Endogenna neuroplastyczność neuronów dopaminergicznych indukowana przez opioidy w brzusznym obszarze nakrywkowym wpływa na nagrodę naturalną i opiatową (2014)

KOMENTARZE: Często cytowane przez nas badania dotyczące DeltaFosB koncentrowały się na jądrze półleżącym (ośrodku nagrody) i wykazały, że seks uruchamia praktycznie te same mechanizmy mózgowe, co metamfetamina i kokaina. Z przełomowego badania tego samego badacza ( Natural and Drug Rewards Act on Common Neural Plasticity Mechanisms with ΔFosB as a Key Mediator (2013) ):

Zatem nagrody naturalne i narkotykowe nie tylko zbiegają się na tej samej ścieżce neuronowej, ale zbiegają się na tych samych mediatorach molekularnych i prawdopodobnie w tych samych neuronach w Nucleus Accumbens, aby wpłynąć na istotność motywacji i „chcenie” obu typów nagród

Odbieranie: metamfetamina, kokaina i seks - wszystkie te same podstawowe rzeczy działają na te same komórki nerwowe w centrum nagrody (jądro półleżące), niezależnie od tego, co robią inaczej w innych częściach mózgu. To zlikwidowało zwykłe gadanie, że naturalne nagrody i narkotyki różnią się mechanizmami i efektami.

W nowym badaniu zbadano wpływ seksu na VTA. VTA to miejsce, w którym rozpoczynają się komórki nerwowe produkujące dopaminę – i rozgałęziają się do jądra półleżącego, kory czołowej i ciała migdałowatego. Zasadniczo VTA jest źródłem (źródłem) większości naszej dopaminy. Zobacz te dwa zdjęcia układu nagrody: Pic1 , Pic2

Naukowcy odkryli, że seks (orgazm) powoduje tymczasowe kurczenie się ciał komórek w VTA (u mężczyzn). Ciała komórek i ich dendryty tworzą istotę szarą mózgu. Dokładnie to samo dzieje się z uzależnieniem od heroiny w VTA (nie chodzi o jednorazowe użycie heroiny, ale o jej przewlekłe używanie). Należy zauważyć, że takie samo kurczenie się ciał komórek VTA występuje u osób uzależnionych od heroiny.

Skurcz komórek indukowany przez seks utrzymuje się przez co najmniej 7 dni. Zmiany indukowane przez płeć powróciły do ​​normy w 30 dni, ale naukowcy oceniali tylko dni 1, 7 i 30.

Kurczenie się ciał komórek w uzależnieniu od heroiny prowadzi do obniżenia poziomu dopaminy w jądrze półleżącym – czyli do tzw. desensytyzacji . Naukowcy podali szczurom morfinę, aby ocenić ich reakcję (po stosunku), ale nic się nie zmieniło. Zazwyczaj szczury bardzo lubią morfinę, ale w tym przypadku zostały tymczasowo odczulone. Krótko mówiąc, układ nagrody u szczurów po ejakulacji nie reagował na niski poziom heroiny. Naukowcy przypuszczali, że do wywołania „normalnej” reakcji u szczurów potrzebne będą wyższe dawki.

Podsumowując - seks (tymczasowo) robi dokładnie to samo w VTA, co uzależnienie od heroiny: kurczenie się ciał komórek nerwowych wytwarzających dopaminę. Prowadzi to do obniżenia poziomu dopaminy w ośrodku nagrody i mniejszej wrażliwości na narkotyki - a regeneracja mózgów szczurów zajmuje co najmniej 7 dni.

 

J Neurosci. 2014 25 czerwca;34(26):8825-36 . doi: 10.1523/JNEUROSCI.0133-14.2014.

Dzbany KK1, Coppens CM2, Beloate LN3, Fuller J.2, Van S2, Frohmader KS2, Laviolette SR2, Lehman MN4, Coolen LM5.

Abstrakcja

Naturalne nagrody i substancje psychoaktywne działają na szlaku mezolimbicznym i aktywują wspólny mechanizm plastyczności neuronalnej w jądrze półleżącym. Przewlekła ekspozycja na opiaty indukuje plastyczność neuronów dopaminergicznych brzusznego pola nakrywki (VTA), która reguluje tolerancję na nagrodę w postaci morfiny.

Tutaj testujemy hipotezy, że wywołane przez krycie uwalnianie endogennych opioidów w VTA powoduje zmiany morfologiczne komórek dopaminy VTA u samców szczurów, co z kolei reguluje długotrwałą ekspresję wywołanego doświadczeniem wzmocnienia zachowań seksualnych.

Po pierwsze, doświadczenia seksualne zmniejszały wielkość somy dopaminowej VTA w 1. i 7. dniu, ale nie 30 dni po ostatniej sesji kopulacyjnej . Efekt ten blokowano naloksonem przed każdą sesją kopulacyjną; zatem plastyczność komórek dopaminowych VTA była zależna od działania endogennych opioidów.

Z kolei plastyczność VTA wiązała się ze zmianą nagrody od opiatów, ponieważ samce doświadczane seksualnie nie tworzyły warunkowej preferencji miejsca dla morfiny 0.5 mg / kg.

Następnie określono, czy endogenne działanie opioidów pośredniczy w nagradzaniu i zapamiętywaniu zachowań seksualnych u samców szczurów leczonych naloksonem podczas doświadczeń godowych, zarówno ogólnoustrojowo, jak i dożylnie. Nalokson nie zapobiegał początkowemu, indukowanemu doświadczeniem ułatwieniu zachowań seksualnych w trakcie powtarzanych sesji godowych ani warunkowej preferencji miejsca dla kopulacji. Jednak leczenie naloksonem osłabiło długoterminową ekspresję indukowanego doświadczeniem ułatwienia zachowań seksualnych oraz aktywację neuronalną w obszarach mezolimbicznych, indukowaną przez bodźce warunkowe związane z kopulacją.

Łącznie, te dane pokazują, że endogenne opioidy podczas krycia indukują plastyczność neuronów w neuronach dopaminy VTA, które wydają się krytyczne dla nagrody morfinowej i pamięci długotrwałej dla zachowania naturalnej nagrody.

 

Wprowadzenie

Naturalne zachowania nagród są mediowane przez system mezokortykolimbiczny (Meisel i Mullins, 2006; Hoebel i wsp., 2009; Frohmader i wsp., 2010a; Pitchers i wsp., 2010a; Young i wsp., 2011; Blum i wsp., 2012). Leki nadużywania powodują zmiany neurologiczne w tym systemie, co z kolei przyczynia się do rozwoju i wyrażania nadużywania substancji (Hyman i wsp., 2006; Nestler, 2012). Wcześniej stwierdziliśmy, że doświadczenie z naturalnymi zachowaniami nagród, tj. Doświadczeniem seksualnym u samców szczurów, powoduje również plastyczność nerwową w jądrze półleżącym (NAc), w tym zwiększone kolce dendrytyczne (Pitchers i wsp., 2010a) i deltaFosB (Pitchers i wsp., 2013). Z kolei ta plastyczność wywołana przez seks ma kluczowe znaczenie dla efektów doświadczenia seksualnego w późniejszym kryciu, przejawiającym się w ułatwianiu inicjacji i wykonywaniu zachowań seksualnych (Pitchers i wsp., 2010b, 2012, 2013). Ponadto doświadczenie seksualne zmienia wrażliwość na środki psychostymulujące, w tym uwrażliwienie na aktywność lokomotoryczną i zwiększoną nagrodę (Frohmader i wsp., 2010a; Pitchers i wsp., 2010a, 2013).

NAc jest jednym z dalszych celów neuronów dopaminergicznych w brzusznym obszarze nakrywki (VTA). Neurony dopaminowe VTA są aktywowane podczas godów i po ekspozycji na bodźce warunkowe przewidujące nagrodę seksualną ( Balfour i in., 2004 ; Frohmader i in., 2010a ), poprzez wiązanie endogennego peptydu opioidowego (EOP) z receptorami μ-opioidowymi (MOR; Matthews i German, 1984 ; Johnson i North, 1992 ; Klitenick i in., 1992 ; Ikemoto i in., 1997 ; Balfour i in., 2004 ). W związku z tym narażenie na bodźce warunkowe przewidujące zachowanie seksualne powoduje uwolnienie EOP i aktywację komórek dopaminowych VTA, co ułatwia motywację seksualną ( Mitchell i Stewart, 1990 ; van Furth i in., 1995 ; van Furth i van Ree, 1996 ) oraz uwalnianie dopaminy w NAc ( Fiorino i in., 1997 ).

Powtarzające się narażenie na egzogenne opiaty powoduje zmiany morfologiczne w VTA ( Mazei-Robison i in., 2011 ; Mazei-Robison i Nestler, 2012 ), zmniejszenie rozmiaru somy neuronów dopaminowych VTA ( Sklair-Tavron i in., 1996 ; Spiga i in., 2003 ; Chu i in., 2007 ; Russo i in., 2007 ; Mazei-Robison i in., 2011 ), zmniejszenie poziomów białek neurofilamentowych ( Beitner-Johnson i in., 1992 ), zwiększenie pobudliwości komórek dopaminowych i zmniejszenie transportu aksoplazmatycznego i wyrzutu dopaminy do NAc ( Beitner-Johnson i in., 1992 ; Mazei-Robison i in., 2011 ). Te zmiany w neuronach dopaminowych VTA powodują tolerancję na morfinę i są przejściowe, ponieważ zanikają w ciągu miesiąca od odstawienia narkotyków ( Russo i in., 2007 ). Obecnie nie jest jasne, czy plastyczność neuronów dopaminowych VTA jest charakterystyczna dla działania opiatów, czy też jest również wynikiem uwalniania EOP podczas naturalnych zachowań nagradzających.

Tutaj testujemy hipotezę, że naturalne doświadczenie nagrody powoduje neuroplastyczność podobną do tej powodowanej przez opiaty, a zatem, że opiaty zbiegają się na mechanizmie plastyczności, który jest krytyczny dla naturalnego zachowania nagrody i nagrody. Testujemy, czy doświadczenie seksualne u samców szczurów zmniejsza wielkość soma neuronów dopaminowych VTA poprzez proces zależny od działania EOP w VTA. Ponadto badamy, czy zmiany indukowane przez EOP w neuronach dopaminowych VTA są związane ze wzmocnieniem naturalnych zachowań nagradzających i przypisaniem zachęt do sygnałów związanych z naturalną nagrodą, a jednocześnie powodują tolerancję krzyżową na nagrodę morfiny.

Materiały i Metody

Zwierzęta

Dorosłe samce szczurów rasy Sprague-Dawley (200–225 g) pozyskano z Charles River i trzymano parami w sztucznie oświetlonych pomieszczeniach, w 12-godzinnym cyklu światło/ciemność we wszystkich eksperymentach (światło gaszone o godzinie 10:00 rano, z wyjątkiem eksperymentu z tolerancją na morfinę, o godzinie 17:00). Pokarm i woda były dostępne ad libitum, z wyjątkiem testów behawioralnych. Samice będące obiektem stymulacji przeszły owariektomię i wszczepiono im podskórnie kapsułki SILASTIC (średnica wewnętrzna 1.98 mm, długość 0.5 cm, Dow-Corning) z 5% benzoesanem 5-β-estradiolu. Zastrzyki progesteronu (podskórnie, 500 μg w 0.1 ml oleju sezamowego) podawano 3–6 godzin przed testem w celu wywołania podatności seksualnej. Wszystkie procedury zostały zatwierdzone przez komisje ds. opieki nad zwierzętami Uniwersytetu Western Ontario i Uniwersytetu Michigan i są zgodne z wytycznymi Kanadyjskiej Rady ds. Opieki nad Zwierzętami oraz Narodowych Instytutów Zdrowia dotyczącymi badań na zwierzętach kręgowych.

Przebieg czasowy zmian wielkości soma dopaminy VTA

Codzienne sesje godowe.

Aby zbadać przebieg zmian wielkości somy neuronów dopaminowych w VTA, zwierzęta doświadczone seksualnie i naiwne zostały uśmiercone w 1., 7. lub 31. dniu ( n = 5–8 w każdej grupie) po ostatnim dniu krycia (doświadczone) lub dotykania (naiwne). Grupy z doświadczeniem seksualnym zostały dopasowane pod względem zachowań seksualnych podczas ostatniej sesji krycia, a także pod względem całkowitej liczby ejakulacji w ciągu pięciu sesji (średnio 5 dla każdej grupy) i nie różniły się pod względem żadnego parametru zachowań seksualnych.

Sesje godowe.

Samce, które nie miały doświadczenia seksualnego, przydzielono do jednego z dwóch warunków eksperymentalnych: naiwne lub doświadczone seksualnie. Zwierzętom, które miały doświadczenie seksualne, pozwolono kopulować pięć razy w kolejnych dniach z otwartymi samicami w prostokątnych klatkach testowych (60 × 45 × 50 cm) do momentu wystąpienia ejakulacji lub do 1 godziny (w zależności od tego, co nastąpiło wcześniej). Klatki dokładnie czyszczono 70% roztworem etanolu, a między sesjami kopulacji dodawano świeżą ściółkę. Zachowania seksualne obserwowano w fazie ciemności (2–6 godzin po zapadnięciu ciemności). Tylko zwierzęta, które miały ejakulację podczas co najmniej czterech z pięciu sesji kopulacji, uznawano za doświadczone seksualnie i włączano do eksperymentów. Wszystkie sesje kopulacji obserwowano, a zachowania seksualne rejestrowano. Rejestrowano liczbę kopulacji (M), intromisji (IM), latencję kopulacji (ML; czas od wprowadzenia samicy do pierwszego kopulacji), latencję intromisji (IL; czas od wprowadzenia samicy do pierwszej intromisji) i latencję ejakulacji (EL; czas od pierwszej intromisji do ejakulacji) ( Agmo, 1997 ). Zwierzęta naiwne umieszczano w czystej klatce testowej na 1 godzinę w tym samym pomieszczeniu, w którym kopulowały samce doświadczone seksualnie, tak aby były wystawione na zapachy odległych samic oraz na podobne poziomy zakłóceń i nowości środowiskowej, co samce doświadczone.

