Livelli ta ’Espressjoni ta’ MicroRNA Assoċjati mad-Disturb tal-Logħob ta ’l-Internet (2018)

. 2018; 9: 81.

Ippubblikat fuq l-internet 2018 Mar 12. doi:  10.3389 / fpsyt.2018.00081

PMCID: PMC5858605

PMID: 29593587

Astratt

Sfond

L-użu tal-vizzju tal-Internet u l-logħob onlajn huwa disturb psikjatriku potenzjali msejjaħ Internet gaming disorder (IGD). Profili ta' espressjoni ta' microRNA (miRNA) mibdula ġew irrappurtati fid-demm u fit-tessut tal-moħħ ta' pazjenti b'ċerti disturbi psikjatriċi u ssuġġeriti bħala bijomarkaturi. Madankollu, ma kien hemm l-ebda rapporti dwar profili miRNA tad-demm fl-IGD.

Metodi

Biex niskopru miRNAs assoċjati ma 'IGD, analiznajna l-profili ta' espressjoni ta 'miRNA ta' 51 kampjun (25 IGD u 26 kontroll) bl-użu ta 'TaqMan Low Density miRNA Array. Għall-validazzjoni, wettaqna PCR ta 'traskrizzjoni inversa kwantitattiva b'36 kampjun indipendenti (20 IGD u 16 kontrolli).

Riżultati

Permezz ta 'skoperta u validazzjoni indipendenti, identifikajna tliet miRNAs (hsa-miR-200c-3p, hsa-miR-26b-5p, hsa-miR-652-3p) li kienu rregolati b'mod sinifikanti fil-grupp IGD. Individwi bit-tliet alterazzjonijiet tal-miRNA kellhom riskju ferm ogħla ta 'IGD minn dawk mingħajr tibdil [odds ratio (OR) 22, 95% CI 2.29-211.11], u l-ORs żiedu d-doża b'mod dipendenti man-numru ta' miRNAs mibdula. Il-ġeni fil-mira mbassra tat-tliet miRNAs kienu assoċjati ma 'mogħdijiet newrali. Aħna esplorajna l-espressjoni tal-proteini tat-tliet ġeni fil-mira downstream permezz tal-western blot u kkonfermajna li l-espressjoni ta 'GABRB2 u DPYSL2 kienet ogħla b'mod sinifikanti fil-grupp IGD.

konklużjoni

Aħna osservajna li espressjonijiet ta 'hsa-miR-200c-3p, hsa-miR-26b-5p, u hsa-miR-652-3p kienu regolati 'l isfel fil-pazjenti IGD. Ir-riżultati tagħna se jkunu ta 'għajnuna biex nifhmu l-patofiżjoloġija tal-IGD.

keywords: Disturb tal-logħob fuq l-internet, mikroRNA, bijomarkatur, vizzju, western blot

introduzzjoni

L-użu dipendenti fuq l-Internet u l-logħob ibbażat fuq l-Internet mhuwiex biss fenomenu soċjali f’pajjiżi b’infrastruttura estensiva ta’ aċċess għall-Internet, iżda disturb psikjatriku potenzjali msejjaħ Internet gaming disorder (IGD) (-). Skont rapporti epidemjoloġiċi, ir-rati ta' prevalenza ta' IGD fl-adolexxenti jvarjaw bejn il-pajjiżi, li jvarjaw minn 0.8 sa 26.7% (). B'mod partikolari, studji juru rati ta' prevalenza 'l fuq minn 10% fl-adolexxenti f'ħafna pajjiżi Asjatiċi bħall-Korea t'Isfel, iċ-Ċina, it-Tajwan, Ħong Kong, u Singapor (). IGD huwa assoċjat ma 'indeboliment fil-konjizzjoni, relazzjonijiet psiko-soċjali, u l-ħajja ta' kuljum; pereżempju, tnaqqis fil-prestazzjoni akkademika jew okkupazzjonali (-). L-IGD issa hija inkluża fit-Taqsima III (Kundizzjonijiet għal Studju Aktar) tal-ħames reviżjoni tal-Manwal Dijanjostiku u Statistiku tad-Disturbi Mentali (DSM-V) (). Madankollu, minkejja l-importanza kliniko-soċjali tagħha, ftit hu magħruf dwar il-mekkaniżmu ġenetiku molekulari wara IGD.

Studji reċenti fuq tewmin fuq skala kbira ssuġġerew sfond ġenetiku għall-IGD (, ). Vink et al. investiga d-differenzi individwali fl-użu kompulsiv tal-Internet ma’ 5,247 tewmin adolexxenti monozigotiċi u diżigotiċi fir-Reġistru tat-Tewmin ta’ l-Olanda u rrapporta li 48% tad-differenzi kienu spjegati minn fatturi ġenetiċi (). Li et al. osserva 825 par tewmin adolexxenti Ċiniżi u rrapporta li fatturi ġenetiċi spjegaw 58-66% tad-differenzi (). Għaldaqstant, il-polimorfiżmi tal-ġeni involuti fin-newrotrażmissjoni, il-konjizzjoni u l-attenzjoni bħall-ġene D2 tar-riċettur tad-dopamina (DRD2), ġene tal-catecholamine-O-methyltransferase (COMT), ġene trasportatur tas-serotonin (5HTTLPR), u l-ġene nikotiniku alfa 4 tar-riċettur kolinerġiku (CHRNA4) ġew irrappurtati li huma assoċjati b'mod sinifikanti mal-vizzju tal-Internet (-). Riċentement, Kim et al. varjanti skrinjati ta’ aktar minn 100 ġeni kandidati relatati mal-produzzjoni, l-azzjoni, u l-metaboliżmu ta’ newrotrażmettituri permezz ta’ analiżi ta’ sekwenzar tal-ġenerazzjoni li jmiss u rrapportaw li rs2229910 ta’ NTRK3 ġene huwa assoċjat ma 'IGD ().

Minbarra l-fatturi ġenetiċi, huwa magħruf ukoll li l-fenotipi newroimġieba huma kkontrollati epiġenetikament minn RNAs mhux kodifikanti inklużi microRNAs (miRNAs) (, ). Il-miRNAs huma molekuli żgħar ta' RNA single-stranded li ma jikkodifikawx (madwar 20-23 nukleotide fit-tul), li jirregolaw b'mod negattiv l-espressjoni ta' ġeni li jikkodifikaw il-proteini billi jiddegradaw l-mRNAs u għandhom rwol kritiku fil-proċess patofiżjoloġiku ta' diversi mard (). Linji ta’ evidenza wrew li l-miRNAs huma abbundanti fis-sistema nervuża ċentrali tal-bniedem (CNS) u jaġixxu biex jirfinaw il-livelli ta’ espressjoni tal-ġeni fil-mira tagħhom, li huma involuti fl-iżvilupp u l-maturazzjoni tas-sistema tas-CNS (). Tabilħaqq, studji reċenti wrew li l-profili tal-espressjoni tal-miRNA jinbidlu fit-tessut tal-moħħ ta 'pazjenti b'disturbi psikjatriċi, li jissuġġerixxu li l-profili tal-espressjoni tagħhom jistgħu jkunu bijomarkaturi għal disturbi psikjatriċi (, , ). Per eżempju, permezz ta 'analiżi postmortem, Lopez et al. irrapporta li l-espressjoni ta 'miR-1202, li tirregola l-espressjoni tal-ġene metabotropic glutamate receptor-4 u tbassar ir-rispons għall-antidipressant, kienet regolata 'l isfel fit-tessuti tal-kortiċi prefrontali ta' pazjenti b'disturb ta 'depressjoni maġġuri (). F'termini ta 'screening tal-bijomarkaturi, dan l-approċċ għandu limitazzjoni ċara għaliex it-twettiq ta' bijopsija tat-tessut tas-CNS għall-iskrinjar huwa impossibbli. Peress li l-miRNAs jistgħu jiġu skoperti fid-demm (plażma jew serum), il-miRNAs li jiċċirkolaw għandhom vantaġġ definit bħala bijomarkaturi mhux invażivi f'disturbi newropsikjatriċi. Madankollu, sal-lum, ma kien hemm l-ebda studju dwar iċ-ċirkolazzjoni tal-profili miRNA fl-IGD. Fehim aħjar tal-profili tal-espressjoni miRNA li jiċċirkolaw jista 'jgħin biex jiċċara l-mekkaniżmu tal-iżvilupp tal-IGD u jiffaċilita t-traduzzjoni klinika.

F'dan l-istudju, immirajna li nidentifikaw markaturi ta 'miRNA assoċjati ma' IGD billi nosservaw miRNAs tal-plażma espressi b'mod differenzjat bejn l-IGD u l-gruppi ta 'kontroll u esplorajna l-implikazzjonijiet bijoloġiċi tagħhom.

