न्यूक्लियस umbकम्बन्स (२०११) मधील ओपिओइड आणि कॅनाबिनॉइड रिसेप्टर-मध्यस्थी सिग्नलिंगवर osफोसबी ओव्हरएक्सप्रेसचा प्रभाव

न्यूरोफर्माकोलॉजी 2011 Dec;61(8):1470-6. doi: 10.1016/j.neuropharm.2011.08.046.

सिम-सेले एलजे, कॅसिडी एमपी, स्पार्टा ए, जॅचरियो व्ही, नेस्लर ईजे, सेले डे.

स्रोत

फार्माकोलॉजी आणि टॉक्सिकोलॉजी विभाग आणि औषध आणि अल्कोहोल स्टडीज संस्था, व्हर्जिनिया कॉमनवेल्थ युनिव्हर्सिटी स्कूल ऑफ मेडिसिन, रिचमंड, व्हीए एक्सएनयूएमएक्स, यूएसए.

सार

स्थिर ट्रान्सक्रिप्शन फॅक्टर Δफोसबी अनेकदा गैरवर्तन करण्याच्या औषधांच्या तीव्र प्रदर्शनासह न्यूक्लियस umbक्बुन्स (एनएसी) मध्ये प्रेरित होतो आणि स्ट्रायटममध्ये एफओएसबीचे ट्रान्सजेनिक अभिव्यक्ती मॉर्फिन आणि कोकेनचे फायद्याचे गुणधर्म वाढवतेई. तथापि, या निरीक्षणाचा यांत्रिकी आधार अपूर्णपणे समजला आहे. आम्ही -फोसबी इनडिसीबल अभिव्यक्तीसह एक बिट्रान्जेनिक माउस मॉडेल वापरले डोपॅमिन डीएक (एक्सएनयूएमएक्स) एनएसीमध्ये ओपिओइड आणि कॅनाबिनॉइड रिसेप्टर सिग्नलिंगवर osफोसबी अभिव्यक्तीचा प्रभाव निश्चित करण्यासाठी रिसेप्टर / डायरोफिन युक्त स्ट्रायटल न्यूरॉन्स. परिणामांनी दर्शविले की म्यू ओपिओइड-मध्यस्थी जी-प्रोटीन क्रियाकलाप आणि adडिनलिल सायक्लेझचा प्रतिबंध ice फॉसबी व्यक्त केलेल्या उंदीरच्या एनएसीमध्ये वाढविला गेला. त्याचप्रमाणे, appफोसबी एक्सप्रेसिंग उंदीरमध्ये enडिनिल सायक्लेजचा कप्पा ओपिओइड प्रतिबंध वाढविला गेला. याउलट, कॅन्सॅबिनॉइड रिसेप्टर-मध्यस्थीय सिग्नलिंग उंदीर ओव्हरएक्सप्रेसिंग -फोसबी आणि नियंत्रण उंदीर यांच्यामध्ये भिन्न नाही. Tहे निष्कर्ष सूचित करतात की ओपिओइड आणि कॅनाबिनॉइड रिसेप्टर सिग्नलिंग वेगळ्या पद्धतीने osफोसबीच्या अभिव्यक्तीद्वारे बदलले गेले आहेत आणि सूचित करतात की एनएसीमध्ये एफओएसबी अभिव्यक्ती त्याचे काही प्रभाव वर्धित म्यू आणि कप्पा ओपिओइड रिसेप्टर सिग्नलिंगद्वारे तयार करू शकते.

कीवर्ड: जी-प्रोटीन, enडेनिल सायक्लेज, स्ट्रायटम

जा:

1. परिचय

ओपिओइड रिसेप्टर्स आणि कॅनाबिनॉइड सीबी₁ रिसेप्टर्स (सीबी)₁आर) मोठ्या प्रमाणात वापरल्या जाणार्‍या दोन औषध वर्गासाठी न्यूरोबायोलॉजिकल लक्ष्य आहेत ज्यात मॉर्फिन, हेरोइन आणि प्रिस्क्रिप्शन ओपिओइड्स आणि गांजा (Δ⁹अनुक्रमे -टेटरहाइड्रोकाबॅनिबॉल (टीएचसी). ओपिओइड्स आणि कॅनाबिनॉइड्सचे तीव्र परिणाम जी-प्रोटीन-जोडीतील रिसेप्टर्सद्वारे मध्यस्थी केले जातात जे प्रामुख्याने जी सक्रिय करतात._{मी / ओ} प्रथिने आणि streamडेनिल सायक्लेजच्या प्रतिबंधासारख्या डाउनस्ट्रिम इंफेक्टर प्रतिसादांची निर्मिती करतात (चिल्डर्स, एक्सएनयूएमएक्स, चाइल्डर्स, इत्यादि., एक्सएनयूएमएक्स, हॉलेट, इट अल., एक्सएनयूएमएक्स). The चे मोटर, मेमरी बिघाड आणि मनोवैज्ञानिक प्रभाव⁹-टीएचसी सीबी निर्मित करतात₁आर (हूएस्टिस, इत्यादि., एक्सएनयूएमएक्स, झिम्मर, इत्यादि., एक्सएनयूएमएक्स), जे मेंदूमध्ये मोठ्या प्रमाणात वितरीत केले जाते, ज्यामध्ये बेसल गँगलिया, हिप्पोकॅम्पस आणि सेरेबेलम (उच्च रक्तवाहिन्या) मध्ये उच्च पातळी असते (हर्केनहॅम, वगैरे., एक्सएनयूएमएक्स). बर्‍याच वैद्यकीयदृष्ट्या संबंधित आणि गैरवर्तन केलेल्या ओपिओइड औषधांचे वेदनशामक आणि फायद्याचे परिणाम मुख्यत: म्यू ओपिओड रिसेप्टर्स (एमओआर) द्वारे मध्यस्थ केले जातात (मॅथस, इत्यादि., एक्सएनयूएमएक्स), जे लिंबिक सिस्टम आणि ब्रेनस्टाममध्ये समृद्ध आहेत (मन्सूर, इत्यादी., एक्सएनयूएमएक्स). व्हेंट्रल टेगमेंटल एरिया (व्हीटीए) ते न्यूक्लियस umbक्म्बन्स (एनएसी) पर्यंत डोपामिनर्जिक प्रोजेक्शनची बनलेली मेसोलिंबिक सिस्टम ओपिओइड्स आणि कॅनाबिनॉइड्सच्या फायद्याच्या प्रभावांमध्ये महत्त्वपूर्ण भूमिका बजावते (बोझर्थ आणि विझ, 1984, व्हॅकारिनो, इत्यादि., एक्सएनयूएमएक्स, झेंजेन, इत्यादि., एक्सएनयूएमएक्स), तसेच गैरवर्तनाची इतर औषधे (कोब आणि व्होल्को, 2010). शिवाय, एंडोजेनस ओपिओइड आणि कॅनाबिनॉइड सिस्टम मनोविरोधी औषधांच्या एकाधिक श्रेणीच्या फायद्याच्या प्रभावांमध्ये सामील आहेत (मालदोनाडो, इत्यादि., एक्सएनयूएमएक्स, ट्रायगो, इट अल., एक्सएनयूएमएक्स). अशा प्रकारे, ओपीओइड आणि सीबी कोणत्या यंत्रणेद्वारे स्पष्ट करणे महत्वाचे आहे₁एन सिॅक मध्ये आर सिग्नलिंगचे नियमन केले जाते.

ड्रग्स गैरवर्तन क्षेत्रात एक केंद्रीय प्रश्न असा आहे की मनोविकृतीशील औषधांच्या तीव्र ते दीर्घकाळापर्यंत प्रभावांमध्ये संक्रमणास प्रोटीन ओळखणे. एपी-एक्सएनयूएमएक्स ट्रान्सक्रिप्शन फॅक्टर Δफोसबी विशेषतः मनोरंजक आहे कारण ते स्थिर कापलेले स्प्लिस व्हेरियंट प्रॉडक्ट आहे फॉस्ब जीन जे वारंवार गैरवर्तन करण्याच्या किंवा नैसर्गिक बक्षिसाच्या औषधांच्या संपर्कात आल्या नंतर जमा होते (मॅक्लंग, इत्यादि., एक्सएनयूएमएक्स, नेस्लर, 2008, नेस्लर, वगैरे., एक्सएनयूएमएक्स). आम्हाला आढळले आहे की मॉर्फिनच्या वारंवार संपर्कात आल्यानंतर Δ फॉसबी मेंदूत प्रवृत्त होते, Δ⁹-टीएचसी, कोकेन किंवा इथेनॉल, प्रत्येक औषधासह -FosB अभिव्यक्तीचा एक अद्वितीय प्रादेशिक नमुना तयार करते (पेरोटी, इत्यादि., एक्सएनयूएमएक्स). ड्रग्सच्या निरंतर शोधात असे होते की - फॉसबी स्ट्रायटममध्ये अत्यधिक प्रेरित होते, जिथे चारही औषधे एनएसी कोअरमध्ये फॉसबीने प्रेरित केली आणि सर्व वगळता Δ⁹-टीएचसी ने एनएसी शेल आणि कौडेट-पुटमेन मध्ये लक्षणीय प्रेरित अभिव्यक्ती.

फार्माकोलॉजिकल अभ्यासातून असे दिसून आले की डोपामाइन डीचे सह-प्रशासन₁ रिसेप्टर (डी₁आर) विरोधी एससीएच एक्सएनयूएमएक्सने डीएसीचे संभाव्य महत्त्व दर्शविणार्‍या, मधूनमधून कोकेन किंवा मॉर्फिन प्रशासनाद्वारे एनएएसी आणि कॉडेट-पुटमेनमध्ये फॉसब प्रेरण रोखले.₁आर-एक्सप्रेसिंग न्यूरॉन्स (मुलर आणि अनटरवाल्ड, 2005, नवीन, वगैरे., एक्सएनयूएमएक्स). औषध-मध्यस्थी वर्तनांवर फॉस इंडक्शनच्या परिणामाची तपासणी एनएसी आणि पृष्ठीय स्ट्रायटमच्या विशिष्ट न्यूरोनल लोकसंख्येमध्ये -फोसबी व्यक्त करणारे बिट्रान्जेनिक उंदीर वापरून केली गेली (चेन, इत्यादि., एक्सएनयूएमएक्स). डायनॉरफिन / डी मध्ये फॉसब व्यक्त करणारे उंदीर₁एनएसी आणि डोर्सल स्ट्रीटम (लाइन एक्सएनयूएमएक्सए) मधील आर पॉझिटिव्ह न्यूरॉन्स गैरवर्तन करण्याच्या औषधांना बदललेली प्रतिक्रिया दर्शवितात, कोकेन किंवा मॉर्फिनच्या फायद्याच्या परिणामाबद्दल विशेषतः वर्धित संवेदनशीलता (कोल्बी, इत्यादि., एक्सएनयूएमएक्स, केलझ, इत्यादि., एक्सएनयूएमएक्स, जखवारी, वगैरे., एक्सएनयूएमएक्स). एमओआर किंवा विविध जी-प्रोटीन सब्यूनिट्सच्या पातळीत बदल नसतानाही हे बदल घडले. तथापि, Δफोसबी एक्सप्रेसिंग माईसच्या एनएसीमध्ये डाइनॉरफिन एमआरएनए पातळी कमी केली गेली (जखवारी, वगैरे., एक्सएनयूएमएक्स) असे सूचित करते की Δफोसबीचे एक लक्ष्य एंडोजेनस ओपिओइड पेप्टाइड एन्कोडिंग एक जीन आहे. Os एफएएसबी इंडक्शन एनएसीमध्ये रिसेप्टर सिग्नलिंगचे नियमन करून वर्तणुकीशी बदल घडवून आणू शकतो, परंतु या संभाव्यतेचा शोध लागला नाही. म्हणूनच, सध्याच्या अभ्यासानुसार, बिट्रॅन्जेनिक माउस मॉडेलचा वापर करून डायरोफिन / डी मधील osFosB चे ओव्हर एक्सप्रेस₁स्ट्रायटल न्यूरॉन्स असलेले आर एमएआर-मध्यस्थी जी-प्रोटीन क्रियाकलाप आणि एमओआर- आणि केओआर-मध्यस्थीत enडनिलाईल सायक्लेझ इनएकेशन एनएसीमध्ये बदलते. सीबीवर osFosB चा परिणाम₁आर-मध्यस्थी केलेल्या जी-प्रोटीन क्रियाकलापाचे मूल्यांकन देखील केले गेले कारण Δ⁹-टीएचसी प्रशासनाने एनएसीमध्ये एफओएसबीची भरती केली (पेरोटी, इत्यादि., एक्सएनयूएमएक्स) आणि एंडोकॅनाबिनोइड प्रणाली मेंदूत बक्षीस सर्किट्सचे नियमन करण्यासाठी ज्ञात आहे (गार्डनर, 2005, मालदोनाडो, इत्यादि., एक्सएनयूएमएक्स), परंतु एंडोकेनाबिनोइड प्रणालीवर ΔFosB चा काय परिणाम झाला याचा अभ्यास केला गेला नाही.

