Een ghreline-receptor (GHS-R1A) -antagonist verzwakt de belonende eigenschappen van morfine en verhoogt de opioïde peptideniveaus in beloningsgebieden bij muizen (2015)

Eur Neuropsychopharmacol. Oktober 2015 21. pii: S0924-977X (15) 00329-6. doi: 10.1016 / j.euroneuro.2015.10.004.

Engel JA1, Nylander I2, Jerlhag E3.

Abstract

Van darmhersenhormonen zoals ghreline is onlangs gesuggereerd dat ze een rol spelen bij beloningsregulering. Van Ghrelin was van oudsher bekend dat het de voedselinname en lichaamsgewicht homo-ostasis reguleert. Recent werk heeft bovendien gewezen op het feit dat dit peptide een nieuwe rol speelt in door geneesmiddelen geïnduceerde beloning, waaronder door morfine geïnduceerde toename van de extracellulaire niveaus van accumulerend dopamine in ratten. Hierin werd het effect van de ghreline receptor (GHS-R1A) antagonist, JMV2959, op door morfine geïnduceerde activering van het mesolimbische dopamine-systeem in muizen onderzocht. Daarnaast werden de effecten van toediening van JMV2959 op opioïde peptideniveaus in beloningsgerelateerde gebieden onderzocht. In de huidige reeks experimenten hebben we aangetoond dat perifere toediening van JMV2959, in een dosis zonder effect op zich, het vermogen van morfine om locomotorische stimulatie te veroorzaken verzwakt, de extracellulaire niveaus van accumulerend dopamine verhoogt en een plaatsvoorkeur bij muizen conditioneert. JMV2959-toediening verhoogde significant de weefselniveaus van Met-enkefaline-Arg6Phe7 in het ventrale tegmentale gebied, dynorphin B in de hippocampus en Leu-enkephalin-Arg6 in striatum. We veronderstellen daarom dat JMV2959 door morfine geïnduceerde beloning voorkomt door stimulatie van delta-receptor-actieve peptiden in striatum- en ventrale tegmentale gebieden. Bovendien kunnen hippocampale peptiden die de kappa-receptor activeren betrokken zijn bij het vermogen van JMV2959 om de geheugenvorming van de beloning te reguleren. Gegeven dat de ontwikkeling van drugsverslaving, tenminste gedeeltelijk, afhangt van de effecten van verslavende geneesmiddelen op het mesolimbische dopaminesysteem, suggereren de huidige gegevens dat GHS-R1A-antagonisten het verdienen te worden opgehelderd als nieuwe behandelingsstrategieën van opioïde-verslaving.

 

 

 

 
   

Abstract

Van darmhersenhormonen zoals ghreline is onlangs gesuggereerd dat ze een rol spelen bij beloningsregulering. Van Ghrelin was van oudsher bekend dat het de voedselinname en lichaamsgewicht homo-ostasis reguleert. Recent werk heeft bovendien gewezen op het feit dat dit peptide een nieuwe rol speelt in door geneesmiddelen geïnduceerde beloning, waaronder door morfine geïnduceerde toename van de extracellulaire niveaus van accumulerend dopamine in ratten. Hierin werd het effect van de ghreline receptor (GHS-R1A) antagonist, JMV2959, op door morfine geïnduceerde activering van het mesolimbische dopamine-systeem in muizen onderzocht. Daarnaast werden de effecten van toediening van JMV2959 op opioïde peptideniveaus in beloningsgerelateerde gebieden onderzocht. In de huidige serie experimenten hebben we aangetoond dat perifere JMV2959-toediening in een dosis zonder effect is per se, verzwakt het vermogen van morfine om locomotorische stimulatie te veroorzaken, verhoogt de extracellulaire niveaus van accumulerend dopamine en conditioneert een plaatsvoorkeur bij muizen. JMV2959-toediening verhoogde significant de weefselniveaus van Met-enkefaline-Arg6Phe7 in het ventrale tegmentale gebied, dynorphin B in de hippocampus en Leu-enkephalin-Arg6 in striatum. We veronderstellen daarom dat JMV2959 door morfine geïnduceerde beloning voorkomt via stimulatie van delta-receptor-actieve peptiden in striatum- en ventrale tegmentale gebieden. Bovendien kunnen hippocampale peptiden die de kappa-receptor activeren betrokken zijn bij het vermogen van JMV2959 om de geheugenvorming van de beloning te reguleren. Gegeven dat de ontwikkeling van drugsverslaving, tenminste gedeeltelijk, afhangt van de effecten van verslavende geneesmiddelen op het mesolimbische dopaminesysteem, suggereren de huidige gegevens dat GHS-R1A-antagonisten het verdienen te worden opgehelderd als nieuwe behandelingsstrategieën van opioïde-verslaving.

 

 

 

 

1. Inleiding

Acute en chronische blootstelling aan verslavende geneesmiddelen heeft een grote invloed op het mesolimbische dopaminesysteem, een belangrijk sleutelcircuit van de beloningssystemen voor de hersenen (Nestler, 2005). Deze effecten zijn voorgesteld om, tenminste gedeeltelijk, ten grondslag te liggen aan de ontwikkeling van drugsverslaving (Wise, 2004). Drugsverslaving veroorzaakt een breed scala van schadelijke effecten voor zowel het individu als de samenleving en nieuwe farmacologische interventies, die dit grote probleem voor de volksgezondheid behandelen, zijn gerechtvaardigd (Koob en Le Moal, 2001). Door het verduidelijken van de signaleringssystemen die het vermogen van verslavende geneesmiddelen mediëren om het mesolimbische dopaminesysteem te activeren, kunnen unieke behandelingsstrategieën voor stoornissen in het gebruik van stoffen worden geïdentificeerd.

Onderzoek heeft aangetoond dat gemeenschappelijke neurobiologische mechanismen de inname van en beloning veroorzaakt door voedsel en verslavende middelen reguleren (Morganstern et al., 2011), waarbij wordt voorgesteld dat de voedselregulerende darmhersenpeptiden zoals ghreline beloningsbemiddeling omvatten. Aanvankelijk werd aangetoond dat ghreline afgifte van groeihormoon veroorzaakt (Kojima et al., 1999) en adipositas bij ratten induceert (Tschop et al., 2000). Tot op heden is het bekend dat ghrelin de voedselinname, honger verhoogt en de eetlust stimuleert via hypothalamische circuits (voor een overzicht zie Egecioglu et al. (2011)). Naast de hypothalamus worden ghreline-receptoren (GHS-R1A) uitgedrukt in beloningsgerelateerde gebieden zoals de amygdala, striatum, prefrontale cortex, ventraal tegmentaal gebied (VTA) en hippocampus (voor een overzicht zie Engel en Jerlhag (2014)), wat impliceert dat de fysiologische rol van ghreline uitstrekt voorbij energie homeostase regelgeving. Het orexigene peptide ghreline bleek inderdaad een activator te zijn van het mesolimbische dopaminesysteem, evenals een regulator van beloning, motivatie en inname van alcohol, nicotine, amfetamine en cocaïne bij muizen (voor een overzicht zie Engel en Jerlhag (2014)).

