Orexin bemiddelt bij de initiatie van seksueel gedrag bij seksueel naïeve mannelijke ratten, maar is niet cruciaal voor seksuele prestaties (2011)

Horm Behav. Auteur manuscript; beschikbaar in PMC 2011 Aug 1.

Gepubliceerd in definitief bewerkte vorm als:

PMCID: PMC2917508

De definitieve bewerkte versie van dit artikel is beschikbaar op Horm Behav

Zie andere artikelen in PMC dat citeren het gepubliceerde artikel.

Ga naar:

Abstract

Het hypothalamische neuropeptide ofexine medieert opwinding, slaap en natuurlijk belonen gedrag, inclusief voedselinname. Mannelijk seksueel gedrag wordt veranderd door orexin receptor-1 agonisten of antagonisten, wat een rol suggereert voor orexine-A in dit natuurlijk lonende gedrag. De specifieke rol van endogene orexine-A of B in verschillende elementen van mannelijk seksueel gedrag is momenteel echter onduidelijk. Daarom gebruikten de huidige onderzoeken markers voor neurale activering en orexine celspecifieke laesies om de hypothese te testen dat orexine kritisch is voor seksuele motivatie en prestaties bij mannelijke ratten. Eerst werd cFos-expressie in orexine-neuronen gedemonstreerd na presentatie van een receptieve of niet-receptieve vrouw zonder verdere activatie door verschillende elementen van paring. Vervolgens werd de functionele rol van orexine getest met behulp van orexine-B geconjugeerd saporine, resulterend in orexine cellichaamletsels in de hypothalamus. Laesies werden uitgevoerd bij seksueel naïeve mannen en daaropvolgend seksueel gedrag werd geregistreerd tijdens vier paringsproeven. Lesion-mannetjes vertoonden kortere latenties om te monteren en intromiteren tijdens de eerste, maar niet volgende paringsproeven, hetgeen suggereert dat laesies de initiatie van seksueel gedrag bij seksueel naïeve, maar niet-ervaren mannen vergemakkelijkten. Evenzo hadden laesies geen invloed op de seksuele motivatie bij ervaren mannen, bepaald door de runway-tests. Ten slotte toonden verhoogde plus doolhoftests verminderde angstachtig gedrag in gelaesioneerde mannen aan, wat een rol voor orexine bij angst in verband met initiële blootstelling aan het vrouwtje bij naïeve dieren ondersteunt. Al met al laten deze bevindingen zien dat orexine niet cruciaal is voor de seksuele prestaties of motivatie van mannen, maar wel een rol kan spelen bij opwinding en angst gerelateerd aan seksueel gedrag bij naïeve dieren.

sleutelwoorden: orexin, hypocretin, seksueel gedrag, copulatie, neurale activering, motivatie, hypothalamus, nieuwheid, opwinding, angst

Introductie

Orexin, ook bekend als hypocretine, is een hypothalamisch neuropeptide dat van cruciaal belang is voor het voedingsgedrag (de Lecea et al., 1998; Sakurai et al; 1998, Sakurai, 2006; Benoit et al., 2008) opwinding en slaap (Chemelli et al., 1999; Lin et al., 1999, Sakurai, 2007; Furlong en Carrive, 2007; Furlong et al., 2009; Carter et al., 2009). Orexine-neuronen zijn gelokaliseerd in het laterale hypothalamische gebied (LHA) en perifornische dorsomediale hypothalamus (PFA-DMH) en produceren twee neuropeptiden, orexin-A en B (de Lecea et al., 1998; Sakurai et al., 1998). Van Orexin-neuronen is aangetoond dat ze projecteren op hersenstructuren die betrokken zijn bij bemiddeling van opwinding, waaronder de locus coeruleus, tuberomammillary nucleus en peduculopontine tegmental nucleus (Peyron et al., 1998; Hagan et al., 1999; Horvath et al., 1999; Baldo et al., 2003). Orexin is ook betrokken bij beloning en motivatie, specifiek gerelateerd aan voedsel en drugsmisbruik (Aston-Jones et al., 2009a; Aston-Jones et al., 2009b) en orexine-neuronen bleken te projecteren om gerelateerde hersenstructuren in het mesolimbische systeem te belonen, waaronder het ventrale tegmentale gebied (VTA) en nucleus accumbens (NAc) (Peyron et al., 1998; Fadel en Deutch, 2002; Martin et al., 2002; Baldo et al., 2003). Orexine-neuronen worden geactiveerd door geconditioneerde contextuele aanwijzingen in verband met voedsel- en drugsbeloning (Harris et al., 2005; de Lecea et al., 2006; Choi et al., 2010) en er is aangetoond dat het een rol speelt bij op beloning gebaseerd voedingsgedrag (Choi et al., 2010). Bovendien resulteert intracerebroventriculaire (ICV) of intraperitoneale toediening van een orexinereceptor 1 (ORX1) antagonist in verminderde motivatie voor smakelijk voedsel (Thorpe et al., 2005; Nair et al., 2008), terwijl ICV orexin-A administratie deze motivatie kan herstellen (Boutrel et al., 2005).

De rol van orexine in ander belonen gedrag is momenteel onduidelijk, hoewel verschillende studies een rol hebben geïmpliceerd voor orexine in de controle van seksueel gedrag bij mannelijke ratten. Eerder is aangetoond dat orexine neuronen worden geactiveerd door copulatie in mannelijke ratten (Muschamp et al., 2007). Bovendien resulteerde toediening van orexine-A in het mediale preoptische gebied (mPOA) in verbeterde seksuele prestaties, wat blijkt uit verminderde latencies om te monteren en intromit, en verhoogde frequenties van mounts en intromissie (Gulia et al., 2003). ICV-toediening van orexin-A verminderde seksuele motivatie daarentegen door de voorkeur van vrouwen te verminderen, hoewel alleen bij sterk seksueel gemotiveerde mannen (Bai et al., 2009). Studies met ORX1-antagonisten hebben ook tegenstrijdige gegevens aangetoond, aangezien systemische toediening van ORX1-antagonisten de seksuele prestaties lichtelijk verslechteren door latentie tot intromit te verhogen zonder andere parameters van seksueel gedrag te beïnvloeden (Muschamp et al., 2007), terwijl ICV-toediening van ORX1-antagonist geen effect had op seksuele motivatie (Bai et al., 2009). Samen suggereren deze studies dat toediening van exogene orexine-A de seksuele prestaties en motivatie beïnvloedt; endogene orexine speelt mogelijk echter geen belangrijke rol bij het bemiddelen van seksueel gedrag (Bai et al., 2009). Daarom was het doel van de huidige studie om te bepalen of endogene orexine essentieel is voor seksuele motivatie en prestaties van mannelijke ratten.

Ten eerste werd bepaald wanneer tijdens seksueel gedrag orexin neuronen worden geactiveerd, het testen van de hypothese dat orexine neuronen worden geactiveerd bij de introductie van de belonende stimulus. Bovendien, aangezien is aangetoond dat seksuele ervaring de seksuele prestaties beïnvloedt (Dewsbury, 1969) en de lonende eigenschappen van seksueel gedrag (Tenk et al., 2009), werd vastgesteld of seksuele ervaring van invloed is op de activering van neuronen tijdens de paring. Ten slotte werd getest of orexine een cruciale rol speelt in seksuele motivatie en prestaties met behulp van cellichaamspecifieke laesies van orexine neuronen.

Materialen en methoden

Volwassen mannelijke Sprague Dawley-ratten (200-250g) werden verkregen van Harlan (Indianapolis, IN) of Charles River Laboratories (Sherbrooke, Quebec, Canada) en afzonderlijk of in paren ondergebracht, afhankelijk van het individuele experiment (zie hieronder) in plexiglaskooien. De kolonieruimte werd gehandhaafd op een 12 / 12 omgekeerde licht-donkercyclus (licht uit bij 10 am) en voedsel en water waren beschikbaar ad libitum behalve tijdens gedragstesten. Vrouwelijke Sprague-Dawley-ratten werden verkregen van Harlan (Indianapolis, IN) of Charles River Laboratories (Sherbrooke, Quebec, Canada) werden bilateraal geovariëctomiseerd en subcutaan geïmplanteerd met 5% 17-p-oestradiolbenzoaat-silastische capsules. Seksuele ontvankelijkheid werd geïnduceerd door subcutane injecties van progesteron (500 μg in 0.1ml sesamolie), bij benadering 4 h, voorafgaand aan paringssessies. Alle procedures werden goedgekeurd door de Animal Care Committees van de University of Cincinnati en de University of Western Ontario en voldoen aan de richtlijnen van het National Institute of Health en de Canadian Council on Animal Care. Alle gedragstesten werden uitgevoerd tijdens de eerste helft van de donkere fase bij zwak rode verlichting, behalve wanneer anders vermeld.

