အဆိုပါ ventral tegmental ဧရိယာလွှမ်းမိုးမှုအတွက် dopaminergic အာရုံခံ၏ Endogenous opioid-သွေးဆောင် neuroplasticity ကသဘာဝနှင့် opiate ဆုလာဘ် (2014)

နေ့စဉ်မိတ်လိုက်အစည်းအဝေးများ။

VTA ရှိ dopamine neuron soma အရွယ်အစားပြောင်းလဲမှု၏ အချိန်ကာလကို လေ့လာရန်အတွက်၊ လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာ အတွေ့အကြုံရှိပြီး အတွေ့အကြုံမရှိသေးသော တိရစ္ဆာန်များကို မိတ်လိုက်ခြင်း (အတွေ့အကြုံရှိ) သို့မဟုတ် ကိုင်တွယ်ခြင်း (အတွေ့အကြုံမရှိ) ၏ နောက်ဆုံးနေ့ပြီးနောက် ၁၊ ၇ ရက် သို့မဟုတ် ၃၁ ရက် ( အုပ်စုတစ်စုလျှင် n = ၅-၈) တွင် သတ်ခဲ့သည်။ လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာ အတွေ့အကြုံရှိသော အုပ်စုများကို နောက်ဆုံး မိတ်လိုက်ခြင်း အစည်းအဝေးအတွင်း လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာ အပြုအမူအပြင် အစည်းအဝေးငါးခုအတွင်း သုက်လွှတ်မှု စုစုပေါင်းအရေအတွက် (အုပ်စုတစ်စုလျှင် ပျမ်းမျှ ၅ ခု) အတွက် ကိုက်ညီစေပြီး လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာ အပြုအမူ၏ မည်သည့် parameter တွင်မျှ မကွာခြားပါ။

မိတ်လိုက်အစည်းအဝေးများ။

လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာ အတွေ့အကြုံမရှိသော အထီးများကို စမ်းသပ်အခြေအနေနှစ်ခုအနက် တစ်ခုခုအဖြစ် သတ်မှတ်ခဲ့သည်- လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာ အတွေ့အကြုံမရှိသော သို့မဟုတ် လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာ အတွေ့အကြုံရှိခြင်း။ လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာ အတွေ့အကြုံရှိသော တိရစ္ဆာန်များကို သုက်လွှတ်သည်အထိ သို့မဟုတ် ၁ နာရီအထိ (ဘယ်ဟာက အရင်လာလဲ) စတုဂံစမ်းသပ်လှောင်အိမ်များတွင် လက်ခံနိုင်သော အမများနှင့် ရက်ဆက်တိုက် ငါးကြိမ် မိတ်လိုက်ခွင့်ပြုခဲ့သည်။ လှောင်အိမ်များကို ၇၀% အီသနောအရည်ဖြင့် သေချာစွာ သန့်စင်ပြီး မိတ်လိုက်ချိန်များကြားတွင် အိပ်ယာခင်းအသစ်များ ထည့်ခဲ့သည်။ မှောင်မိုက်သောအဆင့် (မှောင်မိုက်ပြီးနောက် ၂-၆ နာရီ) တွင် လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာ အပြုအမူကို ပြုလုပ်ခဲ့သည်။ မိတ်လိုက်ချိန် ငါးကြိမ်အနက် အနည်းဆုံး လေးကြိမ်အတွင်း သုက်လွှတ်ခဲ့သော တိရစ္ဆာန်များကိုသာ လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာ အတွေ့အကြုံရှိသူများအဖြစ် သတ်မှတ်ပြီး စမ်းသပ်မှုများတွင် ထည့်သွင်းခဲ့သည်။ မိတ်လိုက်ချိန်အားလုံးကို လေ့လာစောင့်ကြည့်ပြီး လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာ အပြုအမူကို မှတ်တမ်းတင်ခဲ့သည်။ ထိတွေ့မှုအကြိမ်ရေ (M) ထိတွေ့မှုအကြိမ်ရေ (IMs)၊ ထိတွေ့မှုကြာချိန် (ML; အမကို မိတ်ဆက်ချိန်မှ ပထမဆုံးထိတွေ့မှုအကြိမ်ရေအထိ အချိန်)၊ ထိတွေ့မှုကြာချိန် (IL; အမကို မိတ်ဆက်ချိန်မှ ပထမဆုံးထိတွေ့မှုအကြိမ်ရေအထိ အချိန်) နှင့် သုက်လွှတ်ချိန် (EL; ပထမဆုံးထိတွေ့မှုအကြိမ်ရေမှ သုက်လွှတ်ချိန်အထိ အချိန်) တို့ကို မှတ်တမ်းတင်ခဲ့သည် ( Agmo, 1997 )။ ရိုးရိုးသားသား တိရစ္ဆာန်များကို သန့်ရှင်းသော စမ်းသပ်လှောင်အိမ်ထဲတွင် ၁ နာရီကြာ ထားခဲ့ပြီး လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာ အတွေ့အကြုံရှိ အထီးများကို အခန်းတစ်ခုတည်းတွင် မိတ်လိုက်စေခဲ့ရာ ၎င်းတို့သည် ဝေးလံသော အမ အနံ့များနှင့် အတွေ့အကြုံရှိ အထီးများကဲ့သို့ အလားတူ နှောင့်ယှက်မှုနှင့် ပတ်ဝန်းကျင်ဆိုင်ရာ ထူးခြားမှုအဆင့်များကို ထိတွေ့ခဲ့ရသည်။

နဲ့ Immunofluorescence တံဆိပ်ကပ်ခြင်း။

တိရစ္ဆာန်များကို ဆိုဒီယမ် ပန်တိုဘာဘီတယ် (၂၇၀ မီလီဂရမ်/ကီလိုဂရမ်၊ ip) ဖြင့် နက်နက်ရှိုင်းရှိုင်း မေ့ဆေးပေးခဲ့ပြီး ၀.၉% ဆားရည် ၅၀ မီလီလီတာဖြင့် နှလုံးအတွင်းသို့ ဖြန်းပေးခဲ့ပြီးနောက် ၀.၁ မီလီလီတာ ဆိုဒီယမ် ဖော့စဖိတ် ဘာဖာ (PB) တွင် ၄% ပါရာဖော်မယ်လ်ဒီဟိုက် ၅၀၀ မီလီလီတာ ထည့်ပေးခဲ့သည်။ ဦးနှောက်များကို ဖယ်ရှားပြီး အခန်းအပူချိန် (RT) တွင် ၁ နာရီကြာ တူညီသော fixative ဖြင့် ထားပြီးနောက် ၄°C တွင် သိမ်းဆည်းရန်အတွက် ၀.၁ မီလီလီတာ PB တွင် ၂၀% ဆူးခရို့စ်နှင့် ၀.၀၁% ဆိုဒီယမ် အာဆိုဒ်တွင် နှစ်မြှုပ်ခဲ့သည်။ Coronal အပိုင်းများကို အေးခဲနေသော microtome (H400R၊ Microm) ပေါ်တွင် ၃၅ μm တွင် ဖြတ်တောက်ကာ cryoprotectant solution (၃၀% ဆူးခရို့စ်၊ ၃၀% အီသလင်း ဂလိုင်ကောလ် ၀.၁ မီလီလီတာ PB) တွင် parallel series လေးခုဖြင့် စုဆောင်းပြီးနောက် ၂၀°C တွင် သိမ်းဆည်းခဲ့သည်။ incubation အားလုံးကို RT တွင် ညင်သာစွာ မွှေပေးပြီး incubation များကြားတွင် ၀.၁ မီလီလီတာ PBS၊ pH ၇.၃၅ ဖြင့် အကြိမ်များစွာ ဆေးကြောခြင်းဖြင့် ပြုလုပ်ခဲ့သည်။ အပိုင်းများကို endogenous peroxidases များကို ဖျက်ဆီးရန်အတွက် 1% _H2O2 နှင့် 10 _{မိနစ်ကြာ} ထိတွေ့စေ ပြီးနောက် incubation solution (PBS+: PBS containing 0.4% Triton X-100; Sigma-Aldrich) နှင့် 0.1% bovine serum albumin (Jackson Immuno Research Laboratories) တွင် 1 နာရီကြာ ပိတ်ဆို့ခဲ့သည်။ ထို့နောက် အပိုင်းများကို RT တွင် mouse tyrosine hydroxylase (TH)-antibody (1:20 000; Millipore ) တွင် တစ်ညလုံး incubation လုပ်ခဲ့သည်။ primary antibody incubation လုပ်ပြီးနောက် အပိုင်းများကို AlexaFluor 555-conjugated goat anti-mouse antibody (1:100; Invitrogen, Eugene, OR) တွင် 30 မိနစ်ကြာ incubation လုပ်ခဲ့သည်။ နောက်ဆုံးတွင်၊ အပိုင်းများကို 0.1 m PB ဖြင့်ဆေးကြောပြီး Superfrost Plus ဖန်ချပ်များပေါ်တွင်တပ်ဆင်ကာ အခြောက်ခံကာ အရောင်မှိန်ခြင်းဆန့်ကျင်ပစ္စည်း 1,4-diazabicyclo(2,2)octane (DABCO; 50 mg/ml, Sigma-Aldrich; Lennette, 1978 ) ပါ၀င်သည့် gelvatol ဖြင့် ဖုံးအုပ်ထားသည်။

ဒေတာကိုခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာ: အာရုံခံဆဲလျ Soma အရွယ်အစား။

