PSMC5 တစ် 19S Proteasomal ATPase သည်နျူကလိယ Accumbens အတွက်ကင်းလှုပ်ရှားမှု (2015) ထိန်းညှိ

PLoS တစ်ခုမှာ။ 2015 မေလ 11; 10 (5): e0126710 ။ Doi: 10.1371 / journal.pone.0126710 ။ eCollection 2015 ။

Ohnishi YH1, Ohnishi yn2, Nakamura T က3, Ohno သည် M က4, ကနေဒီ PJ5, Yasuyuki အို6, Nishi တစ်ဦးက7, Neve R ကို8, Tsuzuki T က4, Nestler EJ5.

ြဒပ်မဲ့သော

osFosB သည်ကိုကင်းနှင့်အခြားအလွဲသုံးစားမှုမူးယစ်ဆေးဝါးများကိုနာတာရှည်ထိတွေ့မှုကြောင့် ဦး နှောက်၏ဆုလာဘ်အစီအစဉ်၏အဓိကအစိတ်အပိုင်းဖြစ်သောနျူကလိယ accumbens (NAc) တွင်စုဆောင်းထားသည့်တည်ငြိမ်သောကူးယူဖော်ပြသည့်အချက်ဖြစ်သည်။ familyFosB သည်ဇွန်မိသားစု ၀ င်တစ် ဦး နှင့်တက်ကြွစွာကူးယူထားသည့်အချက်ရှုပ်ထွေးသောဖွဲ့စည်းမှုကိုဖော်ဆောင်ခြင်းအားဖြင့်ပိုမိုသဘောကျကြောင်းသိသော်လည်း ဦး နှောက်အတွင်းရှိ possibleFosB အတွက်အခြားဖြစ်နိုင်ချေရှိသောတွဲဖက်လုပ်ကိုင်သူများအားပွင့်ပွင့်လင်းလင်းရှာဖွေခြင်းမရှိသေးပါ။ ဒီနေရာမှာတဆေးနှစ်မျိုးစပ်တဲ့ assay ကိုအသုံးပြုခြင်းအားဖြင့် PSMC5 ကို - SUG1 လို့လည်းသိကြပါတယ်။ ATPase ပါဝင်တဲ့ 19S proteasomal ရှုပ်ထွေးသော - FosB နှင့်ပရိုတိန်းများအပြန်အလှန်ဆက်သွယ်တဲ့ဝတ္ထုတစ်ခုဖြစ်တယ်။ ကျနော်တို့ NAc အတွက် endogenous -FosB နှင့် PSMC5 အကြားထိုကဲ့သို့သော interaction ကအတည်ပြုရန်နှင့်နှစ် ဦး စလုံးပရိုတိန်းလည်းဗီဇ activation နှင့်ဆက်စပ်သောအခြား chromatin စည်းမျဉ်းပရိုတိန်းနှင့်အတူရှုပ်ထွေးသောဖွဲ့စည်းရန်သရုပ်ပြခဲ့သည်။ နာတာရှည်ကိုကင်းသည်နျူကလီးယားတိုးပွားစေသော်လည်း cytoplasmic မဟုတ်ဘဲ NAc ရှိ PSMC5 အဆင့်ကိုပြသသည်။ ဤ ဦး နှောက်ဒေသရှိ PSMC5 ၏အလွန်အကျွံထုတ်ဖော်ခြင်းသည်ကိုကင်းအားစက်ခေါင်းမှတုံ့ပြန်မှုကိုတိုးပွားစေသည်။ အတူတူ, ဒီတွေ့ရှိချက် osFosB ၏လုပ်ရပ်များကိုအထောက်အကူပြုရန်နှင့်, ပထမ ဦး ဆုံးအကြိမ်အဘို့, ကိုကင်း - သွေးဆောင်မော်လီကျူးနှင့်အပြုအမူပလပ်စတစ်အတွက် PSMC5 ဆိုလိုကြောင်းတစ် ဦး ဝတ္ထုယန္တရားဖော်ပြရန်။

ကိုးကား: Ohnishi YH, Ohnishi yn, Nakamura T က, Ohno သည် M က, ကနေဒီ PJ, Yasuyuki အို et al ။ (2015) PSMC5 တစ် 19S Proteasomal ATPase သည်နျူကလိယ Accumbens အတွက်ကင်းလှုပ်ရှားမှုထိန်းညှိ။ PLoS ONE 10 (5): e0126710 ။ Doi: 10.1371 / journal.pone.0126710

ပညာရေးဆိုင်ရာအယ်ဒီတာ: ဂျိမ်း Edgar McCutcheon, Leicester တက္ကသိုလ်, United Kingdom

Received: ဒီဇင်ဘာလ 10, 2014; လက်ခံခဲ့သည်: ဧပြီလ 7, 2015; Published: မေလ 11, 2015

မူပိုင်: © 2015 Ohnishi et al ။ ဒါက၏စည်းကမ်းချက်များအောက်မှာဖြန့်ဝေကာပွင့်လင်း access ကိုဆောင်းပါးဖြစ်ပါသည် ကို Creative Commons Attribution လိုင်စင်, အရာမရှိသောအသုံးပြုမှုကိုခွင့်ပြု, ဖြန့်ဖြူးခြင်း, မည်သည့်အလတ်စားအတွက်မျိုးပွား, မူရင်းစာရေးသူနှင့်အရင်းအမြစ်ထောက်ပံ့အသိအမှတ်ပြုကြသည်

ဒေတာကိုရရှိနိုင်: အားလုံးသက်ဆိုင်ရာဒေတာတွေကိုစက္ကူအတွင်းဖြစ်ကြသည်။

ရန်ပုံငွေရှာခြင်း: ဤလုပ်ငန်းကိုအမျိုးသားသိပ္ပံ (KAKENHI နံပါတ်များ: 24591735, 26290064, 25116010) မူးယစ်ဆေးဝါးအလွဲသုံးမှုပေါ်နှင့် Ishibashi ဖောင်ဒေးရှင်းနှင့်ဂျပန်လူ့အဖွဲ့အစည်းများကသိပ္ပံ၏မြှင့်တင်ရေးအဘို့, ကနျြးမာရေးအမျိုးသား Institutes ထံမှထောက်ပံ့ငွေကထောက်ခံခဲ့သည်။ အဆိုပါဒကာလေ့လာမှုဒီဇိုင်း, အချက်အလက်စုဆောင်းခြင်းနှင့်ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာ, ထုတ်ဝေရန်ဆုံးဖြတ်ချက်သို့မဟုတ်လက်ရေးမူများမှာတွေ့နိုင်ပါတယ်၏ပြင်ဆင်မှုမရှိအခန်းကဏ္ဍရှိခဲ့ပါတယ်။

ယှဉ်ပြိုင်အကျိုးစီးပွား: စာရေးသူအဘယ်သူမျှမယှဉ်ပြိုင်အကျိုးစီးပွားတည်ရှိကြောင်းကြေငြာခဲ့ကြသည်။

နိဒါန္း

ΔFosBသည်တစ်ဦးခြင်းကိုထုတ်ကုန် FosB မျိုးရိုးဗီဇကိုလည်းက c-Fos full-အရှည် FosB, Fra-1 နှင့် Fra-2 ပါဝင်သည်ထားတဲ့ကူးယူအချက်များ၏ Fos မိသားစုကပိုင်ဆိုင်သည်။ ΔFosBအခြား Fos ပရိုတိန်းကဲ့သို့သတ်သတ်မှတ်မှတ်ပစ်မှတ်မျိုးဗီဇ၏ဟူသောအသုံးအနှုနျး induces သို့မဟုတ် represses သည့်တက်ကြွ AP-1 (active ပရိုတိန်း-1) ကူးယူအချက်ရှုပ်ထွေးသော, ဖွဲ့စည်းရန် JunD-တစ်ဦးဇွန်လမိသားစုပရိုတိန်း-က c-ဇွန်, JunB, ဒါမှမဟုတ်နှင့်အတူ heterodimerizes [1,2].

ΔFosB [မူးယစ်ဆေးစွဲနေတဲ့သော့ချက်အခန်းကဏ္ဍမှပြသထားသည်2] ။ ထူးခြား Fos မိသားစုပရိုတိန်းတို့က [ကြောင့်တည်ငြိမ်မှု၎င်း၏အဆင့်မြင့်ဖို့ထပ်ခါတလဲလဲမူးယစ်ဆေးအုပ်ချုပ်မှုအပြီးနျူကလိယ accumbens (NAc) နှင့်အခြားဆုလာဘ်-related ဦးနှောက်ဒေသများအတွင်းစုဆောင်း3,4] အများအပြားပရိုတိန်း kinases အားဖြင့် C-terminal ကို degron domains များမရှိခြင်းအားဖြင့်၎င်း, phosphorylation ကကမကထပြုခဲ့သော [5-7] ။ အဆိုပါ NAc အာမခံအတွက်ΔFosB၏ထိုကဲ့သို့သောသော induction အလွဲသုံးစားမှုမူးယစ်ဆေးဝါးများမှအမူအကျင့်တုံ့ပြန်မှုတိုးတက်လာခဲ့သည်။ ထို့ကြောင့်အရွယ်ရောက်တိရိစ္ဆာန်များ၏ဤဦးနှောက်ဒေသတွင်း၌ΔFosB၏ overexpression, ဖြစ်စေဗိုင်းရပ်စ် virus သယ်ဆောင်သို့မဟုတ်သွေးဆောင် bitransgenic ကြွက်၏အသုံးပြုမှုကိုအသုံးပြုပုံ Self-အုပ်ချုပ်ရေးမှူးဖို့ locomotor-ကိုသက်ဝင်နှင့်ကိုကင်းနှင့်အ opiates ၏အကြိုးသက်ရောက်မှုတစ်ခုတိရိစ္ဆာန်ရဲ့ sensitivity အဖြစ်တိရိစ္ဆာန်ရဲ့လှုံ့ဆျောမှုတိုးပွါး ကိုကင်း [7-11] ။ ပြောင်းပြန်ΔFosB၏ကြီးစိုးအနုတ်လက္ခဏာရန်၏ overexpression [ဆန့်ကျင်ဘက်အမူအကျင့် phenotypes ဖြစ်ပေါ်စေသည်10-12].