Opioïden activeren, net als andere verslavende geneesmiddelen, het mesolimbische dopaminesysteem waardoor dopamine-afgifte wordt opgehoopt via activering van μ- en / of δ-opioïde receptoren in de nucleus accumbens (NAc) (Hirose et al., 2005, Murakawa et al., 2004, Yoshida et al., 1999) en in de VTA, vermoedelijk door het verlagen van de GABA -inhibitie van dopamine-neuronen (Johnson and North, 1992). Bovendien reguleren accumale K-opioïde receptoren de activiteit van mesolimbisch dopamine-systeem (Chefer et al., 2005, Spanagel et al., 1992). Herhaalde blootstelling aan opioïden produceert adaptieve veranderingen van verschillende neurotransmitters, waaronder opioïde peptiden, in beloningsgebieden die bijdragen aan de ontwikkeling van verslaving (De Vries en Shippenberg, 2002). Bij ratten verzwakt farmacologische onderdrukking van de GHS-R1A door morfine geïnduceerde accumulatie van dopamine-afgifte evenals stereotypisch gedrag (Sustkova-Fiserova et al., 2014). Het doel van het eerste deel van de huidige serie experimenten was het onderzoeken van het acute effect van een GHS-R1A-antagonist, JMV2959, op het vermogen van morfine om een ​​locomotorische stimulatie te veroorzaken, ophoping van dopamine-afgifte en geconditioneerde plaatsvoorkeur bij muizen. Het doel van het tweede deel van deze studie was om het effect van herhaalde behandeling met JMV2959 of ghrelin op opioïde peptideniveaus te evalueren (Met-enkefaline-Arg6Phe7 (MEAP), dynorfine B (DynB) en Leu-enkefaline-Arg6 (LeuArg)) in beloningsgerelateerde gebieden, waaronder de amygdala, striatum, prefrontale cortex, VTA en hippocampus.

 

 

2. Experimentele procedures

 

 

2.1. Dieren

Volwassen post-puberale, aan leeftijd aangepaste mannelijke NMRI-muizen (8-12 weken oud en 25-40 g lichaamsgewicht; Charles River, Sulzfeld, Duitsland) werden gebruikt. In het kort werden alle muizen in een groep gehuisvest en bij een 12 / 12 h licht / donker cyclus gehouden (lichten op om 7 uur). Kraanwater en voedsel (normale voeding, Harlan Teklad, Norfolk, Engeland) werden geleverd ad libitum, behalve tijdens de experimentele opstellingen. Nieuwe muizen werden gebruikt voor elke afzonderlijke gedragstest alsook voor de opioïde peptide-analyse. De experimenten werden goedgekeurd door de Zweedse ethische commissie voor dieronderzoek in Göteborg. Alle inspanningen werden geleverd om dierenleed te minimaliseren en om het aantal gebruikte dieren te verminderen. Alle dieren mochten minimaal één week voor aanvang van de experimenten acclimatiseren.

 

 

2.2. Drugs

Morfinehydrochloride (Apoteksbolaget Sahlgrenska Hospital, Göteborg, Zweden) werd opgelost in een drager (0.9% natriumchloride-oplossing) en werd ip toegediend met een dosis 20 mg / kg 10 min voorafgaand aan de start van het experiment. Deze dosis werd gekozen omdat een lagere dosis (10 mg / kg, ip) geen locomotorstimulatie veroorzaakte bij onze muizen (gegevens niet getoond). De geselecteerde dosis (6 mg / kg, ip) van JMV2959 (gesynthetiseerd aan het Institut des Biomolécules Max Mousseron (IBMM), UMR5247, CNRS, Montpellier 1 en 2 Universities, Frankrijk), een GHS-R1A-antagonist, werd eerder bepaald en heeft geen effect op de locomotorische activiteit, geaccumuleerde dopamine-afgifte en geconditioneerde plaatsvoorkeur bij muizen (Jerlhag et al., 2009). JMV2959 werd opgelost in een drager (0.9% natriumchloride-oplossing) en werd altijd 20 minuten voorafgaand aan blootstelling aan morfine of onthoofding toegediend voor analyse van opioïde peptideniveaus. De geselecteerde dosis JMV2959 had geen invloed op het grove gedrag van muizen in een willekeurig experiment. Voor de gedragstests werd JMV2959 acuut toegediend, omdat uit onze doorzichtige onderzoeken blijkt dat een enkele injectie met JMV2959 de door geneesmiddelen geïnduceerde beloning vermindert (voor een overzicht zie Engel en Jerlhag (2014)). JMV2959 werd subchronisch gedurende vijf opeenvolgende dagen toegediend voor de opioïde peptide-analyse om de mogelijkheid om een ​​robuust effect te detecteren te vergroten. Bovendien vermijdt u met herhaalde injecties het mogelijke verstorende effect van acute injectiestress op peptiden. Geacyleerde ghreline van de rat (Bionuclear; Bromma, Zweden) werd verdund in 0.9% natriumchloride en de geselecteerde dosis van ghrelin (0.33 mg / kg, ip) heeft eerder aangetoond dat het beloning in muizen veroorzaakt (Jerlhag, 2008). Een uitgebalanceerd ontwerp werd gebruikt voor alle drugsproblemen.

 

 

2.3. Locomotorische activiteitsexperimenten

Eerdere studies hebben aangetoond dat morfine een locomotorische stimulatie veroorzaakt bij knaagdieren (Wise en Bozarth, 1987). Locomotorische activiteit werd geregistreerd in acht geluidgedempte, geventileerde en zwak verlichte locomotorboxen (420 × 420 × 200 mm, Kungsbacka mät- och reglerteknik AB; Fjärås, Zweden). Vijf bij vijf rijen fotocelbundels, op het vloerniveau van de doos, waardoor fotoceldetectie mogelijk was, liet een op een computer gebaseerd systeem toe om de activiteit van de muizen te registreren. Locomotorische activiteit werd gedefinieerd als het geaccumuleerde aantal nieuwe fotocelbundels onderbroken gedurende een 60-min-periode. Bij alle experimenten mochten de muizen één uur voorafgaand aan de geneesmiddeluitdagingen gewend zijn aan de locomotoreactievak. Er waren geen verschillen tussen gewenning in een van de behandelingsgroepen (gegevens niet getoond).

In de eerste serie experimenten werden de effecten van JMV2959 (6 mg / kg, ip) op morfine-geïnduceerde (20 mg / kg, ip) locomotorstimulatie onderzocht. JMV2959 werd 20 min vóór morfine toegediend en de activiteitsregistratie startte tien minuten na de laatste injectie. Elke muis ontving één behandelcombinatie (vehikel / voertuig, JMV2959 / drager, morfine / drager of JMV2959 / morfine; n= 8 per behandelcombinatie) en werd slechts aan één experimentele proef onderworpen.

 

 

2.4. Geconditioneerde plaatsvoorkeur

Om de effecten van JMV2959 op de lonende effecten van morfine in nieuwe muizen te evalueren, werden geconditioneerde place preferenceesten getest in muizen zoals eerder beschreven (Jerlhag, 2008). In het kort werd een CPP-apparaat met twee kamers gebruikt, met 45 lx-verlichting en verschillende visuele en tactiele signalen. Eén compartiment werd gedefinieerd door zwart en wit gestreepte muren en door een donkere gelamineerde vloer terwijl de andere een wit geschilderde houten vloer en muren met houten textuur had. De procedure bestond uit voorconditionering (dag 1), conditionering (dagen 2-5) en na-conditionering (dag 6). Bij preconditionering werden muizen ip met vehiculum geïnjecteerd en werd ze in de kamer geplaatst met vrije toegang tot beide compartimenten gedurende 20 min om de voorkeur voor de eerste plaats (of zijkant) te bepalen. Conditionering (20 min per sessie) werd uitgevoerd met behulp van een vooringenomen procedure waarbij morfine (20 mg / kg) gepaard was met het compartiment met de minste voorkeur en drager met het voorkeurscompartiment. Alle muizen ontvingen elke dag één injectie van morfine en van het vehiculum en de injecties werden tussen ochtend en middag veranderd in een evenwichtsontwerp. Bij post-conditioning van de muizen (n= 16) werden geïnjecteerd met JMV2959 (6 mg / kg, ip) of een gelijk volume voertuigoplossing en 20 min. Later geplaatst op de middellijn tussen de twee compartimenten met vrije toegang tot beide compartimenten voor 20 min (waardoor de volgende behandelingsgroepen werden gecreëerd; Morph-Veh en Morph-JMV2959).

Voorkeursplaats voorkeur werd berekend als het verschil in% van de totale tijd doorgebracht in de drug-gepaarde (d.w.z. minst geprefereerd) compartiment tijdens de na-conditionering en de pre-conditioneringssessie.