Oznaczanie immunofluorescencyjne.

Zwierzęta znieczulono głęboko pentobarbitalem sodu (270 mg/kg, ip) i perfundowano dożylnie 50 ml 0.9% roztworu soli fizjologicznej, a następnie 500 ml 4% paraformaldehydu w 0.1 m buforze fosforanowym sodu (PB). Mózgi pobrano i utrwalono przez 1 godzinę w temperaturze pokojowej (RT) w tym samym środku utrwalającym, a następnie zanurzono w 20% roztworze sacharozy i 0.01% azydku sodu w 0.1 m PB w celu przechowywania w temperaturze 4°C. Skrawki wieńcowe pocięto na 35 μm na mikrotomie zamrażającym (H400R, Microm) i zebrano w czterech równoległych seriach w roztworze krioochronnym (30% sacharozy, 30% glikolu etylenowego w 0.1 m PB), a następnie przechowywano w temperaturze 20°C. Wszystkie inkubacje przeprowadzono w temperaturze pokojowej (RT) z delikatnym mieszaniem i obfitym płukaniem 0.1 m PBS, pH 7.35, pomiędzy inkubacjami. Skrawki wystawiono na działanie 1% H 2 O 2 przez 10 min w celu zniszczenia endogennych peroksydaz, a następnie zablokowano na 1 h w roztworze inkubacyjnym (PBS+: PBS zawierający 0.4% Triton X-100; Sigma-Aldrich) i 0.1% albuminy surowicy bydlęcej (Jackson Immuno Research Laboratories). Następnie skrawki inkubowano przez noc w temperaturze pokojowej (RT) w przeciwciałach przeciwko mysiej hydroksylazie tyrozynowej (TH) (1:20 000; Millipore ). Po inkubacji z przeciwciałami pierwotnymi skrawki inkubowano w sprzężonych z AlexaFluor 555 przeciwciałach kozich antymysich (1:100; Invitrogen, Eugene, OR) przez 30 min. Na koniec preparaty umyto 0.1 m PB, umieszczono na szkiełkach przedmiotowych Superfrost Plus, wysuszono i przykryto szkiełkami nakrywkowymi z żelem zawierającym środek zapobiegający blaknięciu 1,4-diazabicyklo(2,2)oktan (DABCO; 50 mg/ml, Sigma-Aldrich; Lennette, 1978 ).

Analiza danych: rozmiar neuroma-soma.

Zdjęcia neuronów TH-immunoreaktywnych (IR) w VTA wykonano przy powiększeniu 40× na trzech poziomach od rostralnego do ogonowego ( Balfour i in., 2004 ). Nie wykryto różnic między komórkami na różnych poziomach. Rozmiar soma neuronów TH-IR analizowano przy użyciu ImageJ (National Institutes of Health). Średnią powierzchnię, obwód i kolistość mierzono zgodnie z opisem Sklair-Tavron i in. (1996) . Przeanalizowano średnio 25 komórek na zwierzę (łącznie wszystkie 3 poziomy VTA) i uwzględniono tylko komórki z wyraźnie widocznym jądrem. Dla każdego zwierzęcia obliczono średnią powierzchnię, obwód i kolistość. Do analizy statystycznej zastosowano dwukierunkową analizę wariancji (ANOVA) [czynniki: doświadczenie seksualne (seks doświadczony lub nie) i czas (1, 7 lub 31 dni)], a następnie porównania post hoc przy użyciu metody Holma–Sidaka z poziomem istotności 0.05.

VTA zmiany nie-dopaminy

Dwutygodniowe sesje godowe.

Aby przetestować, czy doświadczenie seksualne podczas codziennych sesji godowych jest wymagane dla zmniejszenia wymiaru soma neuronu TH-IR, analizowano neurony dopaminowe VTA zwierząt, które łączyły się podczas pięciu sesji dwutygodniowych. Sesje krycia były opisane powyżej, ale przez okres 2.5 tygodni. Mózgi zostały zebrane 7 d po ostatnim kryciu lub obsłudze.

Oznaczanie immunoperoksydazą.

Ponadto przetestowano, czy zastosowanie czułych technik barwienia z immunoperoksydazą i detekcją chromogenów pozwoli również na wizualizację zmian wielkości somy w podczerwieni (TH-IR). Perfuzję i obróbkę tkanek przeprowadzono zgodnie z powyższym opisem. Po podaniu 1% H2O2 i PBS +, skrawki inkubowano przez noc w temperaturze pokojowej w mysim poliklonalnym przeciwciele przeciwko hydroksylazie tyrozynowej (TH) (1:20 000; Millipore ). Po inkubacji z przeciwciałami pierwotnymi, sekcje inkubowano z biotyno-sprzężonymi przeciwciałami kozimi anty-króliczymi IgG (1 godz., 1:500 w PBS+; Vector Laboratories), awidyną-biotyną-peroksydazą chrzanową (1 godz., ABC elite; 1:1 000 w PBS; Vector Laboratories) i czterochlorowodorkiem 3,3′-diaminobenzydyny (10 min, 0.02%, DAB; Sigma-Aldrich) wzbogaconym siarczanem niklu w (0.02% w 0.1 m PB) z nadtlenkiem wodoru (0.015%). Wycinki dokładnie przemyto w 0.1 m PB w celu zakończenia reakcji i umieszczono na kodowanych szkiełkach mikroskopowych Superfrost plus (Fisher) z dodatkiem 0.3% żelatyny w ddH2O . Po odwodnieniu wszystkie szkiełka przykryto szkiełkami nakrywkowymi z dodatkiem środka mocującego DPX (ftalan dibutylu/ksylen; Sigma-Aldrich).

Analiza danych: rozmiar neuroma-soma.

Komórki TH-IR analizowano pod kątem powierzchni, obwodu i kolistości, jak opisano powyżej. Dodatkowo analizowano komórki TH-IR w istocie czarnej (SN), w tych samych skrawkach, co komórki TH-IR w VTA. Na koniec, po analizie komórek TH-IR w VTA i SN, skrawki barwiono kontrastowo fioletem krezylowym, a komórki nie-TH-IR analizowano tymi samymi metodami, co opisane powyżej. Różnice między grupami naiwnymi i doświadczonymi porównano za pomocą dwustronnego testu t- Studenta z poziomem istotności 0.05.

Wpływ naloksonu na indukowaną przez doświadczenie redukcję wielkości soma-nu dopaminy

Aby określić, czy receptory MOR odgrywają rolę w zmianach wielkości soma neuronów dopaminowych wywołanych doświadczeniem seksualnym, receptory MOR blokowano podczas zachowań seksualnych. Połowa zwierząt zyskała doświadczenie seksualne, podczas gdy druga połowa była dotykana, ale pozostała naiwna seksualnie. Zwierzętom doświadczonym seksualnie pozwolono na krycie przez 5 kolejnych dni. W grupach doświadczonych seksualnie i naiwnych, zwierzętom podawano nieselektywny antagonistę receptorów MOR, nalokson (10 mg/kg, sc; Sigma-Aldrich, rozpuszczony w 0.9% soli fizjologicznej) lub sól fizjologiczną 30 minut przed wprowadzeniem samicy (doświadczone) lub przed dotykaniem (naiwne); tworząc w ten sposób cztery grupy eksperymentalne: sól fizjologiczna naiwna seksualnie (Naive Sal), nalokson naiwny seksualnie (Naive NLX), sól fizjologiczna doświadczalna seksualnie (Exp Sal) i nalokson doświadczalny seksualnie (Exp NLX; n = 5–8 w każdej grupie). Leczenie naloksonem nie miało statystycznie istotnego wpływu na żaden parametr zachowań seksualnych w żadnym z 5 dni, a grupy leczone naloksonem i solą fizjologiczną miały identyczne doświadczenia seksualne. Wszystkie zwierzęta uśmiercono poprzez perfuzję wewnątrzsercową 7 dni po ostatniej sesji krycia. Sekcje, immunohistochemię i analizę danych (dwuczynnikowa analiza wariancji ANOVA; czynniki: doświadczenie seksualne i leczenie farmakologiczne) w celu określenia wielkości somy dopaminy przeprowadzono zgodnie z powyższym opisem.

Preferowana lokalizacja morfiny

Projekt eksperymentalny.

Wcześniej Russo i in. (2007) wykazali, że przewlekłe podawanie morfiny indukuje tolerancję na nagrodę morfinową. Ponieważ doświadczenia seksualne i przewlekłe podawanie morfiny powodują podobne zmniejszenie rozmiaru soma neuronów dopaminowych w VTA, zbadano funkcjonalne znaczenie zmian morfologicznych wywołanych płcią w kontekście nagrody morfinowej. Zwierzęta z doświadczeniem seksualnym i te, które nie miały kontaktu z płcią, podzielono na sześć różnych grup eksperymentalnych ( n = 9–13 w każdej grupie) w zależności od zachowań seksualnych (z doświadczeniem seksualnym lub bez) oraz dawki morfiny (0.5, 5.0 lub 10.0 mg/kg, i.p.), a następnie zbadano je pod kątem warunkowej preferencji miejsca (CPP) wywołanej morfiną.

Morfina-CPP.

Warunkowanie miało miejsce 1 dzień po ostatniej sesji krycia, a grupy były dobierane pod kątem sprawności seksualnej podczas ostatniej sesji krycia. Zastosowany paradygmat CPP składał się z testu wstępnego, dni warunkowania i testu końcowego, a aparat był oparty na Tenk et al. (2009) . Krótko mówiąc, aparat CPP (MED Associates) składał się z trzech odrębnych komór. Pomiędzy każdą sesją aparat był dokładnie czyszczony 70% roztworem etanolu, aby zminimalizować utrzymujące się sygnały węchowe. Aby określić indywidualne preferencje, przeprowadzono test wstępny, podczas którego zwierzęta miały swobodny dostęp do całego aparatu przez 15 minut. Jako grupa, zwierzęta nie wykazywały znaczącej preferencji co do konkretnej komory, ale każde pojedyncze zwierzę miało niewielką początkową preferencję. Szczury, które wykazywały znaczącą preferencję co do jednej z komór (różnica czasu spędzonego w każdej z komór >200 s; <5% zwierząt) podczas testu wstępnego, zostały wyłączone z badania. Podczas warunkowania lek był sparowany z początkowo preferowaną lub niepreferowaną komorą przy użyciu niezależnego paradygmatu ( Tzschentke, 2007 ), a zwierzęta były zamykane w komorach na 30 minut. Zwierzętom wstrzykiwano roztwór soli fizjologicznej (ip) rano (od 9:00 do 12:00) i były zamykane w sparowanej komorze z roztworem soli fizjologicznej (kontrola). Po południu (od 1:00 do 4:00) zwierzętom wstrzykiwano morfinę (ip, 0.5 mg/kg, 5.0 mg/kg lub 10.0 mg/kg; siarczan morfiny rozpuszczony w 0.9% roztworze soli fizjologicznej, Johnson Matthey) i były zamykane w sparowanej komorze z morfiną. Zwierzęta były poddawane dwóm dniom warunkowania. Następnego dnia (3 dni po ostatnim dniu krycia) przeprowadzono test końcowy, proceduralnie identyczny z testem wstępnym. W celu przeprowadzenia analizy statystycznej, czas spędzony w komorze parzystej z morfiną podczas testu końcowego porównano z czasem spędzonym w komorze parzystej z solą fizjologiczną podczas testu końcowego u samców nieuprawiających seksu lub doświadczonych seksualnie, w ramach każdej dawki, za pomocą sparowanego testu t . Wartość p < 0.05 uznano za istotną statystycznie. Dodatkowe grupy kontrolne zwierząt nieuprawiających seksu i doświadczonych seksualnie otrzymywały sól fizjologiczną zarówno w komorach parzystych, jak i niesparowanych, jako kontrolę negatywną. Nie stwierdzono różnic w czasie spędzonym między komorami w żadnej z grup.

Wpływ ogólnoustrojowego naloksonu na wywołane doświadczeniem ułatwienie zachowań seksualnych

Projekt eksperymentalny.

Doświadczenie seksualne prowadzi do ułatwienia zachowań seksualnych, które utrzymuje się przez co najmniej 1 miesiąc ( Pitchers i in., 2012 ). Aby przeanalizować wpływ blokowania receptora MOR na wywołane doświadczeniem ułatwienie zachowań seksualnych, zwierzętom doświadczającym seksualnie podawano nalokson lub sól fizjologiczną przed pięcioma kolejnymi sesjami krycia ( n = 12 każda), jak opisano powyżej. Tydzień po ostatniej sesji krycia przeprowadzono ostateczny test krycia, podczas którego wszystkim zwierzętom pozwolono na krycie do jednej ejakulacji lub do 1 godziny. Nie podawano naloksonu ani soli fizjologicznej przed kryciem w ostatnim dniu testu. Porównano parametry krycia, aby określić, czy nalokson wpływał na ułatwienie krycia wywołane doświadczeniem seksualnym (dzień 1 vs. dzień 5), czy też na utrzymanie tego ułatwienia (dzień 5 vs. test) za pomocą dwuczynnikowej analizy wariancji (ANOVA) [czynniki: leczenie (sól fizjologiczna vs. nalokson) i dzień (dzień 1, dzień 5 lub test)] oraz metody Holma-Sidaka do porównań post hoc . We wszystkich testach statystycznych p < 0.05 uznano za istotne statystycznie.