ကျနော်တို့နှင့်အခြားသူများယခင်က [JunD နှင့်ဖြစ်ကောင်းသည်အခြားဇွန်မိသားစုပရိုတိန်း Vivo အတွက်ဦးနှောက်ထဲမှာΔFosB၏အဓိကစည်းနှောင်မိတ်ဖက်ဖြစ်ကြောင်းကို, လိမ်းဆေးပြောင်းကုန်ပြီ assay ၏အသုံးပြုမှုကိုအသုံးပြုပုံအတည်ပြုနိုင်ပါပြီ13-15] ။ သို့သော်ယနေ့အထိ, ဦးနှောက်ထဲမှာΔFosBရဲ့စည်းနှောင်မိတ်ဖက်တစ်ဦးဖွင့်, ဘက်မလိုက်အကဲဖြတ်ပေးခြင်းမရှိပေ။ ဒီနေရာမှာကျွန်တော်တစ်ဦးတဆေးကို Two-စပ် assay အသုံးပြုခြင်းဖြင့်ΔFosBများအတွက်မိတ်ဖက် binding ဝတ္ထုခွဲခြားသတ်မှတ်ပေးဖို့ကြိုးစားခဲ့ [16,17] ။ ကျွန်ုပ်တို့၏ data တွေကိုလည်း SUG5 အဖြစ်လူသိများ PSMC1, နှစ်ဦးစလုံးအတွက်စသည်တို့ကြောင့်လည်း CBP (CREB binding ပရိုတိန်းများပါဝင်သည်သောကိုကင်း-သွေးဆောင်ကူးယူ activation ရှုပ်ထွေးသော၏အစိတ်အပိုင်းတစ်ရပ်အဖြစ်ΔFosBပူးပေါင်းမည်ဘယ်မှာ Vivo အတွက် NAc အတွက်ΔFosBတစ်ခိုင်မာတဲ့မိတ်ဖက်ကြောင်းထင်ရှား ) နှင့် p300-နှစ်ဦးစလုံး histone acetyltransferases (ဦးထုပ်) BRG1 (က chromatin ပြုပြင်ပရိုတိန်း) ကဲ့သို့ကောင်းစွာအဖွစျ။ ကျနော်တို့ NAc အတွက်ကင်းမှနာတာရှည်ထိတွေ့ PSMC5, အ 19S proteasomal ရှုပ်ထွေးတစ်ခု ATPase ပါဝင်သော subunit ၏နျူကလီးယားအဆင့်ဆင့်ပွောငျးလဲကြောင်းပြ PSMC5 အလှည့်အတွက်ကင်းရန်အမူအကျင့်တုံ့ပြန်မှုကိုထိန်းချုပ်ထားကြောင်းပေါ်သွားပါ။

ပစ္စည်းနှင့်နည်းစနစ်များ

တဆေးကို Two-စပ်စိစစ်

MaV203 တဆေးဆဲလ် (Invitrogen ဘဝ Technologies က) pDBLeu အဆိုပါΔFosBပရိုတိန်း၏ကွဲပြားခြားနားသောအကျိုးအပဲ့ကိုမောင်းနှင်နှင့်အတူပူးတွဲ transfected ရှိ. , မောက်ဦးနှောက်စာကြည့်တိုက် pPC86 (Invitrogen ဘဝ Technologies က) တွင် subcloned ခဲ့သည်။ အသွင်ပြောင်းဆဲလ် SC-အလတ်စားချို့တဲ့ leucine, tryptophan နှင့် histidine အပေါ်စိုက်ပျိုးနှင့် 10-aminotriazole ၏ 3 MM င်ခဲ့ကြသည်။ FosB အပိုင်းအစများနှင့်ကိုယ်စားလှယ်လောင်းမိတ်ဖက်များအကြား binding (သုံးသတင်းထောက်ဗီဇ inducesHis3, Ura3နှင့် LacZ), နှင့် induction အသုံးပြုသောယဉ်ကျေးမှုအခြေအနေများအောက်တွင်ရှင်သန်ရပ်တည်ရန်ေူပာင်းလဲရေးကိုနိုင်ခဲ့စေသည်။ positive Clone MaV203 ဆဲလ်တွေမှာရှိတဲ့ retransformation assay အားဖြင့်လတ်ဆတ်တဲ့ pDBLeu-ΔFosBအပိုင်းအစများနှင့်အတူ retested ခဲ့ကြသည်။

cell လိုင်းများ

Mouse Neuro 2A neuroblastoma ဆဲလ်များ (ATCC) ကို Eagle ၏အနည်းဆုံးမရှိမဖြစ်လိုအပ်သည့်အလတ်စား (EMEM) တွင်ထိန်းသိမ်းထားသည်။ ၁၀% တွင်သန္ဓေသား bovine serum (FBS) နှင့် ၃၇ ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်နှင့် ၅% CO တို့တွင်ဖြည့်စွက်ထားသည်။2။ ကြွက် 1A ဆဲလ် [Yusaku Nakabeppu (Fukuoka, ဂျပန်) မှလက်ဆောင်ခဲ့ကြသည်18] နှင့် 10 ° C နဲ့ 37% CO မှာ 5% FBS နှင့်အတူဖြည့်ဆည်း, Dulbecco ရဲ့ Mem (DMEM) (ဘဝ Technologies က) တွင်ထိန်းသိမ်းထား2။ plasmid DNA ကိုအတူဆဲလ် Transfection ထုတ်လုပ်သူရဲ့ညွှန်ကြားချက်အတိုင်း Effectene (Qiagen) ကို အသုံးပြု. ပြည့်စုံခဲ့သည်။

PSMC5 နှင့်ΔFosB Construction

PSMC5 စီအလံ-tagged သူတို့ရဲ့ N-terminus မှာအတော်ကြာ Mutant ပုံစံများ, immunoprecipitative သို့မဟုတ်ဗိုင်းရပ်စ်-mediated ဗီဇလွှဲပြောင်းစမ်းသပ်ချက်များတွင်အသုံးပြုရန်ထုတ်ပေးခဲ့ကြသည်။ ဤရွေ့ကားပါဝင်သည်: PSMC5-K196M, (အမိုင်နိုအက်ဆစ် 5-5 ချို့တဲ့ PSMC27-ΔCC) PSMC68-Δcoiled-ကွိုင်ဒိုမိန်း PSMC5-NT (ထိုပရိုတိန်းများ N-terminal ကိုအပိုင်းအစပါဝင်သည်ဟု, အမိုင်နိုအက်ဆစ် 1-151), နှင့် PSMC5 (ထိုပရိုတိန်းများ C-terminal ကိုအပိုင်းအစ, 172 အမိုင်နိုအက်ဆစ်များပါဝင်သည်ဟု) -CT (ကြည့်ရှု သင်္ဘောသဖန်း 1) ။ ငါတို့သည်လည်း [N-terminal ကို MYC-Tagged wildtype ΔFosB၏ပုံစံများအဖြစ်ဇွန်လမိသားစုပရိုတိန်းနှင့်အတူ heterodimerization ဖျက်ဆီးသိသော 182 မှအမိုင်နိုအက်ဆစ်များက၎င်း၏ leucine-ဇစ်ဒိုမိန်း (mutation 205 အတွက် mutation နှင့်အတူΔFosBအသုံးပြုသွားမည်6].

thumbnail ကို
သင်္ဘောသဖန်း 1 ။ ΔFosBစသည်တို့အတွက် PSMC5 မှချည်နှောင်။

 

အဆိုပါΔFosB N-terminus ၏ပထမဦးဆုံး 2 အမိုင်နိုအက်ဆစ်ကင်းမဲ့ရာΔFosB၏အေသိထားသည် leucine ဇစ်ဒိုမိန်းဇွန်ပရိုတိန်းနှင့်အတူΔFosB heterodimerization ဖျက်ဆီးဖို့ mutated သောΔFosB-LZM နှင့်Δ78ΔFosB။ PSMC5, PSMC5 ၏ပထမဦးဆုံး 151 အမိုင်နိုအက်ဆစ်ကင်းမဲ့ရာ PSMC5-CT, နှင့် coil-ကွိုင်ဒိုမိန်း (အမိုင်နိုအက်ဆစ် 5-235) ကင်းမဲ့ရာ PSMC5-ΔCC၏ပထမဦးဆုံး 5 အမိုင်နိုအက်ဆစ်ပါဝင်သည်ရာ PSMC28 ၏ခသိထား, PSMC68-NT ။ အဆိုပါ AAA ဒိုမိန်းတစ်ဦး motif, များစွာသော ATPases အတွက်ပစ္စုပ္ပန်ကွဲပြားခြားနားဆယ်လူလာလှုပ်ရှားမှုများနှင့်အတူ ATPases Associated မှကိုက်ညီ။ pcDNA2.4-ΔFosB (လမ်းကြောင်း 3.1-1) ၏ C. 4 μgသို့မဟုတ်ΔFosB-LZM (5 Lane) Neuro2.4a ဆဲလ်သို့ Flag-tagged PSMC5 သို့မဟုတ်အမျိုးမျိုးသောဖျက်မှု Mutant ၏ 2 μgနှင့်အတူပူးတွဲ transfected ဖြစ်ခဲ့သည်။ နှစ်ရက် transfection ပြီးနောက်ဆဲလ် lysed ခဲ့ကြသည်နှင့်အ immunoprecipitative အကြောင်းမဲ့ anti-အလံ antibody ကိုအတူပြီးတော့အနောက်တိုင်းဆန့်ကျင်ΔFosBသို့မဟုတ် Anti-အလံ antibody ကိုအတူပေါစနှေငျ့။ ΔFosB, ဒါပေမယ့်မရΔFosB-LZM, PSMC5 သို့မဟုတ် PSMC5-NT ဖို့စေ့စ့စပ်စပ်ချည်နှောင်ပေမယ့်မပေး PSMC5-CT သို့မဟုတ် PSMC5-ΔCCကြောင်း။ မှတ်ချက် အဆိုပါကိန်းဂဏန်းမှာပြထားတဲ့ဒေတာသုံးသီးခြားစမ်းသပ်မှုတွေ၏တစ်ဦးချင်းစီအတွက် triplicate ပုံတူမဖြစ်တော့ဘူးခဲ့ကြသည်။

Doi: 10.1371 / journal.pone.0126710.g001

တိရစ္ဆာန်များ

11-ရက်သတ္တပတ်အရွယ် C57BL / 6J အထီးကြွက် (အဆိုပါ Jackson ကဓါတ်ခွဲခန်း) မှ Nine- အားလုံးစမ်းသပ်ချက်အတွက်အသုံးပြုခဲ့သည်။ တိရစ္ဆာန်များအစားအစာနှင့်ရေမှဝင်ရောက်ခွင့်နှင့်အတူတစ်ဦး 12-ဇအလင်း-မှောင်မိုက်သံသရာအပေါ်သျောခဲ့ကြသည် ကြော်ငြာ libitum နှင့်လက်တွေ့စမ်းသပ်ချက်မတိုင်မီ 1 ရက်သတ္တပတ် habituated ခဲ့ကြသည်။ နှစျဦးကိုကင်းကုသမှု regimen အသုံးပြုခဲ့ကြသည်။ ကိုကင်းများ၏ထဲကဓာတုပစ်စညျးသက်ရောက်မှုကိုလေ့လာရန်, အိမ်မွေးတိရစ္ဆာန်ကိုကင်းများ၏ 7 နေ့စဉ်ဆေးများပေးခဲ့သို့မဟုတ်ဆား (20 / ကီလိုဂရမ် mg), နှင့်ပြီးခဲ့သည့်ဆေးထိုးပြီးနောက်ယင်းသို့ခေါင်းဖြတ်စီရင် 24 နာရီအားဖြင့်သေဆုံးခဲ့ရသည်။ ဒါက [မူးယစ်ဆေးမှမြောက်မြားစွာမော်လီကျူးများနှင့်ဆယ်လူလာတုံ့ပြန်မှုထုတ်လုပ်ပြသခဲ့ပြီးသောစံ protocol ကိုဖြစ်ပါသည်7] ။ ကိုကင်းရန်အမူအကျင့်တုံ့ပြန်မှုအပေါ်နျူကလိယ accumbens အတွက် PSMC5 ၏သြဇာလွှမ်းမိုးမှုလေ့လာဖို့, ကျနော်တို့ (7.5 ကီလိုဂရမ် / mg; အောက်တွင်ဖော်ပြထားသော Locomotor ာင်းကိုကြည့်ပါ) မူးယစ်ဆေးတစ်ခု subthreshold ထိုးအသုံးပြုသော PSMC5, ΔFosBလိုပဲတစ်ခုတိရိစ္ဆာန်ရဲ့ sensitivity တိုးမြှင့်မည်ဟုသောအယူအဆပေါ်တွင်အခြေခံ ကိုကင်း [8] ။ အားလုံးတိရစ္ဆာန်အစမ်းသပ်ချက်သိနာတောင်ပေါ်မှာ Institutional တိရိစ္ဆာန်စောင့်ရှောက်မှုနှင့်အသုံးပြုမှုကော်မတီကအတည်ပြုပေးခဲ့သည်။

