പ് വിഷമയമായ കാൽ ഞെട്ടലുമായി ജോടിയാക്കിയിരുന്നു (പ്രവേശനം: F2,21 = 3.9 , പി <0.05; ക്യൂ: എഫ് 1,21 = 8.6, പി <0.01; ആക്സസ് × ക്യൂ ഇന്ററാക്ഷൻ: എഫ് 2,21 = 4.7, പി <0.05; * പി <0.05 ബേസ്‌ലൈൻ സെഷനിലെ ഉപഭോഗവുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ, # പി <0.05 ച ow- മാത്രം എലികൾ). (സി) 30 മിനിറ്റ് ബേസ്‌ലൈൻ സെഷനുകളിലും, ലെന്റി-കൺട്രോൾ, ലെന്റി-ഡി 2 ആർ‌എസ് എലികളിലെ പരീക്ഷണ ദിവസത്തിലും ശരാശരി ഭക്ഷണക്രമം ഉപഭോഗം ചെയ്യുക 1,26 = 29.7, പി <0.0001; * പി <0.05, ** പി <0.01 അടിസ്ഥാന സെഷനുകളിലെ ഉപഭോഗവുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ, പോസ്റ്റ് ഹോക് ടെസ്റ്റ്). . 30, പി <2; * പി <1,26, ** പി <44.9 അടിസ്ഥാന സെഷനുകളിലെ ഉപഭോഗവുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ, പോസ്റ്റ് ഹോക് ടെസ്റ്റ്).

അവസാനമായി, ലെന്റി-കൺട്രോൾ, ലെന്റി-ഡി 2 ആർ‌ഷ് എലികൾ എന്നിവയിലെ ഭക്ഷണം കഴിക്കുന്നതിലുള്ള ശിക്ഷ-ജോടിയാക്കിയ കണ്ടീഷൻഡ് ഉത്തേജനത്തിന്റെ ഫലങ്ങൾ ഞങ്ങൾ പരിശോധിച്ചു, അവയ്ക്ക് മുമ്പ് ച ow മാത്രം പ്രവേശനമുണ്ടായിരുന്നു അല്ലെങ്കിൽ കഫറ്റീരിയ ഭക്ഷണത്തിലേക്ക് വിപുലമായ ആക്സസ് ഉണ്ടായിരുന്നു (ചിത്രം 6 ൽ നിന്നുള്ള എലികൾ). 30 മിനിറ്റുള്ള ബേസ്‌ലൈൻ സെഷനുകളിൽ അടിസ്ഥാനപരമായ രുചികരമായ ഭക്ഷണം കഴിക്കുന്നത് സമാനമായി ഉയർന്നതാണെന്ന് ഞങ്ങൾ കണ്ടെത്തി (k 40 കിലോ കലോറി) നാല് ഗ്രൂപ്പുകളിലും (ചിത്രം 7 സി). കൂടാതെ, കണ്ടീഷനിംഗ് സെഷനുകളിലും പരീക്ഷണ ദിനത്തിലും എലികളുടെ നാല് ഗ്രൂപ്പുകൾക്കിടയിലും ആകെ ദൈനംദിന ച ow ഉപഭോഗം (ഹോം കൂട്ടിൽ) സമാനമായിരുന്നു (അനുബന്ധ ചിത്രം 10). അതിനാൽ ഭക്ഷണശാലയിലേക്കുള്ള ഭക്ഷണത്തിന്റെ 14 ഡി മുൻ‌കൂട്ടി പ്രവേശനം എലികളിൽ‌ കാണുന്നതുപോലെയുള്ള അമിത ഭക്ഷണ രീതി തടയുന്നതിന് പര്യാപ്തമല്ല> കഫറ്റീരിയ ഭക്ഷണത്തിലേക്ക് 40 ഡി വിപുലീകൃത ആക്‍സസ് ഉണ്ടായിരുന്നു (ചിത്രം 7 എ, ബി). പ്രതികൂലമായ ക്യൂ ലൈറ്റ് ഉത്തേജനം മുമ്പ് ച ow- മാത്രം ആക്സസ് ഉണ്ടായിരുന്ന ലെന്റി-കൺട്രോൾ, ലെന്റി-ഡി 2 ആർ‌ഷ് എലികളിലെ രുചികരമായ ഭക്ഷണം കഴിക്കുന്നത് തടസ്സപ്പെടുത്തി (ചിത്രം 7 സി). അതുപോലെ, പ്രതികൂലമായ കണ്ടീഷൻഡ് ഉത്തേജനം ലെന്റി-കൺട്രോൾ എലികളിലെ രുചികരമായ ഭക്ഷണം കഴിക്കുന്നതിനെ തടസ്സപ്പെടുത്തി, മുമ്പ് കഫറ്റീരിയ ഭക്ഷണത്തിലേക്ക് 14 ഡി വിപുലീകൃത ആക്സസ് ഉണ്ടായിരുന്നു. ഇതിനു വിപരീതമായി, ലെന്റി-ഡി 2 ആർ‌എച്ച് എലികളിലെ ഭക്ഷ്യയോഗ്യമായ ഭക്ഷണ ഉപഭോഗത്തെ പ്രതികൂലമായ കണ്ടീഷൻഡ് ഉത്തേജനം ബാധിച്ചിട്ടില്ല, മുമ്പ് കഫറ്റീരിയ ഭക്ഷണത്തിലേക്ക് 14 ഡി വിപുലീകൃത ആക്സസ് ഉണ്ടായിരുന്നു (ചിത്രം 7 സി). ടെസ്റ്റ് സെഷനുശേഷം 48 മണിക്കൂർ രേഖപ്പെടുത്തിയപ്പോൾ ഈ എലികളിൽ ബി‌എസ്‌ആർ പരിധി ഗണ്യമായി ഉയർന്നിരുന്നു, അതേസമയം മറ്റ് മൂന്ന് ഗ്രൂപ്പുകളിലെ എലികളിൽ പരിധി സ്ഥിരവും മാറ്റവുമില്ലാതെ തുടർന്നു.

(അനുബന്ധ ചിത്രം 11). ക്ലാസിക്കൽ കണ്ടീഷനിംഗ് പ്രക്രിയകളിലെ വൈകല്യങ്ങൾക്ക് ദ്വിതീയമല്ല ലെന്റി-ഡിഎക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ്ആർ‌എസിലെ എക്സ്റ്റെൻഡഡ്-ആക്സസ് എലികളിലെ കണ്ടീഷൻഡ് ഉത്തേജക-പ്രേരണ അടിച്ചമർത്തലിനോടുള്ള പ്രതിരോധം സ്ഥിരീകരിക്കുന്നതിന്, കുറഞ്ഞ പാലറ്റബിൾ സ്റ്റാൻഡേർഡ് ച ow ഉപഭോഗത്തിൽ പ്രതികൂലമായ കണ്ടീഷൻഡ് ഉത്തേജകത്തിന്റെ ഫലങ്ങൾ ഞങ്ങൾ പരീക്ഷിച്ചു. എലികളുടെ നാല് ഗ്രൂപ്പുകളും. രുചികരമായ ഭക്ഷണത്തിന്റെ അമിത ഉപഭോഗത്തിന് വിപരീതമായി, 2 മിൻ ബേസ്‌ലൈൻ സെഷനുകളിൽ (ചിത്രം 2d) എലികളുടെ നാല് ഗ്രൂപ്പുകളും ചെറിയ ച ow (~ 30 kCal) കഴിക്കുന്നതായും നാല് ഗ്രൂപ്പുകളിലും ച ow കഴിക്കുന്നത് തടസ്സപ്പെട്ടതായും ഞങ്ങൾ കണ്ടെത്തി. പ്രതികൂലമായ കണ്ടീഷൻഡ് ഉത്തേജകത്തിന് എക്സ്പോഷർ ചെയ്യുമ്പോൾ സമാനമായ അളവ് (ചിത്രം 7d). ഈ ഡാറ്റ തെളിയിക്കുന്നത് സ്‌ട്രാറ്റിയൽ ഡിഎക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ്ആറുകളുടെ നോക്ക്ഡ down ൺ രുചികരമായ ഭക്ഷണം കഴിക്കാൻ നിർബന്ധിതമാകുന്നതിന്റെ ആവിർഭാവത്തെ ത്വരിതപ്പെടുത്തി, പക്ഷേ വിപുലീകൃത ആക്സസ് ചരിത്രമുള്ള എലികളിൽ മാത്രമാണ്. മാത്രമല്ല, ബി‌എസ്‌ആർ പരിധി ഉയർത്തിയ ലെന്റി-ഡിഎക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ്ആർ‌എച്ച് എലികളിൽ മാത്രമേ നിർബന്ധിത ഭക്ഷണം കണ്ടെത്തിയിട്ടുള്ളൂ, നിർബന്ധിത ഭക്ഷണം തേടുന്നതിന്റെ ആവിർഭാവത്തിന് ഡയറ്റ്-ഇൻഡ്യൂസ്ഡ് റിവാർഡ് ഹൈപ്പോഫംഗ്ഷൻ ഒരു മുൻഗാമിയായിരിക്കാം.