Dodatkowe eksperymenty kontrolne

Ogólny nalokson w dniu testu.

Aby wykazać, że zmiany w zachowaniach seksualnych w ostatnim dniu testu krycia nie były spowodowane brakiem naloksonu, podawaliśmy nalokson lub sól fizjologiczną w ostatnim dniu testu krycia zwierzętom, które były kojarzone z naloksonem w trakcie zdobywania doświadczenia seksualnego. Dokładniej, wszystkie zwierzęta otrzymywały zastrzyk z naloksonu (10 mg/kg, sc) na 30 minut przed kryciem, aż do jednej ejakulacji w ciągu 5 kolejnych dni. W dniu testu, 7 dni później, około połowa zwierząt otrzymała zastrzyk z naloksonu (10 mg/kg, n = 7) lub soli fizjologicznej ( n = 6) na 30 minut przed wprowadzeniem samicy gotowej do krycia. Zachowania seksualne obserwowano i rejestrowano. Porównano parametry krycia, aby określić, czy nalokson wpływał na ułatwienie krycia wywołane doświadczeniem seksualnym (dzień 1 vs. dzień 5), czy też na utrzymanie tego ułatwienia (dzień 5 vs. test) za pomocą dwuczynnikowej analizy wariancji (ANOVA) [czynniki: leczenie (sól fizjologiczna vs. nalokson) i dzień (dzień 1, dzień 5 lub test)] oraz metody Holma-Sidaka do porównań post hoc . We wszystkich testach statystycznych p < 5% uznano za istotne statystycznie.

Wpływ naloksonu na krótkoterminową ekspresję ułatwionych zachowań seksualnych.

Efekty leczenia naloksonem (10 mg/kg, sc) podczas krycia sprawdzono na późniejsze zachowania seksualne w ostatnim dniu testu krycia, który przeprowadzono zaledwie 1 dzień po ostatnim kryciu (sól fizjologiczna, n = 5; nalokson, n = 4).

Systemowa wstępna obróbka naloksonu.

Aby określić, czy wielokrotne podanie samego naloksonu powoduje upośledzenie zachowań seksualnych, 7 dni po ostatnim podaniu, zwierzętom, które nie były wcześniej seksualnie, podawano pięć dawek naloksonu (10 mg/kg, podskórnie) lub soli fizjologicznej w kolejnych dniach przed testem krycia, 7 dni po ostatnim podaniu naloksonu lub soli fizjologicznej. W tym ostatnim dniu testu zwierzęta nie otrzymywały żadnych zastrzyków. Zachowania seksualne obserwowano i rejestrowano zgodnie z powyższym opisem. Parametry krycia porównano między grupami za pomocą niezależnych testów t . We wszystkich testach statystycznych p < 5% uznano za istotne statystycznie.

Systemowy nalokson i nagroda seksualna.

Jedną z możliwości osłabiającego wpływu naloksonu na przejawy utrzymywania ułatwionych zachowań seksualnych jest to, że nalokson blokuje satysfakcjonujące skutki zachowań seksualnych. Aby przetestować tę możliwość, paradygmat CPP został przeprowadzony dla zachowań seksualnych bezpośrednio po wstrzyknięciu naloksonu lub soli fizjologicznej u mężczyzn bez wcześniejszego doświadczenia seksualnego. Procedura CPP była podobna do opisanej powyżej dla morfiny-CPP, w tym przed testem, dniami kondycjonowania i po teście.

Zachowania seksualne były sparowane z początkowo niepreferowaną komorą. W sposób zrównoważony, każde zwierzę otrzymało zastrzyk naloksonu ( n = 12) lub soli fizjologicznej ( n = 11) 30 minut przed uzyskaniem dostępu do receptywnej samicy. Średni czas trwania sesji krycia wynosił ~13 minut. Minutę po ejakulacji zwierzę zostało umieszczone w sparowanej komorze na 30 minut. W drugim dniu warunkowania zwierzęta otrzymały zastrzyk naloksonu lub soli fizjologicznej (w zależności od tego, co otrzymały przed kryciem) i zostały umieszczone w niesparowanej komorze na 30 minut. Następnie przeprowadzono post-test, identyczny z pre-testem. Aby określić preferencje dotyczące komory, porównano czas spędzony w sparowanej komorze podczas pre-testu i post-testu. Do analizy statystycznej, sparowane testy t zostały użyte do porównania wyników preferencji i różnic, a czas spędzony w sparowanej komorze podczas pre-testu i post-testu, aby określić, czy utworzono istotny CPP dla zachowań seksualnych. Za istotny uznano p < 0.05.

Wpływ naloksonu wewnątrz-VTA na wywołane doświadczeniem ułatwianie zachowań seksualnych

Projekt eksperymentalny.

Aby ustalić, czy działanie EOP, konkretnie w VTA, było odpowiedzialne za wpływ zmian w zachowaniach seksualnych wywołanych doświadczeniem seksualnym, zwierzętom podawano miejscowy wlew naloksonu lub soli fizjologicznej do VTA przed pięcioma codziennymi sesjami krycia. Paradygmat behawioralny był podobny do eksperymentu z systemowym podawaniem naloksonu. Zwierzętom doświadczonym seksualnie pozwolono na krycie przez 5 kolejnych dni, aż do jednej ejakulacji lub do 1 godziny. Piętnaście minut przed wprowadzeniem receptywnej samicy, samcom szczurów podawano obustronne wlewy naloksonu (10 μg/μl na półkulę; objętość 0.5 μl; rozpuszczonego w 0.9% soli fizjologicznej) lub soli fizjologicznej (0.5 μl na półkulę). Obustronne mikroiniekcje podawano z szybkością przepływu 0.5 μl/min w odstępie 1 minuty, a następnie przez kolejną minutę z kaniulą iniekcyjną pozostawioną na miejscu w celu dyfuzji. Następnie kaniulę iniekcyjną zastąpiono kaniulą ślepą i nasadką przeciwpyłową. Tydzień po ostatnim dniu krycia (dniu testu) wszystkie zwierzęta ponownie kryły się do ejakulacji bez wlewu naloksonu lub soli fizjologicznej. Rysunek 3A przedstawia schemat eksperymentu. Analizę danych przeprowadzono zgodnie z opisem w eksperymencie z systemowym podawaniem naloksonu.

Operacja kaniulacyjna.

Samce szczurów znieczulono dootrzewnowo (0.1 ml/kg) ketaminą (0.87 mg/ml) i ksylazyną (0.13 mg/ml) i umieszczono w aparacie stereotaktycznym (Kopf Instruments). Obustronne kaniule prowadzące 21-gauge (Plastics One) zostały opuszczone przez małe otwory wiertnicze w czaszce do mózgu w kierunku VTA na -4.8 mm AP, ± 0.75 mm ML od bregmy i -7.8 mm DV od szczytu czaszki zgodnie z Paxinos i Watson (2013) . Kaniule zostały zabezpieczone akrylem dentystycznym, który przylegał do trzech śrub osadzonych w czaszce. Zwierzęta przeszły 2-tygodniowy okres rekonwalescencji i były codziennie dotykane w celu przyzwyczajenia się do procedur dotykania i iniekcji stosowanych podczas testów behawioralnych.

Weryfikacja położenia kaniuli.

Umiejscowienie kaniul zbadano za pomocą immunobarwienia TH, aby potwierdzić, że celowanie w VTA było prawidłowe. Do analiz włączono wyłącznie zwierzęta z prawidłowym umiejscowieniem (ostateczna liczebność grup: zwierzęta, którym podano sól fizjologiczną n = 8; zwierzęta, którym podano nalokson n = 6). Trzy dodatkowe zwierzęta, którym podano nalokson do VTA iniekcje skierowane poza VTA, zgrupowano w grupie „pominiętych” iniekcji. Grupa pominiętych iniekcji została przeanalizowana oddzielnie, aby posłużyć jako kontrola anatomiczna, a test U Manna-Whitneya został użyty do porównania zachowania samców w ostatnim dniu testu z samcami, którym podano nalokson i sól fizjologiczną.

Powiązana z kontekstem cue wywołana ekspresją pERK

Projekt eksperymentalny.

Wykazano, że ekspozycja na klatkę, w której samce zdobywały doświadczenie godowe, powoduje aktywację MOR w VTA i aktywność neuronalną w VTA i NAc ( Balfour i in., 2004 ). Zatem środowisko godowe służy jako warunkowy sygnał predykcyjny nagrody seksualnej. W niniejszym badaniu sprawdzono, czy aktywacja MOR podczas doświadczenia seksualnego jest wymagana do późniejszej aktywacji neuronalnej wywołanej sygnałem warunkowym. Nalokson lub sól fizjologiczna podawano ogólnoustrojowo (ip) 30 minut przed umieszczeniem na arenie godowej i wprowadzeniem receptywnej samicy do kopulacji (doświadczonej) lub przed manipulacją kontrolną, która polegała na umieszczeniu w klatce bez prezentacji samicy (środowisko neutralne; naiwne). W związku z tym utworzono cztery grupy eksperymentalne: Naive Sal, Naive NLX, Exp Sal ​​i Exp NLX. Tydzień po ostatniej sesji krycia, połowa zwierząt w każdej grupie była wystawiona na działanie klatki krycia (samce Exp: warunkowe sygnały związane z płcią) lub klatki manipulacyjnej (samce naiwne: sygnały niealienowane/neutralne), podczas gdy druga połowa nie była wystawiona na działanie żadnych sygnałów i zamiast tego pozostała w klatkach domowych (aby określić początkową ekspresję pERK). Ten paradygmat eksperymentalny wytworzył 8 grup: Naive Sal-No Cue, Naive Sal+Cue, Naive NLX-No Cue, Naive NLX+Cue, Exp Sal-No Cue, Exp Sal+Cue, Exp NLX-No Cue, Exp NLX+Cue ( n = 4 każda z wyjątkiem Naive NLX-No Cue, n = 3). Zwierzęta były perfundowane 10–15 minut po ekspozycji na sygnał. Zwierzęta kontrolne zostały usunięte z ich klatek domowych i perfundowane jednocześnie.

Immunohistochemia.

Podział na sekcje i badania immunohistochemiczne przeprowadzono zgodnie z powyższym opisem. W tym przypadku użyliśmy króliczego przeciwciała poliklonalnego przeciwko kinazom MAP p42 i p44 ERK1 i ERK2 (pERK; 1:4000; Cell Signaling Technology). Pierwotne przeciwciało zostało szczegółowo scharakteryzowane w literaturze ( Roux i Blenis, 2004 ; Murphy i Blenis, 2006 ; Frohmader i in., 2010b ). Co więcej, pominięcie pierwotnego przeciwciała zapobiegło jakiejkolwiek immunoreaktywności, a analiza Western blot tkanki mózgowej szczura ujawniła dwa pasma o odpowiednich masach cząsteczkowych.

Analiza danych.

Komórki pERK-immunoreaktywne (-IR) liczono w szeregu obszarów mózgu za pomocą kamery lucida, podłączonej do mikroskopu Leica DMRD: NAc [rdzeń (C) i skorupa (S); 400 × 600 μm; środkowa kora przedczołowa; mPFC; przedni obszar zakrętu obręczy (ACA); kora przedlimbiczna (PL); kora podlimbiczna (IL); 600 × 800 μm każda], jądro ogoniaste–skorupa (CP; 800 × 800 μm) i jądro migdałowate boczno-podstawne (BLA; 900 × 1200 μm; Balfour i in., 2004 ; Frohmader i in., 2010b ; Pitchers i in., 2010b ). Dwa przekroje zostały zliczone na obszar mózgu, a liczba komórek w standardowych obszarach analiz została następnie obliczona jako liczba komórek na mm2 . Dwa zliczenia zostały uśrednione na zwierzę w celu obliczenia średnich grupowych. Średnie grupowe w obrębie grup z doświadczeniem seksualnym lub bez doświadczenia zostały porównane przy użyciu dwukierunkowej analizy wariancji [czynniki: leczenie farmakologiczne (NLX lub Sal) i sygnał (sygnał lub brak sygnału)], a następnie porównań post hoc przy użyciu testu sum Holma-Sidaka lub Manna-Whitneya, gdzie było to odpowiednie, z poziomem istotności p < 0.05. W powłoce NAc zwierząt z doświadczeniem seksualnym istniał silny trend w kierunku istotności czynników, dlatego też przeprowadzono porównania parami, aby porównać tylko grupy z roztworem soli fizjologicznej (Sal-Brak sygnału) i z roztworem soli fizjologicznej (Sal+Sygnał).

Obrazy.

Zdjęcia cyfrowe wykonano za pomocą kamery CCD (Macrofire, Optronics) podłączonej do mikroskopu Leica (DM5000B) ze stałymi ustawieniami kamery. Zdjęcia zaimportowano do programu Adobe Photoshop 9.0. Zdjęcia nie były modyfikowane w żaden sposób, poza regulacją jasności i kontrastu.

