Endogene opioïde-geïnduceerde neuroplasticiteit van dopaminerge neuronen in het ventrale tegmentale gebied beïnvloedt natuurlijke en opiaatbeloning (2014)

OPMERKINGEN: De DeltaFosB-onderzoeken we citeren er vaak allemaal op de nucleus accumbens (beloningscentrum), en ontdekte dat seks vrijwel dezelfde hersenmechanismen uitschakelt als meth en cocaïne. Uit de mijlpaalstudie van dezelfde onderzoeker (Natural and Drug Rewards handelen in op gemeenschappelijke neurale plasticiteitsmechanismen met ΔFosB als belangrijke bemiddelaar (2013)):

Natuurlijke beloningen en medicijnbeloningen komen dus niet alleen samen op hetzelfde neurale pad, ze komen ook samen op dezelfde moleculaire mediatoren, en waarschijnlijk in dezelfde neuronen in de Nucleus Accumbens, om de incentive-saillantie en het 'willen' van beide soorten beloningen te beïnvloeden.

De take-away: meth, cocaïne en seks doen allemaal dezelfde fundamentele dingen met dezelfde zenuwcellen in het beloningscentrum (nucleus accumbens), wat ze ook elders in de hersenen anders kunnen doen. Dit ontmantelde het gebruikelijke spreekwoord dat natuurlijke beloningen en medicijnen verschillen in mechanismen en effecten.

In dit nieuwe onderzoek is onderzocht wat seks met de VTA doet. De VTA is waar de dopamine-producerende zenuwcellen beginnen - en ze vertakken naar de nucleus accumbens, frontale cortex en amygdala. In feite is de VTA de bron (bron) van de meeste van onze dopamine. Bekijk deze 2 foto's van het beloningscircuit: Pic1, Pic2

Onderzoekers ontdekten dat seks (climax) ervoor zorgt dat de cellichamen in de VTA tijdelijk (bij mannen) inkrimpen. Cellichamen en hun dendrieten bestaat uit de grijze massa van de hersenen. Dit is precies wat heroïneverslaving doet met de VTA (geen eenmalig gebruik van heroïne, maar chronisch heroïnegebruik). Merk op dat deze zelfde inkrimping van de VTA-cellichamen komt voor bij menselijke heroïneverslaafden.

De door geslacht geïnduceerde celinkrimping duurt ten minste 7-dagen. De door seks veroorzaakte veranderingen waren op 30-dagen weer normaal geworden, maar de onderzoekers beoordeelden alleen de dagen 1, 7 en 30.

De krimp van de cellichamen bij heroïneverslaving resulteert in een lagere dopamine in de nucleus accumbens - of wat we noemen desensibilisatie. De onderzoekers dienden morfine toe aan de ratten om hun reactie (na seks) te beoordelen, maar er gebeurde niets. Meestal houden de ratten erg van de morfine, maar hier waren ze tijdelijk ongevoelig. Kortom, het beloningscircuit van de post-ejaculatie ratten reageerde niet op het lage heroïnegehalte. Onderzoekers vermoedden dat hogere doses nodig zouden zijn om een ​​"normale" rattenreactie op te wekken.

Samenvattend - Seks doet (tijdelijk) precies hetzelfde in de VTA als verslaving aan heroïne: het krimpen van de dopamine producerende zenuwcellichamen. Dit leidt tot een lagere dopamine in het beloningscentrum en minder reactievermogen op verdovende middelen - en het duurt minstens 7 dagen voordat rattenhersenen herstellen.

 

J Neurosci. 2014 Jun 25;34(26):8825-36. doi: 10.1523 / JNEUROSCI.0133-14.2014.

Pitchers KK1, Coppens CM2, Beloate LN3, Voller J2, Van S2, Frohmader KS2, Laviolette SR2, Lehman MN4, Coolen LM5.

Abstract

Natuurlijke beloning en drugs van misbruik convergeren op de mesolimbische route en activeren een gemeenschappelijk mechanisme van neurale plasticiteit in de nucleus accumbens. Chronische blootstelling aan opiaten induceert plasticiteit in dopaminerge neuronen van het ventrale tegmentale gebied (VTA), die tolerantie voor morfine-beloning reguleert.

Hier testen we de hypothesen dat door paring geïnduceerde afgifte van endogene opioïden in de VTA morfologische veranderingen van VTA-dopaminecellen bij mannelijke ratten veroorzaakt, die op hun beurt de lange termijn expressie van door ervaring geïnduceerde versterking van seksueel gedrag reguleren.

Ten eerste verminderde seksuele ervaring VTA dopamine soma-grootte 1- en 7-dagen, maar niet 30-dagen na de laatste paarzitting. Dit effect werd geblokkeerd met naloxon voor elke paringssessie; aldus was de plasticiteit van dopamine van VTA afhankelijk van de werking van endogene opioïden.

VTA-plasticiteit was op zijn beurt geassocieerd met een gewijzigde opiaatbeloning, omdat seksueel ervaren mannen geen geconditioneerde plaatsvoorkeur voor 0.5 mg / kg morfine vormden.

Vervolgens werd bepaald of endogene opioïde werking seksuele beloning en geheugen bemiddelt bij mannelijke ratten die tijdens de paringservaring worden behandeld met naloxon, zowel systemisch als intra-VTA. Naloxon voorkwam niet de eerste ervaring-geïnduceerde facilitering van seksueel gedrag tijdens herhaalde paring sessies, of geconditioneerde plaatsvoorkeur voor paring. De naloxonbehandeling verzwakte echter de langere termijn expressie van door ervaring geïnduceerde facilitering van seksueel gedrag en neurale activatie in mesolimbische gebieden geïnduceerd door paring-geassocieerde geconditioneerde aanwijzingen.

Samen tonen deze gegevens aan dat endogene opioïden tijdens paring neurale plasticiteit induceren in VTA dopamine-neuronen die kritisch lijken te zijn voor morfine-beloning en langetermijngeheugen voor natuurlijk beloningsgedrag.

 

Introductie

Natuurlijk beloningsgedrag wordt gemedieerd door het mesocorticolimbische systeem (Meisel en Mullins, 2006; Hoebel et al., 2009; Frohmader et al., 2010a; Pitchers et al., 2010a; Young et al., 2011; Blum et al., 2012). Drugsmisbruik veroorzaakt neurale veranderingen in dit systeem, die op hun beurt bijdragen aan de ontwikkeling en expressie van middelenmisbruik (Hyman et al., 2006; Nestler, 2012). We hebben eerder bepaald dat ervaring met natuurlijk beloningsgedrag, dwz seksuele ervaring bij mannelijke ratten, ook neurale plasticiteit in de nucleus accumbens (NAc) veroorzaakt, waaronder toegenomen dendritische stekels (Pitchers et al., 2010a) en deltaFosB (Pitchers et al., 2013). Op zijn beurt is deze door seks geïnduceerde plasticiteit van cruciaal belang voor de effecten van sekservaring op de daaropvolgende paring, die zich manifesteert als het vergemakkelijken van de initiatie en uitvoering van seksueel gedrag (Pitchers et al., 2010b, 2012, 2013). Bovendien verandert sekservaring de responsiviteit ten opzichte van psychostimulantia, inclusief sensibilisatie van locomotorische activiteit en verbeterde beloning (Frohmader et al., 2010a; Pitchers et al., 2010a, 2013).

Het NAc is een stroomafwaarts doelwit van de dopaminergische neuronen in het ventrale tegmentale gebied (VTA). VTA-dopaminneuronen worden geactiveerd tijdens het paren en na blootstelling aan geconditioneerde aanwijzingen die voorspellend zijn voor seksuele beloning (Balfour et al., 2004; Frohmader et al., 2010a), door middel van endogeen opioïde peptide (EOP) - bindend aan μ-opioïde receptoren (MORs; Matthews en Duits, 1984; Johnson en North, 1992; Klitenick et al., 1992; Ikemoto et al., 1997; Balfour et al., 2004). Vandaar dat blootstelling aan geconditioneerde aanwijzingen die voorspellend zijn voor seksueel gedrag, de afgifte van dopamine-celactivering van EOP en VTA veroorzaakt, wat seksuele motivatie vergemakkelijkt (Mitchell en Stewart, 1990; van Furth et al., 1995; van Furth en van Ree, 1996) en dopamine-afgifte in het NAc (Fiorino et al., 1997).

Herhaalde blootstelling aan exogene opiaten veroorzaakt morfologische veranderingen in de VTA (Mazei-Robison et al., 2011; Mazei-Robison en Nestler, 2012), verminderde soma-grootte van VTA dopamine-neuronen (Sklair-Tavron et al., 1996; Spiga et al., 2003; Chu et al., 2007; Russo et al., 2007; Mazei-Robison et al., 2011), verlaagde niveaus van neurofilamentproteïnen (Beitner-Johnson et al., 1992), verhoogde exciteerbaarheid van dopaminecellen en verminderd axoplasmatisch transport en dopamine-output naar het NAc (Beitner-Johnson et al., 1992; Mazei-Robison et al., 2011). Deze VTA dopamine-neuronveranderingen veroorzaken tolerantie voor morfine-beloning en zijn van voorbijgaande aard aangezien ze binnen een maand na onthouding door geneesmiddelen verdwijnen (Russo et al., 2007). Het is op dit moment onduidelijk of plasticiteit in de VTA dopamine neuronen uniek is voor de werking van opiaten of dat ze ook worden geproduceerd door de afgifte van EOP tijdens natuurlijk beloningsgedrag.

Hier testen we de hypothese dat natuurlijke beloningsbeleving neuroplasticiteit veroorzaakt die lijkt op die veroorzaakt door opiaten, en dus dat opiaten samenkomen op een plasticiteitsmechanisme dat essentieel is voor natuurlijk beloningsgedrag en beloningsgeheugen. We testen of seksuele ervaring bij mannelijke ratten de soma-grootte van VTA dopamine-neuronen vermindert via een proces dat afhankelijk is van EOP-actie in de VTA. Verder onderzoeken we of door EOP geïnduceerde veranderingen in VTA-dopamine-neuronen worden geassocieerd met de versterking van natuurlijk beloningsgedrag en het toekennen van incentive-salience aan signalen in verband met natuurlijke beloning, terwijl ze een marge-overschrijdende tolerantie veroorzaken.

Materialen en methoden

Dieren

Volwassen mannelijke Sprague-Dawley-ratten (200-225 g) werden verkregen van Charles River en gehuisvest in paren in kunstmatig verlichte ruimten op een 12 h licht / donker cyclus in alle experimenten (licht uit bij 10: 00 AM behalve voor het morfine-tolerantie-experiment , licht op bij 5: 00 PM). Voedsel en water waren beschikbaar ad libitum behalve tijdens gedragstesten. Stimulus vrouwtjes werden ovariectomized en geïmplanteerd subcutaan met 5% 17-β-estradiol benzoate SILASTIC capsules (1.98 mm binnendiameter, 0.5 cm lengte, Dow-Corning). Aan injecties van progesteron (subcutaan, 500 μg in 0.1 ml sesamolie) werd 3-6 h toegediend vóór het testen om seksuele ontvankelijkheid te induceren. Alle procedures werden goedgekeurd door de Animal Care Committees van de University of Western Ontario en University of Michigan en conformeerden zich aan de richtlijnen van de Canadian Council on Animal Care en National Institutes of Health waarbij gewervelde dieren betrokken waren bij onderzoek.

Tijdsverloop van VTA dopamine soma grootte veranderingen

Dagelijkse koppelsessies.

Om het tijdsverloop van veranderingen in dopamine-neuron soma-grootte in de VTA te bestuderen, werden seksueel ervaren en naïeve dieren gedood bij 1, 7 of 31 d (n = 5-8 per groep) na de laatste dag van de paring (ervaren) of behandeling (naïef). Seksueel ervaren groepen werden gematcht voor seksueel gedrag tijdens de laatste paarzitting, evenals het totale aantal ejaculaties gedurende de vijf sessies (gemiddelde van 5 voor elke groep), en verschilden niet in enige parameter van seksueel gedrag.

Paringsessies.

Seksueel naïeve mannen werden ingedeeld in een van de twee experimentele omstandigheden: seksueel naïef of seksueel ervaren. Seksueel ervaren dieren mochten vijf opeenvolgende dagen paren met receptieve vrouwtjes in rechthoekige testkooien (60 × 45 × 50 cm) tot weergave van ejaculatie of tot 1 h (welke het eerst was). Kooien werden grondig schoongemaakt met 70% ethanoloplossing en verse bodembedekking werd toegevoegd tussen koppelsessies. Seksueel gedrag werd uitgevoerd tijdens de donkere fase (2-6 h na het begin van het donker). Alleen dieren die tijdens ten minste vier van de vijf paar sessies ejaculeerden, werden als seksueel ervaren beschouwd en opgenomen in experimenten. Alle paringssessies werden geobserveerd en seksueel gedrag werd geregistreerd. Het aantal mounts (M) intromissies (IM's), mount latentie (ML, tijd vanaf introductie van de vrouw naar de eerste mount), intromission latentie (IL, tijd vanaf introductie van de vrouw naar de eerste intromissie) en ejaculatie latentie (EL; tijd van eerste intromissie tot ejaculatie) werden geregistreerd (Agmo, 1997). Naïeve dieren werden geplaatst in een schone testkooi voor 1 h gelijktijdig met seksueel ervaren mannetjes die in dezelfde kamer paren, zodanig dat ze werden blootgesteld aan verre vrouwelijke geuren, en vergelijkbare niveaus van verstoring en milieunieuwheid als ervaren mannetjes.