VTA ရှိ TH-immunoreactive (IR) အာရုံကြောဆဲလ်များ၏ ပုံများကို rostral မှ caudal အဆင့်သုံးဆင့်တွင် 40× magnification ဖြင့် ရိုက်ယူခဲ့သည် ( Balfour et al., 2004 )။ မတူညီသောအဆင့်များရှိ ဆဲလ်များအကြား ကွာခြားချက်များကို မတွေ့ရှိခဲ့ပါ။ TH-IR အာရုံကြောဆဲလ်များ၏ soma အရွယ်အစားကို ImageJ (National Institutes of Health) ကို အသုံးပြု၍ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခဲ့သည်။ ပျမ်းမျှဧရိယာ၊ ပတ်လည်အတိုင်းအတာနှင့် စက်ဝိုင်းပုံကို Sklair-Tavron et al. (1996) မှဖော်ပြထားသည့်အတိုင်း တိုင်းတာခဲ့သည် ။ တိရစ္ဆာန်တစ်ကောင်လျှင် ပျမ်းမျှဆဲလ် ၂၅ ခု (VTA အဆင့် ၃ ခုလုံးပေါင်းစပ်) ကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခဲ့ပြီး nucleus ကို ရှင်းရှင်းလင်းလင်းမြင်နိုင်သော ဆဲလ်များကိုသာ ထည့်သွင်းခဲ့သည်။ တိရစ္ဆာန်တစ်ခုစီအတွက် ပျမ်းမျှဧရိယာ၊ ပတ်လည်အတိုင်းအတာနှင့် စက်ဝိုင်းပုံကို တွက်ချက်ခဲ့သည်။ စာရင်းအင်းခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုအတွက် two-way ANOVA ကို အသုံးပြုခဲ့သည် [အချက်များ- လိင်ဆက်ဆံမှုအတွေ့အကြုံ (လိင်ဆက်ဆံဖူးခြင်း သို့မဟုတ် လိင်ဆက်ဆံမှုအတွေ့အကြုံမရှိခြင်း) နှင့် အချိန် (1, 7, သို့မဟုတ် 31 d)] ထို့နောက် 0.05 ၏ သိသာထင်ရှားသောအဆင့်ဖြင့် Holm–Sidak နည်းလမ်းကို အသုံးပြု၍ post hoc နှိုင်းယှဉ်မှုများ ပြုလုပ်ခဲ့သည်။

ခြားမိတ်လိုက်အစည်းအဝေးများ။

နေ့စဉ်မိတ်လိုက်အစည်းအဝေးများကာလအတွင်းလိင်ပိုင်းဆိုင်ရာအတွေ့အကြုံက TH-မှာ IR အာရုံခံဆဲလျ Soma အရွယ်အစားလျှောက်လျော့နည်းဘို့လိုအပ်ပါသည်ရှိမရှိစမ်းသပ်ဖို့, ငါးခြားမိတ်လိုက်အစည်းအဝေးများကာလအတွင်း mated ခဲ့ကြောင်းတိရစ္ဆာန်များ၏ VTA dopamine အာရုံခံဆန်းစစ်ခဲ့ကြသည်။ အထက်တွင်ဖော်ပြထားသကဲ့သို့မိတ်လိုက်အစည်းအဝေးများပေမယ် 2.5 ရက်သတ္တပတ်တစ်ဦးကျြောကာလအတှငျးရှိကြ၏။ ဦးနှောက်နောက်ဆုံးမိတ်လိုက်သို့မဟုတ်ကိုင်တွယ်ပြီးနောက် 7 ဃစုဆောင်းခဲ့ကြသည်။

Immunoperoxidase တံဆိပ်ကပ်ခြင်း။

ထို့အပြင်၊ immunoperoxidase နှင့် chromogen ထောက်လှမ်းခြင်းပါရှိသော sensitive staining နည်းပညာများကို အသုံးပြုခြင်းဖြင့် TH-IR soma အရွယ်အစားပြောင်းလဲမှုများကို မြင်ယောင်နိုင်မလားကို စမ်းသပ်ခဲ့သည်။ သွေးစီးဆင်းမှုနှင့် တစ်ရှူးပြုပြင်ခြင်းကို အထက်တွင်ဖော်ပြထားသည့်အတိုင်း ပြုလုပ်ခဲ့သည်။ 1% H2O2 နှင့် PBS+ ဖြင့် ကုသပြီးနောက် _၊ အပိုင်း _{များကို} RT တွင် mouse polyclonal tyrosine hydroxylase (TH)-antibody (1:20 000; Millipore ) တွင် တစ်ညလုံး incubation လုပ်ခဲ့သည်။ မူလပဋိပစ္စည်း ပေါက်ဖွားပြီးနောက်၊ အပိုင်းများကို biotin-conjugated goat anti-rabbit IgG (1 နာရီ၊ PBS+ တွင် 1:500; Vector Laboratories)၊ avidin-biotin-horseradish peroxidase (1 နာရီ၊ ABC elite; 1:1 000; Vector Laboratories) နှင့် 3,3′-diaminobenzidine tetrahydrochloride (10 မိနစ်၊ 0.02%၊ DAB; Sigma-Aldrich) တွင် နီကယ်ဆာလဖိတ်ဖြင့် မြှင့်တင်ထားသော (0.1 m PB တွင် 0.02%) ဟိုက်ဒရိုဂျင်ပါအောက်ဆိုဒ် (0.015%) တို့ဖြင့် ပေါက်ဖွားစေခဲ့သည်။ ဓာတ်ပြုမှုကို ရပ်တန့်စေရန် အပိုင်းများကို 0.1 m PB တွင် သေချာစွာဆေးကြောပြီး ddH ₂ O တွင် 0.3% gelatin ပါဝင်သော coded Superfrost plus glass slides (Fisher) ပေါ်တွင် တပ်ဆင်ခဲ့သည်။ ရေဓာတ်ခန်းခြောက်ပြီးနောက်၊ slides အားလုံးကို DPX mountant (dibutyl phthalate xylene; Sigma-Aldrich) ဖြင့် ဖုံးအုပ်ထားသည်။

ဒေတာကိုခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာ: အာရုံခံဆဲလျ Soma အရွယ်အစား။

အထက်တွင်ဖော်ပြထားသည့်အတိုင်း TH-IR ဆဲလ်များကို ဧရိယာ၊ ပတ်လည်အတိုင်းအတာနှင့် စက်ဝိုင်းပုံသဏ္ဍာန်တို့အတွက် ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခဲ့သည်။ ထို့အပြင်၊ VTA TH-IR ဆဲလ်များကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာရန်အတွက် အသုံးပြုသည့် အပိုင်းများတွင် substantia nigra (SN) ရှိ TH-IR ဆဲလ်များကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခဲ့သည်။ နောက်ဆုံးတွင်၊ VTA နှင့် SN TH-IR ဆဲလ်များကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာပြီးနောက်၊ အပိုင်းများကို cresyl violet ကို အသုံးပြု၍ counterstain လုပ်ခဲ့ပြီး non-TH-IR ဆဲလ်များကို အထက်တွင်ဖော်ပြထားသည့် နည်းလမ်းများကို အသုံးပြု၍ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခဲ့သည်။ အတွေ့အကြုံမရှိသောအုပ်စုများနှင့် အတွေ့အကြုံရှိအုပ်စုများအကြား ကွာခြားချက်များကို 0.05 ၏ သိသာထင်ရှားမှုအဆင့်ရှိသော two-tailed Student's t စမ်းသပ်မှုများကို အသုံးပြု၍ နှိုင်းယှဉ်ခဲ့သည်။

စမ်းသပ်ဒီဇိုင်း။

ယခင်က Russo et al. (၂၀၀၇) က နာတာရှည်မော်ဖင်းသည် မော်ဖင်းဆုလာဘ်ကို ခံနိုင်ရည်ရှိစေကြောင်း ပြသခဲ့သည်။ လိင်ဆက်ဆံမှုအတွေ့အကြုံနှင့် နာတာရှည်မော်ဖင်းသည် VTA တွင် ဒိုပါမင်းအာရုံကြောဆဲလ်များ၏ ဆိုမာအရွယ်အစား အလားတူကျဆင်းမှုကို ဖြစ်စေသောကြောင့်၊ လိင်ကြောင့်ဖြစ်ပေါ်လာသော ရုပ်သွင်ပြောင်းလဲမှုများ၏ လုပ်ဆောင်နိုင်စွမ်းဆိုင်ရာ ဆက်စပ်မှုကို မော်ဖင်းဆုလာဘ်အတွက် စမ်းသပ်ခဲ့သည်။ လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာ အတွေ့အကြုံရှိပြီး အတွေ့အကြုံမရှိသော တိရစ္ဆာန်များကို လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာအပြုအမူ (လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာ အတွေ့အကြုံမရှိသော သို့မဟုတ် အတွေ့အကြုံရှိ) နှင့် မော်ဖင်းဆေးပမာဏ (၀.၅၊ ၅.၀ သို့မဟုတ် ၁၀.၀ မီလီဂရမ်/ကီလိုဂရမ်၊ ip) အပေါ်အခြေခံ၍ ကွဲပြားသော စမ်းသပ်အဖွဲ့ခြောက်ဖွဲ့ ( အုပ်စုတစ်စုလျှင် n = ၉-၁၃) ခွဲခြားခဲ့ပြီး မော်ဖင်းကြောင့်ဖြစ်ပေါ်သော အခြေအနေအလိုက် ဦးစားပေးမှု (CPP) အတွက် စမ်းသပ်ခဲ့သည်။

