Endogenna neuroplastyczność neuronów dopaminergicznych indukowana przez opioidy w brzusznym obszarze nakrywkowym wpływa na nagrodę naturalną i opiatową (2014)

Komentarze: Podczas spotkania Członkom Konsorcjum zostały zaprezentowane Badania DeltaFosB często przytaczamy wszystkie skupione na nich jądro półleżowe (ośrodek nagrody) i odkrył, że seks w dużym stopniu wyzwala te same mechanizmy mózgu, co met i kokaina. Z przełomowego badania tego samego badacza (Ustawa o przyznawaniu nagród w zakresie ochrony środowiska naturalnego i lekarstw w sprawie wspólnych mechanizmów plastyczności nerwowej z ΔFosB jako kluczowym mediatorem (2013)):

Zatem nagrody naturalne i narkotykowe nie tylko zbiegają się na tej samej ścieżce neuronowej, ale zbiegają się na tych samych mediatorach molekularnych i prawdopodobnie w tych samych neuronach w Nucleus Accumbens, aby wpłynąć na istotność motywacji i „chcenie” obu typów nagród

Odbieranie: metamfetamina, kokaina i seks - wszystkie te same podstawowe rzeczy działają na te same komórki nerwowe w centrum nagrody (jądro półleżące), niezależnie od tego, co robią inaczej w innych częściach mózgu. To zlikwidowało zwykłe gadanie, że naturalne nagrody i narkotyki różnią się mechanizmami i efektami.

To nowe badanie dotyczyło wpływu płci na VTA. VTA to miejsce, w którym zaczynają się komórki nerwowe wytwarzające dopaminę - i rozgałęziają się do jądra półleżącego, kory czołowej i ciała migdałowatego. Zasadniczo VTA jest źródłem (studnią) większości naszej dopaminy. Zobacz te 2 zdjęcia obwodu nagród: Pic1, Pic2

Naukowcy odkryli, że seks (szczyt) powoduje chwilowe kurczenie się ciał komórek w VTA (u mężczyzn). Ciała komórkowe i ich dendryty zawierają szare komórki mózgu. Właśnie to uzależnia heroina od VTA (Nie jednorazowe użycie heroiny, ale chroniczne używanie heroiny). Zauważ, że ten sam skurcz ciał komórek VTA występuje u osób uzależnionych od heroiny.

Skurcz komórek indukowany przez seks utrzymuje się przez co najmniej 7 dni. Zmiany indukowane przez płeć powróciły do ​​normy w 30 dni, ale naukowcy oceniali tylko dni 1, 7 i 30.

Kurczenie się ciał komórkowych w uzależnieniu od heroiny powoduje obniżenie poziomu dopaminy w jądrze półleżącym - lub to, co nazywamy odczulanie. Naukowcy podali szczurom morfinę, aby ocenić ich reakcję (po stosunku), ale nic się nie wydarzyło. Zwykle szczury bardzo lubią morfinę, ale tutaj tymczasowo odczulano. Krótko mówiąc, obwód nagrody szczurów po wytrysku nie reagował na niski poziom heroiny. Naukowcy przypuszczali, że do wywołania „normalnej” reakcji szczura potrzebne będą wyższe dawki.

Podsumowując - seks (tymczasowo) robi dokładnie to samo w VTA, co uzależnienie od heroiny: kurczenie się ciał komórek nerwowych wytwarzających dopaminę. Prowadzi to do obniżenia poziomu dopaminy w ośrodku nagrody i mniejszej wrażliwości na narkotyki - a regeneracja mózgów szczurów zajmuje co najmniej 7 dni.


 

J Neurosci. 2014 Jun 25;34(26):8825-36. doi: 10.1523 / JNEUROSCI.0133-14.2014.

Dzbany KK1, Coppens CM2, Beloate LN3, Fuller J.2, Van S2, Frohmader KS2, Laviolette SR2, Lehman MN4, Coolen LM5.

Abstrakcyjny

Naturalna nagroda i nadużywanie narkotyków zbiegają się na szlaku mezolimbicznym i aktywują wspólny mechanizm plastyczności nerwowej w jądrze półleżącym. Przewlekła ekspozycja na opiaty indukuje plastyczność w neuronach dopaminergicznych w obszarze brzusznym nakrywki (VTA), który reguluje tolerancję na nagrodę morfiny.