സംവാദം

കൊഴുപ്പ് കൂടിയ ഉയർന്ന കൊഴുപ്പ് ഉള്ള ഭക്ഷണത്തിലേക്കുള്ള പ്രവേശനം അമിതവണ്ണത്തിന്റെ ഒരു പ്രധാന അപകടസാധ്യതയാണ്. വളരെ രുചികരമായ കഫറ്റീരിയ-ശൈലിയിലുള്ള ഭക്ഷണത്തിലേക്കുള്ള ആക്സസ് അമിതമായി ആഹാരം കഴിക്കുന്നതിനും ശരീരഭാരം കൂട്ടുന്നതിനും എലികളിലെ ബി‌എസ്‌ആർ പരിധി ക്രമേണ ഉയർത്തുന്നതിനും കാരണമായതായി ഞങ്ങൾ കണ്ടെത്തി. മസ്തിഷ്ക റിവാർഡ് സർക്യൂട്ടുകളുടെ പ്രതികരണശേഷി ക്രമേണ കുറയ്ക്കുന്നതിലൂടെ ബി‌എസ്‌ആർ പരിധിയിലെ ഈ സ്വാധീനം വിശദീകരിക്കാം, ഇത് ഭക്ഷണ നിയന്ത്രണവും ശരീരഭാരം കുറയ്ക്കലും എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് വർദ്ധിപ്പിക്കും എന്ന വസ്തുതയുമായി പൊരുത്തപ്പെടുന്ന ഒരു വ്യാഖ്യാനമാണ്, അതേസമയം അമിതമായ അമിത ഭക്ഷണം എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ് കുറയുന്നു, എലികളിൽ ബി‌എസ്‌ആറിനായി പ്രതികരിക്കുന്നു. ഈ കണ്ടെത്തൽ ഒരു ഇൻട്രാഗാസ്ട്രിക് ഫീഡിംഗ് ട്യൂബ് എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ് വഴി എലികൾക്ക് അമിതമായി ഭക്ഷണം നൽകുന്നത്, ഗ്യാസ്ട്രിക് ഡിസ്റ്റൻഷൻ അല്ലെങ്കിൽ ഇൻട്രാവൈനസ് ഗ്ലൂക്കോൺ ഇൻഫ്യൂഷൻ എന്നിവ പോസ്റ്റ്‌ട്രാൻഡിയൽ സാറ്റിറ്റി എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ്, എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ്, എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് എന്നിവ അനുകരിക്കുന്നു, ലാറ്ററൽ ഹൈപ്പോഥലാമിക് ബി‌എസ്‌ആറിന് പ്രതിഫലം നൽകുന്നതിനുള്ള പ്രതികരണം കുറയുന്നു. ഉത്തേജനം 19. എലികളുടെ ഭാരം ~ 20 g വർദ്ധിക്കുന്നതുവരെ ആവർത്തിച്ച് ഇൻട്രാഗാസ്ട്രിക് ട്യൂബുകളിലൂടെ ഭക്ഷണം നൽകുന്നതായി മുമ്പത്തെ പ്രവൃത്തികൾ തെളിയിച്ചിട്ടുണ്ട്, അതുപോലെ തന്നെ ബി‌എസ്‌ആറിനോടുള്ള പ്രതികരണ നിരക്ക് കുറയുന്നു, ഇത് ശരീരഭാരം നോർമലൈസ് ചെയ്യുന്നതുവരെ നിലനിൽക്കുന്നു. എലികളിലെ ഈ കണ്ടെത്തലുകളിലേതുപോലെ, ലാറ്ററൽ ഹൈപ്പോഥലാമിക് ബി‌എസ്‌ആറിനായുള്ള പൂച്ചകളോട് പ്രതികരിക്കുന്നത് സാറ്റിയേഷൻ എക്സ്എൻ‌എം‌എക്‌സിന് മുമ്പത്തെ ഭക്ഷണം നൽകുന്നത് തടഞ്ഞു, ഇത് മസ്തിഷ്ക പ്രതിഫല പ്രവർത്തനവും ഉപാപചയ അവസ്ഥയും തമ്മിലുള്ള ഇടപെടലുകൾ സംരക്ഷിക്കപ്പെടുന്നുവെന്നും ഇത് മനുഷ്യരിലും സംഭവിക്കാൻ സാധ്യതയുണ്ടെന്നും കാണിക്കുന്നു. പാശ്ചാത്യ സമൂഹങ്ങളിലെ നിലവിലെ അമിത വണ്ണത്തിന്റെ പകർച്ചവ്യാധിയുടെ പ്രധാന പാരിസ്ഥിതിക സംഭാവനയായി മനുഷ്യരിൽ ഭക്ഷണ സ ase കര്യവും അതിൻറെ അനന്തരഫലവും അമിതമായി ഭക്ഷണം കഴിക്കുന്നത് കണക്കാക്കപ്പെടുന്നു. ഞങ്ങളുടെ ഡാറ്റ കാണിക്കുന്നത് എലികളിലാണ് റിവാർഡ് ഹൈപ്പോഫംഗ്ഷൻ ഉണ്ടാകുന്നത്, മനുഷ്യർ കഴിക്കുന്നതിനു സമാനമായ രുചികരമായ കഫറ്റീരിയ ഭക്ഷണത്തെ അമിതമായി ആഹാരം കഴിക്കുകയും കൂടുതൽ ഭാരം കൂടുന്നതിനനുസരിച്ച് ഈ ഫലം ക്രമേണ മോശമാവുകയും ചെയ്യും. റിവാർഡ് ത്രെഷോൾഡ് എലവേഷൻ ഉള്ള എല്ലാ എലികൾക്കും ബി‌എസ്ആർ ഇലക്ട്രോഡുകൾ ഫോർണിക്‌സിന്റെ ~ 21 withinm നുള്ളിൽ സ്ഥിതിചെയ്യുന്നു. കൊഴുപ്പ് ഉരുത്തിരിഞ്ഞ ഹോർമോൺ ലെപ്റ്റിനോട് സംവേദനക്ഷമതയുള്ള രീതിയിൽ ഭക്ഷണ നിയന്ത്രണത്തിലൂടെ ഈ പ്രദേശത്തെ റിവാർഡ് സംബന്ധമായ ന്യൂറോണുകളുടെ സംവേദനക്ഷമത വർദ്ധിക്കുന്നു, കൂടാതെ ഈ മസ്തിഷ്ക പ്രദേശം ഭക്ഷണ റിവാർഡ് എക്സ്നുഎംഎക്സിനുള്ള ഒരു പ്രധാന കെ.ഇ. അതിനാൽ ഭക്ഷ്യ ഹെഡോണിക്സ് നിയന്ത്രിക്കുന്ന മസ്തിഷ്ക സർക്യൂട്ടുകൾ തൃപ്തി പ്രവചിക്കുന്ന പോസ്റ്റ്‌ജെസ്റ്റീവ് സിഗ്നലുകൾ വഴി തടയുന്നു, ഗ്യാസ്ട്രിക് ഡിസ്റ്റൻഷൻ എക്സ്എൻഎംഎക്സും ഗട്ട്-ഡെറിവേഡ് പോസ്റ്റ്പ്രാൻഡിയൽ ഫാക്ടർ പെപ്റ്റൈഡ് YY21-22 (PYY) 23 ഉം തലച്ചോറിലെ പ്രദേശങ്ങളുടെ പ്രവർത്തനത്തെ മോഡുലേറ്റ് ചെയ്യുന്നു റിവാർഡ് പ്രോസസ്സിംഗിൽ ഉൾപ്പെടുന്നു. കൂടാതെ, അമിത ഭാരം കൂടുന്നതിലൂടെ റിവാർഡ് സിസ്റ്റങ്ങളെയും തടയുന്നു. Energy ർജ്ജ ബാലൻസിന്റെ പ്രധാന റെഗുലേറ്ററായ ലെപ്റ്റിൻ രക്തചംക്രമണം മസ്തിഷ്ക കോശങ്ങളിലേക്ക് തുളച്ചുകയറുകയും റിവാർഡ് സർക്യൂട്ടുകളുടെ പ്രവർത്തനത്തെ തടയുകയും ചെയ്യുമെന്ന് സമീപകാല റിപ്പോർട്ടുകൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നു. 24, 25, 200, 23.