जा:

2. साहित्य आणि पद्धती

एक्सएनयूएमएक्स. अभिकर्मक

[³⁵एस] जीटीपीγएस (एक्सएनयूएमएक्स सीआय / मिमीोल), [α-³²पी] एटीपी (एक्सएनयूएमएक्स सीआय / मिमीोल) आणि [³एच] कॅम्प (एक्सएनयूएमएक्स सीआय / एमएमओएल) पर्किनइल्मर (शेल्टन, सीटी) कडून विकत घेतले गेले. एटीपी, जीटीपी, जीडीपी, सीएएमपी, बोव्हिन सीरम अल्बमिन, क्रिएटिन फॉस्फोकिनेस, पापावेरीन, इमिडाझोल आणि डब्ल्यूआयएन-एक्सएनयूएमएक्स-एक्सएनयूएमएक्स, सिग्मा अ‍ॅलड्रिच (सेंट लुईस, एमओ) कडून विकत घेण्यात आल्या. जीटीपीγएस रोचे डायग्नोस्टिक कॉर्पोरेशन (शिकागो, आयएल) कडून विकत घेण्यात आले. नॅशनल इन्स्टिट्यूट ऑन ड्रग अ‍ॅब्युज (रॉकविले, एमडी) च्या औषध पुरवठा कार्यक्रमाद्वारे डीएएमजीओ पुरविला गेला. इकोनो-एक्सएनयूएमएक्स सिन्टीलेशन फ्लुईड फिशर सायंटिफिक (नॉरक्रॉस, जीए) कडून प्राप्त झाले. इकोलाइट सिन्टीलेशन फ्लुईड आयसीएन (कोस्टा मेसा, सीए) कडून प्राप्त झाले. इतर सर्व रसायने सिग्मा ldल्डरिक किंवा फिशर सायंटिफिक कडून मिळविली.

एक्सएनयूएमएक्स. उंदीर

केल्झ एट अल मध्ये वर्णन केल्यानुसार एनएसई-टीटीए (लाइन ए) et टेटओपी-एफओएसबी (लाइन एक्सएनयूएमएक्स) पासून काढलेले नर बिट्रांसजेनिक उंदीर तयार केले गेले. (केलझ, इत्यादि., एक्सएनयूएमएक्स). ट्रान्सजेन अभिव्यक्ति दडपण्यासाठी बिट्रांसजेनिक उंदीर गर्भधारणेचे आणि डॉक्सीसाइक्लिन (पिण्याच्या पाण्यात 100 µg) वर वाढविले गेले. वयाच्या एक्सएनयूएमएक्स आठवड्यात, ट्रान्सजेन अभिव्यक्तीस परवानगी देण्यासाठी अर्ध्या उंदरांना पाण्यातून डॉक्सीसाइक्लिन वगळले गेले, तर उर्वरित उंदीर ट्रान्जेन दडपण्यासाठी डॉक्सीसाइक्लिनवर ठेवण्यात आले. एक्सएनयूएमएक्स आठवड्यातून मेंदू गोळा केले गेले, ज्या वेळेस -फोसबीचे लिप्यंतरण प्रभाव जास्तीत जास्त आहे (मॅकक्लंग आणि नेस्लर, 2003). दुसर्‍या ट्रान्सजेनिक माउस लाईनचा वापर केला गेला ज्यामध्ये सी-जूनचा प्रबळ नकारात्मक विरोधी Junc-Jun डी मध्ये व्यक्त केला गेला₁आर / डायरोफिन आणि डी₂स्ट्रायटम, हिप्पोकॅम्पस आणि पॅरिटल कॉर्टेक्सचे आर / एनकेफेलिन पेशी (पीकमन, वगैरे., एक्सएनयूएमएक्स). सी-जून आणि संबंधित जून फॅमिली प्रथिने फॉस फॅमिली प्रोटीनसह डाईमराइझ होतात आणि ट्रान्सक्रिप्शन नियमित करण्यासाठी लक्ष्य जीन्सच्या एपी-एक्सएनयूएमएक्स साइटला बांधतात. तथापि, सी-जून (-c-Jun) च्या एन-टर्मिनसचे ट्रंकेशन जटिल ट्रान्सक्रिप्शनली निष्क्रिय आणि सक्रिय एपी-एक्सएनयूएमएक्स कॉम्प्लेक्सच्या डीएनए बंधन्यास अडथळा आणण्यास सक्षम करते. पीकमान एट अल मध्ये वर्णन केल्यानुसार एनएसई-टीटीए (लाइन ए) et टेटओप-फ्लाग-एसी-जून (लाइन ई) मधून आलेला नर बिट्रांसजेनिक उंदीर तयार झाला. (पीकमन, वगैरे., एक्सएनयूएमएक्स). ट्रान्सजेन अभिव्यक्ति दडपण्यासाठी बिट्रांसजेनिक उंदीर गर्भधारणेचे आणि डॉक्सीसाइक्लिन (पिण्याच्या पाण्यात 100 µg) वर वाढविले गेले. एक्सएएनएमएक्सएक्स आठवड्यात पिल्लांचे दुध सोडले गेले, जीनोटाइप केले गेले आणि गटांमध्ये विभक्त केले गेले, अर्ध्याने डॉक्सीसाइक्लिन असलेल्या पाण्यावर आणि अर्ध्याने नियमित पिण्याच्या पाण्यावर एफएलएजी--सी-जून अभिव्यक्तीस प्रवृत्त केले. 3 आठवडे नंतर मेंदू गोळा केले गेले, त्या वेळी ज्यावेळी FLAG-Δc-Jun ची कमाल पातळी मोजली गेली (पीकमन, वगैरे., एक्सएनयूएमएक्स). सर्व प्राण्याची प्रक्रिया प्रयोगशाळेतील प्राण्यांच्या देखरेखीसाठी आणि वापरण्यासाठी राष्ट्रीय आरोग्य संस्थेच्या आरोग्य मार्गदर्शकाच्या अनुसार केली गेली.

एक्सएनयूएमएक्स. पडदा तयार करणे

परखच्या दिवसापर्यंत मेंदूत −80. C वर साठा होता. परख घेण्यापूर्वी, प्रत्येक मेंदू वितळविला गेला होता, आणि एनएसीला बर्फावरुन वेगळे केले गेले. प्रत्येक नमुना एक्सएनयूएमएक्स एमएम ट्रीस-एचसीएल, एक्सएनयूएमएक्स एमएम एमजीसीएलमध्ये एकसंध केले गेले₂, एक्सएनयूएमएक्स एमएम ईजीटीए, पीएच एक्सएनयूएमएक्स (झिल्ली बफर) एक्सएनयूएमएक्स ° से येथे ग्लास होमोजिनायझरमधून एक्सएनयूएमएक्स स्ट्रोकसह. होमोजेनेट 1 at वर केंद्रीत करण्यात आले g एक्सएनयूएमएक्स min से, एक्सएनयूएमएक्स मिनिटासाठी, झिल्ली बफरमध्ये पुन्हा संयोजित, पुन्हा एक्सएनयूएमएक्स cent वर सेंट्रीफ्यूज g एक्सएनयूएमएक्स मिनिटासाठी एक्सएनयूएमएक्स ° से आणि एक्सएनयूएमएक्स एमएम ट्रीस-एचसीएल, एक्सएनयूएमएक्स एमएम एमजीसीएल मध्ये रिसेप्ट₂, एक्सएनयूएमएक्स एमएम ईजीटीए, एक्सएनयूएमएक्स एमएम एनएसीएल, पीएच एक्सएनयूएमएक्स (परख बफर). प्रोटीनची पातळी ब्रॅडफोर्डच्या पद्धतीने निर्धारित केली गेली (ब्रॅडफोर्ड, एक्सएनयूएमएक्स) मानक म्हणून बोवाइन सीरम अल्बमिन (बीएसए) वापरणे.

एक्सएनयूएमएक्स. Onगोनिस्ट-उत्तेजित [³⁵एस] जीटीपीγ बंधनकारक

परख बफरमधील enडिनोसिन डिमिनेस (एक्सएनयूएमएक्स एमयू / एमएल) सह एक्सएनयूएमएक्स at सेल्सियस झिंबरे 10 मिनिटांकरिता प्री-इनक्यूबेटेड होते. एक्सएनयूएमएक्स% (डब्ल्यू / व्ही) बीएसए, एक्सएनयूएमएक्स एनएम असलेल्या परख बफरमधील एक्सएनयूएमएक्स for से येथे एक्सएनयूएमएक्स तास झिल्ली (एक्सएनयूएमएक्स – एक्सएनयूएमएक्स प्रोटीन) उष्मायित केली गेली [³⁵एस] जीएटीपी γएस, एक्सएनयूएमएक्स Gएम जीडीपी आणि osडिनोसीन डिमिनेस (एक्सएनयूएमएक्स एमयू / एमएल) डीएएमजीओ किंवा विंएक्सएनयूएमएक्स-एक्सएनयूएमएक्सच्या योग्य एकाग्रतेसह आणि त्याशिवाय. नॉनस्पेसिफिक बाइंडिंग एक्सएनयूएमएक्स µएम जीटीपीγएस सह मोजले गेले. इनक्युबेशन जीएफ / बी ग्लास फायबर फिल्टर्सद्वारे फिल्टरेशनद्वारे समाप्त केले गेले होते, त्यानंतर एक्सएनयूएमएक्स वॉशनंतर एक्सएनयूएमएक्स मिली आइस-कोल्ड एक्सएनयूएमएक्स एमएम ट्रिस-एचसीएल, पीएच एक्सएनयूएमएक्स. इकोनो-एक्सएनयूएमएक्स सिन्टीलेशन फ्लुईडमध्ये रात्रीच्या वेळी फिल्टर केल्यावर बाउंड रेडियोएक्टिव्हिटी लिक्विड स्किंटीलेशन स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रीद्वारे निश्चित केली जाते.

