Front Behav Neurosci. 2014 Feb 11; 8: 36. doi: 10.3389 / fnbeh.2014.00036. eCollection 2014.
Zack M1, Featherstone RE2, Mathewson S3, Fletcher PJ3.
Abstract
Verslaving wordt beschouwd als een hersenziekte veroorzaakt door chronische blootstelling aan drugs. Sensitisatie van hersenen-dopamine (DA) -systemen medieert dit effect gedeeltelijk. Pathologisch gokken (PG) wordt beschouwd als een gedragsverslaving. PG kan daarom worden veroorzaakt door chronische blootstelling aan gokken. Het identificeren van een door gokken geïnduceerde sensitisatie van DA-systemen zou deze mogelijkheid ondersteunen. Gokbeloningen roepen DA-release op. Eén aflevering van gokautomaatspel verschuift de DA-respons van beloninglevering naar begin van cues (draaiende haspels) voor beloning, in overeenstemming met temporele verschilleerprincipes. Geconditioneerde stimuli (CS) spelen dus een sleutelrol in DA-respons op gokken. In primaten is het DA-antwoord op een CS het sterkst wanneer de kans op beloning 50% is. Onder dit schema roept de CS een verwachting van beloning op, maar geeft geen informatie over of het zal plaatsvinden in een bepaald onderzoek. Tijdens het gokken moet een 50% -schema maximale DA-vrijgave oproepen. Dit komt overeen met de beloningsfrequentie (46%) op een commerciële gokautomaat. DA-afgifte kan bijdragen aan sensibilisatie, vooral voor amfetamine. Chronische blootstelling aan een CS die beloning 50 voorspelt% van de tijd kan dit effect nabootsen. We testten deze hypothese in drie onderzoeken met ratten. Dieren ontvingen 15 × 45-min-blootstellingen aan een CS die een beloning voorspelde met een waarschijnlijkheid van 0, 25, 50, 75 of 100%. De CS was een licht; de beloning was een 10% sucrose-oplossing. Na training ontvingen ratten een sensibiliserend regime van vijf afzonderlijke doses (1 mg / kg) d-amfetamine. Ten slotte ontvingen ze een 0.5- of 1 mg / kg amfetamine-uitdaging voorafgaand aan een 90-min locomotorische activiteitentest. In alle drie onderzoeken vertoonde de 50% -groep grotere activiteit dan de andere groepen als reactie op beide uitdagingsdoses. Effectgrootten waren bescheiden maar consistent, zoals weerspiegeld door een significante groeps × rangorde (φ = 0.986, p = 0.025). Chronische blootstelling aan een gokachtig schema van beloningsprikkelstimuli kan sensibilisatie voor amfetamine bevorderen, net als blootstelling aan amfetamine zelf.
Introductie
Verslaving is gekarakteriseerd als een hersenziekte veroorzaakt door chronische blootstelling aan drugs van misbruik (Leshner, 1997). Neuroplasticiteit wordt verondersteld de effecten van een dergelijke blootstelling te bemiddelen (Nestler, 2001). Sensitisatie van hersenendopamine (DA) -systemen is een vorm van neuroplasticiteit die betrokken is bij hyperreactiviteit voor geconditioneerde stimuli (CS) voor geneesmiddelen en dwangmatig zoeken naar geneesmiddelen (Robinson en Berridge, 2001). Sensitisatie is operationeel gedefinieerd door een verhoogde DA-afgifte als reactie op een CS voor beloning en door een verhoogde locomotorische respons op farmacologische DA-uitdaging (Robinson en Berridge, 1993; Pierce en Kalivas, 1997; Vanderschuren en Kalivas, 2000). Hoewel sensitisatie slechts een van de vele veranderingen in de hersenen is die verband houden met verslaving (vergelijk Robbins en Everitt, 1999; Koob en Le Moal, 2008), is gesuggereerd dat veranderingen in presynaptische dopamine-afgifte veelvoorkomende neuroadaptaties vertegenwoordigen die betrokken zijn bij drugsverslaving op basis van verslaving (bijv. terugval), in die zin dat geneesmiddelen die locomotorisibilisatie induceren tot opiaat (bijv. morfine) of stimulantia (bijvoorbeeld amfetamine) , ook leiden tot herstel van gedoofde operante responsen voor heroïne of cocaïne zelftoediening-een diermodel van terugval (Vanderschuren et al., 1999). Bewijs dat sensibilisering van de prikkel (verhoogde waarde van de beloning voor drugsverslaving) het meest uitgesproken is na de eerste blootstelling aan verslavende geneesmiddelen, suggereert verder dat sensibilisatie ook in de vroege stadia van verslaving kan zijn betrokken (Vanderschuren en Pierce, 2010).
Pathologisch gokken (PG) is beschreven als een gedragsverslaving en is recentelijk opnieuw ingedeeld in dezelfde categorie als substantieverslagregelingsstoornissen in de 5-editie van de diagnostische en statistische handleiding voor psychische stoornissen (Frascella et al., 2010; APA, 2013). Dit impliceert dat PG veroorzaakt kan zijn door chronische blootstelling aan gokachtige activiteit, dat gemeenschappelijke mechanismen de effecten van gokken en blootstelling aan drugs kunnen mediëren (Zack en Poulos, 2009; Leeman en Potenza, 2012); en dat sensibilisatie van DA-wegen in de hersenen een belangrijk element van dit proces kan zijn.
Klinisch bewijs ondersteunt indirect deze mogelijkheid: Positron-emissietomografie (PET) gebruiken Boileau en collega's ontdekten dat mannelijke PG-proefpersonen een significant grotere striatale DA-afgifte vertonen als reactie op amfetamine (0.4 mg / kg) dan gezonde mannelijke controles (Boileau et al., 2013). Algemene groepsverschillen waren significant in het associatieve en somatosensorische striatum. In het limbische striatum, waaronder de nucleus accumbens, verschilden de groepen niet. Bij PG-proefpersonen correleerde de DA-afgifte in het limbische striatum echter rechtstreeks met de ernst van PG-symptomen. Deze bevindingen komen overeen met sensibilisatie van DA-wegen in hersenen bij PG, maar suggereren ook enkele belangrijke verschillen met individuen die afhankelijk zijn van de mens en met het klassieke diermodel voor sensibilisatie van amfetamine. In tegenstelling tot PG-patiënten en dieren die zijn blootgesteld aan lage doses amfetamine (vergelijk Robinson et al., 1982) vertonen mensen met substantieafhankelijkheid consistent verminderde DA-afgifte tot een stimulantuitdaging (Volkow et al., 1997; Martinez et al., 2007), en het bewijs van dieren suggereert dat dit tekorten in de DA-functie kan weerspiegelen tijdens de eerste stadia van onthouding na binge-patronen van middelenmisbruik (Mateo et al., 2005). In onderzoeken waarbij sensitisatie van het stimulerende effect bij dieren wordt aangetoond, wordt verhoogde DA-afgifte gewoonlijk waargenomen in het limbische striatum in plaats van het dorsale (associatieve, somatosensorische) striatum (Vezina, 2004). Echter, cue-geïnduceerde (dat wil zeggen, geconditioneerde) drug-zoeken bij dieren die herhaaldelijk zijn blootgesteld aan cocaïne is in verband gebracht met een verhoogde DA-afgifte in het dorsale striatum, een resultaat waarvan wordt aangenomen dat het een meer gebruikelijke vorm van gemotiveerd gedrag aangeeft (Ito et al., 2002). Aldus kan de algehele verhoging van de DA-afgifte in dorsale gebieden bij PG-patiënten verband houden met op gewoonten gebaseerde (niet-flexibele, geroutiniseerde) beloning waarbij "een progressie van ventrale naar meer dorsale domeinen van het striatum" is betrokken (Everitt en Robbins, 2005, p. 1481), terwijl de ernstafhankelijke DA-afgifte in limbisch striatum bij deze personen mogelijk meer overeenkomt met stimulatieovergevoeligheid zoals typisch gemodelleerd bij dieren. De PET-bevindingen kunnen niet onthullen of DA-hyperreactiviteit een reeds bestaand kenmerk van deze PG-patiënten was, een gevolg van blootstelling aan gokken of het resultaat van een ander volledig proces. Om deze vraag aan te pakken, is het noodzakelijk om de inductie van sensibilisatie aan te tonen door blootstelling aan chronische gokken bij onderwerpen die normaal zijn vóór blootstelling. Dit roept vragen op over welke kenmerken van gokken waarschijnlijk sensibilisatie zullen veroorzaken.
Skinner merkte op dat het variabele schema van versterking fundamenteel was voor de aantrekkingskracht van gokken (of in ieder geval de persistentie ervan) (Skinner, 1953). Het gokgedrag in een gokautomaat voldoet goed aan de basisprincipes van instrumentele conditionering, zoals blijkt uit een prospectieve correlatie tussen de monetaire uitbetaling en de gokomvang bij opeenvolgende spins (Tremblay et al., 2011). Operant reageren met variabele ratio lijkt dus een extern geldig model van gokautomaten te bieden.
Recent onderzoek met dieren biedt een sterke initiële ondersteuning voor een causaal effect van gokblootstelling op sensitisatie. Singer en collega's onderzochten de effecten van 55 1-h dagelijkse sessies van gefixeerde (FR20) of variabele (VR20) sacharine-versterking in een operant-hefboom-pers-paradigma op de daaropvolgende locomotorische respons op een lage dosis (0.5 mg / kg) amfetamine bij gezonde mannen ( Sprague Dawley) ratten (Singer et al., 2012). Ze veronderstelden dat, als gokken leidt tot sensibilisatie, ratten die worden blootgesteld aan het variabele schema, dat gokken nabootst, een grotere respons op amfetamine zouden moeten vertonen dan ratten die aan het vaste schema worden blootgesteld. Zoals voorspeld, toonde de VR20-groep een 50% grotere locomotorische respons op amfetamine dan de FR20-groep. Daarentegen vertoonden de groepen equivalente voortbeweging na een zoutoplossinginjectie. Deze bevindingen bevestigen dat chronische blootstelling aan variabele versterking voldoende is om hyperreactiviteit te induceren tot een DA-uitdaging bij gezonde dieren die zijn gerandomiseerd naar de respectieve schema's.
Een aantal vragen komen voort uit dit resultaat: Ten eerste, in welke mate bemiddelt deze waargenomen contingentie - of het ontbreken daarvan - tussen de operante respons en de uitkomst ervan? In termen van leren, houdt dit effect een "verwachte respons-uitkomst" in of is een vergelijkbaar effect te zien in de afwezigheid van een operante respons, dat wil zeggen "een verwachte prikkeluitkomst" in een Pavloviaans paradigma (zie Bolles, 1972)? Ten tweede, is de mate van contingentie tussen de antecedente gebeurtenis (respons of stimulus) en de uitkomst ervan van invloed op de mate van sensitisatie?
De tweede vraag betreft de rol van onzekerheid bij sensibilisatie. Bijvoorbeeld, hebben games waarvan de uitkomst echt willekeurig is - volledig onvoorspelbaar - een groter potentieel om sensibilisatie te veroorzaken dan spellen waarbij de winkansen duidelijk zijn gedefinieerd maar niet willekeurig, zelfs als het absolute beloningsniveau laag is? Het huidige onderzoek ging in op deze vragen.
Het experimentele ontwerp werd geïnformeerd door een baanbrekend onderzoek naar de verwachte beloning en DA-neuronrespons bij apen (Fiorillo et al., 2003). De dieren in die studie ontvingen een juice-beloning (VS) onder 0-, 25-, 50-, 75- of 100% -schema's met variabele ratio's. De schema's werden aangeduid met 1 van 4 verschillende CS (pictogrammen). Het 0% -schema leverde even vaak beloning op als het schema 100%, maar liet de CS weg. De afvuursnelheid van DA-neuronen tijdens het interval tussen CS-onset en Amerikaanse aflevering of weglating was de belangrijkste afhankelijke maat. Uit de studie bleek dat de DA-respons toenam als een functie van de onzekerheid van de beloning. Dus, onder het 100% schema wekte de CS weinig activiteit op, onder de 25 en 75% schema's, riep de CS gematigde en vergelijkbare niveaus van activiteit op, en onder het 50% schema wekte de CS maximale activiteit op. In beide gevallen escaleerde de vuursnelheid in de loop van het CS-VS-interval, dat wil zeggen naarmate de verwachting dichterbij kwam.