Experimenteel ontwerp

cFos-expressiestudies

Mannelijke ratten (n = 48) werden individueel gehuisvest en de helft van de dieren kreeg seksuele ervaring in de thuiskooi tijdens 5-sessies van tweemaal per week. Paringstests werden uitgevoerd in de thuiskooi om arousal en cFos-expressie te elimineren die wordt geïnduceerd door blootstelling aan een andere paringsarena en blootstelling aan geconditioneerde aanwijzingen in verband met eerdere paring (Balfour et al., 2004). Een receptieve vrouw werd in de thuiskooi ingebracht en mannen mochten paren tot één ejaculatie of gedurende 60 minuten. Tijdens elke test werd seksueel gedrag waargenomen. Het totale aantal mounts en intromissies, evenals de latencies voor de eerste mount en intromission (de tijd vanaf de presentatie van de receptieve vrouw naar de eerste mount of intromission), en ejaculatie (de tijd vanaf de eerste intromissie tot ejaculatie), werden geregistreerd (Agmo, 1997). De resterende helft van de dieren bleef seksueel naïef. Deze dieren werden gehuisvest in dezelfde kamer als de seksueel ervaren mannetjes, werden behandeld en blootgesteld aan geuren en geluiden in verband met paring, maar deden geen maat. Naïeve en ervaren dieren werden elk verder onderverdeeld in 6-experimentele groepen (n = 4 per groep). De 6-naïeve en ervaren groepen omvatten: Controle mannen zonder blootstelling aan seksueel gedrag (Home Cage); mannen blootgesteld aan een niet-receptieve vrouw in de huiskooi voor 15 minuten (Anestrous Female). Mannen konden onderzoeken en interageren, maar deden niet paren vanwege gebrek aan vrouwelijke ontvankelijkheid; mannen blootgesteld aan de geuren van een ontvankelijk vrouwtje geplaatst in een gaas doos op de top van de huiskooi voor 15 minuten (Estrous Female); mannetjes die mounts vertoonden, maar geen intromissies of ejaculatie met vaginaal gemaskerde vrouwtjes (Mount); mannetjes die alleen mounts en intromissies vertoonden (Intromission); en mannetjes die gepaard aan een ejaculatie (ejaculatie). Een uur na het einde van de test werden mannetjes opgeofferd om de cFos-expressie te analyseren. Seksueel ervaren groepen werden vergeleken op parameters van seksueel gedrag en er waren geen significante verschillen tussen groepen voorafgaand aan de laatste test. Bovendien waren er geen significante verschillen tussen naïeve en ervaren groepen in aantal mounts plus intromissies tijdens de laatste test.

Perfusies: uitdrukking cFos

Alle mannen werden diep geanesthetiseerd met natriumpentobarbitol (270 mg / ml) en werden transcardiaal geperfundeerd met 4% paraformaldehyde (500 mL; PFA). Volgende perfusiehersenen werden onmiddellijk verwijderd en na fixatie gedurende één uur in hetzelfde fixeermiddel vervolgens overgebracht naar 20% sucrose-oplossing voor cryoprotectie. Hersenen werden gesegmenteerd op een bevriezend microtoom (Microm, Walldorf, Duitsland) in coronale coupes van 35 μm en verzameld in 4 parallelle coupes in cryoprotectantoplossing (30% sucrose in 0.1 M PB met 30% ethyleenglycol en 0.01% natriumazide) en opgeslagen bij -20 ° C tot verdere verwerking.

immunohistochemie

Alle incubaties werden uitgevoerd bij kamertemperatuur onder voorzichtig schudden. Vrij zwevende secties werden uitgebreid gewassen met 0.1M saline gebufferd natriumfosfaat (PBS). Secties werden geblokkeerd met 1% H2O2 (30% voorraadoplossing) in PBS voor 10 minuten, daarna uitgebreid opnieuw gespoeld met PBS. Secties werden geïncubeerd met een incubatieoplossing (PBS met 0.1% runderserumalbumine en 0.4% Triton X-100) gedurende 1 uur. Primaire antilichaamincubaties werden overnacht bij kamertemperatuur in de incubatieoplossing uitgevoerd. Volgende kleuringsecties werden gespoeld in PBS, gemonteerd op plus geladen glasplaatjes en afgedekt met dibutylftalaat xyleen (DPX).

cFos / Orexin

Eén reeks secties was immunologisch bewerkt voor cFos en orexine. Secties werden overnacht geïncubeerd met een konijn-verhoogd antilichaam dat cFos herkent (konijn anti-cFos, sc-52; 1: 10 000, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) gevolgd door 1 uur incubaties met gebiotinyleerd geiten-anti-konijn (1: 500 , Vector Laboratories, Burlingame, CA) en een avidine-mierikswortelperoxidasecomplex (1: 1000, ABC-kit, Vector Laboratories, Burlingame, CA). Secties werden gedurende 10 minuten geïncubeerd in 0.02% diaminobenzidine (DAB) (Sigma, St. Louis, MO) in 0.1M fosfaatbuffer (PB) die 0.012% waterstofperoxide en 0.08% nikkelsulfaat bevat, resulterend in een blauwzwart reactieproduct. Secties werden vervolgens overnacht geïncubeerd met een konijn-verhoogd antilichaam dat orexine-A herkent (konijn anti-orexine-A, H-003-30; 1: 20 000, Phoenix Pharmaceuticals, Burlingame, CA) gevolgd door een 1 uur incubatie met gebiotinyleerd geiten-anti -rabbit en ABC, zoals hierboven beschreven. Uiteindelijk werden de coupes gedurende 10 minuten geïncubeerd met 0.02% DAB in 0.1M PB met 0.012% waterstofperoxide, resulterend in een roodachtig bruin reactieproduct.

Alle antilichamen zijn eerder gekarakteriseerd (Chen et al., 1999; Satoh et al., 2004; Solomon et al., 2007). Immunohistochemische controles omvatten weglating van primaire antilichamen, western blot-analyse die enkele banden bij geschikt gewicht demonstreerde (cFos) en verlies van immunohistochemisch orexinesignaal met orexine B-saporine-laesies (orexin).

Data-analyse

cFos / Orexin

Neuronen gelabeld voor orexine of orexine en cFos werden bilateraal geteld in drie representatieve secties per dier waarvan bekend is dat het maximale aantallen van de orexine neuronale populatie bevat (Sakurai et al., 1998) spanning -2.3 mm tot -3.6 mm van bregma (Paxinos en Watson, 1998) (Figuur 1), met behulp van een tekenbuis bevestigd aan een Leica-microscoop (Leica Microsystems; Wetzlar Duitsland), door een waargenomen blind voor experimentele groepen. De PFA-DMH en LHA werden afgebakend op basis van de locatie van de fornix (Figuur 1a). Percentages van orexine-neuronen die cFos tot expressie brachten werden berekend en gemiddeld per halfrond voor elk dier, en groepsgemiddelden werden berekend. Statistische significantie tussen groepen werd bepaald met behulp van een tweezijdige ANOVA met seksuele ervaring en seksueel gedrag tijdens de laatste test als factoren gevolgd door Fisher's LSD-tests met een 95% betrouwbaarheidsniveau.

Figuur 1 

Locatie van orexine neuronen in de hypothalamus. (A) Anatomische locatie van orexine neuronen in de hypothalamus. (Paxinos en Watson, 1998), Schaalbalk: 200 μm. (B) Enkelvoudige gemerkte orexine neuronen in de PFA-DMH in een niet-gem controleerd controledier. (C) Orexin ...