Materjali u Metodi

Suġġetti ta' Studju

Stħarrejna 3,166 żagħżugħ (ta’ bejn it-12 u t-18-il sena) bl-użu tal-punteġġ DSM-V IGD. Fosthom, 251 (168 raġel u 83 mara) ġew iddijanjostikati bħala IGD skont il-kriterji DSM-V (). Total ta' 91 individwu (49 IGD u 42 kontroll) ipprovdew il-kunsens infurmat għal dan l-istudju. Fosthom, erba’ individwi ġew esklużi skont il-kriterji ta’ esklużjoni. Fl-aħħarnett, 87 individwu (45 suġġett IGD u 42 individwu ta 'kontroll b'saħħtu) ġew irreġistrati għal dan l-istudju. Fosthom, 51 parteċipant (25 pazjent IGD u 26 kontroll) ġew reklutati bħala s-sett ta 'skoperta mill-2014 sal-2016. Is-36 parteċipant l-oħra (20 pazjent IGD u 16-il kontroll) ġew reklutati bħala s-sett ta' validazzjoni indipendenti mill-2016. Il-parteċipanti kollha kienu Koreani individwi, irreġistrati mill-Isptar Seoul St. Mary's (Seoul, Korea t'Isfel) u Seoul National University Boramae Hospital (Seoul, Korea t'Isfel). Il-parteċipanti kollha għaddew minn intervista strutturata minn psikjatra bbażata fuq l-Iskeda Koreana Kiddie għal Disturbi Affettivi u Skizofrenija (K-SADS-PL) (). Il-parteċipanti kollha lestew is-subtests tad-Disinn tal-Blokk u l-Vokabularju tal-Iskala tal-Intelliġenza Koreana-Wechsler għat-Tfal, ir-4 edizzjoni (K-WISC-IV) (). L-impulsività ġew evalwati mill-Iskala tal-Impulsività Barratt (BIS) (). Ġew imkejla l-iskali tas-Sistema ta' Inibizzjoni tal-Imġieba (BInS) u tas-Sistema ta' Attivazzjoni tal-Imġieba (BAS) biex tiġi vvalutata d-dimensjoni tal-personalità (). Il-kriterji ta’ esklużjoni kienu jinkludu disturbi mediċi maġġuri tal-passat jew attwali (eż., dijabete mellitus), disturb newroloġiku (eż., disturbi ta’ aċċessjoni, korriment fir-ras), disturbi psikjatriċi (eż., disturbi depressivi maġġuri, disturbi ta’ ansjetà), ritardament mentali, jew kwalunkwe abbuż minn sustanzi (eż. , tabakk, kannabis, alkoħol). Il-karatteristiċi ġenerali tas-suġġetti tal-istudju huma miġbura fil-qosor fit-Tabella Table1.1. Dan l-istudju ġie approvat mill-Bord ta 'Reviżjoni Istituzzjonali tal-Kulleġġ Mediku tal-Università Kattolika tal-Korea (MC16SISI0120). Il-parteċipanti kollha u l-ġenituri tagħhom taw il-kunsens infurmat bil-miktub.

Tabella 1

Karatteristiċi ġenerali tas-suġġetti ta 'studju.

 DiscoveryvalidazzjoniMagħquda
 
 KontrollIGDP-valurKontrollIGDP-valurKontrollIGDP-valur
N2625 1620 4245 
Età (snin)
Medjan (min–max)13 (12 - 17)13 (12 - 15)0.75915 (13 - 18)14.5 (12 - 18)0.62814 (12 - 18)14 (12 - 18)0.509
Sigħat ta' logħob tal-Internet ta' kull ġimgħa (h)
Medjan (min–max)5.25 (2 - 17)18 (6 - 46)1.27E−6a5.5 (2 - 23)8 (1 - 112)0.3745.5 (2 - 23)14 (1 - 112)1.63E−5a
Dħul ta' kull xahar tal-familja (miljun KRW)
Medjan (min–max)5 (1 - 9)3 (1 - 9)0.5884 (4 - 4)2 (2 - 2)1.0005 (1 - 9)3 (1 - 9)0.460
Edukazzjoni (snin)
Medjan (min–max)8 (7 - 9)8 (7 - 9)0.58412 (12 - 12)6 (6 - 13)0.3058 (7 - 12)8 (6 - 13)0.269
K-WISC: disinn tal-blokki
Medjan (min–max)10.5 (4 - 17)10 (4 - 16)0.54410 (3 - 16)12.5 (4 - 15)0.12510 (3 - 17)11 (4 - 16)0.598
K-WISC: vokabularju
Medjan (min–max)9 (5 - 17)7 (5 - 13)0.1749.5 (8 - 15)11.5 (5 - 15)0.5959 (5 - 17)9 (5 - 15)0.527
KS
Medjan (min–max)24 (17 - 36)37 (22 - 51)3.81E−6a29 (17 - 34)59 (22 - 108)1.2E−5a25 (17 - 36)40 (22 - 108)2.05E−10a
BIS
Medjan (min–max)63 (35 - 75)67.5 (45 - 81)0.08061 (45 - 79)63 (32 - 82)0.83562 (35 - 79)65 (32 - 82)0.240
BAS
Medjan (min–max)31 (15 - 40)31 (13 - 51)0.55836.5 (22 - 48)34 (27 - 52)1.00032 (15 - 48)34 (13 - 52)0.637
BnS
Medjan (min–max)18 (10 - 26)17.5 (13 - 27)0.64218.5 (12 - 25)20 (13 - 21)0.13818 (10 - 26)19 (13 - 27)0.302
 

IGD, pazjenti b'disturbi tal-logħob tal-Internet; KS, Skala Koreana ta 'Proneness ta' Dipendenza fuq l-Internet; BIS, Barratt Impulsivity Scale; BAS, Sistema ta' Attivazzjoni tal-Imġieba; BInS, Sistema ta' Inibizzjoni tal-Imġieba; KRW, Won Korean.

aP < 0.05 (Test Mann–Whitney–Wilcoxon).

TaqMan ta 'densità baxxa miRNA Array (TLDA) Esperimenti

Inġabar demm periferali minn kull parteċipant u ttrasferit għal-laboratorju fi żmien 4 sigħat biex jimminimizza l-liżi taċ-ċelluli tad-demm. Il-kampjun ġie ċentrifugat fi 3,000 rpm għal 10 min f'temperatura tal-kamra. Imbagħad, is-supernatant (saff tal-plażma) inġabar mingħajr ma kkontamina ċ-ċelluli tad-demm. MiRNAs li jiċċirkolaw ġew estratti bl-użu ta 'TaqMan miRNA ABC Purification Kit (Human Panel A; Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) skont l-istruzzjoni tal-manifattur. Fil-qosor, tħalltu 50 µL ta' kampjun tal-plażma u 100 µL ta' buffer ABC. Wara l-ibridizzazzjoni bi żibeġ manjetiċi anti-miRNA speċifiċi għall-mira, miRNAs li jiċċirkolaw illimitati ġew elużi miż-żibeġ b'100 µL ta 'buffer ta' elużjoni. Fil-fażi ta 'skoperta, ġew eżaminati 381 miRNAs minn 51 kampjun tal-plażma (25 IGDs u 26 kontroll) bl-użu tal-Kit ta' Purifikazzjoni TaqMan miRNA ABC (Human Panel A; Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) skont l-istruzzjonijiet tal-manifattur. Twettqu reazzjonijiet ta 'traskrizzjoni inversa u pre-amplifikazzjoni Megaplex biex tiżdied il-kwantità ta' cDNA għall-analiżi tal-espressjoni ta 'miRNA bl-użu ta' MegaplexPreAmp Primers Human Pool A u TaqManPreAmp Master Mix (Thermo Fisher Scientific). Il-pannell TLDA A v2.0 (Thermo Fisher Scientific) tħaddem fuq is-sistema PCR f'ħin reali ViiA7 (Thermo Fisher Scientific) biex jevalwa l-espressjoni tal-miRNAs. Id-dejta mhux ipproċessata ġiet ipproċessata bl-użu tas-Software ExpressionSuite v1.0.4 (Thermo Fisher Scientific) biex jiġu ddeterminati l-valuri Ct għal kull miRNA.