Deze bevindingen geven aan dat de DA-activiteit niet alleen varieert naargelang de beloning al dan niet zeker is (Fixed Ratio) of onzeker (Variable Ratio), maar ook varieert in omgekeerde verhouding tot de hoeveelheid informatie over beloningstoediening die door de CS wordt overgebracht. In de 100% -voorwaarde roept de CS de beloningsverwachting op en voorspelt ook perfect de levering. In de 25- en 75% -omstandigheden roept de CS de verwachting op en voorspelt de beloning drie van de vier keer. In de 50% -voorwaarde roept de CS de verwachting op, maar biedt geen informatie over beloningslevering die verder gaat dan alleen kans. Gebaseerd op hun bevindingen, Fiorillo et al. concludeerde: "Deze onzekerheid-geïnduceerde toename van dopamine kan bijdragen aan de belonende eigenschappen van gokken" (p .1901).
De effecten van een variabele beloning van 50% in een enkele sessie mogen niet veranderen in de loop van meerdere sessies, omdat de kans op een beloning bij elke proef volledig onvoorspelbaar blijft. Dus als we kijken naar de omstandigheden die de chronische activering van DA-neuronen tijdens herhaalde gokafleveringen maximaliseren, zou het 50% -schema zowel het meest duurzame als het meest robuuste effect moeten hebben. Dit is opmerkelijk gezien het feit dat het beloningspercentage op lange termijn (uitbetaling> 0) waargenomen gedurende duizenden spins op een commerciële gokautomaat 45.8% was (Tremblay et al., 2011). 50% variabele beloning lijkt dus nauwkeurig het door de feitelijke gokapparaten beheerde uitbetalingsschema weer te geven.
In de huidige studie werden dezelfde conditioneringsschema's gebruikt als Fiorillo et al. bij chronische blootstelling, ontwerp tussen groepen met ratten. Dieren ondergingen ~ 3 weken aan dagelijkse conditioneringssessies, waarbij een CS (licht) werd gecombineerd met een US (kleine hoeveelheid sucrose). Na de trainingsfase rustten de dieren voordat ze de sensibilisatie die werd geïndexeerd door de locomotorische respons op amfetamine, konden beoordelen. Op basis van de literatuur werd voorspeld dat ratten die aan verschillende beloningsschema's werden blootgesteld, niet zouden verschillen in hun drugsvrij bewegingsgedrag, maar significant verschillende niveaus van voortbeweging zouden vertonen na amfetamine, waarbij de 50% -groep een grotere locomotorische respons op het medicijn vertoonde ten opzichte van de andere groepen in de loop van de doses, een patroon dat zou worden verwacht als de 50% van de dieren eerder was blootgesteld aan aanvullende doses amfetamine zelf (dwz kruissensibilisatie).
experiment 1
materialen en methodes
vakken
Vier groepen (n = 8 / groep) van volwassen (300-350 g) mannelijke Sprague-Dawley-ratten (Charles River, St. Constant, Quebec, Canada) werden individueel gehuisvest in heldere polycarbonaatdozen (20 x XUMX X XUMX cm) onder een omgekeerde 43: 22 licht-donker cyclus. Ze hebben ontvangen ad libitum toegang tot voedsel en water, en dagelijkse behandeling door een experimentator gedurende 2 weken voorafgaand aan het onderzoek. Elke groep werd geconditioneerd onder een van de vier variabele beloningsschema's: 0, 25, 50 of 100%. De 75% -groep werd weggelaten in deze eerste studie, zoals Fiorillo et al. (2003) vonden een equivalente post-CS DA-release onder 25- en 75% -beloningsschema's, zodanig dat beide voorwaarden tot een grotere DA-release leidden dan de 100% CS-US-voorwaarde, maar minder dan de 50% -voorwaarde.
Apparaat
Toegang tot sucrosepresentaties en tot de CS werd individueel verschaft in operante conditioneringsdozen (33 × 31 × 29 cm). Elke doos was uitgerust met een versterkermagazijn, dat zich op de voormuur bevond. Een lampje aan de bovenkant van het tijdschrift diende als de CS. Een gemotoriseerde, solenoïde gestuurde vloeistofdipper kan naar de vloer van het magazijn worden verplaatst. Gebeurtenissen in de box werden bestuurd door apparatuur en software van Med Associates, met behulp van een intern programma dat werd geschreven in MED-PC. Het testen van de motor werd individueel uitgevoerd in plexiglas kooien (27 × 48 × 20 cm). Elke kooi was uitgerust met een bewakingssysteem bestaande uit zes fotobundelcellen om horizontale beweging te detecteren.
Procedure
Trainingen. Het onderzoek werd uitgevoerd in overeenstemming met de ethische richtlijnen uiteengezet door de Canadian Council on Animal Care. Ratten waren voedsel-beperkt tot 90% van hun lichaamsgewicht voor de duur van de studie en individueel gehuisvest. Elke rat ontving 15 dagen van sucrose beloningstraining (10% wateroplossing bij 0.06 ml per beloning): 5 opeenvolgende dagen × 3 weken, met weekends uit. Dieren werden voor en na de trainingsfase op standaardvoer gehouden; blootstelling aan sucrose was beperkt tot de vijftien ~ 40-min trainingssessies. Elke dagelijkse sessie bestond uit 15-stimuluspresentaties (een licht; CS), elk gescheiden door een tussenproefperiode van 120 s. Het licht bevond zich in het bovenste paneel van het tijdschrift en bleef aan voor 25 s, waarbij sucrose beschikbaar werd gesteld tijdens de laatste 5 s. In het geval van groep 0 werd de sucrosedipper elke 140 s (voor 5 s) verhoogd, maar het stimuluslicht was niet verlicht. Dit stelde het interval voor tussen presentaties van de dipper in groep 0 en de andere groepen (120 + 25 s). Elke behandelingssessie duurde ~ 40 min. Gemiddeld ontving groep 25 eenmaal per vier CS-presentaties sucrose; groep 50 ontving één keer sucrose voor elke twee CS-presentaties en groep 100 ontving sucrose na elke CS-presentatie.
Testen. Twee weken na de laatste sessie met sucrose-toegang (of "conditionering") werd de locomotorische respons op d-amfetamine (AMPH; ip) bepaald. Aan ratten werden drie 2-h-sessies gegeven om aan de locomotor-boxen te wennen, gevolgd door zes AMPH-testsessies. AMPH-testdagen traden op met 1-wk-intervallen. Op testdagen kregen ratten 30 min om te wennen aan dozen en ontvingen vervolgens een enkele 0.5 mg / kg dosis AMPH gevolgd, op afzonderlijke wekelijkse sessies, met vijf 1.0 mg / kg doses (één dosis per dag) op testdagen 1 tot 5 . De post-AMPH-beweging werd beoordeeld op 90 min op elke sessie.
Data-analytische aanpak
Statistische analyses werden uitgevoerd met SPSS (v. 16 en v. 21; SPSS Inc., Chicago IL). Onmiddellijke gedragsreactie op de CS werd beoordeeld in termen van neuspokes in de opening waar de sucrose werd afgegeven. Het gemiddelde aantal neuspokes tijdens dit interval (5 per proef) werd vervolgens vergeleken met het gemiddelde aantal neuspokes voor dezelfde duur (5 s) gemiddeld over de tijd dat de CS afwezig was. Groep x Sessie ANOVA's van neuspokes met CS aanwezig en afwezig volgden de verwerving van een onderscheidende respons op de keu en willekeurige poriënreacties onder de verschillende schema's in de loop van de 15 sucrose trainingssessies.
Effecten van behandeling op locomotorische responsen werden beoordeeld met Group × Session ANOVA's voor de drugsvrije gewenningsfase (drie sessies), pre-sensibilisatie 0.5 mg / kg AMPH-challenge (één sessie) en tijdens de vijf-sessie 1 mg / kg AMPH overgevoeligheidsregime, wanneer van groepen werd verwacht dat ze verschilden in reactie op herhaalde doses AMPH. Groep x Sessie ANOVA's hebben ook drugsvrije locomotorische responsen bepaald tijdens de 30-min pre-injectie gewenningsfase van elke AMPH-testsessie. Geplande vergelijkingen beoordeelden het verschil in gemiddelde prestaties voor groep 50 vs. groep 0 (geen verwachtingscontrole) en groep 100 (geen onzekerheidscontrole), door middel van t-tests (Howell, 1992), met behulp van de MS-fout en df-fouttermen voor het relevante effect (dat wil zeggen, groep of groep × sessie-interactie) van de ANOVA (Winer, 1971). Polynomiale trendanalyses testten het profiel van veranderingen in de loop van sessies.
Om te bepalen of naderingsreacties in de aanwezigheid en afwezigheid van de CS tijdens de 15-sucrosetraining bijdroegen aan de variatie in de locomotorische respons op AMPH, of gemedieerde groepsverschillen in AMPH-respons, werden follow-upanalyses van covariantie (ANCOVA's) uitgevoerd op de AMPH locomotorische gegevens, inclusief totale neuspokes (som voor 15-sessies) wanneer de CS afwezig was als de covariabele. Een significant effect van de covariabele zou erop duiden dat medicijnvrije benaderingsresponsen gemodereerd (beïnvloed de kracht van) de effecten van groep of sessie. Een afname in de significantie van de effecten van een groep of sessie in de aanwezigheid van een significante covariabele zou erop wijzen dat naderingsreacties de effecten van groep of sessie veroorzaakten (goed waren). Een afname in de significantie van groeps- of sessie-effecten bij afwezigheid van een significant covariaatseffect zou eenvoudigweg een verlies aan statistische power weerspiegelen als gevolg van de herallocatie van df van de foutterm naar de covariabele, en zou niet van invloed zijn op de interpretatie van de effecten van groep of sessie.
Resultaten
Neus steekt uit tijdens sucrose-conditioneringssessies
CS aanwezig. Figuur Figure1A1A toont de gemiddelde neuspokes voor groepen 25, 50 en 100 terwijl de CS aanwezig was op de 15 sucrose-conditioneringssessies (neuspokes waren niet gecodeerd voor groep 0, die geen CS ontving). Een 3-groep × 15 sessie-ANOVA leverde belangrijke hoofdeffecten van groep op, F(2, 21) = 5.63, p = 0.011 en sessie, F(14, 294) = 14.00, p <0.001, samen met een aanzienlijke groep × sessie-interactie, F(28, 294) = 2.93, p <0.001. Figuur Figure1A1A geeft aan dat het belangrijkste effect van Session een toename van neuspokes in sessies in alle drie groepen weerspiegelde, en het belangrijkste effect van de Groep weerspiegelde over het algemeen hogere totaalscores in groep 100 versus groep 25 met tussentijdse scores in groep 50. Een significante Group × Session-interactie voor de kubieke trend, F(2, 21) = 4.42, p = 0.030, duidde op een snelle stijging, dip en nivellering in neuspokes over sessies in groep 100, vergeleken met een lineaire toename ten opzichte van sessies in groep 50, en een ondieper lineaire toename ten opzichte van sessies in groep 25.
CS afwezig. Figuur Figure1B1B toont de gemiddelde neuspokes voor alle vier groepen voor een equivalente duur (5 s × 15-proeven) gemiddeld over de tijd dat de CS afwezig was. Een 4-groep × 15 sessie-ANOVA leverde belangrijke hoofdeffecten van groep op, F(3, 28) = 7.06, p = 0.001 en sessie F(14, 392) = 2.84, p <0.001, samen met een aanzienlijke groep × sessie-interactie, F(42, 392) = 3.93, p <0.001. Een significante Groep × Sessie-interactie voor de kwadratische trend, F(3, 28) = 3.91, p = 0.019, zonder interactie voor de kubieke trend, F(3, 28) <0.93, p > 0.44, weerspiegelde een “omgekeerd-U” -profiel van neusprikken tijdens sessies in groep 0, vergeleken met een algemeen stabiel profiel over sessies in de andere groepen.
Gewenning aan locomotiefkamers
Een 4-groep × 3 sessie-ANOVA leverde een belangrijk effect op sessie, F(2, 56) = 5.67, p = 0.006, en geen andere significante effecten, F(3, 28) <1.60, p > 0.21. Gemiddelde (SE) straalonderbrekingen per 2 uur in de locomotorische boxen waren 1681 (123) in sessie 1, 1525 (140) in sessie 2 en 1269 (96) in sessie 3. Geplande vergelijkingen vonden geen significante verschillen tussen groep 50 en groep 0 of groep 100 op de eerste of laatste gewenningssessie, t(84) <1.69, p > 0.05. Dus, in de afwezigheid van AMPH, werd herhaalde blootstelling aan de testboxen geassocieerd met een consistente afname van de spontane locomotorische activiteit in de vier groepen (dwz sessie-effect), en geen differentiële respons als functie van het sucrose-trainingsschema (geen interactie) .