एक्सएनयूएमएक्स. अ‍ॅडेनिल सायक्लेझ परख

वर वर्णन केल्याप्रमाणे झिल्ली (एक्सएनयूएमएक्स – एक्सएनयूएमएक्स proteing प्रथिने) enडिनोसाइन डिमिनेससह प्रक्षेपित होते, त्यानंतर एक्सएनयूएमएक्स at से येथे एक्सएनयूएमएक्स at से येथे एक्सएएनएमएक्सएक्स फॉरस्कोलिनच्या उपस्थिती किंवा अनुपस्थितीत, डीएएमजीओ, युएक्सएनयूएमएक्स किंवा डब्ल्यूएनएक्सएनएमएक्सएक्स एक्स-एक्सएनएक्सएक्समध्ये समाविष्ट होते एक्सएनयूएमएक्स µएम एटीपी, [α-³²पी] एटीपी (एक्सएनयूएमएक्स µ सीआय), एक्सएनयूएमएक्स एमएम डीटीटी, एक्सएनयूएमएक्स% (डब्ल्यू / व्ही) बीएसए, एक्सएनयूएमएक्स µएम चक्रीय एएमपी, एक्सएनयूएमएक्स µएम जीटीपी, एक्सएनयूएमएक्स एमएम पापावेरीन, एक्सएनयूएमएक्स एमएम फॉस्फोक्रेटीन, एक्सएनयूएमएक्स एक्स युनिट / एमएल क्रिएसीन phडिओफोस / मिली) 1.5 µl च्या अंतिम खंडात. या अटींनुसार, एकूण [α-³²पी] वसूल केलेला कॅमप सामान्यत: जोडलेल्या एकूण रकमेच्या एक्सएनयूएमएक्स% पेक्षा कमी होता [α-³²पी] प्रत्येक नमुन्यात एटीपी. एक्सएनएमएक्सएक्स मिनिटे उकळवून ही प्रतिक्रिया संपुष्टात आणली गेली [³²पी] चक्रीय एएमपी सलोमोन (डाउएक्स आणि एल्युमिना) च्या ड्युअल कॉलम पद्धतीने विभक्त केले गेले (सलोमन, एक्सएनयूएमएक्स). [³एच] अंतर्गत मानक म्हणून स्तंभ क्रोमॅटोग्राफीच्या आधी प्रत्येक ट्यूबमध्ये कॅम्प (एक्सएनयूएमएक्स डीपीएम) जोडले गेले होते. रेडिओएक्टिव्हिटी लिक्विड स्किंटीलेशन स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री (एक्सएनयूएमएक्स% कार्यक्षमतेद्वारे) द्वारे निर्धारित केली गेली ³एच) इल्युएटच्या एक्सएनयूएमएक्स एमएल नंतर इकोलाइट सिन्टीलेशन फ्लुईडच्या एक्सएनयूएमएक्स मिलीमध्ये विरघळली गेली.

2.6. डेटा विश्लेषण

अन्यथा सूचित केल्याशिवाय डेटाचे मूल्य क्षमतेच्या रूपात नोंदवले गेले आहे X एक्सएनयूएमएक्सचे एक्सएनएमएक्सएक्स स्वतंत्र प्रयोग, त्यापैकी प्रत्येक त्रिकोणी केले गेले. नेट-उत्तेजित [³⁵एस] जीटीपीγ बंधनकारक गणना अ‍ॅगनिस्ट-उत्तेजित बंधनकारक वजा बेसल बंधनकारक म्हणून केली जाते. नेट फोर्सकोलिन-उत्तेजित enडेनिल सायक्लेज क्रियाकलाप फोर्सकोलिन-उत्तेजित क्रियाकलाप - बेसल क्रियाकलाप (संध्याकाळी / मिग्रॅ / मिनिट) असे परिभाषित केले जाते. फोर्सकोलिन-उत्तेजित enडेनिल सायक्लेज क्रियाकलापांचे टक्के निषेध म्हणून परिभाषित केले गेले आहे (एगोनिस्टच्या अनुपस्थितीत नेट फोर्स्कॉलिन-उत्तेजित क्रियाकलाप - अ‍ॅगनिस्टच्या अनुपस्थितीत नेट फोर्स्कोलीन-उत्तेजित क्रिया)) एक्सएनयूएमएक्स. प्रिज्म एक्सएनयूएमएक्ससी (ग्राफपॅड सॉफ्टवेअर, इंक., सॅन डिएगो, सीए) वापरून सर्व कर्व्ह फिटिंग आणि सांख्यिकीय विश्लेषण केले गेले. ईसी प्राप्त करण्यासाठी एकाग्र-प्रभाव वक्रचे पुनरावृत्ती पुनरावलोकात्मक नसलेल्या रेखीय रीग्रेशनद्वारे विश्लेषण केले गेले₅₀ आणि ई_कमाल मूल्ये. एकाग्रता-प्रभावाच्या आकडेवारीचे सांख्यिकीय महत्त्व मुख्य घटक म्हणून अ‍ॅगनिस्ट डोस आणि जनुक प्रेरण (चालू किंवा बंद) च्या दोन-मार्ग विश्लेषणाद्वारे (एनोवा) निर्धारित केले गेले. वक्र-फिट मूल्यांचे सांख्यिकीय महत्त्व (ई_कमाल किंवा ईसी₅₀) ईसीमधील असमान रूपे (एफ-टेस्टद्वारे आढळलेल्या) दुरुस्त करणे आवश्यक आहे तेथे वेलचेचे सुधारणे किंवा डेटाचे स्क्वेअर रूट ट्रान्सफॉर्मेशन वापरुन, जोडी नसलेल्या दोन-टेल-टेल विद्यार्थ्यांची टी-टेस्टद्वारे निश्चित केले गेले₅₀ मूल्ये.

जा:

3. परिणाम

एक्सएनयूएमएक्स. ओपिओइड आणि कॅनाबिनॉइड रिसेप्टर-मध्यस्थी जी-प्रोटीन एक्टिवेशनवर फॉसब अभिव्यक्तीचा प्रभाव

एमओआर- किंवा सीबी असल्याचे निर्धारित करण्यासाठी₁आर-मध्यस्थी जी-प्रोटीन सक्रियण मध्ये एनएसी मधील एफओएसबीच्या इनडोकिएबल ट्रांसजेनिक अभिव्यक्तीद्वारे बदल केले गेले, अ‍ॅगोनिस्ट-उत्तेजित [³⁵एस] जीटीपीच्या बंधनकारकतेची बिट्रान्जेनिक उंदीरांच्या या प्रदेशातून तयार केलेल्या वेगळ्या पडद्यामध्ये सशर्त अभिव्यक्ती (Δ फॉसब ऑन) किंवा Δ फॉसबी ट्रान्सजेन एक्सप्रेस न करणे (os फॉसब बंद) तपासले गेले. एमओआर सक्रिय करण्यासाठी एनओआर-सेलेक्टिव एनकेफॅलिन अ‍ॅनालॉग डीएएमजीओ वापरला गेला होता आणि कॅनॅबिनॉइड अमीनोअलकिलिंडोल डब्लूआयएनएक्सएनयूएमएक्स-एक्सएनयूएमएक्स सीबी सक्रिय करण्यासाठी वापरला गेला.₁आर. या लिगाँड्स पूर्वी एमओआर आणि सीबी येथे पूर्ण अ‍ॅगोनिस्ट असल्याचे दर्शविलेले होते₁आर, अनुक्रमे (ब्रेव्होजेल, इत्यादि., एक्सएनयूएमएक्स, सेले, इत्यादि., एक्सएनयूएमएक्स). केओआर-मध्यस्थी केलेल्या जी-प्रोटीन क्रियाकलापांचे परीक्षण करणे शक्य नव्हते कारण कृंतक मेंदूत सिग्नल खूप कमी आहे (चाइल्डर्स, इत्यादि., एक्सएनयूएमएक्स). परिणामांनी डीएएमजीओ आणि डब्ल्यूआयएनएक्सएनयूएमएक्स-एक्सएनयूएमएक्स या दोहोंनी जी-प्रोटीन क्रियाकलापांची एकाग्रता-आधारित उत्तेजना दर्शविली - फोसब बंद आणि उंदीरवर फॉसब (आकृती 1). डीएएमजीओ-उत्तेजित क्रियाकलापासाठी (आकृती 1A), एकाग्रता-प्रभाव डेटाच्या दु-मार्ग एनोवाने with फॉसबी स्थिती (पी <0.0001, एफ = 22.12, डीएफ = 1) आणि डीएएमजीओ एकाग्रता (पी <0.0001, एफ = 29.65, डीएफ = 5) चे कोणतेही मुख्य प्रभाव नाही. महत्त्वपूर्ण संवाद (पी = 0.857, एफ = 0.387, डीएफ = 5). एकाग्रता-प्रभाव वक्र नॉनलाइनर रिग्रेशन विश्लेषणाने लक्षणीय मोठे डीएएमजीओ ई उघड केले_कमाल उंदरांवर osFosB मध्ये मूल्य (ई_कमाल = एक्सएनयूएमएक्स ± एक्सएनयूएमएक्स% उत्तेजन) iceFosB ऑफ उंदीरशी संबंधित (ई_कमाल = 56 ± 4.1% उत्तेजन; पी <0.05 विद्यार्थ्यांच्या टी-टेस्टद्वारे उंदरावरील फॉसबपेक्षा वेगळे) डॅमगो ईसी₅₀ एफएसबी चालू आणि Δफॉसब ऑफ उंदीर (एक्सएनयूएमएक्स ± एक्सएनयूएमएक्स एनएम विरूद्ध एक्सएनयूएमएक्स ± एक्सएनयूएमएक्स एनएम, अनुक्रमे, पी = एक्सएनयूएमएक्स) मधील मूल्ये भिन्न नाहीत.

आकृती 1

अ‍ॅगोनिस्ट-उत्तेजित वर फॉस अभिव्यक्तीचा प्रभाव [³⁵एस] एनएसीमध्ये जीटीपीचे बंधनकारक. Concentफोसबी-एक्स्प्रेसिंग (Δफोसबी ऑन) किंवा कंट्रोल (osफोसबी ऑफ) उंदीर पासून पडदा वेगवेगळ्या सांद्रतांचा वापर करून पद्धतींमध्ये वर्णन केल्यानुसार दिले गेले. ...

एमओआर onगोनिस्ट डीएएमजीओ बरोबर प्राप्त झालेल्या निकालांच्या उलट, जी-प्रोटीन एक्टिवेशनमध्ये Δफोसबी स्थिती-आधारित फरक कॅनाबिनॉइड अ‍ॅगोनिस्ट विंएक्सएनयूएमएक्स-एक्सएनयूएमएक्स सह पाहिले गेले नाहीत (आकृती 1B). डब्ल्यूआयएन 55,212-2 एकाग्रता-प्रभाव डेटाच्या दु-मार्ग एनोवाने WIN55,212-2 एकाग्रता (पी <0.0001, एफ = 112.4, डीएफ = 7) चा महत्त्वपूर्ण मुख्य परिणाम प्रकट केला, परंतु एफओएसबी स्थितीचा नाही (पी = 0.172) , एफ = 1.90, डीएफ = 1) आणि कोणताही संवाद झाला नाही (पी = 0.930, एफ = 0.346, डीएफ = 7). त्याचप्रमाणे, WIN55,212-2 E वर osFosB स्थितीचा कोणताही परिणाम झाला नाही_कमाल मूल्ये (103 ± 6% विरूद्ध 108 ± 8% उत्तेजना respectivelyFosB मधील उंदीर चालू आणि बंद, अनुक्रमे, विद्यार्थ्यांच्या टी-टेस्टद्वारे p = 0.813) किंवा EC₅₀ मूल्ये (103 ± 20 एनएम विरूद्ध 170 ± 23 एनएम मध्ये iceFosB मध्ये अनुक्रमे, पी = एक्सएनयूएमएक्स).