Immunofluorescentie-labeling.

Dieren werden diep geanesthetiseerd onder gebruikmaking van natriumpentobarbital (270 mg / kg, ip) en intracardiaal geperfuseerd met 50 ml 0.9% zoutoplossing, gevolgd door 500 ml 4% paraformaldehyde in 0.1 m natriumfosfaatbuffer (PB). Hersenen werden verwijderd en achteraf gefixeerd voor 1 h bij kamertemperatuur (RT) in hetzelfde fixeermiddel en vervolgens ondergedompeld in 20% sucrose en 0.01% natriumazide in 0.1 m PB voor opslag bij 4 ° C. Coronale secties werden geknipt bij 35 μm op een bevriezende microtoom (H400R, Microm) en werden verzameld in vier parallelle reeksen in cryoprotectantoplossing (30% sucrose, 30% ethyleenglycol in 0.1 m PB) en daarna bewaard bij 20 ° C. Alle incubaties werden bij kamertemperatuur uitgevoerd met voorzichtig schudden en overvloedige spoelingen met 0.1 m PBS, pH 7.35, tussen incubaties. Secties werden blootgesteld aan 1% H2O2 voor 10 min om endogene peroxidasen te vernietigen, vervolgens geblokkeerd voor 1 h in incubatieoplossing (PBS +: PBS met 0.4% Triton X-100; Sigma-Aldrich) en 0.1% boviene serumalbumine (Jackson Immuno Research Laboratories). Vervolgens werden secties overnacht geïncubeerd bij kamertemperatuur in een muizenyrosinehydroxylase (TH) -antilichaam (1: 20 000; Millipore). Na primaire antilichaamincubatie werden secties geïncubeerd in met AlexaFluor 555 geconjugeerd geitenantilichaam tegen muizen (1: 100; Invitrogen, Eugene, OR) voor 30 min. Ten slotte werden secties gewassen met 0.1 m PB, gemonteerd op Superfrost Plus glasplaatjes, gedroogd en afgedekt met gelvatol dat het anti-fading middel 1,4-diazabicyclo (2,2) octaan (DABCO; 50 mg / ml, Sigma-Aldrich; Lennette, 1978).

Gegevensanalyse: neuron soma-grootte.

Afbeeldingen van TH-immunoreactieve (IR) neuronen in de VTA werden genomen met 40 × vergroting op drie rostrale tot caudale niveaus (Balfour et al., 2004). Er werden geen verschillen gedetecteerd tussen cellen op de verschillende niveaus. De soma-grootte van TH-IR neuronen werd geanalyseerd met ImageJ (National Institutes of Health). Gemiddeld gebied, omtrek en circulariteit werden gemeten zoals beschreven door Sklair-Tavron et al. (1996). Een gemiddelde van 25-cellen per dier (alle 3-VTA-niveaus gecombineerd) werd geanalyseerd en alleen cellen met een duidelijk zichtbare kern werden opgenomen. Voor elk dier werden het gemiddelde gebied, de omtrek en de cirkelvormigheid berekend. Voor statistische analyse werd een tweezijdige ANOVA gebruikt [factoren: seksuele ervaring (seks ervaren of seksueel naïef) en tijd (1, 7 of 31 d)] gevolgd door post hoc vergelijkingen met de Holm-Sidak-methode met een significantieniveau van 0.05.

VTA niet-dopamine veranderingen

Tweewekelijks paring sessies.

Om te testen of seksuele ervaring tijdens dagelijkse paringsessies vereist is voor afname van TH-IR neuron soma-grootte, werden VTA-dopaminneuronen van dieren die gedurende vijf tweewekelijkse paringsessies gepaard waren, geanalyseerd. Paringsessies waren zoals hierboven beschreven, maar gedurende een periode van 2.5 weken. Hersenen werden 7 d verzameld na de laatste dekking of hantering.

Immunoperoxidase labeling.

Daarnaast werd getest of het gebruik van gevoelige kleuringstechnieken met immunoperoxidase en chromogeendetectie ook de mogelijkheid zou bieden om de TH-IR soma-grootteveranderingen te visualiseren. Perfusie en weefselverwerking was gedrag zoals hierboven beschreven. Na behandeling met 1% H2O2 en PBS +, secties werden overnacht geïncubeerd bij RT in een muis polyklonaal tyrosine hydroxylase (TH) -antilichaam (1: 20 000; Millipore). Na primaire antilichaamincubatie werden coupes geïncubeerd met aan biotine geconjugeerd anti-konijn-IgG van geit (1 h, 1: 500 in PBS +; Vector Laboratories), avidine-biotine-mierikswortelperoxidase (1 h, ABC-elite; 1: 1 000 in PBS ; Vector Laboratories) en 3,3'-diaminobenzidine tetrahydrochloride (10 min, 0.02%, DAB; Sigma-Aldrich) versterkt met nikkelsulfaat in (0.02% in 0.1 m PB) met waterstofperoxide (0.015%). Secties werden grondig gewassen in 0.1 m PB om de reactie te beëindigen en gemonteerd op gecodeerde Superfrost plus glasplaatjes (Fisher) met 0.3% gelatine in ddH2O. Na dehydratie werden alle objectglaasjes afgedekt met DPX-montagemiddel (dibutylftalaat xyleen; Sigma-Aldrich).

Gegevensanalyse: neuron soma-grootte.

TH-IR-cellen werden geanalyseerd op oppervlakte, omtrek en circulariteit zoals hierboven beschreven. Daarnaast werden TH-IR-cellen in substantia nigra (SN), in dezelfde secties gebruikt voor analyse van VTA TH-IR-cellen, geanalyseerd. Tenslotte, na analyse van VTA- en SN TH-IR-cellen, werden coupes tegengekleurd met cresylviolet en werden niet-TH-IR-cellen geanalyseerd met dezelfde methoden als hierboven beschreven. Verschillen tussen naïeve en ervaren groepen werden vergeleken met behulp van tweezijdige studenten t tests met een significantieniveau van 0.05.

Effecten van naloxon op door ervaring geïnduceerde vermindering van de hoeveelheid dopamine Soma

Om vast te stellen of MOR's een rol speelden in sekservaring-geïnduceerde veranderingen in dopamine-neuron soma-grootte, werden MOR geblokkeerd tijdens seksueel gedrag. De helft van de dieren kreeg seksuele ervaring, terwijl de andere helft werd behandeld maar seksueel naïef bleef. Seksueel ervaren dieren mochten op 5 opeenvolgende dagen paren. Binnen de seksueel ervaren en naïeve groepen werden dieren behandeld met de niet-selectieve MOR-antagonist naloxon (10 mg / kg, sc; Sigma-Aldrich, opgelost in 0.9% zoutoplossing) of zoutoplossing 30 min voor de introductie van het vrouwtje (ervaren) of vóór behandeling (naief); waardoor vier experimentele groepen worden gecreëerd: seksueel naïeve zoutoplossing (Naive Sal), seksueel naïeve naloxon (Naive NLX), seksueel ervaren zoutoplossing (Exp Sal) en seksueel ervaren naloxon (Exp NLX; n = 5-8 per groep). Behandeling met naloxon had geen statistisch significante effecten op enige parameter van seksueel gedrag, op geen van de 5 d, en naloxon- en zoutoplossing-behandelde groepen waren identiek in seksuele ervaring. Alle dieren werden gedood via intracardiale perfusie 7 d na de laatste paring sessie. Secties, immunohistochemie en data-analyse (tweewegs-ANOVA; factoren: sekservaring en medicamenteuze behandeling) voor dopamine-somagrootte werden uitgevoerd zoals hierboven beschreven.

Door morfine geconditioneerde plaatsvoorkeur

Experimenteel ontwerp.

Eerder, Russo et al. (2007) toonde aan dat chronische morfine tolerantie induceert voor morfine-beloning. Aangezien seksuele ervaring en chronische morfine vergelijkbare verlagingen van de soma-grootte van dopamine-neuronen in de VTA veroorzaken, werd de functionele relevantie van de seksegerelateerde morfologische veranderingen getest op morfine-beloning. Seksueel ervaren en naïeve dieren werden verdeeld in zes verschillende experimentele groepen (n = 9-13 per groep) op basis van seksueel gedrag (seksueel naïef of ervaren) en morfinedosis (0.5, 5.0 of 10.0 mg / kg, ip) en werden getest op morfine-geïnduceerde geconditioneerde plaatsvoorkeur (CPP).

Morfine-CPP.

De conditionering vond plaats 1 d na de laatste paarzitting en groepen werden vergeleken tijdens de laatste paarzitting voor seksuele prestaties. Het gebruikte CPP-paradigma bestond uit een voor- test-, conditionerings- en posttest, en apparatuur was gebaseerd op Tenk et al. (2009). In het kort: het CPP-apparaat (MED Associates) bestond uit drie verschillende kamers. Tussen elke sessie werd het apparaat grondig gereinigd met 70% ethanoloplossing om aanhoudende olfactorische signalen te minimaliseren. Om individuele voorkeuren te bepalen, werd een pretest uitgevoerd waarbij dieren gedurende 15 minuten vrije toegang kregen tot het volledige apparaat. Als groep vertoonden dieren geen significante voorkeur voor een specifieke kamer, maar elk individueel dier had een lichte initiële voorkeur. Ratten die een substantiële voorkeur vertoonden voor een van de kamers (> 200 s verschil tussen de tijd doorgebracht in elk van de kamers; <5% van de dieren) tijdens de pretest, werden uitgesloten van het onderzoek. Tijdens het conditioneren werd het medicijn gekoppeld aan een aanvankelijk geprefereerde of niet-geprefereerde kamer met behulp van een onbevooroordeeld paradigma (Tzschentke, 2007) en dieren waren beperkt tot de kamers voor 30 min. Dieren werden 's ochtends geïnjecteerd met zoutoplossing (ip) (9: 00 AM naar 12: 00 PM) en opgesloten in de zoutgepairede kamer (controle). 'S Middags (1: 00-4: 00 PM) werden de dieren geïnjecteerd met morfine (ip, 0.5 mg / kg, 5.0 mg / kg of 10.0 mg / kg; morfinesulfaat opgelost in 0.9% zoutoplossing, Johnson Matthey) en ingesloten naar de morfine-gepaarde kamer. Dieren werden onderworpen aan twee conditioneringsdagen. De volgende dag (3 d na de laatste dag van de paring) werd een posttest uitgevoerd, procedureel identiek aan de pretest. Voor statistische analyse werd de tijd doorgebracht in de morfine-gepaarde kamer tijdens de posttest vergeleken met de tijd doorgebracht in de in zoutoplossing gepaarde kamer tijdens de posttest voor seksueel naïeve of ervaren mannen binnen elke dosering met behulp van een gepaarde t test. p <0.05 werd als statistisch significant beschouwd. Extra controlegroepen van seksueel naïeve en ervaren dieren kregen zoutoplossing in zowel gepaarde als ongepaarde kamers om als negatieve controles te dienen. Voor beide groepen werden geen verschillen in tijdsbesteding tussen kamers waargenomen.

Effecten van systemisch naloxon op door ervaring geïnduceerde facilitering van seksueel gedrag

Experimenteel ontwerp.

Seksuele ervaring resulteert in het faciliteren van seksueel gedrag dat wordt gehandhaafd gedurende ten minste 1 maanden (Pitchers et al., 2012). Om het effect te analyseren van het blokkeren van de MOR op ervaringsgeïnduceerde facilitering van seksueel gedrag, ontvingen seksueel ervaren dieren naloxon of zoutoplossing vóór de vijf opeenvolgende paringssessies (n = 12 elk) zoals hierboven beschreven. Een week na de laatste paar sessie, werd een laatste paringstest uitgevoerd, waarbij alle dieren mochten paren tot één ejaculatie of tot 1 h. Er werd geen behandeling met naloxon of zoutoplossing toegediend vóór het paren op de laatste testdag. Paringsparameters werden vergeleken om te bepalen of naloxon invloed had op door beide-ervaring geïnduceerde facilitatie van paring (dag 1 versus dag 5) of onderhoud van deze faciliteit (dag 5 vs-test) met behulp van een tweezijdige ANOVA [factoren: behandeling (zoutoplossing versus naloxon ) en dag (dag 1, dag 5 of test)] en Holm-Sidak-methode voor post hoc vergelijkingen. Voor alle statistische tests, p <0.05 werd als statistisch significant beschouwd.