Test sessies
Effecten van pre-sensibilisatie 0.5 mg / kg AMPH-uitdaging.
Pre-injectie locomotie. Een 4 Group one-way ANOVA van de locomotorische respons tijdens de 30-min pre-injectie gewenningsfase leverde geen significante effecten op, F(3, 28) <1.05, p > 0.38. Geplande vergelijkingen vonden geen significant verschil tussen groep 50 en groep 0 of groep 100, t(32) <0.87, p > 0.40. Daarom waren basislijnverschillen in locomotie vóór injectie geen rekening gehouden met groepsverschillen in locomotorische respons op AMPH. De gemiddelde (SE) straalonderbrekingen voor het monster waren 559 (77).
Beweging na de injectie versus de laatste drugsvrije gewenningssessie. Een 4 Group × 2 Session ANOVA vergeleek de locomotorische reacties van de groepen op de laatste gewenningssessie en onmiddellijk na de pre-sensibilisatie 0.5 mg / kg AMPH-challenge. Scores voor de gewenningssessie (120 min) werden geschaald om overeen te komen met de duur van de AMPH-testsessie (90 min) (ruwe gewenningsscore × 90/120). De analyse leverde een significant hoofdeffect op van Session, F(1, 28) = 34.16, p <0.001, en geen andere significante effecten, F(3, 28) <2.26, p > 0.10. Het sessie-effect weerspiegelde een toename van de gemiddelde (SE) straalonderbrekingen als reactie op de dosis, van 952 (72) tot 1859 (151). Geplande vergelijkingen vonden geen significante verschillen tussen groep 50 en groep 0 of groep 100 als reactie op de dosis, t(56) <1.72, p > 0.10. De rangorde van de bundelonderbrekingsscores (M; SE) in lijn met de hypothese: groep 50 (2205; 264)> groep 0 (2025; 203)> groep 100 (1909; 407)> groep 25 (1296; 299) .
Effecten van 1 mg / kg AMPH.
Pre-injectie locomotie. Een 4-groep × 5-sessie ANOVA van de locomotorische respons tijdens de 30-min pre-injectie gewenningsfase op 1 mg / kg AMPH-testsessies leverde een hoofdeffect op Sessie, F(4, 112) = 43.64, p <0.0001, en geen andere significante effecten, F(3, 28) <0.97, p > 0.42. Geplande vergelijkingen vonden geen significant verschil tussen groep 50 en groep 0 of groep 100 tijdens de eerste of laatste testsessie, t(140) <0.84, p > 0.30. Daarom waren basislijnverschillen in voortbeweging geen verklaring voor groepsverschillen in locomotorische respons op AMPH. De gemiddelde (SE) bundelonderbrekingsscores voor de gewenningsfase vóór de dosis op sessies 1–5 waren: 454 (30), 809 (53), 760 (36), 505 (35), 756 (39).
Een locomotie na de injectie. Figuur Figure22 toont de effecten van vijf injecties van 1 mg / kg AMPH (één per week) op de scores van voortbewegingsactiviteiten in de vier groepen. Een 4-groep × 5 sessie-ANOVA leverde een belangrijk effect op sessie, F(4, 112) = 8.21, p <0.001, een marginaal hoofdeffect van Group, F(2, 45) = 3.28, p = 0.085, en geen significante interactie, F(12, 122) <0.77, p > 0.68.
Geplande vergelijkingen onthulden dat groep 50 scores aanzienlijk verschilden van groep 0, t(14) = 2.19, p = 0.037 en groep 100, t(14) = 2.36, p = 0.025 [en marginaal verschillend van groep 25, t(14) = 2.03, p = 0.051]. Dus in groep 50 overschreed de locomotorische respons op 1 mg / kg AMPH op betrouwbare wijze die van de andere drie groepen in alle vijf testsessies. Polynomiale trendanalyse detecteerde een significante kwadratische trend over sessies, F(1, 28) = 32.47, p <0.0001, en geen andere significante trends, F(1, 28) <1.78, p > 0.19. Figuur Figure22 laat zien dat dit resultaat een "omgekeerd U" -patroon weerspiegelt in alle sessies.
Beheersing van variatie in neusklokken die reageren tijdens sucrose-training
De follow-up ANCOVA van de locomotorische responsen op 1 mg / kg AMPH, met neuspokes (CS aanwezig) als de covariabele, in de drie groepen die de CS ontvingen, leverde een marginaal hoofdeffect op van de Groep, F(2, 20) = 3.07, p = 0.069, en geen significante covariaat-gerelateerde effecten, F(4, 80) <0.05, p > 0.85. De respons van de cued-benadering tijdens de training verklaarde dus geen significante variatie in de locomotorische respons op 1 mg / kg AMPH in groepen 25, 50 of 100.
De follow-up ANCOVA van locomotorische responsen op 1 mg / kg AMPH, met neuspokes (CS afwezig) als een covariabele, leverde een significant effect op van de covariabele, F(1, 27) = 6.17, p = 0.020, een significant hoofdeffect van Group, F(3, 27) = 4.13, p = 0.016, een marginale sessie × Covariate-interactie, p = 0.080, en geen andere significante effecten, F(4, 108) <1.48, p > 0.21. Aldus verklaarde een niet-cued (willekeurige) benadering die reageerde tijdens de training een significante variatie in locomotorische respons op 1 mg / kg AMPH. Deze variatie overlapt echter niet met groepsgerelateerde variantie, omdat opname van de covariabele in de analyse de significantie van het groepseffect eerder verhoogde dan afnam.
Discussie
De nose porgegevens terwijl de CS aanwezig was, tonen aan dat groepen de associatie tussen CS en sucrose-afgifte hebben verworven zoals weerspiegeld door een toename in reacties op cues gedurende trainingssessies. Het profiel van antwoordende sessies terwijl de CS aanwezig was, suggereerde dat de 100- en 50% CS-US-schema's even effectief waren in het uitlokken van de benadering, terwijl het 25% -schema een meer bescheiden toename van de cue-geïnduceerde benadering teweegbracht. De nose por gegevens terwijl de CS afwezig was suggereren dat groepen die één van de drie CS-sucrose trainingsschema's (groep 25, 50, 100) ontvingen snel leerden om hun neuspokes te verminderen in de afwezigheid van de CS, terwijl dieren in groep 0 , die geen CS kreeg, leerde pas na een uitgebreide training in beperkte mate hun benaderingsgedrag te verminderen.
De gegevens over de gewenning tonen aan dat de groepen niet van elkaar verschilden voorafgaand aan AMPH en dat herhaalde blootstelling aan de testdozen verband hield met een afgenomen respons van de drugsvrije locomotor. Daarom kunnen verschillen tussen de groepen en een toegenomen respons op herhaalde doses AMPH niet worden toegeschreven aan reeds bestaande verschillen in voortbewegingsgedrag.
Resultaten van de pre-sensibilisatie-uitdaging met 0.5 mg / kg AMPH bevestigden dat het medicijn de locomotorische activiteit verhoogde ten opzichte van de laatste drugsvrije gewenningsdag. In overeenstemming met de hypothese classificeerde groep 50 hoger dan groepen 0 of 100 (evenals groep 25) in termen van gemiddelde respons op de dosis, hoewel de gemiddelde verschillen tussen groepen niet significant waren.
Voor de sensibiliseringssessies toonden de geplande vergelijkingen tussen de groepen aan dat eerdere blootstelling aan 50% geconditioneerde sucrose-beloning leidde tot een significante toename van de locomotorische respons op een dosis van 1.0, 1 mg / kg amfetamine in vergelijking met de andere drie schema's. Dit effect was duidelijk vanaf de eerste dosis en veranderde niet merkbaar na herhaalde doses. De trendanalyse duidde op een tweefasige respons (voor het volledige monster) op herhaalde doses AMPH, oplopend tot de derde dosis en daarna afnemend. De resultaten van de follow-up ANCOVA met nose-pokes (CS afwezig) als covariaat bevestigde dat verschillen in de locomotorische reacties van de vier groepen op XNUMX mg / kg AMPH niet werden gemedieerd door niet-gecued benadering die reageerde tijdens de sucrose-trainingssessies.
Het groepseffect tijdens de sensibiliseringssessies is consistent met onze hypothese. Het bi-fasische sessie-effect is niet consistent met de verwachte aanhoudende escalatie van locomotorische responsen met herhaalde AMPH-doses. Dit kan te maken hebben met het doseringsinterval. Om dit probleem aan te pakken, moet een procedure (alternatieve dagelijkse doses) waarvan is aangetoond dat deze een consistente escalatie in de motorische respons op 1.0 mg / kg doses AMPH (dat wil zeggen gedragssensibilisatie) induceren, worden toegepast. De impact van een sensibiliserend regime van AMPH op de daaropvolgende reactie op een tweede 0.5 mg / kg-uitdaging zou de algemeenheid van dit effect verder ondersteunen. Het opnemen van een zoutoplossing voorafgaand aan AMPH zou de rol van verwachting of injectie-gerelateerde (bijv. Stress) effecten op de locomotorische respons op AMPH bepalen. Het opnemen van een 75% geconditioneerde sucrosegroep zou helpen om de rol van beloningsonzekerheid versus beloningsfrequentie op het patroon van responsen voor groepen 50 en groep 25 te verduidelijken. Om de bijdrage van drugsvrije cued approach-responsen op voortbeweging onder AMPH (ANCOVA) mogelijk te maken (gebruikmakend van neuspokes met CS aanwezig als de covariabele), werden neuspokes ook gecodeerd voor groep 0 tijdens het interval wanneer de CS was aanwezig in de andere vier groepen (dwz, zodat de neuspokken van alle vijf groepen - inclusief groep 0 die geen CS ontvingen - konden worden opgenomen in de analyse van covariantie met CS aanwezig als de covariabele). Deze verfijningen zijn verwerkt in experiment 2.
experiment 2
materialen en methodes
De methodologie van experiment 2 was vergelijkbaar met die van experiment 1 maar werd herzien om een regime dat werd gevonden om op betrouwbare wijze AMPH-sensibilisatie induceert, beter te benaderen (Fletcher et al., 2005). De veranderingen waren als volgt: (a) de 75% CS-sucrosegroep (n = 8) was inbegrepen; (b) Tijdens sucrose-training ontvingen ratten (behalve groep 0) 20 CS (lichte) presentaties (in tegenstelling tot 15 in experiment 1); (c) CS-presentaties werden elk gescheiden door een gemiddeld inter-trial interval van 90 s; bereik: 30-180 s (versus 120 s in experiment 1), die de toename van trainingsproeven compenseert om de duur van elke trainingssessie gelijk te stellen aan die van experiment 1; (d) de duur van elk van de drie gewenningssessies werd verlaagd van 120 naar 90 min om overeen te komen met de duur van de testsessies; (e) Een zoutoplossing (ip, 1 ml / kg) uitdaging (90 min) werd toegevoegd (post-sucrosetrainingsdag 8) om de locomotorische effecten van injectie te bepalen werkt (bijv. verwachting, stress); (f) De sensitisatiesessies 1 mg / kg werden gehouden op andere weekdagen (post-trainingsdagen 12-21) in plaats van met wekelijkse intervallen zoals in experiment 1; (g) Naast de pre-sensibilisatie 0.5 mg / kg AMPH-uitdaging (post-trainingsdag 9) werd een tweede post-sensibilisatie 0.5 mg / kg AMPH-uitdaging toegevoegd (post-sucrose trainingsdag 28) om de algemeenheid van de overgevoeligheidseffect in doses; (h) neuspokes terwijl CS aanwezig was, waren gecodeerd voor alle groepen (inclusief groep 0); (i) neuspokes terwijl CS afwezig was, werden specifiek geregistreerd uit het 5-s-interval onmiddellijk voorafgaand aan het begin van de CS om vroegtijdige naderingrespons te indexeren.
