പ്രമേഹരോഗം. 2017; 60 (8): 1502 - 1511.
ഓൺ‌ലൈനായി പ്രസിദ്ധീകരിച്ചു 2017 മെയ് 20. doi: 10.1007/s00125-017-4305-4
PMCID: PMC5491592
ചിസായോ കൊസുക,1 തഡാഷി കനാമെ,2 ചിഗുസ ഷിമിസു-ഒകാബെ,3 ചിറ്റോഷി തകയാമ,3 മസാറ്റോ സുത്സുയി,4 മസായുകി മാത്സുഷിത,5 കെയ്‌കോ അബെ,6,7 ഒപ്പം ഹിരോക്കി മസുസാക്കി
1
വേര്പെട്ടുനില്ക്കുന്ന
ലക്ഷ്യങ്ങൾ / പരികല്പന
കൊഴുപ്പ് അമിതമായി കഴിക്കുന്നത് മനുഷ്യരിലും എലിയിലും അമിതവണ്ണത്തിന് കാരണമാകുന്നു. മനുഷ്യരിലും എലികളിലുമുള്ള സമീപകാല പഠനങ്ങൾ തെളിയിക്കുന്നത് കൊഴുപ്പിനോടുള്ള ആസക്തി മസ്തിഷ്ക റിവാർഡ് സിസ്റ്റങ്ങളുടെ അപര്യാപ്തതയുടെ അടിസ്ഥാനത്തിൽ മദ്യം, നിക്കോട്ടിൻ, മയക്കുമരുന്ന് എന്നിവയ്ക്കുള്ള ആസക്തിയുമായി ഒരു പൊതു സംവിധാനം പങ്കിടുന്നു എന്നാണ്. ഉയർന്ന കൊഴുപ്പ് ഉള്ള ഭക്ഷണക്രമം (എച്ച്എഫ്ഡി) മസ്തിഷ്ക റിവാർഡ് സിസ്റ്റത്തിന്റെ ഒരു പ്രധാന റെഗുലേറ്ററായ സ്ട്രൈറ്റത്തിലെ ഡോപാമൈൻ ഡിഎക്സ്എൻഎംഎക്സ് റിസപ്റ്റർ (ഡിഎക്സ്എൻഎംഎക്സ്ആർ) സിഗ്നലിംഗിനെ ആകർഷിക്കുന്നു, ഇത് ഹെഡോണിക് അമിതഭക്ഷണത്തിന് കാരണമാകുന്നു. തവിട്ട് അരി-നിർദ്ദിഷ്ട ബയോ ആക്റ്റീവ് ഘടകം γ-oryzanol ഹൈപ്പോഥലാമിക് നിയന്ത്രണം വഴി ഒരു എച്ച്എഫ്ഡിക്ക് മുൻഗണന നൽകുന്നുവെന്ന് ഞങ്ങൾ മുമ്പ് റിപ്പോർട്ട് ചെയ്തു. അതിനാൽ എലികളിലെ മസ്തിഷ്ക റിവാർഡ് സിസ്റ്റത്തിന്റെ പ്രവർത്തനം γ-oryzanol മോഡുലേറ്റ് ചെയ്യുന്നതിനുള്ള സാധ്യത ഞങ്ങൾ പരിശോധിച്ചു.
രീതികൾ
എച്ച്എഫ്ഡിക്ക് ആഹാരം നൽകിയ ആൺ സി‌എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ്ബി‌എൽ / എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്ജെ എലികളെ γ-oryzanol ഉപയോഗിച്ച് വാമൊഴിയായി ചികിത്സിച്ചു, കൂടാതെ D57R സിഗ്നലിംഗിൽ ഉൾപ്പെട്ടിരിക്കുന്ന തന്മാത്രകളുടെ സ്ട്രാറ്റിയൽ അളവ് വിലയിരുത്തി. D6R പ്രൊമോട്ടറിന്റെ ഡിഎൻഎ മെത്തിലൈലേഷനിൽ γ-oryzanol ന്റെ സ്വാധീനവും ഭക്ഷണത്തിലെ കൊഴുപ്പിനുള്ള മുൻ‌ഗണനകളിലെ മാറ്റങ്ങളും പരിശോധിച്ചു. കൂടാതെ, ഡിഎൻഎ മെഥൈൽ‌ട്രാൻസ്ഫെറസുകളുടെ (ഡിഎൻഎംടി) ശക്തമായ ഇൻ‌ഹിബിറ്ററായ എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്-ആസാ-എക്സ്എൻഎംഎക്സ്-ഡിയോക്സിസൈറ്റിഡിൻ, ഭക്ഷണ മുൻഗണന, ഡിഎക്സ്എൻഎംഎക്സ്ആർ സിഗ്നലിംഗ്, സ്ട്രൈറ്റത്തിലെ ഡിഎൻഎംടികളുടെ അളവ് എന്നിവയെക്കുറിച്ച് അന്വേഷിച്ചു. ഡിഎൻഎംടികളുടെ പ്രവർത്തനത്തിൽ γ-oryzanol ന്റെ തടസ്സം ഉണ്ടാക്കുന്ന ഫലങ്ങൾ വിട്രോയിൽ എൻസൈമിക്കായി വിലയിരുത്തി.
ഫലം
എലികളിൽ നിന്നുള്ള സ്ട്രിയാറ്റത്തിൽ ഒരു എച്ച്എഫ്ഡി നൽകി, ഡിഎക്സ്എൻയുഎംഎക്സ്ആറിന്റെ പ്രൊമോട്ടർ മേഖലയിലെ ഡിഎൻഎ മെത്തിലൈലേഷന്റെ വർദ്ധനവ് വഴി ഡിഎക്സ്എൻയുഎംഎക്സ്ആർ ഉൽ‌പാദനം കുറഞ്ഞു. Γ-oryzanol ന്റെ ഓറൽ അഡ്മിനിസ്ട്രേഷൻ DNMT- കളുടെ പ്രകടനവും പ്രവർത്തനവും കുറയ്ക്കുകയും അതുവഴി സ്ട്രൈറ്റത്തിലെ D2R- കളുടെ അളവ് പുന oring സ്ഥാപിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു. 2-aza-2′-deoxycytidine ഡിഎൻഎംടികളുടെ ഫാർമക്കോളജിക്കൽ ഇൻ‌ഹിബിഷനും ഭക്ഷണത്തിലെ കൊഴുപ്പിനുള്ള മുൻഗണന മെച്ചപ്പെടുത്തി. ഈ കണ്ടെത്തലുകൾക്ക് അനുസൃതമായി, എൻസൈമാറ്റിക് ഇൻ വിട്രോ അസ്സെയ്സ് γ-oryzanol DNMT- കളുടെ പ്രവർത്തനത്തെ തടസ്സപ്പെടുത്തുന്നുവെന്ന് തെളിയിച്ചു.
നിഗമനങ്ങൾ / വ്യാഖ്യാനം
എലികളുടെ സ്ട്രൈറ്റത്തിൽ D2R ന്റെ പ്രൊമോട്ടർ മേഖലയുടെ എച്ച്എഫ്ഡി-ഇൻഡ്യൂസ്ഡ് ഡിഎൻഎ ഹൈപ്പർ‌മെഥിലേഷൻ γ-oryzanol മെച്ചപ്പെടുത്തുന്നുവെന്ന് ഞങ്ങൾ തെളിയിച്ചു. ഞങ്ങളുടെ പരീക്ഷണാത്മക മാതൃക γ-oryzanol ഒരു നോവൽ എപിജനെറ്റിക് മോഡുലേറ്ററെന്ന വ്യതിരിക്തമായ സ്വത്തവകാശമുള്ള ഒരു ആന്റിബോബിസിറ്റി പദാർത്ഥമായി എടുത്തുകാണിക്കുന്നു.
ഇലക്ട്രോണിക് സപ്ലിമെന്ററി മെറ്റീരിയൽ
ഈ ലേഖനത്തിന്റെ ഓൺലൈൻ പതിപ്പിൽ (doi: 10.1007 / s00125-017-4305-4) പിയർ അവലോകനം ചെയ്തതും എഡിറ്റുചെയ്യാത്തതുമായ അനുബന്ധ മെറ്റീരിയലുകൾ അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു, ഇത് അംഗീകൃത ഉപയോക്താക്കൾക്ക് ലഭ്യമാണ്.
അവതാരിക
അമിതവണ്ണമുള്ള വ്യക്തികളിൽ അമിതമായി ഭക്ഷണം കഴിക്കുന്നത്, കുറഞ്ഞത് ഭാഗികമായെങ്കിലും, മദ്യം, നിക്കോട്ടിൻ, മയക്കുമരുന്ന് എന്നിവയ്‌ക്ക് അടിമപ്പെടുന്ന സാധാരണ സംവിധാനങ്ങൾ പങ്കിടുന്നു [1]. വിശപ്പിന്റെ ഹൈപ്പോഥലാമിക്, ഹോർമോൺ നിയന്ത്രണത്തോടൊപ്പം, മസ്തിഷ്ക റിവാർഡ് സിസ്റ്റം, പ്രത്യേകിച്ചും ഡോപാമൈൻ റിസപ്റ്റർ സിഗ്നലിംഗ്, ആസക്തി അല്ലെങ്കിൽ ഹെഡോണിക് തീറ്റ സ്വഭാവവുമായി അടുത്ത ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു [2]. എലികളിലെ മുമ്പത്തെ ഒരു പഠനത്തിൽ, ലെന്റിവൈറസ്-മെഡിയേറ്റഡ് ഷോർട്ട് ഹെയർപിൻ ആർ‌എൻ‌എയെ തടസ്സപ്പെടുത്തുന്ന സ്ട്രൈറ്റൽ ഡോപാമൈൻ ഡിഎക്സ്എൻഎംഎക്സ് റിസപ്റ്ററിൻറെ (ഡിഎക്സ്എൻയുഎംഎക്സ്ആർ) നോക്ക്ഡ down ൺ വേഗത്തിൽ ആസക്തി പോലുള്ള പ്രതിഫല കമ്മി, നിർബന്ധിത ഭക്ഷണം എന്നിവ തേടുന്നു [3]. D2R സാന്ദ്രത കുറയുന്നതിനാൽ, അമിതവണ്ണമുള്ള മനുഷ്യരിലും എലികളിലുമുള്ള മെലിഞ്ഞ നിയന്ത്രണ ഗ്രൂപ്പുകളുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ ഡോർസൽ സ്ട്രിയാറ്റം ഭക്ഷണ പ്രതിഫലത്തോട് പ്രതികരിക്കുന്നില്ല [3-5]. ഈ ധാരണയ്ക്ക് അനുസൃതമായി, ദി തഖ്IA ഓൺലൈൻ ANKK1 സ്‌ട്രീറ്റൽ D2R ഉൽ‌പാദനം കുറയ്ക്കുന്ന ജീൻ ലോക്കസ് (എൻ‌കോഡിംഗ് DRD1 / അങ്കൈറിൻ റിപ്പീറ്റ്, കൈനാസ് ഡൊമെയ്ൻ), മനുഷ്യരിൽ അമിതവണ്ണമുള്ള ഒരു ഫിനോടൈപ്പുമായി ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു [6], ബരിയാട്രിക് ശസ്‌ത്രക്രിയയ്‌ക്കുശേഷം ശരീരഭാരം കുറയ്‌ക്കുന്നതിന്റെ ഫലങ്ങൾ ഉയർന്ന സ്‌ട്രീറ്റൽ D2R സാന്ദ്രതയുമായി ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു [7]. അമിതവണ്ണത്തെ ചികിത്സിക്കുന്നതിനുള്ള ഒരു പുതിയ ചികിത്സാ ലക്ഷ്യമെന്ന നിലയിൽ സ്ട്രാറ്റിയൽ D2R ന്റെ പ്രാധാന്യം ഈ ഡാറ്റ ശക്തമായി നിർദ്ദേശിക്കുന്നു. എന്നിരുന്നാലും, മസ്തിഷ്ക റിവാർഡ് സിസ്റ്റത്തിൽ പ്രവർത്തിക്കുന്ന ചില മരുന്നുകൾ ഗുരുതരമായ മാനസിക പ്രശ്നങ്ങൾ ഉൾപ്പെടെയുള്ള ഗുരുതരമായ പ്രതികൂല ഫലങ്ങൾ ഉണ്ടാക്കി, ഫലമായി ക്ലിനിക്കുകളിൽ നിന്ന് പിന്മാറുകയും ചെയ്തു [8].