မော်ဖင်းအကိုက်-CPP က။

နောက်ဆုံး မိတ်လိုက်ချိန် ၁ ရက်အကြာတွင် အခြေအနေပြင်ဆင်မှုကို ပြုလုပ်ခဲ့ပြီး နောက်ဆုံး မိတ်လိုက်ချိန်အတွင်း လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာ စွမ်းဆောင်ရည်အတွက် အုပ်စုများကို တွဲစပ်ခဲ့သည်။ အသုံးပြုထားသော CPP ပုံစံတွင် pretest၊ conditioning days နှင့် post-test တို့ပါဝင်ပြီး ကိရိယာသည် Tenk et al. (2009) ကို အခြေခံထားသည် ။ အကျဉ်းချုပ်ပြောရလျှင် CPP ကိရိယာ (MED Associates) တွင် ကွဲပြားသော အခန်းသုံးခန်းပါဝင်သည်။ အစည်းအဝေးတစ်ခုစီကြားတွင် အနံ့ခံအာရုံကျန်ရှိနေခြင်းကို လျှော့ချရန် ကိရိယာကို 70% အီသနောအရည်ဖြင့် သေချာစွာ သန့်စင်ခဲ့သည်။ တစ်ဦးချင်း နှစ်သက်မှုများကို ဆုံးဖြတ်ရန်အတွက်၊ တိရစ္ဆာန်များအား ကိရိယာတစ်ခုလုံးကို မိနစ် ၁၅ ကြာ အခမဲ့အသုံးပြုခွင့်ပေးသည့် pretest တစ်ခုကို ပြုလုပ်ခဲ့သည်။ အုပ်စုတစ်ခုအနေဖြင့် တိရစ္ဆာန်များသည် သတ်မှတ်ထားသော အခန်းတစ်ခုကို သိသာထင်ရှားသော နှစ်သက်မှုမပြသခဲ့သော်လည်း တစ်ဦးချင်းတိရစ္ဆာန်တိုင်းတွင် ကနဦးနှစ်သက်မှုအနည်းငယ်ရှိသည်။ pretest အတွင်း အခန်းတစ်ခု (အခန်းတစ်ခုစီတွင် အချိန်ကုန်ဆုံးချိန်အကြား 200 စက္ကန့်ကွာခြားချက်ထက် >; တိရစ္ဆာန်များ၏ 5% <) ကို သိသာထင်ရှားသော နှစ်သက်မှုပြသသည့် ကြွက်များကို လေ့လာမှုမှ ဖယ်ထုတ်ထားသည်။ အေးဆေးတည်ငြိမ်စေသည့်ကာလအတွင်း၊ ဆေးဝါးကို ဘက်မလိုက်သောပုံစံ ( Tzschentke၊ ၂၀၀၇ ) ကို အသုံးပြု၍ ကနဦးဦးစားပေး သို့မဟုတ် မဦးစားပေးအခန်းတွင် တွဲဖက်ခဲ့ပြီး တိရစ္ဆာန်များကို အခန်းများတွင် မိနစ် ၃၀ ကြာ ကန့်သတ်ထားသည်။ တိရစ္ဆာန်များကို မနက်ခင်း (၉:၀၀ နာရီမှ ၁၂:၀၀ နာရီအထိ) ဆားရည် (ip) ဖြင့် ထိုးသွင်းပြီး ဆားရည်နှင့်တွဲထားသော အခန်း (ထိန်းချုပ်မှု) တွင် ကန့်သတ်ထားသည်။ နေ့လယ်ခင်း (၁:၀၀-၄:၀၀ နာရီ) တွင် တိရစ္ဆာန်များကို မော်ဖင်း (ip၊ ၀.၅ မီလီဂရမ်/ကီလိုဂရမ်၊ ၅.၀ မီလီဂရမ်/ကီလိုဂရမ် သို့မဟုတ် ၁၀.၀ မီလီဂရမ်/ကီလိုဂရမ်၊ ၀.၉% ဆားရည်တွင် ပျော်ဝင်နေသော မော်ဖင်းဆာလဖိတ်၊ Johnson Matthey) ဖြင့် ထိုးသွင်းပြီး မော်ဖင်းတွဲထားသော အခန်းတွင် ကန့်သတ်ထားသည်။ တိရစ္ဆာန်များကို အေးဆေးတည်ငြိမ်စေသည့်ရက် နှစ်ရက် ပေးထားသည်။ နောက်တစ်နေ့ (မိတ်လိုက်သည့် နောက်ဆုံးနေ့ပြီးနောက် ၃ ရက်) တွင် pretest နှင့် လုပ်ထုံးလုပ်နည်းအရ တူညီသော post-test ကို ပြုလုပ်ခဲ့သည်။ စာရင်းအင်းခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုအတွက်၊ မော်ဖင်းတွဲထားသော အခန်းတွင် စမ်းသပ်မှုအပြီးအချိန်နှင့် လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာ အတွေ့အကြုံမရှိသော သို့မဟုတ် အတွေ့အကြုံရှိ အထီးများအတွက် စမ်းသပ်မှုအပြီးအချိန် ဆားရည်တွဲထားသော အခန်းတွင် စမ်းသပ်မှုအပြီးအချိန်နှင့် နှိုင်းယှဉ်ခဲ့ပြီး တွဲထားသော t စမ်းသပ်မှုကို အသုံးပြုခဲ့သည်။ p < 0.05 ကို စာရင်းအင်းအရ သိသာထင်ရှားသည်ဟု ယူဆခဲ့သည်။ လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာ အတွေ့အကြုံမရှိသော တိရစ္ဆာန်များနှင့် အတွေ့အကြုံရှိ တိရစ္ဆာန်များ၏ နောက်ထပ်ထိန်းချုပ်မှုအုပ်စုများသည် negative control အဖြစ် ဆောင်ရွက်ရန် တွဲထားသော အခန်းနှင့် တွဲမထားသော အခန်း နှစ်မျိုးလုံးတွင် ဆားရည်ကို ရရှိခဲ့ကြသည်။ အုပ်စုနှစ်ခုလုံးအတွက် အခန်းများအကြား ကုန်ဆုံးချိန်ကွာခြားချက်ကို မတွေ့ရှိခဲ့ပါ။

စမ်းသပ်ဒီဇိုင်း။

လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာအတွေ့အကြုံသည် အနည်းဆုံး ၁ လကြာ လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာအပြုအမူကို လွယ်ကူချောမွေ့စေသည် ( Pitchers et al., 2012 )။ အတွေ့အကြုံကြောင့် လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာအပြုအမူကို လွယ်ကူချောမွေ့စေသည့်အပေါ် MOR ပိတ်ဆို့ခြင်း၏ အကျိုးသက်ရောက်မှုကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာရန်အတွက်၊ လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာအတွေ့အကြုံရှိသော တိရစ္ဆာန်များသည် အထက်တွင်ဖော်ပြထားသည့်အတိုင်း ငါးကြိမ်ဆက်တိုက် မိတ်လိုက်ခြင်းမပြုမီ naloxone သို့မဟုတ် saline ကို လက်ခံရရှိခဲ့သည် ( n = 12 ခုစီ)။ နောက်ဆုံး မိတ်လိုက်ခြင်းအစည်းအဝေးအပြီး တစ်ပတ်အကြာတွင်၊ နောက်ဆုံးမိတ်လိုက်ခြင်းစမ်းသပ်မှုကို ပြုလုပ်ခဲ့ပြီး တိရစ္ဆာန်အားလုံးကို တစ်ကြိမ်သုက်လွှတ်သည်အထိ သို့မဟုတ် ၁ နာရီအထိ မိတ်လိုက်ခွင့်ပြုခဲ့သည်။ နောက်ဆုံးစမ်းသပ်မှုနေ့တွင် မိတ်လိုက်ခြင်းမပြုမီ naloxone သို့မဟုတ် saline ကုသမှုကို မပေးခဲ့ပါ။ မိတ်လိုက်ခြင်း၏ parameters များကို naloxone သည် လိင်ဆက်ဆံမှုအတွေ့အကြုံကြောင့် မိတ်လိုက်ခြင်းကို လွယ်ကူချောမွေ့စေခြင်း (နေ့ ၁ နှင့် နေ့ ၅) သို့မဟုတ် ဤလွယ်ကူချောမွေ့စေမှုကို ထိန်းသိမ်းခြင်း (နေ့ ၅ နှင့် စမ်းသပ်မှု) ကို နှစ်လမ်းသွား ANOVA [အချက်များ- ကုသမှု (ဆားရည်နှင့် naloxone)) နှင့် နေ့ (နေ့ ၁၊ နေ့ ၅ သို့မဟုတ် စမ်းသပ်မှု)] နှင့် post hoc နှိုင်းယှဉ်မှုများအတွက် Holm–Sidak နည်းလမ်းကို နှိုင်းယှဉ်ခဲ့သည်။ စာရင်းအင်းဆိုင်ရာ စစ်ဆေးမှုအားလုံးအတွက်၊ p < 0.05 ကို စာရင်းအင်းအရ သိသာထင်ရှားသည်ဟု ယူဆပါသည်။