Efekty

Zmiany wywołane doświadczeniem seksualnym w komórkach dopaminy VTA

Doświadczenie seksualne spowodowało zmniejszenie wymiaru soma dopaminy VTA (Rys. 1A-C). Doświadczenia seksualne znacznie zmniejszają powierzchnię i obwód somy komórek VTA TH-IR (obszar: F(1,31) = 23.068, p <0.001; obwód, F(1,31) = 18.225, p <0.001). Istniał również główny znaczący wpływ czasu (obszar: F(2,31) = 6.377, p = 0.005; obwód, F(2,31) = 4.389, p = 0.021) i znacząca interakcja między doświadczeniem a czasem (obszar: F(2,31) = 5.284, p = 0.011; obwód, F(2,31) = 4.347, p = 0.022). Porównania parami wykazały, że powierzchnia i obwód komórek TH-IR znacznie zmniejszyły 1 i 7 d po ostatnim dniu zachowań seksualnych u zwierząt doświadczonych seksualnie w porównaniu z kontrolą naiwną na poziomie seksualnym [Rys. 1B, powierzchnia: p = 0.002 (1 d), p <0.001 (7 d); C, obwód: p = 0.009 (1 d), p <0.001 (7 dni)]. Efekt zachowań seksualnych zanikał, gdy następował okres abstynencji nagrody, gdy rozmiar somy neuronów TH-IR powrócił do poziomu wyjściowego 31 dni po ostatniej sesji godowej (Rys. 1B, powierzchnia: p = 0.798; C, obwód: p = 0.785). Zmiany wywołane doświadczeniem seksualnym nie zostały wykryte w cykliczności w żadnym z punktów czasowych (Rys. 1D). Redukcja wielkości soma w dopaminie VTA nie była zależna od codziennych sesji godowych, ponieważ doświadczenie w kryciu podczas pięciu sesji dwutygodniowych kojarzyło się również ze zmniejszoną wielkością soma dopaminy (Rys. 2A,B, E-H, powierzchnia: p = 0.004; obwód: p <0.001). Natomiast doświadczenie seksualne nie wpłynęło na wielkość somy TH-IR w istocie czarnej (Rys. 2C, I-J, powierzchnia: p = 0.13; obwód: p = 0.16), ani zmienionego wymiaru somy w pobliskich neuronach VTA nie-TH-IR (Rys. 2D, E-H, powierzchnia: p = 0.46; obwód: p =

Rysunek 1. 

Endogenne zmiany wielkości soma indukowane opioidami neuronów dopaminowych VTA. A, Reprezentatywne obrazy neuronów dopaminowych VTA z naiwnych seksualnie i doświadczonych zwierząt, pokazujące zmniejszenie wymiaru soma 7 d po końcowej sesji godowej. Pasek skali, 5 μm. Dane ilościowe pokazujące, że doświadczenie seksualne (Exp, czarne słupki) spowodowało znaczne zmniejszenie obszaru (B; w μm2) i obwodzie (C; w μm) komórek dopaminy VTA, 1 d (Naive, Exp; n = 6) i 7 d (Naiwny, n = 5; Exp, n = 6), ale nie 31 d (Naive, n = 6; Exp, n = 8) po końcowym kryciu, w porównaniu z nie naiwnymi kontrolami (Naive, białe słupki). Powierzchnia została zredukowana do 84% u doświadczonych mężczyzn w porównaniu z naiwnymi kontrolami w 1 lub 7 d. Obwód został zredukowany do 91.6 i 90% w doświadczonych grupach w porównaniu z kontrolą w 1 i 7 d resp. Nie było żadnego wpływu na cyrkulację (D). Ta plastyczność komórek dopaminy w obszarze (E) i obwodzie (F) został powstrzymany przez nalokson (NLX, n = 8), ale nie zasolenie (Sal, n = 7) traktowanie podczas krycia, 7 d po końcowej sesji godowej w porównaniu z naiwnymi kontrolami płciowymi (Sal, n = 5; NLX, n = 6). Dane oznaczają średnią ± SEM; * wskazuje na istotną różnicę w porównaniu z kontrolą naiwną na ten sam dzień (B, C) lub w porównaniu z leczonymi na podstawie soli fizjologicznie kontrolami i samymi doświadczonymi seksualnie mężczyznami leczonymi naloksonem (E, F).

Rysunek 2. 

Doświadczenie seksualne nie zmniejszyło wymiaru soma w neuronach dopaminowych istoty czarnej ani neuronach niedojadłowych VTA. VTA TH-IR neuron obszar soma (A; w μm2) i obwodzie (B; w μm) u zwierząt o nieświadomości seksualnej (białej) i doświadczonej (czarnej), które uzyskały doświadczenie przez krycie dwa razy w tygodniu, a nie w ciągu kolejnych dni. Substantia nigra TH-IR obszar soma (C) i obszar soma VTA non-TH-IR (D) na zwierzętach naiwnych seksualnie (białe) i doświadczonych (czarnych). Dane oznaczają średnią ± SEM; * wskazuje na znaczącą różnicę w porównaniu z kontrolą naiwną na poziomie seksualnym. Reprezentatywne obrazy przedstawiające neurony TH-IR (brązowe) w VTA naiwnych na tle seksualnym (E) i doświadczony (F) mężczyźni. G, H, Obraz o większym powiększeniu neuronu wskazany strzałką w E oraz F odpowiednio. Błony barwione Nisslem są pokazane na niebiesko na tych obrazach. Reprezentatywne obrazy przedstawiające neurony TH-IR w SN naiwnych na tle seksualnym (I) i doświadczony (J) mężczyźni. Paski skali: E-J, 20 μm.

Indukowane przez doświadczenie seksualne zmniejszenie wymiarów soma w neuronach dopaminowych VTA zależy od aktywacji receptora opioidowego

Zmniejszenie wielkości somy neuronów dopaminy VTA spowodowane przez doświadczenie seksualne zostało zablokowane przez nieselektywny nalokson antagonisty MOR, podawany przed każdą sesją godową. Leczenie naloksonem przed sesjami godowymi miało znaczący wpływ na obszar (F(1,22) = 4.738, p = 0.041) i zmierzały w kierunku znaczącego wpływu na obwód (F(1,22) = 2.892, p = 0.052). Stwierdzono istotną interakcję między doświadczeniem a leczeniem naloksonem dla obszaru (F(1,22) = 5.578, p = 0.027) i obwód (F(1,22) = 8.167, p = 0.009). Porównania parami pokazały, że doświadczenia seksualne u zwierząt leczonych solą fizjologiczną znacznie zmniejszyły obszar i obwód neuronów dopaminowych VTA 7 d po ostatniej sesji godowej w porównaniu z mężczyznami, które nie leczono seksualnie, leczonymi solą fizjologiczną (Rys. 1E, powierzchnia: p = 0.018; F, obwód: p = 0.007). Natomiast doświadczone seksualnie zwierzęta leczone naloksonem nie różniły się od nieleczonych samców leczonych naloksonem (Rys. 1E, powierzchnia: p = 0.483; F, obwód: p = 0.330). Ponadto, wielkość soma doświadczonych zwierząt fizjologicznych była znacznie zmniejszona w porównaniu z doświadczonymi zwierzętami naloksonowymi (Rys. 1E, powierzchnia: p = 0.002; F, obwód: p = 0.002). Ten wpływ naloksonu był specyficzny dla doświadczenia seksualnego, ponieważ sam nalokson nie wpływał na wielkość komórek sutka TH-IR u płciowo naiwnych mężczyzn leczonych naloksonem w porównaniu z grupą kontrolną traktowaną solanką (Rys. 1E,F). Co więcej, ten wpływ naloksonu na indukowane przez doświadczenie zmniejszenie rozmiaru somy nie było spowodowane działaniem naloksonu na zachowania seksualne, ponieważ zachowanie godowe nie różniło się znacząco pomiędzy samcami leczonymi naloksonem i solą fizjologiczną, z wyjątkiem dłuższego czasu na rozpoczęcie krycia po wytrysku. (interwał po wytrysku) u samców leczonych naloksonem podczas pierwszej i piątej sesji godowej (p = 0.03 i p = 0.004, odpowiednio). Zarówno samce leczone solą fizjologiczną i naloksonem kopulowały do ​​wytrysku podczas każdej z pięciu sesji godowych.

Doświadczenie seksualne wywołane doświadczalną tolerancją na morfinę

Efekty doświadczenia seksualnego na rozmiar soma dopaminy VTA poprzez działanie EOP w VTA są podobne do tych zgłaszanych dla opiatów egzogennych ( Sklair-Tavron i in., 1996 ; Russo i in., 2007 ). Dlatego też sprawdzono, czy naturalna plastyczność komórek dopaminy VTA wywołana nagrodą wpływa na nagrodę za opioid morfinę. Rzeczywiście, doświadczenie seksualne powodowało tolerancję na nagrodę morfinową, podobnie jak efekty przewlekłych opiatów ( Russo i in., 2007 ). Doświadczeni seksualnie samce nie wykształciły CPP dla dawki morfiny 0.5 mg/kg; podczas gdy samce seksualnie naiwne wytworzyły CPP dla tej dawki, na co wskazuje spędzenie większej ilości czasu w komorze sparowanej z morfiną w porównaniu z komorą sparowaną z solą fizjologiczną podczas testu końcowego ( Ryc. 3 ; p = 0.039). Zarówno grupa osób naiwnych, jak i doświadczonych seksualnie spędziła znacznie więcej czasu w komorze z morfiną w porównaniu z komorą z roztworem soli fizjologicznej, w której podawano wyższe dawki morfiny: 5.0 mg/kg ( ryc. 3 ; naiwni: p = 0.029; doświadczenie: p = 0.012) i 10.0 mg/kg ( ryc. 3 ; naiwni: p < 0.001; doświadczenie: p = 0.002).

Rysunek 3. 

Wpływ doświadczeń seksualnych na nagrodę morfinową. Czas spędzony w komorach z solą fizjologiczną (Sal) lub morfiną (Mor; 0.5, 5 lub 10 mg/kg masy ciała) podczas testu końcowego u samców niepoddanych eksperymentom seksualnym (Naive, n = 10–13) lub doświadczonych (Exp, n = 9–13). Dane przedstawiono jako średnia ± SEM; * oznacza istotną różnicę w porównaniu z komorą z solą fizjologiczną u tych samych zwierząt. NS, Nieistotne statystycznie.

Wywołane doświadczeniem seksualnym ułatwianie zachowań godowych zależy od aktywacji receptora opioidowego

Dotychczasowe wyniki pokazują, że EOP działający w VTA podczas codziennych krótkich sesji godowych 5 powoduje plastyczność neuronów dopaminowych VTA, która jest podobna do efektów długotrwałego podawania morfiny lub heroiny (Russo i wsp., 2007; Mazei-Robison i wsp., 2011). Postawiliśmy hipotezę, że redukcja rozmiaru soma w rozmiarze dopaminy VTA ma kluczowe znaczenie dla uczenia się nagrody, a zwłaszcza dla wywoływanego doświadczeniem seksualnym ułatwiania zachowań seksualnych pod względem motywacji i wydajności. Ta hipoteza została przetestowana poprzez blokowanie MOR przy użyciu naloksonu podczas krycia i badanie wpływu na ułatwianie zachowań seksualnych wywołanych doświadczeniem seksualnym podczas pięciu codziennych sesji godowych. Dane są przedstawione w Rysunek 4 tylko dla pierwszej i piątej sesji godowej, ponieważ są to dane, które najlepiej ilustrują wywołane doświadczeniem ułatwianie zachowań godowych. Ponadto, długoterminowe skutki leczenia naloksonem podczas sesji godowych są testowane na utrzymaniu wywołanego doświadczeniem ułatwienia zachowania godowego, podczas końcowego testu godowego 1 tydzień później. Rysunek 4A pokazuje eksperymentalny projekt. Istniał znaczący główny efekt sesji godowej na wszystkie parametry zachowania płciowego (opóźnienie montowania: F(2,55) = 11.286, p <0.001; opóźnienie wprowadzenia: F(2,55) = 8.767, p <0.001; opóźnienie wytrysku: F(2,55) = 10.368, p <0.001) i leczenie naloksonem w przypadku opóźnień do wystąpienia (F(1,55) = 6.585, p = 0.013) i intromission (F(1,55) = 7.863, p = 0.007). Porównania parami wykazały, że leczenie naloksonem wpłynęło na zachowania seksualne podczas pierwszej sesji godowej, ponieważ zwierzęta naloksone miały znacznie dłuższe opóźnienia w pierwszym zamocowaniu (p = 0.002) i intromission (p = 0.002) w porównaniu z solą fizjologiczną pierwszego dnia krycia. Ten wpływ naloksonu na początkowe zachowania seksualne został osłabiony przez doświadczenia seksualne i nie zaobserwowano go podczas żadnej z kolejnych sesji godowych (Tabela 1). Ponadto podawanie naloksonu przed każdą z pięciu sesji godowych nie zapobiegło początkowemu ułatwieniu zachowań seksualnych z doświadczeniem seksualnym. Zgodnie ze wzmacniającymi efektami doświadczenia seksualnego, mężczyźni leczeni solą fizjologiczną wykazywali zmniejszone opóźnienia w montowaniu (Rys. 4B; p = 0.032) (Rys. 4C; p = 0.033) i wytrysk (Rys. 4D; p <0.001) podczas piątej sesji krycia w porównaniu z pierwszą sesją, co wskazywało na ułatwianie zachowań seksualnych. Podobnie, mężczyźni leczeni naloksonem wykazywali znacznie krótsze opóźnienia w dojrzewaniu (Rys. 4B; p <0.001), intromisja (Rys. 4C; p <0.001) i wytrysk (Rys. 4D; p = 0.017) na piątym miejscu w porównaniu z pierwszym dniem. Ponadto samce leczone naloksonem nie różniły się od kontrolnych soli fizjologicznych w żadnej z latencji podczas piątej sesji godowej.

Rysunek 4. 