എപിജനെറ്റിക് പരിഷ്കാരങ്ങൾ വികസനത്തിനും വ്യത്യസ്തതയ്ക്കും മാത്രമല്ല, ഭക്ഷണത്തിലും ജീവിതശൈലിയിലുമടക്കം പാരിസ്ഥിതിക വ്യതിയാനങ്ങളുടെ ഫലമായി ഉണ്ടാകുന്നവയാണ് [9]. ജീൻ എക്സ്പ്രഷന്റെ സ്ഥിരതയ്ക്കുള്ള ഒരു പ്രധാന എപിജനെറ്റിക് സംഭവമാണ് ഡിഎൻഎ മെത്തിലേഷൻ [9]. എലികളിൽ, ഉയർന്ന കൊഴുപ്പ് ഉള്ള ഭക്ഷണത്തിലേക്ക് (എച്ച്എഫ്ഡി) മാതൃ എക്സ്പോഷർ സന്താനങ്ങളിലെ കേന്ദ്ര റിവാർഡ് സിസ്റ്റത്തിനുള്ളിലെ ഡിഎൻഎ മെത്തിലൈലേഷനെ പരസ്പരം മാറ്റുന്നു, ഇത് നായ്ക്കുട്ടികൾ എച്ച്എഫ്ഡി അമിതമായി ഉപയോഗിക്കുന്നതിന് കാരണമാകുന്നു [10]. പ്രത്യേകിച്ചും, ഭക്ഷണ സ്വഭാവത്തെയും ശാരീരിക പ്രവർത്തനങ്ങളെയും നിയന്ത്രിക്കുന്നതിൽ ഡിഎൻഎ മെഥൈൽ‌ട്രാൻസ്ഫെറസ് (ഡിഎൻഎംടി) നിർണായക പങ്ക് വഹിക്കുന്നു [10, 11], അമിതവണ്ണം-പ്രമേഹ സിൻഡ്രോം ചികിത്സയ്ക്കുള്ള ചികിത്സാ ലക്ഷ്യങ്ങൾ ഡിഎൻ‌എം‌ടികൾ വാഗ്ദാനം ചെയ്യുന്നുവെന്ന് നിർദ്ദേശിക്കുന്നു. പ്രധാനമായും, കഫീക്ക് ആസിഡ്, എപിഗല്ലോകാടെക്കിൻ എന്നിവയുൾപ്പെടെയുള്ള പ്രകൃതിദത്തമായ ചില പദാർത്ഥങ്ങൾ ഡിഎൻഎംടി ഇൻ‌ഹിബിറ്ററുകളായി പ്രവർത്തിക്കുന്നു [12, 13].
ഫെറൂളിക് ആസിഡ് എസ്റ്ററിന്റെയും നിരവധി ഫൈറ്റോസ്റ്റെറോളുകളുടെയും മിശ്രിതമായ ബയോ ആക്റ്റീവ്, ബ്ര brown ൺ റൈസ് നിർദ്ദിഷ്ട ഘടകം γ- ഓറിസനോൾ, ഹൈപ്പോഥലാമിക് എൻ‌ഡോപ്ലാസ്മിക് റെറ്റികുലം (ഇആർ) സമ്മർദ്ദം കുറയുന്നതിലൂടെ ഭക്ഷണത്തിലെ കൊഴുപ്പിനുള്ള മുൻഗണന മനസ്സിലാക്കുന്നുവെന്ന് ഞങ്ങൾ അടുത്തിടെ തെളിയിച്ചു [14]. എലികളിലും മുയലുകളിലും, വാമൊഴിയായി നൽകുന്ന γ- ഓറിസനോൾ കുടലിൽ നിന്ന് അതിവേഗം ആഗിരണം ചെയ്യപ്പെടുകയും പ്രധാനമായും തലച്ചോറിലേക്ക് വിതരണം ചെയ്യുകയും ചെയ്യുന്നു [15, 16]. ഈ കണ്ടെത്തലുകൾ ഒരുമിച്ച് നോക്കിയാൽ, കേന്ദ്ര നാഡീവ്യവസ്ഥയിൽ പ്രവർത്തിക്കുന്ന പ്രകൃതിദത്തമായ ഭക്ഷ്യ ഉൽ‌പന്നങ്ങൾ അമിതവണ്ണത്തിലെ ദുർബലമായ ഭക്ഷണ സ്വഭാവത്തെ സുരക്ഷിതമായി മെച്ചപ്പെടുത്തുന്നതിനുള്ള ഒരു ബദലാണ്. ഈ സന്ദർഭത്തിൽ, മസ്തിഷ്ക റിവാർഡ് സിസ്റ്റത്തിലെ ഡിഎൻഎ മെത്തിലൈലേഷൻ നിലയെ hy-oryzanol മാറ്റുമെന്ന അനുമാനത്തെ ഞങ്ങൾ പരീക്ഷിച്ചു, അതിന്റെ ഫലമായി എലികളിൽ ഒരു എച്ച്എഫ്ഡിക്ക് മുൻഗണന ലഭിക്കുന്നു.
രീതികൾ
മൃഗങ്ങൾ
ജപ്പാനിലെ ചാൾസ് റിവർ ലബോറട്ടറീസ് (കനഗാവ, ജപ്പാൻ) ൽ നിന്ന് ലഭിച്ച ഏഴ് ആഴ്ച പ്രായമുള്ള ആൺ C57BL / 6J എലികളെ 3 മണിക്കൂർ / 4 മണിക്കൂർ വെളിച്ചത്തിൽ 24 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ പ്രത്യേക-രോഗകാരികളില്ലാത്ത അവസ്ഥയിൽ പാർപ്പിച്ചു (ഒരു കൂട്ടിൽ 12–12). ഇരുണ്ട ചക്രം. ഒരാഴ്ചത്തെ അക്ലൈമൈസേഷന് ശേഷം, 8 ആഴ്ച പ്രായമുള്ള എലികളെ ഭാരം പൊരുത്തപ്പെടുത്തുകയും രണ്ടോ മൂന്നോ ഗ്രൂപ്പുകളായി തിരിച്ച് ഓരോ പരീക്ഷണത്തിനും വിധേയമാക്കുകയും ചെയ്തു. എലികൾക്കും ഭക്ഷണത്തിനും വെള്ളത്തിനും സ access ജന്യമായി പ്രവേശനം അനുവദിച്ചു. എല്ലാ മൃഗ പരീക്ഷണങ്ങൾക്കും റ്യൂക്യസ് സർവകലാശാലയിലെ അനിമൽ എക്സ്പിരിമെന്റ് എത്തിക്സ് കമ്മിറ്റി അംഗീകാരം നൽകി (എണ്ണം 5352, 5718, 5943).
Γ-oryzanol, 5-aza-2′-deoxycytidine എന്നിവയുടെ അഡ്മിനിസ്ട്രേഷൻ
എച്ച്എഫ്ഡിക്കുള്ള മുൻഗണന വിലയിരുത്തുന്നതിന്, മുമ്പ് വിവരിച്ചതുപോലെ ഭക്ഷണ തിരഞ്ഞെടുപ്പ് പരിശോധനയിൽ ഗാവേജ് വഴി γ- ഓറിസനോൾ (വാക്കോ പ്യുവർ കെമിക്കൽ ഇൻഡസ്ട്രീസ്, ഒസാക്ക, ജപ്പാൻ) 8 ആഴ്ച പ്രായമുള്ള എലികൾക്ക് നൽകി.14, 17]. മറ്റ് പരീക്ഷണങ്ങൾ‌ക്കായി, 12079% or-oryzanol അടങ്ങിയ ഒരു HFD (D0.4B; റിസർച്ച് ഡയറ്റ്സ്, ന്യൂ ബ്രൺ‌സ്വിക്ക്, NJ, USA) ഉരുളകളായി നിർമ്മിച്ചു. ഭക്ഷണത്തിന്റെ ഘടകങ്ങൾ ഇലക്ട്രോണിക് സപ്ലിമെന്ററി മെറ്റീരിയൽ (ESM) പട്ടികയിൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നു 1. 12 ആഴ്ചത്തെ തീറ്റയ്ക്ക് ശേഷം, സ്ട്രിയാറ്റത്തിൽ നിന്നും ഹൈപ്പോതലാമസിൽ നിന്നും ടിഷ്യു ശേഖരിച്ചു. എലികളുടെ ശരാശരി ഭക്ഷണത്തിൽ നിന്ന് കണക്കാക്കപ്പെടുന്ന γ-oryzanol ന്റെ ദൈനംദിന ഉപഭോഗം ഏകദേശം 320 μg / g ശരീരഭാരമായിരുന്നു. Desined-oryzanol ന്റെ ഡോസുകൾ മുമ്പ് വിശദീകരിച്ചതുപോലെ നിർണ്ണയിക്കപ്പെട്ടു [14]. 5-ആസ -2′-ഡിയോക്സിസൈറ്റിഡിൻ (5-ആസ-ഡിസി; സിഗ്മ-ആൽ‌ഡ്രിക്ക്, സെന്റ് ലൂയിസ്, എം‌ഒ, യുഎസ്എ) 0.25 ആഴ്ചത്തേക്ക് ആഴ്ചയിൽ മൂന്ന് തവണ ഇൻട്രാപെറിറ്റോണലായി കുത്തിവച്ചു (12 μg / g ശരീരഭാരം) [18].