वक्रांच्या आकाराच्या आणि आमच्या मागील अभ्यासांनी मेंदूमधील बिफासिक डब्ल्यूआयएनएक्सएनयूएमएक्स-एक्सएनयूएमएक्स एकाग्रता-प्रभाव वक्र दर्शविल्या आहेत यावर आधारित (ब्रेव्होजेल, इत्यादि., एक्सएनयूएमएक्स, ब्रेव्होजेल, इत्यादि., एक्सएनयूएमएक्स), डब्ल्यूआयएनएक्सएनयूएमएक्स-एक्सएनयूएमएक्स वक्रांचे दोन-साइट मॉडेल वापरुन विश्लेषण देखील केले. सरासरी डेटाच्या विश्लेषणाने दोन-साइट मॉडेल (आर.) वापरुन फिटच्या चांगुलपणामध्ये किंचित सुधारणा दिसून आली² एकल-साइट मॉडेलच्या तुलनेत = एक्सएनयूएमएक्स आणि एक्सएनयूएमएक्स, चौरस = एक्सएनएमएक्स आणि एक्सएनयूएमएक्समध्ये UMFosB अनुक्रमे आणि बंद² = एक्सएनयूएमएक्स आणि एक्सएनयूएमएक्स, चौरसांची बेरीज = 0.891 आणि 0.879 अनुक्रमे inFosB मध्ये आणि बंद बंद). तथापि, एकतर E मध्ये osFosB चालू आणि बंद उंदीर दरम्यान कोणतेही महत्त्वपूर्ण फरक आढळले नाहीत_कमाल किंवा ईसी₅₀ उच्च किंवा निम्न सामर्थ्य साइटची मूल्ये (पूरक टेबल 1), जरी कमी ईसीकडे कल होता₅₀ (इ.सी.) वर फॉसब चालू असलेल्या उंदरात उच्च सामर्थ्य असलेल्या साइटवर मूल्य₅₀उच्च X एफओएसबी ऑफ (ईसी) च्या तुलनेत एक्सएनयूएमएक्स ± एक्सएनयूएमएक्स एनएम)₅₀उच्च = एक्सएनयूएमएक्स ± एक्सएनयूएमएक्स एनएम; पी = एक्सएनयूएमएक्स). याव्यतिरिक्त, बेसलवर फोसबी स्थितीचा कोणताही परिणाम झाला नाही [³⁵एस] एनएसी झिल्लीमधील जीटीपी बंधनकारक (अनुक्रमे, पी = एक्सएनयूएमएक्स, mफोसबी मधील एक्सएनयूएमएक्स ± एक्सएनयूएमएक्स विरूद्ध एक्सएनएमएक्स एफएमओएल / मिलीग्राम विरूद्ध). या आकडेवारीवरून असे दिसून येते की उंदीरांच्या एनएसीमध्ये B फॉसबीची इनडिसीबल ट्रांसजेनिक अभिव्यक्ती सीबीवर लक्षणीय परिणाम न करता एमओआर-मध्यस्थी जी-प्रोटीन सक्रियण वाढवते.₁आर-मध्यस्थता किंवा बेसल जी-प्रोटीन क्रिया.

एक्सएनयूएमएक्स. Enडेनिल सायक्लेजच्या ओपिओइड आणि कॅनाबिनॉइड रिसेप्टर-मध्यस्थीत प्रतिबंधावरील फॉसबीचा प्रभाव

एमओआर आणि सीबी द्वारे डाउनस्ट्रीम इंफेक्टर क्रियाकलाप सुधारित-फॉसबीच्या इनडिसीबल ट्रांसजेनिक अभिव्यक्तीच्या प्रभावाचे मूल्यांकन करण्यासाठी₁आर, एक्सएनयूएमएक्स µ एम फोर्सकोलिन-उत्तेजित enडेनिलाईल सायक्लेज क्रियाकलापांचे प्रतिबंध एनएएसी झिल्लीमध्ये तपासले गेले. एमओआर व्यतिरिक्त- आणि सीबी₁केडीओ-निवडक पूर्ण अ‍ॅगोनिस्ट यूएक्सएनयूएमएक्स वापरुन enडिनलिल सायक्लेझ क्रियाकलापांचे आर-मध्यस्थीकरण प्रतिबंध, केओआर क्रियाकलापाचे परिणाम देखील तपासले गेले (झू, इत्यादि., एक्सएनयूएमएक्स), कारण मागील निकालांवरून असे दिसून आले होते की बिट्रान्जेनिक मॉडेलमध्ये डायरोफिन एमआरएनए -फोसबीचे लक्ष्य होते (जखवारी, वगैरे., एक्सएनयूएमएक्स). परिणाम दर्शवितात की डीएएमजीओ, यूएक्सएनयूएमएक्स आणि डब्लूआयएनएक्सएनयूएमएक्स-एक्सएनयूएमएक्स प्रत्येक उदावर फॉसब बंद आणि iceफोसबी या दोहोंमध्ये enडिनलिल सायक्लेझ क्रियाकलापांचे एकाग्रता-आधारित प्रतिबंधआकृती 2). डॅमजीओ एकाग्रता-प्रभाव डेटाची द्वि-मार्ग अनोवा (आकृती 2A) ने एफओएसबी स्थिती (पी = ०.०११२, एफ = ११.0.0012, डीएफ = १) आणि डीएएमजीओ एकाग्रता (पी <०.०००१, एफ = २ .11.34 .1१, डीएफ =)) चे लक्षणीय मुख्य परिणाम प्रकट केले, परंतु कोणतेही महत्त्वपूर्ण परस्परसंवाद (पी = ०.0.0001१, एफ = ०.29.61 6 0.441) , डीएफ = 0.986). डीएएमजीओ एकाग्रता-प्रभाव वक्रांच्या नॉनलाइनर रिग्रेशन विश्लेषणाने लक्षणीय कमी डीएएमजीओ ईसी उघड केले₅₀ iceफॉस ऑफ उंदीर (101 ± 11 एनएम, पी <510 विद्यार्थ्यांच्या टी-टेस्टद्वारे 182) च्या तुलनेत उंदरांवर (0.05 ± XNUMX एनएम) Δ फॉसबचे मूल्य. तथापि, डीएएमजीओ ई मध्ये कोणताही महत्त्वपूर्ण फरक नव्हता_कमाल मूल्ये (एक्सएनयूएमएक्स ± एक्सएनयूएमएक्स विरूद्ध विरूद्ध एक्सएनयूएमएक्स ± एक्सएनयूएमएक्स% इनहिसेज इन फॉर बी इन respectivelyफाइस अनुक्रमे, पी = एक्सएनयूएमएक्स).

आकृती 2

एनएसीमध्ये enडेनिल सायक्लेज क्रियाकलाप प्रतिबंधित करण्यावर एफओएसबी अभिव्यक्तीचा प्रभाव. एक्सएनयूएमएक्स µएमच्या उपस्थितीत मेथड्समध्ये वर्णन केल्यानुसार Δफोसबी-एक्स्प्रेसिंग (Δफोसबी ऑन) किंवा कंट्रोल (Δफोसबी ऑफ) उंदीर पासून पडदा काढला गेला. ...

केओआर-मध्यस्थता enडेनिल सायक्लेज इनहिनिशन Δफोसबी (इनफिसीबल ट्रांसजेनिक एक्सप्रेशन्स फंक्शन) म्हणून भिन्न आहेआकृती 2B). यू -50,488 एकाग्रता-प्रभाव डेटाच्या दु-मार्ग एनोवाने एफओएसबी स्थिती (पी = 0.0006, एफ = 14.53, डीएफ = 1) आणि यू 50,488 एकाग्रता (पी <0.0001, एफ = 26.48, डीएफ = 3) चे महत्त्वपूर्ण मुख्य प्रभाव दर्शविला , कोणत्याही महत्त्वपूर्ण संवादाशिवाय (पी = 0.833, एफ = 0.289, डीएफ = 3). एकाग्रता-प्रभाव वक्र नॉनलाइनर रिग्रेशन विश्लेषणाने एक जास्त U50,488 ई प्रकट केले_कमाल यूएस off फॉसबीचे मूल्य (१.18.3..1.14 ± १.१12.5% प्रतिबंध) compared फॉसब ऑफ उंदीर (१२.± ± ०.०2.03% इनहिबिशन; पी ० ०.०0.05 फॉन्ट ऑन स्टूडंट्स टी-टेस्ट पेक्षा भिन्न), यू ,50,488, EXNUMX E ईसीमध्ये कोणताही फरक नाही.₅₀ मूल्ये (310 ± 172 एनएम विरूद्ध 225 ± 48 एनएम मध्ये iceFosB मध्ये अनुक्रमे, पी = एक्सएनयूएमएक्स).

एमओआर आणि केओआर सह साजरा झालेल्या परिणामाच्या विपरीत, कॅनाबिनॉइड अ‍ॅगोनिस्ट विंएक्सएनयूएमएक्स-एक्सएनयूएमएक्स द्वारा enडिनिलिल सायक्लेजच्या प्रतिबंधाबद्दल इनडिसीबल ट्रांसजेनिक osफोसबी अभिव्यक्तीचा कोणताही महत्त्वपूर्ण प्रभाव दिसला नाही (आकृती 2C). डब्ल्यूआयएन 55,212-2 एकाग्रता-प्रभाव डेटाच्या दु-मार्ग एनोवाने औषध एकाग्रतेचा महत्त्वपूर्ण प्रभाव दर्शविला (पी <0.0001, एफ = 23.6, डीएफ = 2), परंतु एफओएसबी स्थितीचा नाही (पी = 0.735, एफ = 0.118, डीएफ) = 1) किंवा कोणताही महत्त्वपूर्ण संवाद झाला नाही (पी = 0.714, एफ = 0.343, डीएफ = 2). याव्यतिरिक्त, कोणत्याही onगोनिस्टच्या अनुपस्थितीत बेसल किंवा फोर्सकोलिन-उत्तेजित enडेनिलिल सायक्लेझ क्रियाकलापांवर Δ फॉसबी स्थितीचा कोणताही परिणाम झाला नाही. बेसाल enडेनिल सायक्लेझ क्रियाकलाप उंदीरांवर os फॉसबीमध्ये 491 ± 35 संध्याकाळी / मिग्रॅ / मिनिट होते - उंदराच्या बंदीमध्ये फॉसब ऑफ 546 ± 44 च्या तुलनेत (विद्यार्थ्यांच्या टी-टेस्टद्वारे पी = 0.346). त्याचप्रमाणे, 1 µएम फोर्स्कोलीनच्या उपस्थितीत enडनील सायक्लेझ क्रियाकलाप उंदीर (पी = 2244) मध्ये 163 ± 2372 संध्याकाळी / मिग्रॅ / मिनिट विरुद्ध उंदीरांवर osFosB मध्ये 138 ± 0.555 pmol / मिलीग्राम / मिनिट होता.