Endogenne opioidy odgrywają kluczową rolę w wywołanym doświadczeniem ułatwianiu zachowań seksualnych. A , Projekt eksperymentalny. B – D , Parametry zachowań seksualnych samców leczonych solą fizjologiczną (Sal, białe słupki, n = 11) lub naloksonem (NLX; czarne słupki, n = 12) z podaniem ogólnoustrojowym. Przedstawione dane dotyczą latencji do wzniesienia ( B ; sekundy), intromisji ( C ; sekundy) i ejakulacji ( D ; sekundy) w dniach 1 i 5 z pięciu kolejnych dni krycia. Ponadto przedstawiono dane dla ostatniego testu krycia, 7 dni po piątej sesji krycia. Dane przedstawiono jako średnia ± SEM; + oznacza istotną różnicę między dniami 1 i 5 w trakcie leczenia; * oznacza istotną różnicę między dniem testu a dniem 5 w trakcie leczenia; # oznacza istotną różnicę między grupami naloksonu i soli fizjologicznej w ciągu dnia.

Wyświetl tę tabelę: 

Tabela 1. 

Podanie naloksonu przed kryciem zwiększało opóźnienia w celu zamontowania i wprowadzenia tylko w pierwszym dniu krycia

W przeciwieństwie do tego, leczenie naloksonem podczas sesji doświadczenia seksualnego zakłóciło utrzymywanie wywołanego doświadczeniem ułatwiania zachowań seksualnych w ostatnim dniu testów godowych. Dzień próby przeprowadzono 7 d po końcowej sesji godowej w nieobecności iniekcji naloksonu. Myszy kontrolne leczone solą fizjologiczną wykazały spodziewane doświadczane ułatwianie zachowań seksualnych. Konkretnie, opóźnienia do montażu, wprowadzenia i wytrysku nie różniły się między piątą sesją godową a końcowym dniem testu (Rys. 4B-D). Podczas gdy mężczyźni leczeni naloksonem wykazywali znaczny wzrost latencji do montowania (Rys. 4B; p = 0.033), intromission (Rys. 4C; p = 0.036) i wytrysk (Rys. 4D; p = 0.049) w dniu testu w porównaniu z piątą sesją krycia. Ponadto, w dniu testu stwierdzono, że zwierzęta naloksonowe są znacznie wolniejsze niż samce leczone solą fizjologiczną, ponieważ wykazują dłuższe opóźnienia w montowaniu (Rys. 4B; p = 0.017) i intromission (Rys. 4C; p = 0.043). Tak więc leczenie naloksonem blokowało utrzymanie, ale nie początkowe, rozwój wywołanego przez doświadczenie ułatwiania zachowań seksualnych. Odkrycia te wskazują na kluczową rolę indukowanej przez EOP plastyczności VTA dopaminy w długotrwałej ekspresji wzmocnienia naturalnego zachowania nagrody.

Przeprowadzono kilka dodatkowych eksperymentów kontrolnych, aby stwierdzić, że wpływ blokady receptorów opioidowych na utratę długotrwałego wzmocnienia zachowań seksualnych był niezależny od braku naloksonu w końcowym dniu testu godowego (Rys. 5A,B), były specyficzne dla utraty długoterminowego, ale nie krótkoterminowego utrzymania ułatwień kojarzenia (Rys. 5E,F) nie były spowodowane codzienną ekspozycją na sam nalokson (Rys. 5C,D) i nie były spowodowane utratą nagrody seksualnej u samców leczonych naloksonem (Rys. 5G,H). Po pierwsze, aby wykazać, że zmienione zachowanie seksualne w końcowym teście godowym nie było spowodowane brakiem naloksonu, w ostatnim dniu godowym podawano nalokson lub sól fizjologiczną zwierzętom, które otrzymały parzenie w połączeniu z naloksonem, podczas gdy uzyskiwały one doświadczenie seksualne (Rys. 5A). Istniał znaczący główny efekt dnia krycia na opóźnienia do zamontowania (Rys. 5B; F(2,27) = 30.031, p = 0.038) i intromission (Tabela 2; F(2,27) = 10.686, p = 0.048). Nie było żadnego głównego efektu dnia godowego na opóźnienie wytrysku (Tabela 2; F(2,27) = 2.388, p = 0.109) Podobnie jak opisano powyżej, leczenie naloksonem podczas krycia nie wpłynęło na ułatwienie zachowania seksualnego podczas pierwszych pięciu sesji doświadczenia seksualnego. Obie grupy (grupy leczone solanką i naloksonem, określone na podstawie leczenia otrzymanego podczas końcowego testu godowego, oba otrzymały nalokson w czasie krycia) wykazały ułatwione zachowania seksualne w dniu 5 w porównaniu do dnia 1 i wykazały znacznie krótsze opóźnienia w pierwszym zamocowaniu (Rys. 5B; solankowy: p = 0.033; nalokson: p = 0.014) i intromission (Tabela 2; solankowy: p = 0.034; nalokson: p = 0.026). Zwierzęta, które otrzymały nalokson lub sól fizjologiczną w ostatnim dniu testu godowego miały dłuższe latencje do zamontowania (Rys. 5B; solankowy: p = 0.018; nalokson: p = 0.029) i intromission (Tabela 2; solankowy: p = 0.019; nalokson: p = 0.020) w porównaniu z piątym dniem doświadczenia godowego. Dlatego podawanie naloksonu lub soli fizjologicznej w dniu testu bezpośrednio przed kryciem nie wpłynęło na efekt leczenia naloksonem podczas sesji doświadczalnych, a osłabienie długotrwałego ułatwiania zachowań seksualnych było identyczne jak w przypadku zwierząt, które nie otrzymały żadnego zastrzyku w ostatnim dniu testu godowego (Rys. 4).

Rysunek 5. 

Endogenne opioidy są ważne w długoterminowej ekspresji doświadczenia indukowanego ułatwianiem zachowań seksualnych. A , Projekt eksperymentalny dla eksperymentu dotyczącego wpływu leczenia NLX w dniu testu. B , Czas latencji montażu w dniach 1 i 5 pięciu kolejnych dni krycia i ostatniego dnia testu krycia (Test) po wstrzyknięciu soli fizjologicznej (szary) lub naloksonu (czarny). Dane przedstawiają średnią ± SEM. * oznacza istotną różnicę między dniem 1 a dniem 5 w trakcie leczenia. # oznacza istotną różnicę między dniem testu a dniem 5 w trakcie leczenia. C , Projekt eksperymentalny dla eksperymentu mającego na celu sprawdzenie wpływu wstępnego leczenia naloksonem bez doświadczenia seksualnego na zachowania krycia. D , Czas latencji montażu w ostatnim dniu testu krycia, 7 dni po 5 dniach wstrzyknięcia soli fizjologicznej lub naloksonu w przypadku braku krycia. Dane przedstawiają średnią ± SEM. E , Projekt eksperymentalny mający na celu sprawdzenie, czy leczenie naloksonem wpłynęło na krótkotrwałe przejawianie ułatwionych zachowań seksualnych u zwierząt doświadczonych seksualnie. F , Latencja montażowa w 1. i 5. dniu pięciu kolejnych dni krycia i ostatniego dnia testu krycia, 1 dzień po 5. dniu w obecności wstrzyknięcia soli fizjologicznej (szary) lub naloksonu (czarny). Dane przedstawiają średnią ± SEM. * oznacza istotną różnicę między dniem 1. a dniem 5. w trakcie leczenia. G , Projekt eksperymentalny mający na celu sprawdzenie, czy leczenie naloksonem blokuje nagradzające efekty zachowań seksualnych. H , Czas spędzony w komorze parowania (w sekundach) podczas testu wstępnego (biały) i testu końcowego (czarny) dla zwierząt otrzymujących nalokson lub sól fizjologiczną przed kryciem. Dane przedstawiają średnią ± SEM; * oznacza istotną różnicę w porównaniu z testem wstępnym.

Wyświetl tę tabelę: 

Tabela 2. 

Przedstawione dane są latencjami do wprowadzenia i wytrysku (sekundy) z eksperymentów kontrolnych przeprowadzonych w celu ustalenia, że ​​działanie blokady MOR na utratę długotrwałego wzmocnienia zachowań seksualnych nastąpiło niezależnie od braku podawania naloksonu w ostatecznym dniu testowym krycia

Aby ustalić, czy to leczenie naloksonem w połączeniu z doświadczeniem seksualnym, a nie powtarzanie naloksonu jako takiego, spowodowało upośledzenie zachowań seksualnych 7 dni po ostatnim leczeniu, zwierzęta, które nie były wcześniej seksualne, otrzymywały pięć dziennych zastrzyków naloksonu lub soli fizjologicznej przed ostatecznym testem godowym 7 dni później ( Ryc. 5C ) . Nie wykryto żadnych istotnych różnic dla żadnego parametru godowego między grupami wstępnie leczonymi solą fizjologiczną i naloksonem ( Ryc. 5D ; latencja montażu; latencja intromisji: sól fizjologiczna 139.7 ± 40.3 vs. nalokson 121.83 ± 42.55; latencja ejakulacji: sól fizjologiczna 887.9 ± 70.0 vs. nalokson 1050.8 ± 327.31). Wyniki te wskazują, że sam nalokson nie jest wystarczający, aby zmienić późniejsze zachowania seksualne, podobnie jak brak wpływu samego naloksonu na plastyczność neuronów dopaminowych VTA.

Postawimy hipotezę, że leczenie naloksonem podczas nabywania doświadczenia seksualnego zakłóca długoterminową ekspresję seksualnego zachowania wywołanego doświadczeniem seksualnym. Aby przetestować to dalej, wpływ leczenia naloksonem podczas krycia został przetestowany na późniejszym zachowaniu seksualnym podczas końcowego testu krycia, w którym przeprowadzono tylko 1 d po ostatnim kryciu (projekt eksperymentalny; Rys. 5E). Istniał znaczący główny efekt dnia godowego na górze (Rys. 5F; F(2,20) = 19.780, p <0.001) i opóźnienia intromisji (Tabela 2; F(2,20) = 19.041, p <0.001). Nie stwierdzono istotnego głównego wpływu dnia na opóźnienie wytrysku (Tabela 2; F(2,20) = 3.042, p = 0.070). Podobnie jak opisano powyżej, wszyscy mężczyźni (pomimo leczenia solą fizjologiczną lub naloksonem) wykazywali ułatwienie zachowań seksualnych podczas pięciu sesji doświadczeń seksualnych wskazanych przez znacznie krótsze opóźnienia w montażu (Rys. 5F; solankowy: p = 0.002; nalokson: p = 0.018) i intromission (Tabela 2; solankowy: p = 0.006; nalokson: p = 0.009) w dniu 5 w porównaniu z dniem 1. Podobnie, ułatwione zachowanie seksualne zostało zademonstrowane w dniu testu w porównaniu z dniem 1 wskazanym przez znacznie krótsze opóźnienia w montażu (Rys. 5F; solankowy: p = 0.001; nalokson: p = 0.020) i intromission (Tabela 2; solankowy: p = 0.004; nalokson: p = 0.009). Co ważniejsze, leczenie naloksonem podczas krycia nie wpłynęło znacząco na wywoływane doświadczeniem seksualnym ułatwianie zachowania seksualnego podczas testu 1 d po doświadczeniu seksualnym, niezależnie od leczenia naloksonem w ostatnim dniu testów godowych.

Na koniec sprawdziliśmy możliwość, że osłabiający wpływ naloksonu na długoterminową ekspresję ułatwionego zachowania seksualnego wynika z blokującego wpływu naloksonu na nagradzające właściwości zachowania seksualnego. Jednakże nalokson podany bezpośrednio przed kryciem nie zmienił formowania się CPP dla krycia ( Ryc. 5G ) , co sugeruje, że leczenie naloksonem nie zmieniło nagrody seksualnej. Zarówno grupa leczona roztworem soli fizjologicznej, jak i grupa leczona naloksonem wytworzyły istotne CPP dla zachowań seksualnych, na co wskazuje istotnie zwiększony czas spędzony w komorze z podziałem na pary płciowe ( Ryc. 5H ; roztwór soli fizjologicznej: p = 0.038; nalokson: p = 0.002) podczas posttestu w porównaniu z pretestem. Zatem nalokson nie wywiera szkodliwego wpływu na utrzymanie ułatwionego zachowania seksualnego poprzez blokowanie nagrody związanej z zachowaniem seksualnym.

Ułatwienie zachowań seksualnych zależy od działania EOP w VTA

Aby potwierdzić, że EOP działa konkretnie w VTA w celu indukowania długotrwałego ułatwiania zachowań seksualnych, eksperymentalny projekt nakreślony w Rysunek 3A powtórzono z infuzjami naloksonu wewnątrz-VTA zamiast wstrzyknięć ogólnoustrojowych. Wyniki były identyczne jak w przypadku podawania ogólnoustrojowego opisanego powyżej. Istotny główny efekt dnia godowego na wszystkie parametry zachowania płciowego (Rys. 6A, zamontuj opóźnienie: F(2,33) = 4.494, p = 0.019; Bopóźnienie intromission: F(2,33) = 4.042, p = 0.027; C, opóźnienie wytrysku: F(2,33) = 5.309, p = 0.010) i naloksonu wewnątrz-VTA na opóźnienia do zamontowania (F(1,33) = 7.345, p = 0.011) i intromission (F(1,33) = 6.126, p = 0.019). Nalokson wewnątrz-VTA nie zapobiegał początkowemu wywołanemu doświadczeniu ułatwieniu zachowań seksualnych podczas 5-y krycia, ponieważ mężczyźni leczeni naloksonem wykazywali zmniejszone opóźnienia w montowaniu (Rys. 6A; p = 0.001), intromission (Rys. 6B; p <0.001) i wytrysk (Rys. 6C; p = 0.001) w dniu 5 w porównaniu z dniem 1. Mężczyźni leczeni za pomocą naloksonu nie różnili się od mężczyzn leczonych solą fizjologiczną w piątym dniu kojarzenia się z którymkolwiek z latencji. Leczenie naloksonem w ramach VTA, podobnie jak podawanie ogólnoustrojowe, powodowało znaczny wzrostRys. 6A; p <0.001) i opóźnienia intromisji (Rys. 6B; p <0.001) w pierwszym dniu krycia w porównaniu z samcami leczonymi solą fizjologiczną, czego nie obserwowano podczas kolejnych krycia (podczas których samce leczone naloksonem i solą fizjologiczną nie różniły się). Jedną nieoczekiwaną obserwacją było to, że w tym eksperymencie mężczyźni leczeni solą fizjologiczną nie wykazywali statystycznie istotnego ułatwienia utajenia lub latencji intromisji (jak pokazano we wszystkich eksperymentach opisanych powyżej), a jedynie opóźnienie wytrysku było zwarte piątego dnia w porównaniu z pierwszym dniem. (solankowy: p =

Rysunek 6. 