Orexin Lesion Studies

Chirurgie

Mannetjes werden individueel gehuisvest en kregen een pre-test paringssessie met een receptieve vrouw voorafgaand aan laesie en schijnoperatie. Seksueel gedrag werd geregistreerd zoals hierboven beschreven en groepen werden vergeleken op basis van parameters van het paargedrag. Mannelijke ratten werden geanesthetiseerd met isofluraan (Abbot Laboratories, St. Laurent, Quebec, Canada) met behulp van een Surgivet Isotec4-gasapparaat (Smiths Medical Vet Division, Markham, Ontario, Canada) en geplaatst in een stereotaxisch apparaat (Kopf Instruments, Tujunga, CA) met een gasmasker dat de neus en mond bedekt om de anesthesie te behouden. Er werd een incisie gemaakt om de schedel bloot te leggen en lambda en bregma werden gevonden en vastgesteld dat ze waterpas waren. Een gat werd geboord in de schedel met behulp van een dremel boor (Dremel, Racine, WI) en glazen micropipetten (40μm diameter, World Precision Instruments Inc, Sarasota, FL) gevuld met de a-gerichte toxine orexin-B saporine (IT-20, Advanced Targeting Systems, San Diego, CA; 200ng / μL in PBS); of ongeconjugeerd toxine BLANK-saporine (IT-21, Advanced Targeting Systems, San Diego, CA; 200ng / μL in PBS; sham-controles) werden in de hypothalamus verlaagd. Van dit gerichte toxine is aangetoond dat het met een hoge affiniteit bindt aan cellen die orexin receptor 2 (ORX2) tot expressie brengen en met een significant lagere affiniteit voor cellen die ORX1 tot expressie brengen (Gerashchenko et al., 2001), en er is aangetoond dat het specifieke neuronen in de hypothalamus ableert (Frederick-Duus et al., 2007). Bilaterale infusies van 1 μL (2 per halfrond) werden geïnjecteerd op de volgende coördinaten: AP = -2.8 en -3.2; ML = 0.7 en 0.8; DV = -9.0 (Paxinos en Watson, 1998). Na elke infusie werd de naald gedurende 3 minuten op zijn plaats gelaten om diffusie mogelijk te maken. Naalden werden langzaam verwijderd en wonden werden gesloten met wondklemmen. Twee weken na de laesie-operatie werden alle mannen getest op seksuele ervaring tijdens vier paringsproeven en werden ze vervolgens onderworpen aan de runway en / of verhoogde plus doolhoftest (zie hieronder). Operaties werden uitgevoerd in drie verschillende cohorten, gescheiden door verschillende weken, om voldoende aantallen dieren per groep te bereiken.

Seksueel gedrag

Alle mannetjes werden getest op seksueel gedrag tijdens 4-paringsessies die om de dag in de kooi werden gehouden. Tijdens elke sessie werden de mannetjes gepaard met een receptieve vrouw tot een ejaculatie of voor 60 minuten, wat het eerst kwam. Koppelgedrag werd geregistreerd zoals hierboven beschreven en de copulatie-efficiëntie werd ook berekend [aantal intromissies / (aantal mounten + aantal intromissies)]. Statistische verschillen in parameters van seksuele prestaties werden vergeleken tussen laesie- en schijngroepen voor elke test met behulp van een unidirectionele ANOVA met laesiechirurgie als een factor en Fisher's LSD-test met een 95% betrouwbaarheidsniveau, of wanneer geschikte niet-parametrische tests werden uitgevoerd met behulp van een Kruskal-Wallis one-way ANOVA met laesie-operatie als factor en Dunn's test met een 95% betrouwbaarheidsniveau. Bovendien werden gegevens voor elke groep vergeleken met de gegevens van vóór de operatie met behulp van gepaarde t-tests.

Seksuele motivatie: testbaan

Na testen van seksueel gedrag, werd een subgroep van de nu seksueel ervaren mannen getest op seksuele motivatie met behulp van een apparaat met rechte banen (MED Associates Inc., St. Albans, VT) (120 cm lang; Lopez et al., 1999). Mannetjes die gewend zijn aan het runway-apparaat gedurende twee opeenvolgende 10-minutenexperimenten die op dezelfde dag zijn uitgevoerd. Vervolgens werden twee testproeven uitgevoerd. Tijdens de eerste proef, werd een stimulusdier (oer-vrouwtje, anestervrouw of -mannetje) in een doeldoos met geperforeerde verdelers aan het einde van de startbaan geplaatst. Een waaier werd gebruikt om de geuren van de stimulusdieren naar het mannetje te blazen. Experimentele mannetjes werden in de startbox geplaatst, de deur werd geopend om toegang te krijgen tot de startbaan en de tijd om de doelbox te bereiken werd geregistreerd. Zodra ze het doelvak bereikten, kregen mannetjes 30 seconden om te communiceren met het stimulusdier achter het scherm. Een identieke tweede proef volgde 1 uur later. Statistische significantie tussen tijden om het doelvak te bereiken tussen proef 1 en proef 2 werden geanalyseerd met behulp van gepaarde t-testen met een betrouwbaarheidsniveau van 95%. Statistische significantie tussen groepen werd bepaald met behulp van een eenweg-ANOVA met laesie-operatie als een factor gevolgd door Fisher's LSD-testen met een 95% betrouwbaarheidsniveau.

Angstachtig gedrag: verhoogd plus doolhof

Een subgroep van de nu seksueel ervaren mannen werd getest op angstachtig gedrag om te bepalen of de effecten van orexine-laesies op seksuele prestaties of motivatie te wijten waren aan veranderingen in angst of opwinding. Mannetjes werden blootgesteld aan het verhoogde plus doolhofapparaat (EPM; MED Associates Inc., St. Albans, VT) in een helder verlichte kamer gedurende het einde van de lichte fase. De EPM bestond uit 4-armen met elk 50 cm in lengte die zich uitstrekten vanaf een centrale kruising en was verhoogd met 75 cm. Twee armen van het doolhof stonden open voor de buitenomgeving en de andere twee waren ingesloten met een donkere gevelbeplating van 40 cm hoog. Dieren werden op de EPM geplaatst en gedurende vijf minuten gevolgd. Tijd doorgebracht in open en gesloten armen, en het totale aantal items in elke arm werd vastgelegd met behulp van fotobeam-arrays. Statistische significantie tussen groepen werd bepaald met behulp van een éénrichtings-ANOVA met laesie als een factor gevolgd door Fisher's LSD-testen met een 95% betrouwbaarheidsniveau.

Perfusies en paring-geïnduceerde cFos

Na alle gedragstesten werden alle mannen diep geanesthetiseerd met natriumpentobarbitol (270mg / ml) en werden transcardiaal geperfuseerd met 500 ml 4% PFA voor laesieverificatie zoals eerder beschreven. Om de effecten van orexine-laesies op door paring geïnduceerde cFos-expressie te testen, werden bovendien groepen van schijn- en laesie-mannetjes gepaard tot één ejaculatie. Eén uur na ejaculatie werden mannetjes transcardiaal geperfundeerd met 4% PFA zoals hierboven beschreven. De helft van de mannen in deze groep werd niet geïntroduceerd bij een vrouw en werd geperfuseerd vanuit de huiskooi om te dienen als niet-gecontroleerde controles.

immunohistochemie

Hersenen werden gesegmenteerd met behulp van een bevriezend microtoom in een 4 parallelle reeks van 35 μm coronale secties en opgeslagen zoals hierboven beschreven. Voor de verificatie van de laesies werd één reeks secties die de hypothalamus van alle laesie-experimenten bevatten, een enkele gelabeld voor orexine met behulp van hetzelfde konijn anti-orexine-A- en DAB-protocol dat hierboven is beschreven. Eén reeks secties van de dieren die paringen, werd gekleurd voor cFos en orexine zoals hierboven beschreven.

Lesion Verificatie

In elk dier werden aantallen orexine neuronen die immunoreactief waren voor orexine bilateraal geteld in de PFA-DMH en LHA in 3-coupes die maximale aantallen orexin-cellen tot expressie brengen in niet-operatieve controles, -2.3 mm tot -3.6 mm van bregma zoals hierboven beschreven. Cellen per halfrond werden gemiddeld voor elk dier, en groepsgemiddelden werden berekend. Niet-chirurgische controledieren (van cFos-experimenten) werden gebruikt om intacte / basislijnaantallen van orexine-neuronen te bepalen en gegevens werden uitgedrukt als percentages in vergelijking met de niet-operatieve controlemannen (Figuur 2). Mannetjes met minder dan 20% orexin-cellen in vergelijking met niet-chirurgische controledieren werden in de laesiegroep opgenomen. Dieren met meer dan 20%, maar minder dan 80% werden opgenomen in een gedeeltelijke laesiegroep. Sham-controles hadden geen significante veranderingen in het aantal orexinecellen. Statistische significantie tussen schijn-, gedeeltelijke en volledige laesiedieren werd berekend met behulp van een eenwegs ANOVA en Fisher's LSD-test met een 95% betrouwbaarheidsniveau.