एक्सएनयूएमएक्स. Enडेनिल सायक्लेजच्या ओपिओइड आणि कॅनाबिनॉइड रिसेप्टर-मध्यस्थी प्रतिबंधांवर oncJun चा प्रभाव

एमएसी आणि केओआर कडून एनएसीमध्ये enडेनिल सायक्लेज करण्यासाठी एफओएसबी वर्धित इनहिबिटरी सिग्नल ट्रान्सपॅक्शनची इंडोकिएबल ट्रान्सजेनिक अभिव्यक्ती, एफओएसबी-मध्यस्थी ट्रान्सक्रिप्शनचे प्रबळ नकारात्मक अवरोधक उलट पद्धतीने ओपिओइड रिसेप्टर सिग्नलिंग सुधारित करेल की नाही हे निर्धारित करणे हितकारक आहे. या प्रश्नाकडे लक्ष देण्यासाठी, डीएएमजीओ आणि यूएक्सएनयूएमएक्स द्वारा फोर्सकोलिन-उत्तेजित enडेनिल सायक्लेझ क्रियाकलाप प्रतिबंधित बिट्रोजेनिक उंदीरांच्या एनएसीमधून सशर्त JcJun व्यक्त करणार्या पडदामध्ये तपासले गेले. एमओआर किंवा केओआर (ORडनिलिल सायक्लेज अ‍ॅक्टिव्हिटी) च्या प्रतिबंधाबद्दल expressionc जॉन अभिव्यक्तीचा परिणाम दिसून आला नाही (आकृती 3). डीएएमजीओ एकाग्रता-प्रभाव वक्रांच्या द्वि-मार्ग अनोव्हाने डीएएमजीओ एकाग्रता (पी <0.0001, एफ = 20.26, डीएफ = 6) चा महत्त्वपूर्ण प्रभाव दर्शविला, परंतु Jc जॉन स्थितीचा नाही (पी = 0.840, एफ = 0.041, डीएफ = 1) आणि तेथे कोणताही महत्त्वपूर्ण संवाद झाला नाही (पी = ०.० 0.982 .२, एफ = ०.0.176, डीएफ =)). त्याचप्रमाणे ईमध्येही कोणताही फरक नव्हता_कमाल किंवा ईसी₅₀ JcJun on (E) सह उंदीर दरम्यान मूल्ये_कमाल = एक्सएनयूएमएक्स ± एक्सएनयूएमएक्स%; ईसी₅₀ = एक्सएनयूएमएक्स ± एक्सएनयूएमएक्स एनएम) किंवा Jसी जॉन ऑफ (ई_कमाल = एक्सएनयूएमएक्स ± एक्सएनयूएमएक्स%, पी = एक्सएनयूएमएक्स; ईसी₅₀ = 611 ± 176 एनएम, पी = 0.129). समान परिणाम U50,488 सह पाहिले गेले, जसे की एकाग्रता-प्रभाव वक्रांच्या दुतर्फा एनोवाने एकाग्रतेचा महत्त्वपूर्ण परिणाम दर्शविला (पी <0.0001, एफ = 11.94, डीएफ = 6), परंतु Jc जॉन स्थितीचा नाही (p = 0.127 , एफ = 2.391, डीएफ = 1) आणि कोणताही महत्त्वपूर्ण संवाद झाला नाही (पी = 0.978, एफ = 0.190, डीएफ = 6). त्याचप्रमाणे ई मध्ये कोणतेही महत्त्वपूर्ण फरक नव्हते_कमाल किंवा ईसी₅₀ JcJun on (E) सह उंदीर दरम्यान मूल्ये_कमाल = एक्सएनयूएमएक्स ± एक्सएनयूएमएक्स%; ईसी₅₀ = एक्सएनयूएमएक्स ± एक्सएनयूएमएक्स एनएम) किंवा बंद (ई_कमाल = एक्सएनयूएमएक्स ± एक्सएनयूएमएक्स%, पी = एक्सएनयूएमएक्स; ईसी₅₀ = एक्सएनयूएमएक्स ± एक्सएनयूएमएक्स एनएम, पी = एक्सएनयूएमएक्स).

आकृती 3

एनएसीमध्ये enडेनिल सायक्लेज क्रियाकलाप प्रतिबंधित करण्यासाठी Δc जॉन अभिव्यक्तीचा प्रभाव. डीएएमजीओ (ए), यूएक्सएनयूएमएक्सएच (बी) किंवा विन्क्सएनयूएमएक्स-एक्सएनयूएमएक्सच्या उपस्थितीत J सी जॉन-एक्स्प्रेसिंग (Δक जॉन ऑन) किंवा कंट्रोल (Jc जॉन ऑफ) उंदीर कडून झिल्ली उष्मायित केली गेली. ...

कॅनॅबिनॉइड अ‍ॅगोनिस्ट द्वारा Jc जॉन अभिव्यक्ती देखील एनएसीमध्ये enडनिल सायक्लेजच्या प्रतिबंधनावर लक्षणीय परिणाम करीत नाही. डब्ल्यूआयएन 55,212-2 एकाग्रता प्रभाव वक्र च्या दु-मार्ग एनोवाने WIN55,212-2 एकाग्रता (पी <0.0001, एफ = 15.53, डीएफ = 6) चा महत्त्वपूर्ण परिणाम दर्शविला, परंतु जीनोटाइपचा नाही (पी = 0.066, एफ = 3.472२, डीएफ = १) आणि कोणताही महत्त्वपूर्ण संवाद झाला नाही (पी = ०.1 0.973,, एफ = ०.०0.208, डीएफ = 6). त्याचप्रमाणे, डब्ल्यूआयएन 55,212-2 ई मध्ये कोणतेही महत्त्वपूर्ण फरक नव्हते_कमाल मूल्ये (एक्सएनयूएमएक्स ± एक्सएनयूएमएक्स% आणि एक्सएनयूएमएक्स in एक्सएनयूएमएक्स% इनहिन्स इन Δसी जॉन विरुद्ध उंदीर विरूद्ध, अनुक्रमे, पी = एक्सएनयूएमएक्स) आणि किंवा ईसी₅₀ मूल्ये (208 ± 120 nM आणि 417 ± 130 nM ΔcJun च्या विरूद्ध विरूद्ध उंदीर क्रमशः p = 0.270). अशाप्रकारे, icecJun व्यक्त करणार्‍या उंदरांमध्ये WIN55,212-2 ची क्षमता कमी होण्याकडे थोडासा कल असला तरी, ट्रान्सजेनने enडेनिल सायक्लेजच्या कॅनाबिनोइड प्रतिबंधास लक्षणीय बदल केले नाही. याव्यतिरिक्त, बेसल किंवा फोर्सकोलिन-उत्तेजित yडेनिलिल सायक्लेझ क्रियाकलापांवर Jc जॉन स्थितीचा कोणताही परिणाम दिसला नाही. बेसल enडेनिल सायक्लेझ क्रियाकलाप क्रमशः Jc जुन चालू किंवा बंद 1095 ± 71 pmol / mg / min आणि 1007 ± 77 pmol / mg / min (p = 0.403) होते. एक्सएनयूएमएक्स µएम फोर्सकोलिनद्वारे उत्तेजित enडनील सायक्लेज क्रियाकलाप अनुक्रमे Jc जुन चालू किंवा बंद 1 ± 4185 pmol / mg / Xs 293 pmol / mg / min (p = 4032) मध्ये होते.

3.4. चर्चा

या अभ्यासाच्या निष्कर्षांनुसार एमओआर-मध्यस्थी जी-प्रोटीन सक्रियण आणि डायन्सॉफिन / डी मधील एफओएसबीच्या इनडिकेशियल ट्रांसजेनिक अभिव्यक्तिसह उंदरांच्या एनएसीमध्ये enडनिलिल सायक्लेज प्रतिबंधित₁न्यूरॉन्स असलेले आर. ORफोसबी एक्स्प्रेस चूहोंच्या एनएसीमध्ये enडनीयल सायक्लेज क्रियाकलापांचे केओआर-मध्यस्थीय निषेध देखील वाढविला गेला, ज्यायोगे असे सूचित केले गेले की Δफोसबी एनएसीमध्ये अंतर्जात ओपिओइड सिस्टमचे नियमन करते. दॅमगो ई_कमाल एमओआर-उत्तेजितसाठी मूल्य अधिक होते [³⁵एस] जीटीपीचे बंधनकारक आणि त्याचे ईसी₅₀ नियंत्रण उंदीरच्या तुलनेत osफोसबी ओव्हर-एक्सप्रेसिंग उंदीरमध्ये, enडेनिल सायक्लेज प्रतिबंधासाठी मूल्य कमी होते. हे निष्कर्ष परीक्षेच्या मॉड्युलेशनसाठी रिसेप्टर रिझर्वची शक्यता दर्शवितात परंतु परख परिस्थितीनुसार जी-प्रोटीन सक्रिय करणे नव्हे. केओआर onगोनिस्ट द्वारा enडिनलिल सायकलक्लेझचा जास्तीत जास्त प्रतिबंध केल्याचा निष्कर्ष osफोसबी अभिव्यक्तीने प्रभावित केला आहे - केओआर-मध्यस्थी प्रतिसादासाठी कमी रिसेप्टर रिझर्व्ह सूचित करतो, जे माऊस ब्रेनमधील केओआर बाइंडिंग साइटच्या निम्न स्तराशी सुसंगत आहे (अंडरवल्ड, इट अल., एक्सएनयूएमएक्स). याउलट सीबी₁आर-मध्यस्थी जी-प्रोटीन क्रियाकलाप आणि enडेनिल सायक्लेझचा प्रतिबंध फोसबी अभिव्यक्तीद्वारे अप्रभावित झाला, या एनएसी न्यूरॉन्समधील ओपिओइड आणि कॅनाबिनॉइड सिस्टमच्या Δफोसबीच्या प्रतिसादामध्ये भिन्न असल्याचे सूचित करते.

ओपिओइड रिसेप्टर-मध्यस्थीय सिग्नलिंगवर Δफोसबीचा प्रभाव आमच्या मागील अहवालाशी सुसंगत आहे - स्ट्रायटममधील फॉसब अभिव्यक्ती मॉर्फिनचे तीव्र आणि तीव्र परिणाम बदलते (जखवारी, वगैरे., एक्सएनयूएमएक्स). त्या अभ्यासाचा एक निष्कर्ष म्हणजे डायनॉरफिन / डी मधील फॉसबीच्या ट्रांसजेनिक अभिव्यक्ती असणारा उंदीर₁नियंत्रणापेक्षा आर स्ट्रायटल न्यूरॉन्स मॉर्फिनच्या जागी कंडिशनिंगमध्ये अधिक संवेदनशील होते. शिवाय, एनएसीमध्ये साइट-विशिष्ट इंजेक्शनद्वारे -फोसबीच्या मध्यस्थ अभिव्यक्तीद्वारे या परिणामाची नक्कल केली गेली. ही निरीक्षणे सध्याच्या निकालांशी सुसंगत आहेत जी एनएसीमध्ये सुधारित एमओआर सिग्नल दर्शवितात.

आम्ही यापूर्वी जीन एन्कोडिंग ओळखले orफोसबीचे लक्ष्य म्हणून डायनॉरफिन आणि प्रस्तावित केले की डीओरोफिन -फोसबी बिट्रान्जेनिक उंदीरातील मॉर्फिनच्या वर्धित फायद्याच्या गुणधर्मांशी सुसंगत असेल. (जखवारी, वगैरे., एक्सएनयूएमएक्स). सध्याचे निकाल दर्शविते की एनएसीमध्ये enडनिल सायक्लेजचे केओआर-मध्यस्थीय निरोधक. फॉसबी एक्सप्रेसिंग उंदरामध्ये वाढविले गेले आहे, जे कमी डायरोफिननंतर केओआर संवेदनशीलतेमध्ये भरपाई वाढवू शकते. मागील अभ्यासांमधून असे दिसून आले आहे की एनएसीसह प्रोडिनॉर्फिन नॉकआऊट उंदीरांच्या काही मेंदू प्रदेशांमध्ये केओआर अपग्रेटेड केले गेले होते.क्लार्क, इत्यादि., एक्सएनयूएमएक्स).