2.5. In vivo microdialyse- en dopamine-afgiftemetingen

Aangezien JMV2959 de door morfine geïnduceerde locomotorische stimulatie en geconditioneerde plaatsvoorkeur bij muizen verzwakt, werd het effect van JMV2959 (6 mg / kg, ip) op morfine-geïnduceerde (20 mg / kg, ip) accuma- bale dopamine-afgifte onderzocht met behulp van in vivo microdialyse bij vrij bewegende muizen. Voor metingen van extracellulaire dopaminegehalten werden muizen unilateraal geïmplanteerd met een microdialysesonde gepositioneerd in de nucleus accumbens. Daarom werden de muizen geanesthetiseerd met isofluran (Isofluran Baxter, Univentor 400 anesthesie-eenheid, Univentor Ldt., Zejtun, Malta), geplaatst in een stereotaxisch frame (David Kopf Instruments; Tujunga, CA, VS) en op een verwarmingskussen gehouden om te voorkomen dat hypothermie. Xylocain adrenaline (5 μg / ml; Pfizer Inic; New York, VS) werd gebruikt als lokale anesthetica en carprofen (Rimadyl, 5 mg / kg ip) (Astra Zeneca; Gothenburg, Zweden) werd gebruikt om mogelijke pijn te verlichten. Het schedelbot werd blootgelegd en een gat voor de sonde en een gat voor de verankeringsschroef werden geboord. De sonde werd willekeurig afgewisseld naar de linker- of de rechterkant van de hersenen. De coördinaten van 1.5 mm vóór de bregma, ± 0.7 lateraal naar de middellijn en 4.7 mm onder het oppervlak van het hersenoppervlak werden gebruikt voor de nucleus accumbens (Franklin en Paxinos, 1997). De blootgestelde punt van het dialysemembraan (20,000 kDa afgesneden met een od / id van 310 / 220 μm, HOSPAL, Gambro, Lund, Zweden) van de sonde was 1 mm. Alle sondes werden chirurgisch geïmplanteerd twee dagen voorafgaand aan het experiment. Na de operatie werden de muizen tot de testdag in afzonderlijke kooien gehouden (Macrolon III).

Op de testdag was de sonde verbonden met een microperfusiepomp (U-864 spuitpomp; AgnThós AB) en geperfundeerd met Ringer-oplossing met een snelheid van 1.5 μl / min. Na één uur gewenning aan de microdialyseopstelling werden per 20 min perfusiemonsters verzameld. Het baseline dopaminegehalte werd gedefinieerd als het gemiddelde van drie opeenvolgende monsters vóór de eerste geneesmiddel / drageruitdaging, en de toename van dopamine in de accumulatie werd berekend als het percentage toename ten opzichte van de uitgangswaarde. Na de basislijnmonsters (-40 min tot 0 min) werden muizen geïnjecteerd met JMV2959 of drager (op 0 min.), Gevolgd door een morfine- of vehikelinjectie (bij 20 min). Na deze medicijntoedieningen werden nog eens acht 20 min-monsters verzameld. Collectief de volgende behandelingsgroepen (n= 8 in elke groep) werden gecreëerd: voertuig-voertuig (Veh-Veh), voertuig-morfine (Veh-Morph), JMV2959-voertuig (JMV2959-Veh) en JMV2959-morfine (JMV2959-Morph).

De dopaminegehalten in de dialysaten werden bepaald met HPLC met elektrochemische detectie. Een pomp (Gyncotec P580A, Kovalent AB, V. Frölunda, Zweden), een ionenwisselingskolom (2.0 × 100 mm, Prodigy 3 μm SA; Skandinaviska GeneTec AB; Kungsbacka, Zweden) en een detector (Antec Decade; Antec Leyden; Zoeterwoude , Nederland) uitgerust met een VT-03 stroomcel (Antec Leyden) werden gebruikt. De mobiele fase (pH 5.6), bestaande uit sulfonzuur 10 mM, citroenzuur 200 mM, natriumcitraat 200 mM, 10% EDTA, 30% MeOH, werd onder vacuüm gefiltreerd met behulp van een 0.2 μm-membraanfilter (GH Polypro; PALL Gelman Laboratory; Lund, Zweden). De mobiele fase werd afgegeven met een stroomsnelheid van 0.2 ml / min door een ontgasser (Kovalent AB) en de analyt werd geoxideerd bij + 0.4 V.

Nadat de microdialyse-experimenten waren voltooid, werden de muizen onthoofd en werden de sondes geperfundeerd met pontamine sky blue 6BX om probe lokalisatie te vergemakkelijken. De hersenen werden op een vibro-schijfapparaat (752 M Vibroslice; Campden Instruments Ltd., Loughborough, VK) gemonteerd en in 50 μm-coupes gesneden. De locatie van de probe werd bepaald door middel van grove observatie met behulp van lichtmicroscopie. De exacte positie van de sonde werd geverifieerd (Franklin en Paxinos, 1997) en alleen muizen met correcte plaatsing werden gebruikt in de statistische analyse.

 

 

2.6. Behandeling en dissectie

De effecten van de behandeling met JMV2959 op de niveaus van MEAP, DynB en LeuArg in beloningsgerelateerde gebieden werden onderzocht. Muizen werden geïnjecteerd met JMV2959 (6 mg / kg, ip, n= 8) of een gelijk volume voertuig (ip, n= 8) gedurende vijf opeenvolgende dagen. 20 min na de laatste injectie werden de muizen opgeofferd en de hersenen van deze muizen werden verzameld. Afzonderlijke muizen werden geïnjecteerd met ofwel ghreline (0.33 mg / kg, ip, n= 8) of een gelijk volume voertuig (ip, n= 8) gedurende vijf opeenvolgende dagen. Vijf minuten na de laatste injectie werden de muizen opgeofferd en de hersenen van deze muizen werden verzameld. De amygdala, striatum, prefrontale cortex, VTA en hippocampus werden snel ontleed en onmiddellijk op droog ijs gezet en vervolgens bij -80 ° C opgeslagen tot verdere verwerking.

 

 

2.7. Opioïde peptideniveaus-analyse

De homogenisatie- en peptide-extractieprocedures volgden een standaardprocedure, eerder in detail beschreven (Nylander et al., 1997). In het kort werd warm (95 ° C) azijnzuur (1 M) aan de bevroren monsters toegevoegd. De monsters werden verwarmd in een waterbad (95 ° C) gedurende 5 min, gekoeld op ijs en vervolgens gehomogeniseerd met een Branson Sonifier (Danbury, CT, VS). Het homogenaat werd opnieuw verwarmd bij 95 ° C gedurende 5 min en afgekoeld op ijs vóór centrifugatie voor 15 min bij 4 ° C en 12,074 ×g in een Beckman GS-15R centrifuge (Fullerton, CA, VS). De extracten werden verder gezuiverd volgens een eerder beschreven procedure (Nylander et al., 1997). Twee fracties werden verzameld: fractie III (Leu-Arg en MEAP) en fractie V (DynB). De monsters werden gedroogd in een vacuümcentrifuge (Savant SpeedVac Plus SC210A; Thermo Scientific Inc., Waltham, MA USA) en bewaard in de vriezer (-20 ° C) tot peptide-analyse.