ഭക്ഷണത്തിലെ കൊഴുപ്പിനുള്ള മുൻഗണന കണക്കാക്കൽ
ഭക്ഷണത്തിലെ കൊഴുപ്പിനുള്ള മുൻ‌ഗണനകൾ വിലയിരുത്തുന്നതിന്, മുമ്പ് വിവരിച്ചതുപോലെ ച ow, എച്ച്എഫ്ഡി (D12450B, D12451; റിസർച്ച് ഡയറ്റുകൾ) എന്നിവയ്ക്കിടയിൽ ഭക്ഷണ പരിശോധനകൾ തിരഞ്ഞെടുത്തു [14]. ഭക്ഷണത്തിന്റെ ഘടകങ്ങൾ ESM പട്ടികയിൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നു 1. ചുരുക്കത്തിൽ, ച ow, എച്ച്എഫ്ഡി എന്നിവയിലേക്ക് എലികൾക്ക് സ access ജന്യ ആക്സസ് അനുവദിച്ചു. ച ow, എച്ച്എഫ്ഡി എന്നിവയുടെ അളവ് ആഴ്ചതോറും അളക്കുകയും ഭക്ഷണത്തിലെ കൊഴുപ്പിന് മുൻഗണന നൽകുകയും ചെയ്തു. ഫോർമുല അനുസരിച്ച് എച്ച്എഫ്ഡി മുൻഗണന കണക്കാക്കി: എച്ച്എഫ്ഡി മുൻഗണന = [(എച്ച്എഫ്ഡി ഉപഭോഗം / മൊത്തം ഭക്ഷണം കഴിക്കൽ) × 100].
ഡിഎൻഎ മെത്തിലൈലേഷനായുള്ള ബിസുൾഫൈറ്റ് സീക്വൻസിംഗ്
ഡി‌എൻ‌സി ബ്ലഡ് & ടിഷ്യു കിറ്റ് (QIAGEN, ടോക്കിയോ, ജപ്പാൻ) ഉപയോഗിച്ചാണ് ഡിഎൻഎ ശുദ്ധീകരിച്ചത്. ഡിഎൻഎ ലായനി പുതുതായി തയ്യാറാക്കിയ 3 mol / l NaOH മായി ചേർത്ത് 37 മിനുട്ട് 15 ° C താപനിലയിൽ ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്ത് 5.3 mol / l യൂറിയ, 1.7 mol / l സോഡിയം ബിസുൾഫൈറ്റ്, 4.9 mmol / l ഹൈഡ്രോക്വിനോൺ എന്നിവ ചേർത്തു. പരിഹാരം 15 സെക്കന്റിന് 95 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ 30 സൈക്കിൾ ഡിനാറ്ററേഷനും 50 മിനിറ്റിന് 15 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിനും വിധേയമാക്കി [XNUMX]19]. മിൻ‌ല്യൂട്ട് പി‌സി‌ആർ പ്യൂരിഫിക്കേഷൻ കിറ്റ് (QIAGEN) ഉപയോഗിച്ചാണ് ബിസുൾഫൈറ്റ് ചികിത്സിച്ച ഡിഎൻഎ ശുദ്ധീകരിച്ചത്, കൂടാതെ കാപ ഹൈഫി ഹോട്ട്സ്റ്റാർട്ട് യുറസിൽ + റെഡിമിക്സ് പി‌സി‌ആർ കിറ്റും (കെ‌എ‌പി‌എ ബയോസിസ്റ്റംസ്, വോബർ‌ൻ, എം‌എ, യുഎസ്എ) പി‌സി‌ആർ വർദ്ധിപ്പിച്ചു. . പ്രൈമർ സീക്വൻസുകൾ ഇപ്രകാരമായിരുന്നു: ഫോർവേഡ് പ്രൈമർ, 2′-GTAAGAATTGGTTGGTTGGAGTTAAAA-5; റിവേഴ്സ് പ്രൈമർ, 3′-ACCCTACCCTCTAAAACCACAACTAC-5. അടുത്തതായി, അഡൻ‌കോർട്ട് എ‌എം‌പുർ എക്സ്പി (ബെക്ക്മാൻ കോൾട്ടർ, ബ്രിയ, സി‌എ, യുഎസ്എ) ഉപയോഗിച്ച് അഡാപ്റ്റർ സീക്വൻസുകൾ ചേർത്ത് വൃത്തിയാക്കി. നിർമ്മാതാവിന്റെ പ്രോട്ടോക്കോൾ അനുസരിച്ച് ക്രമീകരിക്കുന്നതിനായി സാമ്പിളുകൾ ഒരു ജി‌എസ് ജൂനിയറിലേക്ക് (റോച്ചെ ഡയഗ്നോസ്റ്റിക്സ്, ടോക്കിയോ, ജപ്പാൻ) പൂൾ ചെയ്തു. എല്ലാ സൈറ്റോസൈൻ അവശിഷ്ടങ്ങളിലെയും മെത്തിലൈലേറ്റഡ് സൈറ്റോസൈനുകളുടെ ശതമാനമായാണ് മെത്തിലേഷൻ നില പ്രകടിപ്പിച്ചത്.
DNMT പ്രവർത്തന പരിശോധന
നിർമ്മാതാവിന്റെ പ്രോട്ടോക്കോളുകൾ അനുസരിച്ച് എപിക്വിക് ഡിഎൻഎ മെഥൈൽ‌ട്രാൻസ്ഫെറസ് ആക്റ്റിവിറ്റി / ഇൻ‌ഹിബിഷൻ അസ്സേ കിറ്റ് (എപിജെൻ‌ടെക് ഗ്രൂപ്പ്, ബ്രൂക്ലിൻ, എൻ‌വൈ, യുഎസ്എ), ഇപിജീനസ് മെത്തിലിൽ‌ട്രാൻസ്ഫെറേസ് അസ്സേ കിറ്റ് (സിസ്ബിയോ ജപ്പാൻ, ചിബ, ജപ്പാൻ) എന്നിവ ഉപയോഗിച്ചാണ് ഡിഎൻഎംടി എൻസൈമാറ്റിക് ആക്റ്റിവിറ്റി അസ്സേ നടത്തിയത്.
ഡിഎൻഎ മെത്തിലൈലേഷനിലെ ഓരോ സംയുക്തത്തിന്റെയും തടസ്സം സൃഷ്ടിക്കുന്ന പ്രവർത്തനം വിലയിരുത്തുന്നതിന് S-adenosyl-l-homocysteine (SAH) ഓരോ സംയുക്തത്തിന്റെയും സാന്നിധ്യത്തിൽ അളന്നു (സ്ക്രീനിംഗ് പരിശോധനകൾക്കായി 20 μmol / l), S-അഡെനോസൈൽ മെഥിയോണിൻ (SAM; 10 μmol / l), DNMT സബ്‌സ്‌ട്രേറ്റ് (4 ng / μl) എന്നിവ 37 ° C ന് 90 മിനുട്ട്. മൈക്കിളിസ്-മെന്റൻ ഭൗതികശാസ്ത്രത്തെ വിലയിരുത്തുന്നതിന്, DNMT1 (20 μmol / l) γ-oryzanol, SAM (5 μmol / l), 37 മിനിറ്റിന് 90 ° C ന് പോളി dI-dC യുടെ സാന്ദ്രത എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച് ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്തു. DNMT3a (100 μmol / l), DNMT3b (100 μmol / l) എന്നിവ γ-oryzanol, SAM (5 μmol / l), 37 മിനുട്ട് 120 ° C ന് പോളി dG · dC യുടെ സാന്ദ്രത എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച് ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്തു. നാലിരട്ടിയാണ് പരിശോധനകൾ നടത്തിയത്. വേർതിരിച്ചെടുത്ത പ്രോട്ടീൻ (0.75 മി.ഗ്രാം / മില്ലി) SAM (5 μmol / l), പോളി dI-dC (5 μg / ml), പോളി dG · dC (5 μg / ml) എന്നിവ 40 ° C ന് 120 മിനുട്ട്, SAH രൂപീകരണം അളന്നു.
ഈസ്ട്രജനുമായി ബന്ധപ്പെട്ട റിസപ്റ്റർ- γ ആക്റ്റിവിറ്റി അസ്സേ
നിർമ്മാതാവിന്റെ പ്രോട്ടോക്കോൾ അനുസരിച്ച് ഹ്യൂമൻ ഈസ്ട്രജനുമായി ബന്ധപ്പെട്ട റിസപ്റ്റർ ഗാമ റിപ്പോർട്ടർ അസ്സേ സിസ്റ്റം (ഇൻഡിഗോ ബയോസയൻസ്, സ്റ്റേറ്റ് കോളേജ്, പി‌എ, യുഎസ്എ) ഉപയോഗിച്ച് ഈസ്ട്രജനുമായി ബന്ധപ്പെട്ട റിസപ്റ്റർ- γ (ERRγ) യിലെ γ- ഓറിസനോളിന്റെ വിപരീത പ്രവർത്തനം വിലയിരുത്തി. ചുരുക്കത്തിൽ, സജീവമായ ERRγ ഘടനാപരമായി പ്രകടിപ്പിക്കുന്ന മനുഷ്യേതര സസ്തന റിപ്പോർട്ടർ സെല്ലുകൾ ഓരോ സംയുക്തത്തിന്റെയും സൂചിപ്പിച്ചിരിക്കുന്ന സാന്ദ്രതകളിലേക്ക് 24 മണിക്കൂർ ത്രിരൂപത്തിൽ കാണിക്കുന്നു.