അമിതഭാരമുള്ള എലികളിലെ റിവാർഡ് കമ്മി, മസ്തിഷ്ക റിവാർഡ് സർക്യൂട്ടുകളുടെ അടിസ്ഥാന സംവേദനക്ഷമതയിലെ വിപരീത കുറവുകളെ പ്രതിഫലിപ്പിച്ചേക്കാം. നെഗറ്റീവ് റിവാർഡ് 6, 32 എന്ന അവസ്ഥയെ ഒഴിവാക്കുന്നതിനോ ലഘൂകരിക്കുന്നതിനോ ഉയർന്ന പ്രതിഫലമുള്ള 'ഒബെസോജെനിക്' ഡയറ്റുകൾ കഴിക്കാനുള്ള പ്രചോദനം വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നതിലൂടെ അത്തരം ഡയറ്റ്-ഇൻഡ്യൂസ്ഡ് റിവാർഡ് ഹൈപ്പോഫംഗ്ഷൻ അമിതവണ്ണത്തിന്റെ വികാസത്തിന് കാരണമായേക്കാം. ഇത് വിപുലീകൃത ആക്‌സസ്സിൽ ഞങ്ങൾ നിരീക്ഷിച്ച ഹൈപ്പോഫാഗിയയ്ക്ക് കാരണമായേക്കാം. രുചികരമായ ഭക്ഷണം പിൻ‌വലിക്കുകയും കുറഞ്ഞ രുചികരമായ ച ow മാത്രം ലഭ്യമാകുകയും ചെയ്തപ്പോൾ എലികളും നിയന്ത്രിത-ആക്സസ് എലികളിൽ ഒരു പരിധിവരെ. അത്തരമൊരു സാഹചര്യം മനുഷ്യ മസ്തിഷ്ക ഇമേജിംഗ് പഠനങ്ങളിൽ നിന്നുള്ള ഡാറ്റയുമായി പൊരുത്തപ്പെടുന്നു, അതിൽ ഉയർന്ന രുചികരമായ ഭക്ഷണത്തോടുള്ള പ്രതികരണമായി സ്ട്രൈറ്റത്തിന്റെ മൂർച്ചയുള്ള സജീവമാക്കൽ, പ്രത്യേകിച്ചും സ്ട്രൈറ്റൽ ഡി 2 ആർ എക്സ്പ്രഷൻ കുറയുമെന്ന് കരുതുന്ന ജനിതക പോളിമോർഫിസമുള്ള വ്യക്തികളിൽ, ദീർഘകാല ഭാരം കൂടുന്നതുമായി ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു. അമിതവണ്ണമുള്ളവരിൽ അത്തരം റിവാർഡ് ഹൈപ്പോസെൻസിറ്റിവിറ്റി പ്രകടമാകുന്നത് അമിതവണ്ണത്തിന്റെ വികാസത്തിന് മുമ്പാണോ അതോ ജനിതക ഘടകങ്ങളുമായി ('റിവാർഡ് ഡെഫിഷ്യൻസി സിൻഡ്രോം') മാത്രം ബന്ധപ്പെട്ടതാണോ അതോ അമിതമായി ഭക്ഷണം കഴിക്കുന്നത് റിവാർഡ് പ്രോസസ്സിംഗിൽ തടസ്സമുണ്ടാക്കുമോ എന്ന് വ്യക്തമല്ല. രുചികരമായ ഉയർന്ന energy ർജ്ജ ഭക്ഷണത്തിലേക്കുള്ള തുടർന്നുള്ള ആക്സസും തുടർന്നുള്ള അമിതഭക്ഷണവും സംവേദനക്ഷമതയ്ക്ക് പ്രതിഫലം നൽകുന്നുവെന്നും അതിനാൽ അമിതവണ്ണത്തിന്റെ വികാസത്തെ പ്രോത്സാഹിപ്പിക്കുന്ന ഒരു പ്രധാന ഹെഡോണിക് സംവിധാനത്തെ പ്രതിനിധീകരിക്കാമെന്നും ഞങ്ങളുടെ ഡാറ്റ തെളിയിക്കുന്നു. അമിതവണ്ണമുള്ള എലികളിൽ റിപ്പോർട്ടുചെയ്‌തതിന് സമാനമായ പ്രതിഫലനഷ്ടം ഇൻട്രാവൈനസ് കൊക്കെയ്ൻ അല്ലെങ്കിൽ ഹെറോയിൻ സ്വയംഭരണത്തിലേക്കുള്ള വിപുലമായ ആക്‌സസ് ചരിത്രമുള്ള എലികളിലും കണ്ടെത്തിയിട്ടുണ്ട്, എന്നാൽ നിയന്ത്രിത ആക്‌സസ് 4, 12, 13 ചരിത്രമുള്ളവരിലല്ല. മയക്കുമരുന്ന് പ്രേരണയുടെ പ്രതിഫലനം 14, 12, 32 മൂലമുണ്ടാകുന്ന പ്രതിഫലത്തിന്റെ നിരന്തരമായ അവസ്ഥയെ ലഘൂകരിക്കാനുള്ള ശ്രമത്തിന്റെ ഫലമായി കാഷ്വൽ മുതൽ നിർബന്ധിത മയക്കുമരുന്ന് തേടൽ വരെ നിർദ്ദേശിക്കപ്പെട്ടിട്ടുണ്ട്. അതിനാൽ, അമിതവണ്ണവും മയക്കുമരുന്നിന് അടിമയും അടിസ്ഥാനപരമായ ഹെഡോണിക് സംവിധാനങ്ങൾ പങ്കിട്ടേക്കാമെന്ന് ഞങ്ങളുടെ ഡാറ്റ സൂചിപ്പിക്കുന്നു.

രുചികരമായ ഭക്ഷണത്തിന്റെ അമിത ഉപഭോഗത്തോടുള്ള ശ്രദ്ധേയമായ ന്യൂറോഡാപ്റ്റീവ് പ്രതികരണമാണ് സ്ട്രൈറ്റൽ ഡിഎക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ്ആർ എക്സ്പ്രഷന്റെ തരംതാഴ്ത്തൽ. വാസ്തവത്തിൽ, അമിതഭാരമുള്ള വ്യക്തികളായ സ്‌ട്രാറ്റിയൽ D2R സാന്ദ്രത കുറയുന്നത് 2, 4, എലിശല്യം 34, 35 എന്നിവയിൽ കാണപ്പെടുന്നു. നേരെമറിച്ച്, അനോറെക്സിയ നെർ‌വോസ ഉള്ള വ്യക്തികൾക്ക് സ്ട്രൈറ്റൽ ഡി‌എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്ആർ‌എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ് ഉണ്ട്, ബാരിയാട്രിക് (ഗ്യാസ്ട്രിക് ബൈപാസ്) ശസ്ത്രക്രിയയ്ക്കുശേഷം അമിതവണ്ണമുള്ളവരിൽ ശരീരഭാരം കുറയുന്നത് എലവേറ്റഡ് സ്ട്രൈറ്റൽ ഡിഎക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ്ആർ ഡെൻസിറ്റിഎക്സ്എൻ‌എം‌എമ്മുമായി ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു. TaqIA A36 അല്ലീലെ എന്ന് വിളിക്കപ്പെടുന്ന ജീൻ പോളിമോർഫിസം സ്ട്രൈറ്റൽ D2R സാന്ദ്രത കുറയുന്നതിന് കാരണമാകുന്നു, കൂടാതെ ഈ അല്ലീലിനെ ആശ്രയിക്കുന്ന വ്യക്തികൾ അമിതവണ്ണമുള്ള പോപ്പുലേഷൻ 37- ൽ അമിതമായി പ്രതിനിധീകരിക്കുന്നു. മദ്യം, ഒപിയോയിഡ്, സൈക്കോമോട്ടോർ ഉത്തേജക ആസക്തി 2 എന്നിവയ്‌ക്കുള്ള അപകടസാധ്യതയും ടാകിയ അലീൽ‌ വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നു. ഘടനാപരമായ ജനിതക ഘടകങ്ങളിലൂടെയോ അമിതമായി ഭക്ഷണം കഴിക്കുന്നതിന്റെ അനന്തരഫലമായോ സംഭവിക്കുന്ന സ്ട്രൈറ്റൽ ഡിഎക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ്ആർ സാന്ദ്രത കുറയുന്നത് അമിതവണ്ണത്തിന്റെ ന്യൂറോബയോളജിക്കൽ സംവിധാനങ്ങൾക്ക് കാരണമായേക്കാം. മെംബറേനുമായി ബന്ധപ്പെട്ട D28R പ്രതിഫലിപ്പിക്കുമെന്ന് കരുതപ്പെടുന്ന 1 kDa D2R ഐസോഫോമിന്റെ സ്ട്രൈറ്റൽ ലെവലുകൾ ച ow- മാത്രം, നിയന്ത്രിത-ആക്സസ്, എക്സ്റ്റെൻഡഡ് ആക്സസ് ഗ്രൂപ്പുകളിൽ നിന്നുള്ള എലികളിലെ ശരീരഭാരവുമായി വിപരീതമായി ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നുവെന്ന് ഞങ്ങൾ കണ്ടെത്തി (ചിത്രം 4). ഡോർസോളാറ്ററൽ സ്ട്രൈറ്റത്തിൽ (ചിത്രം. എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്) ഏറ്റവും പ്രധാനമായി സ്ട്രൈറ്റൽ ഡി‌എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ്ആർ എക്സ്പ്രഷന്റെ നോക്ക്ഡ down ൺ, കഫറ്റേരിയ ഡയറ്റ് എക്സ്പോഷർ ചെയ്തയുടനെ ബി‌എസ്‌ആർ പരിധി പെട്ടെന്നുതന്നെ വർദ്ധിച്ചു. അതിനാൽ സ്‌ട്രാറ്റിയൽ D38R എക്‌സ്‌പ്രഷനിലെ കുറവ് എലികളിൽ റിവാർഡ് ഹൈപ്പോഫംഗ്ഷന്റെ ആവിർഭാവത്തെ അതിവേഗം ത്വരിതപ്പെടുത്തി, ഉയർന്ന രുചികരമായ ഭക്ഷണത്തിലേക്ക് വിപുലമായ ആക്‌സസ് ഉള്ള മനുഷ്യന്റെ മസ്തിഷ്ക ഇമേജിംഗ് ഡാറ്റയുമായി പൊരുത്തപ്പെടുന്ന ഒരു കണ്ടെത്തൽ, സ്ട്രൈറ്റൽ D2R സാന്ദ്രതയുടെ കുറവുകൾ അമിതവണ്ണമുള്ള വ്യക്തികളിലെ ഹൈപ്പോഫംഗ്ഷന് പ്രതിഫലം നൽകുന്നുവെന്ന് സൂചിപ്പിക്കുന്നു.