De immunoreactieve (ir) niveaus van DynB, LeuArg en MEAP werden geanalyseerd met goed vastgestelde radioimmunoassays en de protocollen zijn elders in detail beschreven (Nylander et al., 1997). In de DynB-assay werd anti-konijn-IgG van geit (GARGG; Bachem, Bubendorf, Zwitserland) gebruikt om vrij en aan antilichaam gebonden peptide te scheiden. Het Dyn-antiserum (113 +) werd gebruikt in een uiteindelijke verdunning van 1: 600000. De kruisreactiviteit met grote Dyn was 100% en met DynB (1-29) 1%. Er werd geen kruisreactiviteit met andere opioïde peptiden waargenomen. In de LeuArg- en MEAP-assays werd een houtskoolsuspensie gebruikt om vrij en aan antilichaam gebonden peptide te scheiden. Voor het LeuArg-antiserum (91: 6D +, uiteindelijke verdunning 1: 60000) was de kruisreactiviteit minder dan 0.01% voor Leu-enkefaline en MEAP, 0.02% voor DynB, 0.04% voor DynA en 0.08% voor alpha-neoendorphin. Het MEAP-antiserum 90: 3D (II) werd gebruikt in een uiteindelijke verdunning van 1: 160 000. Kruisreactiviteit met Met-enkefaline, Met-enkefaline-Arg6, Met-enkephalin-Arg6Gly7Leeuw8Leu-enkefaline en Leu-enkefaline-Arg6 was <0.1%

 

 

 

2.8. statistische analyse

Locomotor activiteitsgegevens werden geëvalueerd door een eenwegs ANOVA gevolgd door Bonferroni post-hoc testen. De conditievoorkeurgegevens werden vooraf geëvalueerd door een ongepaarde t-test. De microdialyse-experimenten werden geëvalueerd door een tweewegs-ANOVA gevolgd door Bonferroni post-hoc-test voor vergelijkingen tussen verschillende behandelingen en specifiek op gegeven tijdstippen. De peptideniveaus werden geanalyseerd met een ongepaarde t-test. Gegevens worden weergegeven als gemiddelde ± SEM. Een waarschijnlijkheidswaarde van P<0.05 werd als statistisch significant beschouwd.

 

 

 

3. Resultaten

 

 

3.1. Effecten van JMV2959 op morfine-geïnduceerde locomotorstimulatie, accuma- le dopamine-afgifte en geconditioneerde plaatsvoorkeur bij muizen

Een algemeen hoofdeffect van de behandeling werd gevonden op de locomotorische activiteit bij muizen na systemische toediening van morfine (20 mg / kg) en JMV2959 (6 mg / kg) (F (3,27) = 7.409, P= 0.0009; n= 8 voor Veh-Veh, JMV2959-Veh, JMV2959-Morph en n= 7 voor Veh-Morph). Zoals getoond in Figuur 1A, posthoc-analyse onthulde dat voorbehandeling met een enkele injectie met JMV2959 (P<0.001) verminderde significant de door morfine geïnduceerde locomotorische stimulatie (P<0.01 Veh-Veh vs Veh-Morph). De geselecteerde dosis JMV2959 had geen effect op de locomotorische activiteit in vergelijking met de behandeling van het voertuig (P> 0.05). Er was geen verschil in locomotorische activiteitsrespons bij met vehikel behandelde muizen en met JMV2959-morfine behandelde muizen (P> 0.05).

Fig. 1. Opent een grote afbeelding  

Figuur 1

De GHS-R1A-antagonist JMV2959 verzwakt morfine-geïnduceerde locomotorstimulatie, accuma- le dopamineafgifte en geconditioneerde plaatsvoorkeur bij muizen. (A) Morfine-geïnduceerde (20 mg / kg ip) locomotorische stimulatie werd verzwakt door een enkele injectie van JMV2959 (6 mg / kg ip) (n= 7-8 in elke groep; **P<0.01, ***P<0.001 eenmalige ANOVA gevolgd door een Bonferroni post-hoc test). (B) De door morfine geïnduceerde (20 mg / kg ip) conditieplaatsvoorkeur (CPP) werd verzwakt door een acute enkele injectie van JMV2959 (6 mg / kg ip) bij muizen (n= 8 in elke groep, *P<0.05, ongepaarde t-test). (C) Eerst hebben we een significant effect aangetoond van morfine (20 mg / kg ip) om de dopamine-afgifte te verhogen in vergelijking met voertuigbehandeling (tijdsinterval 40-180 min (P<0.001), Veh – Veh vs Veh-Morph). Zoals aangetoond in (C), verminderde voorbehandeling met JMV2959 (6 mg / kg ip) de morfine-geïnduceerde toename in dopamine-afgifte in vergelijking met de voorbehandeling van het voertuig in het tijdsinterval 40-100 en 140-180 min (##P<0.01, ###P <0.001, JMV2959-Morph vergeleken met Veh-Morph-behandeling). De geselecteerde dosis JMV2959 had geen significant effect op de accumulatie van dopamine-afgifte in vergelijking met voertuigbehandeling op enig tijdsinterval (P> 0.05, Veh – Veh vs JMV2959-Veh). JMV2959 reduceerde, maar blokkeerde niet volledig, de door morfine teweeggebrachte dopamine-afgifte per dag met tijdsinterval 60-140 (*P<0.05, **P<0.01, ***P <0.001, JMV2959-Morph vergeleken met Veh-Morph-behandeling). Pijlen vertegenwoordigen tijdstippen van injectie van JMV2959, drager en morfine. Gegevens geanalyseerd met een tweeweg ANOVA gevolgd door een Bonferroni post-hoc test (n= 8 in elke groep). Veh-veh (Square), Veh-Morph (rhomb), JMV2959-Veh (Triangle), JMV2959-Morph (cirkel). Alle waarden vertegenwoordigen het gemiddelde ± SEM.

De door morfine geïnduceerde locatievoorkeur (20 mg / kg) (Morph-Veh) was significant verzwakt door een acute enkele injectie van JMV2959 (6 mg / kg) (Morph-JMV2959) op de post-conditioneringsdag (P= 0.025, n= 8 in elke groep; Figuur 1B).

Accumbal microdialyse metingen van dopamine bij muizen toonden een algemeen hoofdeffect van de behandeling aan (F(3,33) = 24.15, P<0.0001), tijd F(11,308) = 7.05, P<0.0001) en behandeling × tijdinteractie (F(11,308) = 8.63, P<0.0001) (Figuur 1C; n= 8 in elke groep). Morfine verhoogde de dopamine-afgifte in het bloed ten opzichte van de behandeling met het medium 40-180 min (P<0.001). Zoals getoond in Figuur 1C dit effect werd verminderd door voorbehandeling met JMV2959 met tijdsinterval 40-80 (P<0.01), 100 (P<0.001), 140 (P<0.01) en 160-180 min (P<0.001). JMV2959 verminderde, maar blokkeerde niet volledig, de door morfine geïnduceerde accumulatie van dopamine-afgifte, aangezien er een verschil was tussen vehiculumbehandeling en JMV2959-morfinebehandeling met een tijdsinterval van 60-80 (P<0.01), 100 (P<0.001), 140 (P<0.01) en 160 min (P<0.05). De geselecteerde dosis JMV2959 had geen significant effect op de accumulatie van dopamine-afgifte in vergelijking met voertuigbehandeling op enig tijdsinterval (P> 0.05).

 

 

 

3.2. Effecten van subchronische JMV2959- of ghrelinebehandeling op opioïde peptideniveaus

De immunoreactieve (ir) niveaus van de drie peptiden in de gemeten hersengebieden zijn te vinden in Tabel 1, Tabel 2. Subchronische behandeling met JMV2959 verhoogde de niveaus van MEAP in de VTA, DynB in de hippocampus en LeuArg in striatum (Tabel 1). Er waren geen verschillen in andere onderzochte gebieden, namelijk amygdala en prefrontale cortex. Subchronische ghrelinebehandeling veranderde de niveaus van MEAP, DynB of LeuArg (Tabel 2).