പാശ്ചാത്യപ്രയോഗം
മുമ്പ് വിവരിച്ചതുപോലെ ഇത് നടപ്പാക്കി [20] D2R (1: 500, മുയൽ), ഡോപാമൈൻ ട്രാൻസ്പോർട്ടർ (DAT; 1: 500, മുയൽ), ടൈറോസിൻ ഹൈഡ്രോക്സിലേസ് (TH; 1: 1000, മുയൽ) (AB5084P, AB1591P, AB152, മെർക്ക് മില്ലിപോർ, ബില്ലേരിക്ക, എം‌എ, യുഎസ്എ), സിഗ്നൽ ട്രാൻസ്ഫ്യൂസറും ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ 3α (STAT3α; 1: 1000, മുയൽ), DNMT1 (1: 1000, മുയൽ), DNMT3a (1: 1000, മുയൽ) (എണ്ണം 8768, 5032, 3598; സെൽ സിഗ്നലിംഗ് ടെക്നോളജി, ടോക്കിയോ, ജപ്പാൻ), DNMT3b (1 μg / ml, മുയൽ), ERRγ (1: 1000, മുയൽ), β- ആക്ടിൻ (1: 10,000, മൗസ്) (ab16049, ab128930, ab6276; അബ്കാം, കേംബ്രിഡ്ജ്, എം‌എ, യുഎസ്എ).
ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് തത്സമയ പി‌സി‌ആർ
മുമ്പ് വിവരിച്ചതുപോലെ ജീൻ എക്സ്പ്രഷൻ പരിശോധിച്ചു [14]. mRNA ലെവലുകൾ സാധാരണ നിലയിലാക്കി Rn18s (18S rRNA). ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് തത്സമയ പി‌സി‌ആർ വിശകലനങ്ങൾ‌ക്കായി ഉപയോഗിക്കുന്ന പ്രൈമർ സെറ്റുകൾ ഇ‌എസ്‌എം പട്ടികയിൽ സംഗ്രഹിച്ചിരിക്കുന്നു 2.
സ്ഥിതിവിവര വിശകലനം
ഡാറ്റ ശരാശരി ± SEM ആയി പ്രകടിപ്പിക്കുന്നു. വൺ-വേ ANOVA യും ആവർത്തിച്ചുള്ള അളവുകളും ANOVA യും അതിനുശേഷം ഒന്നിലധികം താരതമ്യ പരിശോധനകളും (ബോൺഫെറോണി-ഡൺ രീതി) ബാധകമായ ഇടങ്ങളിൽ ഉപയോഗിച്ചു. വിദ്യാർത്ഥികളുടെ t രണ്ട് ഗ്രൂപ്പുകൾ തമ്മിലുള്ള വ്യത്യാസങ്ങൾ വിശകലനം ചെയ്യാൻ ടെസ്റ്റ് ഉപയോഗിച്ചു. എന്നതിൽ വ്യത്യാസങ്ങൾ പ്രാധാന്യമർഹിക്കുന്നു p <0.05.
ഫലം
എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്-ആസാ-ഡിസി ഡിഎൻഎംടികളെ ഫാർമക്കോളജിക്കൽ ഇൻ‌ഹിബിഷൻ ചെയ്യുന്നത് എലികളിലെ കൊഴുപ്പിനുള്ള മുൻ‌ഗണനയെ മനസ്സിലാക്കുന്നു
എച്ച്എഫ്ഡിക്ക് ഭക്ഷണം നൽകിയ എലികളിൽ, സ്ട്രൈറ്റത്തിലെ ഡിഎക്സ്എൻയുഎംഎക്സ്ആറിന്റെ പ്രൊമോട്ടർ മേഖലയിലെ ഡിഎൻഎ മെത്തിലൈലേഷൻ എലികൾക്ക് ഒരു ച ow ഡയറ്റ് നൽകിയതുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ ഗണ്യമായി വർദ്ധിച്ചു (ചിത്രം. (Fig.1a) .1a). മറുവശത്ത്, D2R ന്റെ പ്രൊമോട്ടർ മേഖലയിലെ ഹൈപ്പോഥലാമിക് ഡിഎൻഎ മെത്തിലൈലേഷൻ ഒരു ച ow ഡയറ്റിനു കീഴിലുള്ള സ്ട്രൈറ്റത്തിൽ ഉള്ളതിനേക്കാൾ കൂടുതലാണ് (p <0.01) (ചിത്രം. (Fig.1a, 1a, f), എച്ച്എഫ്ഡി ഇത് മാറ്റിയില്ല (ചിത്രം. (Fig.1f) .1f). HFD ആഹാരം എലികളുടെ ൽ, സ്ത്രിഅതുമ് ൽ ദ്ക്സനുമ്ക്സര് ഒരു തരത്തില് മേഖലയിലെ ആഗുമെന്റഡ് ഡിഎൻഎ മെഥ്യ്ലതിഒന് ക്സനുമ്ക്സ-ആസായിലുള്ള-ഡിസി, സാധ്യത ദ്ന്മ്ത് ഇംഹിബിതൊര് (ചിത്രം ചികിത്സ വഴി സാധാരണ ചെയ്തു. (Fig.1a) .1a). ഇതിനു വിപരീതമായി, ഹൈപ്പോതലാമസിലെ D2R ന്റെ പ്രൊമോട്ടർ മേഖലയിലെ ഡിഎൻഎ മെത്തിലൈലേഷൻ 5-aza-dC (ചിത്രം) ഉപയോഗിച്ചുള്ള ചികിത്സയിലൂടെ കാര്യമായ മാറ്റമൊന്നും വരുത്തിയില്ല. (Fig.1f) .1f). 20 ആഴ്ച പ്രായമുള്ള ആൺ എലികളുടെ സ്ട്രൈറ്റത്തിൽ 12 ആഴ്ച എച്ച്എഫ്ഡി നൽകി, എംആർഎൻഎയും ഡി 2 ആർ ന്റെ പ്രോട്ടീൻ അളവും ഗണ്യമായി കുറഞ്ഞു (ചിത്രം. (Fig.1b, 1b, k, l). ഇതിനു വിപരീതമായി, എൻ‌കോഡുചെയ്‌ത ഡോപാമൈൻ D1 റിസപ്റ്ററുകളുടെ (D1Rs) ലെവലുകൾ DrD1), അഡെനൈൽ സൈക്ലേസ്, സി‌എ‌എം‌പി-മെഡിയേറ്റഡ് ഇൻട്രാ സെല്ലുലാർ സിഗ്നലിംഗ് എന്നിവയിലെ ഡി‌എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌ആർ‌എസിന് വിപരീതമായി പ്രവർത്തിക്കുന്നു, അവ മാറ്റമില്ല (ചിത്രം. (Fig.1c) .1c). കൂടാതെ, D2R സിഗ്നലിംഗുമായി ബന്ധപ്പെട്ട മറ്റ് തന്മാത്രകളുടെ അളവിൽ മാറ്റങ്ങളൊന്നും ഉണ്ടായിട്ടില്ല, അതായത് എം‌ആർ‌എൻ‌എയിലെ ടിഎച്ച്, ഡാറ്റ്, കൂടാതെ / അല്ലെങ്കിൽ പ്രോട്ടീൻ തലത്തിൽ (ചിത്രം. (Fig.1d, 1d, e, k, m). മറുവശത്ത്, ഹൈപ്പോഥലാമസിൽ D2R ഉൾപ്പെടെ വ്യക്തമായ മാറ്റങ്ങളൊന്നും കണ്ടെത്തിയില്ല (ചിത്രം. (Fig.1g - m) .1g - m). ഹൈപ്പോതലാമസിലെ D2R, TH എന്നിവയുടെ പ്രോട്ടീൻ അളവ് സ്ട്രൈറ്റത്തിൽ ഉള്ളതിനേക്കാൾ വളരെ കുറവായിരുന്നു എന്നത് ശ്രദ്ധേയമാണ് (ചിത്രം. (Fig.1l, 1l, മീ), ഹൈപ്പോതലാമസുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ മസ്തിഷ്ക റിവാർഡ് സിസ്റ്റത്തിലെ ഡോപാമൈൻ റിസപ്റ്റർ സിഗ്നലിംഗിന്റെ ആപേക്ഷിക പ്രാധാന്യം പ്രതിഫലിപ്പിക്കുന്നു.
D2R ന്റെ പ്രൊമോട്ടർ മേഖലയിലെ ഡിഎൻഎ മെത്തിലൈലേഷൻ ഭക്ഷണത്തിലെ കൊഴുപ്പിനുള്ള മുൻ‌ഗണനയെ മാറ്റിമറിക്കുമോയെന്ന് പരിശോധിക്കുന്നതിന്, 5-aza-dC- ചികിത്സിക്കുന്ന എലികളുടെ തീറ്റ സ്വഭാവം വിശകലനം ചെയ്തു. പ്രതീക്ഷിച്ചതുപോലെ, എച്ച്എഫ്ഡി-തീറ്റ എലികളുടെ സ്ട്രൈറ്റത്തിൽ എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്-അസാ-ഡിസി, എംആർഎൻഎയും പ്രോട്ടീന്റെ അളവും ഡി‌എക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ്ആറിനായി ഗണ്യമായി വർദ്ധിപ്പിച്ചു (ചിത്രം. (Fig.1b, 1b, k, l). മറുവശത്ത്, ലെവലിൽ യാതൊരു ഫലവുമില്ല DrD1, Th ഒപ്പം Slc6a3 (എൻ‌കോഡിംഗ് DAT) സ്ട്രൈറ്റത്തിൽ അല്ലെങ്കിൽ ലെവലിൽ DrD2, Drd1, Th ഒപ്പം Slc6a3 ഹൈപ്പോഥലാമസിൽ (ചിത്രം. (Fig.1c - e, 1c - e, g - m). വാഹനം ചികിത്സിക്കുന്ന എലികൾ എച്ച്‌എഫ്‌ഡിയെ തിരഞ്ഞെടുക്കുമ്പോൾ, എക്സ്എൻഎംഎക്സ്-ആസാ-ഡിസി-ചികിത്സിക്കുന്ന എലികളിൽ എച്ച്എഫ്ഡിക്കുള്ള മുൻഗണന ഗണ്യമായി കുറഞ്ഞു (വാഹനം ചികിത്സിക്കുന്ന എലികളുടെ മൂല്യങ്ങളുടെ എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്%) (ചിത്രം. (Fig.1n) .1n). തൽഫലമായി, 5-aza-dC ഉപയോഗിച്ചുള്ള ചികിത്സ ശരീരഭാരത്തിലെ വർദ്ധനവ് കുറച്ചു (ചിത്രം. (Fig.11o).