Resultaten
Neus steekt uit tijdens sucrose-conditioneringssessies
Een 5-groep × 15-sessie × 2-fase (CS aanwezig, CS afwezig) ANOVA van neuspokes leverde belangrijke hoofdeffecten van Groep op, F(4, 19) = 2.89, p = 0.050, sessie F(14, 266) = 2.28, p = 0.006, en fase, F(1, 19) = 14.72, p = 0.001, evenals een significante drieweginteractie, F(56, 266) = 1.38, p = 0.050. panels (A, B) van figuur Figure33 plot de gemiddelde neusholtescores van de groepen voor respectievelijk de CS-huidige en CS-afwezige fasen. Vergelijking van de twee panelen laat zien dat het hoofdeffect van Phase meer algemene neushoornresponsen weerspiegelde wanneer de CS aanwezig was versus afwezig. Daarom kwamen cued-reacties significant vaker voor dan premature un-cued-reacties. De hoofdeffecten van groep en sessie werden niet gemakkelijk geïnterpreteerd vanwege de interactie van hogere orde. Dit laatste resultaat weerspiegelde een convergentie van scores voor de vijf groepen op een relatief stabiel laag niveau tussen sessies wanneer de CS afwezig was (figuur (Figure3B), 3B), samen met een divergentie van scores in hoge (groep 75, groep 100), tussenliggende (groep 50) en lage (groep 0, groep 25) niveaus van neuskoppen die reageerden tijdens sessies toen de CS aanwezig was (Figuur (Figure3A) .3A). Van de lagere orde polynomiale trends (lineair, kwadratisch, kubisch) benaderde alleen de drieweginteractie voor de lineaire trend betekenis, F(4, 19) = 2.32, p = 0.094, als gevolg van de over het algemeen monotone toename van neuspokes ten opzichte van sessies in groep 75 en relatief snellere stabilisatie bij hoge, gemiddelde en lage niveaus van reageren in de andere groepen wanneer de CS aanwezig was.
Gewenning aan locomotorboxen
Een 5-groep × 3-sessie ANOVA van geneesmiddelvrije locomotorische reacties leverde een significant hoofdeffect op Sessie, F(2, 70) = 60.01, p <0.0001, en geen andere significante effecten, F(4, 35) <0.70, p > 0.60. Geplande vergelijkingen van groep 50 met groep 0 en met groep 100 op de eerste en laatste gewenningssessies leverden geen significante effecten op, t's <0.84, p > 0.40. Daarom verschilde de gemiddelde medicijnvrije locomotorische respons in de belangrijkste groepen niet voorafgaand aan het testen. Het gemiddelde (SE) aantal straalonderbrekingen per 90 minuten was 2162 (118) in sessie 1, 1470 (116) in sessie 2 en 1250 (98) in sessie 3.
Test sessies
Zoutpannen. Een 5-groep × 2-sessie ANOVA vergeleken de locomotorische respons op de laatste gewenningssessie en de saline-uitdagingssessie. De ANOVA leverde een hoofdeffect op Sessie, F(1, 35) = 62.46, p <0.0001, en geen andere significante effecten, F(4, 35) <0.65, p > 0.64. Figuur Figure44 plot de groep betekent en toont aan dat het sessie-effect een algemene afname van de locomotorische respons van de laatste drugsvrije gewenningssessie naar de zoutoplossing-sessie weerspiegelde, die niet per groep varieerde. Dus de daling van de locomotorische respons gezien tijdens de drie habituations-sessies ging door op de vierde drugsvrije blootstelling aan de testdozen.
Effecten van 0.5 mg / kg AMPH.
Pre-injectie locomotie. Een 5-groep × 2-sessie ANOVA van pre-injectie-beweging (30-min) op de pre- en post-sensibilisatie 0.5 mg / kg AMPH-testdagen leverde een significant hoofdeffect op Sessie, F(1, 35) = 13.39, p = 0.001, en geen andere significante effecten, F(4, 35) <1.79, p > 0.15. Geplande vergelijkingen vonden geen significante verschillen tussen groep 50 en groep 0 of groep 100 tijdens de eerste sessie, t(70) <1.00, p > 0.30. Bij de tweede (post-sensibilisatie) sessie vertoonde groep 50 (1203; 121) echter significant meer pre-injectie straalonderbrekingen (M; SE) dan groep 100 (756; 103), t(70) = 5.11, p <0.001, maar verschilde niet van groep 0 (1126; 211), t(7) <0.88, p > 0.40. Daarom waren verschillen in de motoriek in de basislijn niet verantwoordelijk voor groepsverschillen in locomotorische respons op de eerste dosis van 0.5, 50 mg / kg AMPH, maar kunnen ze hebben bijgedragen aan verschillen tussen groep 100 en groep 0.5 in motorische respons op de tweede dosis van 0.5, 757 mg / kg AMPH. . De gemiddelde (SE) straalonderbrekingen voor de pre-injectiefase op de eerste en tweede 41 mg / kg AMPH-testsessie waren 974 (59) en XNUMX (XNUMX).
Een locomotie na de injectie. Een 5-groep × 2-sessie ANOVA van de locomotorische respons op 0.5 mg / kg AMPH voor en na het 5-dosis sensibiliserende schema leverde een hoofdeffect op Sessie, F(1, 35) = 76.05, p <0.0001, en geen andere significante effecten, F(4, 35) <1.10, p > 0.37. Figuur Figure55 toont de gemiddelde scores voor elke groep en sessie.
De figuur laat zien dat het sessie-effect een significante toename betekende van algemene gemiddelde (SE) bundelonderbrekingen per 90 min van 0.5 mg / kg dosis 1, 3674 (216) naar 0.5 mg / kg dosis 2, 6123 (275). Het gebrek aan interactie of groepseffect suggereerde dat sensitisatie voor AMPH niet betrouwbaar varieerde tussen groepen. Ondanks het ontbreken van significante groepsgerelateerde effecten in de ANOVA, laat inspectie van de figuur zien dat groep 50 de grootste respons vertoonde op zowel de eerste als de tweede 0.5 mg / kg doses. Geplande vergelijkingen van de respons op de eerste dosis 0.5 mg / kg brachten geen significant verschil aan het licht tussen groep 50 en groep 0 of groep 100, t's(35) <0.48, p > 0.50. Echter, als reactie op de tweede (post-sensibilisatie) dosis van 0.5 mg / kg, vertoonde groep 50 een significant grotere motoriek dan groep 0, t(35) = 2.00, p <0.05, evenals groep 100, t(35) = 3.29, p <0.01.
In het licht van het significante groepsverschil in de pre-injectie-motoriek op de tweede 0.5 mg / kg AMPH-sessie die hierboven werd vermeld, werd een follow-up 5 Group x XUMUM Session ANCOVA van de locomotorische respons op 2 mg / kg AMPH uitgevoerd, die controleerde voor injectiebeweging tijdens de tweede sessie. Deze analyse leverde een significant effect op van de covariabele, F(1, 34) = 8.65, p = 0.006, een belangrijk effect van sessie F(1, 34) = 10.83, p = 0.002, en geen andere significante effecten, F(4, 34) <0.85, p > 0.50. Belangrijk is dat geplande vergelijkingen op basis van de MS-fout en df-fout van de ANCOVA bevestigden dat de gemiddelde locomotorische respons op de tweede dosis van 0.5 mg / kg AMPH significant hoger bleef in groep 50 dan in groep 100, t(34) = 3.09, p <0.01, en groep 0, t(34) = 1.88, p <0.05 (eenzijdig), wanneer de pre-injectie variatie van sessie 2 werd gecontroleerd. Groep 50 vertoonde dus een significant grotere locomotorische respons na sensibilisatie op 0.5 mg / kg AMPH dan groep 100 of groep 0, en deze groepsverschillen werden niet gemedieerd door voortbeweging vóór injectie op testdagen.
Effecten van 1.0 mg / kg AMPH.
Pre-injectie locomotie. Een 5-groep × 5 sessie-ANOVA van 30-min pre-injectie scores voor de 1 mg / kg AMPH-sensibiliseringssessies leverde een hoofdeffect van sessie op, F(4, 140) = 16.70, p <0.0001, en geen andere significante effecten, F(4, 35) <0.94, p > 0.45. Geplande vergelijkingen vonden geen significant verschil in motoriek vóór injectie tussen groep 50 en groep 0 of groep 100 tijdens de eerste sessie, t(175) <1.66, p > 0.10. Bij de laatste sessie vertoonde groep 50 (1167; 140) echter significant meer straalonderbrekingen (M; SE) dan groep 100 (1000; 99), t(175) = 2.35, p <0.05, maar verschilde niet van groep 0 (1085, 120), t(175) <1.16, p > 0.20. Daarom droegen verschillen in voortbeweging vóór injectie bij aan verschillen tussen groepen 50 en 100 in locomotorische respons op de uiteindelijke dosis van 1 mg / kg AMPH. Gemiddelde (SE) totale straalonderbrekingen voor het monster tijdens de pre-injectiefase voor sessie 1 tot en met 5 waren: 810 (46), 784 (52), 760 (53), 726 (46), 1009 (51).
Een locomotie na de injectie. Een 5-groep × 5-sessie ANOVA van reacties op 1 mg / kg AMPH leverde een significant hoofdeffect op Sessie, F(4, 140) = 6.72, p <0.001, een marginale groep × sessie-interactie, F(16, 140) = 1.57, p = 0.085, en geen hoofdeffect van groep, F(4, 35) <0.44, p > 0.77. Polynoom-trendanalyses lieten een significante lineaire trend zien, F(1, 35) = 9.19, p = 0.005 en kubieke trend, F(1, 35) = 21.63, p <0.001, gedurende sessies 1 tot en met 5. Afbeelding Figure66 toont de gemiddelde voortbewegingsscores voor elke groep en sessie.
De figuur laat zien dat het sessie-effect een significante toename van de algemene gemiddelde (SE) bundelonderbrekingen voor het volledige monster van sessie 1, 4624 (213) naar sessie 5, 5736 (272), bevestigde de opkomst van overgevoeligheid voor AMPH. De kubieke trend gaf relatieve maxima aan voor sessies 1, 3 en 5, met dips op sessies 2 en 4, met name voor groepen 0 en 50. De figuur laat ook zien dat, ondanks het gebrek aan significante interactie, groep 25 progressief een grotere locomotorische respons vertoonde tijdens sessies en aanzienlijk verschilde van de andere groepen in sessies 4 en 5 (respectievelijk 9 en 22% groter dan de eerstvolgende hoogste groep). Geplande vergelijkingen vonden dat groep 50 niet significant verschilde van groepen 0 of 100, t(175) <0.89, p > 0.40 tijdens de eerste of laatste 1 mg / kg AMPH-testsessie.
Beheersing van variatie in neusklokken die reageren tijdens sucrose-training
Twee 5-groep × 2-sessie ANCOVA's van de locomotorische respons op 0.5 mg / kg AMPH voor en na het sensibiliseringsregime, inclusief totale neuspokes tijdens de sucrosetraining met CS aanwezig en met CS afwezig als afzonderlijke covariaten, vonden geen significante effecten voor beide covariaten, F(1, 18) <1.03, p > 0.31. Daarom bemiddelde benaderingsreactie tijdens de training geen groepsverschillen in reactie op 0.5 mg / kg AMPH.
Twee 5-groep × 5-sessie ANCOVA's van locomotorische respons op 1 mg / kg tijdens de sensibiliseringssessies met totale neuspokes (CS aanwezig, CS afwezig) als afzonderlijke covariabelen leverden geen significante effecten op van de covariabele terwijl de CS aanwezig was, F(4, 104) <1.04, p > 0.38, en een marginaal hoofdeffect van de covariaat terwijl de CS afwezig was, F(1, 18) = 3.32, p = 0.085.
Discussie
De resultaten van deze studie ondersteunden niet consistent de hypothese dat groep 50 een hogere respons op het bewegingsapparaat zou vertonen gedurende sessies in vergelijking met de andere groepen. De 1 mg / kg AMPH-gegevens bevestigden de opkomst van sensibilisatie met het doseringsregime van afwisselende dag. Het patroon over groepen gaf een trend aan voor grotere sensitisatie tijdens de laatste sessies in groep 25, zonder dergelijk bewijs voor groep 50. In tegenstelling hiermee wezen de 0.5 mg / kg-dosisresultaten op een trend voor grotere overgevoeligheid in groep 50, terwijl tegelijkertijd een significante algehele toename in de locomotorische respons over groepen naar de tweede versus de eerste 0.5 mg / kg AMPH-dosis werd bevestigd. Het nuleffect van een zoutoplossing-injectie bevestigde dat de verwachting of injectie-gerelateerde stress niet bijdroeg aan de AMPH-effecten.