စမ်းသပ်မှုနေ့၌စနစ် naloxone ။

နောက်ဆုံး မိတ်လိုက်စမ်းသပ်မှုနေ့တွင် လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာ အပြုအမူ ပြောင်းလဲခြင်းသည် naloxone မရှိခြင်းကြောင့် မဟုတ်ကြောင်း ပြသရန်အတွက်၊ လိင်ဆက်ဆံမှု အတွေ့အကြုံရနေစဉ် naloxone နှင့် တွဲဖက်မိတ်လိုက်ခြင်းကို ခံယူခဲ့သော တိရစ္ဆာန်များကို နောက်ဆုံး မိတ်လိုက်စမ်းသပ်မှုနေ့တွင် naloxone သို့မဟုတ် saline ကို ပေးခဲ့ပါသည်။ အထူးသဖြင့် တိရစ္ဆာန်အားလုံးသည် မိတ်လိုက်ခြင်းမပြုမီ မိနစ် ၃၀ အလိုတွင် naloxone ထိုးဆေး (10 mg/kg, sc) ကို ၅ ရက်ဆက်တိုက် တစ်ကြိမ် သုက်လွှတ်သည်အထိ ခံယူခဲ့ကြသည်။ စမ်းသပ်သည့်နေ့ ၇ ရက်အကြာတွင် တိရစ္ဆာန်ထက်ဝက်ခန့်သည် လက်ခံနိုင်သော အမကို မိတ်ဆက်ခြင်းမပြုမီ မိနစ် ၃၀ အလိုတွင် naloxone (10 mg/kg, n = 7) သို့မဟုတ် saline ( n = 6) ထိုးဆေးကို ခံယူခဲ့ကြသည်။ လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာ အပြုအမူကို လေ့လာစောင့်ကြည့်ပြီး မှတ်တမ်းတင်ခဲ့သည်။ မိတ်လိုက်ခြင်း၏ parameters များကို naloxone သည် လိင်ဆက်ဆံမှု အတွေ့အကြုံကြောင့် မိတ်လိုက်ခြင်းကို လွယ်ကူချောမွေ့စေခြင်း (နေ့ ၁ နှင့် နေ့ ၅) သို့မဟုတ် ဤလွယ်ကူချောမွေ့စေမှုကို ထိန်းသိမ်းခြင်း (နေ့ ၅ နှင့် နေ့ ၅) ကို ဆုံးဖြတ်ရန် two-way ANOVA [အချက်များ- ကုသမှု (saline နှင့် naloxone) နှင့် နေ့ (နေ့ ၁၊ နေ့ ၅ သို့မဟုတ် စမ်းသပ်မှု)] နှင့် Holm-Sidak နည်းလမ်းကို post hoc နှိုင်းယှဉ်မှုများအတွက် နှိုင်းယှဉ်ခဲ့သည်။ စာရင်းအင်းဆိုင်ရာ စစ်ဆေးမှုအားလုံးအတွက်၊ p < 5% ကို စာရင်းအင်းအရ သိသာထင်ရှားမှုရှိသည်ဟု ယူဆပါသည်။

သင်တန်းနည်းပြလိင်ပိုင်းဆိုင်ရာအပြုအမူများ၏ရေတိုရေရှည်စကားရပ်အပေါ် naloxone ၏ဆိုးကျိုးများ။

မိတ်လိုက်စဉ် naloxone (10 mg/kg, sc) ကုသမှု၏ အကျိုးသက်ရောက်မှုများကို နောက်ဆုံး မိတ်လိုက်စမ်းသပ်မှုနေ့တွင် နောက်ဆက်တွဲ လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာ အပြုအမူများအပေါ် စမ်းသပ်ခဲ့ပြီး၊ နောက်ဆုံး မိတ်လိုက်ပြီးနောက် ၁ ရက်အကြာတွင်သာ ပြုလုပ်ခဲ့သည် (saline၊ n = 5; naloxone၊ n = 4)။

စနစ် naloxone pretreatment ။

နာလောက်ဇုန်းတစ်ခုတည်းကို ထပ်ခါတလဲလဲ ကုသခြင်းသည် နောက်ဆုံးကုသမှုအပြီး ၇ ရက်အကြာတွင် လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာ အပြုအမူကို ထိခိုက်စေခြင်း ရှိ၊ မရှိ ဆုံးဖြတ်ရန်အတွက်၊ လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာ အတွေ့အကြုံမရှိသော တိရစ္ဆာန်များကို နောက်ဆုံး နာလောက်ဇုန်း သို့မဟုတ် ဆားရည်ထိုးပြီး ၇ ရက်အကြာတွင် မိတ်လိုက်စမ်းသပ်မှုမပြုလုပ်မီ နေ့စဉ် နာလောက်ဇုန်း (10 mg/kg, sc) သို့မဟုတ် ဆားရည်ထိုးဆေး ငါးကြိမ် ဆက်တိုက် ထိုးပေးခဲ့သည်။ ဤနောက်ဆုံးစမ်းသပ်မှုနေ့တွင် တိရစ္ဆာန်များကို မည်သည့်ဆေးမှ မထိုးခဲ့ပါ။ အထက်တွင်ဖော်ပြထားသည့်အတိုင်း လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာ အပြုအမူကို လေ့လာစောင့်ကြည့်ပြီး မှတ်တမ်းတင်ခဲ့သည်။ မိတ်လိုက်ခြင်း၏ parameters များကို unpaired t tests များကို အသုံးပြု၍ အုပ်စုများအကြား နှိုင်းယှဉ်ခဲ့သည်။ စာရင်းအင်းဆိုင်ရာ စမ်းသပ်မှုအားလုံးအတွက် p < 5% ကို စာရင်းအင်းအရ သိသာထင်ရှားသည်ဟု ယူဆခဲ့သည်။

စနစ် naloxone နှင့်လိင်ဆုလာဘ်။

လွယ်ကူချောမွေ့သောလိင်ဆိုင်ရာအပြုအမူများကိုထိန်းသိမ်းခြင်း၏ပြသမှုအပေါ် naloxone ၏ attenuating သက်ရောက်မှုများအတွက်ဖြစ်နိုင်ခြေတစ်ခုမှာ naloxone သည်လိင်ဆိုင်ရာအပြုအမူ၏အကျိုးကျေးဇူးများကိုပိတ်ဆို့ခြင်းဖြစ်သည်။ ဒီဖြစ်နိုင်ခြေကိုစမ်းသပ်ဖို့အတွက် CPP ပါရာဒိုင်းကိုလိင်ပိုင်းဆိုင်ရာအပြုအမူအတွက်ကြိုတင်လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာအတွေ့အကြုံမရှိသောအမျိုးသားများတွင် naloxone သို့မဟုတ်ဆားထိုးဆေးထိုးပြီးချက်ချင်းပြုလုပ်ခဲ့သည်။ CPP လုပ်ထုံးလုပ်နည်းသည် morphine-CPP အတွက်အထက်တွင်ဖော်ပြထားသည့်ပုံစံနှင့်ဆင်တူသည်။

လိင်အပြုအမူကို မူလက ဦးစားပေးမဟုတ်သော အခန်းနှင့် တွဲခဲ့သည်။ ချိန်ညှိထားသော နည်းလမ်းဖြင့် တိရစ္ဆာန်တစ်ခုစီကို လက်ခံနိုင်သော အမထံ ဝင်ရောက်ခွင့်မရမီ မိနစ် ၃၀ အကြာတွင် naloxone ( n = 12) သို့မဟုတ် saline ( n = 11) ထိုးဆေး ရရှိခဲ့သည်။ မိတ်လိုက်ချိန် ပျမ်းမျှကြာချိန်သည် မိနစ် ၁၃ ခန့်ဖြစ်သည်။ သုက်လွှတ်ပြီး တစ်မိနစ်အကြာတွင် တိရစ္ဆာန်ကို တွဲထားသော အခန်းထဲတွင် မိနစ် ၃၀ ကြာ ထားခဲ့သည်။ အခြား conditioning day တွင် တိရစ္ဆာန်များကို naloxone သို့မဟုတ် saline ထိုးဆေး (မိတ်လိုက်ခြင်းမပြုမီ ရရှိသည့် မည်သည့်အရာမဆို) ထိုးခဲ့ပြီး အတွဲမပါသော အခန်းထဲတွင် မိနစ် ၃၀ ကြာ ထားခဲ့သည်။ ထို့နောက် pretest နှင့် အတူတူပင် post-test ကို ပြုလုပ်ခဲ့သည်။ အခန်းဦးစားပေးမှုကို ဆုံးဖြတ်ရန်အတွက် pretest နှင့် post-test အတွင်း အတွဲအခန်းတွင် ကုန်ဆုံးခဲ့သော အချိန်ကို နှိုင်းယှဉ်ခဲ့သည်။ စာရင်းအင်းခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုအတွက် ဦးစားပေးမှုနှင့် ကွာခြားချက်ရမှတ်များကို နှိုင်းယှဉ်ရန်နှင့် pretest နှင့် post-test အတွင်း အတွဲအခန်းတွင် အချိန်ကို နှိုင်းယှဉ်ရန် အသုံးပြုခဲ့ပြီး လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာအပြုအမူအတွက် သိသာထင်ရှားသော CPP တစ်ခု ဖွဲ့စည်းထားခြင်း ရှိ၊ မရှိ ဆုံးဖြတ်ရန် paired t test များကို အသုံးပြုခဲ့သည်။ p < 0.05 ကို သိသာထင်ရှားသည်ဟု ယူဆခဲ့သည်။