Lenti-D2Rsh എലികളുടെ മൂന്ന് സവിശേഷതകളും ശ്രദ്ധേയമാണ്. ഒന്നാമതായി, സ്‌ട്രാറ്റിയൽ ഡിഎക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ്ആർ നോക്ക്ഡ down ൺ, രുചികരമായ ഭക്ഷണത്തിലേക്കുള്ള ആക്സസ് എന്നിവ ബി‌എസ്‌ആർ പരിധി ഉയർത്തുന്നതിന് കാരണമായിട്ടുണ്ടെങ്കിലും, നിയന്ത്രണ എലികളുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ ഈ എലികളിൽ കലോറി ഉപഭോഗത്തിലോ ശരീരഭാരത്തിലോ വ്യത്യാസമില്ല. എലികൾക്ക് കഫറ്റീരിയ ഭക്ഷണത്തിലേക്ക് 2 d മാത്രമേ പ്രവേശനമുള്ളൂ എന്ന വസ്തുത ഇത് പ്രതിഫലിപ്പിച്ചേക്കാം; കൂടുതൽ‌ ആക്‍സസ് കാലയളവ് കാലക്രമേണ ശരീരഭാരം വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നതിന് കാരണമായിരിക്കാം, അതുപോലെ തന്നെ സ്ട്രൈറ്റൽ‌ D14R സിഗ്നലിംഗ് 2 ന്റെ കുറവുള്ള മനുഷ്യരിൽ‌ കാണപ്പെടുന്ന ശരീരഭാരം വർദ്ധിക്കുന്നതിനുള്ള സാധ്യത കൂടുതലാണ്. എന്നിരുന്നാലും, കഫറ്റേരിയ ഭക്ഷണത്തിലേക്കുള്ള ആക്സസ് എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് മാത്രമായി പരിമിതപ്പെടുത്തുന്നതിന്റെ പ്രയോജനം, ഉയർന്ന ബി‌എസ്‌ആർ പരിധി കാണിക്കുന്ന ഒരേയൊരു ഗ്രൂപ്പാണ് എക്സ്റ്റെൻഡഡ് ആക്സസ് ഉള്ള നോക്ക്ഡൗൺ എലികൾ, മാത്രമല്ല നിർബന്ധിത വികസനത്തിൽ റിവാർഡ് ഹൈപ്പോഫംഗ്ഷന്റെ പങ്ക് വിലയിരുത്താൻ ഇത് ഞങ്ങളെ അനുവദിച്ചു. കഴിക്കുന്നു (ചുവടെ കാണുക). രണ്ടാമതായി, ച ow യിലേക്ക് മാത്രം പ്രവേശനമുള്ള നോക്ക്ഡൗൺ എലികളിൽ ബി‌എസ്‌ആർ പരിധി സ്ഥിരവും മാറ്റമില്ലാതെ തുടർന്നു. റിവാർഡ് ഹൈപ്പോസെൻസിറ്റിവിറ്റി ഉണ്ടാക്കാൻ സ്ട്രൈറ്റൽ ഡിഎക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ്ആർ എക്‌സ്‌പ്രഷൻ മാത്രം പര്യാപ്തമല്ലെന്ന് ഇത് സൂചിപ്പിക്കുന്നു; പകരം, പ്രതിഫല സംവേദനക്ഷമത കുറയുന്ന ഈ അവസ്ഥയുടെ ആവിർഭാവത്തെ ത്വരിതപ്പെടുത്തുന്നതിന് രുചികരമായ ഭക്ഷണത്തിന്റെ അമിത ഉപഭോഗവുമായി ഇടപഴകുന്നതായി തോന്നി. അതിനാൽ ബ്രെയിൻ റിവാർഡ് സർക്യൂട്ടുകളിലെ മറ്റ് അഡാപ്റ്റീവ് പ്രതികരണങ്ങൾ കഫറ്റീരിയ ഭക്ഷണത്തിലേക്ക് വിപുലമായ ആക്സസ് ഉള്ള എലികളിൽ റിവാർഡ് ഹൈപ്പോസെൻസിറ്റിവിറ്റി പ്രവർത്തനക്ഷമമാക്കിയേക്കാം. ഇത് മനസ്സിൽ വെച്ചുകൊണ്ട്, D4R അഗോണിസ്റ്റ് ബ്രോമോക്രിപ്റ്റിൻ ലെപ്റ്റിൻഎക്സ്എൻ‌എം‌എക്‌സിന്റെ രക്തചംക്രമണത്തിന്റെ അളവ് കുറയ്ക്കുന്നു, കൂടാതെ ലെപ്റ്റിൻ കുറഞ്ഞത് ഭക്ഷണം നൽകുന്നത് തടയുന്നു, ഫുഡ് എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ്, എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ്, എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് എന്നിവയ്ക്കുള്ള ഹെഡോണിക് പ്രതികരണങ്ങളെ നിയന്ത്രിക്കുന്ന സ്ട്രൈറ്റൽ പ്രദേശങ്ങളെ തടയുന്നു. അതിനാൽ, ശരീരഭാരം വർദ്ധിക്കുന്നതിനോടുള്ള പ്രതികരണമായി സ്ട്രാറ്ററ്റൽ ഡിഎക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്ആർ കുറയ്ക്കുന്നത് ലെപ്റ്റിൻ സിഗ്നലിംഗ് വർദ്ധിപ്പിക്കുകയും അതുവഴി മസ്തിഷ്ക റിവാർഡ് സിസ്റ്റങ്ങളിൽ ഈ അഡിപ്പോകൈനിന്റെ തടസ്സം സൃഷ്ടിക്കുകയും ചെയ്യും. അവസാനമായി, ഞങ്ങളുടെ ലെന്റിവൈറസ് വെക്റ്ററുകളെ ഡോർസോലെറ്ററൽ സ്ട്രൈറ്റത്തിലേക്ക് ലക്ഷ്യമാക്കി. ഇത് പ്രധാനമായും സാങ്കേതിക കാരണങ്ങളാലാണ്, കാരണം സ്ട്രൈറ്റത്തിലേക്ക് വൈറസ് ഡെലിവറി ചെയ്യുന്നതിനായി കാൻ‌യുലയുടെ ലാറ്ററൽ പ്ലേസ്മെന്റ് ബി‌എസ്‌ആർ പരിധി നിർണ്ണയിക്കാനായി ഇൻ‌വെല്ലിംഗ് ഹൈപ്പോഥലാമിക് ഉത്തേജക ഇലക്ട്രോഡിനെ ഉൾക്കൊള്ളാൻ ഞങ്ങളെ പ്രാപ്തരാക്കി. അതിനാൽ, സ്ട്രൈറ്റത്തിന്റെ മറ്റ് മേഖലകളിൽ, പ്രത്യേകിച്ച് ഡോർസോമീഡിയൽ, വെൻട്രൽ ഏരിയകളിൽ (ന്യൂക്ലിയസ് അക്യുമ്പെൻസ് കോർ, ഷെൽ) നോക്ക്ഡ for ണിനായി ഡിഎക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്ആർ ടാർഗെറ്റുചെയ്യുന്നത് രുചികരമായ ഭക്ഷണത്തിന്റെ അഭാവത്തിൽ പോലും ബി‌എസ്‌ആർ പരിധി ഉയർത്തിയിരിക്കാം.

ഡോർസോളാറ്ററൽ സ്ട്രിയാറ്റം ഉത്തേജക-പ്രതികരണ ശീല തരം പഠനത്തിൽ വളരെയധികം ഉൾപ്പെട്ടിട്ടുണ്ട്, ഇത് സംതൃപ്തി സ്വഭാവത്തിന്റെ വികാസത്തിൽ പ്രതിഫലിക്കുന്നു, ഇത് മൂല്യത്തകർച്ചയ്ക്ക് അപകർഷതാബോധം നൽകുന്നു, ഇത് സംതൃപ്തിക്ക് മുമ്പുള്ള ഭക്ഷണം അല്ലെങ്കിൽ വിഷമയമായ ഉത്തേജകങ്ങളുമായി ജോടിയാക്കുക. പ്രധാനമായും ഡോർസോളാറ്ററൽ സ്ട്രിയാറ്റം ടാർഗെറ്റുചെയ്യുന്നതിലൂടെ, നിർബന്ധിത-സമാനമായ ഭക്ഷണത്തിന്റെ വികാസത്തിന് എലിയുടെ അപകടസാധ്യത നിയന്ത്രിക്കുന്ന D40R- കളുടെ ജനസംഖ്യ ഞങ്ങൾ തട്ടിമാറ്റിയിരിക്കാം. നിർബന്ധിത പെരുമാറ്റങ്ങളിൽ സ്‌ട്രാറ്റിയൽ ഡി 2 ആർ കൾക്കുള്ള പങ്ക് അനുസരിച്ച്, മനുഷ്യന്റെ ഡിആർഡി 2-എഎൻകെ 2 ജീൻ ലോക്കസിന്റെ ടാകിയ അലീൽ - ഇത് കുറഞ്ഞ സ്‌ട്രാറ്റിയൽ ഡി 1 ആർ ഡെൻസിറ്റി 2 ന് കാരണമാകുന്നു, രുചികരമായ ഭക്ഷണത്തോടുള്ള പ്രതികരണമായി സ്ട്രൈറ്റൽ ആക്റ്റിവേഷനെ ബ്ലണ്ട് ചെയ്യുന്നു, ഒപ്പം അമിതവണ്ണത്തിന്റെ അപകടസാധ്യത 5 ഉയർത്തുന്നു - നെഗറ്റീവ് പരിണതഫലങ്ങളുള്ള പ്രവർത്തനങ്ങൾ ഒഴിവാക്കാൻ പഠനത്തിലെ അപര്യാപ്തതകൾ 4. പ്രതികൂല ഫലമുണ്ടാക്കുന്ന സ്വഭാവത്തെ തടസ്സപ്പെടുത്തുന്ന നിയന്ത്രണം നഷ്ടപ്പെടുന്നത് അമിതവണ്ണത്തിന്റെയും മയക്കുമരുന്നിന്റെയും ആസക്തിയുടെ ഒരു സവിശേഷതയാണ്, ഇതിൽ സാമൂഹിക, ആരോഗ്യം അല്ലെങ്കിൽ സാമ്പത്തിക പ്രത്യാഘാതങ്ങൾക്കിടയിലും ഉപഭോഗ സ്വഭാവങ്ങൾ നിലനിൽക്കുന്നു. വിപുലമായ മയക്കുമരുന്ന് ഉപയോഗത്തിന്റെ ചരിത്രമുള്ള എലികളിലെ കൊക്കെയ്ൻ എടുക്കൽ സ്വഭാവം വഴങ്ങാത്തതും പ്രതികൂലമായ കണ്ടീഷൻഡ് ഉത്തേജനം വഴി തടസ്സപ്പെടുത്തുന്നതിനെ പ്രതിരോധിക്കുന്നതും നെഗറ്റീവ് ഫലം പ്രവചിക്കുന്നു (കാൽ ഷോക്ക്) 4. അതുപോലെ, മുമ്പ് കൊഴുപ്പ് കൂടിയ ഉയർന്ന കൊഴുപ്പ് ഭക്ഷണത്തിലേക്ക് പ്രവേശനം ലഭിച്ച എലികൾ ഭക്ഷണരീതിയിൽ യാതൊരു പരിചയവുമില്ലാത്ത എലികളേക്കാൾ രുചികരമായ ഭക്ഷണം ലഭിക്കുന്നതിന് പ്രതികൂലമായ അന്തരീക്ഷത്തിൽ (തിളക്കമുള്ള വെളിച്ചത്തിൽ) കൂടുതൽ സമയം ചെലവഴിക്കും. കഫറ്റീരിയ ഭക്ഷണത്തിലേക്ക് വിപുലമായ ആക്സസ് ഉള്ള എലികളിലെ രുചികരമായ ഭക്ഷണ ഉപഭോഗം സമാനമായ ഒരു കണ്ടീഷൻഡ് ഉത്തേജകത്തിന് സമാനമല്ലെന്ന് ഞങ്ങൾ കണ്ടെത്തി. ഈ ഫലത്തിൽ സ്‌ട്രാറ്റിയൽ ഡി 41 ആർ‌മാർ‌ക്ക് ഒരു പങ്ക് അനുസരിച്ച്, സ്ട്രൈറ്റൽ‌ ഡി 18 ആർ‌ നോക്ക്ഡ down ൺ‌ എലികളിൽ‌ നിർബന്ധിത ഭക്ഷണം കഴിക്കുന്നത് കണ്ടെത്തി, മുമ്പ്‌ കഫറ്റീരിയ ഡയറ്റിലേക്ക് 42 ഡി വിപുലീകൃത ആക്‍സസ് ഉണ്ടായിരുന്നെങ്കിലും നിയന്ത്രണ ഗ്രൂപ്പുകളിലല്ല. ഒരു ന്യൂറോ സർക്യൂട്ട് വീക്ഷണകോണിൽ നിന്ന്, രുചികരമായ ഭക്ഷണത്തിലേക്കുള്ള വിപുലമായ പ്രവേശനം കോർട്ടികോസ്ട്രിയൽ പാതകളിൽ പ്ലാസ്റ്റിസിറ്റിക്ക് കാരണമാകും, അതുവഴി മൃഗങ്ങളെ നിർബന്ധിത സ്വഭാവരീതികളുടെ വികാസത്തിന് ഇരയാക്കാം, സ്ട്രൈറ്റൽ ഡി 2 ആർ സിഗ്നലിംഗിലെ അപര്യാപ്തത ഈ പ്രക്രിയയെ മെച്ചപ്പെടുത്തുന്നു. വാസ്തവത്തിൽ, അമിതവണ്ണമുള്ള വ്യക്തികളിലെ സ്ട്രൈറ്റൽ ഡി 2 ആർ സാന്ദ്രത പ്രീഫ്രോണ്ടൽ, ഓർബിറ്റോഫ്രോണ്ടൽ കോർട്ടിക്കൽ ഏരിയകളിലെ മെറ്റബോളിസവുമായി ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു. ഇത് പെരുമാറ്റത്തിൽ തടസ്സമുണ്ടാക്കുന്നു.