De nose-poke-gegevens onthulden opnieuw een algehele toename in benadering die reageerde in de loop van trainingssessies wanneer de CS aanwezig was, zonder overeenkomstige toename toen de CS afwezig was. Daarom leken de dieren de associatie tussen de CS en het vooruitzicht op sucrose-beloning te verwerven. Groepsverschillen in de frequentie van neuspokes toen de CS aanwezig was, kwamen grofweg overeen met de frequentie van beloningstoediening onder de respectieve schema's, waarbij groepen 75 en 100 de meeste neuspokes vertoonden, groep 50 die tussennummers van neuspokes weergeeft, en groepen 0 en 25 geeft de minste neuspokes weer. Deze resultaten suggereren dat de CS de respons van de aanpak benaderde op een manier die consistent was met de algehele waarschijnlijkheid van beloning. Hoewel speculatief, een mogelijke verklaring voor de porussnelheden van de lagere neus waarbij CS in groep 50 aanwezig is in experiment 2 versus experiment 1, kan het verkorten van het interval tussen de onderzoeken zijn, omdat langere tussenperioden (experiment 1) impulsief lijken te stimuleren tendensen en dit is geassocieerd met verhoogde turnover van DA in anterior cingulate, prelimbic en infralimbic cortices (Dalley et al., 2002). Daarom kan de 30% -reductie in inter-trialinterval in experiment 2 (en 3) gewijzigde corticale DA-spiegels hebben en selectiever (dat wil zeggen geleid door de relatieve frequentie van beloning) vs. impulsieve (niet geleid door beloningsfrequentie) benadering bevorderen reageren in groep 50 tijdens trainingsproeven in experiment 2 in vergelijking met experiment 1.
Het ontbreken van significante covariaat-gerelateerde effecten voor neuspokes in de CS-huidige conditie in de ANCOVA's geeft aan dat de benadering die reageerde tijdens sucrose-training niet de effecten van de verschillende CS-sucroseschema's op responsen op AMPH medieerde. Het marginaal significante effect van de covariabele op de CS afwezigheidstoestand in de ANCOVA van de locomotorische responsen op 1 mg / kg AMPH suggereert dat de neiging tot vroegtijdige, medicijnvrije respons een deel van de variabiliteit in locomotorische effecten van AMPH tijdens de sensibiliseringssessies verklaarde.
Tezamen suggereert het bewijs dat de effecten van de conditioneringsgeschiedenis meer waarneembaar zijn met 0.5 AMPH dan met 1 mg / kg AMPH, en dat een protocol dat sensitisatie genereert bij afwezigheid van enige andere manipulatie, de effecten van een vermeend duister kan verduisteren of overbodig maken. sensibilisatiebevorderende gedragsmanipulatie (di chronische variabele beloning).
Gedragssensibilisatie voor AMPH is een robuust effect in het laboratorium. Buiten het laboratorium escaleert echter slechts een minderheid van de personen die gokken, chronisch tot pathologische niveaus. Hoewel het risico op overgevoeligheid gerelateerd is aan het risico op verslaving (of het zoeken naar drugs), met name voor psychostimulantia (Vezina, 2004; Flagel et al., 2008), kunnen veel factoren, los van sensibilisatierisico, iemand vatbaar maken voor verslaving (bijv. Verdejo-Garcia et al., 2008; Conversano et al., 2012; Volkow et al., 2012). Desondanks kunnen eigenschapfactoren die kwetsbaarheid voor sensibilisatie veroorzaken, interageren met de conditioneringsgeschiedenis om de effecten van onvoorspelbare beloning (dwz 50% CS-VS schema) op de reactiviteit van het DA-systeem te accentueren. Om deze mogelijkheid te onderzoeken, experimenteerde 3 op dezelfde manier als experiment 2, maar gebruikte Lewis-stam in plaats van Sprague Dawley-stamratten.
Sprague Dawley-ratten vertonen intermediaire niveaus van DA-transporters, met lagere niveaus dan Wistar-stamratten (Zamudio et al., 2005), maar hogere niveaus dan Wistar-Kyoto-ratten (een "depressieve" -achtige stam) in de nucleus accumbens, amygdala, ventrale tegmentale zone en substantia nigra (Jiao et al., 2003). Dit profiel kan Sprague Dawley-ratten slechts matig gevoelig maken voor milieu- of farmacologische manipulaties van de DA-functie. Lewis-ratten daarentegen vertonen lage niveaus van DA-transporters evenals D2- en D3 DA-receptoren in de nucleus accumbens en dorsale striatum in vergelijking met andere stammen (bijv. F344) (Flores et al., 1998). Deze morfologische verschillen kunnen bijdragen aan de differentiële respons van Lewis-ratten op DA-manipulaties. Lewis-ratten vertonen ook een reeks geaccentueerde reacties op experimentele medicijnmanipulaties in vergelijking met andere stammen (bijv. F344). Het belangrijkste is dat Lewis-ratten een grotere sensibilisatie voor methamfetamine vertonen, gekenmerkt door een lage respons op initiële doses maar een hogere respons op latere doses (Camp et al., 1994). Lewis-ratten vertonen ook een grotere locomotorische sensitisatie voor een reeks doses cocaïne (Kosten et al., 1994; Haile et al., 2001). Op basis van dit patroon van effecten, vermoedden we dat Lewis-ratten ons in staat zouden stellen om te onderzoeken of gevoeligheid voor sensibilisatie de effecten van conditioneringsschema op daaropvolgende respons op AMPH versterkt.
experiment 3
materialen en methodes
De methodologie was hetzelfde als in experiment 2, afgezien van het gebruik van Lewis-ratten (200-225 g bij aankomst, Charles River, Quebec, Canada).
Resultaten
Neus steekt uit tijdens sucrose-conditioneringssessies
Een 5-groep × 15-sessie × 2-fase (CS aanwezig, CS afwezig) ANOVA van neuspokes leverde belangrijke hoofdeffecten van Groep op, F(4, 34) = 6.12, p = 0.001, sessie, F(14, 476) = 3.42, p <0.001, en fase, F(1, 34) = 20.83, p <0.001, evenals een significante interactie met drie richtingen, F(56, 476) = 1.56, p = 0.008. panels (A, B) van figuur Figure77 plot de gemiddelde neusholtescores van de groepen voor respectievelijk de CS-huidige en CS-afwezige fasen. Vergelijking van de twee panelen laat zien dat het hoofdeffect van Phase meer algemene neushoornresponsen weerspiegelde wanneer de CS aanwezig was versus afwezig. Daarom kwamen cued-reacties significant vaker voor dan pre-mature reacties. De hoofdeffecten van groep en sessie werden niet gemakkelijk geïnterpreteerd vanwege de interactie van hogere orde. De drieweginteractie weerspiegelde een convergentie van scores voor de vijf groepen op een relatief stabiel laag niveau tussen sessies wanneer de CS afwezig was [Panel (B)], samen met een divergentie van scores wanneer de CS aanwezig was in relatief discrete profielen voor elke groep die parallel liep aan hun rangorde van beloningsfrequentie: van hoogste (groep 100) tot laagste (groep 25) [Paneel (A)]. Alleen de lineaire trend voor de interactie was significant, F(4, 34) = 4.03, p = 0.009, als gevolg van de over het algemeen consistente toename van neuspokes tijdens sessies in groep 100 toen de CS aanwezig was, in tegenstelling tot het relatief inconsistente profiel van toename van neuspokken over sessies in de andere groepen tijdens deze fase.
Gewenning aan locomotorboxen
Een 5-groep × 3 sessie-ANOVA leverde een belangrijk effect op sessie, F(2, 70) = 23.07, p <0.0001, en geen andere significante effecten, F(8, 70) <1.47, p > 0.18. Een kromlijnig patroon van gemiddelde (SE) locomotorische scores kwam naar voren van sessie 1, 1076 (74), via sessie 2, 644 (48), tot sessie 3, 762 (59). Geplande vergelijkingen van groep 50 met groep 0 en met groep 100 tijdens de eerste en laatste gewenningssessies lieten significant minder straalbreuken zien in groep 50 (M = 911; SE = 109) versus groep 0 (M = 1103; SE = 176) op gewenningssessie 1, t(105) = 2.02, p <0.05, maar geen verschil tussen groep 50 en groep 100 (M = 1066; SE = 150), t(105) <1.20, p > 0.20, op deze sessie. Groep 50 verschilde niet significant van groep 0 of groep 100 op de laatste gewenningssessie, t(105) <0.93, p > 0.30. Daarom verschilden de gemiddelde medicijnvrije locomotorische respons in de belangrijkste groepen niet consistent voorafgaand aan het testen.
Test sessies
Zoutpannen. Een 5-groep × 2-sessie ANOVA van locomotorische responsen op de laatste gewenningssessie en de zouttestsessie heeft een significant hoofdeffect van sessie opgeleverd, F(1, 35) = 50.12, p <0.0001, en geen andere significante effecten, F(4, 35) <0.57, p > 0.68. Figuur Figure88 toont de groepsgemiddelde scores voor de twee sessies en geeft aan dat het sessie-effect een significante afname weerspiegelde van gewenningstest tot zouttest. Dus ontvangst van de injectie werkt (bijv. verwachting, stress) verbeterde het reactievermogen van het locomotief niet.
Effecten van 0.5 mg / kg AMPH.
Pre-injectie locomotie. Een 5-groep × 2-sessie ANOVA van voortbeweging vóór de injectie leverde een significant hoofdeffect op Sessie, F(1, 35) = 15.04, p <0.001, en geen andere significante effecten, F(4, 35) <1.19, p > 0.33. Geplande vergelijkingen vonden geen significant verschil tussen groep 50 en groep 0 of groep 100 op beide testsessies, t(70) <0.99, p > 0.30. Daarom waren verschillen in de basislijn in motoriek vóór injectie niet verantwoordelijk voor groepsverschillen in locomotorische respons op 0.5 mg / kg AMPH. Gemiddelde (SE) straalonderbrekingen voor de pre-injectiefase voor de eerste en tweede (post-sensibilisatie) 0.5 mg / kg sessies waren 325 (25) en 473 (36).
Een locomotie na de injectie. Een 5-groep × 2-sessie ANOVA van de locomotorische respons op 0.5 mg / kg doses die vóór en na chronische 1 mg / kg AMPH werden toegediend, leverde een hoofdeffect op Sessie, F(1, 34) = 87.44, p <0.0001, en geen andere significante effecten, F(4, 34) <0.94, p > 0.45. Figuur Figure99 berekent de gemiddelde voortbewegingsscores voor elke groep en sessie en toont aan dat het sessie-effect een verhoogde totale respons op de tweede 0.5 mg / kg dosis weerspiegelde, consistent met sensibilisatie. De figuur laat ook zien dat de groepen zeer vergelijkbaar presteerden op sessie 1, maar die groep 50 vertoonde meer locomotorische activiteit dan de andere groepen in sessie 2. Geplande vergelijkingen in reactie op de eerste dosis 0.5 mg / kg brachten geen significante verschillen aan het licht tussen groep 50 en groep 0 of groep 100, t(35) <1.28, p > 0.20. Groep 50 vertoonde echter een significant grotere locomotorische respons op de tweede dosis van 0.5 mg / kg dan groep 0, t(35) = 4.32, p <0.001, of groep 100, t(35) = 2.24, p <0.05.
Effecten van 1 mg / kg AMPH.
Pre-injectie locomotie. Een 5-groep × 5-sessie ANOVA van 30-min pre-injectie scores voor de sensibiliseringssessies leverde een hoofdeffect op Sessie, F(4, 140) = 4.10, p = 0.004, en geen andere significante effecten, F(4, 35) = 1.25, p > 0.31. Geplande vergelijkingen toonden aan dat straalonderbrekingen tijdens de pre-injectiefase (M; SE) significant lager waren in groep 50 (395; 62) dan in groep 100 (508; 62), t(175) = 2.58, p <0.01, maar niet groep 0, t(175) <1.83, p > 0.10, op 1 mg / kg AMPH-sessie 1. Tijdens de laatste 1 mg / kg AMPH-sessie bleek uit geplande vergelijkingen ook dat de motoriek vóór injectie in groep 50 (378; 60) significant lager was dan in groep 100 (650; 75). ), t(175) = 6.17, p <0.001, maar niet in groep 0, t(175) <1.84, p > 0.10. Omdat de richting van deze groepsverschillen (controlegroep = groep 50) tegengesteld was aan het hypothetische patroon, kunnen groepsverschillen in voortbeweging na injectie die overeenkomen met de hypothese niet worden toegeschreven aan verschillen in de basislijn vóór injectie. Gemiddelde (SE) totale straalonderbrekingen tijdens de pre-injectiefase voor sessie 1 tot en met 5 waren: 442 (34), 452 (32), 542 (40), 411 (26), 504 (37).