စမ်းသပ်ဒီဇိုင်း။

VTA တွင် EOP လုပ်ဆောင်ချက်သည် အထူးသဖြင့် လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာအတွေ့အကြုံကြောင့် လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာအပြုအမူအပေါ် သက်ရောက်မှုများအတွက် တာဝန်ရှိသည်ဖြစ်စေ မရှိသည်ဖြစ်စေ ဆုံးဖြတ်ရန်အတွက်၊ တိရစ္ဆာန်များကို နေ့စဉ် မိတ်လိုက်ခြင်း ငါးကြိမ်မပြုမီ VTA ထဲသို့ naloxone သို့မဟုတ် saline ထိုးသွင်းခဲ့သည်။ အပြုအမူပုံစံသည် စနစ်တကျ naloxone စမ်းသပ်မှုနှင့် ဆင်တူသည်။ လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာအတွေ့အကြုံရှိသော တိရစ္ဆာန်များကို တစ်ကြိမ်သုက်လွှတ်သည်အထိ ၅ ရက်ဆက်တိုက် သို့မဟုတ် ၁ နာရီအထိ မိတ်လိုက်ခွင့်ပြုခဲ့သည်။ လက်ခံနိုင်သော အမကြွက်များကို မိတ်ဆက်ခြင်းမပြုမီ ၁၅ မိနစ်အလိုတွင်၊ အထီးကြွက်များကို naloxone (ကမ္ဘာခြမ်းတစ်ခုလျှင် 10 μg/μl၊ 0.5 μl ပမာဏ၊ 0.9% saline တွင်ပျော်ဝင်သည်) သို့မဟုတ် saline (ကမ္ဘာခြမ်းတစ်ခုလျှင် 0.5 μl) နှစ်ဖက်ထိုးသွင်းမှုများ ရရှိခဲ့သည်။ နှစ်ဖက်ထိုးသွင်းမှုများကို ၁ မိနစ်ကြားကာလအတွင်း 0.5 μl/min စီးဆင်းမှုနှုန်းဖြင့် ထိုးသွင်းပြီးနောက် ၁ မိနစ်ခြား၍ ထိုးသွင်းပြီးနောက် ထိုးသွင်း cannula ကို ပျံ့နှံ့စေရန် ထားခဲ့သည်။ ထို့နောက် ထိုးသွင်း cannula ကို dummy cannula နှင့် ဖုန်မှုန့်အဖုံးဖြင့် အစားထိုးခဲ့သည်။ မိတ်လိုက်သည့် နောက်ဆုံးနေ့ (စမ်းသပ်သည့်နေ့) တစ်ပတ်အကြာတွင် တိရစ္ဆာန်အားလုံးသည် naloxone သို့မဟုတ် saline ထိုးသွင်းခြင်းမရှိဘဲ သုက်လွှတ်ခြင်းနှင့် ထပ်မံမိတ်လိုက်ခဲ့ကြသည်။ ပုံ ၃ A သည် စမ်းသပ်မှုဒီဇိုင်းကို ဖော်ပြထားသည်။ ဒေတာခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုကို စနစ်တကျ နာလောက်ဆုန်း စမ်းသပ်မှုတွင် ဖော်ပြထားသည့်အတိုင်း ပြုလုပ်ခဲ့သည်။

Cannulation ခွဲစိတ်။

Paxinos နှင့် Watson (၂၀၁၃) အရ ကြွက်ထီးများကို ketamine (0.87 mg/ml) နှင့် xylazine (0.13 mg/ml) ဝမ်းဗိုက်အတွင်းထိုးဆေး (0.1 ml/kg) ဖြင့် မေ့ဆေးပေးခဲ့ပြီး stereotaxic ကိရိယာ (Kopf Instruments) ထဲသို့ ထည့်ခဲ့သည်။ Paxinos နှင့် Watson (၂၀၁၃) ၏ အဆိုအရ နှစ်ဖက်စလုံး 21-gauge guide cannulas (Plastics One) ကို ဦးခေါင်းခွံရှိ တူးဖော်ထားသော အပေါက်ငယ်များမှတစ်ဆင့် VTA ဘက်သို့ ဦးနှောက်ထဲသို့ −4.8 mm AP၊ bregma မှ ± 0.75 mm ML နှင့် ဦးခေါင်းခွံ၏အပေါ်မှ −7.8 mm DV တွင် နှိမ့်ချခဲ့သည်။ Cannulas များကို ဦးခေါင်းခွံတွင် တပ်ဆင်ထားသော screw သုံးခုတွင် ကပ်ထားသော သွား acrylic ဖြင့် လုံခြုံအောင် ပြုလုပ်ခဲ့သည်။ တိရစ္ဆာန်များကို ၂ ပတ်ကြာ ပြန်လည်ကောင်းမွန်လာစေခဲ့ပြီး အပြုအမူဆိုင်ရာ စမ်းသပ်မှုအတွင်း အသုံးပြုသည့် ကိုင်တွယ်ခြင်းနှင့် ထိုးဆေးလုပ်ထုံးလုပ်နည်းများကို ကျင့်သားရစေရန် နေ့စဉ်ကိုင်တွယ်ခဲ့သည်။

Cannula နေရာချထားစိစစ်အတည်ပြု။

VTA ကို တိကျစွာပစ်မှတ်ထားကြောင်း အတည်ပြုရန်အတွက် cannulas များ၏နေရာချထားမှုကို TH-immunostaining ကိုအသုံးပြု၍ စစ်ဆေးခဲ့သည်။ သင့်လျော်သောနေရာချထားမှုရှိသော တိရစ္ဆာန်များကိုသာ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုများတွင် ထည့်သွင်းခဲ့သည် (နောက်ဆုံးအုပ်စုအရွယ်အစား- အတွေ့အကြုံရှိ saline n = 8; အတွေ့အကြုံရှိ naloxone n = 6)။ VTA ပြင်ပသို့ ညွှန်ကြားထားသော intra-VTA naloxone ထိုးဆေးများ လက်ခံရရှိသော နောက်ထပ်တိရစ္ဆာန်သုံးကောင်ကို "လွတ်သွားသော" ထိုးဆေးအုပ်စုတွင် အတူတကွ အုပ်စုဖွဲ့ခဲ့သည်။ လွတ်သွားသောအုပ်စုကို ခန္ဓာဗေဒဆိုင်ရာထိန်းချုပ်မှုများအဖြစ် အသုံးပြုရန်အတွက် သီးခြားစီခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခဲ့ပြီး Mann–Whitney U စစ်ဆေးမှုကိုအသုံးပြု၍ နောက်ဆုံးစမ်းသပ်မှုနေ့တွင် naloxone နှင့် saline ကုသထားသော အတွေ့အကြုံရှိ အထီးများနှင့် အပြုအမူကို နှိုင်းယှဉ်ခဲ့သည်။

စမ်းသပ်ဒီဇိုင်း။

မိတ်လိုက်ခြင်းအတွေ့အကြုံရရှိခဲ့သော အထီးလှောင်အိမ်နှင့်ထိတွေ့ခြင်းသည် VTA တွင် MOR activation နှင့် VTA နှင့် NAc တွင် အာရုံကြောလှုပ်ရှားမှုကို ဖြစ်စေကြောင်းပြသထားသည် ( Balfour et al., 2004 )။ ထို့ကြောင့် မိတ်လိုက်ခြင်းပတ်ဝန်းကျင်သည် လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာဆုလာဘ်ကို ခန့်မှန်းသည့် အခြေအနေရှိသော အချက်ပြမှုတစ်ခုအဖြစ် ဆောင်ရွက်သည်။ လက်ရှိလေ့လာမှုသည် နောက်ဆက်တွဲ အခြေအနေရှိသော အချက်ပြမှုကြောင့် အာရုံကြောလှုပ်ရှားမှုအတွက် လိင်ဆက်ဆံမှုအတွေ့အကြုံအတွင်း MOR activation လိုအပ်ခြင်းရှိမရှိကို စမ်းသပ်ခဲ့သည်။ မိတ်လိုက်ခြင်းနယ်ပယ်တွင် မထားမီနှင့် မိတ်လိုက်ရန် လက်ခံနိုင်သော အမတစ်ကောင်ကို မိတ်ဆက်ခြင်း (အတွေ့အကြုံရှိ) မတိုင်မီ ၃၀ မိနစ်အလိုတွင် သို့မဟုတ် အမကို တင်ပြခြင်းမရှိဘဲ ကိုင်တွယ်သည့်လှောင်အိမ်တွင် ထားရှိခြင်းပါဝင်သော ထိန်းချုပ်မှုကိုင်တွယ်မှုမတိုင်မီ (ကြားနေပတ်ဝန်းကျင်၊ ရိုးရိုး) မတိုင်မီတွင် Naloxone သို့မဟုတ် saline ကို စနစ်တကျ (ip) ထိုးပေးခဲ့သည်။ ထို့ကြောင့် စမ်းသပ်အဖွဲ့လေးဖွဲ့ကို ဖန်တီးခဲ့သည်- Naive Sal၊ Naive NLX၊ Exp Sal ​​နှင့် Exp NLX။ နောက်ဆုံး မိတ်လိုက်ခြင်း ඉදිරියට တစ်ပတ်အကြာတွင် အုပ်စုတစ်ခုစီရှိ တိရစ္ဆာန်တစ်ဝက်စီကို မိတ်လိုက်လှောင်အိမ် (Exp အထီးများ- လိင်နှင့်ဆက်စပ်သော အခြေအနေရှိသော အချက်ပြမှုများ) သို့မဟုတ် ကိုင်တွယ်လှောင်အိမ် (ရိုးအသော အထီးများ- nonsalient/neutral အချက်ပြမှုများ) နှင့် ထိတွေ့စေခဲ့ပြီး ကျန်တစ်ဝက်ကို မည်သည့်အချက်ပြမှုမှ မထိတွေ့စေဘဲ အိမ်လှောင်အိမ်များတွင်သာ နေစေခဲ့သည် (အခြေခံ pERK ဖော်ပြမှုကို ဆုံးဖြတ်ရန်)။ ဤစမ်းသပ်ပုံစံသည် အုပ်စု ၈ စုကို ဖြစ်ပေါ်စေခဲ့သည်- Naive Sal-No Cue၊ Naive Sal+Cue၊ Naive NLX-No Cue၊ Naive NLX+Cue၊ Exp Sal-No Cue၊ Exp Sal+Cue၊ Exp NLX-No Cue၊ Exp NLX+Cue ( Naive NLX-No Cue မှလွဲ၍ n = 4 တစ်ခုစီ၊ n = 3)။ တိရစ္ဆာန်များကို အချက်ပြမှု ထိတွေ့ပြီး ၁၀-၁၅ မိနစ်အကြာတွင် ထုတ်လွှင့်ခဲ့သည်။ ထိန်းချုပ်တိရစ္ဆာန်များကို ၎င်းတို့၏ အိမ်လှောင်အိမ်များမှ ဖယ်ရှားပြီး တစ်ပြိုင်နက်တည်း ထုတ်လွှင့်ခဲ့သည်။