ശ്രദ്ധേയമായി, പാലറ്റബിൾ ഭക്ഷണത്തിന്റെ നിർബന്ധിത ഉപഭോഗം മുമ്പ് കണ്ടെത്തിയത് നോക്ക്ഡൗൺ എലികളിൽ മാത്രമാണ്, മുമ്പ് കഫറ്റീരിയ ഭക്ഷണത്തിലേക്ക് പ്രവേശനം വ്യാപിപ്പിച്ചിരുന്നു, നിയന്ത്രണ ശൈലികളിലല്ല, ഒരേ സമയത്തേക്ക് കഫറ്റീരിയ ഭക്ഷണത്തിലേക്ക് പ്രവേശനം വ്യാപിപ്പിച്ചിരുന്നു, അല്ലെങ്കിൽ നോക്ക്ഡൗൺ എലികളിലും ച ow- മാത്രം ആക്സസ്. മുൻ‌കൂട്ടി വിപുലീകരിച്ച ആക്‌സസ് ഉള്ള നോക്ക്ഡൗൺ എലികളും മറ്റ് ഗ്രൂപ്പുകളുമായുള്ള പ്രധാന വ്യത്യാസം അവയുടെ സ്ഥിരമായി ഉയർത്തിയ ബി‌എസ്‌ആർ പരിധി ആയിരുന്നു. റിവാർഡ് ഹൈപ്പോ ഫംഗ്ഷന്റെ സാധാരണ ന്യൂറോബയോളജിക്കൽ ഉത്ഭവവും താൽക്കാലികമായി യാദൃശ്ചികവും സ്വതന്ത്രവുമായ പ്രതിഭാസങ്ങളായ നിർബന്ധിത പോലുള്ള ഭക്ഷണത്തിന്റെ ആവിർഭാവത്തെ ഇത് പ്രതിഫലിപ്പിച്ചേക്കാം. മറ്റൊരു തരത്തിൽ, ഡയറ്റ്-ഇൻഡ്യൂസ്ഡ് റിവാർഡ് ഹൈപ്പോഫംഗ്ഷൻ നെഗറ്റീവ് ബലപ്പെടുത്തലിനുള്ള ഒരു കെ.ഇ.യായി വർത്തിക്കും, ഇത് നിർബന്ധിത-പോലുള്ള ഭക്ഷണം 14, 32, 33 എന്നിവ വികസിപ്പിക്കുന്നതിന് സഹായിക്കുന്നു. അടിസ്ഥാനപരമായ മെക്കാനിസങ്ങൾ എന്തുതന്നെയായാലും, രുചികരമായ ഭക്ഷണത്തിനായി ആസക്തി പോലുള്ള നിർബന്ധിത പ്രതികരണം അമിതവണ്ണമുള്ള എലികളിൽ ഉയർന്നുവരുമെന്ന് ഞങ്ങളുടെ കണ്ടെത്തലുകൾ തെളിയിക്കുന്നു, ഒപ്പം സ്ട്രൈറ്റൽ ഡിഎക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ്ആർ സിഗ്നലിംഗിലെ അപര്യാപ്തത ഈ സ്വഭാവത്തിന്റെ വികാസത്തിന് സാധ്യത വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നുവെന്നും സൂചിപ്പിക്കുന്നു.

ചുരുക്കത്തിൽ, രുചികരമായ, energy ർജ്ജ-ഇടതൂർന്ന ഭക്ഷണത്തിന്റെ അമിത ഉപഭോഗത്തിലൂടെ മസ്തിഷ്ക റിവാർഡ് സിസ്റ്റങ്ങളെ അമിതമായി ഉത്തേജിപ്പിക്കുന്നത് റിവാർഡ് ഹൈപ്പോസെൻസിറ്റിവിറ്റിയുടെ അഗാധമായ അവസ്ഥയെയും നിർബന്ധിത ഭക്ഷണത്തിന്റെ വികാസത്തെയും പ്രേരിപ്പിക്കുന്നുവെന്ന് ഞങ്ങൾ കണ്ടെത്തി. അമിതവണ്ണമുള്ള എലികളിലെ ഈ തെറ്റായ പെരുമാറ്റ പ്രതികരണങ്ങൾ ഒരുപക്ഷേ സ്ട്രൈറ്റൽ ഡിഎക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്ആർ സിഗ്നലിംഗിലെ ഭക്ഷണ-പ്രേരിത കമ്മികളിൽ നിന്നാണ് ഉണ്ടാകുന്നത്. ദുരുപയോഗ മരുന്നുകളുടെ അമിത ഉപഭോഗം സമാനമായി സ്‌ട്രാറ്റിയൽ D2R സാന്ദ്രത കുറയ്ക്കുകയും റിവാർഡ് ഹൈപ്പോഫംഗ്ഷന്റെ അഗാധമായ അവസ്ഥയെ പ്രേരിപ്പിക്കുകയും നിർബന്ധിത-മയക്കുമരുന്ന് ഉപയോഗിക്കുന്ന സ്വഭാവങ്ങളുടെ ആവിർഭാവത്തെ പ്രേരിപ്പിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു. അതിനാൽ ബ്രെയിൻ റിവാർഡ് സർക്യൂട്ടുകളിലെ സമാനമായ ന്യൂറോഡാപ്റ്റീവ് പ്രതികരണങ്ങളിൽ നിന്ന് അമിതവണ്ണവും മയക്കുമരുന്നിന് അടിമയും ഉണ്ടാകാമെന്ന് സൂചിപ്പിക്കുന്നതിന് മുമ്പത്തെ വർക്ക് എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ്, എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ്, എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ്, എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്, എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ് എന്നിവ ഞങ്ങളുടെ കണ്ടെത്തലുകൾ പിന്തുണയ്ക്കുന്നു.

രീതികൾ

എലികൾ.

പരീക്ഷണങ്ങളുടെ തുടക്കത്തിൽ 300 - 350 ഗ്രാം ഭാരമുള്ള പുരുഷ വിസ്റ്റാർ എലികൾ ചാൾസ് നദിയിൽ നിന്ന് ലഭിച്ചു. എത്തിച്ചേർന്നപ്പോൾ, എലികളെ എക്സ്എൻയുഎംഎക്സ്-എച്ച് ലൈറ്റ്-ഡാർക്ക് സൈക്കിളിൽ നിരന്തരമായ താപനിലയിൽ പാർപ്പിച്ചിരുന്നു (എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് എച്ച് ലൈറ്റുകൾ ഓണാണ്). പരീക്ഷണ സമയത്തേക്ക് സ്റ്റാൻഡേർഡ് ലബോറട്ടറി ച ow, വെള്ളം എന്നിവയിലേക്ക് എലികൾക്ക് പരസ്യമായി പ്രവേശനം അനുവദിച്ചു. എല്ലാ നടപടിക്രമങ്ങളും സ്ക്രിപ്സ് ഫ്ലോറിഡയിലെ ഇൻസ്റ്റിറ്റ്യൂഷണൽ ആനിമൽ കെയർ ആന്റ് യൂസ് കമ്മിറ്റി അംഗീകരിച്ചു, മൃഗസംരക്ഷണത്തിന്റെ തത്വങ്ങളെക്കുറിച്ച് ദേശീയ ആരോഗ്യ സ്ഥാപനങ്ങൾ മുന്നോട്ടുവച്ച മാർഗ്ഗനിർദ്ദേശങ്ങൾക്കനുസൃതമായി എലികളെ ചികിത്സിച്ചു.

ശസ്ത്രക്രിയാ നടപടിക്രമങ്ങൾ.