Een locomotie na de injectie. A 5 Groep × 5 Sessies ANOVA van reacties op de 1 mg / kg doses leverde een significant hoofdeffect op Sessie, F(4, 140) = 6.15, p <0.001, en geen andere significante effecten, F(4, 35) <0.57, p > 0.68. Polynoom-trendanalyses lieten een significante lineaire trend zien, F(1, 35) = 9.34, p = 0.004 en kubieke trend, F(1, 35) = 5.08, p = 0.031, het laatste resultaat dat de relatieve maxima voor sessies 3 en 5 aangeeft. Figuur Figure1010 geeft deze scores weer en toont aan dat, ondanks het gebrek aan significante interactie in de ANOVA, groep 50 een aanzienlijk grotere voortbeweging vertoonde dan de andere vier groepen als reactie op de uiteindelijke 1 mg / kg dosis. Dienovereenkomstig toonden geplande vergelijkingen aanzienlijk grotere gemiddelde scores op sessie 5 in groep 50 dan in alle andere groepen, t(35) > 3.68 XNUMX, p <0.001.
Beheersing van variatie in neusklokken die reageren tijdens sucrose-training
Twee 5-groep × 2-sessie ANCOVA's van de locomotorische respons op 0.5 mg / kg AMPH voor en na het sensibiliseringsregime, inclusief totale neuspokes tijdens de sucrosetraining met CS aanwezig en met CS afwezig als afzonderlijke covariaten, vonden geen significante effecten voor beide covariaten, F(1, 32) <0.44 p > 0.51. Twee ANCOVA's van 5 groep × 5 sessie van locomotorische respons op 1 mg / kg AMPH tijdens de sensibiliseringssessies met totale neuspokes (CS aanwezig, CS afwezig) als afzonderlijke covariabelen leverden geen significante effecten van de covariabele op terwijl de CS aanwezig of afwezig was, F(1, 33) <0.14, p > 0.71. Daarom hield de respons op drugsvrije aanpak geen rekening met groepsverschillen in locomotorische responsen op beide doses AMPH.
Discussie
Overgevoeligheid ontwikkeld voor de effecten van herhaalde 1.0 mg / kg amfetamine. De gegevens over gewenning en zoutoplossing bevestigen dat dit effect niet het gevolg was van reeds bestaande verschillen, verwachting of stressgerelateerde reacties op de injectie. De ANCOVA's met neusprikken bevestigen dat deze effecten niet te wijten waren aan drugsvrij naderingsgedrag. De neus-poriegegevens gaven zelf aan dat de groepen de associatie tussen de CS en het vooruitzicht op sucrose-beloning verwierven. Het rangniveau van de neusholte van de groepen die aan het einde van de training reageerden, kwam overeen met de algehele frequentie van de beloning volgens de verschillende schema's, van het hoogste (groep 100) tot het laagste (groep 0), zoals in experiment 2. Het relatief lagere algemene gemiddelde neus-porieniveaus in dit experiment in vergelijking met experimenten 1 en 2 kunnen een meer selectieve benadering weerspiegelen die reageert op signalen voor beloning bij Lewis-ratten (Kosten et al., 2007).
De 0.5 mg / kg dosisgegevens toonden aan dat de initiële locomotorische respons op AMPH bij Lewis-ratten (Figuur (Figure9) 9) was enigszins onderdrukt vergeleken met Sprague Dawley-ratten (experiment 2; Figuur Figure5), 5), maar de toename in respons binnen de groep ten opzichte van de tweede dosis bij Lewis-ratten was aanzienlijk (bijna het dubbele van de respons op de eerste 0.5 mg / kg dosis) na het 5-sessie AMPH-regime. Meer in het bijzonder vertoonde groep 50 een grotere locomotorische respons. dan alle groepen behalve groep 25 tot de tweede (dwz post-sensibilisatie) 0.5 mg / kg AMPH-dosis en een grotere locomotorische reactie dan alle andere groepen, inclusief groep 25, tot de uiteindelijke 1 mg / kg AMPH-dosis (laatste sensibiliseringssessie) .
Samenvattende analyse van groepsrangschikking tussen verschillende experimenten
Om de betrouwbaarheid van groepsverschillen in sensitisatie te bepalen, beoordeelde een niet-parametrische analyse de contingentie tussen de groep en de rangorde van de gemiddelde locomotorische respons op de tweede (post-chronische AMPH) 0.5 mg / kg dosis en de uiteindelijke 1.0 mg / kg dosis AMPH van de 3-experimenten. De analyse leverde een significant effect op, ![[var phi]](http://www.ncbi.nlm.nih.gov/corehtml/pmc/pmcents/x03C6.gif){kind=small}
= 0.986, p = 0.025, als weerspiegeling van het feit dat groep 50 op de eerste plaats kwam in alle vergelijkingen op één na. De superieure rangorde van groep 50 in vergelijking met alle andere groepen als reactie op de tweede (post-chronische AMPH) 0.5 mg / kg dosis is weergegeven in figuur Figure55 (experimenteer 2) en figuur Figure99 (experimenteer 3). De superieure rangorde van groep 50 ten opzichte van andere groepen als reactie op de uiteindelijke dosis 1.0 mg / kg is weergegeven in figuur Figure22 (experimenteer 1) en figuur Figure1010 (experimenteer 3). De enige uitzondering op dit patroon was de respons op de uiteindelijke dosis 1.0 mg / kg in Sprague-Dawley-ratten in experiment 2.
Algemene discussie
De huidige reeks experimenten testte de hypothese dat chronische blootstelling aan een gokachtig beloningsschema de DA-paden van de hersenen gevoelig kan maken, net als chronische blootstelling aan misbruikt drugs. Bewijs voor een dergelijk effect zou erop kunnen wijzen dat neuroplasticiteit, van dezelfde soort die wordt geacht bij te dragen aan drugsverslaving, kan worden veroorzaakt door chronische blootstelling aan onvoorspelbare beloningsschema's. In overeenstemming met de literatuur over drugsverslaving, reageerde de locomotorische respons op 0.5 en 1.0 mg / kg doses AMPH geïndexeerde DA-systeemreactiviteit, met een grotere motoriek als reactie op latere doses die operationeel sensibilisatie definieerden (zie Robinson en Berridge, 1993; Pierce en Kalivas, 1997; Vanderschuren en Kalivas, 2000).
Over het algemeen liggen de resultaten in lijn met onze hypothese. Ze wijzen echter ook op aanzienlijke variabiliteit in experimentele effecten als gevolg van procedurele factoren. De effecten van het conditioneringsschema waren bescheiden maar consistent, waarbij groep 50 een grotere respons vertoonde dan de andere vier groepen op beide doses na het doseringsschema van vijf. Hoewel het over het algemeen F-waarden voor groepsgerelateerde effecten in de variantieanalyses waren vaak niet-significant, de belangrijkste groepsverschillen werden bevestigd met paarsgewijze geplande vergelijkingen. In dit verband moet worden opgemerkt dat "het huidige denken echter die algemene betekenis is [voor F in de ANOVA] is niet nodig. Allereerst zijn de hypothesen die worden getest door de algehele test en een multiple-vergelijkingstest behoorlijk verschillend, met behoorlijk verschillende niveaus van kracht. Bijvoorbeeld de overall F verdeelt in feite de verschillen tussen groepen over het aantal vrijheidsgraden voor groepen. Dit heeft het effect dat het totaal wordt verdund F in de situatie waarin verschillende groepsgemiddelden gelijk zijn aan elkaar maar verschillend van een ander gemiddelde "(Howell, 1992, p. 338). Dit is precies de situatie die werd toegepast in de huidige experimenten, waarbij van groep 50 werd verwacht dat deze verschilt van groep 0- en groep 100-besturingselementen, maar er werd geen verschil tussen deze controlegroepen voorspeld voor groep 25 of groep 75.
De nose-porgegevens bevestigden dat de dieren in elk experiment de associatie tussen de CS en het vooruitzicht op sucrose-beloning hebben verworven. De overeenkomst tussen de neuspoke-frequentie voor de verschillende groepen en de algehele frequentie van beloning onder hun respectieve trainingsschema's duidt erop dat de gemiddelde snelheid van door sucrose-beloning begeleide, medicamenteuze aanpak reageert. Het gebrek aan bemiddelende effecten van neuspokken op groepsgerelateerde locomotorische responsen op AMPH in de ANCOVA's wees echter uit dat afzonderlijke processen ten grondslag liggen aan de twee gedragingen.
In sommige gevallen was het effect van conditioneringsschema duidelijk in reactie op de eerste AMPH-dosis; in andere gevallen kwam het pas tevoorschijn na herhaalde doses. Groepsverschillen in reactie van het bewegingsapparaat op de eerste dosis AMPH suggereren dat blootstelling aan gokachtige beloningsschema's op zichzelf voldoende is om sensibilisatie te veroorzaken. Groepsverschillen in voortbeweging na meerdere AMPH-doses duiden op een subtieler effect dat zou kunnen worden gekarakteriseerd als "gevoeligheid", dat zich alleen manifesteert wanneer het wordt gecombineerd met voortdurende blootstelling aan het primaire sensibiliserende agens (dwz amfetamine).
Verschillen in het patroon van respons tussen experimenten suggereren dat een langer interval tussen training en initiële AMPH-uitdaging de kans kan maximaliseren om het inherente sensibiliserende effect van de conditioneringsbehandeling te detecteren. Dit op zijn beurt suggereert dat effecten van geconditioneerde beloningsblootstelling in de loop van de tijd kunnen incuberen, een fenomeen dat ook wordt gezien met stimulerende sensitisatie (Grimm et al., 2006). Het patroon van de reactie op de twee doses amfetamine suggereert dat de 0.5 mg / kg dosis effectiever kan zijn in het onthullen van de effecten van conditioneringsgeschiedenis. Dit suggereert op zijn beurt dat conditioneringseffecten onder het huidige trainingsprotocol enigszins subtiel zijn en gecamoufleerd kunnen worden door plafondeffecten onder AMPH-doses en condities die genereren de novo sensibilisering.
In experiment 3 is het bifasische patroon van respons op de doses 0.5 mg / kg en de progressieve superioriteitsopkomst in groep 50 consistent met het verwachte profiel voor Lewis-ratten als reactie op methamfetamine (Camp et al., 1994). Dit geeft steun aan de validiteit van de huidige bevindingen en suggereert een overlap tussen de factoren die de kwetsbaarheid voor psychostimulans sensibilisatie matigen en voor gokachtige beloningsschema's.
Bij alle experimenten overschreed de post-sensitisatie-locomotorische reactie van groep 50 in het algemeen die van de andere groepen onder verschillende doses amfetamine en in verschillende stammen van dieren. De grote variabiliteit binnen de groep en de bescheiden effectgroottes tussen de groepen duiden echter op een rol voor andere factoren in de reactiviteit van het DA-systeem op amfetamine na blootstelling aan verschillende schema's van geconditioneerde sucrosebeloning. Hoewel reacties van DA-neuronen op beloningssignalen een grof gokmodel kunnen zijn (Fiorillo et al., 2003), net als bij alle modellen, is er een verlies van informatie omwille van spaarzaamheid, dwz om een sleutelproces te demonstreren. Dientengevolge is het patroon van effecten in CS-US-omstandigheden in de originele Fiorillo et al. studie generaliseert niet volledig naar de reactie van het locomotorisme op amfetamine. Verdere verfijningen van het model zijn nodig om de aspecten van gokken die van invloed zijn op de werking van het DA-systeem volledig vast te leggen.
Alles bij elkaar bieden de resultaten van deze reeks experimenten voorlopige ondersteuning voor de hypothese dat chronische blootstelling aan gokachtige beloningsschema's de reactiviteit van het hersenstelsel tot psychostimulantuitdaging verhoogt. Als zodanig breiden ze de bevindingen van Singer et al. Uit. (2012) die aantoonden dat, in vergelijking met een vast schema, eerdere blootstelling aan een variabel versterkingsschema in een operant paradigma de daaropvolgende reactie van het bewegingsapparaat op amfetamine versterkt. Meer specifiek wijzen de huidige bevindingen op onzekerheid over de beloning als de kritische factor die ten grondslag ligt aan de effecten van variabele beloning. De grootte van de effecten in het operante paradigma was aanzienlijk groter dan de effecten gevonden in de onderhavige experimenten. Dit kan wijzen op een grotere chronische blootstelling aan de gokachtige activiteit (55 vs. 15-dagen); het kan een weerspiegeling zijn van de effecten van het vereisen van een operante respons om de beloning (dwz een rol voor keuzevrijheid) uit te lokken in plaats van passieve blootstelling, zoals in de huidige studie. Het verlengen van de duur van de training in het huidige paradigma zou helpen om deze vragen op te lossen.