Analiżi tad-Dejta għal TLDA

L-ewwel imkejla ċikli ta 'limitu (valur Ct) ta' kull miRNA. miRNAs b'valur Ct > 35 kienu kkunsidrati bħala li ma jistgħux jinstabu u esklużi mill-analiżi sussegwenti. Il-valuri Ct kollha ġew normalizzati għall-valur Ct ta 'miR-374b (valur ΔCt), wieħed mill-miRNAs espressi b'mod stabbli li jiċċirkolaw fil-plażma umana (). Proporzjon ta' bidla log2 (il-valur ΔΔCt) ta' espressjoni ġie kkalkulat bl-użu ta' valuri medji ta' kampjuni ta' kontroll bħala kalibratur fil-pakkett HTqPCR f'Bijokonduttur (). Il-kwantifikazzjoni relattiva (RQ) ta 'kull mira miRNA kienet definita bħala 2−ΔΔCt. Għall-ittestjar ipotetiku tad-differenza fl-espressjoni bejn żewġ gruppi, applikajna analiżi varjabbli surrogata (SVA) biex naqbdu eteroġeneitajiet bħall-effetti tal-lott fl-esperimenti bl-użu tal- sva pakkett fil-Bijokonduttur (). miRNAs b'a P-valur <0.05 tqiesu li huma differenti b'mod sinifikanti bejn żewġ gruppi.

Analiżi ta' Arrikkiment tas-Sett tal-Ġene

Għall-analiżi tal-arrikkiment tas-sett tal-ġeni, użajna ToppFun f'ToppGene Suite () biex tiddeduċi Ontoloġija tal-Ġene (GO) arrikkita b'mod sinifikanti () termini, passaġġ, u termini tal-mard. Bħala l-input għal dan l-approċċ, użajna 1,230 ġeni fil-mira mbassra tal-miRNAs kandidati. Analiżi tal-mogħdija ntużat biex jinstabu mogħdijiet sinifikanti tal-ġeni fil-mira mbassra skont KEGG, BioCarta, Reactome, GeneMAPP, u MSigDBin il-mogħdijiet ToppGene. Is-sinifikat tat-termini ta' arrikkiment funzjonali ġie ddeterminat abbażi tal-aġġustament ta' Bonferroni P-valur.

Validazzjoni u Replikazzjoni Kwantitattiva ta' Traskrizzjoni Reverse PCR (qRT-PCR).

Biex jiġu vvalidati l-10 miRNAs li ġew espressi b'mod differenzjali fl-istadju tal-iskoperta, qRT-PCR twettqet bl-użu tat-TaqMan MicroRNA Assay (miR-15b-5p, #000390; miR-26b-5p, #000407; miR-29b-3p, # 000413; miR-125b-5p, #000449; -200p, #3; u miR-002300-337p, #5) u s-sistema ViiA002156 (Life Technologies) skont il-protokoll tal-manifattur. Għaxar nanogrammi ta 'RNA totali ġew ikkonvertiti għal cDNA ta' l-ewwel linja b'primers speċifiċi għal miRNA bl-użu ta 'TaqMan MicroRNA Reverse Transcription Kit (#411, Life Technologies), segwit minn PCR f'ħin reali b'TaqMan Probes. L-RQ ta 'kull miRNA kien definit bħala 5−ΔCt, fejn ΔCt hija d-differenza fiċ-ċikli tal-limitu għall-kampjun inkwistjoni, normalizzat kontra l-miRNA endoġenu (miR-374b-5p, #001319). Ir-reazzjonijiet PCR kollha twettqu fi tliet kopji, u l-valuri Ct tagħhom ġew medjati. Aħna kkalkolajna log2 fold-change ratio (ΔΔCt) ta 'kull miRNA bl-istess mod bħal fl-analiżi bbażata fuq array. Twettaq test Mann–Whitney–Wilcoxon mhux parametriku biex jiġu ttestjati d-differenzi fil-livelli ta’ espressjoni ta’ miRNAs f’żewġ gruppi b’limitu P-valur ta '0.05.

Analiżi tal-Blot tal-Punent

Kull kampjun tas-serum l-ewwel kien eżawrit mill-aqwa 14-il proteina b'abbundanza għolja (albumina, immunoglobulina G, immunoglobulina A, serotransferrin, haptoglobin, alpha-1 antitrypsin, fibrinogen, alpha-2 makroglobulina, alpha-1 acid glycoprotein, immunoglobulina M, apolipoprotein AI , apolipoprotein A-II, komplement C3, u transthyretin) bl-użu tal-kolonna MARS-14 (4.6 × 50 mm, Agilent Technology, Santa Clara, CA, USA) qabel l-analiżi tal-western blot. Il-frazzjoni mhux marbuta miksuba mill-kolonna MARS-14 kienet ikkonċentrata bl-użu ta 'filtru ċentrifugali Amicon Ultracel-3 (cutoff ta' 3 kDa), u mbagħad il-konċentrazzjoni tal-proteina ġiet iddeterminata bl-użu tal-metodu tal-aċidu bicinchoninic. L-istess ammonti (minn 10 sa 30 µg) ta 'kampjuni ta' serum ta 'kontroll u IGD ġew separati fuq ġel precast Mini-PROTEAN TGX 4-20% (Bio-Rad, CA, USA) u trasferiti għal membrana polyvinylidene difluoride. Sussegwentement, il-membrana ġiet imblukkata f'TBS-T (190 mM NaCl, 25 mM Tris–HCl, pH 7.5, u 0.05% Tween 20) b'5% ħalib niexef mingħajr xaħam f'temperatura tal-kamra għal 30 min. Il-membrani mbagħad ġew inkubati b'antikorpi primarji kontra DPYSL2 (1:500, Novus Biologicals, Littleton, CO, USA), GABRB2 (1:1000, Abcam, Cambridge, MA, USA), u CNR1 (1:100, Santa Cruz Biotechnology). , Inc., Santa Cruz, CA, USA), DUSP4 (1:500, MybioSource, San Diego, CA, USA), u PI15 (1:500, MybioSource, San Diego, CA, USA) f'TBS-T b'5 % ħalib xott bla xaħam f'4°C matul il-lejl, u mbagħad b'antikorpi sekondarji xierqa jew bovini kontra l-ġurdien (1:1,000, Santa Cruz Biotechnology) jew mogħoż kontra l-fenek (1:1,000, Cell Signaling, Beverly, MA, USA ) konjugat ma' perossidasi tar-ravanell f'temperatura tal-kamra għal siegħa. Is-sejbien tas-sinjali saru bl-użu ta 'kimiluminixxenza b'reaġent ECL (GE healthcare, Piscataway, NJ, USA). Aħna kkwantifikajna r-riżultati tal-western blot bl-użu tas-softwer ta 'analiżi TotalLab 1D (Dynamics mhux lineari, Newcastle upon Tyne, UK). Imbagħad, il-valur tal-proporzjon tad-densitometrija ġie kkalkulat billi jiġi diviż il-valur tad-densitometrija ta 'kull kampjun kif deskritt x'imkien ieħor (). Bħala kontroll għan-normalizzazzjoni, kampjun tas-serum miġbur minn 46 IGD u kampjuni ta 'kontroll intuża għal kull esperiment. Is-sinifikat statistiku ġie determinat bl-użu ta' test Mann–Whitney–Wilcoxon mhux parametriku b'limitu P-valur ta '0.05.

Riżultati

Karatteristiċi tas-Suġġetti ta' Studju

Il-karatteristiċi demografiċi u kliniċi tas-suġġetti tal-istudju huma murija fit-Tabella Table1.1. Meta qabbilna l-IGD u l-gruppi ta 'kontroll skont l-Iskala Koreana ta' Pronezza għall-Vizzju tal-Internet (K-Skala) kif deskritt band'oħra (, ), il-grupp IGD wera valur K-Scale medjan sinifikament ogħla mill-grupp ta 'kontroll (37 vs 24, P = 3.81 × 10-6) (Tabella ​(Tabella 1).1). Il-ħin medjan ta' kull ġimgħa mqatta' fuq il-logħob tal-Internet fil-grupp IGD kien itwal b'mod sinifikanti minn dak tal-kontrolli (18 vs. 5.25 h, P = 1.27 × 10-6). Billi ma kien hemm l-ebda differenza sinifikanti bejn żewġ gruppi fl-età, id-dħul fix-xahar tal-familja, it-tul tal-edukazzjoni, id-disinn tal-blokki, u r-riżultati tas-sottotest tal-vokabularju tal-K-WISC, BIS, BInS, u BAS.

MiRNAs Espressi b'mod differenti Bejn IGD u Kontrolli

Biex niskopru miRNAs assoċjati ma 'IGD, adottajna approċċ f'żewġ stadji (skoperta u validazzjoni indipendenti). Id-disinn tal-istudju u l-istrateġija ġenerali huma illustrati fil-Figura S1 f'Materjal Supplimentari. Fl-istadju ta 'skoperta, aħna analizzajna profili ta' espressjoni ta 'miRNA ta' 51 kampjun (25 IGDs u 26 kontroll) bl-użu tal-firxa miRNA li fiha 384 miRNAs. Il-livelli ta' espressjoni ta' 10 miRNAs instabu li kienu differenti b'mod sinifikanti bejn l-IGD u l-gruppi ta' kontroll (Tabella ​(Tabella 2).2). Livelli ta 'espressjoni relattiva ta' dawn l-10 miRNAs huma murija fil-Figura Figura1.1. Fosthom, tnejn (hsa-miR-423-5p u hsa-miR-483-5p) ġew regolati 'l fuq u tmienja (hsa-miR-15b-5p, hsa-miR-26b-5p, hsa-miR-29b-3p, hsa-miR-125b-5p, hsa-miR-200c-3p, hsa-miR-337c-5p, hsa-miR-411-5p, u hsa-miR-652-3p) kienu downregolati fil-grupp IGD.