Tabel 1Sub-chronische behandeling met JMV2959 verhoogde de ir-niveaus van Met aanzienlijk5-enkephalin-Arg6Phe7 (MEAP) in het ventrale tegmentale gebied (VTA), de ir-niveaus van Dynorphin B (DynB) in de hippocampus (HC) evenals de ir-niveaus van en Leu-enkefaline-Arg6 (LeuArg) in striatum (STR) vergeleken met vehikelbehandeling. Er waren geen verschillen in andere onderzochte gebieden. Alle waarden vertegenwoordigen het gemiddelde ± SEM. (amygdala (AMY) en prefrontale cortex (PFC)).
 JMV2959Voertuigp-Waarde
 Ir MEAP-niveaus
AMY14.52 3.91 ±15.61 4.37 ±0.838
STR43.47 5.54 ±47.60 7.94 ±0.754
PFC3.61 0.90 ±2.94 0.41 ±0.450
VTA8.69 0.75 ±4.63 0.42 ±0.003
HC4.52 0.80 ±2.56 0.23 ±0.170
 Ir DynB-niveaus
AMY2.56 0.41 ±1.90 0.25 ±0.759
STR8.69 0.89 ±10.17 0.91 ±0.547
PFC2.24 0.36 ±1.60 0.20 ±0.169
VTA8.89 0.55 ±5.98 0.21 ±0.079
HC3.70 0.41 ±2.36 0.19 ±0.042
 Ir LeuArg-niveaus
AMY13.46 1.69 ±11.07 1.45 ±0.270
STR14.50 0.89 ±12.12 0.93 ±0.046
PFC11.21 1.32 ±10.80 1.44 ±0.776
VTA12.96 1.63 ±10.96 1.39 ±0.245
HC5.29 0.75 ±5.67 0.72 ±0.663
 
Tabel 2Sub-chronische ghrelinebehandeling veranderde de ir-niveaus van Met niet5-enkephalin-Arg6Phe7 (MEAP), dynorfine B (DynB) of Leu-enkefaline-Arg6 (LeuArg) in een van de beloningsgerelateerde gebieden onderzocht, d.w.z. het ventrale tegmentale gebied (VTA), amygdala (AMY), striatum (STR), prefrontale cortex (PFC) en hippocampus (HC). Alle waarden vertegenwoordigen het gemiddelde ± SEM.
 ghrelineVoertuigp-Waarde
 Ir MEAP-niveaus
AMY12.00 3.91 ±15.46 3.02 ±0.517
STR43.59 7.24 ±61.15 12.46 ±0.176
PFC3.75 0.46 ±3.17 0.64 ±0.550
VTA11.96 1.03 ±10.60 0.91 ±0.249
HC6.75 1.88 ±5.20 1.01 ±0.314
 Ir DynB-niveaus
AMY3.97 1.09 ±5.42 2.27 ±0.488
STR11.15 0.89 ±13.03 2.41 ±0.434
PFC3.23 0.50 ±2.38 0.18 ±0.072
VTA5.11 0.15 ±8.25 1.59 ±0.070
HC4.32 0.87 ±3.19 0.29 ±0.095
 Ir LeuArg-niveaus
AMY9.67 1.53 ±9.47 1.29 ±0.928
STR8.69 0.87 ±8.87 0.44 ±0.875
PFC4.61 0.47 ±4.47 0.39 ±0.921
VTA8.35 1.04 ±6.99 0.42 ±0.407
HC4.97 0.50 ±3.47 0.41 ±0.086
 

 

 

 

4. Discussie

De huidige studie ondersteunt verder de hypothese dat de fysiologische rol van het orexigene peptide beloningsregulering omvat. We toonden inderdaad aan dat perifere toediening van een GHS-R1A-antagonist het vermogen van morfine om een ​​locomotorische stimulatie te veroorzaken verzwakt, de dopaminegehalten in NAc verhoogt en een geconditioneerde plaatsvoorkeur bij muizen induceert. We ontdekten ook dat de subchronische JMV2959, maar niet de ghreline-behandeling de ir-weefselniveaus van MEAP in de VTA, DynB in de hippocampus en LeuArg in striatum verhoogde, en het eerste bewijs opleverde dat het vermogen van ghreline-signalering om wapening te reguleren opioïde peptiden kan omvatten .

De hierin gepresenteerde gegevens laten zien dat GHS-R1A-antagonisme het vermogen van morfine om het mesolimbische dopaminesysteem bij muizen te activeren, beïnvloedt. In overeenstemming zijn de bevindingen die aantonen dat JMV2959 het vermogen van morfine blokkeert om de extracellulaire niveaus van accumulerend dopamine te verhogen en om stereotiep gedrag bij ratten te veroorzaken (Sustkova-Fiserova et al., 2014). Ondersteunend vergroot centrale ghreline-toediening het breekpunt, maar niet het aantal actieve hefboomdrukken, in het progressieve ratio-versterkingsschema bij ratten die zelf heroïne toedienen (Maric et al., 2012). De bewering dat ghrelinesignalering ten grondslag ligt aan drugsverslaving wordt verder ondersteund door de bevindingen die aantonen dat JMV2959 zowel de inname als de motivatie om alcohol te consumeren bij ratten vermindert en dat door amfetamine, cocaïne en nicotine geïnduceerde beloning wordt geblokkeerd door het GHS-R1A-antagonisme bij knaagdieren ( voor een overzicht zie Engel en Jerlhag (2014)) en dat polymorfismen in ghreline-gerelateerde genen geassocieerd zijn met de inname van alcohol, roken en amfetamine (voor een overzicht zie Engel en Jerlhag (2014)).

De huidige bevindingen met verhoogde niveaus van opioïde peptiden in het striatum, VTA en hippocampus na subchronische JMV2959-behandeling suggereren voor de eerste keer interacties tussen opioïde peptiden en ghreline-signalering. De endogene opioïden zijn betrokken bij belonende effecten, niet alleen geïnduceerd door opioïden maar ook andere drugs van misbruik en natuurlijke beloningen, en in adaptieve processen waargenomen na herhaalde blootstelling aan geneesmiddelen (Trigo et al., 2010, Van Ree et al., 2000). Inderdaad wordt de activiteit van het mesolimbische dopaminesysteem gereguleerd door endogene opioïden op zowel het niveau van de VTA als de NAc (Hirose et al., 2005, Spanagel et al., 1992) en de acties zijn aangetoond dat ze direct of indirect zijn door modulatie van andere zenders (Charbogne et al., 2014).

We vonden hierin dat subchronische JMV2959-behandeling de niveaus van MEAP in de VTA verhoogde. MEAP is exclusief afkomstig van proenkephalin en werd gebruikt als een marker voor proenkephalin-peptiden die voornamelijk δ-opioïde-receptoren activeren. We veronderstellen dat de verhoogde niveaus van endogene MEAP in de VTA na behandeling met JMV2959 mogelijk het vermogen van morfine om de GABA-remming van mesoaccumbal dopamine neuronen (Johnson en North, 1992) te verminderen, die kunnen bijdragen aan de verminderde morfine-geïnduceerde effecten die volgen na JMV2959. Ondersteunend bevindt GHS-R1A zich op GABAergic-interneuronen in de VTA (Abizaid et al., 2006). Bovendien hebben eerdere studies aangetoond dat intra-VTA-infusie van JMV2959, via onbekende mechanismen, verzwakt ghrelin-geïnduceerde beloning (Jerlhag et al., 2011) evenals ghreline-gemedieerde sucrose-inname bij knaagdieren (Skibicka et al., 2011), suggereren dat ventrale tegmentale GHS-R1A belangrijk zijn voor beloningsregulering. Ter ondersteuning van een dergelijke bewering zijn de bevindingen die aantonen dat andere hongerregulerende peptiden, zoals galanine en orexine, de belonende eigenschappen van morfine mediëren via lokale mechanismen binnen de VTA (Narita et al., 2006, Richardson en Aston-Jones, 2012).

In het striatum vonden we dat subchronisch JMV2959 de ir-niveaus van LeuArg verhoogde, wat suggereert dat het vermogen van JMV2959 om de door morfine veroorzaakte geconditioneerde plaatsvoorkeur, dopamine-afgifte en locomotorstimulatie te verzwakken, althans gedeeltelijk afhangt van een verbeterde accumassa δ- opioïde receptoractiviteit. Verhoogde LeuArg-spiegels kunnen het gevolg zijn van verhoogde enzymatische conversie van dynorfine-peptiden naar enkephalinen of van verhoogde Dyn-afgifte in het NAc als een reactie op toegenomen dopamine, gevolgd door afbraak in LeuArg. Hoewel eerdere studies hebben aangetoond dat de activiteit van het mesolimbische dopamine-systeem wordt gereguleerd via K-opioïde receptoren in het NAc (Spanagel et al., 1992) en endogene K-opioïde receptoren zorgen voor een tonische remming van mesoaccumbal dopamine neurotransmissie en verzwakken door cocaïne geïnduceerde afgifte van dopamine in NAc (Chefer et al., 2005), wij niet laten zien dat JMV2959 de ir-DynB-niveaus in het striatum verandert. Daarom zijn verdere studies gerechtvaardigd over prodynorfine-peptiden om de interacties tussen GHS-R1A-antagonisme en -dynorfinen op te helderen.