De geldigheid van variabele belonings- en versterkingsschema's als gokmodel kan niet worden afgeleid uit deze experimenten. Toekomstig onderzoek dat de impact van conditioneringsgeschiedenis op risicovol gedrag bij knaagdierenkansopdrachten onderzoekt, kan dit probleem aanpakken. Evenzo moet de overeenkomst tussen de gedragssensibilisatie die hier wordt gevonden en de verhoogde striatale DA-respons op amfetamine die recent is aangetroffen bij pathologische gokkers, wachten op verder onderzoek (Boileau et al., 2013). Micro-dialyse zou deze vraag kunnen beantwoorden, en de voorspelling op basis van de menselijke gegevens zou zijn dat een grotere DA-afgifte in de groep 50 "gokfenotype" het duidelijkst zou worden waargenomen in het dorsale (sensorimotorische) striatum in plaats van het ventrale (limbische) striatum. . Validatie van 50% variabele CS + beloningsblootstelling in deze andere paradigma's zou het nut ervan als een bonafide experimenteel model van PG ondersteunen.
Terwijl sommige vormen van gokken duidelijk een instrumentele reactie met zich meebrengen (bv. Gokautomaten), is bij andere vormen van gokken (bv. Loterij) het verband tussen de actie (het kaartje kopen, dwz het plaatsen van de weddenschap), de signalen voor beloning (bv. , lotnummers) en de beloning zelf (het winnende nummer en de geldelijke uitbetaling) is veel diffuser. Niettemin kan activering van DA tijdens het CS-US-interval optreden. Dit zou kunnen verklaren waarom, wanneer het "winnende nummer" wordt aangekondigd, de aandacht wordt getrokken wanneer elke individuele loterijbal achter elkaar valt om de specifieke reeks cijfers in het winnende nummer samen te stellen. Hoewel de kans dat een specifiek cijfer voorkomt wiskundig is gedefinieerd, is de uitkomst voor elke individuele loterijbal binair - hit (komt overeen met het nummer van de speler) of gemist (komt niet overeen met het nummer van de speler) - en de uitkomst van een bepaalde proef is onbekend. Een dergelijk scenario kan de ervaring van groep 50 in de huidige experimenten beter karakteriseren, waar beloning niet-contingent maar ook onvoorspelbaar werd gegeven en de CS alleen het potentieel voor beloning aangaf zonder te onthullen of het zou plaatsvinden bij een bepaalde proef. Gokautomaten zijn sterker verbonden met PG dan loten (Cox et al., 2000; Bakken et al., 2009), wat een belangrijke rol aangeeft voor instrumentele factoren (en directheid) in de belonende aspecten van gokken voor deze populatie (Loba et al., 2001). Niettemin lijkt het Pavloviaanse proces gemodelleerd in de huidige experimenten (CS + onzekere beloning) een noodzakelijk, zo niet voldoende element van de gokervaring.
Naast het ontbreken van een duidelijke instrumentele eis, hebben een aantal andere ontwerpkenmerken mogelijk bijgedragen aan het relatief bescheiden en variabele patroon van experimentele effecten. De groepen verschilden in de algehele blootstelling aan sucrose, evenals de eventualiteit tussen CS en sucrosebeloning. Hoewel dit mogelijk heeft bijgedragen aan de variabiliteit tussen groepen, kan het niet gemakkelijk verklaren waarom dieren met de grootste sucrose-blootstelling (groep 100) minder overgevoeligheid vertoonden dan groep 50. Daarnaast ontving groep 0 geen stimulans voor blootstelling aan sucrose bij elke test. Hoewel dit een cue-geïnduceerde verwachting van beloning uitsloot, had het geen controle over de aanwezigheid van een stimulus vóór de beloning, die in alle andere groepen bestond. Om dit probleem aan te pakken, moet toekomstig onderzoek een aandoening omvatten waarbij dieren beloning ontvangen bij elke test na willekeurige blootstelling aan een neutrale stimulus (dat wil zeggen, van wie de aanwezigheid niet wijst op het potentieel voor een beloning).
Een andere ontwerpbeperking is de mogelijke opkomst van bijkomend gedrag dat de effecten van het trainingsschema zou kunnen beïnvloeden. In het licht van onzekerheid kunnen dieren bijgelovig gedrag ontwikkelen dat ontworpen is om waargenomen controle te verbeteren en onzekerheid-geïnduceerde DA-activering te verminderen (zie Harris et al., 2013). Het is daarom mogelijk dat ongecontroleerde aspecten van het experimentele ontwerp de dieren in staat stelden de effecten van het conditioneringsschema te compenseren. Een dergelijk effect zou kunnen bijdragen aan de relatief bescheiden en variabele respons op amfetamine in groep 50 na CS + sucrose-training. Toekomstig onderzoek moet spontaan gedrag registreren, afgezien van neusdoppen, tijdens trainingssessies om deze mogelijkheid te testen en statistisch te controleren indien dit zich zou voordoen. Omdat verwacht wordt dat dergelijk gedrag de effecten van schema-geïnduceerde onzekerheid zal tegenwerken of temperen, moet de motorische respons op amfetamine in groep 50 worden verbeterd wanneer het wordt gecontroleerd (procedureel of statistisch). Daarom biedt het huidige (ongecontroleerde) ontwerp een conservatieve test van de effecten van 50% CS + -beloning op sensitisatie van amfetamine.
In termen van externe validiteit, beperkt het gebruik van mannelijke ratten ook de generaliseerbaarheid van de resultaten. Het ontbreken van een duidelijke "straf" -voorwaarde verschilt ook van gokken, waar grote geldverliezen algemeen zijn en belangrijke motivationele effecten hebben (Nieuwenhuis et al., 2005; Singh en Khan, 2012). Het vermogen om beloningen te verzamelen is ook afwezig in het huidige paradigma en er is gevonden dat cumulatieve winsten in een gokautomaatgame interactie hebben met DA-manipulaties bij mensen (Tremblay et al., 2011; Smart et al., 2013). Evenzo is de kans op een jackpot een belangrijk verschil tussen het huidige model en het werkelijke gokken.
Ondanks deze beperkingen suggereren de huidige resultaten dat 50% variabele CS + beloning DA-routes kan activeren die betrokken zijn bij de versterkende effecten van gokken (Fiorillo et al., 2003; anselme, 2013). Kruissensibilisatie van de respons op AMPH na dit gokachtige schema komt overeen met een cruciale rol voor DA bij gok- en psychostimulerende geneesmiddelen (Zack en Poulos, 2009), en breidt eerdere studies uit over cross-priming van motivatie om te gokken door AMPH in pathologische gokkers (Zack en Poulos, 2004). De huidige resultaten suggereren ook indirect dat bescheiden doses AMPH, die geen supra-fysiologische DA-afgifte veroorzaken, de hersenactiviteit beter kunnen modelleren in reactie op intermitterende beloningssignalen (dwz tijdens gokken) dan blootstelling aan hoge (dwz eetbuien) doses stimulerende geneesmiddelen (vgl. Vanderschuren en Pierce, 2010). Directe ondersteuning voor deze correspondentie zou kunnen worden afgeleid door DA-afgifte te beoordelen in reactie op het 50% variabele CS-US schema en verschillende doses AMPH met behulp van microdialyse.
Vanuit een experimenteel standpunt lijken het huidige Pavloviaanse model en het eerdere operante model van variabele versterking beide een fenotype op te wekken dat lijkt op de menselijke pathologische gokker. Als zodanig bieden ze een waardevolle aanvulling op knaagdieren-goktaken die het gokgedrag modelleren (als een afhankelijke maatregel) maar die tot nu toe alleen gezonde dieren hebben gebruikt, het equivalent van menselijke sociale gokkers. Op basis van de literatuur kunnen de dieren die chronisch aan variabele beloning worden blootgesteld, in deze taken verschillen, met name als reactie op DA-ergische geneesmiddelen. Het combineren van het gokfenotype met goktaken kan een systematische ontwikkeling van medicijnen voor de behandeling van PG mogelijk maken, wat mogelijk niet volledig wordt bereikt met alleen gezonde dieren. Verdere verfijningen in het experimentele ontwerp en trainingsregime, zoals hierboven beschreven, zouden de overeenkomst tussen dieren die in dit paradigma zijn getraind en daadwerkelijke pathologische gokkers moeten verbeteren.
Vanuit het klinisch-sociologische standpunt, de bevinding dat blootstelling aan 50% variabele CS + beloning, die nauw overeenkomt met het beloningsschema op een commerciële gokautomaat (Tremblay et al., 2011), verandert het hersen-DA-systeem op betrouwbare en duurzame manieren, suggereert dat, in sommige gevallen, gokactiviteiten, zoals drugsmisbruik, een "pathogeen" kunnen zijn dat verslavingsproblemen kan veroorzaken. De bescheiden effectgrootte en hoge variabiliteit in reactie op 50% CS + -beloning suggereren echter dat, net als drugsmisbruik, de neiging tot gokachtige beloningsschema's om verslaving te bevorderen sterk zal afhangen van het reeds bestaande risicoprofiel van de gokker. Om individuen met een hoog risico bloot te stellen aan mogelijke ongunstige gokgerelateerde effecten lijkt het echter redelijk dat beleid dat wordt toegepast om gebruik te ontmoedigen en schade door misbruik door drugs te minimaliseren, ook kan worden uitgebreid tot kansspelen.
Belangenconflict verklaring
De auteurs verklaren dat het onderzoek is uitgevoerd in afwezigheid van commerciële of financiële relaties die kunnen worden beschouwd als een potentieel belangenconflict.
Dankwoord
Dit onderzoek werd gefinancierd door subsidies van de Natural Sciences and Engineering Research Council van Canada aan Paul J. Fletcher. Wij danken Mevr. Djurdja Djordjevic hartelijk voor het voorbereiden van de cijfers.