Tabella 2

MicroRNAs espressi b'mod differenzjali (miRNAs) u bidliet darbiet.

miRNADiscoveryvalidazzjoniMagħquda
 
 P-valurItwi bidlaP-valurItwi bidlaP-valurItwi bidla
hsa-miR-15b-5p0.0330.8290.6941.1190.3810.947
hsa-miR-26b-5pa0.0080.8710.0490.8410.0130.857
hsa-miR-29b-3p0.0050.4000.5601.1870.0890.647
hsa-miR-125b-5p0.0210.5820.2900.9500.0690.723
hsa-miR-200c-3pa0.0110.3360.0030.5422.93 × 10-50.415
hsa-miR-337c-5p0.0090.3850.5820.8720.0200.553
hsa-miR-411-5p0.0040.3220.3361.2820.1580.595
hsa-miR-423-5p0.0261.3870.1890.9550.5181.175
hsa-miR-483-5p0.0181.8610.7651.4130.2111.647
hsa-miR-652-3pa0.0190.7150.0490.8770.0110.782
 

amiRNAs mibdula b'mod sinifikanti kemm fis-settijiet ta 'skoperta kif ukoll ta' validazzjoni b'mod konsistenti.

 

Fajl estern li jkollu stampa, illustrazzjoni, eċċ Isem ta 'l-oġġett huwa fpsyt-09-00081-g001.jpg

Livelli ta 'espressjoni relattiva ta' 10 miRNAs espressi b'mod differenzjali. Kwantifikazzjoni relattiva (RQ) ġiet normalizzata għal miR-374b-5p.

qRT-PCR Validazzjoni tal-miRNAs Kandidati

Biex nivvalidaw l-10 miRNAs kandidati, wettaqna qRT-PCR b'sett ta 'validazzjoni indipendenti (20 IGDs u 16-il kontroll) (Tabella S1 f'Materjal Supplimentari). Tlieta minn dawn il-miRNAs (hsa-miR-200c-3p, hsa-miR-26b-5p, u hsa-miR-652-3p) kienu rregolati b'mod sinifikanti fil-grupp IGD tas-sett ta' validazzjoni (Tabella ​(Tabella 2).2). Tliet miRNAs oħra (hsa-miR-337c-5p, hsa-miR-125b, u hsa-miR-423-5p) kienu wkoll irregolati fil-grupp IGD iżda mhux b'mod sinifikanti. Erba 'miRNAs li jifdal (hsa-miR-15b-5p, hsa-miR-29b-3p, hsa-miR-411-5p, u hsa-miR-423-5p) ġew espressi b'mod oppost fis-sett ta' validazzjoni. Meta kkombinajna s-settijiet ta' skoperta u validazzjoni (total ta' 45 suġġett IGD u 42 kontroll), it-tliet miRNAs validati kienu sinifikanti b'mod konsistenti (Tabella ​(Tabella 2).2). Informazzjoni dettaljata, postijiet kromosomali, sekwenzi maturi, u livelli ta 'espressjoni fis-CNS ta' dawn it-tliet miRNAs huma disponibbli fit-Tabella S2 f'Materjal Supplimentari.

Effett Sinerġistiku ta 'Alterazzjoni Simultanja tat-Tliet miRNAs fuq Riskju IGD

Biex nevalwaw l-effett kombinat tat-tliet miRNAs, osservajna l-odds ratios (ORs) tal-erba 'sottogruppi (b'0, 1, 2, jew 3 alterazzjonijiet tal-miRNA). L-alterazzjoni tal-miRNA kienet definita mill-valur RQ kif deskritt fit-Taqsima "Materjali u Metodi.” Minħabba li t-tliet markaturi tal-miRNAs kienu regolati 'l isfel fil-grupp IGD, miRNA li l-valur RQ tiegħu kien taħt wieħed ġie sfidat bħala wieħed mibdul. Informazzjoni dettaljata tal-valur RQ ta 'kull suġġett ta' studju għat-tliet miRNAs hija disponibbli fit-Tabella S3 f'Materjal Supplimentari. Għal kull sottogrupp, l-odds ġew ikkalkulati bħala l-proporzjon tan-numru ta 'kontrolli għal dak ta' IGDs, imbagħad kull OR ġie kkalkulat billi diviż l-odds ta 'kull sottogrupp b'odds tas-sottogrupp mingħajr ebda alterazzjoni tal-miRNA. Individwi bi tliet alterazzjonijiet tal-miRNA wrew riskju 22 darba ogħla minn dawk mingħajr ebda alterazzjoni tal-miRNA (OR 22, 95% CI 2.29-211.11). L-ORs wrew xejra dejjem tiżdied bin-numru ta’ miRNAs mibdula minn 0 sa 3 (r2 = 0.996) (Figura (Figura22).

Fajl estern li jkollu stampa, illustrazzjoni, eċċ Isem ta 'l-oġġett huwa fpsyt-09-00081-g002.jpg
Odds ratios (ORs) skond in-numru ta' markaturi ta' mikroRNA regolati 'l isfel (miRNA). Valuri 'l fuq mill-istimi tal-punti huma l-ORs (intervall ta' kunfidenza ta' 95%).

GO u Pathway Analysis of Target Genes of the Kandidati miRNAs

Biex tikseb għarfien dwar il-funzjonijiet tat-tliet markaturi miRNA regolati b'mod sinifikanti fil-grupp IGD, il-ġeni fil-mira tagħhom kienu mbassra bl-użu tad-database miRWalk 2.0 (). Total ta’ 1,230 ġene kienu mbassra b’mod konsistenti bħala miri downstream minn erba’ algoritmi (miRWalk, miRanda, RNA22, u Targetscan) bl-użu tad-database miRWalk (-) (Tabella S4 f'Materjal Supplimentari). Analiżi ta 'arrikkiment tas-sett tal-ġeni bl-użu ta' ToppFun f'ToppGene Suite uriet li l-ġeni fil-mira ta 'dawk il-miRNAs kienu assoċjati b'mod sinifikanti ma' mogħdijiet ta 'żvilupp newrali bħal "gwida Axon" u termini GO bħal "newroġenesi" (Tabella S5 f'Materjal Supplimentari).

Espressjoni tal-Ġeni tal-Mira Mbassra

Fost il-ġeni fil-mira downstream tat-tliet miRNAs, 140 kienu mbassra simultanjament għal żewġ miRNAs jew aktar (Tabella S4 f'Materjal Supplimentari). Biex tesplora jekk il-livelli tal-espressjonijiet tal-proteini tagħhom tal-ġeni fil-mira downstream humiex differenti bejn l-IGD u l-gruppi ta 'kontroll, għażilna 2 ġeni (DUSP4 u, PI15), li huma mbassra bħala miri downstream tat-3 miRNAs kollha u t-3 ġeni addizzjonali (GABRB2, DPYSL2, u CNR1) minn dawk imbassra għal 2 miRNAs u wettqu analiżi tal-western blot bil-kampjuni tal-plażma minn 28 IGDs u 28 kontroll disponibbli għall-esperiment. Aħna qabblu l-espressjonijiet tal-ħames miri bejn l-IGD u l-gruppi ta 'kontroll billi kejlu l-intensità tal-medda u l-erja kif deskritt x'imkien ieħor (). Fosthom, il-livelli ta' espressjoni ta' DPYSL2 (28 IGDs u 28 kontroll, P = 0.0037) u GABBR2 (27 IGD u 28 kontroll, P = 0.0052) kienu ogħla b'mod sinifikanti fil-grupp IGD (Figura (Figura3) .3). Madankollu, ma stajniex nosservaw espressjonijiet differenzjali ta 'CNR1 (P = 0.0853), DUSP4 (P = 0.5443), u PI15 (P = 0.6346).

 

Fajl estern li jkollu stampa, illustrazzjoni, eċċ Isem ta 'l-oġġett huwa fpsyt-09-00081-g003.jpg

Western blot immaġini u box-dot-plots li juru l-espressjoni ta (A) DPYSL2 u (B) GABRB2. Kemm il-proteini DPYSL2 kif ukoll GABRB2 wrew differenzi sinifikanti fil-livelli ta’ espressjoni tagħhom bejn id-disturb tal-logħob tal-Internet (IGD) u l-kampjuni ta’ kontroll (P-valur <0.05). Iż-żewġ proteini ġew espressi f'livelli ogħla fil-kampjuni IGD.