Immunohistochemistry ။

အထက်တွင်ဖော်ပြထားသည့်အတိုင်း ပိုင်းခြားခြင်းနှင့် ကိုယ်ခံအားဓာတုဗေဒတို့ကို ပြုလုပ်ခဲ့သည်။ ဤနေရာတွင်၊ ကျွန်ုပ်တို့သည် p42 နှင့် p44 MAP Kinases ERK1 နှင့် ERK2 (pERK; 1:4 000; Cell Signaling Technology) ကို ဆန့်ကျင်သည့် ယုန် polyclonal antibody ကို အသုံးပြုခဲ့သည်။ primary antibody ကို စာပေများတွင် ကျယ်ကျယ်ပြန့်ပြန့် ဖော်ပြထားပြီးဖြစ်သည် ( Roux and Blenis, 2004 ; Murphy and Blenis, 2006 ; Frohmader et al., 2010b )။ ထို့အပြင်၊ primary antibody ကို ချန်လှပ်ထားခြင်းသည် immunoreactivity အားလုံးကို တားဆီးပေးပြီး ကြွက်ဦးနှောက်တစ်ရှူး၏ Western blot ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုသည် သင့်လျော်သော မော်လီကျူးအလေးချိန်များတွင် band နှစ်ခုကို ဖော်ပြသည်။

ဒေတာကိုခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာ။

pERK-immunoreactive (-IR) ဆဲလ်များကို Leica DMRD မိုက်ခရိုစကုပ် နှင့် တွဲထားသော ကင်မရာ lucida ပုံဆွဲပြွန်ကို အသုံးပြု၍ ဦးနှောက်ဒေသအများအပြားတွင် ရေတွက်ခဲ့သည် - NAc [core (C) နှင့် shell (S); 400 × 600 μm; medial prefrontal cortex; mPFC; anterior cingulate area (ACA); prelimbic cortex (PL); infralimbic cortex (IL); 600 × 800 μm တစ်ခုစီ]၊ caudate–putamen (CP; 800 × 800 μm) နှင့် basolateral amygdala (BLA; 900 × 1200 μm; Balfour et al., 2004 ; Frohmader et al., 2010b ; Pitchers et al., 2010b )။ ဦးနှောက်ဒေသတစ်ခုလျှင် အပိုင်းနှစ်ပိုင်းကို ရေတွက်ခဲ့ပြီး ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှု၏ စံဧရိယာများရှိ ဆဲလ်အရေအတွက်ကို ^mm2 လျှင် ဆဲလ်အရေအတွက်အဖြစ် တွက်ချက်ခဲ့သည် ။ အုပ်စုပျမ်းမျှတွက်ချက်ရန်အတွက် တိရစ္ဆာန်တစ်ကောင်လျှင် ရေတွက်မှုနှစ်ခုကို ပျမ်းမျှခဲ့သည်။ လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာ အတွေ့အကြုံရှိသူများ သို့မဟုတ် ရိုးရိုးအမဲအုပ်စုများအတွင်းရှိ အုပ်စုပျမ်းမျှများကို နှစ်လမ်းသွား ANOVA [အချက်များ- မူးယစ်ဆေးဝါးကုသမှု (NLX သို့မဟုတ် Sal) နှင့် cue (cue သို့မဟုတ် no cue)] ကို အသုံးပြု၍ နှိုင်းယှဉ်ပြီးနောက် သင့်လျော်သည့်နေရာတွင် Holm–Sidak သို့မဟုတ် Mann–Whitney sum စစ်ဆေးမှုများကို p < 0.05 ၏ သိသာထင်ရှားမှုအဆင့်ဖြင့် အသုံးပြု၍ post hoc နှိုင်းယှဉ်မှုများ ပြုလုပ်ခဲ့သည်။ လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာ အတွေ့အကြုံရှိ တိရစ္ဆာန်များ၏ NAc shell တွင်၊ အချက်များ၏ အရေးပါမှုဆီသို့ ခိုင်မာသော လမ်းကြောင်းတစ်ခု ရှိခဲ့ပြီး ထို့ကြောင့် saline (Sal-No Cue) နှင့် saline cue (Sal+Cue) အုပ်စုများကိုသာ နှိုင်းယှဉ်ရန် pairwise နှိုင်းယှဉ်မှုများကို ပြုလုပ်ခဲ့သည်။

ပုံရိပ်တွေ။

Leica မိုက်ခရိုစကုပ် (DM5000B) နှင့် ချိတ်ဆက်ထားသော CCD ကင်မရာ (Macrofire၊ Optronics) ကို အသုံးပြု၍ ဒစ်ဂျစ်တယ်ပုံများကို ကင်မရာဆက်တင်များဖြင့် ရိုက်ကူးခဲ့သည် ။ ပုံများကို Adobe Photoshop 9.0 ဆော့ဖ်ဝဲလ်ထဲသို့ ထည့်သွင်းခဲ့သည်။ တောက်ပမှုနှင့် ဆန့်ကျင်ဘက်အရောင်ကို ချိန်ညှိခြင်းမှလွဲ၍ ပုံများကို မည်သည့်နည်းနှင့်မျှ ပြောင်းလဲခြင်း မရှိပါ။

VTA dopamine အာရုံခံ၏ Endogenous opioid-သွေးဆောင် Soma အရွယ်အစားအပြောင်းအလဲများကို။ Aနောက်ဆုံးမိတ်လိုက် session တစ်ခုပြီးနောက် Soma အရွယ်အစား 7 ဃအတွက်လျော့ချရေးဖေါ်ပြခြင်းလိင်နုံများနှင့်အတွေ့အကြုံရှိတိရစ္ဆာန်များအနေဖြင့် VTA dopamine အာရုံခံ၏, ကိုယ်စားလှယ်ပုံရိပ်တွေ။ စကေးဘား, 5 μm။ လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာအတှေ့အကွုံ (Exp, အနက်ရောင်ဘား) ဧရိယာ၌သိသိသာသာလျှော့ချရေးစေဖေါ်ပြခြင်း quantitative ဒေတာ (B; μmအတွက်²) နှင့်ပတ်လည်အတိုင်းအတာ (C; VTA dopamine ဆဲလ်၏) μmအတွက် Exp, 1 ဃ (နုံ; n = 6) နှင့် 7 ဃ (နုံ, n = 5; Exp, n = 6), မဟုတ် 31 ဃ (နုံ, n = 6; Exp, n = လိင်နုံထိန်းချုပ်မှု (နုံ, အဖြူရောင်ဘား) နဲ့နှိုင်းယှဉ်နောက်ဆုံးမိတ်လိုက်ပြီးနောက် 8) ။ ဧရိယာ 84 သို့မဟုတ် 1 ဃမှာနုံထိန်းချုပ်မှုနှင့်နှိုင်းယှဉ်ပါအတွေ့အကြုံရှိတဲ့ယောက်ျားအတွက် 7% အထိလျှော့ချခဲ့သည်။ ပတ်လည်အတိုင်းအတာ 91.6 မှာထိန်းချုပ်မှုများနှင့် 90 ဃ resp နှင့်နှိုင်းယှဉ်ပါအတွေ့အကြုံရှိအုပ်စုများအတွက် 1 နှင့် 7% အထိလျှော့ချခဲ့သည်။ မြို့ပတ်ရထားပေါ်မျှအကျိုးသက်ရောက်မှု (ရှိခဲ့သည်D) ။ ဧရိယာ၌ဤ dopamine ဆဲလ် plasticity (E) နှင့်ပတ်လည်အတိုင်းအတာ (F) (naloxone အားဖြင့် NLX တားဆီးခဲ့ပါတယ်, n = 8), မဟုတ်ဆား (Sal, n လိင်နုံထိန်းချုပ်မှု (Sal, နှင့်နှိုင်းယှဉ်နောက်ဆုံးမိတ်လိုက် session တစ်ခုအပြီးမိတ်လိုက်နေစဉ်အတွင်း = 7) ကုသမှု 7 ဃ n = 5; NLX, n = 6) ။ ဒေတာများကို± SEM ဆိုလိုကိုယ်စားပြု; * (ထိုနေ့၏လိင်နုံထိန်းချုပ်မှုတွေနဲ့နှိုင်းယှဉ်ရင်သိသိသာသာခြားနားချက်ကိုညွှန်ပြB, C) သို့မဟုတ်ဆား-ကုသလိင်နုံထိန်းချုပ်မှုနှင့် naloxone-ကုသလိင်ကြုံတွေ့ယောက်ျားနှင့်နှိုင်းယှဉ်ပါ (E, F).