F- ഓറിസനോൾ എച്ച്എഫ്ഡി-തീറ്റ എലികളുടെ സ്ട്രിയാറ്റത്തിൽ ഡിഎൻഎംടികളുടെ അളവ് കുറയ്ക്കുന്നു
ഞങ്ങൾ മുമ്പ് റിപ്പോർട്ട് ചെയ്തതുപോലെ [14], ഗാവേജ് ഉപയോഗിച്ച് പുരുഷ എലികളിലേക്കുള്ള γ- ഓറിസനോളിന്റെ വാക്കാലുള്ള അഡ്മിനിസ്ട്രേഷൻ ഒരു എച്ച്എഫ്ഡി (വാഹനം ചികിത്സിക്കുന്ന എലികളുടെ മൂല്യങ്ങളുടെ 93%) മുൻ‌ഗണനയെ ഗണ്യമായി മനസ്സിലാക്കുന്നു (ചിത്രം. (Fig.2a), 2a), അതിന്റെ ഫലമായി ശരീരഭാരം വർദ്ധിക്കുന്നതായി കാണപ്പെടുന്നു (ചിത്രം. (Fig.2b) .2b). അതിനാൽ സ്ട്രൈറ്റത്തിലെ D2R- കളിലെ എപിജനെറ്റിക് മോഡുലേഷനിൽ γ-oryzanol- ന്റെ സാധ്യതയെക്കുറിച്ച് ഞങ്ങൾ അന്വേഷിച്ചു.
സസ്തനികളിൽ, മൂന്ന് പ്രധാന DNMT- കൾ ഉണ്ട് - DNMT1, 3a, 3b. ഡിഎൻഎ മെത്തൈലേഷൻ നിലനിർത്തുന്നതിനായി ഡിഎൻഎംടിഎക്സ്എൻഎംഎക്സ് പ്രവർത്തിക്കുന്നു, അതേസമയം ഡി നോവ ഡിഎൻഎ മെത്തിലൈലേഷൻ സുഗമമാക്കുന്നതിൽ ഡി‌എൻ‌എം‌ടിഎക്സ്എൻ‌എം‌എക്സയും എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സും ഒരു പങ്കു വഹിക്കുന്നു [21]. വിവോയിലെ ഡി‌എൻ‌എം‌ടികളിൽ γ-oryzanol ന്റെ സാധ്യതകൾ പര്യവേക്ഷണം ചെയ്യുന്നതിന്, എച്ച്എഫ്ഡി-തീറ്റ എലികളുടെ തലച്ചോറിലെ ഡിഎൻഎംടികളുടെ അളവ് ഞങ്ങൾ വിലയിരുത്തി. സ്ട്രൈറ്റത്തിലോ ഹൈപ്പോതലാമസിലോ ഉള്ള എംആർഎൻഎ, ഡിഎൻഎംടികളുടെ പ്രോട്ടീൻ അളവ് എന്നിവയിൽ എച്ച്എഫ്ഡിക്ക് യാതൊരു സ്വാധീനവും ഇല്ലെങ്കിലും, γ- ഓറിസനോളിനൊപ്പം നൽകുന്നത് സ്ട്രൈറ്റത്തിലെ ഡിഎൻഎംടികളുടെ അളവ് ഗണ്യമായി കുറയുന്നു, പക്ഷേ ഹൈപ്പോതലാമസിൽ അല്ല (ചിത്രം. (Fig.2c - e, 2c - e, g-i, k-n). Data-oryzanol ഡിഎൻഎംടികളുടെ അളവ് സ്ട്രൈറ്റം-നിർദ്ദിഷ്ട രീതിയിൽ നിയന്ത്രിക്കാനുള്ള സാധ്യത ഈ ഡാറ്റ ഉയർത്തുന്നു. സമാനമായ രീതിയിൽ, സ്ട്രിയാറ്റത്തിൽ (ഇ.എസ്.എം ചിത്രം) ഡിഎൻ‌എം‌ടിഎക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ, എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്ബി എന്നിവയുടെ എംആർഎൻഎ അളവ് ഗണ്യമായി കുറഞ്ഞു. 1a - d).
മുമ്പത്തെ ഒരു പഠനത്തിന്റെ അടിസ്ഥാനത്തിൽ, ഡിഎൻഎംടിഎക്സ്എൻഎംഎക്സിന്റെ എംആർഎൻഎ ലെവൽ ന്യൂക്ലിയർ റിസപ്റ്റർ ERR by [ഭാഗികമായെങ്കിലും പോസിറ്റീവ് ആയി നിയന്ത്രിച്ചുവെന്ന് കാണിക്കുന്നു [22], ERRγ പ്രവർത്തനത്തിൽ γ-oryzanol- ന്റെ സാധ്യതയെക്കുറിച്ച് ഞങ്ങൾ പരിശോധിച്ചു. സജീവമായ ERRγ ഘടനാപരമായി പ്രകടിപ്പിക്കുന്ന മനുഷ്യേതര സസ്തന കോശങ്ങളിൽ, ERRγ യുടെ വിപരീത വിപരീത അഗോണിസ്റ്റായ 4- ഹൈഡ്രോക്സി തമോക്സിഫെൻ, ERRγ പ്രവർത്തനം കുറഞ്ഞു. ശ്രദ്ധിക്കുക, γ-oryzanol ERRγ പ്രവർത്തനം ഭാഗികമായി കുറഞ്ഞു (സ്വതസിദ്ധമായ മൂല്യത്തിന്റെ ഏകദേശം 40% കുറവ്) (ചിത്രം. (Fig.3a) .3a). പ്രധാനമായും, സ്ട്രൈറ്റത്തിൽ ERRγ വളരെ പ്രകടമാണ്, പക്ഷേ ഹൈപ്പോതലാമസിൽ അല്ല (ചിത്രം. (Fig.3b - d) .3b - d). സ്ട്രൈറ്റത്തിന്റെ അവസ്ഥയ്ക്ക് വിപരീതമായി, hyp- ഓറിസനോൾ ഹൈപ്പോതലാമസിൽ മാത്രം ഡിഎൻഎംടിഎക്സ്എൻഎംഎക്സിന്റെ പ്രോട്ടീൻ അളവ് ഗണ്യമായി വർദ്ധിപ്പിച്ചു (ചിത്രം. (Fig.2k, 2k, l). DNMT3 ലെവലിന്റെ പോസിറ്റീവ് റെഗുലേറ്ററായ STAT1α [ഞങ്ങളുടെ കണ്ടെത്തൽ വഴി ഈ ഫലങ്ങൾ വിശദീകരിക്കാം [23], ഹൈപ്പോതലാമസിൽ ധാരാളമായി പ്രകടിപ്പിച്ചെങ്കിലും സ്ട്രൈറ്റത്തിൽ അല്ല (ചിത്രം. (Fig.33e-g).
വിവോയിലെ ഡിഎൻഎംടികളുടെ പ്രവർത്തനത്തിൽ γ- ഓറിസനോളിന്റെ സ്വാധീനം കൂടുതൽ വിലയിരുത്തുന്നതിന്, ഡിഎൻഎ മെത്തിലൈലേഷന്റെ ഉപോൽപ്പന്നവും ഡിഎൻഎംടികളുടെ ശക്തമായ ഇൻ‌ഹിബിറ്ററുമായ എസ്‌എ‌എച്ച് രൂപീകരണം എച്ച്എഫ്ഡിക്ക് നൽകിയ γ- ഓറിസനോൾ ചികിത്സിച്ച എലികളിൽ വിലയിരുത്തി. എച്ച്എഫ്ഡി-തീറ്റയും ച ow- തീറ്റ എലികളും തമ്മിലുള്ള സ്ട്രൈറ്റത്തിലോ ഹൈപ്പോതലാമസിലോ SAH രൂപീകരണത്തിൽ കാര്യമായ മാറ്റങ്ങളൊന്നും ഉണ്ടായിട്ടില്ല (ചിത്രം. (Fig.2f, 2f, j). ശ്രദ്ധേയമായി, γ-oryzanol സ്ട്രൈറ്റത്തിൽ SAH രൂപീകരണം ഗണ്യമായി കുറഞ്ഞു (ചിത്രം. (Fig.2f) 2f) പക്ഷേ ഹൈപ്പോഥലാമസിൽ ഇല്ല (ചിത്രം. (Fig.2j), 2j), എച്ച്എഫ്ഡി-തീറ്റ എലികളിലെ സ്ട്രിയാറ്റം-നിർദ്ദിഷ്ട രീതിയിൽ γ-oryzanol ഡിഎൻഎംടികളുടെ പ്രവർത്തനത്തെ അടിച്ചമർത്താമെന്ന് നിർദ്ദേശിക്കുന്നു.
വിട്രോയിലെ ഡി‌എൻ‌എം‌ടികൾ‌ക്കായി γ-oryzanol ന്റെ ഇൻ‌ഹിബിറ്ററി പ്രോപ്പർട്ടികളെക്കുറിച്ചുള്ള എൻസൈമാറ്റിക് വിശകലനങ്ങൾ
വിട്രോയിലെ ഡിഎൻഎംടികളുടെ പ്രവർത്തനത്തിൽ γ-oryzanol ന്റെ സ്വാധീനം ഞങ്ങൾ അടുത്തതായി വിലയിരുത്തി. D-oryzanol, Ferulic acid, 5-aza-dC, haloperidol (ഒരു പ്രതിനിധി D2R എതിരാളി), ക്വിൻ‌പൈറോൾ (ഒരു പ്രതിനിധി D2R അഗോണിസ്റ്റ്), DNMT കൾക്കെതിരായ SAH എന്നിവയുടെ തടസ്സം വിലയിരുത്തി. ഒരു പോസിറ്റീവ് നിയന്ത്രണമെന്ന നിലയിൽ, എസ്‌എൻ‌എച്ച് ഒരു ഡോസ്-ആശ്രിത രീതിയിൽ ഡിഎൻഎംടികളുടെ പ്രവർത്തനങ്ങളെ ശക്തമായി ശ്രദ്ധിച്ചു (ചിത്രം. (Fig.4a - f) .4a - f). പ്രതീക്ഷിച്ചതുപോലെ, ഹാലോപെരിഡോൾ, ക്വിൻ‌പിറോൾ എന്നിവ ഡിഎൻഎംടികളുടെ പ്രവർത്തനങ്ങളിൽ യാതൊരു ഫലവും കാണിച്ചില്ല (ESM Fig. 2). ശ്രദ്ധേയമായി, D-oryzanol DNMT1 (IC) ന്റെ പ്രവർത്തനങ്ങളെ ഗണ്യമായി തടഞ്ഞു50 = 3.2 μmol / l), 3a (IC50 = 22.3 olmol / l) 3b (പരമാവധി ഗർഭനിരോധനം 57%) (ചിത്രം. (Fig.4d - f) .4d - f). ഇതിനു വിപരീതമായി, γ-oryzanol ന്റെ മെറ്റാബോലൈറ്റായ ഫെരുലിക് ആസിഡിന്റെ തടസ്സം പ്രവർത്തനം γ-oryzanol- നേക്കാൾ വളരെ കുറവാണ് (ചിത്രം. (Fig.44d - f).