Endogenne opioidy w VTA pośredniczą w wywołanym doświadczeniem ułatwianiu zachowań seksualnych i ich długotrwałym utrzymywaniu. Parametry zachowań seksualnych u samców leczonych solą fizjologiczną (Sal, białe słupki, n = 8) lub NLX (czarne słupki, n = 6) z podaniem do VTA. Przedstawione dane dotyczą latencji do montażu ( A ), intromisji ( B ) i ejakulacji ( C ) w dniach 1 i 5 z pięciu kolejnych dni krycia. Ponadto przedstawiono dane dla ostatniego dnia testu krycia, 7 dni po 5 dniu, przy braku wstrzyknięcia soli fizjologicznej lub naloksonu. Dane przedstawiono jako średnią ± SEM; + oznacza istotną różnicę między dniami 1 i 5 w trakcie leczenia; * oznacza istotną różnicę między dniem testu a dniem 5 w trakcie leczenia; # oznacza istotną różnicę między grupami naloksonu i Sal w ciągu dnia. Schematyczne rysunki przekrojów czołowych VTA (H, -4.60; I, -5.00; J, -5.25 z bregma) wskazujące miejsca wstrzyknięć do VTA dla wszystkich zwierząt w eksperymencie 5 (sól fizjologiczna; biały; nalokson; czarny; pominięty; szary), wykonane przy użyciu szablonów z Swanson Brain Maps ( Swanson, 2004 ). Kaniule były obustronne, ale miejsca wstrzyknięć przedstawiono jednostronnie dla ułatwienia prezentacji. fr, Fasciculus retroflexus; ML, Medial lemniscus; SN, substantia nigra.

Leczenie naxolonem w ramach VTA blokowało utrzymanie ułatwionego zachowania seksualnego obserwowanego u samców doświadczonych seksualnie, podobnie jak w przypadku działania ogólnoustrojowego naloksonu. Konkretnie, w dniu ostatecznego testu mężczyźni leczeni naloksonem mieli dłuższe latencje do zamontowania (Rys. 6A; p = 0.011), intromission (Rys. 6B; p = 0.010) i wytrysk (Rys. 6C; p = 0.015) w porównaniu z ich piątą sesją godową i porównane z samcami leczonymi solą fizjologiczną w ostatnim dniu testu (Rys. 6A, p = 0.006; B, p = 0.008). W przeciwieństwie do tego, zwierzęta leczone solą fizjologiczną nie różniły się pod względem opóźnień w montowaniu i wprowadzaniu między końcowym dniem testowym i dniem 5 krycia. Efekty te były specyficzne dla dostarczania naloksonu do VTA, jak mężczyźni z miejscami kaniulacji w pobliżu, ale nie celujący w VTA (Rys. 6D; n = 3) wykazały długotrwałe ułatwianie zachowań seksualnych podobnych do kontrolnych potraktowanych solą fizjologiczną (ML, IL = 53 ± 6.245, EL = 389 ± 299.5 i znacząco różniły się od zwierząt naloksonu wewnątrz-VTA w ostatnim dniu testu godowego (ML, IL: p = 0.029; EL: p =

Działanie EOP jest wymagane dla aktywowanej neuronalnie aktywowanej aktywacji związanej z płcią

Opierając się na dotychczasowych ustaleniach, postawiliśmy hipotezę, że aktywacja EOP w VTA podczas doświadczenia godowego i następująca po nim redukcja wielkości soma dopaminy VTA mają kluczowe znaczenie dla przypisywania zachęt do pasujących do nagrody bodźców związanych z nagrodą iw konsekwencji do utrzymania ułatwionego zachowania seksualnego. Aby przetestować tę hipotezę, zbadano wpływ blokowania receptorów opioidowych podczas doświadczenia krycia na aktywność nerwową wywołaną późniejszą ekspozycją na uwarunkowane kontekstowe wskazówki przewidujące nagrodę seksualną (związane z seksem wskaźniki kontekstualne). Zwierzęta naiwne narządów płciowych były również narażone na sygnały środowiskowe, ale nie były one związane z wcześniejszym doświadczeniem godowym, stąd były neutralne. Ostatecznie ustalono wyjściowe poziomy pERK w grupach doświadczających doświadczenia seksualnego i naiwnych, które pozostawały w klatkach domowych i nie były narażone na żadne sygnały (-Nie Cue). Potwierdzanie i rozszerzanie poprzednich ustaleń (Balfour i wsp., 2004), ekspozycja na kontekstowe sygnały związane z poprzednią nagrodą za seks znacznie zwiększyła ekspresję pERK u doświadczonych seksualnie mężczyzn w NAc (Rys. 7) i mPFC (Rys. 8A-C), ale nie spowodowało aktywacji neuronów w BLA (Rys. 8D) lub CPu (dane nie pokazane). Wystąpiły główne efekty ekspozycji na cue w rdzeniu NAc (F(1,12) = 12.1941, p = 0.004), ACA (F(1,12) = 5.541, p = 0.038) i PL (F(1,12) = 5.241, p = 0.041) i leczenie naloksonem w rdzeniu NAc (F(1,12) = 6.511, p = 0.025), ACA (F(1,12) = 15.242, p = 0.002) i PL (F(1,12) = 7.336, p = 0.019). Istniała istotna interakcja w rdzeniu NAc (F(1,12) = 10.107, p = 0.008), ACA (F(1,12) = 16.060, p = 0.002), PL (F(1,12) = 8.235, p = 0.014) i IL ((F(1,12) = 6.965, p = 0.022). Po pierwsze, związana z kojarzeniem ekspozycja Cue znacząco zwiększyła pERK u zwierząt doświadczonych seksualnie leczonych solą fizjologiczną (Exp Sal ​​+ Cue) w porównaniu z grupami kontrolnymi, które nie były narażone na żadne sygnały i pobrane z klatki domowej (Exp Sal-No Cue) w rdzeniu NAc (Rys. 7A; p <0.001) i podregiony mPFC ACA (Rys. 8A; p = 0.001), PL (Rys. 8B; p = 0.003) i IL (Rys. 8C; p = 0.029). W przeciwieństwie do tego, u zwierząt naiwnych leczonych solą fizjologiczną, ekspozycja na sygnały kontekstualne, które nie były związane z nagrodą seksualną, nie indukuje pERK w żadnym z obszarów mózgu (Naive Sal + Cue w porównaniu z naiwnym Sal-No Cue; Ryc. 7, 8), wykazując, że indukcja pERK jest specyficzna dla ekspozycji związanych z doświadczeniem seksualnym. Co więcej, same doświadczenia seksualne nie zmieniają wyjściowej ekspresji pERK w żadnym z regionów mózgu, ponieważ nie było różnic między grupami, które zostały pobrane z klatek domowych, bez względu na to, czy były płciowo naiwne czy doświadczane i leczone solą fizjologiczną lub naloksonem.

Rysunek 7. 

Endogenne działanie opioidów jest wymagane do aktywacji neuronalnej w NAc wywołanej przez warunkowe wskazówki związane z płcią. Liczba komórek pERK-IR na mm 2 w jądrze półleżącym, rdzeniu ( A ) i powłoce ( B ) u zwierząt naiwnych seksualnie (białych) i doświadczonych (Exp; czarnych), które były wstępnie leczone systemowym NLX lub solą fizjologiczną (Sal) podczas sesji godowych (samce Exp) lub sesji manipulacyjnych (samce Naive). Grupy były albo narażone na wskazówki kontekstowe (Cue), które były wskazówkami związanymi z godami u samców Exp i wskazówkami neutralnymi u zwierząt Naive, albo pobrane z klatek domowych (brak wskazówki; wskazane przez brak etykiety Cue). Dane przedstawiono jako średnia ± SEM; * oznacza istotną różnicę w porównaniu z kontrolami wstępnie leczonymi solą fizjologiczną bez wskazówki (Naive Sal-No Cue i Exp Sal-No Cue); # oznacza istotną różnicę w porównaniu z grupą Exp poddaną działaniu Sal i narażoną na bodźce (Exp Sal+Cue). Reprezentatywne obrazy komórek pERK-IR na mm2 w rdzeniu NAc samców z doświadczeniem seksualnym z Sal ( C , D ) lub NLX ( E , F ), pobrane z klatki domowej (brak bodźca, C, E) lub wystawione na bodźce kontekstowe związane z kopulacją (bodźce; D , F ). N = 4 w każdej grupie, z wyjątkiem grupy Naive NLX (brak bodźca), n = 3. ac, Spoidło przednie. Skala: 100 μm.

Rysunek 8. 

Wpływ naloksonu na ekspresję pERK wywołaną sygnałem godowym w innych regionach docelowych VTA. Liczba komórek pERK-IR na mm 2 u zwierząt niepoddanych seksualnemu dojrzewaniu (białych) i doświadczonych (Exp; czarnych), które były wstępnie leczone systemowym NLX lub solą fizjologiczną (Sal) podczas sesji godowych i były wystawione na sygnały kontekstowe (Cue) lub klatkę domową (bez sygnałów) w ACA ( A ), PL ( B ), IL ( C ) i BLA ( D ). Dane przedstawiono jako średnią ± SEM; * oznacza istotną różnicę w porównaniu z kontrolami wstępnie leczonymi solą fizjologiczną bez sygnału (Naive Sal-No Cue i Exp Sal-No Cue); # oznacza istotną różnicę w porównaniu z kontrolami niepoddanymi seksualnemu dojrzewaniu, wystawionymi na sygnał (Naive Sal+Cue).

Na poparcie naszej hipotezy wykazano, że leczenie naloksonem w trakcie doświadczeń seksualnych znacząco osłabiło indukcję pERK przez warunkowe wskazówki związane z płcią. Ekspresja pERK u doświadczonych samców poddanych działaniu naloksonu i narażonych na wskazówki (Exp NLX+Cue) nie różniła się od wyjściowej ekspresji pERK w żadnej z grup kontrolnych, zarówno naiwnych, jak i doświadczonych seksualnie, pobranych z klatek domowych (Naive Sal-No Cue lub Naive NLX-No Cue). Co więcej, ekspresja pERK u doświadczonych samców narażonych na sygnały podawane naloksonowi (Exp NLX+Cue) była istotnie niższa w porównaniu do doświadczonych zwierząt narażonych na sygnały podawane roztworowi soli fizjologicznej (Exp Sal+Cue) w rdzeniu NAc ( ryc. 7 A ; p = 0.002) i podregionach mPFC ( ryc. 8 A , ACA: p < 0.001; B , PL: p = 0.002; C , IL: p = 0.015).

W powłoce NAc dwukierunkowa analiza wariancji (ANOVA) nie wykazała statystycznie istotnych efektów czynników ekspozycji na bodziec i leczenia naloksonem. Jednakże porównanie parami wykazało, że ekspozycja na bodziec indukowała pERK w grupie z doświadczeniem seksualnym leczonej roztworem soli fizjologicznej (Exp SAL+Cue) w porównaniu z grupą kontrolną bez ekspozycji na bodziec ( ryc. 7B ; Naive SAL-No Cue: p = 0.0163).

Dyskusja

Niniejsze badanie wykazuje, że EOP działający w VTA podczas zachowań seksualnych, naturalnego zachowania nagrody, powodował znaczną, ale przejściową redukcję somy komórek dopaminowych VTA. Redukcji somy nie obserwowano w neuronach niedopaminowych VTA ani w neuronach dopaminowych w pobliskiej istocie czarnej, co sugeruje, że ta zmiana była specyficzna dla komórek dopaminowych VTA. Ta plastyczność dopaminy VTA wydaje się podobna do tej indukowanej przez przewlekłą ekspozycję na opiaty ( Sklair-Tavron i in., 1996 ; Russo i in., 2007 ; Mazei-Robison i in., 2011 ) i powodowała podobną tolerancję na egzogenną nagrodę w postaci opiatów (morfiny). Wykazaliśmy, że plastyczność dopaminy w VTA ma kluczowe znaczenie dla długoterminowego (utrzymanie), ale nie krótkoterminowego (rozwój), wzmocnienia zachowań seksualnych i aktywności neuronalnej indukowanej nagrodą (pERK) w regionach docelowych VTA: NAc i mPFC. Odkrycia te wskazują na rolę plastyczności dopaminy w VTA w długoterminowej ekspresji bodźców motywujących, takich jak naturalne wskazówki predykcyjne nagrody, lub pamięć nagrody.