immunoprecipitative နှင့်အနောက်တိုင်းချေ

Neuro 2A ဆဲလ် PSMC5 ၏ wildtype သို့မဟုတ် Mutant ပုံစံများနှင့်အတူ transfected ခဲ့ကြသည်။ နှစ်ရက် transfection ပြီးနောက်ဆဲလ် RIPA ကြားခံ (50 MM Tris သော pH 7.4, 150 MM NaCl, 1 MM EDTA, 1% NP-40, 0.25% ဆိုဒီယမ် deoxycholate, 10 MM ဆိုဒီယမ် butyrate, protease inhibitor ကော့တေး) တွင် lysed, PBS အတွက်ကိုဆေးကြောခဲ့သည် ။ Lysates 3 ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်မှာ 4 နာရီများအတွက် nonimmune IgG (Sigma) သို့မဟုတ် Anti-အလံပဋိ (Sigma) တစ်ခုခုကိုနှင့်အတူခွဲထွက်ခြင်းနှင့်နွေးထွေးစွာရှိနေပြီးခဲ့ကြသည်။ ဖော်ပြထားသကဲ့သို့ immunoprecipitative ပရိုတိန်း, G ပုတီး (Invitrogen) နဲ့ဖျော်ဖြေခဲ့ပါတယ် [19] ။ အတိုချုပ်, immunoprecipitated ပရိုတိန်းထုတ်ဝေ protocol များပေါ်တွင်အခြေခံ Anti-FosB / ΔFosB antibody ကို (ဆဲလ် signal နည်းပညာ) ကို အသုံးပြု. SDS-စာမကျြနှာမှအကြောင်းမဲ့နှင့်အနောက်တိုင်းချေအားဖြင့်သုံးသပ်ခဲ့ကြသည် [7] ။ assay binding အတွက် Vivo ပရိုတိန်းအဘို့, ကျနော်တို့ (ကြွက်ကနောက်ဆုံးဆေးထိုးပြီးနောက် 20 နာရီအသုံးပြုသောနှင့်အတူ 7, 24 နေ့ရက်ကာလအဘို့နေ့စဉ် / ကီလိုဂရမ် IP ကို ​​mg) နာတာရှည်ကင်းကုသမှုပြီးနောက်ကြွက်၏လာကြတယ်-ခွဲဖြာ NAc ကနေသန့်နျူကလီးယားပိုငျးကိုအသုံးပြုခဲ့သည်။ နြူကလီးယားအပိုငျးကနေ co-immunoprecipitative ထုတ်လုပ်သူရဲ့ညွှန်ကြားချက်အောက်ပါနျူကလီးယား Complex co-IP ကိုကိရိယာအစုံ (Active ကို motif) ကို အသုံးပြု. ဖျော်ဖြေခဲ့သည်။ အောက်ပါပဋိအသုံးပြုခဲ့ကြသည်: MYC သို့မဟုတ် SS-actin, ဆဲလ် signal နည်းပညာ (Danvers, MA), PSMC5 နှင့် histone H3, Abcam (ကိန်းဘရစ်, MA), CBP, p300 နှင့် BRG1, Santa Cruz ဇီဝနည်းပညာ (Santa Cruz,, CA) နှင့် အလံ M2, Sigma ။

Immunohistochemistry

Immunohistochemistry [ထုတ်ဝေလုပျထုံးလုပျနညျးအရသိရသည်ဖျော်ဖြေခဲ့သည်20] ။ ကြွက် anesthetized နှင့် PBS အတွက် 4% paraformaldehyde နှင့်အတူ intracardially perfused ခဲ့ကြသည်။ ဦးနှောက် 30% sucrose နှင့်အတူ cryoprotected, ပြီးတော့အေးစက်နေတဲ့နှင့်အသုံးပြုမှုသည်အထိ -80 ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်မှာသိမ်းဆည်းထားခဲ့ကြသည်။ မှု Coronal အပိုင်း (40 μm) တစ်ဦး cryostat အပေါ်ဖြတ် immunohistochemistry များအတွက်လုပ်ငန်းများ၌ခဲ့ကြသည်။ အခမဲ့-floating ကဏ္ဍများ 0.3% ထရီနှင့် 3% ပုံမှန်မြည်းသွေးရည်ကြည်င်တစ်ဦးပိတ်ဆို့ခြင်းကြားခံအတွက် Pre-နွေးထွေးစွာရှိနေပြီးခဲ့ကြသည်။ ΔFosBပရိုတိန်း (1 / 1000 Santa Cruz ဇီဝနည်းပညာ) ၏ N-terminal ကိုအဘို့ကိုဆန့်ကျင်ကြီးပြင်းဆိတ် polyclonal antibody ကိုသုံးပြီးရှာတွေ့ခဲ့သည်။ PSMC5 တစ်ယုန် polyclonal antibody ကို (1 / 100 Abcam, ကင်းဘရစ်, MA) ကို အသုံးပြု. ရှာဖွေတွေ့ရှိခဲ့သည်။ ပုံရိပ်တွေဟာ confocal ဏု (; Zeiss 60x ချဲ့) နဲ့ခေါ်ဆောင်သွားခဲ့သည်။

Locomotor ာင်း

အားလုံးကြွက်ဟာထိုး၏စိတ်ဖိစီးမှုသူတို့ကို habituate မှ 3 နေ့ရက်ကာလအဘို့ဆား၏နေ့စဉ် IP ကိုထိုးလက်ခံရရှိခဲ့သည်။ နှင့်ဝတ္ထု locomotor သေတ္တာသို့ချက်ချင်းထားရှိ; နက်ဖြန်နေ့၌, ကြွက်ဆားသို့မဟုတ်ကင်းတဲ့ subthreshold ထိုးနှင့်အတူ IP ကိုထိုးသွင်းခဲ့ကြ (အထက်တိရစ္ဆာန်များအောက်မှာတွေ့မြင် 7.5 ကီလိုဂရမ် / mg) ။ အဆိုပါကြွက်များ၏ locomotor လှုပ်ရှားမှု 30 မိဘို့လူနာရောင်ခြည်လပ်ချိန်အဖြစ် photobeam စနစ်အား အသုံးပြု. မှတ်တမ်းတင်ဖေါ်ပြခဲ့ပါတယ်။ ဤရွေ့ကားကုသမှု 3 နေ့ရက်ကာလအဘို့နေ့စဉ်ထပ်ခါတလဲလဲခဲ့ကြသည်။

ဗိုင်းရပ်စ်-mediated ဗီဇလွှဲပြောင်း

ကျနော်တို့ [ဗိုင်းရပ်စ်-mediated ဗီဇလွှဲပြောင်းဘို့ကျယ်ကျယ်ထုတ်ဝေနည်းလမ်းများအသုံးပြုခဲ့7,8,11,19] ။ အတိုချုပ်, PSMC5 များအတွက်သို့မဟုတ်ယင်း၏ Mutant အတော်ကြာများအတွက်စကားရပ် plasmids (PSMC5 နှင့်ΔFosBအထက်တွင် constructs ကြည့်ပါ) ၏အောက်၌ bicistronic p1005 (+) HSV အဆိုပါ CMV ကမကထများ၏ထိန်းချုပ်မှုအောက်တွင် GFP ဖော်ပြ plasmid နှင့် PSMC5 သို့မဟုတ်ယင်း၏ Mutant သို့ subcloned ခဲ့ကြသည် IE4 / 5 ကမကထ။ ketamine အောက် (100 / ကီလိုဂရမ် mg) / xylazine (10 မီလီဂရမ် / ကီလိုဂရမ်) မေ့ဆေး, ကြွက်ငယ်လေးတစ်-တိရိစ္ဆာန် stereotaxic တူရိယာထဲမှာနေရာယူထားခဲ့ကြသည်, ထို cranial မျက်နှာပြင်ထိတွေ့ခဲ့သည်။ ပြွတ်တစ်ခါသုံးဆေးထိုးအပ်မြန်မာနိုင်ငံသထောင့်ဒီဂရီတစ် 0.5 မှာ NAc သို့တစ်ဦး HSV အားနည်းချက်ကို၏μl 10 မသွားအောင်ရန်အသုံးပြုခဲ့ကြသည်သုံးဆယ်သုံးရက် gauge (AP + 1.6; ML + 1.5; DV -4.4) μl / မိနစ် 0.1 တစ်မှုနှုန်းမှာ။ HSV ထိုးလက်ခံရရှိတိရစ္ဆာန်များလက်တွေ့စမ်းသပ်ချက်မတိုင်မီခွဲစိတ်အောက်ပါ 2 နေ့ရက်ကာလအဘို့ကိုပြန်လည်ဖေါ်ထုတ်ရန်ခွင့်ပြုခဲ့သည်။

စာရင်းအင်း

ANOVAs နှင့်ကျောင်းသား၏ t-test များကို သုံး၍ နှိုင်းယှဉ်မှုများအတွက်ပြင်ဆင်ခဲ့ပြီးအရေးပါမှုကို p <0.05 ဟုသတ်မှတ်သည်။

ရလဒ်များ

PSMC5: ΔFosB၏ဝတ္ထုစည်းနှောင်မိတ်ဖက်

ကျနော်တို့စနစ်က autoactivating မရှိဘဲတဆေးကို Two-စပ် assay အတွက်ငါးစာအဖြစ်တာဝန်ထမ်းဆောင်ကြောင်းΔFosBတစ်ဦးသင့်လျော်သောအပိုင်းအစကိုသိရှိနိုင်ဖို့ပဏာမစမ်းသပ်ချက်ဖျော်ဖြေခဲ့ပါတယ်။ ၎င်း၏ကိုယ်ပိုင်အပေါ်ဟိုလို-ΔFosBသွေးဆောင်သတင်းထောက်ဗီဇလှုပ်ရှားမှု, ပရိုတိန်း၏ N-terminal ကို 1-78 အမိုင်နိုအက်ဆစ်အပိုင်းအစပြုသကဲ့သို့။ သို့သော်တစ်ဦး N-terminal ကိုခြင်းကိုΔFosB (သင်္ဘောသဖန်း 1A), ပရိုတိန်း၏ပထမဦးဆုံး 2 အမိုင်နိုအက်ဆစ်ကင်းမဲ့ရာΔ78ΔFosB, ဤအကျိုးသက်ရောက်မှုရှိသည်မဟုတ်ခဲ့ပါချေါ။ ထို့ကြောင့်, ကျနော်တို့ကငါးစာပရိုတိန်းအဖြစ်Δ2ΔFosBကိုအသုံးပြုခဲ့သည်။

အလားအလာစည်းနှောင်မိတ်ဖက်များအတွက်မျက်နှာပြင်, ငါတို့ pPC86 အတွက် subcloned မောက်ဦးနှောက်စာကြည့်တိုက်ကိုအသုံးပြုခဲ့သည်။ ကျနော်တို့စည်းနှောင်မိတ်ဖက်များအတွက် 11 ကိုယ်စားလှယ်လောင်းများဖော်ထုတ်ခဲ့သည်။ ဒီပရိုတိန်းΔFosBရဲ့လူသိများ heterodimerization မိတ်ဖက်, က c-ဇွန်လနှင့် JunD (ပါဝင်သည်ပေမယ့်စားပွဲတင် 1), ဝေးနေဖြင့်အများဆုံးပျံ့နှံ့ကိုယ်စားလှယ်လောင်း PSMC5 ဖြစ်ခဲ့သည်။ အံ့သြစရာနေစဉ် PSMC5 က c-Fos အတွက်စသည်တို့ [မှခညျြနှောငျဖို့လွန်ခဲ့တဲ့နှစ်ပေါင်းတစ်ခုတည်းအစီရင်ခံစာမှာပြသခံခဲ့ရကတည်းက, ဒီတစ်ခုစိတ်ဝင်စားဖို့တွေ့ရှိချက်ခဲ့သည်21] ။ သို့သျောလညျးကိုကင်းအရေးယူအတွက် PSMC5 ပါဝင်ပတ်သက်မှုမရှိကြိုတင်အစီရင်ခံရှိပါတယ်။ မည်သို့ပင်ဆိုစေကာ, ဘာဖြစ်လို့လဲဆိုတော့တဆေးကို Two-စပ် assay အတွက် PSMC5 signal ကို၏အစွမ်းသတ္တိ၏ကျနော်တို့နောက်ထပ်ဖြစ်နိုင်ခြေΔFosB-PSMC5 interaction ကလေ့လာဖို့ထွက်ထားကြ၏။

thumbnail ကို
စားပွဲတင် 1 ။ Δ2ΔFosBနှင့်အတူတဆေး Two-Hybrid ကိုစစ်ဆေးခြင်း၏ရလဒ်များ။