Diskussjoni

Ġie rrappurtat li l-miRNAs huma involuti fl-iżvilupp newronali (, ), u l-espressjoni differenzjali tal-miRNAs tal-moħħ huma osservati f'mard psikjatriku bħall-iskiżofrenja (). Għalhekk, huwa plawsibbli li l-profili miRNA li jiċċirkolaw jistgħu jkunu bijomarkaturi utli għall-IGD. MiRNAs li jiċċirkolaw ġew ssuġġeriti bħala bijomarkaturi għal diversi disturbi newropsikjatriċi (-); madankollu, il-mekkaniżmi molekulari wara l-iżvilupp IGD għadhom fil-biċċa l-kbira mhux magħrufa minkejja l-importanza klinika u soċjali tagħha. Speċifikament, ma kien hemm l-ebda studju dwar miRNAs assoċjati ma 'IGD. L-għan ta' dan l-istudju kien doppju. L-ewwel, ippruvajna niskopru miRNAs tal-plażma assoċjati ma 'IGD. It-tieni, aħna evalwajna l-implikazzjoni bijoloġika tal-kandidati tal-miRNA billi nesploraw l-espressjoni tal-proteini u GO ta 'ġeni fil-mira downstream. Permezz ta’ screening mal-ġenoma kollu tal-profili tal-espressjoni tal-miRNA u l-validazzjoni downstream tal-kandidati, skoprejna li l-espressjoni ta’ tliet miRNAs (hsa-miR-200c-3p, hsa-miR-26b-5p, u hsa-miR-652-3p) kienet inqas b'mod sinifikanti f'pazjenti IGD mill-kontrolli. Għalkemm il-mudelli ta 'espressjoni ta' seba 'kandidati miRNA oħra ma ġewx replikati fil-validazzjoni, jista' jkun negattiv falz minħabba d-daqs żgħir tal-kampjun f'dan l-istudju. Sa fejn nafu, dan huwa l-ewwel rapport dwar il-possibbiltà li l-profili tal-espressjoni tal-miRNA tad-demm jistgħu jkunu bijomarkaturi utli għall-IGD. Il-kombinazzjoni tat-tliet markaturi tal-miRNA tista 'sservi bħala għodda minimament invażiva għall-identifikazzjoni bikrija ta' nies f'riskju ta 'IGD.

Il-miRNAs identifikati f'dan l-istudju ġew irrappurtati li huma involuti f'diversi disturbi newropsikjatriċi. L-espressjoni ta’ hsa-miR-200c fid-demm ġiet irrappurtata li hija rregolata 'l isfel f'diversi disturbi psikjatriċi bħall-iskiżofrenja () u episodji depressivi kbar (). miR-200c kien irrappurtat li kien espress b'mod aktar għoli fi frazzjonijiet sinaptiċi milli fil-forbrain totali () u wkoll li tkun assoċjata mal-mewt taċ-ċelluli newronali (). Ibbażat fuq dawn ir-rapporti preċedenti, miR-200c huwa involut fin-newrożvilupp u jista 'jkun assoċjat ma' disturbi newropsikjatriċi jekk l-espressjoni tiegħu tkun imfixkla. Diversi studji ssuġġerew assoċjazzjoni bejn miR-652 u r-riskju ta 'disturbi newropsikjatriċi. Simili għall-approċċ tagħna, biex jiġu identifikati bijomarkaturi tad-demm għall-iskiżofrenja, Lai et al. wettaq analiżi TLDA ma 'pazjenti bl-iskiżofrenja u kontrolli normali, u sabet li seba' miRNAs inkluż hsa-miR-652 kienu espressi b'mod differenzjali f'pazjenti bl-iskiżofrenja (). Fl-istudju sussegwenti, iddisinjaw mudell ta’ tbassir bl-użu tad-dejta tal-espressjoni tal-miRNA u ddistingwew b’suċċess l-iskiżofrenja mill-kontroll normali (). Espressjoni mibdula ta' hsa-miR-652 kienet osservata wkoll fl-alkoħoliċi (). Hsa-miR-26b instab li kien attivat waqt id-divrenzjar taċ-ċelluli newronali (). Perkins et al. irrapporta li hsa-miR-26b kien irregolat 'l isfel fil-kortiċi prefrontali ta' pazjenti bl-iskiżofrenja ().

Għalkemm m'hemm l-ebda evidenza diretta li tappoġġja r-relazzjoni bejn l-espressjoni mfixkla ta 'dawn il-miRNAs u l-patofiżjoloġija ta' IGD, nistgħu niddeduċu li d-disregolazzjoni ta 'dawn il-miRNAs tista' tkun assoċjata mal-patofiżjoloġija ta 'IGD ibbażata fuq diversi rapporti preċedenti dwar il-ġeni downstream li mbassajna. . Uħud mill-ġeni downstream tat-tliet miRNAs bħal GABRB2, CNR1, NRXN1, u DPYSL2 huma rrappurtati li huma assoċjati ma’ disturbi newropsikjatriċi. L-aċidu gamma-aminobutyric (GABA) huwa newrotrasmettitur inibitorju ewlieni fis-CNS. Ir-regolazzjoni ħażina tar-riċettur GABA, hija implikata f'disturbi newropsikjatriċi inklużi l-vizzju, l-ansjetà u d-dipressjoni (), li huma wkoll il-karatteristiċi ewlenin tal-IGD (). Polimorfiżmi ġenetiċi fil-ġeni tar-riċetturi GABA huma rrappurtati li huma assoċjati mal-vizzju tal-alkoħol u l-iskiżofrenja (, ). Dihydropyrimidinase-like 2 (DPYSL2) huwa membru tal-familja tal-proteini medjatur tar-rispons tal-collapsin, li għandu rwol fl-assemblaġġ tal-mikrotubuli, is-sinjalar sinaptiku u r-regolamentazzjoni tat-tkabbir assonali. Konsegwentement, din il-molekula ġiet ssuġġerita bħala bijomarkatur għal disturbi psikjatriċi (, ). Polimorfiżmu fil- DPYSL2 Ġie rrappurtat ukoll li l-ġene kien assoċjat ma’ disturb tal-użu tal-alkoħol (). Rapporti preċedenti u d-dejta tagħna jissuġġerixxu li l-espressjoni żejda ta 'GABRB2 u DPYSL2, miri downstream tal-miRNAs regolati 'l isfel, għandha implikazzjonijiet għall-patoġenesi ta' disturbi newropsikjatriċi inkluż IGD. Ir-riċettur tal-kannabinojdi tat-tip 1 (CNR1) huwa eteroriċettur presinaptiku li jimmodula r-rilaxx tan-newrotrasmettituri u t-tfixkil fis-sinjalar tal-kannabinojdi huma assoċjati ma' diversi disturbi newropsikjatriċi (). Polimorfiżmu ġenetiku ta' CNR1 Il-ġene huwa magħruf li huwa assoċjat mad-dipendenza minn sustanzi fil-Kawkasi (). F'mudell tal-far, l-attivazzjoni tal-ippokampus ventrali CNR1 tfixkel l-imġieba soċjali u l-konjizzjoni normali (). L-alterazzjoni ġenetika fil-familja NRXN hija magħrufa li hija involuta f'diversi disturbi newropsikjatriċi inkluż il-vizzju ().

Biex neżaminaw l-implikazzjoni bijoloġika tat-tliet kandidati miRNA b'mod aktar dirett, esplorajna l-espressjoni tal-proteini tal-ġeni fil-mira downstream tagħhom. Minħabba d-disponibbiltà limitata ta 'kampjuni tal-plażma, mill-140 kandidat komuni (bassra bħala downstream ta' 2 miRNAs jew aktar), aħna eżaminajna 5 miri (GABRB2, DPYSL2, CNR1, DUSP4, u PI15) bil-western blot u kkonfermajna dik l-espressjoni ta 'GABRB2 u DPYSL2 kien ogħla b'mod sinifikanti fil-grupp IGD. Rapporti preċedenti u d-dejta tagħna jissuġġerixxu li l-espressjoni żejda ta 'GABRB2 u DPYSL2, miri downstream tal-miRNAs regolati 'l isfel, jista' jkollhom implikazzjonijiet għall-patoġenesi ta 'disturbi newropsikjatriċi inkluż IGD. Ir-riżultati tal-GO u l-analiżi tal-mogħdijiet tal-mogħdijiet tal-iżvilupp newrali jappoġġjaw ukoll l-implikazzjoni newrobijoloġika tal-markaturi tal-miRNA. Sejba oħra interessanti kienet l-effett sinerġistiku ta 'alterazzjoni simultanja tal-miRNAs. Individwi b'regolazzjoni 'l isfel tat-3 miRNAs kollha wrew riskju 22 darba ogħla minn dawk mingħajr regolazzjoni 'l isfel, u l-ORs żdiedu b'mod dipendenti fuq id-doża. Għalkemm CI għal dawn it-tliet alterazzjonijiet kienu wiesgħa minħabba daqs limitat tal-kampjun, il-korrelazzjoni pożittiva ċara (r2 = 0.996) jappoġġja l-effett sinerġistiku tat-tliet miRNAs.