Figuur 2 

Laesie verificatie. Representatieve beelden die orexine (A) - en MCH (B) -cellen tonen in een schijn-laesiedier ingespoten met BLANK-saporine. Representatieve beelden die verlies van orexine cellen (C), maar intacte MCH-cellen (D) in een laesiedier geïnjecteerd met orexine laten zien ...

Lesion Specificity

Om te verifiëren dat laesies beperkt waren tot orexine neuronen, werd één reeks secties die de hypothalamus van een subset van schijn- en laesiedieren bevatten (n = 20) immunologisch bewerkt voor melanocyt concentrerend hormoon (MCH), een hypothalamisch peptide dat een overlappende locatie heeft (maar geen colocalisatie) met orexine neuronen (Broberger et al., 1998), met behulp van een konijn-verheven antilichaam herkennend MCH (konijn anti-MCH, H-070-47; 1: 150 000, Phoenix Pharmaceuticals, Burlingame, CA) en DAB zoals eerder beschreven. MCH-neuronen brengen ORX1 tot expressie (Bäckberg et al., 2002) maar niet ORX2 (Volgin et al., 2004), en zijn niet significant verminderd na behandeling met orexine B-saporine (Frederick-Duus et al., 2007). MCH-immuunreactieve cellen werden bilateraal geteld in twee secties per dier (schijnvertoning: n = 7; laesie n = 5), met behulp van afwisselende secties voor die geanalyseerd voor orexine neuronen. Laesies verminderden het aantal MCH-neuronen in PFA-DMH of LHA niet significant (Tabel 1; Figuur 2b, d; PFA-DMH: p = 0.47; LHA: p = 0.33). Verder werd paring geïnduceerde cFos-expressie bilateraal geteld in één representatieve sectie per dier (schijnvertoning: n = 4; lesie n = 3), met behulp van afwisselende secties voor die geanalyseerd voor orexine neuronen. Laesies hadden geen invloed op door paring geïnduceerde cFos-expressie in de PFA-DMH of LHA (Tabel 1; PFA-DMH: p = 0.53; LHA: p = 0.82). Ten slotte werden representatieve secties die werden gebruikt voor orexine celtellingen (dieren: schijnvertoning: n = 6; laesie: n = 6) Nissl tegengekleurd met behulp van cresyl violet (5 g cresylvioletacetaat (C-5042, Sigma, St. Louis, MO), 0.5 g natriumacetaattrihydraat (S209, Thermo Fisher Scientific, Ottawa, Ontario, Canada), 1L dubbel gedestilleerd water met ijsazijn (AX0073-6, EMD Chemicals, Mississauga, Ontario, Canada) bij pH: 3.14). Tellingen van Nissl-gekleurde neuronen werden uitgevoerd in standaard analysegebieden (250 μm x XUMUM μm) op de algemene locatie van orexine neuronen. Aantallen Nissl-gekleurde neuronen verschilden niet tussen schijn- en laesiegroepen (Tabel 1; PFA-DMH: p = 0.23; LHA: p = 0.33).

Tabel 1 

Verificatie van lesiespecificiteit: analyse van het aantal neuronen gekleurd voor Nissl, MCH of paring geïnduceerde cFos toonden aan dat er geen significant verlies van neuronen in het algemeen, MCH-cellen of paring geïnduceerde neurale activatie in de PFA-DMH of ...

Omdat een tekort aan orexine heeft aangetoond dat het bijdraagt ​​aan narcolepsie bij muizen (Chemelli et al., 1999), honden (Lin et al., 1999) en mensen (Siegel, 1999; Nishino et al., 2000; Peyron et al., 2000; Thannickal et al., 2000) dieren werden waargenomen om de afwezigheid van een narcoleptisch fenotype te garanderen. Dieren werden geobserveerd gedurende de duur van alle gedragstests die in dit onderzoek werden gemeld en vertoonden geen kenmerken van narcolepsie.

Door paringen geïnduceerde cFos-expressie in laesiedieren

Aantallen cFos-immunoreactieve cellen werden bilateraal geteld in 3-coupes per dier in standaard analysegebieden in het ventrale tegmentale gebied (VTA; 900 × 900 μm), mPOA (400 x 600 μm); nucleus accumbens (NAc) kern en schil (400 × 600 μm) en de prelimbische, infralimbische en anterior cingulate subregio's van de mediale prefrontale cortex (mPFC) (600 × 800 μm per subregio) door een waargenomen geblindeerde experimentele groep . Tellingen werden gemiddeld voor elk dier en groepsgemiddelden werden berekend. Statistische significantie werd berekend met behulp van een tweezijdige ANOVA met seksuele ervaring en laesie als factoren gevolgd door Fisher's LSD-test met een 95% betrouwbaarheidsniveau.

Resultaten

Activering van Orexin-neuronen tijdens seksueel gedrag

Een significante toename in cFos-expressie in orexine-neuronen werd waargenomen na seksueel gedrag in zowel de PFA-DMH (F(5,31) 63.4; p <0.001; Figuur 3a) en LHA (F(5,31) 10.4; p <0.001; Figuur 3b), zonder effect van seksuele ervaring. Specifiek, in zowel seksueel naïeve als ervaren dieren, vertoonden alle experimentele groepen mannen die verschillende parameters van seksueel gedrag vertoonden (onderzoek van anesthesiemannetje, blootstelling aan oestrische vrouwelijke geuren, weergave van montage, intromissies of ejaculatie) gelijke inductie van cFos vergeleken met thuis kooicontroles met een hoger percentage orexin-cellen geactiveerd in de PFA-DMH (60-80%) versus de LHA (14-33%), zonder verschillen tussen de experimentele groepen. Deze resultaten suggereren dat orexine-neuronen worden geactiveerd na blootstelling aan de stimulus-vrouw zonder verdere activatie tijdens seksuele prestaties. Bovendien is de activatie niet afhankelijk van incentive salience van de vrouwelijke stimulus omdat zowel niet-receptieve als receptieve vrouwtjes activatie in seksueel ervaren mannetjes induceerden.

Figuur 3 

Orexine-neuronen in PFA-DMH (A) en LHA (B) brachten cFos tot expressie volgens alle parameters van het paringsgedrag bij naïeve en ervaren dieren. Afkortingen: HC, thuishaven; AF: anestachtig wijfje; EF, estrous vrouw; M, Mount; IM, Intromission; E, ejaculatie. ...

Effecten van orexine laesies

Seksueel gedrag

Orexin laesies resulteerden in het faciliteren van seksueel gedrag (mount latency: F(2,47) 3.962; p = 0.034; intromission latentie: H = 9.104; p = 0.011). Tijdens de eerste paringsproef vertoonden laesiemannetjes kortere latencies om te koppelen en intromissie in vergelijking met sham-dieren (mount-latency: p = 0.03; intromissielatentie: p = 0.01; Figuur 4a-b) en vergeleken met latenties tijdens de paring van de paring vóór de chirurgie (mount latency: p = 0.02; intromission latentie: p = 0.03; gegevens niet getoond). Gedeeltelijke laesie-mannetjes verschilden niet significant van schijn-mannetjes en geen van de groepen verschilde van de paring van de paring voor de operatie. Effecten van laesies op mount- en intromission-latenties werden verzwakt door seksuele ervaring, omdat er geen verschillen waren tussen de groepen tijdens een van de volgende onderzoeken (in 4 werd trial getoond in Figuur 4a-b). Ejaculatie latenties (Figuur 4c), aantal bevestigingen (Figuur 4d) en intromissies (Figuur 4e) alsmede copulatie-efficiëntie (Figuur 4f) verschilde niet significant tussen de groepen tijdens een van de onderzoeken of binnen elke groep tussen de eerste koppelingsproef en de pre-operatietest.