Doi: 10.1371 / journal.pone.0126710.t001

ပထမဦးစွာΔFosBနှင့် PSMC5 ကြားရှိရုပ်ပိုင်းဆိုင်ရာအပြန်အလှန်အတည်ပြုပေးရန်, ငါတို့စသည်တို့ Co-immunoprecipitative စမ်းသပ်ချက်များတွင်ဖျော်ဖြေခဲ့ပါတယ်။ ကျနော်တို့ (ထိုအလံ-Tagged PSMC5 တွေ့ရှိခဲ့သင်္ဘောသဖန်း 1B), Neuro 2A ဆဲလ်သို့ transfected, ထိရောက်စွာ (ΔFosBချဆွဲသင်္ဘောသဖန်း 1C) ။ ဒုတိယအချက်မှာသူ့ရဲ့ΔFosBမှ binding များအတွက်တာဝန်ရှိကြောင်း PSMC5 အတွက်ဒေသကိုသိရှိနိုင်ဖို့, ကျနော်တို့ (တော်တော်များများအလံ-tagged PSMC5 Mutant နေထုတ်လုပ်လိုက်တဲ့သင်္ဘောသဖန်း 1B) နှင့် Co-immunoprecipitative စမ်းသပ်မှုထပ်ခါတလဲလဲ။ ΔFosB PSMC151 (PSMC5-NT) ၏ N-terminal ကို 5 အမိုင်နိုအက်ဆစ်နှင့်အတူထိရောက်စွာချဆွဲပေမယ့်မပရိုတိန်း (PSMC172-CT) ၏ C-terminal ကို 5 အမိုင်နိုအက်ဆစ်အပိုင်းအစ (နဲ့အတူခံခဲ့ရပါတယ်သင်္ဘောသဖန်း 1C) ။ ယင်း၏ကွိုင်ကွိုင်ဒိုမိန်း (PSMC5-ΔCC) ချို့တဲ့ PSMC5 လည်းΔFosB precipitating အတွက်ထိရောက်မှုရှိခဲ့သည်။ ဤရွေ့ကားတွေ့ရှိချက် PSMC5 ယင်း၏ coil-ကွိုင်ဒိုမိန်း (အမိုင်နိုအက်ဆစ် 27-68) ကနေတဆင့်ΔFosBချည်နှောင်ကြောင်းအကြံပြုအပ်ပါသည်။ ထိုမှတပါး, အလံ-tagged PSMC5 (က mutated leucine ဇစ်ဒိုမိန်း (ΔFosB-LZM) နဲ့ΔFosBတစ် Mutant ပုံစံ precipitate ဘူးသင်္ဘောသဖန်း 1C), ΔFosBΔFosB heterodimerization PSMC5 binding လိုအပ်ကြောင်း, ဒီဒိုမိန်းမှတဆင့် PSMC5 ချည်နှောင်သို့မဟုတ်ပိုမိုဖြစ်နိုင်ဖွယ်ဖြစ်စေကြောင်းညွှန်ပြ။

နာတာရှည်ကင်းအုပ်ချုပ်ရေးပြီးနောက် NAc အတွက် binding PSMC5-ΔFosB

စသည်တို့တွင်ဤတွေ့ရှိချက်အပေါ်အခြေခံပြီးကျနော်တို့ NAc အတွက် PSMC5 အဆင့်ဆင့်နာတာရှည်ကင်းအုပ်ချုပ်ရေးတုံ့ပြန်ပြောင်းလဲနေကြသည်ရှိမရှိလေ့လာခဲ့သည်။ ကျနော်တို့ subcellular fractionation တွေ့နှင့်အနောက်တိုင်းနာတာရှည်ကင်း cytoplasmic အဆင့်ဆင့် (တစ်ပြောင်းလဲမှုမရှိဘဲဤဦးနှောက်ဒေသတွင်း၌ PSMC5 ၏နျူကလီးယားအဆင့်ဆင့်တိုးပွါးကြောင်း blottingသင်္ဘောသဖန်း 2A) ။ ဤသည်အကျိုးသက်ရောက်မှု (Data ပြမပါ) ကိုကင်းများ၏တစ်ခုတည်းသောဆေးများပြီးနောက်မသိမမြင်ရခဲ့သည်။ ကျနော်တို့လာမယ့် confocal နဲ့ Immunofluorescence microscopy အားဖြင့် NAc အတွက် PSMC5 နှင့်ΔFosBများ၏ဒေသခံဆန်းစစ်ခဲ့သည်။ ΔFosBတစ်ခုတည်းသောရှာဖွေ ထောက်လှမ်း. အခါကျနော်တို့ကိုကင်း၏နောက်ဆုံးအထပ်ထပ်ထိုး, အချိန်မှတ်ပြီးနောက်ကြွက် 24 နာရီခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာ FosB မျိုးဗီဇထုတ်ကုန် (Nestler 2008 ကြည့်ပါ) ။ ကျွန်တော်တစ်ဦးအားကြီးသောနျူကလီးယား signal ကိုအပါအဝင် NAc အတွက်ခိုင်မာတဲ့ PSMC5 immunoreactivity တွေ့ရှိခဲ့ပါတယ်။ ~ ΔFosB + အရေးပါ၏ 85% PSMC5 များအတွက် Co-စွန်း (သင်္ဘောသဖန်း 2B) ။ ထို့အပြင်ကျနော်တို့ (NAc ကောက်နုတ်ချက်များထုတ်ယူအပေါ် Co-immunoprecipitative စမ်းသပ်ချက်ဖျော်ဖြေခြင်းနှင့်နာတာရှည်ကင်းကုသမှုပြီးနောက်, ΔFosB anti-PSMC5 antibody ကိုတို့ကထိရောက်စွာချဆွဲခဲ့ကြောင်းတွေ့ရှိရသင်္ဘောသဖန်း 2C) ။ ဆနျ့ကငျြ, (ထပ်ခါတလဲလဲဆားဆေးထိုးပြီးနောက်) မူးယစ်ရင်တော့မှားမယ် NAc ၏ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမျှမရှာဖွေ ထောက်လှမ်း. ΔFosB (Data ပြမဟုတ်) ဆွဲချဖော်ပြခဲ့တယ်။ ဤရွေ့ကားဒေတာဆဲလ်ယဉ်ကျေးမှု၌အကြှနျုပျတို့၏တွေ့ရှိချက်များနှင့်ကိုက်ညီဖြစ်ကြပြီးΔFosBနှင့် PSMC5 Vivo အတွက် NAc အတွက်အပြန်အလှန်ကြောင်းအတည်ပြုပါ။

thumbnail ကို
သင်္ဘောသဖန်း 2 ။ mouse ကို NAc အတွက် PSMC5 စည်းမျဉ်း။

 

A. အနေဖြင့်ကြွက်များ၏ NAC ၏နျူကလီးယားနှင့် cytosolic အပိုင်းအစများကိုနေ့စဉ်ဆား၊ ကိုကင်း (၂၀ မီလီဂရမ် / ကီလိုဂရမ်) ဖြင့်နေ့စဉ်ကုသပြီးတိရိစ္ဆာန်များအားနောက်ဆုံးဆေးထိုးပြီးနောက် ၂၄ နာရီခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာသည်။ ကိုကင်းသည် PSMC20 ၏နျူကလီးယားကိုတိုးပွားစေသော်လည်း cytosolic အဆင့်တိုးစေသည်။ ကိုကင်းကြောင့်မထိခိုက်သော Histone H7 နှင့် act-actin တို့ကိုထိန်းချုပ်မှုအဖြစ်အသုံးပြုခဲ့သည်။ ဒေတာ± SEM (are = 24-5 / အုပ်စုသည် * p <3) ကိုဆိုလိုသည်။ ခ။ ကြွက်များ၏ NAc တွင် endogenous PSMC8 (အစိမ်းရောင်) နှင့် osFosB (အပြာရောင်) ကိုကိုကင်းအား AC Nuclear lysates ရှိကြွက်များ၏နာတာရှည်ကုသမှုကိုနာတာရှည်ကုသမှုအပြီးနာတာရှည်ကိုကင်းကုသမှုဖြင့် immunoprecipipitation (anti-PSMC10 antibody) သို့မဟုတ် mouse IgG ကိုထိန်းချုပ်မှုအဖြစ်ထိန်းချုပ်သည်။ , ပြီးတော့အနောက်တိုင်း Anti-FosB / -FosB antibody ကိုနှင့်အတူအပြစ်တင်။ vivo in the NAc တွင် PSMC0.05-osFosB အပြန်အလှန်ဆက်သွယ်မှုသည်ဤကိန်းဂဏန်းကိုပြသသည်။ သီးခြားစမ်းသပ်ချက် ၃ ခုစီတွင် B နှင့် C ရှိအချက်အလက်များအားသုံးမျိုးဖြင့်ပုံတူကူးယူခဲ့သည်။

Doi: 10.1371 / journal.pone.0126710.g002

PSMC5 စသည်တို့အတွက်ΔFosBစကားရပ်ပိုကောင်းစေပါတယ်

PSMC5 အဆိုပါ proteasome ရှုပ်ထွေးနေတဲ့လူသိများအဖွဲ့ဝင်ဖြစ်ပြီးကတည်းကကျနော်တို့က Rat 1A ဆဲလ်တွေသုံးပြီးΔFosBအဆင့်ဆင့်ထိန်းညှိခြင်းရှိမရှိစမ်းသပ်စစ်ဆေးပါတယ်။ PSMC5 overexpression (ΔFosB၏ Basal အဆင့်ဆင့်အပေါ်အဘယ်သူမျှမသက်ရောက်ခဲ့ပေမယ့်ဆဲလ်များ၏သွေးရည်ကြည်ဆွအပေါ်သို့ΔFosBသော induction ၏သေးငယ်တဲ့ဒါပေမဲ့သိသိသာသာတိုးမြှင့်စေသောသင်္ဘောသဖန်း 3A) ။ အလားတူလမ်းကြောင်းသစ် Full-အရှည် FosB အဘို့မြင်ကြခံခဲ့ရသည်ပေမယ့်အကျိုးသက်ရောက်မှုစာရင်းအင်းအရေးပါမှုအောင်မြင်ရန်ခဲ့ပါဘူး။ ပြောင်းပြန် PSMC5 ပစ်မှတ်ထားကြောင်း siRNAs အသုံးပြုခြင်းဖြင့်အောင်မြင် Rat 1A ဆဲလ်တွေမှာရှိတဲ့ endogenous PSMC5 စကားရပ်၏ဖိနှိပ်မှု, (Basal ΔFosBအဆင့်ဆင့်ထိခိုက်စေပေမယ့်ပြင်းပြင်းထန်ထန်သွေးရည်ကြည်ဆွခြင်းဖြင့်ΔFosBသော induction inhibited ဘူးသင်္ဘောသဖန်း 3B) ။ အလားတူအကျိုးသက်ရောက်မှုများအပြည့်အဝ-အရှည် FosB အဘို့မြင်ကြခဲ့ကြသည်။ ဤရွေ့ကားဒေတာ PSMC5 အဆိုပါ proteasome တစ်ဦး core ကို subunit အဖြစ်မျှော်လင့်ထားစေခြင်းငှါအဖြစ်, ΔFosB၏ proteasomal ပျက်စီးခြင်းမြှင့်တင်ရန်ပါဘူး, ဒါပေမယ့်အစားလုပျသငျစုဆောင်းခြင်းများအတွက်လိုအပ်ကြောင်းအကြံပြု FosB စသည်တို့အတွက်မျိုးဗီဇထုတ်ကုန်ဖြစ်ကောင်းပရိုတိန်းတည်ငြိမ်မှတဆင့်။

thumbnail ကို
သင်္ဘောသဖန်း 3 ။ Rat 5A ဆဲလ်တွေမှာရှိတဲ့ FosB / ΔFosBထုတ်ဖော် PSMC1 စည်းမျဉ်း။