Osफोसबीच्या विरुध्द, JcJun ची inducible transgenic अभिव्यक्ति, ΔFOSB बंधनकारक भागीदार cJun च्या प्रबळ नकारात्मक कापलेल्या उत्परिवर्तनाने, MOR किंवा KOR अ‍ॅगोनॉजिस्ट्स द्वारा enडनिलिल सायक्लेझ इनहिबिशन बदलले नाही. हे परिणाम सूचित करतात की एफएएसबी अभिव्यक्तीचे मूलभूत स्तर, जे तुलनेने कमी आहेत, एनएएसीमध्ये सिग्नल ट्रान्सडॅक्शनच्या या स्तरावर ओपिओइड रिसेप्टर सिग्नलिंग राखण्यात महत्त्वपूर्ण भूमिका बजावत नाहीत. मॉर्फिनचा सशर्त फायद्याचा प्रभाव आमच्या मागील अभ्यासातील जॉन अभिव्यक्तीने कमी केला होता (जखवारी, वगैरे., एक्सएनयूएमएक्स) एकतर सूचित करते की कंडिशनिंग प्रक्रियेदरम्यान -फोसबीचे मॉर्फिन प्रेरण हे औषधांविषयीच्या वर्तनात्मक प्रतिक्रियांचे नियमन करण्यात किंवा ओपिओइड रिसेप्टर्सद्वारे प्रॉक्सिमल सिग्नलवर परिणाम करणा those्या Δफोसबीच्या ट्रान्सक्रिप्शनल इफेक्टस ओपिओइड बक्षीसवर परिणाम करू शकते. कोणत्याही परिस्थितीत, सध्याच्या अभ्यासाचे निकाल स्पष्टपणे दर्शवतात की, जेव्हा स्ट्रायटल डायरोफिन / डी मध्ये फॉस्ब अभिव्यक्ती बेसल स्तरापेक्षा उच्च केली जाते₁आर-एक्सप्रेसिंग न्यूरॉन्स, एनएसीमध्ये enडेनिल सायक्लेज रोखण्यासाठी एमओआर आणि केओआरच्या जोडणीत जोरदार वाढ झाली आहे.

ज्या यंत्रणेद्वारे एमओआर- आणि केओआर-मध्यस्थीकरण सिग्नलिंगद्वारे osफोसबी ओव्हरएक्सप्रेसद्वारे वर्धित केले गेले आहे ते अस्पष्ट आहे, परंतु आम्ही पूर्वी दर्शविले आहे की एमओआर पातळीचे मूल्यांकन केले गेले आहे [³एच] नालोक्सोन बंधनकारक, उंदीर विरूद्ध (एफओएसबी) च्या एनएसीमध्ये भिन्न नाही.जखवारी, वगैरे., एक्सएनयूएमएक्स). त्याच अभ्यासात असे आढळले की जी_i1 आणि 2 प्रथिने पातळी levelsFosB अभिव्यक्तीद्वारे या प्रदेशात प्रभावित झाले नाहीत. तथापि, मागील जनुक अभिव्यक्ति अ‍ॅरे विश्लेषकांनी हे दर्शविले आहे की जी_o mRNA उंदीर वर ΔFosB च्या NAc मध्ये उपयोजित होते (मॅकक्लंग आणि नेस्लर, 2003). प्रोटीन स्तरावर जी-प्रोटीन सब्यूनिट अभिव्यक्ति तसेच बरेच जी-प्रोटीन मॉड्युलेटर प्रोटीनच्या अभिव्यक्तीवर ट्रान्सजेनिक Δफोसबी अभिव्यक्तीच्या प्रभावाचे सर्वंकष परीक्षण करणे भविष्यातील अभ्यासात रस घेईल.

हे मनोरंजक आहे की एफओएसबी अभिव्यक्ती सीबी वाढवित नाही₁एनएसीमध्ये आर-मध्यस्थी सिग्नलिंग. सीबीमधील बदल शक्य आहे₁संपूर्ण एनएसीच्या तयारीत अस्पष्ट असलेल्या न्यूरॉन्सच्या वेगळ्या लोकसंख्येमध्ये आर सिग्नलिंग उद्भवते. उदाहरणार्थ, of चा प्रशासन⁹- एनएसीच्या टीएचसीने कोरमध्ये लक्षणीय Δ फॉसबी प्रेरित केले, परंतु शेल नाही (पेरोटी, इत्यादि., एक्सएनयूएमएक्स). मीतथापि, हे आव्हान Δ सह दर्शविले गेले आहे⁹TH च्या वारंवार प्रशासनानंतर टीटीसी⁹-टीएचसीने एनएसी कोरमध्ये डोपामाइनचे प्रकाशन वाढविले, परंतु शेलमध्ये रिलीझ कमी झाली (कॅडोनी, इत्यादि., एक्सएनयूएमएक्स). हे लक्षात घेणे देखील महत्त्वाचे आहे की बिट्रान्जेनिक उंदीरांची एक्सएनयूएमएक्सए लाइन dynफोसबी फक्त डाइनॉर्फिन / डी मध्ये₁स्ट्रायटमच्या आर पॉझिटिव्ह मध्यम स्पायनी न्यूरॉन्स, परंतु सीबी₁आर दोन्ही डायरोफिन / डी मध्ये व्यक्त केले जातात₁आर आणि एनकेफेलिन / डी₂आर पॉझिटिव्ह स्ट्रायटल न्यूरॉन्स (होहमन आणि हेरकेनहॅम, एक्सएनयूएमएक्स), तसेच कॉर्टिकल eफ्रेन्ट्सच्या टर्मिनलवर (रोबे, इत्यादि., एक्सएनयूएमएक्स). Osफोसबी-मध्यस्थित ट्रान्सक्रिप्शन, JcJun, च्या प्रबळ नकारात्मक नियामक अभिव्यक्तीचा कॅनाबिनॉइड रिसेप्टर सिग्नलिंगवर देखील कोणताही विशेष प्रभाव पडला नाही, जरी Dc जॉन दोन्ही डी मध्ये स्वतंत्रपणे व्यक्त केला गेला₁ आणि डी₂या उंदरांमध्ये मध्यम मणक्याचे न्यूरॉन्सची लोकसंख्या (पीकमन, वगैरे., एक्सएनयूएमएक्स). तथापि, हे शक्य आहे की बेसल-फॉसबी अभिव्यक्ती हे पुरेसे कमी आहे की एमओआर आणि केओआरच्या परिणामांद्वारे सूचित केल्यानुसार JcJun रिसेप्टर सिग्नलिंगवर परिणाम करणार नाही. हे देखील शक्य आहे की सीबी₁आर सिग्नलिंगचा आधारभूत-फॉसब अभिव्यक्तीद्वारे माफक प्रमाणात वर्धित केला जातो, जसे की पुढे फॉस्फ अभिव्यक्ती वाढवणे किंवा actionscJun सह त्याच्या क्रिया अवरोधित करणे यास अगदी थोडासा प्रभाव पडला जो सांख्यिकीय महत्त्व पातळीवर पोहोचला नाही. या व्याख्यासाठी अप्रत्यक्ष समर्थन WIN55,212-2 EC ची तुलना करून पाहिले जाऊ शकते₅₀ icecJun विरूद्ध -FosB व्यक्त करणार्‍या उंदरांच्या दरम्यानची मूल्ये. WIN55,212-2 EC चे गुणोत्तर₅₀ उंदरामध्ये Jडेनिल सायक्लेज इनहिबिशनचे मूल्य त्याच्या ईसीवर जॉनच्या प्रेरित अभिव्यक्तीसह₅₀ iceफोसबीच्या प्रेरित अभिव्यक्तीसह उंदीरांमधील जी-प्रोटीन सक्रियतेचे मूल्य एक्सएनयूएमएक्स होते, तर कोणत्याही प्रकारच्या ट्रान्सजेनला प्रेरण न घेता उंदीरमधील समान प्रमाण एक्सएनयूएमएक्स होते.

वैकल्पिकरित्या, कॅनॅबिनॉइड्स सीबीवर कोणताही थेट परिणाम न घेता एफओएसबी अभिव्यक्तीस प्रेरित करतात₁आर सिग्नलिंग. या परिस्थितीत, कॅनाबिनॉइड्स drugsफोसबी-मध्यस्थित ट्रान्सक्रिप्शनल रेगुलेशनद्वारे इतर औषधांच्या मनोविकृत प्रभावांबद्दल प्रतिसाद कमी करू शकतात. मीn खरं तर, प्रशासन⁹-टीएचसी ओपिओइड्स आणि अँफेटॅमिनला क्रॉस-सेन्सिटिझेशन तयार करते (कॅडोनी, इत्यादि., एक्सएनयूएमएक्स, लामारक, इत्यादि., एक्सएनयूएमएक्स), या कल्पनेसह सुसंगत. शिवाय, कॅनाबिनॉइड अ‍ॅगोनिस्ट सीपीएक्सएनयूएमएक्सच्या वारंवार कारभारामुळे एनएसीमध्ये एमओआर-मध्यस्थी जी-प्रोटीन सक्रियण वाढवले गेले आहे, तसेच सध्याच्या अभ्यासामध्ये उंदरांना inducably ΔFosB व्यक्त करणे (विगनो, इत्यादि., एक्सएनयूएमएक्स). OsFosB अभिव्यक्तीचा प्रभाव Δ⁹-टीएचसी-मध्यस्थतेच्या वर्तनांचे मूल्यांकन केले गेले नाही, परंतु सद्यपरिणामांमध्ये परस्परसंवादाचे परिणाम घडत नाहीत. याचा आणि आमच्या मागील अभ्यासाचा निकाल (जखवारी, वगैरे., एक्सएनयूएमएक्स) स्ट्रायटममध्ये एमओआर आणि केओआर / डायनॉरफिनमधील फॉसब-प्रेरित बदल दर्शवा. The चे फायद्याचे परिणाम⁹-टीएचसी, स्थानाच्या पसंतीनुसार मोजल्याप्रमाणे, एमओआर शून्य उंदीरमध्ये संपुष्टात आणले जाते, तर केओआर हटविण्यामुळे ten⁹-टीएचसी स्थान प्रतिकार आणि उघड Δ⁹-टीएचसी स्थान प्राधान्य (घोझलँड, इत्यादि., एक्सएनयूएमएक्स). त्याचप्रमाणे, कंडिशनिंग प्लेस अवर्स Δ⁹-टीएचसी वन्य-प्रकारच्या उंदरांच्या तुलनेत प्रो-डायरोफिन नॉकआउटमध्ये अनुपस्थित आहेझिम्मर, इत्यादि., एक्सएनयूएमएक्स). हे डेटा असे सूचित करतात की Δ⁹-फोसबी इंडक्शन नंतर डीओरोफिन अभिव्यक्तीतील कपातसह एमओआर सिग्नलिंगच्या परिणामी टीटीसी अधिक फायद्याचे असू शकते.