In de huidige studie hebben we ook aangetoond dat de behandeling met JMV2959 de niveaus van hippocampale DynB significant verhoogt. Ghreline verhoogt de geheugenconsolidatie en de vorming van dendritische wervels, genereert potentiatie op de lange termijn en zorgt voor geheugenfacilitatie via hippocampus GHS-R1A bij knaagdieren (Carlini et al., 2010, Diano et al., 2006). Bovendien vertonen GHS-R1A knockout-muizen een verbeterd ruimtelijk geheugen in de Morris water doolhoftest en een verstoord contextueel geheugen in het angstconditionerende paradigma vergeleken met wild-type muizen (Albarran-Zeckler et al., 2012). Dynorfine-peptiden, waaronder DynB, zijn overvloedig aanwezig in de hippocampus en ze verzwakken langetermijnpotentiëring (Chavkin et al., 1985, Wagner et al., 1993) en verminderen ook ruimtelijk leren bij ratten (Sandin et al., 1998). We stellen daarom de hypothese dat de GHR-R1A-antagonist het geheugen van beloning kan dempen door hippocampale langetermijnpotentiatie te remmen via activering van DynB. Samen bieden deze gegevens een nieuw potentieel mechanisme waarmee JMV2959 via opioïde peptiden kunnen de versterking veranderen. Opioïde receptoren zijn echter wijd verspreid in de hersenen, wat suggereert dat andere gebieden, die niet zijn opgenomen in de huidige studie, mogelijk betrokken zijn bij GHS-R1A gereguleerde door morfine geïnduceerde beloning. Ghreline-geïnduceerde voedselopname en hefboompersing voor sucrose wordt bijvoorbeeld verminderd door centrale of intra-hypothalamische toediening van een K-opioïde receptorantagonist (Romero-Pico et al., 2013). De rol van opioïde peptiden in andere gebieden moet echter worden opgehelderd in aankomende studies.

De endogene μ-receptorliganden, endomorfines en beta-endorfine zijn hierin niet geanalyseerd, zodat we een mogelijk effect van JMV2959 op deze peptiden niet kunnen uitsluiten. De belonende eigenschappen van morfine betreffen immers zowel μ-opioïde receptoren in de VTA als NAc (Hirose et al., 2005, Johnson en North, 1992, Murakawa et al., 2004, Yoshida et al., 1999). Een μ-receptorantagonist verzwakt echter niet de door ghrelin geïnduceerde voedselinname (Naleid et al., 2005) noch ghreline-geïnduceerde locomotorstimulatie en accumale dopamine-afgifte (Jerlhag et al., 2011), wat impliceert dat het vermogen van de GHSR- 1A-antagonist om wapening te reguleren omvat geen μ-receptoren. Aan de andere kant had JMV2959 wel degelijk invloed op opioïde-peptiden die zijn afgeleid van proenkephalin en prodynorfine, wat aantoont dat zij mogelijk betrokken zijn bij de effecten die worden geïnduceerd door GHSR-1A-antagonisten.

Hoewel eerdere studies hebben aangetoond dat systemische toediening van ghreline leidt tot beloning (Jerlhag, 2008) en de belonende eigenschappen van verslavende geneesmiddelen verbetert (voor een overzicht zie Engel en Jerlhag (2014)), laten we hier zien dat subchronische ghreline-behandeling niet veranderde de ir-weefselniveaus van opioïdenpeptiden in een van de bestudeerde beloningsgerelateerde gebieden. Systemische toediening van ghreline activeert c-fos-expressie in hypothalamische gebieden, maar niet in mesolimbische en hippocampusgebieden (Pirnik et al., 2011) en de binding van fluorescent gelabeld ghreline is beperkt tot regulerende neuronen van de hypothalamus (Schaeffer et al., 2013 ). Samen genomen met de bevindingen die aantonen dat ghrelin, behalve sporenhoeveelheden in de hypothalamus, niet kan worden gedetecteerd in diepere hersengebieden na toediening van perifere ghreline (Furness et al., 2011, Grouselle et al., 2008, Sakata et al., 2009 ), verhoogt de mogelijkheid dat systemische ghrelin het beloningssysteem activeert via indirecte mechanismen onafhankelijk van endogene opioïden. Op ondersteunende wijze vereist door ghreline geïnduceerde accumulatie van dopamine afgifte stroomopwaartse ofexigene hypothalamische signalering (Cone et al., 2014), perifere toediening van ghrelin verandert de alcoholinname bij muizen niet (Lyons et al., 2008) en dat neutralisatie van perifere ghreline verzwakt geen alcohol geïnduceerde beloning bij muizen of alcoholinname bij ratten (Jerlhag et al., in druk). De mogelijkheid dat sub-chronische toediening van ghreline de ir-weefselniveaus van opioïdenpeptiden verhoogt, moet echter worden overwogen, maar dit moet in de komende onderzoeken in detail worden onderzocht.

Het vermogen van verslavende medicijnen om stimulatie te veroorzaken, dopamine-afgifte en om een ​​geconditioneerde plaatsvoorkeur te induceren, is nauw verbonden met de versterkende eigenschappen van verslavende geneesmiddelen en deze parameters worden beschouwd als onderdeel van het verslavingsproces (Wise, 2004). Aangezien we hier hebben vastgesteld dat JMV2959 deze beloningsparameters bij muizen verzwakt, veronderstellen we dat GHS-R1A een belangrijke rol kan spelen in verslavingsprocessen en dat endogene opioïden bij deze processen betrokken zijn. Collectief duiden deze gegevens erop dat GHS-R1A-antagonisten moeten worden opgehelderd als behandeling van drugsverslaving.

De rol van financieringsbron

JE en EJ worden ondersteund door subsidies van de Zweedse Onderzoeksraad (Grant nr. 2011-4646, 2009-2782 en 2011-4819), de Zweedse hersenfundering, LUA / ALF (Grant nr. 148251) van het Sahlgrenska University Hospital, Alcohol onderzoeksraad van het Zweedse alcoholverkoop monopolie en de grondslagen van Adlerbertska, Fredrik en Ingrid Thuring, Tore Nilsson, Längmanska, Torsten en Ragnar Söderberg, Wilhelm en Martina Lundgren, NovoNordisk, Knut en Alice Wallenberg, Magnus Bergvall, Anérs, Jeansons, Åke Wiberg , de Swedish Society of Medicine, Swedish Society for Medical Research en Gothenburg Psychiatry Research Foundation. Alcohol Research Council van het Zweedse Monopoly Alcohol Detailhandel en de Swedish Research Council (K2012-61X-22090-01-3) hebben IN ondersteund. De financieringsbronnen hadden geen rol in het onderzoeksontwerp, in de verzameling, analyse en interpretatie van de gegevens, in het schrijven van het rapport en in de beslissing om de gegevens te publiceren

 

 

 

medewerkers

JAE ontwierp de studie en schreef het manuscript. IN verrichte een deel van de handen aan het werk, analyseerde gegevens, schreef het manuscript. EJ ontwierp de studie, schreef het protocol, beheerde literatuuronderzoek, analyseerde en ondernam een ​​statistische analyse en schreef de eerste versie van het manuscript. Alle auteurs hebben bijgedragen aan en hebben het definitieve manuscript goedgekeurd.

 

 

 

 

Belangenverstrengeling

EJ heeft financiële steun ontvangen van de Novo Nordisk Foundation. Dit neemt niet weg dat de auteurs zich houden aan het beleid van journals over het delen van gegevens en materialen. De overige auteurs verklaren geen belangenconflict.