 

အေ Rat 1A ဆဲလ် PSMC4 ၏ 5 μgသို့မဟုတ်ထိန်းချုပ်မှု DNA ကိုနှင့်အတူ transfected ခဲ့ကြသည်။ အနောက်တိုင်းချေကဆုံးဖြတ်အဖြစ် PSMC5 overexpression FosB သို့မဟုတ် osFosB ပရိုတိန်း၏ Basal စကားရပ်အဆင့်ဆင့်အပေါ်အဘယ်သူမျှမသက်ရောက်ခဲ့ပေမယ့်သွေးရည်ကြည်ဆွ (F (2,21) = 9.75, p = 0.001) ကΔFosB၏ induction အတွက်သေးငယ်တဲ့ပေမယ့်သိသိသာသာတိုးထုတ်လုပ် ခ Rat 1A ဆဲလ်နှစ်ခု siRNAs သို့မဟုတ်အလျင်အမြန်စေလွှတ် RNA (control) ၏ 5 pmol နှင့်အတူ transfected ခဲ့ကြသည်။ နှစ် ဦး စလုံး siRNAs ထိရောက်စွာထိန်းချုပ်မှုအခြေအနေများနှင့်နှိုင်းယှဉ်ပါ PSMC5 ပရိုတိန်းအဆင့်ဆင့်လျော့နည်းသွား (siRNA # 1, ထိန်းချုပ်မှု၏ 23 ± 5%; siRNA # 2, 18 ± 6%; p <0.05; n = 4) ။ PSMC5 နောက်ကောက် FosB သို့မဟုတ်ΔFosB၏အခြေခံအဆင့်ဆင့်အပေါ်အကျိုးသက်ရောက်မှုမရှိပေမယ့်သွေးရည်ကြည်ဆွ (FosB: F (2,6) = 20.99, p = 0.002; FosB: F (2,6) = 22.83) FosB နှင့် osFosB နှစ် ဦး စလုံး၏ induction attenulated , p = 0.002) ။

Doi: 10.1371 / journal.pone.0126710.g003

CBP, p5 နှင့် NAc အတွက် BRG300 နှင့်အတူΔFosBနှင့် PSMC1 ပုံစံရှုပ်ထွေးသော

ပိုကောင်း PSMC5 ΔFosB function ကိုသြဇာလွှမ်းမိုးစေခြင်းငှါ, အရာအားဖြင့်မှတ်တမ်းယန္တရားများကိုနားလည်သဘောပေါက်ရန်, ငါတို့နာတာရှည်ကင်း-ကုသအခြေအနေများအောက်၌ NAc အတွက်နှစ်ခုပရိုတိန်းအဘို့အဖြစ်နိုင်သမျှအပိုဆောင်းစည်းနှောင်မိတ်ဖက်စုံစမ်းစစ်ဆေး။ PSMC5 CBP-တစ်ဦးမှချည်နှောင် HAT-နှင့် HeLa ဆဲလ်တွေမှာရှိတဲ့ MHC-II ကို Proximity ကမကထမှာ histone H3 acetylation တိုးပွါးကြောင်းတဦးတည်းအစီရင်ခံစာ [ရှိပါတယ်22] ။ ထိုမှတပါး, CBP display ကိုချို့တဲ့ဖြစ်ကြောင်းကြွက်တွေကိုကင်းရန်အမူအကျင့် sensitivity ကိုလျှော့ချအဖြစ်မှာ histone acetylation လျှော့ချ FosB ကမကထ [23] ။ ကျနော်တို့အရှင် PSMC5 လည်း CBP နှင့်ဖြစ်ကောင်းသည်အခြားမှတ်တမ်း Active ဆံ့ကြောင်းရှုပ်ထွေးသော၏တစ်စိတ်တစ်ပိုင်းအဖြစ်ΔFosBနှင့်အတူခညျြနှောငျစခွေငျးငှါရှိမရှိစမ်းသပ်စစ်ဆေးပါတယ်။

ကျနော်တို့ပထမဦးဆုံးΔFosBထိရောက်စွာ Neuro300A ဆဲလ် (ထဲတွင် CBP နှင့် p2 တစ်ဦးဆက်စပ် HAT နှစ်ဦးစလုံးကိုချဆွဲကြောင်းသရုပ်ပြသင်္ဘောသဖန်း 4A) ။ ဆနျ့ကငျြ, ΔFosB၏ leucine ဇစ် Mutant ပုံစံ, မျှော်မှန်းထားသည်အဖြစ်, ဒီလှုပ်ရှားမှုပြခဲ့ပါဘူး။ အလားတူပင် PSMC5 ထိရောက်စွာ (CBP နှင့် p300 ချဆွဲသင်္ဘောသဖန်း 4B) ။ စိတ်ဝင်စားစရာ, ဒီအကျိုးသက်ရောက်မှုလည်း PSMC5 ပရိုတိန်း၏အခြား domains များမှတဆင့် CBP နှင့် p5 နှင့်အတူအပြန်အလှန်ဆက်သွယ်နှင့်လွတ်လပ်စွာယင်း၏ΔFosBမှ binding ၏ညွှန်ပြ, ΔFosBဆွဲချမပြုခဲ့ရသော PSMC300-ΔCCများအတွက်ရှုမြင်ကြသည်။

thumbnail ကို
သင်္ဘောသဖန်း 4 ။ ΔFosBနှင့် PSMC5 စသည်တို့နှင့် Vivo အတွက် CBP, p300 နှင့် BRG1 နှင့်အတူအပြန်အလှန်။

 

A. အ Neuro2A ဆဲလ် MYC-tagged ΔFosBသို့မဟုတ် MYC-tagged ΔFosB-LZM ၏ 2.4 μgနှင့်အတူ transfected ခဲ့ကြသည်။ cell ကောက်နုတ်ချက်များထုတ်ယူ Anti-CBP သို့မဟုတ် Anti-p300 antibody ကိုအတူ immunoprecipitated ခဲ့ကြသည်နှင့်မိုးရွာသွန်းမှုအတူတူ antibody ကိုအတူသို့မဟုတ် Anti-MYC antibody ကိုအတူအနောက်တိုင်းပေါစနှေငျ့ခဲ့သညျ။ CBP နှင့် p300 နှစ်ဦးစလုံးΔFosBနှင့်အတူအပြန်အလှန်နှင့်ထိုကဲ့သို့သော interaction ကတစ်ခုနဂိုအတိုင်း leucine ဇစ်လိုအပ်သည်။ ခ Neuro2A ဆဲလ်အလံ-tagged PSMC2.4 သို့မဟုတ်အလံ-tagged PSMC5-ΔCC၏ 5 μgနှင့်အတူ transfected ခဲ့ကြသည်။ cell ကောက်နုတ်ချက်များထုတ်ယူ Anti-CBP သို့မဟုတ် Anti-p300 antibody ကိုအတူ immunoprecipitated ခဲ့ကြသည်နှင့်မိုးရွာသွန်းမှုအတူတူ antibody ကိုအတူသို့မဟုတ် Anti-အလံ antibody ကိုအတူအနောက်တိုင်းပေါစနှေငျ့ခဲ့သညျ။ CBP နှင့် p300 နှစ်ဦးစလုံးဟာ CC ကိုဒိုမိန်းမလိုအပ်ပါဘူး PSMC5 နှင့်ထိုကဲ့သို့သော interaction ကနှင့်အတူအပြန်အလှန်။ mouse ကို NAc ၏ C. နျူကလီးယား lysates နာတာရှည်ကင်းကုသမှုပြီးနောက် Anti-CBP သို့မဟုတ် Anti-p300 antibody ကိုအတူ immunoprecipitative အကြောင်းမဲ့ခဲ့ကြသည်။ Anti-FosB / ΔFosB antibody ကိုနှင့်အတူမိုးရွာသွန်းမှုရရှိလာတဲ့၏နောက်ဆက်တွဲအနောက်တိုင်းချေΔFosBနှင့် CBP / p300 အကြား endogenous interaction ကပြသခဲ့သည်။ တူညီသောနျူကလီးယား lysates ၏ဃ Aliquots Anti-FosB / ΔFosBသို့မဟုတ် Anti-BRG1 antibody ကိုနှင့်အတူမိုးရွာသွန်းမှု၏အနောက်တိုင်းချေအားဖြင့်နောက်တော်သို့လိုက်, Anti-BRG5 သို့မဟုတ် Anti-PSMC1 antibody ကိုအတူ immunoprecipitative အကြောင်းမဲ့ခဲ့ကြသည်။ ရလဒ်ΔFosBနှင့် BRG1 နှင့် BRG1 နှင့် PSMC5 အကြား endogenous interaction ကပြသနေသည်။ CBP / p300, BRG1 နှင့် PSMC5 နှင့်အတူအပြန်အလှန် JunD heterodimers: ΔFosB၏ရေးစပ်မှတ်တမ်း activation ရှုပ်ထွေးသော၏အီးသိထားပုံဥပမာ။

Doi: 10.1371 / journal.pone.0126710.g004

ဤအ interaction က Vivo လည်းဖြစ်ပေါ်ကြောင်းအတည်ပြုရန်ကျနော်တို့ΔFosBနှင့်နျူကလီးယား PSMC5 အဆင့်ဆင့်သွေးဆောင်နာတာရှည်ကင်းအုပ်ချုပ်ခွင့်ရ, ထို့နောက် Anti-CBP သို့မဟုတ် Anti-p300 ပဋိနှင့်အတူ NAc ကောက်နုတ်ချက်များထုတ်ယူ immunoprecipitated ။ ကျွန်တော်တို့ရဲ့ဆဲလ်ယဉ်ကျေးမှုဒေတာတွေနဲ့ကိုက်ညီ, CBP သို့မဟုတ် p300 ၏ immunoprecipitative ထိရောက်စွာΔFosBချဆွဲ (သင်္ဘောသဖန်း 4C) ။ ကျနော်တို့ BRG1 နာတာရှည်ကင်းပြီးနောက် NAc ၎င်းတို့၏ activation နှင့်အတူဖျော်ဖြေပွဲအတွက်သေချာသောΔFosBပစ်မှတ်မျိုးဗီဇမှစုဆောင်းကြောင်းရှာဖွေတာကျွန်တော်တို့ရဲ့အစောပိုင်းကပေါ်အခြေခံပြီး, BRG5, အ SWI-SNF chromatin ပြုပြင်ရှုပ်ထွေးနေတဲ့အမာခံ subunit လည်းΔFosBနှင့် PSMC1 မှခညျြနှောငျစခွေငျးငှါရှိမရှိစမ်းသပ်ပြီး [24] ။ ကျနော်တို့ BRG1 ၏ immunoprecipitative NAc ကောက်နုတ်ချက်များထုတ်ယူအတွက်ΔFosBချဆွဲထုတ်တွေ့ရှိခဲ့နှင့် PSMC5 ၏ immunoprecipitative ထိုနည်းတူ (endogenous BRG1 coprecipitatedသင်္ဘောသဖန်း 4D) ။ အတူတူခေါ်ဆောင်သွားဤရလဒ်များကိုလည်း CBP / p5 နှင့် BRG300 (ပါဝင်သည်ရာ NAc အတွက်ΔFosB-PSMC1 ပုံစံရှုပ်ထွေးသောအကြံပြုသင်္ဘောသဖန်း 4E).