Figuur 4 

Orexin-laesies verkortten de latenties voor aankoppeling en intromissie bij seksueel naïeve mannen tijdens de proef 1. Orexin-laesies hadden geen invloed op de paring tijdens de proef 4, nadat mannen seksuele ervaring hadden opgedaan. (A) Mount Latency. (B) Intromissielopentie. (C) Ejaculatie ...
Runway-test

Orexin-laesies hadden geen invloed op de seksuele motivatie die werd beoordeeld in een test met een rechte runway bij seksueel ervaren mannetjes. In de loop van twee testproeven liepen laesiemannen significant sneller in de richting van een oestrus in de tweede proef vergeleken met de eerste proef (p = 0.03; Figuur 5). Een dergelijke verhoogde looptijd is een aanwijzing voor seksuele motivatie (Lopez et al., 1999). Gedeeltelijke laesie en schijn-mannetjes liepen ook sneller naar een oestervrouw tijdens de proef 2 (p = 0.03), hoewel dit geen significant effect bereikte bij schijn-mannetjes (p = 0.052). Geen van de groepen vertoonde verhoogde snelheid om naar een anesthesiemannetje of een man te rennen tijdens proef 2. Bovendien werden geen significante verschillen waargenomen tussen schijn, gedeeltelijke en laesie mannetjes op snelheid om naar elk stimulusdier te rennen, noch in 1, noch in proef 2, wat een gebrek aan verschillen in algemene activiteit op de startbaan aantoont.

Figuur 5 

Orexin-laesies hadden geen invloed op de seksuele motivatie bij seksueel getinte mannen. Getoond worden tijden om een ​​estrous vrouw in de baanproef in beide proeven 1 en 2 te bereiken. * duidt op een significante verkorting van de tijd om het vrouwtje in proef 2 te bereiken in vergelijking met ...
Angstachtig gedrag

Resultaten tot dusverre suggereren dat laesies het starten van seksueel gedrag bij naïeve dieren mogelijk maken via een mogelijk effect op reacties op nieuwheid en / of angstachtig gedrag wanneer de mannen een nieuw vrouwtje tegenkomen. Ter ondersteuning vertoonden laesiemannen verminderde angst-achtig gedrag op de EPM, gezien als een verminderd percentage van de tijd doorgebracht in de gesloten armen, (p = 0.012; Figuur 6) en een verhoogd percentage van de tijd op de open armen (p = 0.023; Figuur 6) vergeleken met schijnmannetjes. Gedeeltelijke laesies hadden geen significant effect. Deze gegevens ondersteunen verder dat laesie angstachtig gedrag vermindert.

Figuur 6 

Orexin laesies verminderden angst-achtig gedrag op het verhoogde plus doolhof. Het percentage van de tijd doorgebracht in de gesloten armen (links) was verminderd en het percentage van de tijd in open armen (rechts) was verhoogd bij geblesseerde mannen. * geeft significant verschil aan ...
cFos Expression

Om te beoordelen of endogene orexine bijdraagt ​​aan paring-geïnduceerde neuronale activatie in orexin-geïnnerveerde hersenregio's, werd analyse van paring-geïnduceerde cFos-expressie in de VTA, NAc-kern en -schil, mPOA en de mPFC uitgevoerd. In zowel laesie- als schijnamannen steeg de paring significant de cFos in alle geanalyseerde hersengebieden in vergelijking met niet-gematigde controles (Tabel 2). Laesies hadden geen invloed op neurale activering, omdat schijn- en laesiedieren niet verschilden in baseline of paring-geïnduceerde cFos-expressie.

Tabel 2 

Door paren geïnduceerde cFos in schijn-, gedeeltelijke en lesiegroepen in vergelijking met niet-parende controles van dezelfde laesiestatus.

Discussie

Deze studies onderzochten de rol van endogene orexine in seksuele prestaties en motivatie bij de mannelijke rat. Het bleek dat orexine niet essentieel is voor seksuele motivatie of prestaties. In plaats daarvan worden orexine neuronen geactiveerd door de vrouwelijke stimulus, onafhankelijk van de hormonale status van de vrouwelijke of seksuele ervaring van de man. Bovendien verminderde de verwijdering van endogene orexine door orexine celspecifieke laesies angstachtig gedrag en vergemakkelijkte het initiëren van seksueel gedrag bij seksueel naïeve mannen. Zo ondersteunen de resultaten van deze studie een rol voor orexin bij arousal (de Lecea et al., 2006; Harris en Aston-Jones, 2006; Sakurai, 2007; Boutrel et al., 2009; Furlong en Carrive, 2009; Furlong et al., 2009) en angst (Suzuki et al., 2005; Davis et al, 2009; Li et al., 2010), maar ondersteunen geen kritische rol voor orexin in seksuele motivatie of prestaties.

De resultaten van deze onderzoeken verduidelijken verder de rol van endogene orexine en de schijnbaar tegenstrijdige bevindingen van de eerdere onderzoeken naar de rol van orexine in mannelijk seksueel gedrag met behulp van farmacologische hulpmiddelen. Intra-mPOA-infusies van exogene orexine-A leidden tot verhoogde seksuele opwinding en verbeterde seksuele prestaties, wat suggereert dat orexine in de mPOA kan werken om de motivatie en prestaties van seksueel gedrag te vergroten (Gulia et al., 2003). Integendeel, ICV-infusies van orexin-A verzwakte seksuele motivatie en opwinding (Bai et al., 2009), terwijl een orexinereceptorantagonist geen effect had op seksuele opwinding (Bai et al., 2009), wat aangeeft dat endogene orexine mogelijk geen rol speelt bij seksuele motivatie. Tot slot werd aangetoond dat ORX1-blokkade door systemische injecties de prestaties van de co-medicatie slechts in geringe mate beïnvloedde (Muschamp et al., 2007). Uit deze tegenstrijdige studies kunnen enkele conclusies worden getrokken. Ten eerste kan de toepassing van exogene orexine-A het gedrag beïnvloeden, maar ORX1-blokkade heeft geen grote gevolgen, wat wijst op een ondergeschikte rol voor endogene orexine bij de regulatie van mannelijk seksueel gedrag (Bai et al., 2009). De huidige resultaten ondersteunen deze mogelijkheid. De huidige onderzoeken met behulp van verwijdering van orexine door orexine celspecifieke laesies geven aan dat endogene orexine niet essentieel is voor seksuele motivatie of prestaties, in overeenstemming met waarnemingen door Bai et al (2009). Het is echter belangrijk op te merken dat het ontbreken van effecten van orexine-laesies op seksuele motivatie in de runway mogelijk te wijten is aan het feit dat dieren seksuele ervaring hebben opgedaan voorafgaand aan het testen van seksuele motivatie. Daarom kan een gebrek aan effect in de startbaanproef te wijten zijn geweest tot de seksuele ervaring van de mannen. Toekomstige experimenten kunnen dit voorbehoud verhelpen door de effecten van orexine-laesies op seksuele motivatie bij naïeve mannen te testen.

Het is ook mogelijk dat de twee orexineliganden en de twee subtypes van orexinereceptoren (ORX1 en ORX2; Sakurai et al., 1998) kan seksueel gedrag in tegengestelde richtingen regelen. Door gebruik te maken van orexine cellaesietechnieken, werden de liganden voor beide subtypes van orexinereceptoren (orexine-A en B) geëlimineerd in het huidige onderzoek. De twee receptorsubtypen worden uitgedrukt in verschillende hersengebieden (Trivedi et al., 1998; Marcus et al., 2001) en er is aangetoond dat het geheugen op andere wijze wordt gereguleerd voor cue-geïnduceerde cocaïne-zoekende (Smith et al., 2009). Eerdere studies over seksueel gedrag waren vooral gericht op de rol van orexin-A en ORX1 (zie bovenstaande discussie). De orexinereceptorantagonist SB334867 die tot nu toe in de onderzoeken werd gebruikt, richt zich specifiek op ORX1 met een hoge affiniteit voor orexine-A en significant lagere affiniteit voor orexine-B (Sakurai et al., 1998). Evenzo is orexin-A in eerdere onderzoeken als de exogene orexine gebruikt (Gulia et al., 2003; Bai et al., 2009). Toekomstige studies zijn nodig om de rol van orexine-B en ORX2 in de regulatie van mannelijk seksueel gedrag te onderzoeken.