ബി‌എസ്‌ആർ ഉത്തേജക ഇലക്ട്രോഡുകൾ ഉപയോഗിച്ച് തയ്യാറാക്കിയ എലികളെ ആദ്യം ഓക്‌സിജനിൽ എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്-എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് ഐസോഫ്ലൂറൻ ശ്വസിച്ചുകൊണ്ട് അനസ്തേഷ്യ നൽകി സ്റ്റീരിയോടാക്സിക് ഫ്രെയിമിൽ (കോപ്) സ്ഥാപിച്ചു. ബൈപോളാർ ബി‌എസ്‌ആർ ഇലക്ട്രോഡുകൾ (എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് മില്ലീമീറ്റർ നീളമുള്ളത്) പിൻ‌വശം ലാറ്ററൽ ഹൈപ്പോതലാമസിലേക്ക് (ആന്ററോപോസ്റ്റീരിയർ, ബ്രെഗ്മയിൽ നിന്ന് −1 മില്ലീമീറ്റർ; മെഡിയൊലെറ്ററൽ, മിഡ്‌ലൈനിൽ നിന്ന് 3 മില്ലീമീറ്റർ; ഡോർസോവെൻട്രൽ, ഡ്യൂറയിൽ നിന്ന് 11 മില്ലീമീറ്റർ; ഇൻസിസർ ബാർ ഇന്ററാറൽ ലൈനിന് മുകളിൽ 0.5 മില്ലീമീറ്ററായി ക്രമീകരിച്ചു. ) 1.7. വൈറസ് കുത്തിവയ്പ്പുകൾ സ്വീകരിക്കുന്ന എലികൾ സ്ട്രൈറ്റത്തിന് മുകളിൽ സ്ഥാപിച്ചിരിക്കുന്ന ഉഭയകക്ഷി ഗൈഡ് കാൻ‌യുല (8.3 ഗേജ്, 5 മില്ലീമീറ്റർ നീളത്തിൽ) തയ്യാറാക്കി (ആന്ററോപോസ്റ്റീരിയർ, ബ്രെഗ്മയിൽ നിന്ന് 47 മില്ലീമീറ്റർ; മീഡിയോളാറ്ററൽ, മിഡ്‌ലൈനിൽ നിന്ന് 23 മില്ലീമീറ്റർ; ഡോർസോവെൻട്രൽ, ഡ്യൂറയിൽ നിന്ന് X14 മില്ലീമീറ്റർ) 2.8-mm ശൈലികൾക്കൊപ്പം. നാല് സ്റ്റെയിൻ‌ലെസ് സ്റ്റീൽ തലയോട്ടി സ്ക്രൂകളും ഡെന്റൽ അക്രിലിക്കും ഇലക്ട്രോഡും കാൻ‌യുലയും സ്ഥാപിച്ചു. ശസ്ത്രക്രിയയ്ക്കുശേഷം 3.1 d- നായി ഓരോ 2.4 h- ലും ഒരിക്കൽ ശസ്ത്രക്രിയാ മുറിവ് ടോപ്പിക് ആൻറിബയോട്ടിക് ഉപയോഗിച്ച് ചികിത്സിച്ചു. ശസ്ത്രക്രിയയിൽ നിന്ന് കരകയറാൻ എലികളെ 48-14 d അനുവദിക്കുകയും പിന്നീട് BSR ത്രെഷോൾഡ് പ്രക്രിയയിൽ പരിശീലനം നൽകുകയും ചെയ്തു.

ബിഎസ്ആർ നടപടിക്രമം.

മറ്റെവിടെയെങ്കിലും വിവരിച്ചതിന് സമാനമായ ഒരു പ്രത്യേക-ട്രയൽ കറന്റ്-ത്രെഷോൾഡ് നടപടിക്രമമനുസരിച്ച് ബി‌എസ്‌ആർ ഉത്തേജനത്തിനായി പ്രതികരിക്കാൻ എലികളെ പരിശീലിപ്പിച്ചു. 10, 14. ചുരുക്കത്തിൽ, 5-μA ഘട്ടങ്ങളിൽ ഇറങ്ങിവരുന്ന ആരോഹണക്രമത്തിലും ആരോഹണക്രമത്തിലും ബി‌എസ്‌ആർ നിലവിലെ ലെവലുകൾ വ്യത്യാസപ്പെട്ടിരുന്നു. ഓരോ ടെസ്റ്റിംഗ് സെഷനിലും, നാല് ഇതര ആരോഹണ / ആരോഹണ പരമ്പരകൾ അവതരിപ്പിച്ചു. ഓരോ പരമ്പരയുടെയും പരിധി നിർവചിച്ചിരിക്കുന്നത് തുടർച്ചയായ രണ്ട് നിലവിലെ തീവ്രതകൾക്കിടയിലുള്ള മധ്യ പോയിന്റാണ്, അഞ്ച് പരീക്ഷണങ്ങളിൽ മൂന്നെണ്ണമെങ്കിലും എലികൾ പ്രതികരിച്ചു, കൂടാതെ അഞ്ച് പരീക്ഷണങ്ങളിൽ മൂന്നോ അതിലധികമോ എലികൾ പ്രതികരിക്കാത്ത തുടർച്ചയായ രണ്ട് നിലവിലെ തീവ്രത. സെഷന്റെ മൊത്തത്തിലുള്ള പരിധി നാല് വ്യക്തിഗത സീരീസുകളുടെ പരിധി എന്നായി നിർവചിച്ചിരിക്കുന്നു. ഓരോ ടെസ്റ്റിംഗ് സെഷനും ഏകദേശം 30 മിനിറ്റ് ദൈർഘ്യമുണ്ടായിരുന്നു. 10 തുടർച്ചയായ ദിവസങ്ങളിൽ പരിധിയിലെ X5% വ്യതിയാനമായി സ്ഥിരതയുള്ള ബി‌എസ്‌ആർ പരിധി നിർവചിക്കപ്പെട്ടിട്ടുണ്ട്, ഇത് സാധാരണയായി 10-14 d പരിശീലനത്തിന് ശേഷം സ്ഥാപിക്കപ്പെടുന്നു. ക്രിയാത്മക പ്രതികരണം സംഭവിച്ച എല്ലാ പരീക്ഷണങ്ങളുടെയും ശരാശരി പ്രതികരണ ലേറ്റൻസിയായി ഓരോ ടെസ്റ്റ് സെഷനുമായുള്ള പ്രതികരണ ലേറ്റൻസി നിർവചിക്കപ്പെട്ടിട്ടുണ്ട്.

വൈറൽ പാക്കേജിംഗും ഡെലിവറിയും.

ഹ്രസ്വ ഹെയർപിൻ ആർ‌എൻ‌എ ഡെലിവർ ചെയ്യുകയും pRNAT-U6.2 / ലെന്റി വെക്റ്റർ സിസ്റ്റം (ജെൻ‌സ്ക്രിപ്റ്റ്) ഉപയോഗിച്ച് ഘടനാപരമായി പ്രകടിപ്പിക്കുകയും ചെയ്തു. നിർമ്മാതാവിന്റെ പ്രോട്ടോക്കോൾ അനുസരിച്ച് വൈറൽ കണികകൾ തയ്യാറാക്കി. ചുരുക്കത്തിൽ, എസ്‌ആർ‌എൻ‌എ ഉൾപ്പെടുത്തൽ (293 the-GGATCCCGCGCAGCAGTCGAGCTTTCTTCAAGAGAGAAAGCTCGACTGCTGCGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTCTACTTCACACGGAG-5 ′) വെക്റ്റർ ഉപയോഗിച്ച് മാറ്റിസ്ഥാപിച്ചു. അൾട്രാസെൻട്രിഫ്യൂഗേഷൻ (3 ഗ്രാം, ബെക്ക്മാൻ കോൾട്ടർ എസ്‌ഡബ്ല്യു 72 ടിഐ റോട്ടർ., 24 മിനിറ്റ്, 76,755 ° സി) ഉപയോഗിച്ച് സൂപ്പർനേറ്റന്റ് ശേഖരിക്കുകയും കേന്ദ്രീകരിക്കുകയും ചെയ്തു, നിർമ്മാതാവിന്റെ നിർദ്ദേശപ്രകാരം ഫ്ലൂറസെൻസ്-ആക്റ്റിവേറ്റഡ് സെൽ സോർട്ടിംഗ് ഉപയോഗിച്ചാണ് വൈറൽ ടൈറ്റർ നിർണ്ണയിക്കുന്നത്. വൈറസ് മദ്യം ഉപയോഗിക്കുകയും പ്രകാശം സംരക്ഷിത ബോക്സുകളിൽ −32 at C വരെ ഉപയോഗിക്കുകയും ചെയ്തു.

സ്ഥിരതയുള്ള ബി‌എസ്‌ആർ പരിധിയിലുള്ള എലികൾക്ക് ഓരോ മസ്തിഷ്ക അർദ്ധഗോളത്തിന്റെയും സ്ട്രൈറ്റത്തിലെ മൂന്ന് സൈറ്റുകളിൽ ഉഭയകക്ഷി വൈറൽ കുത്തിവയ്പ്പുകൾ ലഭിച്ചു (ഓരോ കുത്തിവയ്പ്പിനും 2 μl, 1 minl min - 1, കുത്തിവയ്പ്പുകൾക്കിടയിൽ 1 മിനിറ്റ്, ഒരു എലിക്ക് ആകെ ആറ് കുത്തിവയ്പ്പുകൾ). ബി‌എസ്‌ആർ പരിധി വിലയിരുത്തൽ പുനരാരംഭിക്കുന്നതിന് മുമ്പ് എലികൾക്ക് ഇൻട്രാസ്ട്രിയറ്റൽ കുത്തിവയ്പ്പുകളിൽ നിന്ന് കുറഞ്ഞത് 2-3 d വീണ്ടെടുക്കൽ അനുവദിച്ചു. വൈറസ് കുത്തിവയ്പ്പുകൾക്ക് ശേഷം എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് ഡിക്കിനായി പ്രതിദിന ബി‌എസ്‌ആർ ത്രെഷോൾഡ് അസസ്മെന്റ് തുടർന്നു, കഫറ്റീരിയ ഭക്ഷണത്തിലേക്ക് എലികൾക്ക് പ്രവേശനം അനുവദിക്കുന്നതിനുമുമ്പ് പരമാവധി സ്ട്രൈറ്റൽ ഡിഎക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ്ആർ നോക്ക്ഡ down ൺ നേടി. ഈ 33 d സമയത്ത് ലെന്റി-നിയന്ത്രണവും ലെന്റി-ഡിഎക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ്ആർ‌എച്ച് എലികളും തമ്മിലുള്ള ബി‌എസ്‌ആർ പരിധിയിൽ വ്യത്യാസങ്ങളൊന്നുമില്ല (ഡാറ്റ കാണിച്ചിട്ടില്ല).