Aanvullende controle-experimenten

Systemische naloxon op testdag.

Om aan te tonen dat veranderd seksueel gedrag op de laatste testmoment niet te wijten was aan de afwezigheid van naloxon, dienden we naloxon of zoutoplossing op de laatste paardeproefdag toe aan dieren die een paring hadden gekregen die gepaard ging met naloxon terwijl ze seksuele ervaring opdeden. In het bijzonder ontvingen alle dieren naloxoninjectie (10 mg / kg, sc) 30 min. Voorafgaand aan paring aan één ejaculatie gedurende 5 opeenvolgende dagen. Op testdag 7 d later ontving ongeveer de helft van de dieren een injectie met naloxon (10 mg / kg, n = 7) of zoutoplossing (n = 6) 30 min voor de introductie van een receptieve vrouw. Seksueel gedrag werd waargenomen en vastgelegd. Paringsparameters werden vergeleken om te bepalen of naloxon invloed had op door beide-ervaring geïnduceerde facilitatie van paring (dag 1 versus dag 5) of onderhoud van deze faciliteit (dag 5 vs-test) met behulp van een tweezijdige ANOVA [factoren: behandeling (zoutoplossing versus naloxon ) en dag (dag 1, dag 5 of test)] en Holm-Sidak-methode voor post hoc vergelijkingen. Voor alle statistische tests, p <5% werd als statistisch significant beschouwd.

Effecten van naloxon op kortdurende expressie van gefaciliteerd seksueel gedrag.

De effecten van behandeling met naloxon (10 mg / kg, sc) tijdens het paren werden getest op daaropvolgend seksueel gedrag tijdens een laatste paardeproefdag, die alleen 1 d werd uitgevoerd na de laatste dekking (zoutoplossing, n = 5; naloxon, n = 4).

Systemische naloxon-voorbehandeling.

Om te bepalen of de herhaalde behandeling van naloxon alleen leidt tot verslechtering van seksueel gedrag 7 d na de laatste behandeling, ontvingen seksueel naïve dieren vijf dagelijkse naloxon- (10 mg / kg, sc) of zoutoplossing-injecties op opeenvolgende dagen vóór een paringstest 7 d na laatste naloxon of zoutoplossing injectie. Op deze laatste testdag kregen de dieren geen enkele injectie. Seksueel gedrag werd waargenomen en vastgelegd zoals hierboven beschreven. Parameters van paring werden vergeleken tussen groepen met ongepaarde t testen. Voor alle statistische tests, p <5% werd als statistisch significant beschouwd.

Systemische naloxon en seksbeloning.

Een mogelijkheid voor de verzachtende effecten van naloxon op het vertonen van instandhouding van gefaciliteerd seksueel gedrag is dat naloxon de belonende effecten van seksueel gedrag blokkeert. Om deze mogelijkheid te testen, werd het CPP-paradigma uitgevoerd voor seksueel gedrag onmiddellijk na naloxon- of zoutinjectie bij mannen zonder voorafgaande seksuele ervaring. CPP-procedure was vergelijkbaar met hierboven beschreven voor morfine-CPP, inclusief pretest, conditioneringsdagen en posttest.

Seksegedrag was gepaard met de aanvankelijk niet-geprefereerde kamer. Op een gebalanceerde manier ontving elk dier een injectie met naloxon (n = 12) of zoutoplossing (n = 11) 30 min voor het ontvangen van toegang tot een receptieve vrouw. De gemiddelde duur van de paringssessie was ~13 min. Eén minuut na ejaculatie werd het dier in de gepaarde kamer geplaatst voor 30 min. Op de andere conditioneringsdag ontvingen de dieren een injectie van naloxon of zoutoplossing (ongeacht welke ze ontvingen vóór paring) en werden ze gedurende 30 min. In de ongepaarde kamer geplaatst. Vervolgens werd een posttest uitgevoerd, identiek aan de pretest. Om de voorkeur voor de kamer te bepalen, werd de tijd doorgebracht in de gepaarde kamer tijdens de voormeting en de posttest vergeleken. Voor statistische analyse, gekoppeld t testen werden gebruikt om voorkeuren en verschilscores te vergelijken, en tijd in gepaarde kamer tijdens de pretest en de posttest om te bepalen of een significante CPP werd gevormd voor seksueel gedrag. p <0.05 werd als significant beschouwd.

Effecten van intra-VTA naloxon op ervaring-geïnduceerde facilitering van seksueel gedrag

Experimenteel ontwerp.

Om vast te stellen of EOP-actie specifiek in de VTA verantwoordelijk was voor de effecten van door seksueel gedrag geïnduceerde veranderingen in seksueel gedrag, ondergingen dieren vóór vijf dagelijkse paring sessies een lokale infusie van naloxon of zoutoplossing in de VTA. Gedragsparadigma was vergelijkbaar met het systemische naloxon-experiment. Seksueel ervaren dieren mochten tijdens 5 opeenvolgende dagen paren tot één ejaculatie of tot 1 h. Vijftien minuten voordat het receptieve vrouwtje werd geïntroduceerd, ontvingen de mannelijke ratten bilaterale infusies van ofwel naloxon (10 μg / μl per halve bol, 0.5 μl volume, opgelost in 0.9% zoutoplossing) of zoutoplossing (0.5 μl per halve bol). Bilaterale micro-injecties werden toegediend met een stroomsnelheid van 0.5 μl / min over een 1 min interval gevolgd door een extra 1 min met de injectiecanule op zijn plaats gelaten voor diffusie. De injectiecanule werd vervolgens vervangen door de dummy canule en de stofkap. Een week na de laatste dag van de paring (testdag) gingen alle dieren opnieuw gepaard met ejaculatie zonder een infusie van naloxon of zoutoplossing. Figuur 3A schetst het experimentele ontwerp. Gegevensanalyse werd uitgevoerd zoals beschreven in systemisch naloxon-experiment.

Canulatie chirurgie.

Mannelijke ratten werden geanesthetiseerd met een intraperitoneale injectie (0.1 ml / kg) ketamine (0.87 mg / ml) en xylazine (0.13 mg / ml) en geplaatst in een stereotaxisch apparaat (Kopf Instruments). Bilaterale 21-gauge geleidepenzen (Plastics One) werden via kleine boorgaten in de schedel in de hersenen naar de VTA gebracht op -4.8 mm AP, ± 0.75 mm ML van bregma en -7.8 mm DV vanaf de schedel naar Paxinos en Watson (2013). Canules werden vastgezet met tandheelkundig acryl dat zich aan drie schroeven bevond die in de schedel waren geplaatst. Dieren kregen een 2-week herstelperiode en werden dagelijks behandeld voor gewenning aan de hantering en injectieprocedures die tijdens gedragstesten werden gebruikt.

Verificatie van de plaatsing van de canule.

De plaatsing van de canules werd onderzocht met behulp van TH-immunokleuring om te bevestigen dat de VTA nauwkeurig was gericht. Alleen dieren met de juiste plaatsingen werden opgenomen in de analyses (uiteindelijke groepsgroottes: ervaren zoutoplossing n = 8; ervaren naloxon n = 6). Drie extra dieren die intra-VTA-naloxoninjecties kregen die buiten de VTA waren gericht, werden samen gegroepeerd in een "gemiste" injectiegroep. De gemiste groep werd afzonderlijk geanalyseerd om te dienen als anatomische controles en Mann-Whitney U test werd gebruikt om gedrag op de laatste testdag te vergelijken met met naloxon en met zoutoplossing behandelde ervaren mannen.

Paring-geassocieerde contextuele cue-geïnduceerde pERK-expressie

Experimenteel ontwerp.

Blootstelling aan de kooi waarin mannetjes paringservaring hebben opgedaan, heeft aangetoond dat ze MOR-activering veroorzaken in de VTA en neurale activiteit in VTA en NAc (Balfour et al., 2004). Daarom dient de parende omgeving als een geconditioneerde cue als voorspeller van seksuele beloning. De huidige studie testte of MOR-activatie tijdens seksuele ervaring vereist is voor daaropvolgende geconditioneerde cue-geïnduceerde neurale activering. Naloxon of zoutoplossing werd systemisch (ip) 30 min toegediend vóór plaatsing in de paringsarena en de introductie van een receptieve vrouw voor paring (ervaren), of vóór de controlemanipulatie die bestond uit plaatsing in de behandelingskooi zonder presentatie van de vrouw (neutraal omgeving, naïef). Zo zijn er vier experimentele groepen gemaakt: Naive Sal, Naive NLX, Exp Sal ​​en Exp NLX. Een week na de definitieve paringsessie werd de helft van de dieren in elke groep blootgesteld aan de paringskooi (Exp-mannetjes: geslachtsgebonden geconditioneerde aanwijzingen) of behandelingskooi (naïeve mannen: niet-zinnige / neutrale signalen), terwijl de andere helft niet werd blootgesteld aan eventuele cues en in plaats daarvan bleven in de thuiskooien (om baseline pERK-expressie te bepalen). Dit experimentele paradigma produceerde 8-groepen: Naive Sal-No Cue, Naive Sal + Cue, Naive NLX-No Cue, Naive NLX + Cue, Exp Sal-No Cue, Exp Sal ​​+ Cue, Exp NLX-No Cue, Exp NLX + Cue (n = 4 elk behalve Naive NLX-No Cue, n = 3). Dieren werden met 10-15 geperfundeerd min na cue-belichting. Controledieren werden uit hun huiskooien verwijderd en gelijktijdig geperfuseerd.

Immunohistochemie.

Sectie en immunohistochemie werden uitgevoerd zoals hierboven beschreven. Hier gebruikten we een polyklonaal konijnantilichaam tegen p42 en p44 MAP-kerneigenschappen ERK1 en ERK2 (pERK; 1: 4 000; celsignaaitechnologie). Het primaire antilichaam is uitgebreid gekarakteriseerd in de literatuur (Roux en Blenis, 2004; Murphy en Blenis, 2006; Frohmader et al., 2010b). Bovendien onthulde weglating van het primaire antilichaam alle immunoreactiviteit en analyse van Western blot van hersenweefsel van rat onthulde twee banden bij de geschikte molecuulgewichten.

Gegevensanalyse.

pERK-immunoreactieve (-IR) cellen werden geteld in een aantal hersengebieden met behulp van een camera lucida tekenbuis bevestigd aan een Leica DMRD-microscoop: NAc [kern (C) en schaal (S); 400 × 600 μm; mediale prefrontale cortex; mPFC; anterior cingulate area (ACA); prelimbische cortex (PL); infralimbic cortex (IL); 600 × 800 μm elk], caudate-putamen (CP; 800 × 800 μm) en basolaterale amygdala (BLA; 900 × 1200 μm; Balfour et al., 2004; Frohmader et al., 2010b; Pitchers et al., 2010b). Twee delen werden geteld per hersengebied en aantallen cellen in de standaardgebieden van analyses werden vervolgens berekend als aantallen cellen per mm2. De twee tellingen werden gemiddeld per dier voor berekening van groepsgemiddelden. Groepsgemiddelden binnen seksueel ervaren of naïeve groepen werden vergeleken met behulp van tweeweg ANOVA [factoren: medicamenteuze behandeling (NLX of Sal) en cue (cue of geen cue)] gevolgd door post hoc vergelijkingen met de somtesten van Holm-Sidak of Mann-Whitney, waar van toepassing met een significantieniveau van p <0.05. In de NAc-schaal van seksueel ervaren dieren was er een sterke trend in de richting van significantie van de factoren en daarom werden paarsgewijze vergelijkingen uitgevoerd om alleen groepen met zoutoplossing (Sal-No Cue) en zoutoplossing (Sal + Cue) te vergelijken.

Afbeeldingen.

Digitale beelden werden vastgelegd met behulp van een CCD-camera (Macrofire, Optronics) gekoppeld aan een Leica microscoop (DM5000B) met vaste camera-instellingen. Afbeeldingen zijn geïmporteerd in Adobe Photoshop 9.0-software. Afbeeldingen werden op geen enkele manier gewijzigd, behalve voor aanpassing van helderheid en contrast.