Għalkemm skoprejna l-markaturi tal-miRNA assoċjati mal-IGD u l-individwi bit-tliet alterazzjonijiet tal-miRNA kellhom riskju 22 darba ogħla minn dawk mingħajr ebda alterazzjoni tal-miRNA, hemm diversi limitazzjonijiet f'dan l-istudju. L-ewwel, id-daqs żgħir tal-kampjun żied il-probabbiltà li jonqsu markaturi ta 'miRNA sinifikanti oħra. It-tieni, peress li d-dejta tagħna ma kinitx biżżejjed biex tiċċara jekk il-profili tal-miRNA tal-plażma humiex kawża jew effett, ma nistgħux nikkonfermaw ir-rwoli bijoloġiċi ta 'dawn il-markaturi mhux invażivi f'ambjent kliniku. Aktar profili tal-miRNA u l-analiżi tal-ġeni downstream tagħhom bl-użu ta 'tessut tal-moħħ uman minn bank tat-tessut tal-moħħ jistgħu jagħtu tweġiba aktar diretta. Analiżi tat-tessut tal-moħħ b'mudell tal-annimali ta 'disturb tal-logħob ukoll tkun ta' għajnuna. It-tielet, minħabba d-disponibbiltà limitata ta 'kampjuni tal-plażma, eżaminajna biss ħames molekuli kandidati downstream. L-esplorazzjoni ta' aktar miri downstream b'sett ta' kampjuni akbar se tkun ta' għajnuna biex tifhem aktar il-mekkaniżmu molekulari tal-IGD.

Fil-qosor, permezz ta 'screening madwar il-ġenoma ta' profili ta 'espressjoni ta' miRNA u validazzjoni indipendenti, skoprejna tliet miRNAs assoċjati ma 'IGD (hsa-miR-200c-3p, hsa-miR-26b-5p, u hsa-miR-652-3p). Ħafna mill-ġeni downstream tagħhom huma rrappurtati li huma involuti f'disturbi newropsikjatriċi diversi, u l-validazzjoni sperimentali ta 'espressjoni mibdula ta' dawn il-ġeni downstream tappoġġja l-implikazzjoni tal-miRNAs identifikati f'dan l-istudju. Sibna li individwi b'regolazzjoni 'l isfel tat-tliet miRNA kollha huma f'riskju għoli ta' IGD. Flimkien mal-fatturi ta 'riskju kliniċi jew ambjentali magħrufa u l-kriterji dijanjostiċi, is-sejbiet tagħna jistgħu jiffaċilitaw intervent bikri biex jgħinu lin-nies f'riskju ogħla ta' IGD.

Dikjarazzjoni tal-Etika

Dan l-istudju ġie approvat mill-Bord ta 'Reviżjoni Istituzzjonali tal-Kulleġġ Mediku tal-Università Kattolika tal-Korea (MC16SISI0120). Il-parteċipanti kollha u l-ġenituri tagħhom taw il-kunsens infurmat bil-miktub.

Kontribuzzjonijiet tal-Awtur

ML u HC ikkontribwew b'mod ugwali għal dan id-dokument. ML, D-JK, u Y-JC iddisinjaw l-istudju. SJ, S-MC, YP, DC, u JL wettqu esperimenti u ġenerazzjoni tad-dejta. J-WC, S-HP, J-SC, u D-JK ġabru kampjuni tad-demm u informazzjoni klinika. Data analizzata ML, HC, S-HY, u Y-JC. ML, HC, S-HY, u Y-JC iddeskrivew il-manuskritt. Y-JC issorveljat il-proġett.

Dikjarazzjoni ta 'Kunflitt ta' Interess

L-awturi jiddikjaraw li r-riċerka saret fin-nuqqas ta 'kwalunkwe relazzjoni kummerċjali jew finanzjarja li tista' tinftiehem bħala kunflitt ta 'interess potenzjali.

Noti f'qiegħ il-paġna

 

Finanzjament. Dan ix-xogħol kien appoġġjat minn għotja mill-Programm tar-Riċerka tal-Moħħ permezz tal-Fondazzjoni Nazzjonali għar-Riċerka tal-Korea (NRF), iffinanzjata mill-Ministeru tax-Xjenza u l-ICT u l-Ippjanar tal-Futur (NRF-2015M3C7A1064778).

 

 

Materjal Supplimentari

Il-Materjal Supplimentari għal dan l-artikolu jinsab fuq l-internet http://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fpsyt.2018.00081/full#supplementary-material.