Zostało dobrze udokumentowane, że doświadczenie seksualne powoduje ułatwienie późniejszego zachowania seksualnego, w tym szybszy początek inicjacji krycia i większą wydajność (Balfour i wsp., 2004; Pitchers i wsp., 2010a,b, 2012). To ułatwianie lub wzmacnianie zachowań seksualnych utrzymuje się przez co najmniej 28 d po kryciu (Pitchers i wsp., 2012). Ponadto wykazano, że zachowania seksualne i warunkowane czynniki predykcyjne nagród seksualnych powodują internalizację MOR w VTA i indukują aktywację neuronalną w całym układzie mezolimbicznym, w tym w VTA (neurony dopaminowe i niedopaminowe), NAc, PFC i BLA (Balfour i wsp., 2004, 2006). Dobrze znane neurony dopaminowe VTA odgrywają kluczową rolę w uczeniu się i przypisywaniu bodźców stymulujących związanych z nagraniem bodźców (Berridge i Robinson, 1998; Berridge i wsp., 2009; Flagel i wsp., 2011) i są krytyczne dla przewidywania nagrody (Schultz, 2010). Aktualne odkrycia poszerzają naszą aktualną wiedzę, demonstrując, że wywołana przez nagrodę neuroplastyczność VTA jest kluczowa dla tych funkcji i zależy od aktywacji MOR przez EOP w VTA. Obecnie nie wiadomo, który EOP jest ligandem MOR, który działa w VTA podczas zachowań seksualnych mężczyzn. Chociaż zarówno β endorfina, jak i enkefalina są zaangażowane w motywację motywacyjną do wzmacniania żywności (Hayward i wsp., 2002), to należy ustalić dla męskich zachowań seksualnych. Wcześniej wykazaliśmy, że neurony β-endorfinowe nie są aktywowane podczas krycia, ani nie występują wzrosty w mRNA POMC; co sugeruje, że β endorfina może nie być krytycznym EOP działającym w VTA podczas krycia (Davis i wsp., 2007). Ta plastyczność dopaminy VTA była niezbędna dla aktywności neuronów w mPFC, NAc i VTA po ekspozycji na sygnały środowiskowe związane z przewidywaniem nagrody seksualnej. Ponadto plastyczność dopaminy VTA była krytyczna dla długotrwałego wyrażania zwiększonej inicjacji i wykonywania zachowań seksualnych. W przeciwieństwie do tego, neuroplastyczność VTA spowodowana doświadczeniem seksualnym nie była wymagana do odpowiedzi hedonicznej, ponieważ nagroda seksualna (określona przez CPP) i krótkoterminowe ułatwianie motywacji seksualnej i wydajności (podczas doświadczenia seksualnego lub 1 d później) pozostały nietknięte mimo blokady MOR podczas krycia (Mehrara i Baum, 1990). Zamiast tego dane sugerują, że neuroplastyczność dopaminy VTA pośredniczy w dłuższym okresie (7 d po doświadczeniu ostatniego seksu; Pitchers i wsp., 2012) wyrażanie "pragnienia" nagród seksualnych i wzmożonych motywowanych reakcji na sygnały krycia (Miller i Baum, 1987; Berridge i Robinson, 1998).

Doświadczenia seksualne wykazały tolerancję krzyżową na nagrodę morfiny, podobną do działania kół poruszających się na myszach, inne naturalne zachowanie polegające na wynagradzaniu, efekt blokowany za pomocą naloksonu (Lett i wsp., 2001, 2002) i określono, że zależy od plastyczności komórek dopaminy VTA (wyniki bieżące). Podobnie jak w przypadku nagród naturalnych, powtarzana ekspozycja na opium morfiny lub heroiny powoduje przejściową redukcję wielkości soma dopaminy VTA (Sklair-Tavron i wsp., 1996; Spiga i wsp., 2003; Russo i wsp., 2007; Mazei-Robison i wsp., 2011). Co więcej, ekspozycja na opiaty z krótkimi okresami karencji powoduje tolerancję na nagrodę, co wynika z wyższych dawek leków wymaganych do tworzenia stowarzyszeń nagrody (Shippenberg i wsp., 1987; Russo i wsp., 2007) i powoduje samopodawanie zwierząt w celu zwiększenia spożycia narkotyków (Ahmed i wsp., 2000; Walker i wsp., 2003). W związku z tym, EOP i opiaty działają na wspólne substraty nerwowe, aby wywoływać tolerancję na nagrodę podczas wczesnego wycofywania, co może odzwierciedlać kompensacyjny mechanizm homeostatyczny w celu przeciwdziałania stymulacji przez wielokrotne narażenie (Koob i Le Moal, 2005). Natomiast podczas długotrwałej abstynencji opiatów tolerancja jest odwracana do wrażliwości na właściwości nagradzające leku (Harris i Aston-Jones, 2003; Aston-Jones i Harris, 2004; Harris i Gewirtz, 2004). Co ciekawe, doświadczenie seksualne, po którym nastąpił okres abstynencji seksualnej 7-28-d, powoduje reakcję uczulenia na psychostymulującą nagrodę (Pitchers i wsp., 2010a), który jest zależny od wywołanej przez krycie ekspresji deltaFosB i aktywacji 1 receptora dopaminy w NAc (Pitchers i wsp., 2013). Dlatego doświadczenie seksualnej nagrody powoduje równoczesną tolerancję nagrody opiatów i psychostymulujące uczulenie na nagrodę, chociaż należy przetestować dłuższy okres abstynencji seksualnej na tolerancję wynagrodzenia dla morfiny. Zakładamy, że te przeciwstawne działania na nagrodę za lek mogą być mediowane przez różne formy plastyczności neuronalnej w różnych obszarach układu mezolimbicznego: działanie VTA EOP i plastyczność dopaminy pośredniczą w tolerancji na opiaty nagrody (obecne badanie), podczas gdy ekspresja delta FosB NAc kontroluje uczulenie psychostymulujące (Pitchers i wsp., 2013). Oba te wydarzenia mogą przyczynić się do eskalacji zażywania narkotyków (Ahmed i Koob, 1998, 1999; Ahmed i wsp., 2000, 2002, 2003; Walker i wsp., 2003).

Mechanizmy molekularne, poprzez które EOP wpływa na neurony dopaminowe VTA podczas naturalnych zachowań nagradzających, pozostają nieznane. Szlak IRS2-Akt-mTORC2 jest głównym mediatorem zmniejszenia rozmiaru somy w VTA spowodowanego powtarzanymi dawkami morfiny ( Jaworski i in., 2005 ; Russo i in., 2007 ; Mazei-Robison i in., 2011 ). Zmianom wielkości neuronów dopaminowych w VTA wywołanym powtarzanymi dawkami morfiny można zapobiec, podając do VTA czynnik neurotroficzny pochodzenia mózgowego (BDNF; Sklair-Tavron i Nestler, 1995 ). BDNF aktywuje tę ścieżkę poprzez sygnalizację TrkB ( Russo i in., 2007 ), kinazę receptorową o wysokim powinowactwie do BDNF i część ścieżki IRS2-Akt ( Seroogy i Gall, 1993 ; Numan i Seroogy, 1999 ), a także ekspresjonowaną na neuronach dopaminowych i GABA w VTA. Obniżenie ekspresji różnych składników ścieżki IRS2-Akt przy użyciu technologii transferu genów wektorów wirusowych naśladuje skutki przewlekłej ekspozycji na opiaty. Co więcej, skutki ekspozycji na opiaty można złagodzić, przywracając tę ​​ścieżkę sygnałową ( Russo i in., 2007 ), a nadmierna ekspresja składnika mTORC2 zapobiega indukowanej przez morfinę redukcji soma dopaminy w VTA ( Mazei-Robison i in., 2011 ). W związku z tym wcześniejsze prace badające wpływ przewlekłego stosowania opiatów na wielkość soma dopaminowego VTA pokazują, że indukowane morfiną obniżenie ekspresji szlaku IRS2-Akt-mTOR jest zarówno wystarczające, jak i niezbędne do uzyskania tego efektu ( Mazei-Robison i Nestler, 2012 ). W związku z tym kusząca wydaje się hipoteza, że ​​wpływ doświadczeń seksualnych na neuroplastyczność dopaminową VTA jest w podobny sposób mediowany przez BDNF i szlak IRS2-Akt-mTORC2.

Podsumowując, obecne badanie wykazało, że neuroplastyczność VTA jest spowodowana doświadczeniem z naturalnymi zachowaniami satysfakcjonującymi, w szczególności poprzez powtarzające się zachowania seksualne mężczyzn. Konkretnie, EOP działa w VTA, aby zmniejszyć rozmiar soma dopaminy, co jest hipotetycznie związane ze zwiększoną pobudliwością nerwową i mniejszą ilością dopaminy, skutkującą układem hipodopaminergicznym, i zmienia działanie układu mezolimbicznego w odpowiedzi na sygnały, które są predykcyjne dla seksualnego wynagrodzenia. Ponadto, neuroplastyczność VTA ma kluczowe znaczenie dla motywacji motywacji i pamięci nagrody, ale nie dla hedonicznego wpływu zachowań seksualnych. Wreszcie, neuroplastyczność VTA spowodowana naturalnym zachowaniem nagród, po którym następuje krótki okres abstynencji nagród, wpływa na nagrodę od opiatów, a zatem może wpływać na podatność na rozwój uzależnienia od narkotyków.

Przypisy

  • Otrzymano Styczeń 12, 2014.
  • Wersja otrzymana May 17, 2014.
  • Zaakceptowano May 20, 2014.

  • Badanie to zostało wsparte grantami od Kanadyjskiego Instytutu Badań nad Zdrowiem do LMC i Nauk Przyrodniczych oraz Badań Inżynieryjnych do KKP

  • Autorzy deklarują brak konkurencyjnych interesów finansowych.

  • Korespondencja powinna być kierowana do Dr Lique M. Coolen, University of Mississippi Medical Center, Department of Physiology and Biophysics, 2500 North State Street, Jackson, MS 39216-4505. [email chroniony]

Referencje

  1. ↵
    1. Agmo A

    (1997) Męskie zachowanie seksualne szczura. Brain Res Brain Res Protoc 1: 203-209.

  2. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Koob GF

    (1998) Przejście od umiarkowanego do nadmiernego spożycia leku: zmiana hedonicznej wartości zadanej. Nauka 282: 298-300.

  3. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Koob GF

    (1999) Długotrwałe zwiększenie wartości zadanej dla samopodawania kokainy po eskalacji u szczurów. Psychopharmacology 146: 303-312.

  4. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Walker JR,
    3. Koob GF

    (2000) Trwały wzrost motywacji do zażywania heroiny u szczurów z historią eskalacji narkotyków. Neuropsychopharmacology 22: 413-421.

  5. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Kenny PJ,
    3. Koob GF,
    4. Markou A

    (2002) Dowody neurobiologiczne na allostazę hedoniczną związaną z nasileniem używania kokainy. Nat Neurosci 5: 625-626.

  6. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Lin D,
    3. Koob GF,
    4. Parsons LH

    (2003) Eskalacja samodzielnego podawania kokainy nie zależy od zmienionego poziomu kokainy wywołanego przez jądro w moczu. J. Neurochem 86: 102-113.

  7. ↵
    1. Aston-Jones G,
    2. Harris GC

    (2004) Substraty mózgowe do zwiększonego poszukiwania narkotyków podczas przedłużającego się wycofywania. Neuropharmacology 47: 167-179.

  8. ↵
    1. Balfour ME,
    2. Yu L,
    3. Coolen LM

    (2004) Zachowania seksualne i związane z płcią wskaźniki środowiskowe aktywują system mezolimbiczny u samców szczurów. Neuropsychopharmacology 29: 718-730.

  9. ↵
    1. Balfour ME,
    2. Brown JL,
    3. Yu L,
    4. Coolen LM

    (2006) Potencjalny udział eferentii z przyśrodkowej kory przedczołowej do aktywacji neuronów po zachowaniach seksualnych u samca szczura. Neuroscience 137: 1259-1276.

  10. ↵
    1. Beitner-Johnson D,
    2. Guitart X,
    3. Nestler EJ

    (1992) Białka nerwiamentowe i mezolimbiczny układ dopaminowy: powszechna regulacja przez przewlekłą morfinę i przewlekłą kokainę w szczurzej brzusznym obszarze nakrywkowym. J Neurosci 12: 2165-2176.

  11. ↵
    1. Berridge KC,
    2. Robinson TE

    (1998) Jaka jest rola dopaminy w nagrodzie: wpływ hedoniczny, uczenie się nagrody lub motywacja? Brain Res Brain Res Rev 28: 309-369.

  12. ↵
    1. Berridge KC,
    2. Robinson TE,
    3. Aldridge JW

    (2009) Rozróżnianie składników nagrody: "lubienie", "pragnienie" i uczenie się. Curr Opin Pharmacol 9: 65-73.

  13. ↵
    1. Blum K,
    2. Werner T,
    3. Carnes S,
    4. Carnes P,
    5. Bowirrat A,
    6. Giordano J,
    7. Oscar-Berman M,
    8. Gold M

    (2012) Seks, narkotyki i rock and roll: hipoteza o powszechnej aktywacji mezolimbicznej w funkcji polimorfizmów genu nagrody. J Leki psychoaktywne 44: 38-55.

  14. ↵
    1. Chu NN,
    2. Zuo YF,
    3. Meng L,
    4. Lee DY,
    5. Han JS,
    6. Cui CL

    (2007) Elektryczna stymulacja obwodowa odwróciła zmniejszenie wielkości komórek i zwiększyła poziom BDNF w brzusznym obszarze nakrywkowym u chronicznych szczurów leczonych morfiną. brain Res 1182: 90-98.