Resultaten

Door sekservaring geïnduceerde veranderingen in VTA-dopaminecellen

Seksuele ervaring resulteerde in een afname van de grootte van VTA dopamine soma (Fig 1A-C). Seksuele ervaring aanzienlijk verminderd gebied en perimeter van de soma van VTA TH-IR-cellen (gebied: F(1,31) = 23.068, p <0.001; omtrek, F(1,31) = 18.225, p <0.001). Er was ook een belangrijk significant effect van tijd (gebied: F(2,31) = 6.377, p = 0.005; omtrek, F(2,31) = 4.389, p = 0.021) en een significante interactie tussen ervaring en tijd (gebied: F(2,31) = 5.284, p = 0.011; omtrek, F(2,31) = 4.347, p = 0.022). Paarsgewijze vergelijkingen toonden aan dat het gebied en de omtrek van de TH-IR-cellen significant waren verminderd 1 en 7 d na de laatste dag van seksueel gedrag bij seksueel ervaren dieren in vergelijking met seksueel naïeve controles [Fig 1B, Gebied: p = 0.002 (1 d), p <0.001 (7 d); C, omtrek: p = 0.009 (1 d), p <0.001 (7 d)]. Het effect van seksueel gedrag verdween wanneer het werd gevolgd door de periode van onthouding van beloningen toen de soma-grootte van TH-IR-neuronen terugkeerde naar de basislijn 31 d na de laatste paringsessie (Fig 1B, Gebied: p = 0.798; C, omtrek: p = 0.785). Seksuele ervaring geïnduceerde veranderingen werden niet gedetecteerd in circulariteit op een van de tijdstippen (Fig 1D). VTA dopamine soma groottevermindering was niet afhankelijk van dagelijkse paringssessies, aangezien paringservaring tijdens vijf tweewekelijkse paring sessies ook een verminderde VTA dopamine soma-grootte produceerde (Fig 2A,B, E-H, Gebied: p = 0.004; omtrek: p <0.001). Sekservaring had daarentegen geen invloed op de grootte van de TH-IR soma in de substantia nigra (Fig 2C, I-J, Gebied: p = 0.13; omtrek: p = 0.16) noch veranderde de soma-grootte in nabije VTA niet-TH-IR neuronen (Fig 2D, E-H, Gebied: p = 0.46; omtrek: p = 0.45).

Figuur 1. 

Endogene opioïde-geïnduceerde soma-grootteveranderingen van VTA dopamine neuronen. A, Representatieve beelden van VTA-dopaminneuronen van seksueel naïeve en ervaren dieren die de vermindering in soma-grootte 7 d na de laatste paarzitting laten zien. Schaalbalk, 5 μm. Kwantitatieve gegevens die aantonen dat seksuele ervaring (Exp, zwarte balken) een aanzienlijke reductie in het areaal veroorzaakte (B; in μm2) en perimeter (C; in μm) van VTA-dopaminecellen, 1 d (Naive, Exp; n = 6) en 7 d (Naïef, n = 5; Exp, n = 6), maar niet 31 d (Naïef, n = 6; Exp, n = 8) na de definitieve dekking, vergeleken met seksueel naïeve controles (Naïeve, witte balken). Het areaal was verlaagd tot 84% bij ervaren mannen in vergelijking met naïeve controles bij 1 of 7 d. Perimeter was gereduceerd tot 91.6 en 90% in ervaren groepen vergeleken met controle bij 1 en 7 d resp. Er was geen effect op circulariteit (D). Deze dopaminecel-plasticiteit in het gebied (E) en perimeter (F) werd voorkomen door naloxon (NLX, n = 8), maar niet zoutoplossing (Sal, n = 7) behandeling tijdens de paring, 7 d na de uiteindelijke paring sessie vergeleken met seksueel naïeve controles (Sal, n = 5; NLX, n = 6). Gegevens vertegenwoordigen gemiddelde ± SEM; * geeft significant verschil aan in vergelijking met seksueel naïeve controles van dezelfde dag (B, C) of vergeleken met met zoutoplossing behandelde seksueel naïeve controles en met naloxon behandelde seksueel ervaren mannen (E, F).

Figuur 2. 

Seksuele ervaring verminderde de soma-grootte niet in substantia nigra dopamine-neuronen of VTA-niet-dopamine-neuronen. VTA TH-IR neuron soma-gebied (A; in μm2) en perimeter (B; in μm) in seksueel naïeve (witte) en ervaren (zwarte) dieren die ervaring hebben opgedaan door twee keer per week te paren in plaats van gedurende opeenvolgende dagen. Substantia nigra TH-IR soma-gebied (C) en VTA niet-TH-IR soma-gebied (D) in seksueel naïeve (witte) en ervaren (zwarte) dieren. Gegevens vertegenwoordigen gemiddelde ± SEM; * geeft een significant verschil aan in vergelijking met seksueel naïeve controles. Representatieve beelden van TH-IR (bruine) neuronen in VTA van seksueel naïef (E), en ervaren (F) mannen. G, H, Een afbeelding met een hogere vergroting van het neuron aangegeven door de pijl in E en F respectievelijk. Nissl-gekleurde neuronen worden in deze afbeeldingen in blauw weergegeven. Representatieve beelden van TH-IR neuronen in SN van seksueel naïef (I) en ervaren (J) mannen. Schaalbalken: E-J, 20 μm.

Door sekse-ervaring geïnduceerde vermindering van de soma-grootte van VTA dopamine-neuronen is afhankelijk van activering van opioïde receptor

De verlaging van het aantal dopamine-neuronen van VTA, veroorzaakt door seksuele ervaring, werd geblokkeerd door de niet-selectieve MOR-antagonist naloxon, toegediend vóór elke paarssessie. De behandeling met Naloxon vóór paring sessies had een significant effect op het gebied (F(1,22) = 4.738, p = 0.041) en neigden naar een significant effect op de omtrek (F(1,22) = 2.892, p = 0.052). Een significante interactie tussen ervaring en naloxonbehandeling werd gevonden voor het gebied (F(1,22) = 5.578, p = 0.027) en perimeter (F(1,22) = 8.167, p = 0.009). Paarsgewijze vergelijkingen toonden aan dat de seksuele ervaring bij met zoutoplossing behandelde dieren significant de oppervlakte en perimeter van VTA-dopamineneuronen 7 d na de laatste paarzitting verlaagde in vergelijking met met zoutoplossing behandelde seksueel naïeve mannen (Fig 1E, Gebied: p = 0.018; F, omtrek: p = 0.007). Daarentegen verschilden seksueel ervaren met naloxon behandelde dieren niet van met naloxon behandelde naieve mannetjes (Fig 1E, Gebied: p = 0.483; F, omtrek: p = 0.330). Bovendien was de soma-grootte van ervaren zoutoplossing-dieren significant verminderd in vergelijking met ervaren naloxon-dieren (Fig 1E, Gebied: p = 0.002; F, omtrek: p = 0.002). Dit effect van naloxon was specifiek voor seksuele ervaring, omdat behandeling met alleen naloxon alleen de soma-grootte van TH-IR-cellen in seksueel naïeve met naloxon behandelde mannen niet beïnvloedde in vergelijking met met zoutoplossing behandelde controles (Fig 1E,F). Bovendien was dit effect van naloxon op door ervaring geïnduceerde vermindering van de somadimensie niet het gevolg van de effecten van naloxon op seksueel gedrag, aangezien het paringsgedrag niet significant verschilde tussen met naloxon en saline behandelde mannetjes, behalve dat het langer duurde om de paring na de ejaculatie in te zetten (post-ejaculatie-interval) bij met naloxon behandelde mannen tijdens de eerste en vijfde paarzitting (p = 0.03 en p = 0.004, respectievelijk). Beide met zoutoplossing en naloxon behandelde mannetjes coproduceerden zich tot ejaculatie tijdens elk van de vijf koppelingssessies.

Seksuele ervaring-geïnduceerde morfine beloningstolerantie

De effecten van seksuele ervaring op de grootte van VTA-dopamineama door de werking van EOP in de VTA komen overeen met die gerapporteerd voor exogene opiaten (Sklair-Tavron et al., 1996; Russo et al., 2007). Daarom werd getest of natuurlijke beloningsgeïnduceerde plasticiteit van DTA-dopaminecellen de beloning voor de opiaatmorfine beïnvloedt. Inderdaad, seksuele ervaring veroorzaakte morfine-beloningstolerantie, vergelijkbaar met de effecten van chronische opiaten (Russo et al., 2007). Seksueel ervaren mannen slaagden er niet in om een ​​CPP te ontwikkelen voor 0.5 mg / kg morfinedosis; terwijl seksueel naieve mannen wel een CPP voor deze dosis vormden, zoals aangegeven door meer tijd door te brengen in de morfine gepaarde kamer in vergelijking met de in zoutoplossing gepaarde kamer tijdens de posttest (Fig 3; p = 0.039). Zowel seksueel naïeve als ervaren groepen brachten een significant grotere hoeveelheid tijd door in de morfine-gepaarde kamer in vergelijking met de zout-gepaarde kamer met hogere doses morfine: 5.0 mg / kg (Fig 3; Naief: p = 0.029; Exp: p = 0.012) en 10.0 mg / kg (Fig 3; Naief: p <0.001; Exp: p = 0.002).

Figuur 3. 

De effecten van seksuele ervaring op morfine-beloning. Tijden doorgebracht in saline- (Sal) of morfine-gepaarde (Mor; 0.5, 5 of 10 mg / kg lichaamsgewicht) kamers tijdens de posttest in seksueel naïef (Naïef, n = 10-13) of ervaren (Exp, n = 9-13) mannen. Gegevens gepresenteerd als gemiddelde ± SEM; * geeft significant verschil aan in vergelijking met Sal-gepaarde kamer binnen dezelfde dieren. NS, niet significant.

Door sekservaring geïnduceerde facilitering van paringsgedrag is afhankelijk van activering van opioïdreceptor

De bevindingen tonen tot nu toe aan dat EOP die in de VTA werkt tijdens 5 dagelijkse korte koppelsessies de plasticiteit van de VTA-dopaminneuronen veroorzaken die vergelijkbaar is met de effecten van chronische morfine of heroïne zelftoediening (Russo et al., 2007; Mazei-Robison et al., 2011). We veronderstelden dat VTA-dopamine-reductie van soma-grootte cruciaal is voor beloningsleren en specifiek voor seksuele ervaring-geïnduceerde facilitering van seksueel gedrag in termen van motivatie en prestaties. Deze hypothese werd getest door MOR te blokkeren met behulp van naloxon tijdens het paren en het onderzoeken van de effecten op het faciliteren van seksueel gedrag geïnduceerd door seksuele ervaring tijdens de vijf dagelijkse paringssessies. Gegevens worden gepresenteerd in Figuur 4 alleen voor de eerste en vijfde koppelsessies, omdat dit de gegevens zijn die het door ervaring geïnduceerde faciliteren van het paringsgedrag het beste illustreren. Bovendien worden de langetermijneffecten van de behandeling met naloxon tijdens de paarsessies getest op het onderhouden van door ervaring geïnduceerde facilitering van het paringsgedrag, tijdens een laatste paarproef 1 een week later. Figuur 4A toont het experimentele ontwerp. Er was een significant hoofdeffect van de paringssessie op alle parameters van seksueel gedrag (mount latency: F(2,55) = 11.286, p <0.001; intromissie latentie: F(2,55) = 8.767, p <0.001; latentie ejaculatie: F(2,55) = 10.368, p <0.001) en naloxonbehandeling op latenties om op te bouwen (F(1,55) = 6.585, p = 0.013) en intromissie (F(1,55) = 7.863, p = 0.007). Paarsgewijze vergelijkingen toonden aan dat behandeling met naloxon seksueel gedrag tijdens de eerste paarssessie beïnvloedde, omdat naloxondieren significant langere latenties hadden om als eerste te worden gemount (p = 0.002) en intromissie (p = 0.002) vergeleken met zoutcontroles op de eerste dag van de paring. Dit naloxon-effect op het initiële geslachtsgedrag werd verminderd door seksuele ervaring en niet waargenomen tijdens een van de volgende paarsessies (Tabel 1). Bovendien was de toediening van naloxon vóór elk van de vijf koppelingssessies geen belemmering voor de eerste facilitering van seksueel gedrag met seksuele ervaring. In overeenstemming met de versterkende effecten van seksuele ervaring, vertoonden met zoutoplossing behandelde mannetjes een afgenomen latentie om te stijgen (Fig 4B; p = 0.032) intromissie (Fig 4C; p = 0.033) en ejaculatie (Fig 4D; p <0.001) tijdens de vijfde paar sessie vergeleken met de eerste paar sessie, wat duidde op facilitering van seksueel gedrag. Evenzo vertoonden met naloxon behandelde mannen significant kortere latenties om te monteren (Fig 4B; p <0.001), intromissie (Fig 4C; p <0.001) en ejaculatie (Fig 4D; p = 0.017) op de vijfde vergeleken met de eerste dag. Bovendien verschilden naloxon-behandelde mannetjes niet van zoutcontroles tijdens een van de latenties tijdens de vijfde paarssessie.

Figuur 4. 

Endogene opioïden spelen een cruciale rol bij het door ervaring ervaren faciliteren van seksueel gedrag. A, Experimenteel ontwerp. B-D, Seksueel gedrag parameters voor mannen behandeld met zoutoplossing (Sal, witte balken, n = 11) of naloxon (NLX; zwarte balken, n = 12) met systemische administratie. De getoonde gegevens zijn latency om te koppelen (B; seconden), intromission (C; seconden) en ejaculatie (D; seconden) op dagen 1 en 5 van vijf opeenvolgende dagen van paring. Bovendien worden er gegevens getoond voor de laatste paartest, 7 d na de vijfde paaringssessie. Gegevens worden gepresenteerd als gemiddelde ± SEM; + geeft significant verschil aan tussen dagen 1 en 5 binnen de behandeling; * geeft significant verschil aan tussen dag en dag test 5 binnen de behandeling; # duidt op een significant verschil tussen naloxon en zoutgroepen binnen een dag.