ഇമ്മ്യൂണോബ്ലോട്ടിംഗ്.

കഫറ്റീരിയ ഭക്ഷണത്തിലേക്ക് പതിവായി ഷെഡ്യൂൾ ചെയ്തതിനുശേഷം എലികൾ ഏകദേശം 1 മണിക്കൂർ കൊല്ലപ്പെട്ടു, തലച്ചോറുകൾ അതിവേഗം നീക്കം ചെയ്യപ്പെട്ടു. ഒരു ഐസ് ബ്ലോക്കിലെ കൊറോണൽ ബ്രെയിൻ മാട്രിക്സ് (1-mm സ്ലൈസ് ഇടവേള; പ്ലാസ്റ്റിക് വൺ) ഉപയോഗിച്ച് ~ 2-1 മില്ലീമീറ്റർ കട്ടിയുള്ള ബ്രെയിൻ വിഭാഗങ്ങൾ തയ്യാറാക്കി, ഡോർസൽ സ്ട്രിയാറ്റത്തിന്റെ ടിഷ്യു പഞ്ചുകൾ (ബ്രെഗ്മ: ~ 2.2 മുതൽ −0.26 മില്ലീമീറ്റർ വരെ) എടുത്തു. സ്ട്രിയറ്റൽ ടിഷ്യു പഞ്ചുകൾ അതിവേഗം ശേഖരിക്കുകയും സ്നാപ്പ് ഫ്രീസുചെയ്യുകയും ഉപയോഗം വരെ −80 at C ൽ സൂക്ഷിക്കുകയും ചെയ്തു. വ്യക്തിഗത സാമ്പിളുകൾ ഹിമത്തിൽ ഉരുകുകയും ആക്സസ് ഗ്രൂപ്പുകളുടെ ഭാരം-ആശ്രിത ശരാശരി വിഭജനത്തിന്റെ അടിസ്ഥാനത്തിൽ തുല്യ അളവിലുള്ള സ്ട്രാറ്റിയൽ ടിഷ്യു ശേഖരിക്കുകയും ചെയ്തു (ഓരോ പൂളിനും 7-10 എലികൾ). സോഡിയം ഓർത്തോവാനഡേറ്റ്, ഫോസ്ഫേറ്റസ് കോക്ടെയ്ൽ ഇൻഹിബിറ്ററുകളായ എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്, എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് (സിഗ്മ-ആൽ‌ഡ്രിക്ക്), ല്യൂപെപ്റ്റിൻ, പെപ്സ്റ്റാറ്റിൻ എന്നിവ അടങ്ങിയ എക്സ്‌എൻ‌എം‌എക്സ് ഐസ്-കോൾഡ് ആർ‌പി‌എ ബഫറിൽ (തെർമോ സയന്റിഫിക്) ടിഷ്യു പുനർ‌നിർമ്മിച്ചു. ടിഷ്യു ലൈസേറ്റുകൾ സാമ്പിൾ ബഫറിൽ 500 മിനുട്ട് തിളപ്പിച്ച് 1% –2% അല്ലെങ്കിൽ 10% ട്രിസ്-ഗ്ലൈസിൻ എസ്ഡിഎസ് ജെല്ലുകളിൽ (ഇൻവിട്രോജൻ) ലോഡുചെയ്തു. പ്രോട്ടീൻ നൈട്രോസെല്ലുലോസ് മെംബ്രണുകളിലേക്ക് മാറ്റി, 4 h ന് ~ 20 - 10 ° C (1% കൊഴുപ്പില്ലാത്ത ഉണങ്ങിയ പാലും 23% Pween- ൽ 25%, 5% Tween-0.2), 20 at C ന് പ്രാഥമിക ആന്റിബോഡിയിൽ ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്തു. ഇനിപ്പറയുന്ന പ്രാഥമിക ആന്റിബോഡികൾ ബ്ലോക്ക് ലായനിയിൽ ലയിപ്പിച്ചിരുന്നു: D7.4R മൗസ് മോണോക്ലോണൽ (സാന്താക്രൂസ്, 4: 2) അല്ലെങ്കിൽ β- ആക്ടിൻ മ mouse സ് മോണോക്ലോണൽ (സാന്താക്രൂസ്, 1: 100). നിറകണ്ണുകളോടെ പെറോക്സിഡേസ്-കൺജഗേറ്റഡ് സെക്കൻഡറി ആന്റിബോഡികളുമായി (അമെർഷാം, എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്: എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്) ഇൻകുബേഷൻ ചെയ്ത ശേഷം ചെമിലൂമിനസെന്റ് ഇസി‌എൽ റിയാജൻറ് ചേർത്തു. പക്വതയാർന്ന മെംബറേൻ-അനുബന്ധ രൂപം D1DR (~ 200 kDa) 1, 2,000 ഒരു പ്രോട്ടീൻ-ലോഡിംഗ് നിയന്ത്രണത്തിലേക്ക് (β- ആക്ടിൻ; 2 kDa) നോർമലൈസ് ചെയ്യുകയും NIH ഇമേജ് ജെ സോഫ്റ്റ്വെയർ ഉപയോഗിച്ച് ഡെൻസിറ്റോമെട്രി ഉപയോഗിച്ച് കണക്കാക്കുകയും ചെയ്തു.

ഇമ്മ്യൂണോകെമിക്കൽ വിശകലനം.

പി‌ബി‌എസിലെ (പി‌എച്ച് എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്) എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്% പാരഫോർമാൽഡിഹൈഡ് ഉപയോഗിച്ച് എലികളെ അനസ്തേഷ്യ ചെയ്യുകയും ട്രാൻസ്കാർഡിയൽ പെർഫ്യൂസ് ചെയ്യുകയും ചെയ്തു. തലച്ചോറുകൾ നീക്കം ചെയ്യുകയും ഒറ്റരാത്രികൊണ്ട് പോസ്റ്റ് ഫിക്സ് ചെയ്യുകയും ചുരുങ്ങിയത് 4 h വരെ സുക്രോസിൽ (PBS- ലെ 7.6% പരിഹാരം, pH 30) സൂക്ഷിക്കുകയും ചെയ്തു. ഫ്രോസൺ ടിഷ്യു വിഭാഗങ്ങൾ (7.4 thicknessm കനം) ഒരു മൈക്രോടോമിൽ നിന്ന് ശേഖരിക്കുകയും തടയുകയും ചെയ്തു (72% BSA, 30% സാധാരണ ആട് സെറം, PN ലെ 3% ട്രൈറ്റൺ X-5) 0.3 h ന് ~ 100-1 at C ന്. ബ്ലോക്ക് ലായനിയിൽ ഇനിപ്പറയുന്ന പ്രാഥമിക ആന്റിബോഡികൾ ചേർത്ത് രാത്രിയിൽ 23 at C ൽ ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്തു: ചിക്കൻ പോളിക്ലോണൽ മുതൽ GFP വരെ (അബ്കാം, 25: 4); മുയൽ മോണോക്ലോണൽ മുതൽ GFAP വരെ (മില്ലിപൂർ, 1: 1,000); മ mon സ് മോണോക്ലോണൽ ടു ന്യൂയുൻ (മില്ലിപോർ, എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്: എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്). ~ 1-1,000 ° C ൽ ഫ്ലൂറസെന്റ്-ഡൈ-കൺജഗേറ്റഡ് സെക്കൻഡറി ആന്റിബോഡികൾ ഉപയോഗിച്ച് വിഭാഗങ്ങൾ ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്തു: ആന്റി-ചിക്കൻ-എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്-എൻ‌എം ഡൈ (ജാക്സൺ ഇമ്മ്യൂണോ റിസർച്ച്, എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്: എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ്), ആന്റി-റാബിറ്റ്-എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ് ഡൈ (ഇൻ‌വിട്രോജൻ, എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ് ), ആന്റി-മൗസ്- 1-nm ഡൈ (ഇൻ‌വിട്രോജൻ, 1,000: 23). വിഭാഗങ്ങൾ‌ DAPI (വെക്റ്റർ‌ ലാബുകൾ‌) അടങ്ങിയ വെക്റ്റാഷീൽ‌ഡ് മൗണ്ടിംഗ് മീഡിയ ഉപയോഗിച്ച് കവർ‌സ്ലിപ്പ് ചെയ്തു. ഒളിമ്പസ് BX25 ഫ്ലൂറസെൻസ് മൈക്രോസ്കോപ്പ് (× 488 ഒബ്ജക്റ്റ്) അല്ലെങ്കിൽ ഒളിമ്പസ് കോൺഫോക്കൽ മൈക്രോസ്കോപ്പ് (× 1, × 1,000 ലക്ഷ്യങ്ങൾ) ഉപയോഗിച്ചാണ് ചിത്രങ്ങൾ എടുത്തത്.

തീറ്റക്രമം.