समर मध्येy, या अभ्यासाच्या निकालांनी डी मधील फोसबीची अभिव्यक्ती दर्शविली₁आर / डायरोफिन पॉझिटिव्ह स्ट्रायटल न्यूरॉन्स ने एनएसीमध्ये enडेनिल सायक्लेज क्रियाकलाप रोखण्यासाठी जी-प्रोटीन मध्यस्थी रोख पातळीवर एमओआर आणि केओआर-मध्यस्थीय सिग्नलिंग वर्धित केले. हा शोध अभ्यासाशी सुसंगत आहे ज्याने बक्षिसामध्ये अंतर्जात ओपिओइड सिस्टमची भूमिका दर्शविली आहे (ट्रायगो, इट अल., एक्सएनयूएमएक्स) प्रदान करते आणि पुरस्कारावरील osफोसबी-मध्यस्थी प्रभावांसाठी संभाव्य यंत्रणा प्रदान करते. याउलट सीबी₁एनएसीमधील आर-मध्यस्थीय सिग्नलिंगची तपासणी केलेल्या शर्तींनुसार स्ट्रायटल Δफोसबी अभिव्यक्तीवर लक्षणीय परिणाम झाला नाही, तरीही एंडोकॅनाबिनॉइड सिस्टमवरील Δ फॉसबी प्रेरणेचा प्रभाव निश्चित करण्यासाठी पुढील अभ्यासांची हमी दिलेली आहे.

संशोधन ठळक वैशिष्ठे

एमओएस सिग्नलिंग iceFosB व्यक्त करणार्‍या उंदरांच्या मध्यवर्ती भागांमध्ये वाढविली जाते
Osफोसबी एक्सप्रेस करणार्‍या उंदीरमध्ये enडिनिल सायक्लेजचा के.ओ.आर. प्रतिबंध थांबविला जातो
एफओएसबीचे अभिव्यक्ती सीबीला बदलत नाही₁मध्यवर्ती भागातील आर सिग्नलिंग

जा:

पुरवणी साहित्य

01

पाहण्यासाठी येथे क्लिक करा.^{(45K, पीडीएफ)}

जा:

प्रतिदाने

लेखक हेन्ग्जुन हे, जॉर्डन कॉक्स आणि अ‍ॅरॉन तोमरचिओ यांचे तांत्रिक सहकार्याबद्दल [³⁵एस] जीटीपीचे बंधनकारक अ‍ॅसेज या अभ्यासाचे यूएसपीएचएस अनुदान डॅक्सन्यूम्एक्स (एलजेएस), डीएक्सएनयूएमएक्स (डीईएस) आणि पीएक्सएनयूएमएक्स डॅक्सन्यूम्क्स (ईजेएन) यांनी समर्थित केले.

जा:

तळटीप

प्रकाशकांचे अस्वीकरण: ही एक अप्रबंधित पांडुलिपिची एक पीडीएफ फाइल आहे जी प्रकाशनासाठी स्वीकारली गेली आहे. आमच्या ग्राहकांना सेवा म्हणून आम्ही हस्तलिखिताची ही प्रारंभिक आवृत्ती प्रदान करीत आहोत. पांडुलिपिची प्रतिलिपी, टाइपसेटिंग आणि परिणामस्वरूपी पुराव्याचे पुनरावलोकन त्याच्या शेवटच्या उल्लेखनीय फॉर्ममध्ये प्रकाशित होण्याआधी होईल. कृपया लक्षात घ्या की उत्पादन प्रक्रियेदरम्यान त्रुटी आढळल्या जाऊ शकतात जी सामग्रीवर परिणाम करू शकते आणि जर्नलवर लागू असलेल्या सर्व कायदेशीर अस्वीकरणांमुळे.

जा:

संदर्भ

बोझर्थ एमए, वाइस आरए. ऍनाटॉमिकली वेगळी ओपिअट रिसेप्टर फील्ड्स मध्यस्थ इनाम आणि शारीरिक निर्भरता. विज्ञान 1984;224: 516-517 [PubMed]
ब्रॅडफोर्ड एमएम. प्रथिने डाई बंधनकारक तत्त्वाचा वापर करून मायक्रोग्राम प्रमाणात प्रोटीनच्या मात्रा निश्चित करण्यासाठी एक जलद आणि संवेदनशील पद्धत. गुदद्वार. बायोकेम. 1976;72: 248-254 [PubMed]
ब्रेव्होजेल सीएस, चाइल्डर्स एसआर, डेडवॉयलर एसए, हॅम्पसन आरई, व्होग्ट एलजे, सिम-सेले एलजे. तीव्र डेल्टा⁹-टेराहायड्रोकाॅनाबिनाल ट्रीटमेंटमुळे मेंदूमध्ये कॅनाबिनॉइड रिसेप्टर-एक्टिवेटेड जी-प्रोटीनची वेळ-अवलंबून नुकसान होते. जे. न्युरोकाहेम. 1999;73: 2447-2459 [PubMed]
ब्रेव्होजेल सीएस, सेले डीई, चाइल्डर्स एसआर. उत्तेजक साठी कॅनाबिनॉइड रीसेप्टर onगोनिस्ट कार्यक्षमता [³⁵एस] उंदीर सेरेबेलर झिल्लीचे जीटीपीचे बंधन जीडीपीच्या संबंधात agगोनिस्ट-प्रेरित घट कमीशी संबंधित आहे. जे. बोल रसायन 1998;273: 16865-16873 [PubMed]
डेल्टा एक्सएनयूएमएक्स-टेट्राहायड्रोकाबॅनिओल आणि मॉर्फिनसह क्रॉस-सेन्सेटिटायझेशनच्या वारंवार संपर्कानंतर कडोनी सी, पिसानू ए, सॉलिनास एम, quक्वास ई, दि चियारा जी. वर्तनासंबंधी संवेदनशीलता. सायकोफर्माकोलॉजी (बर्ल) 2001;158: 259-266 [PubMed]
कॅडोनी सी, व्हॅलेंटीनी व्ही, दि चियारा जी. डेल्टा एक्सएनयूएमएक्स-टेट्राहायड्रोकाबॅनिनॉल आणि मॉर्फिनसह क्रॉस-सेन्सेटिटायझेशन ते वर्तणूक संवेदनशीलता: अ‍ॅक्टंबल शेल आणि कोर डोपामाइन ट्रान्समिशनमध्ये भिन्न बदल. जे. न्युरोकाहेम. 2008;106: 1586-1593 [PubMed]
चेन जे, केलझ एमबी, झेंग जी, सकाई एन, स्टीफन सी, शॉकेट पीई, पिकिओओट्टो एमआर, दुमान आरएस, नेस्लेर ईजे. मेंदूत inducible, लक्ष्यित जनुक अभिव्यक्ति असलेले ट्रान्सजेनिक प्राणी. मोल फार्माकॉल 1998;54: 495-503 [PubMed]
चाइल्डर्स एसआर. ओपिओइड रीसेप्टर-जोडीदार दुसरा मेसेंजर. जीवन विज्ञान 1991;48: 1991-2003 [PubMed]
चाइल्डर्स एसआर, फ्लेमिंग एल, कोंकॉय सी, मार्केल डी, पाचेको एम, सेक्स्टन टी, वार्ड एस. ओपिओइड आणि कॅनॅबिनॉइड रिसेप्टर मेंदूमध्ये enडेनिल सायक्लेझचा प्रतिबंध. एन. न्यू यॉर्क अकादमी विज्ञान 1992;654: 33-51 [PubMed]
चाइल्डर्स एसआर, जिओ आर, व्होग्ट एलजे, सिम-सेले एलजे. कप्पा ओपिओइड रिसेप्टर उत्तेजना [³⁵एस] गिनी पिग ब्रेनमध्ये जीटीपीचे बंधनकारक: कप्प्याचा पुरावा नसणे₂जी-प्रथिने निवडक सक्रियता. बायोकेम फार्माकोल 1998;56: 113-120 [PubMed]
क्लार्क एस, झिम्मर ए, झिम्मर एएम, हिल आरजी, किचन आय. प्रदेश निवडक सूक्ष्म-, डेल्टा- आणि कप्पा-ओपिओइड रिसेप्टर्सचे एनकेफेलिन आणि डायनाफिन नॉकआऊट उंदराच्या मेंदूत ओपिओइड रिसेप्टर-सारख्या एक्सएनयूएमएक्स रिसेप्टर्सचे निवड-अप-नियमन. न्युरोसायन्स 2003;122: 479-489 [PubMed]
कोल्बी सीआर, व्हिस्लर के, स्टीफन सी, नेस्लर ईजे, सेल्फ डीडब्ल्यू. डेल्टाफॉसबीच्या स्ट्रायटल सेल प्रकार-विशिष्ट ओव्हरएक्सप्रेसमुळे कोकेनसाठी प्रोत्साहन वाढते. जे. न्युरोसी. 2003;23: 2488-2493 [PubMed]
गार्डनर ईएल. एंडोकॅनाबिनॉइड सिग्नलिंग सिस्टम आणि मेंदूत बक्षीस: डोपामाइनवर जोर. फार्माकॉल बायोकेम Behav 2005;81: 263-284 [PubMed]
घोजलँड एस, मॅथस एचडब्ल्यू, सायमोनिन एफ, फिलिओल डी, किफर बीएल, मालडोनाडो आर. कॅनाबिनॉइड्सचा प्रेरक प्रभाव म्यू-ओपिओइड आणि कप्पा-ओपिओइड रिसेप्टर्सद्वारे मध्यस्थ केला जातो. जे. न्युरोसी. 2002;22: 1146-1154 [PubMed]
हेरकेनहॅम एम, लिन एबी, जॉन्सन एमआर, मेलव्हिन एलएस, डी कोस्टा बीआर, राईस केसी. उंदीर मेंदूत कॅनाबिनॉइड रिसेप्टर्सचे वैशिष्ट्यीकरण आणि स्थानिकीकरण: व्हिट्रो ऑटोरॅडियोग्राफिक अभ्यासाचे एक परिमाण जे. न्युरोसी. 1991;11: 563-583 [PubMed]
होहमन एजी, हर्केनहॅम एम. लोकूलायझेशन ऑफ कॅनाबिनॉइड सीबी (एक्सएनयूएमएक्स) रिसेप्टर एमआरएनए न्यूरोनल उपसमूहात उंदीर स्ट्रॅटियम: सिटू हायब्रीडायझेशन अभ्यासाचे एक दुहेरी-लेबल. समक्रमित करा. 2000;37: 71-80 [PubMed]
हॉलेट एसी, बर्थ एफ, बोनर टीआय, कॅब्रल जी, कॅस्लास पी, देवणे डब्ल्यूए, फेडर सीसी, हेरकेनहॅम एम, मॅकी के, मार्टिन बीआर, मेचौलम आर, पर्टवी आरजी. आंतरराष्ट्रीय औषधनिर्माणशास्त्र. XXVII. कॅनाबिनोइड रिसेप्टर्सचे वर्गीकरण. औषधनिर्माणशास्त्र पुनरावलोकन. 2002;54: 161-202
हूएस्टिस एमए, गोरेलिक डीए, हीशमन एसजे, प्रेस्टन केएल, नेल्सन आरए, मूलचन ईटी, फ्रँक आरए सीबीएक्सएनयूएमएक्स-सिलेक्टीव्ह कॅनाबिनोइड रिसेप्टर अँटिगोनिस्ट एसआरएक्सएनयूएमएक्सद्वारे स्मोक्ड गांजाच्या प्रभावांचे नाकेबंदी. कमान. जनरल मनोचिकित्सा 2001;58: 322-328 [PubMed]
केल्झ एमबी, चेन जे, कारलेझॉन डब्ल्यू, जूनियर, व्हिस्लर के, गिल्डन एल, बेकमन एएम, स्टीफन सी, झांग वाईजे, मारोटी एल, सेल्फ डीडब्लू, टचॅच टी, बरानौकस जी, सरमीयर डीजे, नेव्ह आरएल, डूमन आरएस, पिससिओटो एमआर, नेस्लर ईजे. मेंदूतील ट्रान्सक्रिप्शन घटक डेल्टाफॉसबी अभिव्यक्ती कोकेनची संवेदना नियंत्रित करते. निसर्ग 1999;401: 272-276 [PubMed]
कोओब जीएफ, व्होल्को एनडी. व्यसन च्या न्युरोसायकर्स न्यूरोसायचिफोराकॉलॉजी 2010;35: 217-238 [पीएमसी मुक्त लेख] [PubMed]
डेल्टा (एक्सएनयूएमएक्स) -टीट्राहायड्रोकाबॅबिनॉल सह लॅमरक एस, टॅग्झूटी के, सायमन एच. क्रोनिक ट्रीटमेंट ampम्फॅटामाइन आणि हेरोइनसाठी लोकोमोटर प्रतिसाद वाढवते. मादक पदार्थांच्या व्यसनाधीनतेसाठी असणारे परिणाम. न्यूरोफर्माकोलॉजी 2001;41: 118-129 [PubMed]
माल्डोनाडो आर, व्हॅल्व्हर्डे ओ, बेरेन्डेरो एफ. ड्रग्सच्या व्यसनामध्ये एंडोकॅनाबिनोइड सिस्टमचा समावेश. ट्रेन्ड न्युरोसी 2006;29: 225-232 [PubMed]
मन्सूर ए, फॉक्स सीए, थॉम्पसन आरसी, अकील एच, वॅटसन एसजे. उंदीर सीएनएस मधील म्यू-ओपिओइड रिसेप्टर एमआरएनए अभिव्यक्ति: एमयू-रिसेप्टर बंधनकारक सह तुलना. ब्रेन रिज. 1994;643: 245-265 [PubMed]
मॅथ्स एचडब्ल्यूडी, मालदोनाडो आर, सायमोनिन एफ, वाल्व्हर्डे ओ, स्लो एस, किचन आय, बेवर्ट के, डेरिच ए, लेमूर एम, डोले पी, तझावरा ई, हॅनॉने जे, रोक्स बीपी, कीफर बीएल. मॉर्फिन-प्रेरित analनाल्जेसिया नष्ट होणे, उंदीरांमधील प्रतिफळ प्रभाव आणि पैसे काढण्याची लक्षणे symptoms-ओपिओइड रिसेप्टर जनुक नसतात. निसर्ग 1996;383: 819-823 [PubMed]
मॅकक्लंग सीए, नेस्लर ईजे. सीआरबी आणि डेल्टाफॉसबी द्वारे जीन अभिव्यक्ती आणि कोकेन पुरस्काराचे नियमन. नॅट न्यूरोसी 2003;6: 1208-1215 [PubMed]
मॅकक्लंग सीए, एलरी पीजी, पेरोटी ली, जॅचिरो व्ही, बर्टन ओ, नेस्लर ईजे. डेल्टाफॉसबी: मेंदूतील दीर्घकालीन अनुकूलतेसाठी आण्विक स्विच. ब्रेन रेस. मोल ब्रेन रेस. 2004;132: 146-154 [PubMed]
मुलर डीएल, अनटरवाल्ड ईएम. डीएक्सएनएक्सएक्स डोपामाइन रिसेप्टर्स मध्यवर्ती मॉर्फीन प्रशासनानंतर चूहा स्ट्रायटममध्ये डेल्टाफॉसबी इंडेक्शनची रचना करतात. जे. फार्माकोल कालबाह्य थ्र. 2005;314: 148-154 [PubMed]
नेस्लर ईजे. पुनरावलोकन व्यसन च्या ट्रान्सक्रिप्शन पद्धती: डेल्टाफॉसबीची भूमिका. फिलॉस ट्रान्स आर. सो. लंडन बी. बायोल. विज्ञान 2008;363: 3245-3255 [पीएमसी मुक्त लेख] [PubMed]
नेस्लर ईजे, केल्झ एमबी, चेन जे. डेल्टाफॉसबी: दीर्घकालीन न्यूरल आणि वर्तनात्मक प्लास्टीसीटीचा आण्विक मध्यस्थ. ब्रेन रिज. 1999;835: 10-17 [PubMed]
नेई हे, होप बीटी, केल्झ एमबी, इदारोला एम, नेस्लर ईजे. स्ट्रायटम आणि न्यूक्लियस ऍक्समंबन्समध्ये कोकेन द्वारे पुरेशी एफओएस-संबंधित एंटीजन इंजेक्शनच्या नियमन संबंधी औषधी अभ्यास. जे. फार्माकोल कालबाह्य थ्र. 1995;275: 1671-1680 [PubMed]
पीकमॅन एमसी, कोल्बी सी, पेरोटी ली, टेकमुल्ला पी, कार्ले टी, उलेरी पी, चाओ जे, डमन सी, स्टीफन सी, मोंटेगीया एल, अॅलन एमआर, स्टॉक जेएल, डूमन आरएस, मॅकनीश जेडी, बॅरोट एम, सेल्फ डीडब्ल्यू, नेस्लर ईजे , स्फेफर ई. इन्ड्यूसिबल, ट्रान्सजेनिक चूह्यात सी-जूनच्या प्रभावी नकारात्मक उत्परिवर्तनातील मेंदू क्षेत्र-विशिष्ट अभिव्यक्ती कोकेनची संवेदनशीलता कमी करते. ब्रेन रिज. 2003;970: 73-86 [PubMed]
पेरोटीआय एलआय, वीव्हर आरआर, रॉबिसन बी, रुन्थल डब्ल्यू, मेझे I, याझदानी एस, एलमोर आरजी, नॅप डीजे, सेले डे, मार्टिन बीआर, सिम-सेले एल, बॅचेल आरके, सेल्फ डीडब्ल्यू, नेस्लर ईजे. गैरवर्तन करणार्या औषधांद्वारे मेंदूच्या डेल्टा फॉस्बीच्या अंतर्भागाची नमुने. समक्रमित करा. 2008;62: 358-369 [पीएमसी मुक्त लेख] [PubMed]
रॉबे डी, onलोन्सो जी, डचॅम्प एफ, बोकॅर्ट जे, मंजोनी ओजे. माऊस न्यूक्लियस accक्म्बन्सच्या ग्लूटामेटरॅजिक सिंनाप्सवर कॅनाबिनॉइड रिसेप्टर्सच्या क्रियेचे स्थानिकीकरण आणि यंत्रणा. जे. न्युरोसी. 2001;21: 109-116 [PubMed]
सालोमन वाय. Enडेनाइट सायकल क्लास. अ‍ॅड. चक्रीय न्यूक्लियोटाइड रेस. 1979;10: 35-55 [PubMed]
सेले डीई, सिम एलजे, जिओ आर, लिऊ क्यू, चाइल्डर्स एसआर. म्यू ओपिओइड रिसेप्टर-उत्तेजित [³⁵एस] उंदीर थॅलॅमस आणि सुसंस्कृत सेल लाईनमध्ये जीटीपीचे बंधनकारक: अ‍ॅगोनिस्ट कार्यक्षमतेच्या अंतर्भूत असलेल्या सिग्नल ट्रान्सडक्शन यंत्रणे. मोल फार्माकॉल 1997;51: 87-96 [PubMed]
ट्रायगो जेएम, मार्टिन-गार्सिया ई, बेरेंडरो एफ, रोबॅल्डो पी, मालडोनॅडो आर. अंतर्जात ओपिओइड सिस्टमः मादक पदार्थांच्या व्यसनातील एक सामान्य सब्सट्रेट. ड्रग अल्कोहोल अवलंबून. 2010;108: 183-194 [PubMed]
अनटरवल्ड ईएम, कॅनॅप सी, झुकिन आरएस. उंदीर आणि गिनी पिग ब्रेनमध्ये एक्सएएनएमएक्स आणि κ एक्सएनयूएमएक्स ओपिओइड रिसेप्टर्सचे न्यूरोआनाटॉमिकल स्थानिकीकरण. ब्रेन रिज. 1991;562: 57-65 [PubMed]
व्हॅककरिनो एफजे, ब्लूम एफई, कोओब जीएफ. न्यूक्लियस ऍक्सेम्न्स ऑफीएट रिसेप्टर्सच्या नाकातून उंदीरमध्ये अनाकलनीय हेरॉईन पुरस्काराचे प्रमाण वाढते. सायकोफर्माकोलॉजी (बर्ल) 1985;86: 37-42 [PubMed]
कॅग्नॅबिनोइड आणि ओपिओइड सिस्टम दरम्यान असममित संवादामध्ये सामील विग्नो डी, रुबीनो टी, व्हॅकानी ए, बियानचेसी एस, मार्मोरॅटो पी, कॅस्टिग्लिओनी सी, पारोलारो डी. आण्विक यंत्रणा. सायकोफर्माकोलॉजी (बर्ल) 2005;182: 527-536 [PubMed]
झचिरू व्ही, बोलानोस सीए, सेलेली डी, दॉबॉल्ड डी, कॅसिडी एमपी, केल्झ एमबी, शॉ-लचमॅन टी, बर्टन ओ, सिम-सेले एलजे, डिलेओन आरजे, कुमार ए, नेस्लर ईजे. न्यूक्लियसमध्ये डेल्टाफॉसबी साठी मॉर्फिन अॅक्शनमध्ये एक महत्वाची भूमिका आहे. नॅट न्यूरोसी 2006;9: 205-211 [PubMed]
झेंजेन ए, सॉलिनास एम, आयकेमोटो एस, गोल्डबर्ग एसआर, वाईज आरए कॅनाबिनोइड बक्षीससाठी दोन मेंदू साइट जे. न्युरोसी. 2006;26: 4901-4907 [PubMed]
झु जे, लुओ एलवाय, ली जेजी, चेन सी, लिऊ-चेन एलवाय. अ‍ॅगोनिस्ट्सद्वारे क्लोन केलेल्या मानवी कप्पा ओपिओइड रिसेप्टरचे सक्रियकरण जीटीपीच्या झिल्लीचे बंधन वाढवते: लिगॅन्ड्सची क्षमता आणि कार्यक्षमता निश्चित करते. जे. फार्माकोल कालबाह्य थ्र. 1997;282: 676-684 [PubMed]
झिमर ए, वाल्जेन्ट ई, कोनिग एम, झिम्मर एएम, रोबॅल्डो पी, ह्हान एच, वाल्वर्डे ओ, मालडोनॅडो आर. डेल्टाची अनुपस्थिती-एक्सएनयूएमएक्स-टेट्राहाइड्रोकाबॅनिबोल डायस्फोरिक इफेक्ट डायरोफिन-कमतर उंदीरमध्ये. जे. न्युरोसी. 2001;21: 9499-9505 [PubMed]
झिमर ए, झिम्मर एएम, होहमन एजी, हेरकेनहॅम एम, बोननर टीआय. कॅनाबिनॉइड सीबीएक्सएनयूएमएक्स रिसेप्टर नॉकआऊट उंदीरांमधील वाढलेली मृत्यु दर, हायपोएक्टिव्हिटी आणि हायपोआल्जेसिया. प्रो. नॅटल अॅकॅड विज्ञान संयुक्त राज्य 1999;96: 5780-5785 [पीएमसी मुक्त लेख] [PubMed]