 

 

Danksagung

Britt-Mari Larsson, Kenn Johannessen, Qin Zhou en Lova Segerström worden dankbaar erkend voor deskundige en waardevolle technische assistentie. De GHS-R1A-antagonist JMV2959 werd geleverd door Æterna Zentaris. Prof. Jean Martinez en Dr. Jean-Alain Fehrentz worden erkend voor de synthese van JMV2959

 

Referenties

  1. Abizaid, A., Liu, ZW, Andrews, ZB, Shanabrough, M., Borok, E., Elsworth, JD, Roth, RH, Sleeman, MW, Picciotto, MR, Tschop, MH, Gao, XB en Horvath, TL Ghreline moduleert de activiteit en synaptische inputorganisatie van dopamineneuronen van de middenhersenen en bevordert de eetlust. J. Clin. Investig. 2006; 116: 3229-3239
  2. Albarran-Zeckler, RG, Brantley, AF en Smith, RG Groeihormoon secretagogue receptor (GHS-R1a) knock-out muizen vertonen verbeterd ruimtelijk geheugen en tekortkomingen in contextueel geheugen. Behav. Brain Res. 2012; 232: 13-19
  3. Bekijk in artikel 
  4. Bekijk in artikel 
  5. Bekijk in artikel 
  6. Bekijk in artikel 
  7. Bekijk in artikel 
  8. Bekijk in artikel 
  9. Bekijk in artikel 
  10. Bekijk in artikel 
  11. Bekijk in artikel 
  12. Bekijk in artikel 
  13. Bekijk in artikel 
  14. Bekijk in artikel 
  15. Bekijk in artikel 
  16. Bekijk in artikel 
  17. Bekijk in artikel 
  18. Bekijk in artikel 
  19. Bekijk in artikel 
  20. Bekijk in artikel 
  21. Bekijk in artikel 
  22. Bekijk in artikel 
  23. Bekijk in artikel 
  24. Bekijk in artikel 
  25. Bekijk in artikel 
  26. Bekijk in artikel 
  27. Bekijk in artikel 
  28. Bekijk in artikel 
  29. Bekijk in artikel 
  30. Bekijk in artikel 
  31. Bekijk in artikel 
  32. Bekijk in artikel 
  33. Bekijk in artikel 
  34. Bekijk in artikel 
  35. Bekijk in artikel 
  36. Bekijk in artikel 
  37. Bekijk in artikel 
  38. Bekijk in artikel 
  39. Bekijk in artikel 
  40. Bekijk in artikel 
  41. Bekijk in artikel 
  42. Bekijk in artikel 
  43. Bekijk in artikel 
  44. Bekijk in artikel 
  45. Bekijk in artikel 
  46. Bekijk in artikel 
  47. Bekijk in artikel 
  48. Carlini, VP, Perez, MF, Salde, E., Schioth, HB, Ramirez, OA en de Barioglio, SR Door ghreline geïnduceerde geheugenfacilitatie impliceert activatie van stikstofoxidesynthase en verlaging van de drempel om LTP in hippocampale dentate gyrus te bevorderen. Physiol. Behav. 2010; 101: 117-123
  49. Charbogne, P., Kieffer, BL en Befort, K. 15 jarenlange genetische benaderingen in vivo voor onderzoek naar verslaving: opioïdreceptor en peptide-gen knock-out in muismodellen van drugsmisbruik. Neurofarmacologie. 2014; 76: 204-217
  50. Chavkin, C., Shoemaker, WJ, McGinty, JF, Bayon, A., en Bloom, FE Karakterisering van de neuropeptide-systemen van prodynorfine en proenkephaline in de hippocampus van ratten. J. Neurosci. 1985; 5: 808-816
  51. Chefer, VI, Czyzyk, T., Bolan, EA, Moron, J., Pintar, JE, en Shippenberg, TS Endogene kappa-opioïde receptorsystemen regelen mesoaccumbal dopaminedynamica en kwetsbaarheid voor cocaïne. J. Neurosci. 2005; 25: 5029-5037
  52. Cone, JJ, McCutcheon, JE en Roitman, MF Ghreline fungeert als een interface tussen fysiologische toestand en fasische dopamine-signalering. J. Neurosci. 2014; 34: 4905-4913
  53. De Vries, TJ en Shippenberg, TS Neurale systemen die ten grondslag liggen aan opiaatverslaving. J. Neurosci. 2002; 22: 3321-3325
  54. Diano, S., Farr, SA, Benoit, SC, McNay, EC, da Silva, I., Horvath, B., Gaskin, FS, Nonaka, N., Jaeger, LB, Banks, WA, Morley, JE, Pinto , S., Sherwin, RS, Xu, L., Yamada, KA, Sleeman, MW, Tschop, MH en Horvath, TL Ghreline regelt de dichtheid van de synaps van de hippocampus en de geheugenprestaties. Nat. Neurosci. 2006; 9: 381-388
  55. Egecioglu, E., Skibicka, KP, Hansson, C., Alvarez-Crespo, M., Friberg, PA, Jerlhag, E., Engel, JA, en Dickson, SL Hedonische en stimulansignalen voor controle van het lichaamsgewicht. Eerwaarde Endocr. Metab. Disord. 2011; 12: 141-151
  56. Engel, JA en Jerlhag, E. De rol van darmhersenhormonen in de pathofysiologie van alcoholisme: implicaties voor farmacotherapie. CNS Drugs. 2014; 28: 875-886
  57. Franklin, KBJ en Paxinos, G. The Mouse Brain in stereotaxische coördinaten. Academic Press, San Diego; 1997
  58. Furness, JB, Hunne, B., Matsuda, N., Yin, L., Russo, D., Kato, I., Fujimiya, M., Patterson, M., McLeod, J., Andrews, ZB en Bron , R. Onderzoek naar de aanwezigheid van ghreline in het centrale zenuwstelsel van rat en muis. Neuroscience. 2011; 193: 1-9
  59. Grouselle, D., Chaillou, E., Caraty, A., Bluet-Pajot, MT, Zizzari, P., Tillet, Y., en Epelbaum, J. Pulsatile cerebrospinal fluid en plasma ghrelin in relatie tot secretie van groeihormoon en voedselinname bij schapen. J. Neuroendocrinol. 2008; 20: 1138-1146
  60. Hirose, N., Murakawa, K., Takada, K., Oi, Y., Suzuki, T., Nagase, H., Cools, AR en Koshikawa, N. Interacties tussen mu- en delta-opioïde receptoren, met name vermoedelijke delta1- en delta2-opioïde receptoren, bevorderen dopamine-afgifte in de nucleus accumbens. Neuroscience. 2005; 135: 213-225
  61. Jerlhag, E. Systemische toediening van ghrelin induceert geconditioneerde plaatsvoorkeur en stimuleert accumulatieve dopamine. Addict. Biol. 2008; 13: 358-363
  62. Jerlhag, E., Egecioglu, E., Dickson, SL en Engel, JA Glutamaterge regulatie van door ghreline geïnduceerde activering van het mesolimbische dopaminesysteem. Addict. Biol. 2011; 16: 82-91
  63. Jerlhag, E., Egecioglu, E., Landgren, S., Salome, N., Heilig, M., Moechars, D., Datta, R., Perrissoud, D., Dickson, SL, en Engel, JA Vereiste van centrale ghreline-signalering voor alcoholbeloning. Proc. Natl. Acad. Sci. VERENIGDE STATEN VAN AMERIKA. 2009; 106: 11318-11323
  64. Jerlhag, E., Ivanoff, L., Vater, A., en Engel, JA Perifeer circulerend ghreline medieert niet door alcohol geïnduceerde beloning en alcoholinname bij knaagdieren. Alcohol. Clin. Exp. Res. 2014; 38: 959-968
  65. Johnson, SW en North, RA Opioïden exciteren dopamine-neuronen door hyperpolarisatie van lokale interneuronen. J. Neurosci. 1992; 12: 483-488