De huidige studie testte de effecten van langdurige verlies van orexine. Muschamp et al. (2007) suggereerde dat een langdurige vermindering van orexine na castratie het verlies van seksuele motivatie en prestaties kan verklaren. Deze hypothese werd tegengesproken door de huidige bevindingen, omdat orexine cellaesies de seksuele motivatie of prestaties niet verminderden. Het is mogelijk dat het langdurige orexineverlies in het huidige onderzoek kan hebben geresulteerd in compensatiemechanismen, hoewel er geen veranderingen in paring-geïnduceerde neurale activering in het circuit die seksueel gedrag medieert, werden gedetecteerd. Desalniettemin is het duidelijk dat verminderde of afwezigheid van orexine seksueel gedrag niet voorkomt. Bovendien ondersteunen de resultaten van de huidige studie geen belangrijke rol voor orexine bij de inductie van cFos-expressie door seksueel gedrag. Het is duidelijk vastgesteld dat orexine bijdraagt ​​aan de activering van neuronen in de VTA (Korotkova et al., 2003; Borgland et al., 2006; Narita et al., 2006; Vittoz et al., 2008). Orexine cellaesies blokkeerden echter paring-geïnduceerde neurale activering in de VTA, of in enige andere beloningsgerelateerde hersenregio's, ondanks de aanwezigheid van orexine-immuunreactieve vezels in de nabijheid van de geactiveerde neuronen bij schijn-mannetjes. Dus paring-geïnduceerde neurale activering in deze hersengebieden lijkt niet afhankelijk te zijn van orexine werking.

Een enigszins onverwachte bevinding van het huidige onderzoek was het effect van orexine-laesies op het vergemakkelijken van de initiatie van seksueel gedrag bij seksueel-naïeve, maar niet-ervaren dieren. Dit bleek te zijn gecorreleerd met een vermindering van angstachtig gedrag. Daarom kunnen de effecten van orexine-laesies op seksuele motivatie en prestaties ondergeschikt zijn aan de effecten op angst en opwinding. Eerdere studies hebben inderdaad een rol gesuggereerd voor orexine bij angst, omdat ICV-infusie van orexine-A de tijd op de open armen van de EPM bij muizen verminderde (Suzuki et al., 2005). Infusie van orexine-A in de paraventriculaire kern van de thalamus van mannelijke ratten verminderde de tijd doorgebracht in het centrumgebied van een open veldkamer en verminderde nieuwe objectexploratie, wat aangeeft dat orexin mogelijk betrokken is bij het genereren van angstachtig gedrag (Li et al., 2010). Bovendien hebben dominante mannelijke ratten die verhoogde risicobereidheid op de EPM vertonen verhoogde niveaus van ORX1-mRNA in de mPFC (Davis et al., 2009). Het is ook aangetoond dat Orexin de reacties op stress verandert (Ida et al., 1999; Ida et al., 2000), en stimulatie van orexinereceptoren verhoogt de afgifte van corticotropine-afgevende factor (Al-Barazanji et al., 2001; Singareddy et al., 2006), corticosteron (Ida et al., 2000; Kuru et al., 2000) en adrenocorticotroop hormoon (Kuru et al., 2000). Orexine-antagonisten bevinden zich momenteel in klinische onderzoeken voor de behandeling van slapeloosheid, een aandoening die vaak comorbide is met angststoornissen (Sullivan en Neria, 2009), en het is de hypothese dat orexine-antagonisten mogelijk kunnen worden gebruikt om angststoornissen te behandelen (Mathew et al., 2008). Gezien het groeiend aantal bewijzen voor een rol van orexine bij angst en opwinding, lijkt het erop dat letsels de initiatie van seksueel gedrag bij naïeve mannen kunnen vergemakkelijken door het verminderen van angstachtige reacties die gepaard gaan met de introductie van een nieuwe stimulus, dwz het vrouwtje.

Significante activering van orexine-neuronen werd waargenomen na seksuele opwinding en seksueel gedrag bij zowel seksueel naïeve als ervaren dieren in zowel de PFA-DMH als de LHA, met respectievelijk 60-80% en 14-33% orexin-cellen die cFos tot expressie brachten. Er is een hoeveelheid bewijsmateriaal dat een dichotomie ondersteunt in de orexine neuronale functie binnen de orexine celpopulatie, waarbij de PFA-DMH kritisch betrokken is bij opwinding en de LHA cruciaal is voor gedrag gerelateerd aan beloning (Harris et al., 2005; Harris en Aston-Jones, 2006, Aston-Jones, 2009a). Vandaar dat de activering van de PFA-DMH-orexinecellen door de vrouwelijke stimulus de hypothese ondersteunt dat orexine wordt geactiveerd door en cruciaal is voor opwinding, waaronder seksuele opwinding bij naïeve en ervaren mannen en angst geassocieerd met de nieuwe vrouwelijke stimulus bij naïeve mannen. PFA-DMH-cellen werden echter geactiveerd tot vergelijkbare niveaus onafhankelijk van de ervaring van de mannen en de hormonale status van het vrouwtje, wat suggereert dat de PFA-DMH-cellen werden geactiveerd tijdens algemene opwinding en niet specifiek door seksuele opwinding. Bovendien ondersteunen onze studies niet volledig het bestaan ​​van een volledig dichotome orexinecelpopulatie, omdat er een significante activering van de LHA was na blootstelling aan alle parameters van seksuele opwinding en prestaties, ongeacht of het gedrag geassocieerd was met beloning. Ervaren mannetjes blootgesteld aan een aest vrouwelijk wijfje toonden dus gelijke niveaus van orexine celactivatie in LHA vergeleken met ervaren mannen die copuleerden naar ejaculatie. Alleen de laatste groep zal echter een geconditioneerde plaatsvoorkeur voor paring vormen (Tenk et al, 2009); suggererend dat copulatie tot ejaculatie meer lonend is dan andere elementen van paring. Het huidige onderzoek heeft niet specifiek de rol van orexine bij seksuele beloning getest; daarom zijn toekomstige studies nodig om die vraag aan te pakken.

Samengevat tonen de resultaten van deze onderzoeken aan dat orexine niet kritisch is voor seksuele prestaties of motivatie. In plaats daarvan werd aangetoond dat orexine cellaesies de angst verminderen, wat suggereert dat endogene orexine betrokken is bij het verhogen van angst. Bovendien resulteerde de verwijdering van orexine in het vergemakkelijken van de initiatie van seksueel gedrag bij seksueel naïeve mannen, wat suggereert dat endogene orexine initiatie van paring kan remmen, mogelijk door het verhogen van angst als reactie op de nieuwe stimulus, dat wil zeggen de vrouw. Deze bevindingen verduidelijken het neurale circuit dat betrokken is bij seksuele prestaties en angst, en voegen toe aan een groeiend aantal literatuur over de rol van orexine bij bemiddeling van opwinding en angst.

Danksagung

Dit onderzoek werd ondersteund door subsidies van de National Institutes of Health (R01 DA014591), Canadese instituten voor gezondheidsonderzoek (RN 014705) en de National Sciences and Engineering Research Council van Canada (Discovery Grant (341710) tot LMC).

voetnoten

Disclaimer uitgever: Dit is een PDF-bestand van een onbewerkt manuscript dat is geaccepteerd voor publicatie. Als service aan onze klanten bieden wij deze vroege versie van het manuscript. Het manuscript zal een copy-editing ondergaan, een typografie en een review van het resulterende bewijs voordat het in zijn definitieve citeervorm wordt gepubliceerd. Houd er rekening mee dat tijdens het productieproces fouten kunnen worden ontdekt die van invloed kunnen zijn op de inhoud en alle wettelijke disclaimers die van toepassing zijn op het tijdschrift.