ഭക്ഷ്യ ഉൽപന്നങ്ങൾ അയഞ്ഞ കട്ടിലുകളുപയോഗിച്ച് മലിനമാകാതിരിക്കാൻ പേപ്പർ ബെഡ്ഡിംഗിൽ (ആൽഫ പാഡുകൾ; ഷെപ്പേർഡ് സ്പെഷ്യാലിറ്റി പേപ്പറുകൾ) എലികളെ വ്യക്തിഗതമായി പാർപ്പിച്ചിരുന്നു. ബേക്കൺ, സോസേജ്, ചീസ്കേക്ക്, പ ound ണ്ട് കേക്ക്, ഫ്രോസ്റ്റിംഗ്, ചോക്ലേറ്റ് എന്നിവ അടങ്ങിയതാണ് കഫറ്റേരിയ ഡയറ്റ്, എലികൾക്ക് ലഭ്യമാകുന്നതിന് മുമ്പ് വ്യക്തിഗതമായി ആഹാരം കഴിച്ചിരുന്നു. ചെറിയ ലോഹ പാത്രങ്ങളിലാണ് കഫറ്റീരിയ ഡയറ്റ് ഭക്ഷ്യവസ്തുക്കൾ വിതരണം ചെയ്തത്. സ്റ്റാൻഡേർഡ് ലബോറട്ടറി ച including ഉൾപ്പെടെ എല്ലാ ഭക്ഷ്യവസ്തുക്കളും തീറ്റ സെഷൻ പൂർത്തിയാക്കിയ ശേഷം വീണ്ടും തൂക്കിനോക്കി. നിർമ്മാതാവ് നൽകിയ പോഷക വിവരങ്ങൾ ഉപയോഗിച്ച് വിവിധ മാക്രോ ന്യൂട്രിയന്റുകളിൽ നിന്നുള്ള കലോറി ഉപഭോഗം കണക്കാക്കി.

ഭക്ഷണം നൽകുന്ന സ്വഭാവത്തെ ക്യൂ-ഇൻഡ്യൂസ്ഡ് സപ്രഷൻ.

ബി‌എസ്‌ആർ പരീക്ഷണങ്ങളിൽ ഉപയോഗിച്ചതിന് സമാനമായ അളവിലുള്ള ശബ്‌ദ-അറ്റൻ‌വേറ്റഡ് ഓപ്പറൻറ് ചേമ്പറുകളിലാണ് തീറ്റക്രമം. എലികളെ ഒരു ഓപ്പറേറ്റീവ് ചേംബറിൽ സ്ഥാപിക്കുകയും 30 മിനുട്ട് കഫറ്റീരിയ ഡയറ്റ് അല്ലെങ്കിൽ ച ow വിന് പ്രവേശനമുണ്ടായിരുന്നു. ചെറിയ ലോഹ പാത്രങ്ങളിലാണ് ഭക്ഷ്യ ഉൽപന്നങ്ങൾ വിതരണം ചെയ്തത്. എല്ലാ ഭക്ഷ്യവസ്തുക്കളും തീറ്റ സെഷനുകൾക്ക് മുമ്പും ശേഷവും തൂക്കിനോക്കിയിരുന്നു, അവ എലികളുടെ സാധാരണ തീറ്റ കാലയളവിൽ നടത്തിയിരുന്നു. എലികളുടെ ഹോം കൂടുകളിൽ നൽകിയിട്ടുള്ള ചൗവിന് സമാനമായ 45-മില്ലിഗ്രാം ചൗ ഉരുളകൾ ഉപയോഗിച്ചാണ് ച ow ഉപഭോഗം വിലയിരുത്തിയത്. സ്ഥിരമായ ഉപഭോഗം നേടുന്നതുവരെ എലികൾക്ക് കഫറ്റീരിയ ഭക്ഷണത്തിലേക്ക് പ്രതിദിനം 30 മിനിറ്റ് പ്രവേശനം അനുവദിച്ചു (ദിവസേന കഴിക്കുന്നതിൽ <10% വ്യതിയാനം എന്ന് നിർവചിക്കപ്പെടുന്നു), ഇതിന് 5–7 ഡി ആവശ്യമാണ്. ഈ അടിസ്ഥാന കാലയളവിൽ രുചികരമായ ഭക്ഷണം കഴിക്കുന്നത് സ്ഥിരപ്പെടുത്തിയ ശേഷം, ഓരോ ആക്സസ് അവസ്ഥയിലെയും എലികളെ രണ്ട് ഗ്രൂപ്പുകൾക്ക് അനുവദിച്ചു: ശിക്ഷിക്കപ്പെട്ടവർ (കാൽ ഷോക്ക് സ്വീകരിക്കുന്നവർ) ശിക്ഷിക്കപ്പെടാത്തവർ (കാൽ ഷോക്ക് ലഭിക്കുന്നില്ല). എലികളെ തുടർച്ചയായി നാല് കണ്ടീഷനിംഗ് സെഷനുകൾക്ക് വിധേയമാക്കി, അതേ ഓപ്പറേഷൻ ചേംബറിൽ, മുമ്പ് അവർക്ക് രുചികരമായ ഭക്ഷണം ലഭ്യമായിരുന്നു. 30 മിനിറ്റ് കണ്ടീഷനിംഗ് സെഷനുകളിൽ 10 മിനിറ്റ് നേരത്തേക്ക് ഒരു ക്യൂ ലൈറ്റ് (കണ്ടീഷൻഡ് ഉത്തേജനം) സജീവമാക്കി, 10 മിനിറ്റ് ഓഫാക്കി, തുടർന്ന് 10 മിനിറ്റ് നേരത്തേക്ക് ഓണാക്കി. ക്യൂ ലൈറ്റിന്റെ അവതരണ വേളയിൽ മാത്രമാണ് ശിക്ഷിക്കപ്പെട്ട എലികൾക്ക് കാൽ ഞെട്ടൽ ലഭിച്ചത് (0.5 സെക്കന്റിന് 1.0 എം‌എ; ~ 10-മിനിറ്റ് ഇടവേളകളുള്ള 1 ഉത്തേജനങ്ങൾ). ശിക്ഷിക്കപ്പെടാത്ത എലികളെ അതേ രീതിയിൽ ക്യൂ ലൈറ്റ് നൽകി, പക്ഷേ കാൽ ഷോക്ക് നൽകാതെ. പരീക്ഷണ ദിവസം, അന്തിമ കണ്ടീഷനിംഗ് സെഷന്റെ പിറ്റേ ദിവസം, ശിക്ഷിക്കപ്പെട്ട ഗ്രൂപ്പുകളിലെ എലികൾക്ക് ഇടയ്ക്കിടെ കാൽ ഷോക്ക് ലഭിച്ചു (ആകെ അഞ്ച് ഉത്തേജനങ്ങൾ) 5 മിനിറ്റ് ക്യൂ ലൈറ്റ് സജീവമാക്കുന്നതുമായി ജോടിയാക്കി. കാൽ ഞെട്ടലിന്റെ അഭാവത്തിൽ ശിക്ഷിക്കപ്പെടാത്ത എലികൾ വീണ്ടും ക്യൂ ലൈറ്റിലേക്ക് തുറന്നുകാട്ടി. 5 മിനിറ്റ് ശിക്ഷാ കാലയളവിനുശേഷം, എല്ലാ എലികൾക്കും 30 മിനിറ്റ് സെഷനായി രുചികരമായ ഭക്ഷണത്തിലേക്ക് പ്രവേശനം അനുവദിച്ചു.

സ്ഥിതിവിവര വിശകലനങ്ങൾ.

ഓരോ വിഷയത്തിനും കഫറ്റേരിയ ഡയറ്റിലേക്ക് പ്രവേശിക്കുന്നതിന് മുമ്പ് എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് ഡി യുടെ ശരാശരി ത്രെഷോൾഡ് മൂല്യമായി ബേസ്‌ലൈൻ റിവാർഡ് ത്രെഷോൾഡുകൾ നിർവചിക്കപ്പെട്ടിട്ടുണ്ട്. അടിസ്ഥാന പരിധി മൂല്യത്തിൽ നിന്നുള്ള ശതമാനം മാറ്റം കാരണം റിവാർഡ് ത്രെഷോൾഡുകൾ പ്രകടിപ്പിച്ചു. ബേസ്‌ലൈൻ റിവാർഡ് ത്രെഷോൾഡ് മൂല്യങ്ങളുടെ ശതമാനം, ശരീരഭാരം, കലോറി ഉപഭോഗം, കൊഴുപ്പിൽ നിന്നുള്ള കലോറിക് ഉപഭോഗം എന്നിവയുടെ ഡാറ്റയെ രണ്ട് ഘടകങ്ങളാൽ വിശകലനം ചെയ്തു, വേരിയൻസിന്റെ ആവർത്തിച്ചുള്ള-അളവ് വിശകലനം, ആക്സസ് (ച ow മാത്രം, നിയന്ത്രിത ആക്സസ് അല്ലെങ്കിൽ വിപുലീകൃത ആക്സസ്), കലോറി ഉറവിടം ( സ്റ്റാൻഡേർഡ് ച ow അല്ലെങ്കിൽ കഫറ്റീരിയ ഡയറ്റ്), വൈറസ് (ലെന്റി-കൺട്രോൾ അല്ലെങ്കിൽ ലെന്റി-ഡിഎക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ്ആർഷ്), ക്യൂ (ശിക്ഷയുമായി ജോടിയാക്കിയതോ ജോടിയാക്കാത്തതോ) എന്നിവ വിഷയങ്ങൾക്കിടയിലുള്ള ഘടകങ്ങളും സമയത്തിനുള്ളിലെ ഘടകമായി സമയവുമാണ്. ഉചിതമാകുമ്പോൾ, വ്യതിയാനത്തിന്റെ വിശകലനങ്ങളിലെ പ്രധാന ഫലങ്ങൾ ബോൺഫെറോണി പോസ്റ്റ് ഹോക് ടെസ്റ്റുകൾ കൂടുതൽ വിശകലനം ചെയ്തു. എല്ലാ സ്ഥിതിവിവര വിശകലനങ്ങളും ഗ്രാഫ്പാഡ് പ്രിസം സോഫ്റ്റ്വെയർ ഉപയോഗിച്ചാണ് നടത്തിയത്.

അവലംബം

അവലംബം

ഇതിലേക്കുള്ള കറസ്പോണ്ടൻസ്:

· പോൾ ജെ കെന്നി ([ഇമെയിൽ പരിരക്ഷിച്ചിരിക്കുന്നു])