  66. Kojima, M., Hosoda, H., Datum, Y., Nakazato, M., Matsuo, H., en Kangawa, K. Ghreline is een groeihormoon-afgevende geacyleerde peptide uit de maag. Natuur. 1999; 402: 656-660
  67. Koob, GF en Le Moal, M. Drugsverslaving, ontregeling van beloning en allostasis. Neuropsychopharmacol. Uit. Publ. Am. Coll. Neuropsychopharmacol. 2001; 24: 97-129
  68. Lyons, AM, Lowery, EG, Sparta, DR en Thiele, TE Effecten van voedselbeschikbaarheid en toediening van orexigenische en anorectische middelen bij verhoogd ethanol drinken geassocieerd met drinken in de duistere procedures. Alcohol. Clin. Exp. Res. 2008; 32: 1962-1968
  69. Maric, T., Sedki, F., Ronfard, B., Chafetz, D., en Shalev, U. Een beperkte rol voor ghreline bij heroïne zelftoediening en door voedselontneming veroorzaakt herstel van het zoeken naar heroïne bij ratten. Addict. Biol. 2012; 17: 613-622
  70. Morganstern, I., Barson, JR en Leibowitz, SF Regulering van overconsumptie van geneesmiddelen en smakelijke voedingsmiddelen door vergelijkbare peptidesystemen. Curr. Drugsmisbruik. Rev. 2011; 4: 163-173
  71. Murakawa, K., Hirose, N., Takada, K., Suzuki, T., Nagase, H., Cools, AR en Koshikawa, N. Deltorphin II verbetert de extracellulaire niveaus van dopamine in de nucleus accumbens via opioïde receptoronafhankelijke mechanismen. EUR. J. Pharmacol. 2004; 491: 31-36
  72. Naleid, AM, Grace, MK, Cummings, DE en Levine, AS Ghreline induceert het voeden van de mesolimbische beloningsroute tussen het ventrale tegmentale gebied en de nucleus accumbens. Peptiden. 2005; 26: 2274-2279
  73. Narita, M., Nagumo, Y., Hashimoto, S., Narita, M., Khotib, J., Miyatake, M., Sakurai, T., Yanagisawa, M., Nakamachi, T., Shioda, S., en Suzuki, T. Directe betrokkenheid van orexinerge systemen bij de activering van de mesolimbische dopamine route en gerelateerd gedrag geïnduceerd door morfine. J. Neurosci. 2006; 26: 398-405
  74. Nestler, EJ Is er een gemeenschappelijke moleculaire route voor verslaving? Nat. Neurosci. 2005; 8: 1445-1449
  75. Nylander, I., Stenfors, C., Tan-No, K., Mathe, AA, en Terenius, L. Een vergelijking tussen microgolfbestraling en onthoofding: basale niveaus van dynorfine en enkefaline en het effect van behandeling met chronische morfine op dynorfine-peptiden. Neuropeptiden. 1997; 31: 357-365
  76. Pirnik, Z., Bundzikova, J., Holubova, M., Pychova, M., Fehrentz, JA, Martinez, J., Zelezna, B., Maletinska, L., en Kiss, A. Ghreline-agonisten hebben invloed op de expressie van Fos-eiwitten in hersengebieden die gerelateerd zijn aan de regulatie van voedselinname bij mannelijke C57BL / 6-muizen. Neurochem. Int. 2011; 59: 889-895
  77. Richardson, KA en Aston-Jones, G. Laterale hypothalamische orexine / hypocretine-neuronen die naar het ventrale tegmentale gebied projecteren, worden differentieel geactiveerd met morfinevoorkeur. J. Neurosci. 2012; 32: 3809-3817
  78. Romero-Pico, A., Vazquez, MJ, Gonzalez-Touceda, D., Folgueira, C., Skibicka, KP, Alvarez-Crespo, M., Van Gestel, MA, Velasquez, DA, Schwarzer, C., Herzog, H., Lopez, M., Adan, RA, Dickson, SL, Dieguez, C. en Nogueiras, R. Hypothalamische kappa-opioïde receptor moduleert het orexigene effect van ghreline. Neuropsychopharmacol. Uit. Publ. Am. Coll. Neuropsychopharmacol. 2013; 38: 1296-1307
  79. Sakata, I., Nakano, Y., Osborne-Lawrence, S., Rovinsky, SA, Lee, CE, Perello, M., Anderson, JG, Coppari, R., Xiao, G., Lowell, BB, Elmquist, JK en Zigman, JM Karakterisatie van een nieuwe ghrelinecelreporter muis. Regul. Pept. 2009; 155: 91-98
  80. Sandin, J., Nylander, I., Georgieva, J., Schott, PA, Ogren, SO, en Terenius, L. Hippocampale dynorphin B-injecties verminderen het ruimtelijk leren bij ratten: een kappa-opioïde receptor-gemedieerd effect. Neuroscience. 1998; 85: 375-382
  81. Schaeffer, M., Langlet, F., Lafont, C., Molino, F., Hodson, DJ, Roux, T., Lamarque, L., Verdie, P., Bourrier, E., Dehouck, B., Baneres , JL, Martinez, J., Mery, PF, Marie, J., Trinquet, E., Fehrentz, JA, Prevot, V., en Mollard, P. Snelle detectie van circulerend ghreline door hypothalamische eetlustmodificerende neuronen. Proc. Natl. Acad. Sci. VERENIGDE STATEN VAN AMERIKA. 2013; 110: 1512-1517
  82. Skibicka, KP, Hansson, C., Alvarez-Crespo, M., Friberg, PA, en Dickson, SL Ghrelin richt zich rechtstreeks op het ventrale tegmentale gebied om de voedselmotivatie te vergroten. Neuroscience. 2011; 180: 129-137
  83. Spanagel, R., Herz, A., en Shippenberg, TS Tegengestelde tonisch actieve endogene opioïde systemen moduleren de mesolimbische dopaminerge route. Proc. Natl. Acad. Sci. VERENIGDE STATEN VAN AMERIKA. 1992; 89: 2046-2050
  84. Sustkova-Fiserova, M., Jerabek, P., Havlickova, T., Kacer, P., en Krsiak, M. Ghreline-antagonisme van morfine-geïnduceerde accumbens dopamine-afgifte en gedragstimulatie bij ratten. Psychopharmacology. 2014; 231: 2899-2908
  85. Trigo, JM, Martin-Garcia, E., Berrendero, F., Robledo, P. en Maldonado, R. Het endogene opioïde systeem: een veel voorkomend substraat bij drugsverslaving. Drug Alcohol Depend. 2010; 108: 183-194
  86. Tschop, M., Smiley, DL en Heiman, ML Ghreline induceert adipositas bij knaagdieren. Natuur. 2000; 407: 908-913
  87. Van Ree, JM, Niesink, RJ, Van Wolfswinkel, L., Ramsey, NF, Kornet, MM, Van Furth, WR, Vanderschuren, LJ, Gerrits, MA en Van den Berg, CL Endogene opioïden en beloning. EUR. J. Pharmacol. 2000; 405: 89-101
  88. Wagner, JJ, Terman, GW en Chavkin, C. Endogene dynorfines remmen excitatorische neurotransmissie en blokkeren de LTP-inductie in de hippocampus. Natuur. 1993; 363: 451-454
  89. Wijs, RA Dopamine, leren en motivatie. Nat. Rev Neurosci. 2004; 5: 483-494
  90. Wise, RA en Bozarth, MA Een psychomotorische stimulantentheorie van verslaving. Psychol. Rev. 1987; 94: 469-492
  91. Yoshida, Y., Koide, S., Hirose, N., Takada, K., Tomiyama, K., Koshikawa, N., en Cools, AR Fentanyl verhoogt dopamine-afgifte in rattenucleus accumbens: betrokkenheid van mesolimbische mu- en delta-2-opioïde receptoren. Neuroscience. 1999; 92: 1357-1365