Referenties
- Anselme P. (2013). Dopamine, motivatie en de evolutionaire betekenis van gokachtig gedrag. Behav. Brain Res. 256, 1-4 10.1016 / j.bbr.2013.07.039 [PubMed] [Kruis Ref]
- APA (2013). Diagnostisch en statistisch handboek voor psychische stoornissen, 5th Edn. Arlington, VA: American Psychiatric Publishing
- Bakken IJ, Gotestam KG, Grawe RW, Wenzel HG, Oren A. (2009). Kansgedrag en gokproblemen in Noorwegen 2007. Scand. J. Psychol. 50, 333-339 10.1111 / j.1467-9450.2009.00713.x [PubMed] [Kruis Ref]
- Boileau I., Payer D., Chugani B., Lobo DS, Houle S., Wilson AA, et al. (2013). In vivo bewijs voor grotere amfetamine-geïnduceerde dopamine-afgifte bij pathologisch gokken: een positronemissietomografiestudie met [C] - (+) - PHNO. Mol. Psychiatry [Epub ahead of print]. 10.1038 / mp.2013.163 [PubMed] [Kruis Ref]
- Bolles RC (1972). Versterking, verwachting en leren. Psychol. Rev. 79, 394-409 10.1037 / h0033120 [Kruis Ref]
- Camp DM, Browman KE, Robinson TE (1994). De effecten van methamphetamine en cocaïne op motorisch gedrag en extracellulair dopamine in het ventrale striatum van Lewis- versus Fischer 344-ratten. Brain Res. 668, 180-193 10.1016 / 0006-8993 (94) 90523-1 [PubMed] [Kruis Ref]
- Conversano C., Marazziti D., Carmassi C., Baldini S., Barnabei G., Dell'Osso L. (2012). Pathologisch gokken: een systematische review van biochemische, neuroimaging- en neuropsychologische bevindingen. Harv. Rev. Psychiatry 20, 130–148 10.3109 / 10673229.2012.694318 [PubMed] [Kruis Ref]
- Cox BJ, Kwong J., Michaud V., Enns MW (2000). Probleem en waarschijnlijk pathologisch gokken: overwegingen uit een enquête onder de bevolking. Kan. J. Psychiatry 45, 548-553 [PubMed]
- Dalley JW, Theobald DE, Eagle DM, Passetti F., Robbins TW (2002). Tekorten in impulscontrole in verband met tonisch verhoogde serotonergische functie in de prefrontale cortex van de rat. Neuropsychofarmacologie 26, 716-728 10.1016 / S0893-133X (01) 00412-2 [PubMed] [Kruis Ref]
- Everitt BJ, Robbins TW (2005). Neurale versterkingssysteem voor drugsverslaving: van acties tot gewoonten tot dwang. Nat. Neurosci. 8, 1481-1489 10.1038 / nn1579 [PubMed] [Kruis Ref]
- Fiorillo CD, Tobler PN, Schultz W. (2003). Discrete codering van beloningskans en onzekerheid door dopamineneuronen. Wetenschap 299, 1898-1902 10.1126 / science.1077349 [PubMed] [Kruis Ref]
- Flagel SB, Watson SJ, Akil H., Robinson TE (2008). Individuele verschillen in het toekennen van incentive salience aan een aan een beloning gerelateerd signaal: invloed op de sensibilisatie van cocaïne. Behav. Brain Res. 186, 48-56 10.1016 / j.bbr.2007.07.022 [PMC gratis artikel] [PubMed] [Kruis Ref]
- Fletcher PJ, Tenn CC, Rizos Z., Lovic V., Kapur S. (2005). Sensibilisatie voor amfetamine, maar niet voor PCP, verslechtert aandachtssetverplaatsing: omkering door een D1-receptoragonist geïnjecteerd in de mediale prefrontale cortex. Psychopharmacology (Berl.) 183, 190-200 10.1007 / s00213-005-0157-6 [PubMed] [Kruis Ref]
- Flores G., Wood GK, Barbeau D., Quirion R., Srivastava LK (1998). Lewis- en Fischer-ratten: een vergelijking van niveaus van dopaminetransporter en -receptoren. Brain Res. 814, 34-40 10.1016 / S0006-8993 (98) 01011-7 [PubMed] [Kruis Ref]
- Frascella J., Potenza MN, Brown LL, Childress AR (2010). Gedeelde breinkwetsbaarheid opent de weg voor niet-substantiële verslavingen: carvingverslaving bij een nieuwe joint? Ann. NY Acad. Sci. 1187, 294-315 10.1111 / j.1749-6632.2009.05420.x [PMC gratis artikel] [PubMed] [Kruis Ref]
- Grimm JW, Buse C., Manaois M., Osincup D., Fyall A., Wells B. (2006). Tijdafhankelijke dissociatie van cocaïne dosis-respons effecten op sucrose hunkering en motoriek. Behav. Pharmacol. 17, 143-149 10.1097 / 01.fbp.0000190686.23103.f8 [PMC gratis artikel] [PubMed] [Kruis Ref]
- Haile CN, Hiroi N., Nestler EJ, Kosten TA (2001). Differentiële gedragsreacties op cocaïne zijn geassocieerd met de dynamiek van mesolimbische dopamine-eiwitten in Lewis- en Fischer 344-ratten. Synapse 41, 179-190 10.1002 / syn.1073 [PubMed] [Kruis Ref]
- Harris JA, Andrew BJ, Kwok DW (2013). De benadering van tijdschriften tijdens een signaal voor voedsel hangt af van Pavlovian, niet van instrumentale, conditionering. J. Exp. Psychol. Anim. Behav. Werkwijze. 39, 107-116 10.1037 / a0031315 [PubMed] [Kruis Ref]
- Howell DC (1992). Statistische methoden voor psychologie. Boston, MA: Duxbury
- Ito R., Dalley JW, Robbins TW, Everitt BJ (2002). Dopamine-afgifte in het dorsale striatum tijdens het zoeken naar cocaïne onder de controle van een aan drugs gerelateerd signaal. J. Neurosci. 22, 6247-6253 [PubMed]
- Jiao X., Pare WP, Tejani-Butt S. (2003). Stamverschillen in de verdeling van plaatsen voor dopaminetransporters in de hersenen van ratten. Prog. Neuropsychopharmacol. Biol. Psychiatry 27, 913-919 10.1016 / S0278-5846 (03) 00150-7 [PubMed] [Kruis Ref]
- Koob GF, Le Moal M. (2008). Beoordeling. Neurobiologische mechanismen voor motivatieprocessen van de tegenstander bij verslaving. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B Biol. Sci. 363, 3113-3123 10.1098 / rstb.2008.0094 [PMC gratis artikel] [PubMed] [Kruis Ref]
- Kosten TA, Miserendino MJ, Chi S., Nestler EJ (1994). Fischer- en Lewis-rattenstammen vertonen verschillende cocaïne-effecten bij geconditioneerde plaatsvoorkeur en gedragssensibilisatie, maar niet bij locomotorische activiteit of geconditioneerde smaakaversie. J. Pharmacol. Exp. Ther. 269, 137-144 [PubMed]
- Kosten TA, Zhang XY, Haile CN (2007). Stamverschillen in instandhouding van cocaïne zelftoediening en hun relatie tot nieuwheidsactiviteitsreacties. Behav. Neurosci. 121, 380-388 10.1037 / 0735-7044.121.2.380 [PubMed] [Kruis Ref]
- Leeman RF, Potenza MN (2012). Overeenkomsten en verschillen tussen pathologisch gokken en drugsgebruikstoornissen: een focus op impulsiviteit en compulsiviteit. Psychopharmacology (Berl.) 219, 469-490 10.1007 / s00213-011-2550-7 [PMC gratis artikel] [PubMed] [Kruis Ref]
- Leshner AI (1997). Verslaving is een hersenziekte en het is belangrijk. Wetenschap 278, 45-47 10.1126 / science.278.5335.45 [PubMed] [Kruis Ref]
- Loba P., Stewart SH, Klein RM, Blackburn JR (2001). Manipulaties van de kenmerken van standaard video-loterij-terminal (VLT) -games: effecten bij pathologische en niet-pathologische gokkers. J. Gambl. Stud. 17, 297-320 10.1023 / A: 1013639729908 [PubMed] [Kruis Ref]
- Martinez D., Narendran R., Foltin RW, Slifstein M., Hwang DR, Broft A., et al. (2007). Amfetamine-geïnduceerde dopamine-afgifte: duidelijk afgezwakt in cocaïneverslaving en voorspellend voor de keuze voor zelf-toediening van cocaïne. Am. J. Psychiatry 164, 622-629 10.1176 / appi.ajp.164.4.622 [PubMed] [Kruis Ref]
- Mateo Y., Lack CM, Morgan D., Roberts DC, Jones SR (2005). Verminderde dopamineklemfunctie en ongevoeligheid voor cocaïne na zelftoediening en deprivatie van cocaïne. Neuropsychopharmacology 30, 1455-1463 10.1038 / sj.npp.1300687 [PubMed] [Kruis Ref]
- Nestler EJ (2001). Moleculaire basis van langetermijnplasticiteit ten grondslag aan verslaving. Nat. Rev Neurosci. 2, 119-128 10.1038 / 35053570 [PubMed] [Kruis Ref]
- Nieuwenhuis S., Heslenfeld DJ, von Geusau NJ, Mars RB, Holroyd CB, Yeung N. (2005). Activiteit in humane beloningsgevoelige hersengebieden is sterk contextafhankelijk. Neuroimage 25, 1302-1309 10.1016 / j.neuroimage.2004.12.043 [PubMed] [Kruis Ref]
- Pierce RC, Kalivas PW (1997). Een schakelmodel voor de expressie van gedragssensibilisatie voor amfetamine-achtige psychostimulanten. Brain Res. Brain Res. Rev. 25, 192 10.1016 / S0165-0173 (97) 00021-0 [PubMed] [Kruis Ref]
- Robbins TW, Everitt BJ (1999). Drugsverslaving: slechte gewoonten kloppen. Nature 398, 567-570 10.1038 / 19208 [PubMed] [Kruis Ref]
- Robinson TE, Becker JB, Presty SK (1982). Langdurige facilitering van amfetamine-geïnduceerd rotatiegedrag en striatale dopamineafgifte geproduceerd door een enkele blootstelling aan amfetamine: geslachtsverschillen. Brain Res. 253, 231-241 10.1016 / 0006-8993 (82) 90690-4 [PubMed] [Kruis Ref]
- Robinson TE, Berridge KC (1993). De neurale basis van het hunkeren naar drugs: een incentive-sensitisatie theorie van verslaving. Brain Res. Brain Res. Rev. 18, 247-291 10.1016 / 0165-0173 (93) 90013-P [PubMed] [Kruis Ref]
- Robinson TE, Berridge KC (2001). Incentive-sensitisatie en verslaving. Verslaving 96, 103-114 10.1046 / j.1360-0443.2001.9611038.x [PubMed] [Kruis Ref]
- Zanger BF, Scott-Railton J., Vezina P. (2012). Onvoorspelbare saccharine-versterking verbetert het motorische reactievermogen op amfetamine. Behav. Brain Res. 226, 340-344 10.1016 / j.bbr.2011.09.003 [PMC gratis artikel] [PubMed] [Kruis Ref]
- Singh V., Khan A. (2012). Besluitvorming in de belonings- en strafvarianten van de goktaak van iowa: bewijs van "vooruitziende blik" of "kadering"? Voorkant. Neurosci. 6: 107 10.3389 / fnins.2012.00107 [PMC gratis artikel] [PubMed] [Kruis Ref]
- Skinner BF (1953). Wetenschap en menselijk gedrag. New York, NY: gratis pers
- Smart K., Desmond RC, Poulos CX, Zack M. (2013). Modafinil verhoogt de beloning in een gokautomaatspel bij pathologische gokkers met een lage en hoge impulsiviteit. Neuropharmacology 73, 66-74 10.1016 / j.neuropharm.2013.05.015 [PubMed] [Kruis Ref]
- Tremblay AM, Desmond RC, Poulos CX, Zack M. (2011). Haloperidol wijzigt de instrumentele aspecten van gokautomaten gokken bij pathologische gokkers en gezonde controles. Addict. Biol. 16, 467-484 10.1111 / j.1369-1600.2010.00208.x [PubMed] [Kruis Ref]
- Vanderschuren LJ, Kalivas PW (2000). Veranderingen in dopaminerge en glutamaterge transmissie bij de inductie en expressie van gedragssensibilisatie: een kritische beoordeling van preklinische studies. Psychopharmacology (Berl.) 151, 99-120 10.1007 / s002130000493 [PubMed] [Kruis Ref]
- Vanderschuren LJ, Pierce RC (2010). Overgevoeligheidsprocessen bij drugsverslaving. Curr. Top. Behav. Neurosci. 3, 179-195 10.1007 / 7854_2009_21 [PubMed] [Kruis Ref]
- Vanderschuren LJ, Schoffelmeer AN, Mulder AH, De Vries TJ (1999). Dopaminerge mechanismen die de langetermijnexpressie van locomotorische sensitisatie mediëren na blootstelling aan morfine of amfetamine. Psychopharmacology (Berl.) 143, 244-253 10.1007 / s002130050943 [PubMed] [Kruis Ref]
- Verdejo-Garcia A., Lawrence AJ, Clark L. (2008). Impulsiviteit als een kwetsbaarheidsteller voor stoornissen in verband met middelengebruik: beoordeling van bevindingen van hoog risicoonderzoek, probleemgokkers en genetische associatiestudies. Neurosci. Biobehav. Rev. 32, 777-810 10.1016 / j.neubiorev.2007.11.003 [PubMed] [Kruis Ref]
- Vezina P. (2004). Sensibilisatie van de dopamineneuronreactiviteit van de middenhersenen en de zelftoediening van psychomotorische stimulerende geneesmiddelen. Neurosci. Biobehav. Rev. 27, 827-839 10.1016 / j.neubiorev.2003.11.001 [PubMed] [Kruis Ref]
- Volkow ND, Wang GJ, Fowler JS, Logan J., Gatley SJ, Hitzemann R., et al. (1997). Verminderde striatale dopaminerge reactiviteit bij gedetoxificeerde, van cocaïne afhankelijke personen. Nature 386, 830-833 10.1038 / 386830a0 [PubMed] [Kruis Ref]
- Volkow ND, Wang GJ, Fowler JS, Tomasi D. (2012). Verslavingsschakelingen in het menselijk brein. Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 52, 321-336 10.1146 / annurev-pharmtox-010611-134625 [PMC gratis artikel] [PubMed] [Kruis Ref]
- Winer B., redacteur. (Red.). (1971). Statistische principes in experimenteel ontwerp. New York, NY: McGraw-Hill
- Zack M., Poulos CX (2004). Amfetamine stimuleert motivatie om te gokken en gokgerelateerde semantische netwerken bij probleemgokkers. Neuropsychopharmacology 29, 195-207 10.1038 / sj.npp.1300333 [PubMed] [Kruis Ref]
- Zack M., Poulos CX (2009). Parallelle rollen voor dopamine bij pathologisch gokken en psychostimulantverslaving. Curr. Drug Abuse Rev. 2, 11-25 10.2174 / 1874473710902010011 [PubMed] [Kruis Ref]
- Zamudio S., Fregoso T., Miranda A., De La Cruz F., Flores G. (2005). Stamverschillen van dopaminereceptorniveaus en dopamine-gerelateerd gedrag bij ratten. Brain Res. Bull. 65, 339-347 10.1016 / j.brainresbull.2005.01.009 [PubMed] [Kruis Ref]
;