လိင်အတွေ့အကြုံကို substantia nigra dopamine အာရုံခံသို့မဟုတ် VTA nondopamine အာရုံခံအတွက် Soma အရွယ်အစားလျော့မပေးခဲ့ပါဘူး။ VTA TH-မှာ IR အာရုံခံဆဲလျ Soma ဧရိယာ (A; μmအတွက်²) နှင့်ပတ်လည်အတိုင်းအတာ (B; ) μmအတွက်လိင်နုံ (အဖြူ) နှင့်တွေ့ကြုံ (အနက်ရောင်) တိရိစ္ဆာန်များအတွက်တစ်ပတ်ကိုနှစ်ကြိမ်အဖော်ရှာခြင်းဖြင့်ထက်ရက်ဆက်တိုက်စဉ်အတွင်းအတွေ့အကြုံကိုရရှိခဲ့ကြောင်း။ Substantia nigra TH-မှာ IR Soma ဧရိယာ (C) နှင့် VTA Non-TH-မှာ IR Soma ဧရိယာ (D)) အဖြူ (လိင်နုံအတွက်နှင့် (အနက်ရောင်) တိရိစ္ဆာန်များခံစားခဲ့ရသညျ။ ဒေတာများကို± SEM ဆိုလိုကိုယ်စားပြု; * လိင်နုံထိန်းချုပ်မှုတွေနဲ့နှိုင်းယှဉ်ရင်သိသိသာသာခြားနားချက်ဖော်ပြသည်။ လိင်နုံ၏ VTA အတွက် TH-မှာ IR (အညိုရောင်) အာရုံခံဖေါ်ပြခြင်းကိုယ်စားလှယ်ပုံရိပ်တွေ (E), နှင့်တွေ့ကြုံ (F) ယောက်ျား။ G, Hအဆိုပါအာရုံခံဆဲလျ၏ Higher-ချဲ့ပုံရိပ်အတွက်မြှားခြင်းဖြင့်ညွှန်ပြ E နှင့် F အသီးသီး။ Nissl-စွန်းတွင် neuron သည်ဤပုံရိပ်တွေအတွက်အပြာမှာပြနေကြသည်။ လိင်နုံ၏ SN အတွက် TH-မှာ IR အာရုံခံဖေါ်ပြခြင်းကိုယ်စားလှယ်ပုံရိပ်တွေ (I) နှင့်တွေ့ကြုံ (J) ယောက်ျား။ စကေးဘား: E-J, 20 μm။

မော်ဖင်းဆုလာဘ်အပေါ် လိင်ဆက်ဆံမှုအတွေ့အကြုံ၏ အကျိုးသက်ရောက်မှုများ။ လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာ အတွေ့အကြုံမရှိသော (Naive, n = 10–13) သို့မဟုတ် အတွေ့အကြုံရှိ (Exp, n = 9–13 ) အထီးများတွင် စမ်းသပ်မှုအပြီးအတွင်း ဆားရည် (Sal) သို့မဟုတ် မော်ဖင်းတွဲထားသော (Mor; 0.5, 5 သို့မဟုတ် 10 mg/kg ခန္ဓာကိုယ်အလေးချိန်) အခန်းများတွင် ကုန်ဆုံးချိန်များ။ ပျမ်းမျှ ± SEM အဖြစ် တင်ပြထားသော ဒေတာ။ * တူညီသော တိရစ္ဆာန်များအတွင်းရှိ Sal တွဲထားသော အခန်းနှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက သိသာထင်ရှားသော ကွာခြားချက်ကို ညွှန်ပြသည်။ NS၊ အရေးမကြီးပါ။

အတွေ့အကြုံကြောင့်ဖြစ်ပေါ်လာသော လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာအပြုအမူကို လွယ်ကူချောမွေ့စေရာတွင် endogenous opioid များသည် အရေးပါသောအခန်းကဏ္ဍမှ ပါဝင်သည်။ A၊ စမ်းသပ်မှုဒီဇိုင်း။ B – D၊ ဆားရည် (Sal၊ အဖြူရောင်ဘားများ၊ n = 11) သို့မဟုတ် naloxone (NLX; အနက်ရောင်ဘားများ၊ n = 12) ဖြင့် စနစ်တကျထိုးသွင်းခြင်းဖြင့် ကုသထားသော အထီးများအတွက် လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာအပြုအမူဆိုင်ရာ ကန့်သတ်ချက်များ။ ပြသထားသောဒေတာများသည် ငါးရက်ဆက်တိုက် မိတ်လိုက်ချိန်၏ ၁ ရက်နှင့် ၅ ရက်များတွင် တပ်ဆင်ရန် နှောင့်နှေးမှု ( B ; စက္ကန့်)၊ လွှတ်ခြင်း ( C ; စက္ကန့်) နှင့် သုက်လွှတ်ခြင်း ( D ; စက္ကန့်) တို့ဖြစ်သည်။ ထို့အပြင်၊ ပဉ္စမမြောက် မိတ်လိုက်ချိန်အပြီး ၇ ရက်အကြာ နောက်ဆုံးမိတ်လိုက်စမ်းသပ်မှုအတွက် ဒေတာများကို ပြသထားသည်။ ဒေတာများကို ပျမ်းမျှ ± SEM အဖြစ် တင်ပြထားသည်။ + သည် ကုသမှုအတွင်း ၁ ရက်နှင့် ၅ ရက်အကြား သိသာထင်ရှားသော ကွာခြားချက်ကို ညွှန်ပြသည်။ * သည် ကုသမှုအတွင်း စမ်းသပ်နေ့နှင့် ၅ ရက်အကြား သိသာထင်ရှားသော ကွာခြားချက်ကို ညွှန်ပြသည်။ # သည် တစ်နေ့အတွင်း naloxone နှင့် ဆားရည်အုပ်စုများအကြား သိသာထင်ရှားသော ကွာခြားချက်ကို ညွှန်ပြသည်။

Naloxone အုပ်ချုပ်ရေးကြိုတင်သာမိတ်လိုက်၏ပထမနေ့၌ mount နှင့် intromission တိုးမြှင် latency အဖော်ရှာရန်

အတွေ့အကြုံကြောင့်ဖြစ်ပေါ်လာသော လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာအပြုအမူကို ရေရှည်ဖော်ပြရာတွင် Endogenous opioid များသည် အရေးကြီးပါသည်။ A ၊ စမ်းသပ်နေ့တွင် NLX ကုသမှု၏အကျိုးသက်ရောက်မှုအတွက် စမ်းသပ်ချက်အတွက် စမ်းသပ်ဒီဇိုင်း။ B ၊ ဆားရည် (မီးခိုးရောင်) သို့မဟုတ် naloxone (အနက်ရောင်) ထိုးပြီးနောက် ငါးရက်ဆက်တိုက် မိတ်လိုက်ခြင်းနှင့် နောက်ဆုံးမိတ်လိုက်ခြင်းစမ်းသပ်မှုနေ့ (စမ်းသပ်) ၏ ၁ ရက်နှင့် ၅ ရက်တွင် နှောင့်နှေးမှုကို ထည့်ပါ။ ဒေတာသည် ပျမ်းမျှ ± SEM ကိုကိုယ်စားပြုသည်။ * သည် ကုသမှုအတွင်း ၁ ရက်နှင့် ၅ ရက်အကြား သိသာထင်ရှားသော ကွာခြားချက်ကို ညွှန်ပြသည်။ # သည် ကုသမှုအတွင်း စမ်းသပ်နေ့နှင့် ၅ ရက်အကြား သိသာထင်ရှားသော ကွာခြားချက်ကို ညွှန်ပြသည်။ C ၊ လိင်ဆက်ဆံမှုအတွေ့အကြုံမရှိဘဲ naloxone ကြိုတင်ကုသမှုတစ်ခုတည်း၏ မိတ်လိုက်အပြုအမူအပေါ် အကျိုးသက်ရောက်မှုကို စမ်းသပ်ရန် စမ်းသပ်ချက်အတွက် စမ်းသပ်ဒီဇိုင်း။ D ၊ မိတ်လိုက်ခြင်းမရှိသော နောက်ဆုံးမိတ်လိုက်စမ်းသပ်မှုနေ့တွင် ဆားရည် သို့မဟုတ် naloxone ထိုးပြီး ၅ ရက်အကြာတွင် ၇ ရက်ကြာ နှောင့်နှေးမှုကို ထည့်ပါ။ ဒေတာသည် ပျမ်းမျှ ± SEM ကိုကိုယ်စားပြုသည်။ E ၊ လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာအတွေ့အကြုံရှိသော တိရစ္ဆာန်များတွင် အထောက်အကူပြု လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာအပြုအမူကို ရေတိုပြသမှုကို naloxone ကုသမှုက သက်ရောက်မှုရှိမရှိ စမ်းသပ်ရန် စမ်းသပ်ချက်အတွက် စမ်းသပ်ဒီဇိုင်း။ F၊ မိတ်လိုက်ခြင်း ငါးရက်ဆက်တိုက်နှင့် နောက်ဆုံးမိတ်လိုက်ခြင်းစမ်းသပ်မှုနေ့၏ ၁ ရက်နှင့် ၅ ရက်မြောက်နေ့တွင် ဆားရည် (မီးခိုးရောင်) သို့မဟုတ် နာလောက်ဇုန်း (အနက်ရောင်) ထိုးဆေးရှိနေချိန်တွင် ၅ ရက်မြောက်နေ့နှင့် ၅ ရက်မြောက်နေ့တွင် နှောင့်နှေးမှုကို တိုင်းတာပါ။ ဒေတာသည် ပျမ်းမျှ ± SEM ကိုကိုယ်စားပြုသည်။ * သည် ကုသမှုအတွင်း ၁ ရက်နှင့် ၅ ရက်အကြား သိသာထင်ရှားသော ကွာခြားချက်ကို ညွှန်ပြသည်။ G၊ နာလောက်ဇုန်းကုသမှုသည် လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာအပြုအမူ၏ အကျိုးဖြစ်ထွန်းသောအကျိုးသက်ရောက်မှုများကို ပိတ်ဆို့ထားခြင်းရှိမရှိ စမ်းသပ်ရန် စမ်းသပ်မှုအတွက် စမ်းသပ်မှုဒီဇိုင်း။ H၊ မိတ်လိုက်ခြင်းမပြုမီ နာလောက်ဇုန်း သို့မဟုတ် ဆားရည်လက်ခံရရှိသော တိရစ္ဆာန်များအတွက် မိတ်လိုက်အတွဲလိုက်အခန်းတွင် စက္ကန့် (စက္ကန့်ဖြင့်) ကုန်ဆုံးချိန်။ ဒေတာသည် ပျမ်းမျှ ± SEM ကိုကိုယ်စားပြုသည်။ * သည် စမ်းသပ်မှုမတိုင်မီနှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက သိသာထင်ရှားသော ကွာခြားချက်ကို ညွှန်ပြသည်။