Tafel 1. 

Naloxon toediening voorafgaand aan paring verhoogde latenties om te monteren en intromissie alleen op de eerste dag van paring

De behandeling met naloxon tijdens seksuele belevingssessies verstoorde het onderhoud van door ervaring geïnduceerde facilitering van seksueel gedrag op de laatste paardeproefdag. De testdag werd uitgevoerd 7 d na de uiteindelijke paring sessie in de afwezigheid van een naloxon injectie. Met zoutoplossing behandelde controlemannen vertoonden de verwachte door ervaring geïnduceerde facilitering van seksueel gedrag. Met name de latencies om te monteren, intromissie en ejaculatie verschilden niet tussen de vijfde paar sessie en de laatste testdag (Fig 4B-D). Overwegende dat met naloxon behandelde mannen een significante toename van de latenties vertoonden (Fig 4B; p = 0.033), intromission (Fig 4C; p = 0.036) en ejaculatie (Fig 4D; p = 0.049) op de testdag vergeleken met de vijfde paaringssessie. Ook werden naloxon-dieren op de testdag significant langzamer gevonden dan met zoutoplossing behandelde mannetjes, zoals weergegeven door langere latencies om te zetten (Fig 4B; p = 0.017) en intromissie (Fig 4C; p = 0.043). De behandeling met naloxon blokkeerde dus het onderhoud, maar niet de initiële ontwikkeling van door ervaring geïnduceerde facilitering van seksueel gedrag. Deze bevindingen duiden op een kritische rol voor door EOP geïnduceerde VTA dopamine neuron plasticiteit op lange termijn expressie van versterking van natuurlijk beloningsgedrag.

Verschillende aanvullende controle-experimenten werden uitgevoerd om te bepalen dat de effecten van opioïde receptorblokkade bij verlies van langetermijnversterking van seksueel gedrag optraden onafhankelijk van een gebrek aan naloxon toediening op de laatste paardeproefdag (Fig 5A,B), waren specifiek voor het verlies van langdurig, maar niet op korte termijn, onderhoud van paring facilitering (Fig 5E,F), werden niet veroorzaakt door dagelijkse blootstelling aan naloxon alleen (Fig 5C,D) en werden niet veroorzaakt door verlies van seksuele beloning bij met naloxon behandelde mannen (Fig 5G,H). Ten eerste, om aan te tonen dat veranderd seksueel gedrag bij de uiteindelijke koppelingstest niet te wijten was aan de afwezigheid van naloxon, werd naloxon of zoutoplossing op de laatste paardeproefdag toegediend aan dieren die een paring hadden gekregen die gepaard ging met naloxon terwijl ze seksuele ervaring opdeden (Fig 5A). Er was een significant hoofdeffect van de paringsdag op latencies om te koppelen (Fig 5B; F(2,27) = 30.031, p = 0.038) en intromissie (Tabel 2; F(2,27) = 10.686, p = 0.048). Er was geen hoofdeffect van de paringsdag op latentie tot ejaculatie (Tabel 2; F(2,27) = 2.388, p = 0.109) Zoals hierboven beschreven, had de behandeling met naloxon tijdens de paring geen invloed op het faciliteren van seksueel gedrag tijdens de eerste vijf seksuele ervaringssessies. Beide groepen (met zoutoplossing en met naloxon behandelde groepen zoals bepaald door de behandeling tijdens de laatste paarvormingstest, beide kregen naloxon tijdens de paring) toonden gefaciliteerd seksueel gedrag op dag 5 vergeleken met dag 1 en vertoonden aanzienlijk kortere latencies tot de eerste reeks (Fig 5B; zoutoplossing: p = 0.033; naloxon: p = 0.014) en intromissie (Tabel 2; zoutoplossing: p = 0.034; naloxon: p = 0.026). Dieren die naloxon of zoutoplossing op de laatste paardeproefdag kregen, hadden een langere latentie om te mounten (Fig 5B; zoutoplossing: p = 0.018; naloxon: p = 0.029) en intromissie (Tabel 2; zoutoplossing: p = 0.019; naloxon: p = 0.020) vergeleken met de vijfde dag van paringservaring. Daarom was de toediening van naloxon of zoutoplossing op de testdag vlak voor de paring niet van invloed op het effect van de behandeling met naloxon tijdens seksuele belevingssessies en was de verzwakking van langdurige facilitatie van seksueel gedrag identiek aan die bij dieren die geen enkele injectie kregen op de laatste testdag (Fig 4).

Figuur 5. 

Endogene opioïden zijn belangrijk bij de langetermijnuitdrukking van door ervaring geïnduceerde facilitering van seksueel gedrag. A, Experimenteel ontwerp voor experiment naar het effect van NLX-behandeling op de testdag. B, Mount latentie op dagen 1 en 5 van vijf opeenvolgende dagen van paring en laatste paringstestdag (test) na zoutoplossing (grijs) of naloxon (zwart) injectie. Gegevens vertegenwoordigen gemiddelde ± SEM. * geeft significant verschil aan tussen dag 1 en dag 5 binnen de behandeling. # geeft significant verschil aan tussen dag van de test en dag 5 binnen de behandeling. C, Experimenteel ontwerp voor experiment om het effect van alleen naloxon-voorbehandeling te testen zonder seksuele ervaring met het paringsgedrag. D, Mount latentie op de laatste testdag, 7 dagen na 5 dagen van een zoutoplossing of naloxon injectie in afwezigheid van paring. Gegevens vertegenwoordigen gemiddelde ± SEM. E, Experimenteel ontwerp voor experiment om te testen of de behandeling met naloxon invloed had op de kortdurende weergave van gefaciliteerd seksueel gedrag bij seksueel ervaren dieren. F, Mount latentie op dag 1 en dag 5 van vijf opeenvolgende dagen van paring en laatste paringstestdag, 1 dag na dag 5 in de aanwezigheid van zoutoplossing (grijs) of naloxon (zwart) injectie. Gegevens vertegenwoordigen gemiddelde ± SEM. * geeft significant verschil aan tussen dag 1 en dag 5 binnen de behandeling. G, Experimenteel ontwerp voor experiment om te testen of behandeling met naloxon de belonende effecten van seksueel gedrag blokkeerde. H, Tijd doorgebracht in paring gepaarde kamer (in seconden) tijdens de voormeting (wit) en posttest (zwart) voor dieren die naloxon of zoutoplossing ontvingen vóór het paren. Gegevens vertegenwoordigen gemiddelde ± SEM; * geeft significant verschil aan in vergelijking met pretest.

Tafel 2. 

Getoonde gegevens zijn latenties voor intromissie en ejaculatie (seconden) van controle-experimenten die zijn uitgevoerd om te bepalen dat de effecten van MOR-blokkade bij verlies van langetermijnversterking van seksueel gedrag optraden onafhankelijk van een gebrek aan naloxontoediening op de laatste paardeproefdag

Om te bepalen of het een behandeling met naloxon was wanneer deze werd gecombineerd met seksuele ervaring en niet werd herhaald tot naloxon als zodanig die verminderde seksueel gedrag veroorzaakte 7 d na de laatste behandeling, ontvingen seksueel naïve dieren ofwel vijf dagelijkse injecties van naloxon- of zoutoplossinginjecties vóór een laatste paarproef 7 d later (Fig 5C). Er werden geen significante verschillen gedetecteerd voor een paringsparameter tussen met zoutoplossing en naloxon voorbehandelde groepen (Fig 5D; mount latency; intromissielatentie: zoutoplossing 139.7 ± 40.3 versus naloxon 121.83 ± 42.55; ejaculatie latentie: zoutoplossing 887.9 ± 70.0 versus naloxon 1050.8 ± 327.31). Deze resultaten geven aan dat naloxon alleen niet voldoende is om daaropvolgend seksueel gedrag te veranderen, vergelijkbaar met het ontbreken van effecten van naloxon alleen op de plasticiteit van dopamine-neuronen van VTA.

We veronderstellen dat behandeling met naloxon tijdens de verwerving van seksuele ervaring de lange termijn expressie van door sekservaring veroorzaakte facilitering van seksueel gedrag verstoort. Om dit verder te testen, werden de effecten van de behandeling met naloxon tijdens de paring getest op daaropvolgend seksueel gedrag tijdens een laatste koppelingstest, die alleen 1 d werd uitgevoerd na de laatste dekking (experimenteel ontwerp; Fig 5E). Er was een significant hoofdeffect van de paringsdag op de berg (Fig 5F; F(2,20) = 19.780, p <0.001) en intromissie-latenties (Tabel 2; F(2,20) = 19.041, p <0.001). Er was geen significant hoofdeffect van de dag op de latentie van de ejaculatie (Tabel 2; F(2,20) = 3.042, p = 0.070). Zoals hierboven beschreven, toonden alle mannetjes (ondanks de zout- of naloxonbehandelingen) het faciliteren van seksueel gedrag tijdens de vijf seksuele ervaringssessies die waren aangegeven met significant kortere latencies om te monteren (Fig 5F; zoutoplossing: p = 0.002; naloxon: p = 0.018) en intromissie (Tabel 2; zoutoplossing: p = 0.006; naloxon: p = 0.009) op dag 5 vergeleken met dag 1. Evenzo werd gefaciliteerd seksueel gedrag aangetoond op de testdag in vergelijking met dag 1, aangegeven door significant kortere latencies om te monteren (Fig 5F; zoutoplossing: p = 0.001; naloxon: p = 0.020) en intromissie (Tabel 2; zoutoplossing: p = 0.004; naloxon: p = 0.009). Belangrijker is dat behandeling met naloxon tijdens de paring geen significante invloed heeft gehad op het door sekservaring geïnduceerde faciliteren van seksueel gedrag bij het testen van 1 d na seks, onafhankelijk van de behandeling met naloxon op deze laatste paardeproefdag.

Ten slotte hebben we de mogelijkheid getest dat de verzachtende effecten van naloxon op de langdurige expressie van gefaciliteerd seksueel gedrag te wijten zijn aan een blokkerende werking van naloxon op de lonende eigenschappen van seksueel gedrag. Echter, naloxon dat onmiddellijk vóór de paring werd toegediend, veranderde de vorming van CPP voor paring niet (Fig 5G), wat suggereert dat behandeling met naloxon de seksuele beloning niet veranderde. Beide met zoutoplossing en naloxon behandelde groepen vormden een significante CPP voor seksueel gedrag, zoals aangegeven door significant langere tijd doorgebracht in geslachtsgepaarde kamer (Fig 5H; zoutoplossing: p = 0.038; naloxon: p = 0.002) tijdens de naslag in vergelijking met de pretest. Daarom heeft naloxon geen nadelig effect op het onderhoud van gefaciliteerd seksueel gedrag door de beloning in verband met seksueel gedrag te blokkeren.

Het faciliteren van seksueel gedrag is afhankelijk van EOP-actie in de VTA

Om te bevestigen dat EOP specifiek handelt in de VTA om langdurige facilitering van seksueel gedrag te bewerkstelligen, is het experimenteel ontwerp dat wordt beschreven in Figuur 3A werd herhaald met intra-VTA naloxon-infusies in plaats van systemische injecties. De resultaten waren identiek aan de hierboven beschreven systemische toediening. Er was een significant hoofdeffect van de paringdag op alle parameters van seksueel gedrag (Fig 6A, mount latency: F(2,33) = 4.494, p = 0.019; B, introissie latentie: F(2,33) = 4.042, p = 0.027; C, latentie van ejaculatie: F(2,33) = 5.309, p = 0.010) en intra-VTA naloxonbehandeling op latencies om te koppelen (F(1,33) = 7.345, p = 0.011) en intromissie (F(1,33) = 6.126, p = 0.019). Intra-VTA naloxon heeft de eerste door ervaring geïnduceerde facilitering van seksueel gedrag tijdens de 5 d van paring niet voorkomen, omdat met naloxon behandelde mannen verminderde latenties toonden (Fig 6A; p = 0.001), intromission (Fig 6B; p <0.001) en ejaculatie (Fig 6C; p = 0.001) op dag 5 vergeleken met dag 1. Met Naloxone behandelde mannetjes verschilden niet van de met zoutoplossing behandelde mannetjes op de vijfde dag van paring in een van de latencies. Intra-VTA-behandeling met naloxon, zoals systemische toediening, veroorzaakte een aanzienlijk verhoogde vatbaarheid (Fig 6A; p <0.001) en intromissie-latenties (Fig 6B; p <0.001) op de eerste paardag vergeleken met met zoutoplossing behandelde mannetjes, wat niet werd waargenomen tijdens daaropvolgende paarsessies (waarbij naloxon- en met zoutoplossing behandelde mannetjes niet verschilden). Een onverwachte observatie was dat in dit experiment met zoutoplossing behandelde mannen geen statistisch significante facilitering van de latentie of intromissie-latentie vertoonden (zoals werd aangetoond in alle hierboven beschreven experimenten), en dat alleen de latentie van ejaculatie werd verkort op de vijfde dag vergeleken met de eerste dag. (zoutoplossing: p = 0.001).