ഡി‌എൻ‌എം‌ടികളിലെ γ-oryzanol ന്റെ തടസ്സ സവിശേഷതകളെക്കുറിച്ച് ഞങ്ങൾ കൂടുതൽ അന്വേഷിച്ചു. വിട്രോയിലെ ഡി‌എൻ‌എം‌ടികളിൽ γ-oryzanol ന്റെ തടസ്സപ്പെടുത്തൽ പ്രവർത്തനം വിലയിരുത്തുന്നതിനാണ് SAH ന്റെ രൂപീകരണം അളക്കുന്നത്. ദ്ന്മ്ത്-മദ്ധ്യസ്ഥത ഡി.എൻ.എ മെഥ്യ്ലതിഒന് സമയത്ത് SAH ൽ രൂപവത്കരണത്തിൽ ഡാറ്റ γ-ഒര്യ്ജനൊല് (ചിത്രം സാന്നിധ്യം അസാന്നിധ്യവും രണ്ട് വേണ്ടി Michaelis-മെംതെന് ജന്മോദ്ദേശ്യം ഒരു സതുരബ്ലെ മാതൃക സൂചിപ്പിക്കുന്നു. (Fig.4g - i) .4g - i). DNMT1- മെഡിറ്റേറ്റഡ് ഡിഎൻഎ മെത്തിലൈലേഷനിൽ, ഈഡി-ഹോഫ്സ്റ്റീ വിശകലനത്തിൽ γ-oryzanol ഒരു ഫലവും കാണിക്കുന്നില്ലെന്ന് തെളിയിച്ചു V പരമാവധി SAH രൂപീകരണത്തിന്റെ (വാഹനം, 597 pmol / min; γ-oryzanol 2 μmol / l, 619 pmol / min; γ-oryzanol 20 μmol / l, 608 pmol / min), അതേസമയം γ-oryzanol വർദ്ധിച്ചത് K m (വാഹനം, 0.47 μg / ml; γ-oryzanol 2 μmol / l, 0.67 μg / ml; γ-oryzanol 20 μmol / l, 0.89 μg / ml) (ചിത്രം. (Fig.4j) .4j). Results-oryzanol DNMT1 നെ ഭാഗികമായെങ്കിലും മത്സരാധിഷ്ഠിതമായി തടയുന്നുവെന്ന് ഈ ഫലങ്ങൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നു. മറുവശത്ത്, DNMT3a-, 3b- മെഡിറ്റേറ്റഡ് ഡിഎൻഎ മെത്തിലൈലേഷൻ എന്നിവയ്‌ക്കായി γ-oryzanol കുറഞ്ഞു V പരമാവധി SAH (DNMT3a: വാഹനം, 85.3 pmol / min; or-oryzanol 2 μmol / l, 63.1 pmol / min; γ-oryzanol 20 μmol / l, 42.5 pmol / min; DNMT3b: വാഹനം, 42.3 pmol / min; -oryzanol 2 μmol / l; 28.0 pmol / min, γ-oryzanol 20 μmol / l, 15.0 pmol / min), അതുപോലെ, K m ഈ പ്രതികരണത്തിനായി (DNMT3a: വാഹനം, 0.0086 μg / ml; γ-oryzanol 2 μmol / l, 0.0080 μg / ml; γ-oryzanol 20 μmol / l, 0.0058 μg / ml; DNMT3b: വാഹനം, 0.0122 μg / ml; γ-. oryzanol 2 μmol / l, 0.0097 μg / ml; γ-oryzanol 20 μmol / l, 0.0060 μg / ml) (ചിത്രം. (Fig.4k, 4k, l). Results-oryzanol DNMT3a, 3b എന്നിവയെ ഭാഗികമായെങ്കിലും മത്സരാധിഷ്ഠിതമായ രീതിയിൽ തടയുന്നുവെന്ന് ഈ ഫലങ്ങൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നു.
F-oryzanol എച്ച്എഫ്ഡി-തീറ്റ എലികളുടെ സ്ട്രിയാറ്റത്തിൽ D2R ന്റെ അളവ് വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നു
അടുത്തതായി D-oryzanol, DNMT- കൾ തടയുന്നതിലൂടെ സ്ട്രാറ്ററ്റൽ D2R ഉള്ളടക്കം വർദ്ധിപ്പിക്കാനുള്ള സാധ്യത പരിശോധിച്ചു. HFD-ആഹാരം എലികളുടെ ൽ γ-ഒര്യ്ജനൊല് വാമൊഴി ഭരണം ഗണ്യമായി ദ്ക്സനുമ്ക്സര്സ് (ചിത്രം ഒരു തരത്തില് മേഖലയിലെ സ്ത്രിഅതല് ഡിഎൻഎ മെഥ്യ്ലതിഒന് കുറഞ്ഞു. (Fig.5a), 5a), ഹൈപ്പോഥലാമസിൽ ഇത് ചെയ്തിട്ടില്ല (ചിത്രം. (Fig.5f) .5f). ഈ കണ്ടെത്തലുകൾക്ക് അനുസൃതമായി, mRNA, D2R ന്റെ പ്രോട്ടീൻ അളവ് എന്നിവ പരസ്പരം വർദ്ധിപ്പിച്ചു (ചിത്രം. (Fig.5b, 5b, g, k, l). 5-aza-dC (ചിത്രം.) ഉപയോഗിച്ചുള്ള ചികിത്സയുടെ ഡാറ്റയ്ക്ക് സമാനമാണ്. (Fig.1), 1), ആർ‌എൻ‌എയിലും പ്രോട്ടീൻ അളവിലും പ്രത്യക്ഷമായ ഫലങ്ങളൊന്നും ഉണ്ടായിരുന്നില്ല DrD1, Th ഒപ്പം Slc6a3 (DAT) സ്ട്രൈറ്റത്തിൽ, കൂടാതെ ലെവലിൽ യാതൊരു ഫലവുമില്ല DrD1, Th ഒപ്പം Slc6a3 ഹൈപ്പോഥലാമസിൽ (ചിത്രം. (Fig.5c - e, 5c - e, h-k, m).
മുമ്പത്തെ പഠനങ്ങൾ കാണിക്കുന്നത് D2R, DNMT1 എന്നിവയുടെ അളവ് ER സമ്മർദ്ദവും വീക്കവും നിയന്ത്രിക്കുന്നത് കുറഞ്ഞത് ഭാഗികമായെങ്കിലും NF-viaB [17, 24, 25]. അതിനാൽ ER സമ്മർദ്ദവുമായി ബന്ധപ്പെട്ടതും വീക്കം സംബന്ധമായതുമായ ജീനുകളുടെ അളവ് ഞങ്ങൾ പരിശോധിച്ചു. മുമ്പ് പ്രദർശിപ്പിച്ചതുപോലെ [26], ടിഎൻ‌എഫ്- α (എൻ‌കോഡിംഗ് ചെയ്യുന്ന ജീനുകളുടെ എച്ച്എഫ്ഡി വർദ്ധിച്ച ആവിഷ്കാരംTnfa), മോണോസൈറ്റ് കീമോട്രാക്റ്റന്റ് പ്രോട്ടീൻ - എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് (എം‌സി‌പി-എക്സ്എൻഎംഎക്സ്) (Ccl2), സി / ഇബിപി ഹോമോലോജസ് പ്രോട്ടീൻ (മുളകും), ER- പ്രാദേശികവൽക്കരിച്ച DnaJ 4 (ERdj4) (Dnajb9) എക്സ്-ബോക്സ് ബൈൻഡിംഗ് പ്രോട്ടീൻ എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് (Xbp1s) ഹൈപ്പോഥലാമസിൽ, പക്ഷേ സ്ട്രൈറ്റത്തിൽ അല്ല (ചിത്രം. (Fig.6) .6). F- ഓറിസനോളിനൊപ്പം എച്ച്എഫ്ഡിയുടെ അനുബന്ധം വർദ്ധിച്ച പ്രകടനത്തെ ഗണ്യമായി കുറച്ചു എന്നത് ശ്രദ്ധേയമാണ് Ccl2, മുളകും, Dnajb9 ഒപ്പം Xbp1s ഹൈപ്പോഥലാമസിൽ മാത്രമാണുള്ളത്, പക്ഷേ സ്ട്രൈറ്റത്തിൽ അല്ല (ചിത്രം. (Fig.66).
സംവാദം
ഇന്നത്തെ പഠനത്തിലെ പ്രധാന കണ്ടെത്തൽ എലികളുടെ സ്ട്രൈറ്റത്തിൽ ഒരു ശക്തമായ ഡിഎൻഎംടി ഇൻ‌ഹിബിറ്ററായി γ-oryzanol പ്രവർത്തിക്കുന്നു, അതുവഴി സ്ട്രൈറ്റൽ D2R ന്റെ എപിജനെറ്റിക് മോഡുലേഷൻ വഴി ഒരു എച്ച്എഫ്ഡിയുടെ മുൻഗണന മനസ്സിലാക്കുന്നു. എച്ച്എഫ്ഡി-തീറ്റ എലികളിൽ നിന്നുള്ള സ്ട്രൈറ്റത്തിൽ, ഡിഎക്സ്എൻയുഎംഎക്സ്ആറിന്റെ അളവ് ഗണ്യമായി കുറഞ്ഞു, അതേസമയം ഡിഎക്സ്എൻയുഎംഎക്സ്ആർ, ടിഎച്ച്, ഡാറ്റ് എന്നിവ മാറ്റിയിട്ടില്ല (ചിത്രം. (Fig.1b - e, 1b-e, k-m). എച്ച്‌എഫ്‌ഡിയിൽ വരുമ്പോൾ ഭക്ഷണ പ്രതിഫലം മനസ്സിലാക്കുന്നതിൽ സ്ട്രൈറ്റൽ ഡിഎക്സ്എൻഎംഎക്സ്ആറിന്റെ വ്യതിരിക്തത നിർണ്ണായക പങ്ക് വഹിക്കുന്നു എന്ന ആശയവുമായി ഈ ഡാറ്റ പൊരുത്തപ്പെടുന്നു, ഇത് അമിതവണ്ണമുള്ള മൃഗങ്ങളിൽ എച്ച്എഫ്ഡിയുടെ അമിത ഉപഭോഗത്തിലേക്ക് നയിക്കുന്നു [3]. നിലവിലെ പഠനത്തിൽ, എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ്-ആസാ-ഡിസി ഉപയോഗിച്ചുള്ള എച്ച്എഫ്ഡി-തീറ്റ എലികളുടെ ചികിത്സ സ്ട്രൈറ്റൽ ഡിഎക്സ്എൻഎംഎക്സ്ആറിന്റെ അളവ് ഗണ്യമായി വർദ്ധിപ്പിച്ചു (ചിത്രം. (Fig.1b, 1b, k, l) ഒരുപക്ഷേ D2R ന്റെ പ്രൊമോട്ടർ മേഖലയിലെ ഡിഎൻഎ മെത്തിലൈലേഷൻ ലെവൽ കുറച്ചതിലൂടെ (ചിത്രം. (Fig.1a), 1a), തന്മൂലം ഭക്ഷണത്തിലെ കൊഴുപ്പിനുള്ള മുൻഗണന വർദ്ധിപ്പിച്ചു (ചിത്രം. (Fig.1n) .1n). എച്ച്‌എഫ്‌ഡിയിലായിരിക്കുമ്പോൾ ഭക്ഷ്യ പ്രതിഫലം മനസ്സിലാക്കുന്നതിൽ സ്ട്രാറ്റിയൽ ഡിഎക്സ്എൻ‌എം‌എക്സ്ആറുകളുടെ നിർണായക പങ്ക് ഈ കണ്ടെത്തൽ പിന്തുണയ്ക്കുന്നു.