PSMC5 overexpression ကင်းဖို့ locomotor တုံ့ပြန်မှုတိုးပွါး

NAc အတွက်ΔFosBနှင့်အတူ PSMC5 ၏ထင်ရှားသောစည်းနှောင်ဒီဦးနှောက်ဒေသတွင်း၌ PSMC5 အဆင့်ဆင့်တိုးမြှင့်ကင်းဖို့အမူအကျင့်တုံ့ပြန်မှုထိန်းညှိခြင်းရှိမရှိစုံစမ်းစစ်ဆေးရန်ကျွန်တော်တို့ကိုသတိပေးခံရ။ ကျနော်တို့ (ထဲမှာ Vivo wildtype PSMC5 သို့မဟုတ်ယင်း၏ Mutant ၏တဦးတည်းဖြစ်စေ overexpresses တစ် herpes simplex ဗိုင်းရပ်စ် (HSV) vector နေထုတ်လုပ်လိုက်တဲ့နှင့် NAc အတွက် virus သယ်ဆောင်အတည်ပြုသင်္ဘောသဖန်း 5A) ။ PSMC5 ၏ viral-mediated စကားရပ်ကို (ဆဲလ်နျူကလိယထဲမှာလွှမ်းမိုးသင်္ဘောသဖန်း 5B) ။ ရိုင်း-type အမျိုးအစား PSMC5 overexpressing ကြွက်တွေကိုကင်းများ၏ကနဦးဆေးများမှပြောင်းလဲတုံ့ပြန်မှုကိုပြသပေမယ့် GFP-ဖော်ပြထိန်းချုပ်မှုကြွက်နှင့်နှိုင်းယှဉ်ပါထပ်ခါတလဲလဲကင်းဆေးများတုံ့ပြန်တိုးမြှင့် locomotor activation ပြသခဲ့ပါဘူး။ ဆနျ့ကငျြ၎င်း၏ coil-ကွိုင်ဒိုမိန်း (PSMC5-ΔCC) ကင်းမဲ့ကြောင်း PSMC5 တစ် Mutant ပုံစံ overexpressing ကြွက် (ဒီအကျိုးသက်ရောက်မှုပြခဲ့ပါဘူးသင်္ဘောသဖန်း 5B) ။ စိတ်ဝင်စားစရာ, အ wildtype ပရိုတိန်း၏ ATPase လှုပ်ရှားမှုကင်းမဲ့ရာ PSMC5-K196M, ၏ overexpression လည်းကင်းရဲ့ locomotor တုံ့ပြန်မှု potentiated ။

thumbnail ကို
သင်္ဘောသဖန်း 5 ။ NAc အတွက် PSMC5 overexpression ကင်းဖို့ locomotor တုံ့ပြန်မှုတိုးပွားစေပါသည်။

 

medial NAc အတွက်အေကိုယ်စားလှယ် HSV-mediated Transgene စကားရပ်။ AC အ, anterior commissure ။ NAc ၏အဓိကနှင့် shell ခွဲများကိုဤပုံတွင်ဖော်ပြထားသည်။ DSVI အစွန်းအထင်းအားဖြင့်မှတ်သားအဖြစ်ပရိုတိန်းအဓိကနျူကလီးယားကြောင်းပြသ HSV-PSMC60 ဆေးထိုးပြီးနောက် NAc အာရုံခံအတွက် PSMC5 ၏ immunohistochemical အစွန်းအထင်း၏ခကိုယ်စားလှယ်မြင့်မားတဲ့ချဲ့ (5x) ။ C. ကြွက်များသည် NAc သို့နှစ် ဦး နှစ်ဖက် HSV ထိုးဆေးများကိုလက်ခံရရှိခဲ့ပြီးနောက်ကိုကာကိုလာ (၇.၅ မီလီဂရမ် / ကီလိုဂရမ်) ကိုအနိမ့်ဆုံးသတ်မှတ်ထားသောဆေးများကိုနေ့စဉ် IP ထိုးခြင်းဖြင့်ပြုလုပ်ခဲ့သည်။ Locomotor တုန့်ပြန်ချက်များသည်မူးယစ်ဆေး၏နေ့စဉ်သုံးကြိမ်အကြိမ်၏ပထမနှင့်နောက်ဆုံးကိုတုန့်ပြန်သည်။ PSMC7.5 သို့မဟုတ် PSMC3-K5M ၏အလွန်အကျွံထုတ်ဖော်မှုသည်ထပ်ခါတလဲလဲကိုကင်းအား locomotor တုန့်ပြန်မှုကိုတိုးစေပြီး PSMC5-ΔCCနှင့်မတွေ့ရပါ။ ကန ဦး ကိုကင်းဆေးများကို locomotor တုန့်ပြန်မှုအပေါ် transgenes ၏သိသာထင်ရှားသောသက်ရောက်မှုမရှိပါ။ ANOVA က F (196) = 5, * p <3,125 Dunnett ရဲ့ posthoc စမ်းသပ်မှုအားဖြင့်။

Doi: 10.1371 / journal.pone.0126710.g005

ဆွေးနွေးမှု

ပစ္စုပ္ပန်လေ့လာမှု၏ရလဒ်များကိုΔFosBဦးနှောက်နှင့်ကိုကင်းအရေးယူမှုတွင်ပါဝင်ပတ်သက်အသစ်တစ်ခုယန္တရားအပေါ်သက်ရောက်မှု mediates သောသစ်တစ်ခုယန္တရားထုတ်ဖေါ်။ တစ်ဦးဘက်မလိုက်ချဉ်းကပ်မှုတစ်ခုတဆေးကို Two-စပ် assay အသုံးပြုမှုအားဖွငျ့ကြှနျုပျတို့ΔFosBများအတွက်မိတ်ဖက် binding တစ်ဝတ္ထုအဖြစ် PSMC5 ဖော်ထုတ်ခဲ့သည်။ ကျနော်တို့ binding ကြံ့ခိုင် PSMC5-ΔFosBသရုပ်ပြဒီယဉ်ကျေးမှုဆဲလ်တွေမှာရှိတဲ့စသည်တို့နှင့် Vivo အတွက် NAc အတွက်နှစ်ဦးစလုံးကိုရှာတွေ့အတည်ပြု။ အရေးကြီးတာက, PSMC5 ၏နျူကလီးယားအဆင့်ဆင့်နာတာရှည်ကင်းအုပ်ချုပ်မှုအားဖြင့် NAc အတွက်သွေးဆောင်နေကြသည်။ ကျနော်တို့တော်တော်များများသည်အခြားမှတ်တမ်း Active ပရိုတိန်း, အမည်ရ CBP နှင့် p5 (နှစ်ခုကိုဦးထုပ်) နှင့် BRG300 (SWI-SNF chromatin ပြုပြင်ရှုပ်ထွေးသော၏အဓိကမဲဆန္ဒနယ်) နဲ့ဖျော်ဖြေပွဲအတွက်ဖြစ်ပေါ် PSMC1-ΔFosB binding ကြောင်းထပ်မံပြသသည်။ အတူတကွကျွန်တော်တို့ရဲ့တွေ့ရှိချက် PSMC5 နာတာရှည်ကင်းအုပ်ချုပ်ရေး၏သင်တန်းကာလအတွင်းကအနည်းဆုံးအချို့ΔFosB-သွေးဆောင်ဗီဇမှစုဆောင်းသောမှတ်တမ်းကို Activation ရှုပ်ထွေးသော (၏အစိတ်အပိုင်းတစ်ခုဖြစ်သည်သောယူဆချက်ကိုထောကျပံ့သင်္ဘောသဖန်း 4E) ။ ဒီအယူအဆနှင့်ကိုက်ညီ NAc အတွက်အပိုဆောင်းတွေ့ရှိချက် PSMC5 ၏ overexpression ဖြစ်ပါသည်, ΔFosBသူ့ဟာသူ၏ overexpression ကဲ့သို့ကင်းရန်အမူအကျင့်တုံ့ပြန်မှုကိုအားပေးအားမြှောက်။ ဒါဟာအတွက်စသည်တို့သတင်းထောက် assay အသုံးပြုခြင်းဖြင့် PSMC5-ΔFosB-HAT-BRG1 interaction က၏စရိုက်လက္ခဏာတွေဤအတွက် Vivo လေ့လာတွေ့ရှိချက်တက်နောက်လိုက်ဖို့အနာဂတ်လေ့လာမှုများအတွက်စိတ်ဝင်စားဖွယ်ကောင်းပါလိမ့်မယ်။

ကိုကင်းအရေးယူအတွက် PSMC5 များ၏ပါဝင်ပတ်သက်မှုလုံးဝဝတ္ထုဖြစ်ပါတယ်။ အဆိုပါ proteasome ပါဝင်ကြောင်း ATPases ၏ကြီးမားသောမိသားစုအဖွဲ့ဝင်တစ်ဦးအဖြစ်အစပိုင်းတွင်ဖော်ထုတ်, PSMC5 [အများအပြားက c-Fos, p53 အပါအဝင်ကူးယူအချက်များ, နျူကလီးယားဟော်မုန်း receptors, နှင့် Basal ကူးယူရှုပ်ထွေးသော၏မဲဆန္ဒနယ်မှနှင့်အတူအပြန်အလှန်ဖို့နှစ်အတွင်းပြသထားသည်25] သို့သော်အနည်းငယ်အလုပ်လုပ်တဲ့လေ့လာမှုများနှစ်ပေါင်းများစွာလုပ်ဆောင်ခဲ့ကြ [26] ။ ၎င်း၏အကောင်းဆုံးထူထောင်အရေးယူမှု [ယဉ်ဆဲလ်တွေမှာရှိတဲ့ MYC ကူးယူအချက်များများ၏လှုပ်ရှားမှုမြှင့်တင်ရေးရန်ဖြစ်ပါသည်27] ။ [မှတ်တမ်းယန္တရားများအတွက် PSMC5 ၏ဆိုလိုဗီဇကူးယူ၏စည်းမျဉ်းစည်းကမ်းအတွက် ubiquitination-proteasomal လှုပ်ရှားမှုများအတွက်အလားအလာအခန်းကဏ္ဍအကြံပြုထားပါတယ်, ဒါပေမယ့်ထိုကဲ့သို့သောစည်းမျဉ်းထဲမှာ PSMC5 များ၏ပါဝင်ပတ်သက်မှုယနေ့အထိလုံးဝနီးပါး untested ဖြစ်နေဆဲ28,29].