Figuur 6. 

Endogene opioïden in de VTA bemiddelen door ervaring geïnduceerde facilitering van seksueel gedrag en het langdurige onderhoud ervan. Seksuele gedragsparameters voor mannen behandeld met zoutoplossing (Sal, witte repen, n = 8) of NLX (zwarte balken, n = 6) met intra-VTA-toediening. De getoonde gegevens zijn latency om te koppelen (A), intromission (B) en ejaculatie (C) op dagen 1 en 5 van vijf opeenvolgende dagen van paring. Bovendien worden er gegevens getoond voor de laatste paardeproefdag, 7 d volgende dag 5 in afwezigheid van zoutoplossing of naloxoninjectie. Gegevens vertegenwoordigen gemiddelde ± SEM; + geeft significant verschil aan tussen dagen 1 en 5 binnen de behandeling; * geeft significant verschil aan tussen dag en dag test 5 binnen de behandeling; # duidt op een significant verschil tussen naloxon en Sal-groepen binnen een dag. Schematische tekeningen van coronale VTA-secties (H, -4.60; I, -5.00; J, -5.25 van bregma) die intra-VTA-injectieplaatsen voor alle dieren in experiment 5 (zoutoplossing; wit; naloxon, zwart; gemist, grijs) aangeven; met behulp van sjabloontekeningen van Swanson Brain Maps (Swanson, 2004). Cannula's waren bilateraal, maar injectieplaatsen zijn eenzijdig weergegeven voor een gemakkelijke presentatie. fr, Fasciculus retroflexus; ML, mediale lemniscus; SN, substantia nigra.

Intra-VTA-behandeling met naxolon blokkeerde het behoud van gefaciliteerd seksueel gedrag waargenomen bij seksueel ervaren mannen, vergelijkbaar met de effecten van systemisch naloxon. Specifiek, op de laatste testdag hadden de met naloxon behandelde mannetjes langere latencies om op te zetten (Fig 6A; p = 0.011), intromission (Fig 6B; p = 0.010) en ejaculatie (Fig 6C; p = 0.015) vergeleken met hun vijfde paar sessie en vergeleken met de met zoutoplossing behandelde mannetjes op de laatste testdag (Fig 6A, p = 0.006; B, p = 0.008). In tegenstelling daarmee verschilden met zoutoplossing behandelde dieren niet in latenties om te monteren en intromissie tussen de laatste testdag en dag 5 van paring. Deze effecten waren specifiek voor de afgifte van naloxon aan de VTA, als mannen met cannulatieplaatsen in de buurt maar niet gericht op de VTA (Fig 6D; n = 3) toont op lange termijn versoepeling van seksueel gedrag vergelijkbaar met met zoutoplossing behandelde controles (ML, IL = 53 ± 6.245, EL = 389 ± 299.5 en significant verschillend in vergelijking met intra-VTA naloxondieren op de laatste paardeproefdag (ML, IL: p = 0.029; EL: p = 0.0395).

EOP-actie is vereist voor geslachtsgebonden geconditioneerde cue-geïnduceerde neurale activering

Op basis van de bevindingen tot dusverre, hebben we de hypothese geopperd dat EOP-activering in VTA tijdens paringservaring en daaropvolgende VTA dopamine soma-groottevermindering van cruciaal belang zijn voor het toekennen van incentive-salience aan paringsbeloning-geassocieerde stimuli en bijgevolg het onderhouden van gefaciliteerd seksueel gedrag. Om deze hypothese te testen, werden de effecten onderzocht van blokkerende opioïde receptoren tijdens paringservaring op neurale activiteit geïnduceerd door daaropvolgende blootstelling aan geconditioneerde contextuele signalen die voorspellend zijn voor seksuele beloning (seks-geassocieerde contextuele aanwijzingen). Seksueel naïve dieren werden ook blootgesteld aan ecologische signalen, maar deze werden niet geassocieerd met eerdere paringservaringen, en waren daarom neutrale aanwijzingen. Ten slotte werden baseline pERK-niveaus bepaald in seksueel ervaren en naïeve controlegroepen die in de thuissets verbleven en niet werden blootgesteld aan enige signalen (-No Cue). Bevestigen en uitbreiden van eerdere bevindingen (Balfour et al., 2004), heeft blootstelling aan contextuele cues geassocieerd met eerdere seksbeloning significant verhoogde pERK-expressie in seksueel ervaren mannetjes in het NAc (Fig 7) en mPFC (Fig 8A-C), maar veroorzaakte geen neuronale activering in de BLA (Fig 8D) of CPu (gegevens niet getoond). Er waren de belangrijkste effecten van cue-exposure in NAc core (F(1,12) = 12.1941, p = 0.004), ACA (F(1,12) = 5.541, p = 0.038) en PL (F(1,12) = 5.241, p = 0.041) en naloxonbehandeling in de NAc-kern (F(1,12) = 6.511, p = 0.025), ACA (F(1,12) = 15.242, p = 0.002) en PL (F(1,12) = 7.336, p = 0.019). Er was significante interactie in de NAc-kern (F(1,12) = 10.107, p = 0.008), ACA (F(1,12) = 16.060, p = 0.002), PL (F(1,12) = 8.235, p = 0.014) en IL ((F(1,12) = 6.965, p = 0.022). Ten eerste nam de paring-geassocieerde Cue-blootstelling significant toe tot PERK in met zoutoplossing behandelde seksueel ervaren dieren (Exp Sal ​​+ Cue) in vergelijking met controles die niet waren blootgesteld aan enige signalen en uit de thuissalon (Exp Sal-No Cue) in NAc-kern (Fig 7A; p <0.001), en mPFC-subregio's ACA (Fig 8A; p = 0.001), PL (Fig 8B; p = 0.003) en IL (Fig 8C; p = 0.029). In contrast, bij met zoutoplossing behandelde seksueel naïeve dieren, veroorzaakte blootstelling aan de contextuele signalen, die niet geassocieerd waren met seksuele beloning, geen pERK in een van de hersengebieden (Naive Sal + Cue vergeleken met naïeve Sal-No Cue; Fig. 7, 8), wat aantoont dat inductie van pERK specifiek is voor de blootstelling van de aan seksuele ervaring gerelateerde signalen. Bovendien veranderde seksuele ervaring alleen de baseline pERK-expressie in geen van de hersenregio's, omdat er geen verschillen waren tussen groepen die werden weggehaald uit de thuiskooien, hetzij seksueel naïef of ervaren, en behandeld met zoutoplossing of naloxon.

Figuur 7. 

Endogene opioïde werking is vereist voor neurale activering in NAc geïnduceerd door geslachtsgebonden geconditioneerde aanwijzingen. Aantallen pERK-IR-cellen per mm2 in de nucleus accumbens kern (A) en shell (B) in seksueel naïeve (witte) en ervaren (Exp; zwarte) dieren die waren voorbehandeld met systemische NLX of zoutoplossing (Sal) tijdens paringssessies (Exp-mannetjes) of behandelingssessies (naieve mannetjes). Groepen werden ofwel blootgesteld aan contextuele signalen (Cue), die paring-geassocieerde aanwijzingen waren in Exp-mannetjes en neutrale signalen in Naïeve dieren, of uit de huiskooien gehaald (Geen Cue, aangegeven door gebrek aan Cue-label). Gegevens worden gepresenteerd als gemiddelde ± SEM; * geeft een significant verschil aan in vergelijking met zoutoplossing-voorbehandelde niet-cue-blootgestelde controles (Naive Sal-No Cue en Exp Sal-No Cue); # geeft een significant verschil aan in vergelijking met Sal-behandelde Cue-blootgestelde Exp-groep (Exp Sal ​​+ Cue). Representatieve beelden van pERK-IR-cellen per mm2 in de NAc-kern van seksueel ervaren mannen met Sal (C, D) of NLX (E, F) die ofwel uit de huiskooi werden gehaald (No Cue, C, E) of werden blootgesteld aan de paring-geassocieerde contextuele aanwijzingen (Cue; D, F). N = 4 elke groep behalve Naive NLX (Geen Cue), n = 3. ac, Anterior commissure. Schaalbalk, 100 μm.

Figuur 8. 

De effecten van naloxon op paring cue-geïnduceerde pERK-expressie in andere VTA-doelregio's. Aantallen pERK-IR-cellen per mm2 in seksueel naïeve (witte) en ervaren (Exp; zwarte) dieren die waren voorbehandeld met systemische NLX of zoutoplossing (Sal) tijdens paringssessies en werden blootgesteld aan de contextuele signalen (Cue) of thuiskooi (geen signalen) in de ACA (A), PL (B), IL (C) en BLA (D). Gegevens zijn gemiddelden ± SEM; * geeft een significant verschil aan in vergelijking met zoutoplossing-voorbehandelde niet-cue-blootgestelde controles (Naive Sal-No Cue en Exp Sal-No Cue); # geeft een significant verschil aan in vergelijking met met Sal behandelde, aan seks blootgestelde, seksueel naïeve controles (Naive Sal + Cue).

Ter ondersteuning van onze hypothese verminderde de naloxonbehandeling tijdens seksuele ervaring de pERK-inductie significant door de geslachtsgebonden geconditioneerde aanwijzingen. pERK-expressie in deze met naloxon behandelde cue-blootgestelde ervaren mannen (Exp NLX + Cue) verschilde niet van baseline pERK-expressie in een van de seksueel naïeve of ervaren controlegroepen uit de thuiskooien (Naive Sal-No Cue of Naive NLX- Geen Cue). Bovendien was de expressie van pERK in de met naloxon behandelde cue-blootgestelde ervaren mannen (Exp NLX + Cue) significant lager in vergelijking met met zoutoplossing behandelde, aan cue blootgestelde, ervaren dieren (Exp Sal ​​+ Cue) in NAc-kern (Fig 7A; p = 0.002) en mPFC subregio's (Fig 8A, ACA: p <0.001; B, PL: p = 0.002; C, IL: p = 0.015).

In de NAc-schaal leverde de tweewegs-ANOVA-analyse geen statistisch significante effecten op van de factoren cue-exposure en naloxonbehandeling. Een paarsgewijze vergelijking toonde echter aan dat cue-blootstelling pERK induceerde in de met zoutoplossing behandelde seksueel ervaren groep (Exp SAL + Cue) in vergelijking met de niet-cue-blootgestelde zout-naïeve controlegroep (Fig 7B; Naive SAL-No Cue: p = 0.0163).

Discussie

De huidige studie toont aan dat EOP die optreedt in de VTA tijdens seksueel gedrag, een natuurlijk beloningsgedrag, een robuuste maar voorbijgaande vermindering in soma-grootte van VTA-dopaminecellen veroorzaakte. De afname in soma-grootte werd niet waargenomen in VTA-non-dopamine-neuronen, noch in dopamine-neuronen in de nabijgelegen substantia nigra, wat suggereert dat deze verandering specifiek was voor VTA-dopaminecellen. Deze dopamine-plasticiteit van VTA lijkt op die van chronische opiatenblootstelling (Sklair-Tavron et al., 1996; Russo et al., 2007; Mazei-Robison et al., 2011) en veroorzaakte vergelijkbare tolerantie voor exogene opiaten (morfine) beloning. We hebben aangetoond dat dopamine-plasticiteit van VTA van cruciaal belang is voor de lange termijn (onderhoud), maar niet voor de korte termijn (ontwikkeling), versterking van seksueel gedrag en beloning-geassocieerde cue-geïnduceerde neurale activiteit (pERK) in VTA-doelregio's: NAc en mPFC. Deze bevindingen zijn indicatief voor een rol voor de dopamine-plasticiteit van VTA bij de langetermijnuitdrukking van de incentive-saillantie van natuurlijke beloningsvoorspellende aanwijzingen of beloningsgeheugen.