ပြသဒေတာများကိုလိင်ပိုင်းဆိုင်ရာအပြုအမူ၏ရေရှည်အားဖြည့်ဆုံးရှုံးမှုအပေါ် Mor ပိတ်ဆို့ထားခြင်း၏သက်ရောက်မှုနောက်ဆုံးမိတ်လိုက်စမ်းသပ်မှုနေ့၌ naloxone အုပ်ချုပ်ရေး၏မရှိခြင်းကနေလွတ်လပ်သောဖြစ်ပွားခဲ့သည်ကြောင်းဆုံးဖြတ်ရန်ကောက်ယူထိန်းချုပ်မှုစမ်းသပ်ချက်ကနေ intromission နှင့်သုတ်ရည်လွှတ် (စက္ကန့်) မှ latency များမှာ

VTA ရှိ endogenous opioid များသည် အတွေ့အကြုံကြောင့်ဖြစ်ပေါ်လာသော လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာအပြုအမူကို လွယ်ကူချောမွေ့စေပြီး ၎င်း၏ရေရှည်ထိန်းသိမ်းမှုကို ကြားဝင်ဆောင်ရွက်ပေးသည်။ ဆားရည် (Sal၊ အဖြူရောင်ဘားများ၊ n = 8) သို့မဟုတ် NLX (အနက်ရောင်ဘားများ၊ n = 6) ဖြင့် ကုသထားသော အထီးများအတွက် လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာအပြုအမူဆိုင်ရာ parameters များ။ ပြသထားသောဒေတာများသည် ငါးရက်ဆက်တိုက် မိတ်လိုက်သည့်နေ့၏ 1 နှင့် 5 ရက်များတွင် mount ရန် latency ( A )၊ intromission ( B ) နှင့် ejaculation ( C ) တို့ဖြစ်သည်။ ထို့အပြင်၊ ဆားရည် သို့မဟုတ် naloxone ထိုးဆေးမပါဘဲ 5 ရက်နောက် 7 ရက်အကြာတွင် နောက်ဆုံးမိတ်လိုက်စမ်းသပ်မှုနေ့အတွက် ဒေတာများကို ပြသထားသည်။ ဒေတာသည် ပျမ်းမျှ ± SEM ကိုကိုယ်စားပြုသည်။ + သည် ကုသမှုအတွင်း 1 နှင့် 5 ရက်အကြား သိသာထင်ရှားသောကွာခြားချက်ကို ညွှန်ပြသည်။ * သည် ကုသမှုအတွင်း စမ်းသပ်မှုနေ့နှင့် 5 ရက်အကြား သိသာထင်ရှားသောကွာခြားချက်ကို ညွှန်ပြသည်။ # သည် naloxone နှင့် Sal အုပ်စုများအကြား တစ်နေ့တာအတွင်း သိသာထင်ရှားသောကွာခြားချက်ကို ညွှန်ပြသည်။ Swanson Brain Maps (Swanson, 2004) မှ တင်းပလိတ်ပုံများကို အသုံးပြု၍ စမ်းသပ်မှု 5 ရှိ တိရစ္ဆာန်အားလုံးအတွက် (ဆားရည်၊ အဖြူရောင်၊ naloxone၊ အနက်ရောင်၊ မေ့သွားသော၊ မီးခိုးရောင်)၊ VTA အတွင်းထိုးဆေးထိုးသည့်နေရာများကို coronal VTA အပိုင်းများ၏ ပုံကြမ်း (H၊ −4.60; I၊ −5.00; J၊ −5.25 ) ၏ ပုံကြမ်းသည် ညွှန်ပြနေသည်။ Cannulas များသည် နှစ်ဖက်စလုံးဖြစ်သော်လည်း ပြသရလွယ်ကူစေရန်အတွက် ထိုးဆေးထိုးသည့်နေရာများကို တစ်ဖက်သတ်ဖော်ပြသည်။ fr, Fasciculus retroflexus; ML, Medial lemniscus; SN, substantia nigra.

လိင်နှင့်ဆက်စပ်သော conditioned cues များကြောင့် လှုံ့ဆော်ပေးသော NAc တွင် အာရုံကြောဆိုင်ရာ activation အတွက် endogenous opioid action လိုအပ်ပါသည်။ လိင် နှင့်ဆက်စပ်သော conditioned cues များ ကြောင့် ဖြစ်ပေါ်လာသော nucleus accumbens core ( A ) နှင့် shell ( B ^{) ရှိ mm2} လျှင် pERK-IR ဆဲလ်အရေအတွက်သည် လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာ naive (အဖြူရောင်) နှင့် အတွေ့အကြုံရှိ (Exp; အနက်ရောင်) တိရစ္ဆာန်များတွင် systemic NLX သို့မဟုတ် saline (Sal) ဖြင့် ကြိုတင်ကုသထားသော တိရစ္ဆာန်များ (Exp အထီးများ) တွင်ဖြစ်သည်။ အုပ်စုများကို Exp အထီးများတွင် မိတ်လိုက်ခြင်းနှင့်ဆက်စပ်သော cues များနှင့် Naive တိရစ္ဆာန်များတွင် neutral cues များဖြစ်သည့် contextual cues (Cue) များနှင့် ထိတွေ့စေခဲ့သည်၊ သို့မဟုတ် အိမ်လှောင်အိမ်များမှ ယူခဲ့သည် (No Cue; Cue-label မရှိခြင်းဖြင့် ညွှန်ပြသည်)။ အချက်အလက်များကို mean ± SEM အဖြစ် တင်ပြထားသည်။ * saline-pretreated no cue-exposed controls (Naive Sal-No Cue နှင့် Exp Sal-No Cue) နှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက သိသာထင်ရှားသော ကွာခြားချက်ကို ညွှန်ပြသည်။ # သည် Sal-treated Cue-exposed Exp အုပ်စု (Exp Sal+Cue) နှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက သိသာထင်ရှားသော ကွာခြားချက်ကို ညွှန်ပြသည်။ Sal ( C , D ) သို့မဟုတ် NLX ( E , F ) ရှိသော လိင်ဆက်ဆံမှုအတွေ့အကြုံရှိသော အထီးများ၏ NAc core ရှိ mm2 လျှင် ^pERK -IR ဆဲလ်များ၏ ကိုယ်စားပြုပုံများကို အိမ်လှောင်အိမ်မှ ရယူထားသည် (No Cue, C, E) သို့မဟုတ် မိတ်လိုက်ခြင်းနှင့်ဆက်စပ်သော အခြေအနေဆိုင်ရာ အချက်ပြမှုများ (Cue; D , F ) နှင့် ထိတွေ့ထားသည်။ Naive NLX (No Cue)၊ n = 3 မှလွဲ၍ အုပ်စုတစ်ခုစီတွင် N = 4။ ac, Anterior commissure။ Scale bar, 100 μm။

အခြား VTA ပစ်မှတ်ဒေသများတွင် မိတ်လိုက်ခြင်းကြောင့်ဖြစ်ပေါ်လာသော pERK ဖော်ပြမှုအပေါ် naloxone ၏ အကျိုးသက်ရောက်မှုများ။ မိတ်လိုက်ချိန်များအတွင်း စနစ်တကျ NLX သို့မဟုတ် saline (Sal) ဖြင့် ကြိုတင်ကုသထားပြီး ACA တွင် ဆက်စပ်အချက်ပြမှုများ (Cue) သို့မဟုတ် home cage (အချက်ပြမှုမရှိ) နှင့် ထိတွေ့ခဲ့ရသော လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာ အတွေ့အကြုံမရှိသော (အဖြူရောင်) နှင့် အတွေ့အကြုံရှိ (Exp; အနက်ရောင်) တိရစ္ဆာန်များတွင် mm2 လျှင် pERK-IR ဆဲလ်အရေအတွက် (A), PL (B), IL (C), နှင့် BLA (D)။ ဒေတာများသည် ပျမ်းမျှ ± SEM ကိုကိုယ်စားပြုသည်။ * သည် saline ကြိုတင်ကုသထားသော cue မပါသော ထိန်းချုပ်မှုများ (Naive Sal-No Cue နှင့် Exp Sal-No Cue) ^{နှင့်} နှိုင်း ယှဉ် ပါ က သိသာ ထင်ရှားသော ကွာခြားချက် ကို ညွှန်ပြသည်။ # သည် Sal ကုသထားသော cue ထိတွေ့ခဲ့ရသော လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာ အတွေ့အကြုံမရှိသော ထိန်းချုပ်မှုများ (Naive Sal+Cue) နှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက သိသာထင်ရှားသော ကွာခြားချက်ကို ညွှန်ပြသည်။