Referenties

  1. Agmo A. Mannelijk seksueel gedrag van ratten. Brain Res Brain Res Protoc. 1997, 1: 203-209. [PubMed]
  2. Al-Barazanji KA, Wilson S, Baker J, Jessop DS, Harbuz MS. Centraal orexine-A activeert de hypothalamus-hypofyse-bijnieras en stimuleert de hypothalamische corticotropine afgevende factor en arginine vasopressine-neuronen bij bewuste ratten. J Neuroendocrinol. 2001, 13: 421-424. [PubMed]
  3. Aston-Jones G, Smith RJ, Moorman DE, Richardson KA. De rol van laterale hypothalamische orexine neuronen bij beloningsverwerking en verslaving. Neurofarmacologie. 2009a; 56 Suppl 1: 112-121. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  4. Aston-Jones G, Smith RJ, Sartor GC, Moorman DE, Massi L, Tahsili-Fahadan P, Richardson KA. Laterale hypothalamische orexine / hypocretine neuronen: een rol bij beloning zoeken en verslaving. Brain Res. 2009b; 1314: 74-90. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  5. Bai YJ, Li YH, Zheng XG, Han J, Yang XY, Sui N. Orexin A verzwakt ongeconditioneerde seksuele motivatie bij mannelijke ratten. Pharmacol Biochem Behav. 2009, 91: 581-589. [PubMed]
  6. Bäckberg M, Hervieu G, Wilson S, Meister B. Orexin receptor-1 (OX-R1) immunoreactiviteit bij chemisch geïdentificeerde neuronen van de hypothalamus: focus op orexin-doelen betrokken bij de beheersing van voedsel- en waterinname. Eur J. Neurosci. 2002, 15: 315-328. [PubMed]
  7. Baldo BA, Daniel RA, Berridge CW, Kelley AE. Overlappende verdelingen van orexin / hypocretine en dopamine-beta-hydroxylase immunoreactieve vezels in rattenhersenregio's die opwinding, motivatie en stress mediëren. J Comp Neurol. 2003, 464: 220-237. [PubMed]
  8. Balfour ME, Yu L, Coolen LM. Seksueel gedrag en seksgerelateerde omgevingsfactoren activeren het mesolimbische systeem bij mannelijke ratten. Neuropsychopharmacology. 2004, 29: 718-730. [PubMed]
  9. Benoit SC, Tracy AL, Davis JF, Choi D, Clegg DJ. Nieuwe functies van orexigenic hypothalamic peptides: van genen tot gedrag. Voeding. 2008, 24: 843-847. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  10. Borgland SL, Taha SASF, Fields HL, Bonci A. Orexin A in de VTA is van cruciaal belang voor de inductie van synaptische plasticiteit en gedragssensibilisatie voor cocaïne. Neuron. 2006, 49 (4) 589-601. [PubMed]
  11. Boutrel B, Cannella N, de Lecea L. De rol van hypocretine bij het stimuleren van opwinding en doelgericht gedrag. Brain Res. 2009 [PMC gratis artikel] [PubMed]
  12. Boutrel B, Kenny PJ, Specio SE, Martin-Fardon R, Markou A, Koob GF, de Lecea L. De rol voor hypocretine bij het veroorzaken van stress-geïnduceerde herstel van cocaïne-zoekgedrag. Proc Natl Acad Sci US A. 2005; 102: 19168-19173. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  13. Broberger C, De Lecea L, Sutcliffe JG, Hokfelt T. Hypocretine / orexine- en melanine-concentrerende hormoon-exprimerende cellen vormen verschillende populaties in de laterale hypothalamus van het knaagdier: relatie tot de neuropeptide Y- en agouti-gen-gerelateerde eiwitsystemen. J Comp Neurol. 1998, 402: 460-474. [PubMed]
  14. Carter ME, Borg JS, de Lecea L. De hypocretinen in de hersenen en hun receptoren: bemiddelaars van allostatische opwinding. Curr Opin Pharmacol. 2009, 9: 39-45. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  15. Chemelli RM, Willie JT, Sinton CM, Elmquist JK, Scammell T, Lee C, Richardson JA, Williams SC, Xiong Y, Kisanuki Y, Fitch TE, Nakazato M, Hammer RE, Saper CB, Yanagisawa M. Narcolepsie in orexine knock-out muizen : moleculaire genetica van slaapregulatie. Cel. 1999, 98: 437-451. [PubMed]
  16. Chen CT, Dun SL, Kwok EH, Dun NJ, Chang JK. Orexine A-achtige immunoreactiviteit in de hersenen van de rat. Neurosci Lett. 1999, 260: 161-164. [PubMed]
  17. Choi DL, Davis JF, Fitzgerald ME, Benoit SC. De rol van orexine-A in voedselmotivatie, op beloning gebaseerd voedingsgedrag en voedselgeïnduceerde neuronale activering bij ratten. Neuroscience. 2010, 167: 11-20. [PubMed]
  18. Davis JF, Krause EG, Melhorn SJ, Sakai RR, Benoit SC. Dominante ratten zijn natuurlijke risiconemers en vertonen een verhoogde motivatie voor voedselbeloning. Neuroscience. 2009, 162: 23-30. [PubMed]
  19. de Lecea L, Jones BE, Boutrel B, Borgland SL, Nishino S, Bubser M, DiLeone R. Verslaving en opwinding: alternatieve rollen van hypothalamische peptiden. J. Neurosci. 2006, 26 (41) 10372-10375. [PubMed]
  20. de Lecea L, Kilduff TS, Peyron C, Gao X, Foye PE, Danielson PE, Fukuhara C, Battenberg EL, Gautvik VT, Bartlett FS, 2nd, Frankel WN, van den Pol AN, Bloom FE, Gautvik KM, Sutcliffe JG. De hypocretinen: hypothalamus-specifieke peptiden met neuro-exciterende activiteit. Proc Natl Acad Sci US A. 1998; 95: 322-327. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  21. Dewsbury DA. Copulerend gedrag van ratten (Rattus norvegicus) als een functie van eerdere copulatory ervaring. Anim Behav. 1969, 17: 217-223. [PubMed]
  22. Fadel J, Deutch AY. Anatomische substraten van orexine-dopamine-interacties: laterale hypothalamische projecties op het ventrale tegmentale gebied. Neuroscience. 2002, 111: 379-387. [PubMed]
  23. Frederick-Duus D, Guyton MF, Fadel J. Door voedsel veroorzaakte verhogingen van afgifte van corticale acetylcholine vereisen transmissie van orexine. Neuroscience. 2007, 149: 499-507. [PubMed]
  24. Furlong TM, Carrive P. Neurotoxische laesies gecentreerd op de perifornische hypothalamus schaffen de cardiovasculaire en gedragsreacties van geconditioneerde angst af op de context maar niet op terughoudendheid. Brain Res. 2007, 1128: 107-119. [PubMed]
  25. Furlong TM, Vianna DM, Liu L, Carrive P. Hypocretine / orexine draagt ​​bij aan de expressie van sommige maar niet alle vormen van stress en opwinding. Eur J Neurosci. 2009, 8: 1603-1614. [PubMed]
  26. Gerashchenko D, Kohls MD, Greco M, Waleh NS, Salin-Pascual R, Kilduff TS, Lappi DA, Shiromani PJ. Hypocretine-2-saporine-laesies van de laterale hypothalamus produceren narcoleptisch-achtig slaapgedrag bij de rat. J Neurosci. 2001, 21: 7273-7283. [PubMed]
  27. Gulia KK, Mallick HN, Kumar VM. Orexin A (hypocretine-1) -toepassing op het mediale preoptische gebied versterkt mannelijk seksueel gedrag bij ratten. Neuroscience. 2003, 116: 921-923. [PubMed]
  28. Hagan JJ, Leslie RA, Patel S, Evans ML, Wattam TA, Holmes S, Benham CD, Taylor SG, Routledge C, Hemmati P, Munton RP, Ashmeade TE, Shah AS, Hatcher JP, Hatcher PD, Jones DN, Smith MI , Piper DC, Hunter AJ, Porter RA, Upton N. Orexin A activeert locus coeruleus celverbranding en verhoogt de opwinding bij de rat. Proc Natl Acad Sci US A. 1999; 96: 10911-10916. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  29. Harris GC, Aston-Jones G. Opwinding en beloning: een dichotomie in orexine-functie. Trends Neurosci. 2006, 29: 571-577. [PubMed]
  30. Harris GC, Wimmer M, Aston-Jones G. Een rol voor laterale hypothalamische orexine neuronen bij beloning zoeken. Natuur. 2005, 437 (7058) 556-559. [PubMed]
  31. Horvath TL, Peyron C, Diano S, Ivanov A, Aston-Jones G, Kilduff TS, van Den Pol AN. Hypocretine (orexine) activering en synaptische innervatie van het locus coeruleus noradrenerge systeem. J Comp Neurol. 1999, 415: 145-159. [PubMed]