Referenzi

1. Żgħażagħ KS. Dipendenza fuq l-Internet: l-emerġenza ta 'disturb kliniku ġdid. Cyber ​​Psychol Behav (1998) 1(3):237–44.10.1089/cpb.1998.1.237 [Cross Ref]
2. Petry NM, Rehbein F, Ko CH, O'Brien CP. Disturb tal-logħob tal-Internet fid-DSM-5. Curr Psychiatry Rep (2015) 17(9):72.10.1007/s11920-015-0610-0 [PubMed] [Cross Ref]
3. Cho H, Kwon M, Choi JH, Lee SK, Choi JS, Choi SW, et al. Żvilupp tal-iskala tal-vizzju tal-Internet ibbażata fuq il-kriterji tad-disturb tal-logħob tal-Internet issuġġeriti f'DSM-5. Addict Behav (2014) 39(9):1361–6.10.1016/j.addbeh.2014.01.020 [PubMed] [Cross Ref]
4. Kuss DJ, Griffiths MD, Karila L, Billieux J. Vizzju tal-Internet: reviżjoni sistematika tar-riċerka epidemjoloġika għall-aħħar għaxar snin. Curr Pharm Des (2014) 20(25):4026–52.10.2174/13816128113199990617 [PubMed] [Cross Ref]
5. Park M, Choi JS, Park SM, Lee JY, Jung HY, Sohn BK, et al. Ipproċessar ta 'informazzjoni li ma jiffunzjonax waqt kompitu potenzjali relatat ma' avveniment tas-smigħ f'individwi b'disturb tal-logħob fuq l-Internet. Transl Psychiatry (2016) 6:e721.10.1038/tp.2015.215 [L-artikolu ħieles mill-PMC] [PubMed] [Cross Ref]
6. Lim JA, Lee JY, Jung HY, Sohn BK, Choi SW, Kim YJ, et al. Bidliet fil-kwalità tal-ħajja u l-funzjoni konjittiva f'individwi b'disturb tal-logħob tal-Internet: segwitu ta '6 xhur. Medicine (Baltimore) (2016) 95(50):e5695.10.1097/MD.0000000000005695 [L-artikolu ħieles mill-PMC] [PubMed] [Cross Ref]
7. van Rooij AJ, Van Looy J, Billieux J. Disturb tal-logħob tal-Internet bħala kostruzzjoni formattiva: implikazzjonijiet għall-kunċettwali u l-kejl. Psikjatrija Clin Neurosci (2016) 71(7):445–58.10.1111/pcn.12404 [PubMed] [Cross Ref]
8. Assoċjazzjoni Psikjatrika Amerikana, editur. , editur. Manwal Dijanjostiku u Statistiku ta 'Disturbi Mentali: DSM-5. 5th ed Arlington, VA: Assoċjazzjoni Psikjatrika Amerikana; (2013).
9. Vink JM, van Beijsterveldt TC, Huppertz C, Bartels M, Boomsma DI. L-ereditabbiltà tal-użu kompulsiv tal-Internet fl-adolexxenti. Addict Biol (2016) 21(2):460–8.10.1111/adb.12218 [L-artikolu ħieles mill-PMC] [PubMed] [Cross Ref]
10. Li M, Chen J, Li N, Li X. Studju doppju ta 'użu problematiku tal-internet: l-ereditabbiltà u l-assoċjazzjoni ġenetika tiegħu b'kontroll sforz. Twin Res Hum Genet (2014) 17(4):279–87.10.1017/thg.2014.32 [PubMed] [Cross Ref]
11. Han DH, Lee YS, Yang KC, Kim EY, Lyoo IK, Renshaw PF. Ġeni tad-dopamina u dipendenza tal-premju f'adolexxenti b'logħob eċċessiv tal-logħob tal-kompjuter fuq l-internet. J Addict Med (2007) 1(3):133–8.10.1097/ADM.0b013e31811f465f [PubMed] [Cross Ref]
12. Lee YS, Han DH, Yang KC, Daniels MA, Na C, Kee BS, et al. Dipressjoni bħal karatteristiċi ta 'polimorfiżmu 5HTTLPR u temperament f'utenti eċċessivi tal-internet. J Affect Disord (2008) 109(1–2):165–9.10.1016/j.jad.2007.10.020 [PubMed] [Cross Ref]
13. Montag C, Kirsch P, Sauer C, Markett S, Reuter M. Ir-rwol tal-ġene CHRNA4 fil-vizzju tal-Internet: studju ta 'kontroll tal-każ. J Addict Med (2012) 6(3):191–5.10.1097/ADM.0b013e31825ba7e7 [PubMed] [Cross Ref]
14. Kim JY, Jeong JE, Rhee JK, Cho H, Chun JW, Kim TM, et al. Sekwenzar tal-exome mmirat għall-identifikazzjoni ta 'varjant protettiv kontra d-disturb tal-logħob tal-Internet f'rs2229910 ta' riċettur newrotrofiku tat-tyrosine kinase, tip 3 (NTRK3): studju pilota. J Behav Addict (2016) 5(4):631–8.10.1556/2006.5.2016.077 [L-artikolu ħieles mill-PMC] [PubMed] [Cross Ref]
15. Issler O, Chen A. Determinazzjoni tar-rwol tal-microRNAs f'disturbi psikjatriċi. Nat Rev Neurosci (2015) 16(4):201–12.10.1038/nrn3879 [PubMed] [Cross Ref]
16. Kocerha J, Dwivedi Y, Brennand KJ. RNAs mhux kodifikanti u mekkaniżmi newrokomportamentali f'mard psikjatriku. Mol Psikjatrija (2015) 20(6):677–84.10.1038/mp.2015.30 [L-artikolu ħieles mill-PMC] [PubMed] [Cross Ref]
17. Ambros V. MicroRNAs: regolaturi ċkejkna b'potenzjal kbir. Cell (2001) 107(7):823–6.10.1016/S0092-8674(01)00616-X [PubMed] [Cross Ref]
18. Hollins SL, Cairns MJ. MicroRNA: medjaturi RNA żgħar tar-rispons ġenomika tal-imħuħ għall-istress ambjentali. Prog Neurobiol (2016) 143:61–81.10.1016/j.pneurobio.2016.06.005 [PubMed] [Cross Ref]
19. Lopez JP, Lim R, Cruceanu C, Crapper L, Fasano C, Labonte B, et al. miR-1202 huwa microRNA speċifiku għall-primati u arrikkit fil-moħħ involut f'trattament ta 'dipressjoni maġġuri u antidipressanti. Nat Med (2014) 20(7):764–8.10.1038/nm.3582 [L-artikolu ħieles mill-PMC] [PubMed] [Cross Ref]
20. Kim YS, Cheon KA, Kim BN, Chang SA, Yoo HJ, Kim JW, et al. L-affidabbiltà u l-validità ta 'kiddie-skeda għal disturbi affettivi u skizofrenija-preżenti u verżjoni ħajja Koreana verżjoni (K-SADS-PL-K). Yonsei Med J (2004) 45(1):81–9.10.3349/ymj.2004.45.1.81 [PubMed] [Cross Ref]
21. Kwak K, Oh S, Kim C. Manwal għall-Iskala Koreana tal-Intelliġenza Wechsler għat-Tfal-IV (K-WISC-IV)-Manwal. Seoul, il-Korea t'Isfel: Hakjisa; (2011).
22. Patton JH, Stanford MS, Barratt ES. Struttura tal-fatturi tal-Iskala tal-Impulsiveness Barratt. J Clin Psychol (1995) 51(6):768–74.10.1002/1097-4679(199511)51:6<768::AID-JCLP2270510607>3.0.CO;2-1 [PubMed] [Cross Ref]
23. Carver C, White TL. Inibizzjoni tal-imġieba, attivazzjoni tal-imġieba, u risponsi affettivi għal premju u kastig imminenti: l-iskali BIS/BAS. J Pers Soc Psychol (1994) 67(2):319–33.10.1037//0022-3514.67.2.319 [Cross Ref]
24. Weiland M, Gao XH, Zhou L, Mi QS. RNAs żgħar għandhom impatt kbir: mikroRNAs li jiċċirkolaw bħala bijomarkaturi għall-mard tal-bniedem. RNA Biol (2012) 9(6):850–9.10.4161/rna.20378 [PubMed] [Cross Ref]
25. Dvinge H, Bertone P. HTqPCR: analiżi ta' rendiment għoli u viżwalizzazzjoni ta' data PCR kwantitattiva f'ħin reali f'R. Bioinformatics (2009) 25(24):3325–6.10.1093/bioinformatics/btp578 [L-artikolu ħieles mill-PMC] [PubMed] [Cross Ref]
26. Leek JT, Sulari JD. Il-qbid ta' eteroġeneità fi studji dwar l-espressjoni tal-ġeni permezz ta' analiżi varjabbli surrogata. PLoS Genet (2007) 3(9):1724–35.10.1371/journal.pgen.0030161 [L-artikolu ħieles mill-PMC] [PubMed] [Cross Ref]
27. Chen J, Bardes EE, Aronow BJ, Jegga AG. Suite ToppGene għall-analiżi tal-arrikkiment tal-lista tal-ġeni u l-prijoritizzazzjoni tal-ġeni kandidati. Nucleic Acids Res (2009) 37 (ħarġa Web Server):W305–11.10.1093/nar/gkp427 [L-artikolu ħieles mill-PMC] [PubMed] [Cross Ref]
28. Ashburner M, Ball CA, Blake JA, Botstein D, Butler H, Cherry JM, et al. Ontoloġija tal-ġeni: għodda għall-unifikazzjoni tal-bijoloġija. Il-konsorzju tal-ontoloġija tal-ġeni. Nat Genet (2000) 25(1):25–9.10.1038/75556 [L-artikolu ħieles mill-PMC] [PubMed] [Cross Ref]
29. Cheon DH, Nam EJ, Park KH, Woo SJ, Lee HJ, Kim HC, et al. Analiżi komprensiva ta 'proteome tal-plażma umana ta' piż molekulari baxx bl-użu ta 'spettrometrija tal-massa minn fuq għal isfel. J Proteome Res (2016) 15(1):229–44.10.1021/acs.jproteome.5b00773 [PubMed] [Cross Ref]
30. Park CH, Chun JW, Cho H, Jung YC, Choi J, Kim DJ. Il-moħħ dipendenti fuq il-logħob fuq l-Internet huwa qrib li jkun fi stat patoloġiku? Addict Biol (2017) 22(1):196–205.10.1111/adb.12282 [PubMed] [Cross Ref]
31. Dweep H, Gretz N. miRWalk2.0: atlas komprensiv ta 'interazzjonijiet microRNA-mira. Nat Methods (2015) 12(8):697.10.1038/nmeth.3485 [PubMed] [Cross Ref]