အနည်းငယ်သာဦးနှောက်ထဲမှာ PSMC5 function ကိုအကြောင်းကိုလူသိများသည်။ အစောပိုင်းကလေ့လာမှု [ဦးနှောက်တစ်လျှောက်လုံး PSMC5 mRNA ၏ကျယ်ပြန့်စကားရပ်ကိုသရုပ်ပြ30], ဒါပေမယ့်သူ့ရဲ့အလုပ်လုပ်တဲ့လှုပ်ရှားမှု unstudied ကျန်ရစ်ခဲ့သည်။ ကျွန်ုပ်တို့၏တွေ့ရှိချက်ယခုပိုကောင်းဗီဇကူးယူထိန်းညှိအတွက်၎င်း၏အခန်းကဏ္ဍကိုနားလည်ရန်ဤစိတ်ဝင်စားစရာကောင်းတဲ့ပရိုတိန်း၏နောက်ထပ်စုံစမ်းစစ်ဆေးမှုတွေလှုံ့ဆျောနှင့်ဦးနှောက်အတွက် ubiquitination-proteasomal function ကိုရန်၎င်း၏ဆက်ဆံရေးမျိုး။ ΔFosBမှ PSMC5 ၏စည်းနှောင် PSMC5 ရဲ့ coil-ကွိုင်ဒိုမိန်းကကမကထပြုခဲ့ခြင်းဖြစ်သည်။ ထို့အပြင် coil-ကွိုင်ဒိုမိန်းလိုအပ်နေချိန်မှာ, ကိုကင်းဖို့ locomotor တုံ့ပြန်မှုမြှင့်တင်ရန် PSMC5 များ၏စွမ်းရည်, ပရိုတိန်းဖို့အခ်ါကြောင်း ATPase လှုပ်ရှားမှုမလိုအပ်ပါဘူး။ ဤရလဒ်သည်ကအနည်းဆုံးကျနော်တို့ရဲ့စနစ်, PSMC5 ၏အဓိကလှုပ်ရှားမှုက၎င်း၏က၎င်း၏ proteasomal-ဆက်စပ်လှုပ်ရှားမှုမှတဆင့်ΔFosBနှင့်အခြားမှတ်တမ်းစည်းမျဉ်းပရိုတိန်းမှ binding နှင့်မနှုန်း se မှတဆင့်ကမကထပြုခဲ့စေခြင်းငှါ, ထိုဖြစ်နိုင်ချေမြှင့်။ နောက်ထပ်အလုပ်တိုက်ရိုက်ဒီကအခြားရွေးချယ်စရာဖြစ်နိုင်ခြေစမ်းသပ်ဖို့လိုအပ်ပါသည်။ ကΔFosB၏ကြေးဇူးတငျကွောငျးအဆင့်ဆင့်ဤအချိန်ဘောင်အတွင်းဦးနှောက်များတွင်စုပြုံကြောင်းလူသိများသည်ဖြစ်သောကြောင့် PSMC5 ၏ဗိုင်းရပ်စ်-mediated overexpression ΔFosBနှင့်အတူ interaction ကနေတဆင့်ကင်းဖို့ locomotor တုံ့ပြန်မှုတိုးပွားလာကြောင်းအဆိုပါယူဆချက် [တစ် 3 နေ့ကကိုကင်းကုသမှု regimen ၏အသုံးပြုမှုကိုရှိနေသော်လည်းယုတ္တိတန်သည်ဟုဆိုရမည်3].

ပစ္စုပ္ပန်တွေ့ရှိချက်နောက်ထပ်ဦးနှောက်စည်းမျဉ်းများ၏မော်လီကျူးအခြေခံလေ့လာနေအတွက်ဘက်မလိုက်, ဖွင့်စမ်းသပ်ချဉ်းကပ် အသုံးပြု. ၏ utility ကိုအတည်ပြုရန်။ PSMC5 ဖို့ကျွန်တော်တို့ရဲ့ကနဦးအာရုံကိုတစ်ဦးတဆေးကို Two-စပ် assay အတွက်တစ်ခုတည်းကိုသာΔFosBရန်၎င်း၏ထင်ရှားသောစည်းနှောင်အပေါ်အခြေခံပြီး, သေးသောကြောင့်ထပ်ခါတလဲလဲကင်းအုပ်ချုပ်မှုအားဖြင့် NAc အတွက်စုဆောင်းဖြစ်ကြောင်းမှတ်တမ်းအပြောင်းအလဲများကို၏အရေးပါသောအစိတ်အပိုင်းတစ်ခုဖြစ်ပေါ်လာသောခဲ့သည်။ PSMC5 ထို့နောက်ကင်း-သွေးဆောင်မှတ်တမ်း activation ရှုပ်ထွေးသောကိုအထောက်အကူပြုရန်သော PSMC5 ၏နျူကလီးယားအဆင့်ဆင့်ကိုကင်းများကသွေးဆောင်နှင့်အလှည့်ထဲမှာနေကြရသောအားဖြင့်အသေးစိတ်ယန္တရားများ၏တစ်ဦးကပိုကောင်းတဲ့နားလည်မှု, လက်ရှိစုံစမ်းစစ်ဆေးများ၏အာရုံစိုက်ဖြစ်ကြသည်။ ဤအတောအတွင်းကျွန်တော်တို့ရဲ့တဆေးကို Two-စပ် assay (ΔFosBအများအပြားထပ်တိုး putative စည်းနှောင်မိတ်ဖက်ထင်ရှားစားပွဲတင် 1) အရာကိုလည်းယခုကင်းမော်ဒယ်များအတွက်တိုက်ရိုက်စာမေးပွဲခိုင်လုံ။ အတူတူ, ဒီအလုပ်ကိုကင်း NAc function ကိုပွောငျးလဲရာမှတဆင့်ရှုပ်ထွေးမော်လီကျူးယန္တရားများတစ်ခုတိုးပွားလာဥာဏ်ပံ့ပိုးသည်။

ကျေးဇူးတင်လွှာ

ဤလုပ်ငန်းကို (KAKENHI နံပါတ်များ: 24591735, 26290064, 25116010) သိပ္ပံ၏မြှင့်တင်ရေးတို့အတွက်မူးယစ်ဆေးဝါးအလွဲသုံးမှုအပေါ်အမျိုးသားဒီမိုကရေစီအဖွဲ့ချုပ်အင်စတီကျုကနေထောက်ပံ့ငွေအသုံးပြုပုံနှင့် Ishibashi ဖောင်ဒေးရှင်းနှင့်ဂျပန်လူ့အဖွဲ့အစည်းကထောက်ခံခဲ့သည်။

စာရေးသူထောက်ပံ့

ပဋိသန္ဓေနှင့်စမ်းသပ်ချက်ဒီဇိုင်း: YHO YNO EJN ။ YHO YNO PJK RN: အစမ်းသပ်ချက်ဖျော်ဖြေခဲ့ပါတယ်။ ဒေတာခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာ: YHO YNO EJN ။ ဓါတ်ကူပစ္စည်း / ပစ္စည်းများ / ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာ tools များလှူဒါန်းခဲ့: TN MO ကို Oy AN RN TT ။ YHO EJN: စက္ကူရေးသားခဲ့သည်။