ഡി‌എൻ‌എം‌ടികൾ‌ക്കെതിരായ γ-oryzanol ന്റെ തടസ്സം പ്രവർത്തനം അതിന്റെ മെറ്റാബോലൈറ്റ് ഫെരുലിക് ആസിഡിനേക്കാൾ ശക്തമാണെന്ന് ഞങ്ങളുടെ ഇൻ‌വിട്രോ അസ്സെ തെളിയിച്ചു (ചിത്രം. (Fig.4d - f), 4d-f), DNMT- കളിലെ തടസ്സപ്പെടുത്തൽ പ്രവർത്തനത്തിന് γ-oryzanol ന്റെ പൂർണ്ണ ഘടനയുടെ പ്രാധാന്യം സൂചിപ്പിക്കുന്നു. എച്ച്എഫ്ഡി-തീറ്റ എലികളിൽ, ഞങ്ങളുടെ പഠനങ്ങൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നത്, ഓറൽ അഡ്മിനിസ്ട്രേഷന് ശേഷം, γ- ഓറിസനോൾ ഒരു പൂർണ്ണ ഘടനയായി തലച്ചോറിലെത്തുകയും സ്ട്രൈറ്റത്തിൽ ഡിഎൻഎംടികളുടെ അളവുകളും പ്രവർത്തനങ്ങളും മുൻ‌ഗണനാക്രമത്തിൽ കുറയ്ക്കുകയും ചെയ്യുന്നു, തൽഫലമായി പ്രൊമോട്ടർ മേഖലയിലെ ഡിഎൻഎ മെത്തിലൈലേഷൻ കുറയുന്നു. സ്ട്രൈറ്റത്തിലെ D2R. കൂടാതെ, ഇൻ-വിട്രോ പഠനങ്ങൾ തെളിയിക്കുന്നത് ERR or യ്ക്കെതിരായ ഭാഗിക എതിരാളിയായി γ-oryzanol പ്രവർത്തിക്കുന്നു, ഇത് പ്രാഥമികമായി DNMT1 ഉൽ‌പാദനത്തിന് ഒരു പോസിറ്റീവ് റെഗുലേറ്ററായി പ്രവർത്തിക്കുന്നു [22], തൽഫലമായി DNMT1 ന്റെ പ്രവർത്തനം കുറഞ്ഞു (ചിത്രം. (Fig.3a) .3a). ശ്രദ്ധിക്കുക, ERRγ സ്ട്രൈറ്റത്തിൽ വളരെ പ്രകടമാണ്, പക്ഷേ എലികളിലെ ഹൈപ്പോതലാമസിൽ അല്ല (ചിത്രം. (Fig.3b) .3b). R-oryzanol ന് DNMT1 ന്റെ mRNA ലെവൽ കുറയ്ക്കാൻ കഴിവുണ്ടെന്ന് ഈ ഡാറ്റ സൂചിപ്പിക്കുന്നു, കുറഞ്ഞത് ഭാഗികമായെങ്കിലും, ERRγ തടയുന്നതിലൂടെ. സ്ട്രൈറ്റത്തിന് വിപരീതമായി, HFD- തീറ്റ എലികളിൽ നിന്നുള്ള ഹൈപ്പോതലാമസിലെ D2R ലെവലിൽ γ-oryzanol ഒരു ഫലവും കാണിച്ചില്ല (ചിത്രം. (Fig.5g, 5g, k, l).
മറുവശത്ത്, ot-oryzanol ഹൈപ്പോതലാമസിലെ DNMT1 ന്റെ അളവ് ഗണ്യമായി വർദ്ധിപ്പിച്ചുവെന്ന് ഞങ്ങൾ തെളിയിച്ചു, പക്ഷേ സ്ട്രൈറ്റത്തിൽ അല്ല (ചിത്രം. (Fig.2k, 2k, l). മാരകമായ ടി-ലിംഫോമ സെല്ലുകളിൽ STAT3, DNMT1 ന്റെ ഉള്ളടക്കം വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നതായി കാണിച്ചിരിക്കുന്നു [23]. എച്ച്എഫ്ഡി-തീറ്റ എലികളിൽ നിന്ന് ഹൈപ്പോഥലാമസിലെ ലെപ്റ്റിൻ-ഇൻഡ്യൂസ്ഡ് STAT3 ഫോസ്ഫോറിലേഷൻ γ-oryzanol ഗണ്യമായി വർദ്ധിപ്പിച്ചുവെന്ന് ഞങ്ങൾ മുമ്പ് തെളിയിച്ചു [14]. STAT3α ഹൈപ്പോതലാമസിൽ ഗണ്യമായി പ്രകടിപ്പിക്കപ്പെട്ടുവെങ്കിലും എലികളിലെ സ്ട്രൈറ്റത്തിൽ അല്ല (ചിത്രം. (Fig.3e - g) .3e-g). ഹൈപ്പോഥലാമസും സ്ട്രൈറ്റവും തമ്മിലുള്ള ഡിഎൻഎംടിഎക്സ്എൻഎംഎക്സിന്റെ അളവിലുള്ള γ- ഓറിസനോളിന്റെ ഫലത്തിലെ വ്യക്തമായ വ്യത്യാസം എലികളുടെ തലച്ചോറിലെ STAT1α, ERRγ എന്നിവയുടെ പ്രദേശ-നിർദ്ദിഷ്ട ഉള്ളടക്കത്തിന് കാരണമായിരിക്കാം എന്ന് അനുമാനിക്കാൻ ഈ ഡാറ്റ ഞങ്ങളെ പ്രേരിപ്പിക്കുന്നു ( അത്തിപ്പഴം. (Fig.3b - g) .3b - g). മൊത്തത്തിൽ, എലികളിലെ സ്ട്രൈറ്റവും ഹൈപ്പോഥലാമസും തമ്മിൽ ERRγ, STAT3α എന്നിവയുടെ ആവിഷ്കാരരീതി ഉണ്ടെന്ന് തോന്നുന്നു. ഞങ്ങളുടെ ഫലങ്ങളുടെ അടിസ്ഥാനത്തിൽ, ERRγ ഉൽ‌പാദനം സമൃദ്ധമായിട്ടുള്ള സ്ട്രൈറ്റത്തിൽ, ER-oryzanol, ERRγ യുടെ നെഗറ്റീവ് റെഗുലേറ്ററായി DNMT1 ന്റെ mRNA നിലയും എൻ‌സൈം പ്രവർത്തനവും മുൻ‌ഗണനാക്രമത്തിൽ കുറയ്‌ക്കുമെന്ന് അനുമാനിക്കുന്നത് ന്യായമാണ്. ഇതിനു വിപരീതമായി, STAT3α ഉൽ‌പാദനം പ്രബലമായ ഹൈപ്പോഥലാമസിൽ, γ-oryzanol മുൻഗണന DNMT1 ന്റെ അളവ് വർദ്ധിപ്പിക്കും.
ഒരു എച്ച്എഫ്ഡി പ്രേരിപ്പിച്ച സ്ട്രാറ്റിയൽ ഡിഎക്സ്എൻഎംഎക്സ്ആർ സിഗ്നലിംഗിന്റെ അറ്റൻ‌വ്യൂഷൻ തീറ്റ സ്വഭാവത്തെ നിയന്ത്രിക്കുന്നുവെന്ന് അടുത്തിടെ നടത്തിയ ഒരു പഠനം തെളിയിച്ചു [3], അമിതവണ്ണ ചികിത്സയ്ക്കായി സ്ട്രാറ്ററ്റൽ ഡിഎൻഎംടികളെ തടയുന്നതിന്റെ പ്രാധാന്യം സൂചിപ്പിക്കുന്നു. മറുവശത്ത്, മുമ്പത്തെ ഒരു പഠനം നിർദ്ദിഷ്ട ഹൈപ്പോഥലാമിക് ന്യൂക്ലിയസുകളിൽ പ്രകടിപ്പിച്ച മെലനോകോർട്ടിൻ റിസപ്റ്റർ എക്സ്എൻ‌യു‌എം‌എക്സ് ജീനിന്റെ ഡിഎൻഎ മെത്തിലൈലേഷന്റെ അവസ്ഥ അഗൂട്ടി പ്രായോഗിക മഞ്ഞ എലികളിലെ അമിതവണ്ണത്തിന്റെ ട്രാൻസ്ജെനറേഷൻ രൂപങ്ങളെ മോഡുലേറ്റ് ചെയ്യുന്നതിനുള്ള സാധ്യത തെളിയിച്ചു [27]. കൂടുതൽ പഠനങ്ങൾ അടിസ്ഥാന സംവിധാനങ്ങളെ വ്യക്തമാക്കുന്നതിന് ആവശ്യമാണെങ്കിലും, എച്ച്എഫ്ഡി-ഇൻഡ്യൂസ്ഡ് അമിതവണ്ണത്തിന്റെ പാത്തോഫിസിയോളജിയിൽ ടിഷ്യു, ജീൻ, സീക്വൻസ്-സ്പെസിഫിക് ഡിഎൻഎ മെഥിലേഷന്റെ പ്രാധാന്യം ഈ പഠനങ്ങൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നു.