32. Enright AJ, John B, Gaul U, Tuschl T, Sander C, Marks DS. MicroRNA miri fi Drosophila. Genome Biol (2003) 5(1):R1.10.1186/gb-2003-5-1-r1 [L-artikolu ħieles mill-PMC] [PubMed] [Cross Ref]
33. Miranda KC, Huynh T, Tay Y, Ang YS, Tam WL, Thomson AM, et al. Metodu bbażat fuq mudell għall-identifikazzjoni ta 'siti ta' rbit tal-mikroRNA u l-eteroduplexes korrispondenti tagħhom. Cell (2006) 126(6):1203–17.10.1016/j.cell.2006.07.031 [PubMed] [Cross Ref]
34. Lewis BP, Burge CB, Bartel DP. Tqabbil taż-żerriegħa kkonservat, ħafna drabi akkumpanjat minn adenosines, jindika li eluf ta 'ġeni umani huma miri tal-mikroRNA. Cell (2005) 120(1):15–20.10.1016/j.cell.2004.12.035 [PubMed] [Cross Ref]
35. Schratt GM, Tuebing F, Nigh EA, Kane CG, Sabatini ME, Kiebler M, et al. MicroRNA speċifiku għall-moħħ jirregola l-iżvilupp tas-sinsla dendritika. Nature (2006) 439(7074):283–9.10.1038/nature04367 [PubMed] [Cross Ref]
36. Sempere LF, Freemantle S, Pitha-Rowe I, Moss E, Dmitrovsky E, Ambros V. Profiling ta 'espressjoni ta' microRNAs mammiferi jikxef sottosett ta 'microRNAs espressi fil-moħħ b'rwoli possibbli fid-divrenzjar newronali murini u uman. Genome Biol (2004) 5(3):R13.10.1186/gb-2004-5-3-r13 [L-artikolu ħieles mill-PMC] [PubMed] [Cross Ref]
37. Beveridge NJ, Tooney PA, Carroll AP, Gardiner E, Bowden N, Scott RJ, et al. Disregolazzjoni ta 'miRNA 181b fil-kortiċi temporali fl-iskiżofrenja. Hum Mol Genet (2008) 17(8):1156–68.10.1093/hmg/ddn005 [PubMed] [Cross Ref]
38. Wei H, Yuan Y, Liu S, Wang C, Yang F, Lu Z, et al. Sejbien ta 'livelli ta' miRNA li jiċċirkolaw fl-iskiżofrenja. Am J Psychiatry (2015) 172(11):1141–7.10.1176/appi.ajp.2015.14030273 [PubMed] [Cross Ref]
39. Dwivedi Y. Applikazzjonijiet patoġenetiċi u terapewtiċi ta 'microRNAs f'disturb depressiv maġġuri. Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry (2016) 64:341–8.10.1016/j.pnpbp.2015.02.003 [L-artikolu ħieles mill-PMC] [PubMed] [Cross Ref]
40. Hara N, Kikuchi M, Miyashita A, Hatsuta H, Saito Y, Kasuga K, et al. Serum microRNA miR-501-3p bħala bijomarkatur potenzjali relatat mal-progressjoni tal-marda ta 'Alzheimer. Acta Neupathol Commun (2017) 5(1):10.10.1186/s40478-017-0414-z [L-artikolu ħieles mill-PMC] [PubMed] [Cross Ref]
41. Gardiner E, Beveridge NJ, Wu JQ, Carr V, Scott RJ, Tooney PA, et al. Ir-reġjun DLK1-DIO3 stampat ta '14q32 jiddefinixxi firma miRNA assoċjata mal-iskiżofrenja fiċ-ċelloli mononukleari tad-demm periferali. Mol Psikjatrija (2012) 17(8):827–40.10.1038/mp.2011.78 [L-artikolu ħieles mill-PMC] [PubMed] [Cross Ref]
42. Belzeaux R, Bergon A, Jeanjean V, Loriod B, Formisano-Treziny C, Verrier L, et al. Pazjenti li wieġbu u li ma rrispondewx juru firem traskrizzjoni periferali differenti matul episodju depressiv maġġuri. Transl Psychiatry (2012) 2:e185.10.1038/tp.2012.112 [L-artikolu ħieles mill-PMC] [PubMed] [Cross Ref]
43. Lugli G, Torvik VI, Larson J, Smalheiser NR. Espressjoni ta 'microRNAs u l-prekursuri tagħhom fi frazzjonijiet sinaptiċi ta' forebrain tal-ġurdien adulti.... J Neurochem (2008) 106(2):650–61.10.1111/j.1471-4159.2008.05413.x [L-artikolu ħieles mill-PMC] [PubMed] [Cross Ref]
44. Stary CM, Xu L, Sun X, Ouyang YB, White RE, Leong J, et al. MicroRNA-200c jikkontribwixxi għal korriment minn iskemija ċerebrali fokali temporanja billi jimmira r-reelin. Stroke (2015) 46(2):551–6.10.1161/STROKEAHA.114.007041 [L-artikolu ħieles mill-PMC] [PubMed] [Cross Ref]
45. Lai CY, Yu SL, Hsieh MH, Chen CH, Chen HY, Wen CC, et al. Aberrazzjoni ta 'espressjoni ta' MicroRNA bħala bijomarkaturi potenzjali tad-demm periferali għall-iskiżofrenja. PLoS One (2011) 6(6):e21635.10.1371/journal.pone.0021635 [L-artikolu ħieles mill-PMC] [PubMed] [Cross Ref]
46. ​​Lai CY, Lee SY, Scarr E, Yu YH, Lin YT, Liu CM, et al. Espressjoni aberranti ta 'microRNAs bħala bijomarkatur għall-iskiżofrenja: minn stat akut għal remissjoni parzjali, u minn demm periferali għal tessut kortikali. Transl Psychiatry (2016) 6:e717.10.1038/tp.2015.213 [L-artikolu ħieles mill-PMC] [PubMed] [Cross Ref]
47. Lewohl JM, Nunez YO, Dodd PR, Tiwari GR, Harris RA, Mayfield RD. Regolamentazzjoni 'l fuq ta' microRNAs fil-moħħ ta 'alkoħoliċi umani. Alcohol Clin Exp Res (2011) 35(11):1928–37.10.1111/j.1530-0277.2011.01544.x [L-artikolu ħieles mill-PMC] [PubMed] [Cross Ref]
48. Dill H, Linder B, Fehr A, Fischer U. Intronic miR-26b tikkontrolla d-differenzazzjoni newronali billi tirreprimi t-traskrizzjoni ospitanti tagħha, ctdsp2. Genes Dev (2012) 26(1):25–30.10.1101/gad.177774.111 [L-artikolu ħieles mill-PMC] [PubMed] [Cross Ref]
49. Perkins DO, Jeffries CD, Jarskog LF, Thomson JM, Woods K, Newman MA, et al. Espressjoni ta 'MicroRNA fil-kortiċi prefrontali ta' individwi bi skizofrenija u disturb skizoaffective. Genome Biol (2007) 8(2):R27.10.1186/gb-2007-8-2-r27 [L-artikolu ħieles mill-PMC] [PubMed] [Cross Ref]
50. Kumar K, Sharma S, Kumar P, Deshmukh R. Potenzjal terapewtiku ta 'ligandi tar-riċetturi GABA (B) fil-vizzju tad-droga, ansjetà, depressjoni u disturbi CNS oħra. Pharmacol Biochem Behav (2013) 110:174–84.10.1016/j.pbb.2013.07.003 [PubMed] [Cross Ref]
51. McCracken ML, Borghese CM, Trudell JR, Harris RA. Aċidu amminiku transmembrana fis-subunità beta2 tar-riċettur GABAA kritiku għall-azzjonijiet ta 'alkoħol u anestetiċi. J Pharmacol Exp Ther (2010) 335(3):600–6.10.1124/jpet.110.170472 [L-artikolu ħieles mill-PMC] [PubMed] [Cross Ref]
52. Zong L, Zhou L, Hou Y, Zhang L, Jiang W, Zhang W, et al. Regolamentazzjoni ġenetika u epiġenetika dwar it-traskrizzjoni ta 'GABRB2: idrossimetilazzjoni u alterazzjonijiet tal-metilazzjoni dipendenti mill-ġenotip fl-iskiżofrenja. J Psychiatr Res (2017) 88:9–17.10.1016/j.jpsychires.2016.12.019 [PubMed] [Cross Ref]
53. Fukata Y, Itoh TJ, Kimura T, Menager C, Nishimura T, Shiromizu T, et al. CRMP-2 jeħel ma' eterodimeri tat-tubulina biex jippromwovi l-assemblaġġ tal-mikrotubuli. Nat Cell Biol (2002) 4(8):583–91.10.1038/ncb825 [PubMed] [Cross Ref]
54. Kekesi KA, Juhasz G, Simor A, Gulyassy P, Szego EM, Hunyadi-Gulyas E, et al. Netwerks ta 'proteini funzjonali mibdula fil-kortiċi prefrontali u l-amigdala ta' vittmi ta 'suwiċidju. PLoS One (2012) 7(12):e50532.10.1371/journal.pone.0050532 [L-artikolu ħieles mill-PMC] [PubMed] [Cross Ref]
55. Taylor A, Wang KS. Assoċjazzjoni bejn il-polimorfiżmi tal-ġeni DPYSL2 u d-dipendenza fuq l-alkoħol f'kampjuni Kawkasi. J Neural Transm (Vjenna) (2014) 121(1):105–11.10.1007/s00702-013-1065-2 [PubMed] [Cross Ref]
56. Hua T, Vemuri K, Pu M, Qu L, Han GW, Wu Y, et al. Struttura tal-kristall tar-riċettur tal-kannabinojdi tal-bniedem CB1. Cell (2016) 167(3):750–62.e14.10.1016/j.cell.2016.10.004 [L-artikolu ħieles mill-PMC] [PubMed] [Cross Ref]
57. Benyamina A, Kebir O, Blecha L, Reynaud M, Krebs MO. Polimorfiżmi tal-ġeni CNR1 f'disturbi ta 'vizzju: reviżjoni sistematika u meta-analiżi. Addict Biol (2011) 16(1):1–6.10.1111/j.1369-1600.2009.00198.x [PubMed] [Cross Ref]
58. Loureiro M, Kramar C, Renard J, Rosen LG, Laviolette SR. It-trażmissjoni tal-kannabinojdi fl-ippokampus jattiva n-newroni tan-nukleu accumbens u jimmodula l-premju u l-qawwa emozzjonali relatata mal-avjazzjoni. Biol Psychiatry (2016) 80(3):216–25.10.1016/j.biopsych.2015.10.016 [PubMed] [Cross Ref]
59. Kasem E, Kurihara T, Tabuchi K. Neurexins u disturbi newropsikjatriċi. Neurosci Res (2017) 127:53–60.10.1016/j.neures.2017.10.012 [PubMed] [Cross Ref]