Het is goed gedocumenteerd dat seksuele ervaring resulteert in het faciliteren van daaropvolgend seksueel gedrag, inclusief sneller begin van paring en verhoogde prestaties (Balfour et al., 2004; Pitchers et al., 2010a,b, 2012). Deze facilitering of versterking van seksueel gedrag wordt gehandhaafd voor ten minste 28 d na de paring (Pitchers et al., 2012). Daarnaast is aangetoond dat seksueel gedrag en geconditioneerde aanwijzingen die voorspellend zijn voor seksbeloning, MOR-internalisatie in de VTA veroorzaken en neuronale activering door het mesolimbische systeem induceren, inclusief in VTA (dopamine en niet-dopamine neuronen), NAc, PFC en BLA (Balfour et al., 2004, 2006). Het is algemeen aanvaarde dopamine-neuronen van VTA spelen een cruciale rol bij het leren en toekennen van de incentive saillantie van beloning-geassocieerde stimuli (Berridge en Robinson, 1998; Berridge et al., 2009; Flagel et al., 2011) en zijn cruciaal voor beloningsvoorspelling (Schultz, 2010). De huidige bevindingen breiden onze huidige kennis uit door aan te tonen dat door beloning geïnduceerde VTA-neuroplasticiteit van cruciaal belang is voor deze functies en afhankelijk is van MOR-activering door EOP in de VTA. Het is momenteel onbekend welke EOP het MOR-ligand is dat in de VTA werkt tijdens mannelijk seksueel gedrag. Hoewel zowel β-endorfine en enkefaline zijn betrokken bij stimuleringsmotivatie voor voedselversterkers (Hayward et al., 2002), dit moet nog worden vastgesteld voor mannelijk seksueel gedrag. We hebben eerder aangetoond dat β-endorfine-neuronen niet worden geactiveerd tijdens de paring, noch zijn er toenamen in POMC-mRNA; dus suggererend dat β-endorfine mogelijk niet de kritische EOP is die in de VTA werkt tijdens de paring (Davis et al., 2007). Deze VTA dopamine-plasticiteit was essentieel voor neurale activiteit in de mPFC, NAc en VTA na blootstelling aan de seksuele beloning-voorspellende omgevingsfactoren. Bovendien was de dopamine-plasticiteit van VTA van cruciaal belang voor de langetermijnexpressie van verhoogde initiatie en prestaties van seksueel gedrag. VTA-neuroplasticiteit veroorzaakt door seksuele ervaring was daarentegen niet vereist voor hedonische respons als seksbeloning (bepaald door CPP) en korte-termijn facilitering van seksuele motivatie en prestaties (tijdens sekservaring of 1 d later) bleef intact ondanks MOR-blokkade tijdens paring (Mehrara en Baum, 1990). In plaats daarvan suggereren de gegevens dat VTA dopamine neuroplasticiteit de langere termijn medieert (7 d na de laatste sekse-ervaring; Pitchers et al., 2012) uitdrukking van "willen" van geslachtsbeloning en verhoogde gemotiveerde reacties op paringsignalen (Miller en Baum, 1987; Berridge en Robinson, 1998).

Seksueel ervaren dieren toonden een tolerantie voor morfine, vergelijkbaar met de effecten van wiellopen bij muizen, een ander natuurlijk belonend gedrag, een effect geblokkeerd door behandeling met naloxon (Lett et al., 2001, 2002) en bepaald afhankelijk te zijn van de plasticiteit van dopamine-cellen van VTA (huidige bevindingen). Net als bij natuurlijke beloningen resulteert herhaalde blootstelling aan de opiaten morfine of heroïne in een voorbijgaande reductie van de grootte van VTA dopamine soma (Sklair-Tavron et al., 1996; Spiga et al., 2003; Russo et al., 2007; Mazei-Robison et al., 2011). Bovendien veroorzaakt opiaatblootstelling met korte wachttijden een beloningstolerantie, zoals geïmpliceerd door hogere doses medicatie die nodig zijn om beloningsassociaties te vormen (Shippenberg et al., 1987; Russo et al., 2007) en zorgt ervoor dat dieren die zelf toedienen de inname van geneesmiddelen doen escaleren (Ahmed et al., 2000; Walker et al., 2003). Vandaar dat EOP en opiaten werken op gemeenschappelijke neurale substraten om beloningstolerantie te induceren tijdens vroegtijdige ontwenning, wat een compenserend homeostatisch mechanisme zou kunnen weerspiegelen om stimulatie door herhaalde blootstelling tegen te gaan (Koob en Le Moal, 2005). Daarentegen wordt tijdens langdurige onthouding van opiaatmedicijnen de tolerantie omgekeerd tot een gevoeligheid voor de belonende eigenschappen van het geneesmiddel (Harris en Aston-Jones, 2003; Aston-Jones en Harris, 2004; Harris en Gewirtz, 2004). Interessant is dat gevonden is dat seksuele ervaring gevolgd door een periode van onthouding van seks van 7-28 d overgevoeligheid veroorzaakt voor de beloning van psychostimulanten (Pitchers et al., 2010a), die afhankelijk is van paring-geïnduceerde deltaFosB-expressie en activering van dopaminereceptor 1 in het NAc (Pitchers et al., 2013). Vandaar, seksuele beloning ervaring veroorzaakt gelijktijdige beloning opiaat beloning en psychostimulant beloning sensibilisatie, hoewel een langer geslacht onthouding periode op morfine beloningstolerantie nog moet worden getest. We stellen dat deze tegengestelde effecten op de beloning van medicijnen kunnen worden gemedieerd door verschillende vormen van neurale plasticiteit in de verschillende gebieden van het mesolimbische systeem: VTA EOP-actie en dopamine-plasticiteit mediëren de opiaat-beloningstolerantie (huidige studie), terwijl NAc deltaFosB-expressie psychostimulant-sensitisatie regelt (Pitchers et al., 2013). Beide gebeurtenissen kunnen bijdragen aan escalaties van drugsgebruik (Ahmed en Koob, 1998, 1999; Ahmed et al., 2000, 2002, 2003; Walker et al., 2003).

De moleculaire mechanismen waardoor EOP de VTA dopamine-neuronen beïnvloeden tijdens natuurlijk beloningsgedrag blijven onbekend. De IRS2-Akt-mTORC2-route is een belangrijke bemiddelaar van afgenomen soma-grootte in de VTA veroorzaakt door herhaalde morfine (Jaworski et al., 2005; Russo et al., 2007; Mazei-Robison et al., 2011). Herhaalde door morfine toediening geïnduceerde veranderingen in de grootte van dopamine-neuronen in de VTA kunnen worden voorkomen door intra-VTA-infusies van van de hersenen afgeleide neurotrofe factor (BDNF; Sklair-Tavron en Nestler, 1995). BDNF activeert dit pad via TrkB-signalering (Russo et al., 2007), een receptor-kinase met hoge affiniteit voor BDNF en een deel van de IRS2-Akt-route (Seroogy en Gall, 1993; Numan en Seroogy, 1999), en uitgedrukt op dopamine- en GABA-neuronen in de VTA. Downregulatie van de verschillende componenten van de IRS2-Akt-route met behulp van virale vector-genoverdrachtstechnologie bootst de effecten na van chronische opiaatblootstelling. Bovendien kunnen de effecten van opiaatblootstelling worden gered door deze signaalroute te herstellen (Russo et al., 2007) en overexpressie van een component van mTORC2 voorkomt door morfine geïnduceerde vermindering van de hoeveelheid VAM-dopamine (Mazei-Robison et al., 2011). Daarom laat eerder werk dat de effecten van chronische opiaten op de grootte van VTA dopamine soma onderzoekt, zien dat morfine-geïnduceerde neerwaartse regulatie van de IRS2-Akt-mTOR-route zowel voldoende als noodzakelijk is voor dit effect (Mazei-Robison en Nestler, 2012). Het is dus verleidelijk om te speculeren dat de effecten van seksuele ervaring op VTA-dopamine-neuroplasticiteit op vergelijkbare wijze worden gemedieerd door BDNF en de IRS2-Akt-mTORC2-route.

Concluderend laat de huidige studie zien dat neuroplasticiteit van VTA wordt veroorzaakt door ervaring met natuurlijk beloningsgedrag, met name door herhaaldelijk mannelijk seksueel gedrag. Specifiek werkt EOP in de VTA om dopamine soma-grootte te verminderen, waarvan wordt verondersteld dat het geassocieerd is met verhoogde neurale prikkelbaarheid en minder dopamine-output resulterend in een hypodopaminerge systeem, en verandert het mesolimbische systeem functioneert in respons op cues die voorspellend zijn voor seksuele beloning. Bovendien is neuroplasticiteit van VTA van cruciaal belang voor de stimulerende motivatie en het beloningsgeheugen, maar niet voor de hedonistische impact van seksueel gedrag. Ten slotte beïnvloedt de neuroplasticiteit van VTA, veroorzaakt door natuurlijk beloningsgedrag gevolgd door een korte periode van beloning van onthouding, de opiaatbeloning en kan daarom de kwetsbaarheid voor de ontwikkeling van drugsverslaving beïnvloeden.

voetnoten

  • Januari 12, 2014 ontvangen.
  • Revisie ontvangen Mei 17, 2014.
  • Geaccepteerd mei 20, 2014.

  • Dit onderzoek werd ondersteund door subsidies van het Canadian Institute of Health Research aan LMC en Natural Sciences and Engineering Research Council aan KKP

  • De auteurs verklaren geen concurrerende financiële belangen.

  • Correspondentie moet worden gericht aan Dr. Lique M. Coolen, University of Mississippi Medical Center, Department of Physiology and Biophysics, 2500 North State Street, Jackson, MS 39216-4505. [e-mail beveiligd]

Referenties

  1. ↵
    1. Agmo A

    (1997) Mannelijk seksueel gedrag van rat. Brain Res Brain Res Protoc 1: 203-209.

  2. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Koob GF

    (1998) Overgang van matige naar excessieve medicijninname: verandering in hedonisch setpoint. Wetenschap 282: 298-300.

  3. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Koob GF

    (1999) Langdurige toename van het instelpunt voor zelftoediening door cocaïne na escalatie bij ratten. Psychopharmacology 146: 303-312.

  4. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Walker JR,
    3. Koob GF

    (2000) Aanhoudende toename van de motivatie om heroïne te nemen bij ratten met een voorgeschiedenis van drugsescalatie. Neuropsychopharmacology 22: 413-421.

  5. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Kenny PJ,
    3. Koob GF,
    4. Markou A

    (2002) Neurobiologisch bewijs voor hedonische allostasis geassocieerd met escalerend cocaïnegebruik. Nat Neurosci 5: 625-626.

  6. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Lin D,
    3. Koob GF,
    4. Parsons LH

    (2003) Escalatie van cocaïne zelftoediening is niet afhankelijk van veranderde door cocaïne geïnduceerde nucleus accumbens dopamine niveaus. J Neurochem 86: 102-113.

  7. ↵
    1. Aston-Jones G,
    2. Harris GC

    (2004) Hersenen substraten voor verhoogd medicijn zoeken gedurende langdurige terugtrekking. Neurofarmacologie 47: 167-179.

  8. ↵
    1. Balfour ME,
    2. Yu L,
    3. Coolen LM

    (2004) Seksueel gedrag en seksgerelateerde omgevingsfactoren activeren het mesolimbische systeem bij mannelijke ratten. Neuropsychopharmacology 29: 718-730.

  9. ↵
    1. Balfour ME,
    2. Brown JL,
    3. Yu L,
    4. Coolen LM

    (2006) Potentiële bijdragen van efferenten van mediale prefrontale cortex tot neurale activatie na seksueel gedrag bij de mannelijke rat. Neurowetenschap leerprogramma 137: 1259-1276.

  10. ↵
    1. Beitner-Johnson D,
    2. Guitart X,
    3. Nestler EJ

    (1992) Neurofilament eiwitten en het mesolimbische dopamine-systeem: gemeenschappelijke regulatie door chronische morfine en chronische cocaïne in het ventrale tegmentale gebied van de rat. J Neurosci 12: 2165-2176.

  11. ↵
    1. Berridge KC,
    2. Robinson TE

    (1998) Wat is de rol van dopamine bij belonen: hedonische impact, beloningsleren of incentive-salience? Brain Res Brain Res Rev 28: 309-369.

  12. ↵
    1. Berridge KC,
    2. Robinson TE,
    3. Aldridge JW

    (2009) Ontleedcomponenten van beloning: "leuk vinden", "willen" en leren. Curr Opin Pharmacol 9: 65-73.

  13. ↵
    1. Blum K,
    2. Werner T,
    3. Carnes S,
    4. Carnes P,
    5. Bowirrat A,
    6. Giordano J,
    7. Oscar-Berman M,
    8. Goud M

    (2012) Seks, drugs en rock-'n-roll: hypothese van algemene mesolimbische activering als een functie van polymorfismen van beloningsgen. J Psychoactieve geneesmiddelen 44: 38-55.

  14. ↵
    1. Chu NN,
    2. Zuo YF,
    3. Meng L,
    4. Lee DY,
    5. Han JS,
    6. Cui CL

    (2007) Perifere elektrische stimulatie keerde de afname van de celgrootte en verhoogd BDNF-niveau in het ventrale tegmentale gebied om in chronisch morfine behandelde ratten. Brain Res 1182: 90-98.

  15. ↵
    1. Davis BA,
    2. Fitzgerald ME,
    3. Brown JL,
    4. Amstalden KA,
    5. Coolen LM

    (2007) Activering van POMC-neuronen tijdens algemene opwinding maar niet seksueel gedrag bij mannelijke ratten. Gedrag Neurosci 121: 1012-1022.

  16. ↵
    1. Fiorino DF,
    2. Coury A,
    3. Phillips AG

    (1997) Dynamische veranderingen in nucleus accumbens dopamine-efflux tijdens het Coolidge-effect bij mannelijke ratten. J Neurosci 17: 4849-4855.