എലികളുടെ പാൻക്രിയാറ്റിക് ദ്വീപുകളിൽ എച്ച്എഫ്ഡി D2R ന്റെ അളവ് വർദ്ധിപ്പിച്ചതായി ഞങ്ങൾ അടുത്തിടെ റിപ്പോർട്ടുചെയ്‌തു [17, 24]. D2R ന്റെ പ്രൊമോട്ടർ മേഖലയിൽ നിരവധി എൻ‌എഫ്‌- κ ബി-പ്രതികരിക്കുന്ന ഘടകങ്ങൾ ഉള്ളതിനാൽ, അത്തരം വർദ്ധനവ് എൻ‌എഫ്‌- κ ബി വഴി ഇആർ സമ്മർദ്ദവും വീക്കവും മൂലം മധ്യസ്ഥത വഹിച്ചിരിക്കാം.17, 24]. കൂടാതെ, അടുത്തിടെ നടത്തിയ ഒരു പഠനത്തിൽ ടിഎൻ‌എഫ്- α, ഐ‌എൽ-എക്സ്എൻഎംഎക്സ് β എന്നിവ എച്ച്എഫ്ഡി-തീറ്റ എലികളിൽ നിന്നുള്ള അഡിപ്പോസ് ടിഷ്യുവിലെ ഡിഎൻഎംടിഎക്സ്എൻഎംഎക്സിന്റെ അളവും പ്രവർത്തനവും വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നു [25]. പ്രധാനമായി, ഇപ്പോഴത്തെ പഠനം തെളിയിക്കുന്നത് എച്ച്എഫ്ഡി ഇആർ സമ്മർദ്ദവും വീക്കവും ഹൈപ്പോതലാമസിൽ മുൻഗണന നൽകുന്നുണ്ടെങ്കിലും സ്ട്രൈറ്റത്തിൽ അല്ല (ചിത്രം). (Fig.6) .6). ഞങ്ങളുടെ പരീക്ഷണാത്മക മാതൃകയിലെ ടിഷ്യു, മേഖല, സൈറ്റ്-നിർദ്ദിഷ്ട ഡിഎൻഎ മെത്തിലൈലേഷൻ, ഡീമെത്തൈലേഷൻ എന്നിവയുടെ ആഴത്തിലുള്ള സംവിധാനങ്ങൾ കൂടുതൽ അന്വേഷണത്തിനായി കാത്തിരിക്കണം.
എലികളിലെ ഇആർ സമ്മർദ്ദത്തെ ഹൈപ്പോഥലാമിക് റെഗുലേഷൻ വഴി H-oryzanol ഒരു എച്ച്എഫ്ഡിക്കുള്ള മുൻഗണന നൽകുന്നുവെന്ന് കാണിക്കുന്ന ഞങ്ങളുടെ മുമ്പത്തെ റിപ്പോർട്ടിനൊപ്പം [14], തീറ്റ സ്വഭാവത്തിന്റെ ഹെഡോണിക്, മെറ്റബോളിക് ഡിസ്റെഗുലേഷൻ എന്നിവ മെച്ചപ്പെടുത്തുന്നതിന്റെ സവിശേഷമായ ഒരു സ്വത്തെയാണ് a-oryzanol പ്രതിനിധീകരിക്കുന്നത്. കാരണം വികസിപ്പിച്ചെടുത്ത ചില ആന്റിബയോസിറ്റി മരുന്നുകൾ ഗുരുതരമായ പ്രതികൂല ഫലങ്ങൾ ഉണ്ടാക്കുന്നു [8], അമിതവണ്ണം-പ്രമേഹ സിൻഡ്രോം സുരക്ഷിതമായി ചികിത്സിക്കുന്നതിനായി മസ്തിഷ്ക റിവാർഡ് സിസ്റ്റത്തോടുള്ള സ്വാഭാവിക ഭക്ഷണം അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ള സമീപനം പ്രതീക്ഷിക്കുന്നു [16]. ഈ മാതൃകയിൽ, ep- ഓറിസനോൾ ഒരു എപ്പിജനെറ്റിക് മോഡുലേറ്റർ എന്ന സവിശേഷമായ സ്വത്തവകാശമുള്ള ഒരു ആന്റിബയോസിറ്റി സ്ഥാനാർത്ഥിയാണ്.
കടപ്പാടുകൾ
കൈയെഴുത്തുപ്രതി അവലോകനം ചെയ്തതിന് എസ്. ഒകാമോട്ടോ (ജപ്പാനിലെ റ്യൂക്യസ്) നന്ദിയുണ്ട്. സെക്രട്ടറിയൽ സഹായത്തിന് എം. ഹിരാത, എച്ച്. കനേഷിരോ, ഐ. അസറ്റോ, സി. നൊഗുചി (ജപ്പാനിലെ റ്യുക്യസ് സർവകലാശാല)
അബ്രീവിയേഷൻസ്
| 5-aza-dC | 5-aza-2′-deoxycytidine |
| D1R | ഡോപാമൈൻ D1 റിസപ്റ്റർ |
| D2R | ഡോപാമൈൻ D2 റിസപ്റ്റർ |
| DAT | ഡോപാമൈൻ ട്രാൻസ്പോർട്ടർ |
| ഡിഎൻഎംടി | ഡിഎൻഎ മെഥൈൽ‌ട്രാൻസ്ഫെറസ് |
| ER | എൻഡോപ്ലാസ്മാക് ജാലകം |
| ERR | ഈസ്ട്രജനുമായി ബന്ധപ്പെട്ട റിസപ്റ്റർ |
| HFD | കൊഴുപ്പ് കൂടിയ ഭക്ഷണം |
| എസ്.എച്ച് | S-അഡെനോസൈൽ-എൽ-ഹോമോസിസ്റ്റൈൻ |
| SAM | S-അഡെനോസിൽ മെഥിയോണിൻ |
| STAT3α | സിഗ്നൽ ട്രാൻസ്ഫ്യൂസറും ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ 3α ന്റെ ആക്റ്റിവേറ്ററും |
| TH | ടൈറോയ്ൻ ഹൈഡ്രോക്സൈലാസ് |
കുറിപ്പുകൾ
ഡാറ്റ ലഭ്യത
നിലവിലെ പഠനസമയത്ത് സൃഷ്ടിച്ച കൂടാതെ / അല്ലെങ്കിൽ വിശകലനം ചെയ്ത ഡാറ്റാസെറ്റുകൾ ന്യായമായ അഭ്യർത്ഥനകളിൽ ബന്ധപ്പെട്ട രചയിതാവിൽ നിന്ന് ലഭ്യമാണ്.
ഫണ്ടിംഗ്
ജപ്പാൻ സൊസൈറ്റി ഫോർ ദി പ്രൊമോഷൻ സയൻസ് (ജെ‌എസ്‌പി‌എസ്; കകെൻ‌ഹി ഗ്രാന്റ് നമ്പറുകൾ 15K19520, 24591338), കൗൺസിൽ ഫോർ സയൻസ്, ടെക്നോളജി ആൻഡ് ഇന്നൊവേഷൻ (CSTI), ക്രോസ്-മിനിസ്റ്റീരിയൽ സ്ട്രാറ്റജിക് ഇന്നൊവേഷൻ പ്രൊമോഷൻ പ്രോഗ്രാം എന്നിവയിൽ നിന്നുള്ള ഗ്രാന്റ്സ് ഇൻ എയ്ഡ് ഈ ജോലിയെ ഭാഗികമായി പിന്തുണച്ചിട്ടുണ്ട്. . ) (ഓകിനാവ പ്രിഫെക്ചർ, ജപ്പാൻ), ജപ്പാനിലെ ഓകിനാവ പ്രിഫെക്ചറിന്റെ മെഡിക്കൽ ക്ലസ്റ്ററിംഗിന്റെ പ്രൊമോഷൻ പ്രോജക്ടും നൂതന വൈദ്യശാസ്ത്രത്തിന്റെ പ്രോത്സാഹനത്തിനായി ഓകിനാവ പ്രിഫെക്ചറിൽ നിന്നുള്ള ഗ്രാന്റും (ഓകിനാവ പ്രിഫെക്ചർ, ജപ്പാൻ).
താൽപ്പര്യത്തിന്റെ ദ്വൈതത
ഈ കയ്യെഴുത്തുപ്രതിയുമായി ബന്ധപ്പെട്ട് താൽപ്പര്യത്തിന്റെ ദ്വൈതതയില്ലെന്ന് രചയിതാക്കൾ പ്രഖ്യാപിക്കുന്നു.
സംഭാവന പ്രസ്താവന
സികെ, എച്ച്എം എന്നിവർ ഗവേഷണം രൂപകൽപ്പന ചെയ്തു. സികെ, ടി കെ എന്നിവർ പരീക്ഷണങ്ങൾ നടത്തി ഡാറ്റ വിശകലനം ചെയ്തു. ഡാറ്റയുടെ വ്യാഖ്യാനത്തിന് ടി‌കെ, സി‌എസ്-ഒ, സിടി, എം‌ടി, എം‌എം, കെ‌എ എന്നിവ സംഭാവന നൽകി. സികെ, എച്ച്എം എന്നിവർ കൈയെഴുത്തുപ്രതി എഴുതി. എല്ലാ രചയിതാക്കളും ഡാറ്റ വ്യാഖ്യാനത്തിന് സംഭാവന നൽകി. എല്ലാ എഴുത്തുകാരും കൈയെഴുത്തുപ്രതി പുതുക്കുന്നതിൽ ചേർന്നു, അതിന്റെ അവസാന പതിപ്പിന് അംഗീകാരം നൽകി. എച്ച്എം ഈ ജോലിയുടെ ഗ്യാരണ്ടറാണ്, എല്ലാ ഡാറ്റയിലേക്കും പൂർണ്ണ ആക്സസ് ഉണ്ടായിരുന്നു കൂടാതെ ഡാറ്റയുടെ സമഗ്രതയ്ക്കും ഡാറ്റ വിശകലനത്തിന്റെ കൃത്യതയ്ക്കും പൂർണ്ണ ഉത്തരവാദിത്തം ഏറ്റെടുക്കുന്നു.
അടിക്കുറിപ്പുകൾ
ഇലക്ട്രോണിക് സപ്ലിമെന്ററി മെറ്റീരിയൽ
ഈ ലേഖനത്തിന്റെ ഓൺലൈൻ പതിപ്പിൽ (doi: 10.1007 / s00125-017-4305-4) പിയർ അവലോകനം ചെയ്തതും എഡിറ്റുചെയ്യാത്തതുമായ അനുബന്ധ മെറ്റീരിയലുകൾ അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു, ഇത് അംഗീകൃത ഉപയോക്താക്കൾക്ക് ലഭ്യമാണ്.
അവലംബം
;