ကိုးကား

  1. 1 ။ မော်ဂန် JI, Curran T က (1995) လတ်တလော-အစောပိုင်းမျိုးဗီဇ: အပေါ်ဆယျနှစျ။ ခေတ်ရေစီးကြောင်း neuroscience 18: 66-67 ။ pmid: 7537412 Doi: 10.1016 / 0166-2236 (95) 80022-t ကို
  2. 2 ။ စွဲလမ်း၏ Nestler EJ (2008) မှတ်တမ်းယန္တရားများ: deltaFosB ၏အခန်းကဏ္ဍ။ ဖီလိုဖြတ်ကျော် R ကို Soc လန်ဒန် B ကို Biol သိပ္ပံ 363: 3245-3255 ။ Doi: 10.1098 / rstb.2008.0067 ။ pmid: 18640924
  3. ကြည့်ရန်အပိုဒ်
  4. PubMed / NCBI
  5. Google Scholar
  6. ကြည့်ရန်အပိုဒ်
  7. PubMed / NCBI
  8. Google Scholar
  9. ကြည့်ရန်အပိုဒ်
  10. PubMed / NCBI
  11. Google Scholar
  12. ကြည့်ရန်အပိုဒ်
  13. PubMed / NCBI
  14. Google Scholar
  15. ကြည့်ရန်အပိုဒ်
  16. PubMed / NCBI
  17. Google Scholar
  18. ကြည့်ရန်အပိုဒ်
  19. PubMed / NCBI
  20. Google Scholar
  21. ကြည့်ရန်အပိုဒ်
  22. PubMed / NCBI
  23. Google Scholar
  24. ကြည့်ရန်အပိုဒ်
  25. PubMed / NCBI
  26. Google Scholar
  27. ကြည့်ရန်အပိုဒ်
  28. PubMed / NCBI
  29. Google Scholar
  30. ကြည့်ရန်အပိုဒ်
  31. PubMed / NCBI
  32. Google Scholar
  33. ကြည့်ရန်အပိုဒ်
  34. PubMed / NCBI
  35. Google Scholar
  36. ကြည့်ရန်အပိုဒ်
  37. PubMed / NCBI
  38. Google Scholar
  39. ကြည့်ရန်အပိုဒ်
  40. PubMed / NCBI
  41. Google Scholar
  42. ကြည့်ရန်အပိုဒ်
  43. PubMed / NCBI
  44. Google Scholar
  45. ကြည့်ရန်အပိုဒ်
  46. PubMed / NCBI
  47. Google Scholar
  48. ကြည့်ရန်အပိုဒ်
  49. PubMed / NCBI
  50. Google Scholar
  51. ကြည့်ရန်အပိုဒ်
  52. PubMed / NCBI
  53. Google Scholar
  54. ကြည့်ရန်အပိုဒ်
  55. PubMed / NCBI
  56. Google Scholar
  57. ကြည့်ရန်အပိုဒ်
  58. PubMed / NCBI
  59. Google Scholar
  60. ကြည့်ရန်အပိုဒ်
  61. PubMed / NCBI
  62. Google Scholar
  63. ကြည့်ရန်အပိုဒ်
  64. PubMed / NCBI
  65. Google Scholar
  66. ကြည့်ရန်အပိုဒ်
  67. PubMed / NCBI
  68. Google Scholar
  69. ကြည့်ရန်အပိုဒ်
  70. PubMed / NCBI
  71. Google Scholar
  72. ကြည့်ရန်အပိုဒ်
  73. PubMed / NCBI
  74. Google Scholar
  75. ကြည့်ရန်အပိုဒ်
  76. PubMed / NCBI
  77. Google Scholar
  78. ကြည့်ရန်အပိုဒ်
  79. PubMed / NCBI
  80. Google Scholar
  81. ကြည့်ရန်အပိုဒ်
  82. PubMed / NCBI
  83. Google Scholar
  84. ကြည့်ရန်အပိုဒ်
  85. PubMed / NCBI
  86. Google Scholar
  87. ကြည့်ရန်အပိုဒ်
  88. PubMed / NCBI
  89. Google Scholar
  90. 3 ။ BT, Nye သူ, Kelz ကို MB, ကိုယ်ပိုင် DW, Iadarola MJ, Nakabeppu Y ကို, et al မျှော်လင့်ပါတယ်။ နာတာရှည်ကိုကင်းနှင့်အခြားနာတာရှည်ကုသမှုအားဖြင့်ဦးနှောက်ထဲမှာပြောင်းလဲ Fos တူသောပရိုတိန်း၏ရေးစပ်ရှည်-တည်မြဲ AP-1994 ရှုပ်ထွေးသော၏ (1) induction ။ အာရုံခံဆဲလျ 13: 1235-1244 ။ pmid: 7946359 Doi: 10.1016 / 0896-6273 (94) 90061-2
  91. 4. Hiroi N, Brown J, Haile C, Ye H, Greenberg ME, Nestler EJ (1997) FosB Mutant ကြွက် - Fos နှင့်သက်ဆိုင်သည့်ပရိုတင်းများကိုနာတာရှည်ကိုကင်းများနှိမ်နင်းခြင်းနှင့်ကိုကင်း၏စိတ်ကိုဖြစ်ပေါ်စေသောထိရောက်မှုနှင့်အကျိုးဖြစ်ထွန်းစေသောအကျိုးသက်ရောက်မှုများမြင့်တက်လာခြင်း။ proc Natl Acad သိပ္ပံယူအက်စ်အေ 94: 10397-10402 ။ pmid: 9294222 Doi: 10.1073 / pnas.94.19.10397
  92. 5 ။ Ulery PG, Rudenko, G, phosphorylation အားဖြင့်ΔFosBတည်ငြိမ်မှု၏ Nestler EJ (2006) စည်းမျဉ်းဥပဒေ။ J ကို neuroscience 26: 5131-5142 ။ pmid: 16687504 Doi: 10.1523 / jneurosci.4970-05.2006
  93. 6 ။ Carl TL, Ohnishi yn, Ohnishi YH, Alibhai IN, Wilkinson ကို MB, Kumar ကတစ်ဦး, et al ။ ထိန်းသိမ်းစောင့်ရှောက်ရေးကို C-terminal ကို degron ဒိုမိန်း၏ (2007) မရှိခြင်းΔFosBရဲ့ထူးခြားတဲ့တည်ငြိမ်မှုကိုအထောက်အကူပြုရန်။ EUR J ကို neuroscience 25: 3009-3019 ။ pmid: 17561814
  94. 7 ။ Robison AJ, Vialou V ကို, Mazei-Robison et al M က, Feng တို့ဂျေ, Kourrich S က, Collins က M ကို။ (2013) အပြုအမူနှင့်နာတာရှည်ကင်းမှဖွဲ့စည်းတည်ဆောက်ပုံဆိုင်ရာတုံ့ပြန်မှုနျူကလီးယပ်အတွက်ΔFosBနှင့် CaMKII ပတျသကျတဲ့အစာကျွေးခြင်း-ရှေ့ဆက်ကွင်းဆက် shell ကို accumbens လိုအပ်သည်။ J ကို neuroscience 33: 4295-4307 Doi: 10.1523 / JNEUROSCI.5192-12.2013 ။ pmid: 23467346
  95. 8 ။ Kelz ကို MB, Chen က J ကို, Carlezon WA Jr က Whisler K ကို Gilden L ကို, Beckmann လေး, et al ။ ဦးနှောက်ထဲမှာကူးယူအချက်ΔFosB၏ (1999) Expression ကိုကင်းမှ sensitivity ကိုထိန်းချုပ်သည်။ သဘာဝတရား 401: 272-276 ။ pmid: 10499584
  96. 9 ။ Colby CR, Whisler K ကို Steffen ကို C, Nestler EJ, ကိုယ်ပိုင် DW (2003) ΔFosBကင်းဘို့မက်လုံးပေးပိုကောင်းစေပါတယ်။ J ကို neuroscience 23: 2488-2493 ။ pmid: 12657709
  97. 10 ။ McClung, CA, CREB နှင့် DFosB အားဖြင့်မျိုးရိုးဗီဇစကားရပ်များနှင့်ကင်းဆုလာဘ်၏ Nestler EJ (2003) စည်းမျဉ်းဥပဒေ။ နတ် neuroscience 11: 1208-1215 ။ pmid: 14566342 Doi: 10.1038 / nn1143
  98. 11 ။ Zachary V ကို, Bolanos, CA, Selley DE, Theobald: D, Cassidy အမတ်, Kelz ကို MB, et al ။ (2006) ΔFosB: မော်ဖင်းအကိုက်အရေးယူအတွက်နျူကလိယ accumbens အတွက်ΔFosBဘို့တစ်ခုမရှိမဖြစ်အခန်းကဏ္ဍ။ သဘာဝတရား neuroscience 9: 205-211 ။ pmid: 16415864 Doi: 10.1038 / nn1636
  99. 12 ။ Peakman MC, Colby ကို C, Perrotti LI, Tekumalla P ကို, Carl T က, Ulery P ကို, et al ။ (2003) သွေးဆောင်, Transgene ကြွက်တွေမှာက c-ဇွန်၏အလွှမ်းမိုးအနုတ်လက္ခဏာ Mutant ၏ဦးနှောက်ဒေသတိကျတဲ့စကားရပ်ကိုကင်းမှ sensitivity ကိုလျော့နည်းစေပါသည်။ ဦးနှောက် Res 970: 73-86 ။ pmid: 12706249 Doi: 10.1016 / s0006-8993 (03) 02230-3
  100. 13 ။ Chen က J ကို, et al Nye သူ, Kelz ကို MB, Hiroi N ကို, Nakabeppu Y ကို။ electroconvulsive ဖမ်းဆီးရမိခြင်းနှင့်ကင်းကုသခွငျးအားဖွငျ့ (1995) မြစ်ဝကျွန်းပေါ် FosB ၏စည်းမျဉ်းဥပဒေနှင့်အ FosB တူသောပရိုတိန်း။ Mol Pharmacol 48: 880-889 ။ pmid: 7476919
  101. 14 ။ Hiroi N ကို, Marek GJ, Brown က J ကိုရဲ H ကို, Saudou က F, Vaidya VA သို့, et al ။ electroconvulsive သိမ်းယူမှု၏, မော်လီကျူးဆယ်လူလာများနှင့်အမူအကျင့်လုပ်ရပ်များအတွက် fosB ဗီဇ၏ (1998) မရှိမဖြစ်အခန်းကဏ္ဍ။ J ကို neuroscience 18: 6952-6962 ။ pmid: 9712664
  102. 15 ။ ဖာရ-Otano ငါ Mandelzys တစ်ဦးက, မော်ဂန် JI (1998) MPTP Parkinson dopaminergic လမ်းကြောင်းအတွက် D-FosB တူသောပရိုတိန်း၏ persistent စကားရပ်ဖြင့်လိုက်ပါသွားသည်။ Mol ဦးနှောက် Res 53: 41-52 ။ pmid: 9473580 Doi: 10.1016 / s0169-328x (97) 00269-6
  103. 16 ။ ma J ကို, Ptashne M (1988) အနေနဲ့ Active သို့ eukaryotic မှတ်တမ်း inhibitor ပြောင်း။ cell 55: 443-446 ။ pmid: 3180218 Doi: 10.1016 / 0092-8674 (88) 90030-x
  104. 17 ။ Chien မှန် CT, Bartel PL, Sternglanz R ကို, Fields S ကို (1991) နှစ်ဦး-ဟိုက်ဘရစ်စနစ်က: အကျိုးစီးပွားပရိုတိန်းနှင့်အတူအပြန်အလှန်ကြောင်းပရိုတိန်းအဘို့အမျိုးဗီဇကိုဖော်ထုတ် clone ရန်နည်းလမ်း။ proc Natl Acad သိပ္ပံအမေရိကန်နိုင်ငံ 88: 9578-9582 ။ pmid: 1946372 Doi: 10.1073 / pnas.88.21.9578
  105. 18 ။ Nakabeppu Y ကို 1, ODA S က, မြစ်ဝကျွန်းပေါ်ဒေသ FosB အားဖြင့် quiescent Rat-1993A ဆဲလ် Sekiguchi M (1) တီထွင်ခဲ့တယ် activation ။ Mol ဆဲလ် Biol 13: 4157-4166 ။ pmid: 8321220
  106. 19 ။ Scobie KN, et al Damez-Werno: D Sun, H ကို, နာမည်ကြီးဖုန်းကုမ္မဏီတခုဖြစ်တဲ့ N ကို, Gancarz တစ်ဦးက, Panganiban CH ။ Poly ၏ (2014) မရှိမဖြစ်အခန်းကဏ္ဍ (လူတွေလည်းရှိနေတယ်-ribosyl) ကိုကင်းအရေးယူအတွက် ation ။ proc Natl Acad သိပ္ပံအမေရိကန်နိုင်ငံ 111: 2005-2010 ။ Doi: 10.1073 / pnas.1319703111 ။ pmid: 24449909
  107. 20 ။ et al Perrotti LI, Weaver RR, Robison B, Renthal W က, ဝင်္ငါ Yazdani S က။ အလွဲသုံးစားမှုမူးယစ်ဆေးဝါးများအားဖြင့်ဦးနှောက်ထဲမှာΔFosBသော induction ၏ (2008) ထူးခြားသောပုံစံများ။ synapses 62: 358-369 ။ Doi: 10.1002 / syn.20500 ။ pmid: 18293355
  108. 21 ။ ဝမ် WL, Chevray pm တွင်, Nathan D ကို (1996) နို့တိုက်သတ္တဝါတွေက Sug1 နှင့်က c-Fos နျူကလီးယား 26S proteasome ၌တည်၏။ proc Natl Acad သိပ္ပံအမေရိကန်နိုင်ငံ 93: 8236-8240 ။ pmid: 8710853 Doi: 10.1073 / pnas.93.16.8236
  109. 22 ။ et al Koues Oi 1, Dudley RK, Truax အေဒီ, Gerhardt: D, Bhat KP, McNeal S က။ အဆိုပါ 2008S proteasomal ATPase Sug19 အားဖြင့်အဓိက histocompatibility ရှုပ်ထွေးလူတန်းစား II ကို Proximity ကမကထမှာ acetylation ၏ (1) စည်းမျဉ်းဥပဒေ။ Mol ဆဲလ် Biol 28: 5837-5850 ။ Doi: 10.1128 / MCB.00535-08 ။ pmid: 18662994
  110. 23 ။ Levine AA ကို, ဂွမ် Z ကို, Barco တစ်ဦးက, Xu က S, Kandel ER, Schwartz JH (2005) CREB-binding ပရိုတိန်းမောက် striatum အတွက် fosB ကမကထမှာ histones acetylating အားဖြင့်ကိုကင်းတုံ့ပြန်ထိန်းချုပ်သည်။ proc Natl Acad သိပ္ပံအမေရိကန်နိုင်ငံ 102: 19186-19191 ။ pmid: 16380431 Doi: 10.1073 / pnas.0509735102
  111. 24 ။ Kumar ကတစ်ဦး, Choi KH, Renthal W က, Tsankova မိုင်, Theobald DEH, Truong HT, et al ။ (2005) Chromatin ပြုပြင် striatum အတွက်ကင်း-သွေးဆောင် plasticity အခြေခံအဓိကယန္တရားသည်။ အာရုံခံဆဲလျ 48: 303-314 ။ pmid: 16242410 Doi: 10.1016 / j.neuron.2005.09.023
  112. ကူးယူစည်းမျဉ်းစည်းကမ်းများအဘို့အ 25. St-Arnaud R ကို (1999) Dual လုပ်ဆောင်ချက်များကို: ဒဏ္myာရီသို့မဟုတ်အဖြစ်မှန်။ J ကိုဆဲလ်ထဲကဓာတုပစ်စညျးပေးသွင်း 32/33: 32-40 ။ Doi: 10.1002 / (sici) 1097-4644 (1999) 75: 32+ <32 :: အကူအညီ-jcb5> 3.0.co; 2-x ကို
  113. 26 ။ Ferrell K ကို Wilkinson CRM, Dubiel W က, Gordon ကမြင်ပါတယ်, C (2000) ကို 26S proteasome ၏စည်းမျဉ်း subunit interaction ကတစ်ဦးရှုပ်ထွေးသောပြဿနာ။ ခေတ်ရေစီးကြောင်းထဲကဓာတုပစ်စညျးသိပ္ပံ 25: 83-88 ။ pmid: 10664589 Doi: 10.1016 / s0968-0004 (99) 01529-7
  114. 27 ။ ဗွန် der Lehr N ကို, Johansson က S, myc-စညျးမဉျြးစညျးကမျးကူးယူအတွက် ubiquitin / proteasome စနစ်၏ Larson LG က (2003) ဂယက်ရိုက်။ cell Cycle 2-5: 403-407 ။ Doi: 10.4161 / cc.2.5.484
  115. 28 ။ Geng FQ, Wenzel S က, Tansey WP (2012) Ubiquitin နှင့်ကူးယူအတွက် proteasomes ။ Annu ဗြာထဲကဓာတုပစ်စညျး 81: 177-201 ။ Doi: 10.1146 / annurev-ထဲကဓာတုပစ်စညျး-052110-120012 ။ pmid: 22404630
  116. 29 ။ Collins GA, Tansey WP (2006) က proteasome: ကူးယူများအတွက် utility ကို tool ကို? Curr ကအေဲနျဂြီမျိုးရိုးဗီဇ Dev မှ 16: 197-202 ။ pmid: 16503126
  117. 30. Sun DH, Swaffield JC, Johnston SA, Milligan CE, Zoeller RT, Schwartz LM (1997) Phylogenetically ထိန်းသိမ်းထားသည့် Sug1 CAD မိသားစုဝင်ကိုခွဲခြား သတ်မှတ်၍ ကြွက် ဦး နှောက်အာရုံကြောစနစ်တွင်ဖော်ပြသည်။ Dev Neurobiol 33: 877-890 ။ Doi: 10.1002 / (sici) 1097-4695 (199712) 33: 7 <877 :: အကူအညီ-neu2> 3.0.co; 2-5