  17. ↵
    1. Flagel SB,
    2. Clark JJ,
    3. Robinson TE,
    4. Mayo L,
    5. Czuj A,
    6. Willuhn I,
    7. Akers CA,
    8. Clinton SM,
    9. Phillips PE,
    10. Akil H

    (2011) Een selectieve rol voor dopamine bij het stimuleren van stimulusbeloningen. NATUUR 469: 53-57.

  18. ↵
    1. Frohmader KS,
    2. Werpers KK,
    3. Balfour ME,
    4. Coolen LM

    (2010a) Mixplezier: overzicht van de effecten van medicijnen op seksueel gedrag bij mensen en diermodellen. Horm Behav 58: 149-162.

  19. ↵
    1. Frohmader KS,
    2. Wiskerke J,
    3. Verstandige RA,
    4. Lehman MN,
    5. Coolen LM

    (2010b) Methamfetamine werkt op subpopulaties van neuronen die seksueel gedrag reguleren bij mannelijke ratten. Neurowetenschap leerprogramma 166: 771-784.

  20. ↵
    1. Harris AC,
    2. Gewirtz JC

    (2004) Verhoogde schrik tijdens ontwenning van acute morfine: een model van opiaatontwenning en angst. Psychopharmacology 171: 140-147.

  21. ↵
    1. Harris GC,
    2. Aston-Jones G

    (2003) Gemodificeerde motivatie en leren na opiumontwenning: bewijs voor langdurige ontregeling van beloningsverwerking. Neuropsychopharmacology 28: 865-871.

  22. ↵
    1. Hayward MD,
    2. Pintar JE,
    3. Lage MJ

    (2002) Selectief beloningsdeficit bij muizen zonder bèta-endorfine en enkefaline. J Neurosci 22: 8251-8258.

  23. ↵
    1. Hoebel BG,
    2. Avena NM,
    3. Bocarsly ME,
    4. Rada P

    (2009) Natuurlijke verslaving: een gedrags- en schakelingsmodel op basis van suikerverslaving bij ratten. J Addict Med 3: 33-41.

  24. ↵
    1. Hyman SE,
    2. Malenka RC,
    3. Nestler EJ

    (2006) Neurale mechanismen van verslaving: de rol van beloningsgerelateerd leren en geheugen. Annu Rev Neurosci 29: 565-598.

  25. ↵
    1. Ikemoto S,
    2. Kohl RR,
    3. McBride WJ

    (1997) GABA (A) -receptorblokkering in het voorste ventrale tegmentale gebied verhoogt extracellulaire niveaus van dopamine in de nucleus accumbens van ratten. J Neurochem 69: 137-143.

  26. ↵
    1. Jaworski J,
    2. Spangler S,
    3. Seeburg DP,
    4. Hoogenraad CC,
    5. Sheng M

    (2005) Controle van dendritische arborisatie door het fosfoinositide-3'-kinase-Akt-zoogdierdoelwit van rapamycineweg. J Neurosci 25: 11300-11312.

  27. ↵
    1. Johnson SW,
    2. North RA

    (1992) Opioïden stimuleren dopamine-neuronen door hyperpolarisatie van lokale interneuronen. J Neurosci 12: 483-488.

  28. ↵
    1. Klitenick MA,
    2. DeWitte P,
    3. Kalivas PW

    (1992) Regulering van somatodendritische dopamine-afgifte in het ventrale tegmentale gebied door opioïden en GABA: een in vivo microdialyseonderzoek. J Neurosci 12: 2623-2632.

  29. ↵
    1. Koob GF,
    2. Le Moal M

    (2005) Plasticiteit van neurocircuitbeloning en de 'donkere kant' van drugsverslaving. Nat Neurosci 8: 1442-1444.

  30. ↵
    1. Lennette DA

    (1978) Een verbeterd bevestigingsmedium voor immunofluorescentiemicroscopie. Am J Clin Pathol 69: 647-648.

  31. ↵
    1. Lett BT,
    2. Grant VL,
    3. Koh MT

    (2001) Naloxon verzwakt de geconditioneerde plaatsvoorkeur veroorzaakt door het wiel dat in ratten loopt. Physiol Behav 72: 355-358.

  32. ↵
    1. Lett BT,
    2. Grant VL,
    3. Koh MT,
    4. Flynn G

    (2002) Eerdere ervaring met wielrennen levert een grote tolerantie op voor het belonende effect van morfine. Pharmacol Biochem Behav 72: 101-105.

  33. ↵
    1. Matthews RT,
    2. Duitse DC

    (1984) Elektrofysiologisch bewijs voor excitatie van ventrale tegmentale gebieden in het ventraal tegmentale gebied door morfine. Neurowetenschap leerprogramma 11: 617-625.

  34. ↵
    1. Mazei-Robison MS,
    2. Koo JW,
    3. Friedman AK,
    4. Lansink CS,
    5. Robison AJ,
    6. Vinish M,
    7. Krishnan V,
    8. Kim S,
    9. Siuta MA,
    10. Galli A,
    11. Niswender KD,
    12. Appasani R,
    13. Horvath MC,
    14. Neve RL,
    15. Worley PF,
    16. Snyder SH,
    17. Hurd YL,
    18. Juich JF toe,
    19. Han MH,
    20. Russo SJ,
    21. et al.

    (2011) Rol voor mTOR-signalering en neuronale activiteit in morfine-geïnduceerde aanpassingen in dopamine-neuronen van het ventrale tegmentale gebied. Neuron 72: 977-990.

  35. ↵
    1. Mazei-Robison MS,
    2. Nestler EJ

    (2012) Opiaat-geïnduceerde moleculaire en cellulaire plasticiteit van ventrale tegmentale gebieden en locus coeruleus catecholamine neuronen. Cold Spring Harb Perspect Med 2: a012070.

  36. ↵
    1. Mehrara BJ,
    2. Baum MJ

    (1990) Naloxon verstoort de expressie, maar niet de verwerving door mannelijke ratten van een geconditioneerde plaatsvoorkeursrespons voor een vrouw met de luchtstroming. Psychopharmacology 101: 118-125.

  37. ↵
    1. Meisel RL,
    2. Mullins AJ

    (2006) Seksuele ervaring bij vrouwelijke knaagdieren: cellulaire mechanismen en functionele gevolgen. Brain Res 1126: 56-65.

  38. ↵
    1. Miller RL,
    2. Baum MJ

    (1987) Naloxon remt de paring en geconditioneerde plaatsvoorkeur voor een oestrogeen in mannelijke ratten kort na castratie. Pharmacol Biochem Behav 26: 781-789.

  39. ↵
    1. Mitchell JB,
    2. Stewart J

    (1990) Facilitatie van seksueel gedrag bij de mannelijke rat geassocieerd met intra-VTA-injecties van opiaten. Pharmacol Biochem Behav 35: 643-650.

  40. ↵
    1. Murphy LO,
    2. Blenis J

    (2006) MAPK-signaalspecificiteit: de juiste plaats op het juiste moment. Trends Biochem Sci 31: 268-275.

  41. ↵
    1. Nestler EJ

    (2012) Transcriptionele mechanismen van drugsverslaving. Clin Psychopharmacol Neurosci 10: 136-143.

  42. ↵
  • ↵
    1. Paxinos G,
    2. Watson C

    (2013) De hersenen van de rat in stereotaxische coördinaten (Academic, Boston), Ed 7.

  • ↵
    1. Werpers KK,
    2. Balfour ME,
    3. Lehman MN,
    4. Richtand NM,
    5. Yu L,
    6. Coolen LM

    (2010a) Neuroplasticiteit in het mesolimbische systeem veroorzaakt door natuurlijke beloning en daaropvolgende beloningsonthouding. Biol Psychiatry 67: 872-879.

  • ↵
    1. Werpers KK,
    2. Frohmader KS,
    3. Vialou V,
    4. Mouzon E,
    5. Nestler EJ,
    6. Lehman MN,
    7. Coolen LM

    (2010b) DeltaFosB in de nucleus accumbens is van cruciaal belang voor het versterken van de effecten van seksuele beloning. Genen Brain Behav 9: 831-840.

  • ↵
    1. Werpers KK,
    2. Schmid S,
    3. Di Sebastiano AR,
    4. Wang X,
    5. Laviolette SR,
    6. Lehman MN,
    7. Coolen LM

    (2012) Natuurlijke beloningsbeleving verandert de AMPA- en NMDA-receptorverdeling en functioneert in de nucleus accumbens. PLoS One 7: e34700.

  • ↵
    1. Werpers KK,
    2. Vialou V,
    3. Nestler EJ,
    4. Laviolette SR,
    5. Lehman MN,
    6. Coolen LM

    (2013) Natuurlijke en drugsbeloningen werken op gemeenschappelijke neurale plasticiteitsmechanismen met DeltaFosB als een belangrijke bemiddelaar. J Neurosci 33: 3434-3442.

  • ↵
    1. Roux PP,
    2. Blenis J

    (2004) ERK en p38 MAPK-geactiveerde eiwitkinasen: een familie van eiwitkinasen met diverse biologische functies. Microbiol Mol Biol Rev 68: 320-344.

  • ↵
    1. Russo SJ,
    2. Bolanos CA,
    3. Theobald DE,
    4. DeCarolis NA,
    5. Renthal W,
    6. Kumar A,
    7. Winstanley CA,
    8. Renthal NE,
    9. Wiley MD,
    10. Zelf DW,
    11. Russell DS,
    12. Neve RL,
    13. Eisch AJ,
    14. Nestler EJ

    (2007) IRS2-Akt-pad in de hersenen van dopamine-neuronen reguleert de gedrags- en cellulaire respons op opiaten. Nat Neurosci 10: 93-99.

  • ↵
    1. Schultz W

    (2010) Meerdere functies van dopamine-neuronen. F1000 Biol Rep 2: 2.

  • ↵
    1. Seroogy KB,
    2. Gall CM

    (1993) Expressie van neurotrofinen door dopaminerge neuronen van de middenhersenen. Exp Neurol 124: 119-128.

  • ↵
    1. Shippenberg TS,
    2. Bals-Kubik R,
    3. Herz A

    (1987) Motiverende eigenschappen van opioïden: bewijs dat een activatie van delta-receptoren versterkingsprocessen medieert. Brain Res 436: 234-239.

  • ↵
    1. Sklair-Tavron L,
    2. Nestler EJ

    (1995) Tegengestelde effecten van morfine en de neurotrofinen, NT-3, NT-4 en BDNF, op locus coeruleus-neuronen in vitro. Brain Res 702: 117-125.

  • ↵
    1. Sklair-Tavron L,
    2. Shi WX,
    3. Lane SB,
    4. Harris HW,
    5. Bunney BS,
    6. Nestler EJ

    (1996) Chronische morfine induceert zichtbare veranderingen in de morfologie van mesolimbische dopamineneuronen. Proc Natl Acad Sci USA 93: 11202-11207.

  • ↵
    1. Spiga S,
    2. Serra GP,
    3. Puddu MC,
    4. Foddai M,
    5. Diana M

    (2003) Morfine-intrekking-geïnduceerde afwijkingen in de VTA: confocale laser scanning microscopie. Eur J Neurosci 17: 605-612.

  • ↵
    1. Swanson LW

    (2004) Brain maps: structuur van het brein van de rat (Academic, San Diego), Ed 3.

  • ↵
    1. Tenk CM,
    2. Wilson H,
    3. Zhang Q,
    4. Werpers KK,
    5. Coolen LM

    (2009) Seksuele beloning bij mannelijke ratten: effecten van seksuele ervaring op geconditioneerde plaatsvoorkeuren geassocieerd met ejaculatie en intromissies. Horm Behav 55: 93-97.

  • ↵
    1. Tzschentke TM

    (2007) Beloning meten met het geconditioneerd plaatsvoorkeurparadigma (CPP): update van het afgelopen decennium. Addict Biol 12: 227-462.

  • ↵
    1. van Furth WR,
    2. van Ree JM

    (1996) Seksuele motivatie: betrokkenheid van endogene opioïden in het ventrale tegmentale gebied. Brain Res 729: 20-28.

  • ↵
    1. van Furth WR,
    2. Wolterink G,
    3. van Ree JM

    (1995) Regulering van mannelijk seksueel gedrag: betrokkenheid van hersenopioids en dopamine. Brain Res Brain Res Rev 21: 162-184.

  • ↵
    1. Walker JR,
    2. Chen SA,
    3. Moffitt H,
    4. Inturrisi CE,
    5. Koob GF

    (2003) Chronische blootstelling aan opioïde zorgt voor verhoogde zelftoediening door heroïne bij ratten. Pharmacol Biochem Behav 75: 349-354.

  • ↵
    1. Jonge KA,
    2. Gobrogge KL,
    3. Liu Y,
    4. Wang Z

    (2011) De neurobiologie van pair bonding: inzichten van een sociaal monogaam knaagdier. Front Neuroendocrinol 32: 53-69.

    •