  15. ↵
    1. Davis BA,
    2. Fitzgerald ME,
    3. Brown JL,
    4. Amstalden KA,
    5. Coolen LM

    (2007) Aktywacja neuronów POMC podczas ogólnego pobudzenia, ale nie zachowania seksualne u samców szczura. Behav Neurosci 121: 1012-1022.

  16. ↵
    1. Fiorino DF,
    2. Coury A,
    3. Phillips AG

    (1997) Dynamiczne zmiany w jądrze półleżącym dopływie dopaminy podczas efektu Coolidge u samców szczura. J Neurosci 17: 4849-4855.

  17. ↵
    1. Flagel SB,
    2. Clark JJ,
    3. Robinson TE,
    4. Mayo L,
    5. Czuj A,
    6. Willuhn I,
    7. Akers CA,
    8. Clinton SM,
    9. Phillips PE,
    10. Akil H

    (2011) Selektywna rola dla dopaminy w uczeniu się bodźca. Nature 469: 53-57.

  18. ↵
    1. Frohmader KS,
    2. Dzbany KK,
    3. Balfour ME,
    4. Coolen LM

    (2010a) Mieszanie przyjemności: przegląd wpływu leków na zachowania seksualne u ludzi i modeli zwierzęcych. Horm Behav 58: 149-162.

  19. ↵
    1. Frohmader KS,
    2. Wiskerke J,
    3. Mądry RA,
    4. Lehman MN,
    5. Coolen LM

    (2010b) Metamfetamina działa na subpopulacje neuronów regulujących zachowania seksualne u samców szczurów. Neuroscience 166: 771-784.

  20. ↵
    1. Harris AC,
    2. Gewirtz JC

    (2004) Podniesiony przestój podczas wycofywania się z ostrej morfiny: model odstawienia opiatów i lęku. Psychopharmacology 171: 140-147.

  21. ↵
    1. Harris GC,
    2. Aston-Jones G

    (2003) Zmieniona motywacja i uczenie się po odstawieniu opiatów: dowód na przedłużającą się deregulację przetwarzania nagrody. Neuropsychopharmacology 28: 865-871.

  22. ↵
    1. Hayward MD,
    2. Pintar JE,
    3. Niski MJ

    (2002) Selektywny deficyt w zadawaniu u myszy bez beta-endorfiny i enkefaliny. J Neurosci 22: 8251-8258.

  23. ↵
    1. Hoebel BG,
    2. Avena NM,
    3. Bocarsly ME,
    4. Rada P

    (2009) Naturalne uzależnienie: model behawioralny i obwodowy oparty na uzależnieniu od cukru u szczurów. J Addict Med 3: 33-41.

  24. ↵
    1. Hyman SE,
    2. Malenka RC,
    3. Nestler EJ

    (2006) Neuronowe mechanizmy uzależnienia: rola uczenia i pamięci związanej z nagrodzeniem. Annu Rev Neurosci 29: 565-598.

  25. ↵
    1. Ikemoto S,
    2. Kohl RR,
    3. McBride WJ

    (1997) Blokada receptora GABA (A) w przednim odcinku brzusznym zwiększa pozakomórkowy poziom dopaminy w jądrze półleżącym szczurów. J. Neurochem 69: 137-143.

  26. ↵
    1. Jaworski J,
    2. Spangler S,
    3. Seeburg DP,
    4. Hoogenraad CC,
    5. Sheng M

    (2005) Kontrola dendrytycznego uwarstwienia przez cel szlaku rapamycyny fosfinoinositide-3'-kinaza-Akt. J Neurosci 25: 11300-11312.

  27. ↵
    1. Johnson SW,
    2. Północny RA

    (1992) Opioidy pobudzają neurony dopaminowe poprzez hiperpolaryzację lokalnych interneuronów. J Neurosci 12: 483-488.

  28. ↵
    1. Klitenick MA,
    2. DeWitte P,
    3. Kalivas PW

    (1992) Regulacja uwalniania dopaminy somatodendrytów w obszarze brzusznym nakrywki za pomocą opioidów i GABA: badanie mikrodializy in vivo. J Neurosci 12: 2623-2632.

  29. ↵
    1. Koob GF,
    2. Le Moal M

    (2005) Plastyczność neurochirurgii nagrody i "ciemna strona" uzależnienia od narkotyków. Nat Neurosci 8: 1442-1444.

  30. ↵
    1. Lennette DA

    (1978) Ulepszone medium montażowe do mikroskopii immunofluorescencyjnej. Am J Clin Pathol 69: 647-648.

  31. ↵
    1. Lett BT,
    2. Grant VL,
    3. Koh MT

    (2001) Nalokson łagodzi preferencje preferowanego miejsca, wywołane bieganiem kół u szczurów. Physiol Behav 72: 355-358.

  32. ↵
    1. Lett BT,
    2. Grant VL,
    3. Koh MT,
    4. Flynn G

    (2002) Wcześniejsze doświadczenia z prowadzeniem kół powodują tolerancję krzyżową na efekt nagradzania morfiny. Pharmacol Biochem Behav 72: 101-105.

  33. ↵
    1. Matthews RT,
    2. Niemiecki DC

    (1984) Elektrofizjologiczne dowody na pobudzenie neuronów dopaminowych szczurzej brzusznej do nakłucia przez morfinę. Neuroscience 11: 617-625.

  34. ↵
    1. Mazei-Robison MS,
    2. Koo JW,
    3. Friedman AK,
    4. Lansink CS,
    5. Robison AJ,
    6. Vinish M,
    7. Krishnan V,
    8. Kim S,
    9. Siuta MA,
    10. Galli A,
    11. Niswender KD,
    12. Appasani R,
    13. Horvath MC,
    14. Neve RL,
    15. Worley PF,
    16. Snyder SH,
    17. Hurd YL,
    18. Cheer JF,
    19. Han MH,
    20. Russo SJ,
    21. i in.

    (2011) Rola dla sygnalizacji mTOR i aktywności neuronalnej w wywołanych przez morfinę adaptacjach neuronów dopaminowych w okolicy nakrywkowej. Neuron 72: 977-990.

  35. ↵
    1. Mazei-Robison MS,
    2. Nestler EJ

    (2012) Indukowana przez opiaty plastyczność molekularna i komórkowa brzusznego obszaru nakrywkowego i neuronów locus coeruleus katecholaminowych. Cold Spring Harb Perspect Med 2: a012070.

  36. ↵
    1. Mehrara BJ,
    2. Baum MJ

    (1990) Nalokson zaburza ekspresję, ale nie jest pozyskiwaniem przez samce szczurów warunkowej reakcji preferencji miejsca dla kobiety o podwyższonej odporności. Psychopharmacology 101: 118-125.

  37. ↵
    1. Meisel RL,
    2. Mullins AJ

    (2006) Doświadczenia seksualne u samic gryzoni: mechanizmy komórkowe i konsekwencje funkcjonalne. brain Res 1126: 56-65.

  38. ↵
    1. Miller RL,
    2. Baum MJ

    (1987) Nalokson hamuje krycie i uwarunkowane preferencje miejsca u samców szczura u samców szczura wkrótce po kastracji. Pharmacol Biochem Behav 26: 781-789.

  39. ↵
    1. Mitchell JB,
    2. Stewart J

    (1990) Ułatwienie zachowań seksualnych u samców szczurów związanych z iniekcjami opiatów wewnątrz VTA. Pharmacol Biochem Behav 35: 643-650.

  40. ↵
    1. Murphy LO,
    2. Blenis J

    (2006) Specyficzność sygnału MAPK: właściwe miejsce we właściwym czasie. Trendy Biochem Sci 31: 268-275.

  41. ↵
    1. Nestler EJ

    (2012) Mechanizmy transkrypcyjne uzależnienia od narkotyków. Clin Psychopharmacol Neurosci 10: 136-143.

  42. ↵
  • ↵
    1. Paxinos G,
    2. Watson C

    (2013) Mózg szczura o współrzędnych stereotaktycznych (Academic, Boston), Ed 7.

  • ↵
    1. Dzbany KK,
    2. Balfour ME,
    3. Lehman MN,
    4. Richtand NM,
    5. Yu L,
    6. Coolen LM

    (2010a) Neuroplastyczność w układzie mezolimbicznym wywołana naturalną nagrodą i późniejszą abstynencją nagród. Biol Psychiatry 67: 872-879.

  • ↵
    1. Dzbany KK,
    2. Frohmader KS,
    3. Vialou V,
    4. Mouzon E,
    5. Nestler EJ,
    6. Lehman MN,
    7. Coolen LM

    (2010b) DeltaFosB w jądrze półleżącym ma kluczowe znaczenie dla wzmocnienia efektów seksualnego wynagrodzenia. Genes Brain Behav 9: 831-840.

  • ↵
    1. Dzbany KK,
    2. Schmid S,
    3. Di Sebastiano AR,
    4. Wang X,
    5. Laviolette SR,
    6. Lehman MN,
    7. Coolen LM

    (2012) Naturalne doświadczenie w nagradzaniu zmienia rozkład i funkcjonowanie receptorów AMPA i NMDA w jądrze półleżącym. PLoS ONE 7: e34700.

  • ↵
    1. Dzbany KK,
    2. Vialou V,
    3. Nestler EJ,
    4. Laviolette SR,
    5. Lehman MN,
    6. Coolen LM

    (2013) Nagrody naturalne i narkotykowe wpływają na powszechne mechanizmy plastyczności nerwowej, a DeltaFosB jest kluczowym mediatorem. J Neurosci 33: 3434-3442.

  • ↵
    1. Roux PP,
    2. Blenis J

    (2004) Kinazy białkowe aktywowane przez ERK i p38 MAPK: rodzina kinaz białkowych o różnych funkcjach biologicznych. Microbiol Mol Biol Rev 68: 320-344.

  • ↵
    1. Russo SJ,
    2. Bolanos CA,
    3. Theobald DE,
    4. DeCarolis NA,
    5. Renthal W,
    6. Kumar A,
    7. Winstanley CA,
    8. Renthal NE,
    9. Wiley MD,
    10. Self DW,
    11. Russell DS,
    12. Neve RL,
    13. Eisch AJ,
    14. Nestler EJ

    (2007) Szlak IRS2-Akt w śródmózgowiu neuronów dopaminowych reguluje behawioralne i komórkowe odpowiedzi na opiaty. Nat Neurosci 10: 93-99.

  • ↵
    1. Schultz W

    (2010) Wiele funkcji neuronów dopaminowych. F1000 Biol Rep 2: 2.

  • ↵
    1. Seroogy KB,
    2. Gall CM

    (1993) Ekspresja neurotrofin przez neurony dopaminergiczne śródmózgowia. Exp Neurol 124: 119-128.

  • ↵
    1. Shippenberg TS,
    2. Bals-Kubik R,
    3. Herz A

    (1987) Motywacyjne właściwości opioidów: dowód, że aktywacja receptorów delta pośredniczy w procesach wzmacniania. brain Res 436: 234-239.

  • ↵
    1. Sklair-Tavron L,
    2. Nestler EJ

    (1995) Przeciwdziałające działanie morfiny i neurotrofin, NT-3, NT-4 i BDNF, na neurony locus coeruleus in vitro. brain Res 702: 117-125.

  • ↵
    1. Sklair-Tavron L,
    2. Shi WX,
    3. Lane SB,
    4. Harris HW,
    5. Bunney BS,
    6. Nestler EJ

    (1996) Przewlekła morfina wywołuje widoczne zmiany w morfologii mezolimbicznych neuronów dopaminowych. Proc Natl Acad Sci USA 93: 11202-11207.

  • ↵
    1. Spiga S,
    2. Serra GP,
    3. Puddu MC,
    4. Foddai M,
    5. Diana M

    (2003) Nieprawidłowości indukowane wywołaniem morfiny w VTA: konfokalna laserowa mikroskopia skaningowa. Eur J Neurosci 17: 605-612.

  • ↵
    1. Swanson LW

    (2004) Mapy mózgu: struktura mózgu szczura (Academic, San Diego), Ed 3.

  • ↵
    1. Tenk CM,
    2. Wilson H,
    3. Zhang Q,
    4. Dzbany KK,
    5. Coolen LM

    (2009) Nagroda seksualna u samców szczurów: wpływ doświadczenia seksualnego na uwarunkowane preferencje miejsca związane z ejakulacją i intrygami. Horm Behav 55: 93-97.

  • ↵
    1. Tzschentke TM

    (2007) Pomiar nagrody za pomocą warunkowego paradygmatu preferencji miejsca (CPP): aktualizacja ostatniej dekady. Addict Biol 12: 227-462.

  • ↵
    1. van Furth WR,
    2. van Ree JM

    (1996) Motywacja seksualna: zaangażowanie endogennych opioidów w brzusznym obszarze nakrywkowym. brain Res 729: 20-28.

  • ↵
    1. van Furth WR,
    2. Wolterink G,
    3. van Ree JM

    (1995) Regulacja męskich zachowań seksualnych: zaangażowanie opioidów mózgu i dopaminy. Brain Res Brain Res Rev 21: 162-184.

  • ↵
    1. Walker JR,
    2. Chen SA,
    3. Moffitt H,
    4. Inturrisi CE,
    5. Koob GF

    (2003) Przewlekła ekspozycja na opioidy zwiększa samopoczucie heroiny u szczurów. Pharmacol Biochem Behav 75: 349-354.

  • ↵
    1. Młody KA,
    2. Gobrogge KL,
    3. Liu Y,
    4. Wang Z

    (2011) Neurobiologia wiązania par: wgląd od społecznie monogamicznego gryzonia. Przód Neuroendocrinol 32: 53-69.

    •