  32. Ida T, Nakahara K, Katayama T, Murakami N, Nakazato M. Effect van laterale cerebroventriculaire injectie van het eetluststimulerende neuropeptide, orexine en neuropeptide Y, op de verschillende gedragsactiviteiten van ratten. Brain Res. 1999, 821: 526-529. [PubMed]
  33. Ida T, Nakahara K, Murakami T, Hanada R, Nakazato M, Murakami N. Mogelijke betrokkenheid van orexine bij de stressreactie bij ratten. Biochem Biophys Res Commun. 2000, 270: 318-323. [PubMed]
  34. Korotkova TM, Sergeeva OA, Eriksson KS, Haas HL, Brown RE. Excitatie van ventrale tegmentale gebieden dopaminerge en niet-dopaminergische neuronen door orexins / hypocretinen. J Neurosci. 2003, 23 (1) 7-11. [PubMed]
  35. Kuru M, Ueta Y, Serino R, Nakazato M, Yamamoto Y, Shibuya I, Yamashita H. Centraal toegediende orexin / hypocretine activeert de HPA-as in ratten. NeuroReport. 2000, 11: 1977-1980. [PubMed]
  36. Li Y, Li S, Wei C, Wang H, Sui N, Kirouac GJ. Veranderingen in emotioneel gedrag geproduceerd door orexine micro-injecties in de paraventriculaire kern van de thalamus. Pharmacol Biochem Behav. 2010, 95: 121-128. [PubMed]
  37. Lin L, Faraco J, Li R, Kadotani H, Rogers W, Lin X, Qiu X, de Jong PJ, Nishino S, Mignot E. De slaapstoornis canine narcolepsie wordt veroorzaakt door een mutatie in het hypocretine (orexin) receptor 2 gen . Cel. 1999, 98: 365-376. [PubMed]
  38. Lopez HH, Olster DH, Ettenberg A. Seksuele motivatie bij de mannelijke rat: de rol van primaire prikkels en copulatory ervaring. Horm Behav. 1999, 36: 176-185. [PubMed]
  39. Marcus JN, Aschkenasi CJ, Lee CE, Chemelli RM, Saper CB, Yanagisawa M, Elmquist JK. Differentiële expressie van orexine-receptoren 1 en 2 in het brein van de rat. J Comp Neurol. 2001, 435: 6-25. [PubMed]
  40. Martin G, Fabre V, Siggins GR, de Lecea L. Interactie van de hypocretinen met neurotransmitters in de nucleus accumbens. Regul Pept. 2002, 104: 111-117. [PubMed]
  41. Mathew SJ, Price RB, Charney DS. Recente ontwikkelingen in de neurobiologie van angststoornissen: implicaties voor nieuwe therapieën. Am J Med Genet C Semin Med Genet. 2008; 148C: 89-98. [PubMed]
  42. Muschamp JW, Dominguez JM, Sato SM, Shen RY, Hull EM. Een rol voor hypocretine (orexine) in mannelijk seksueel gedrag. J Neurosci. 2007, 27: 2837-2845. [PubMed]
  43. Nair SG, Golden SA, Shaham Y. Differentiële effecten van de hypocretine 1-receptorantagonist SB 334867 op vetrijke voedselzelftoediening en herstel van het zoeken naar voedsel bij ratten. Br J Pharmacol. 2008, 154: 406-416. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  44. Narita M, Nagumo Y, Hashimoto S, Khotib J, Miyatake M, Sakurai T, Yanagisawa M, Nakamachi T, Shioda S, Suzuki T. Directe betrokkenheid van orexinergische systemen bij de activering van de mesolimbische dopamineroute en gerelateerd gedrag geïnduceerd door morfine. J Neurosci. 2006, 26: 398-405. [PubMed]
  45. Nishino S, Ripley B, Overeem S, Lammers GJ, Mignot E. Hypocretine (orexine) tekort in menselijke narcolepsie. Lancet. 2000, 355: 39-40. [PubMed]
  46. Paxinos G, Watson C. De hersenen van ratten in stereotaxische coördinaten. San Diego, CA: Academic Press; 1998.
  47. Peyron C, Faraco J, Rogers W, Ripley B, Overeem S, Charnay Y, Nevsimalova S, Aldrich M, Reynolds D, Albin R, Li R, Hungs M, Pedrazzoli M, Padigaru M, Kucherlapati M, Fan J, Maki R , Lammers GJ, Bouras C, Kucherlapati R, Nishino S, Mignot E. Een mutatie in een geval van vroeg optredende narcolepsie en een gegeneraliseerde afwezigheid van hypocretinepeptiden in menselijke narcoleptische hersenen. Nat Med. 2000, 6: 991-997. [PubMed]
  48. Peyron C, Tighe DK, van den Pol AN, de Lecea L, Heller HC, Sutcliffe JG, Kilduff TS. Neuronen die hypocretine (orexine) bevatten, projecteren naar meerdere neuronale systemen. J Neurosci. 1998, 18: 9996-10015. [PubMed]
  49. Sakurai T. Rollen orexins en orexin receptoren in centrale regulatie van voedingsgedrag en energiehomeostase. CNS Neurol Disord Drug Targets. 2006, 5: 313-325. [PubMed]
  50. Sakurai T. Het neurale circuit van orexin (hypocretine): behoud van slaap en wakker zijn. Nat Rev Neurosci. 2007, 8: 171-181. [PubMed]
  51. Sakurai T, Amemiya A, Ishii M, Matsuzaki I, Chemelli RM, Tanaka H, ​​Williams SC, Richardson JA, Kozlowski GP, Wilson S, Arch JR, Buckingham RE, Haynes AC, Carr SA, Annan RS, McNulty DE, Liu WS , Terrett JA, Elshourbagy NA, Bergsma DJ, Yanagisawa M. Orexins en orexin-receptoren: een familie van hypothalamische neuropeptiden en G-eiwit-gekoppelde receptoren die het voedingsgedrag reguleren. Cel. 1998, 92: 573-585. [PubMed]
  52. Satoh S, Matsumura H, Fujioka A, Nakajima T, Kanbayashi T, Nishino S, Shigeyoshi Y, Yoneda H. FOS-expressie in orexine-neuronen na muscimolperfusie van het preoptische gebied. NeuroReport. 2004, 15: 1127-1131. [PubMed]
  53. Siegel JM. Narcolepsie: een sleutelrol voor hypocretinen (orexins) Cel. 1999, 98: 409-412. [PubMed]
  54. Singareddy R, Uhde T, Commissaris R. Differentiële effecten van hypocretinen op alleen-ruis versus versterkte schrikreacties. Physiol Behav. 2006, 89: 650-655. [PubMed]
  55. Smith RJ, zie RE, Aston-Jones G. Orexin / hypocretine signalering aan de orexin 1-receptor reguleert cue-opwekkende cocaïne-zoeken. Eur J Neurosci. 2009, 30: 493-503. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  56. Solomon A, De Fanti BA, Martinez JA. Perifere ghreline interageert met orexine neuronen in glucostatic signalering. Regul Pept. 2007, 144: 17-24. [PubMed]
  57. Sullivan GM, Neria Y. Farmacotherapie bij posttraumatische stressstoornis: bewijs uit gerandomiseerde gecontroleerde studies. Curr Opin Investig Drugs. 2009, 10: 35-45. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  58. Suzuki M, Beuckmann CT, Shikata K, Ogura H, Sawai T. Orexin-A (hypocretine-1) is mogelijk betrokken bij het genereren van angstachtig gedrag. Brain Res. 2005, 1044: 116-121. [PubMed]
  59. Tenk CM, Wilson H, Zhang Q, Pitchers KK, Coolen LM. Seksuele beloning bij mannelijke ratten: effecten van seksuele ervaring op geconditioneerde plaatsvoorkeuren geassocieerd met ejaculatie en intromissies. Horm Behav. 2009, 55: 93-97. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  60. Thannickal TC, Moore RY, Nienhuis R, Ramanathan L, Gulyani S, Aldrich M, Cornford M, Siegel JM. Gereduceerd aantal hypocretine-neuronen bij menselijke narcolepsie. Neuron. 2000, 27: 469-474. [PubMed]
  61. Thorpe AJ, Cleary JP, Levine AS, Kotz CM. Centraal toegediende orexine A verhoogt de motivatie voor zoete pellets bij ratten. Psychopharmacology (Berl) 2005; 182: 75-83. [PubMed]
  62. Trivedi P, Yu H, MacNeil DJ, Van der Ploeg LH, Guan XM. Verdeling van orexine receptor-mRNA in de hersenen van de rat. FEBS Lett. 1998, 438: 71-75. [PubMed]
  63. Vittoz NM, Schmeichel B, Berridge CW. Hypocretine / orexine activeert bij voorkeur caudomediale ventrale tegmentale gebied dopamine neuronen. Eur J Neurosci. 2008, 28: 1629-1640. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  64. Volgin DV, Swan J, Kubin L. RT-PCR-genexpressieprofilering met enkele cel van acuut. gedissocieerde en immunocytochemisch geïdentificeerde centrale neuronen. J. Neurosci-methoden. 2004, 136: 229-236. [PubMed]