Tutaj testujemy hipotezy, że wywołane przez krycie uwalnianie endogennych opioidów w VTA powoduje zmiany morfologiczne komórek dopaminy VTA u samców szczurów, co z kolei reguluje długotrwałą ekspresję wywołanego doświadczeniem wzmocnienia zachowań seksualnych.

Po pierwsze, doświadczenie seksualne zmniejszyło rozmiar soma Xamina XNXX i 1, ale nie 7 dni po ostatniej sesji godowej. Efekt ten został zablokowany za pomocą naloksonu przed każdą sesją godową; w ten sposób plastyczność komórek dopaminy VTA była zależna od działania endogennych opioidów.

Z kolei plastyczność VTA wiązała się ze zmianą nagrody od opiatów, ponieważ samce doświadczane seksualnie nie tworzyły warunkowej preferencji miejsca dla morfiny 0.5 mg / kg.

Następnie ustalono, czy endogenne działanie opioidowe pośredniczy w odbiorze i pamięci seksualnej u samców szczurów leczonych naloksonem podczas doświadczenia godowego, systemowo lub wewnątrz-VTA. Nalokson nie zapobiegał początkowemu wywołanemu doświadczeniu ułatwieniu zachowań seksualnych w powtarzających się sesjach godowych lub warunkowanej preferencji miejsca do krycia. Jednak leczenie naloksonem osłabiało długoterminową ekspresję wywołanego przez doświadczenie ułatwiania zachowań seksualnych i aktywacji neuronów w obszarach mezolimbicznych indukowanych przez związane z pokrewnymi warunkowe sygnały..

Łącznie, te dane pokazują, że endogenne opioidy podczas krycia indukują plastyczność neuronów w neuronach dopaminy VTA, które wydają się krytyczne dla nagrody morfinowej i pamięci długotrwałej dla zachowania naturalnej nagrody.

 

Wprowadzenie

Naturalne zachowania nagród są mediowane przez system mezokortykolimbiczny (Meisel i Mullins, 2006; Hoebel i wsp., 2009; Frohmader i wsp., 2010a; Pitchers i wsp., 2010a; Young i wsp., 2011; Blum i wsp., 2012). Leki nadużywania powodują zmiany neurologiczne w tym systemie, co z kolei przyczynia się do rozwoju i wyrażania nadużywania substancji (Hyman i wsp., 2006; Nestler, 2012). Wcześniej stwierdziliśmy, że doświadczenie z naturalnymi zachowaniami nagród, tj. Doświadczeniem seksualnym u samców szczurów, powoduje również plastyczność nerwową w jądrze półleżącym (NAc), w tym zwiększone kolce dendrytyczne (Pitchers i wsp., 2010a) i deltaFosB (Pitchers i wsp., 2013). Z kolei ta plastyczność wywołana przez seks ma kluczowe znaczenie dla efektów doświadczenia seksualnego w późniejszym kryciu, przejawiającym się w ułatwianiu inicjacji i wykonywaniu zachowań seksualnych (Pitchers i wsp., 2010b, 2012, 2013). Ponadto doświadczenie seksualne zmienia wrażliwość na środki psychostymulujące, w tym uwrażliwienie na aktywność lokomotoryczną i zwiększoną nagrodę (Frohmader i wsp., 2010a; Pitchers i wsp., 2010a, 2013).

NAc jest jednym z dalszych celów neuronów dopaminergicznych w brzusznym obszarze nakrywkowym (VTA). Neurony dopaminowe VTA są aktywowane podczas krycia i po ekspozycji na czynniki warunkujące przewidywanie seksualnego wynagrodzenia (Balfour i wsp., 2004; Frohmader i wsp., 2010a) poprzez wiązanie endogennego peptydu opioidowego (EOP) w μ-receptory opioidowe (MORs; Matthews i niemiecki, 1984; Johnson i North, 1992; Klitenick i wsp., 1992; Ikemoto i wsp., 1997; Balfour i wsp., 2004). W związku z tym ekspozycja na czynniki warunkujące zachowania seksualne powoduje uwalnianie EOP i aktywację dopaminy komórek VTA, co ułatwia motywację seksualną (Mitchell i Stewart, 1990; van Furth i wsp., 1995; van Furth i van Ree, 1996) i uwalnianie dopaminy w NAc (Fiorino i wsp., 1997).

Powtarzająca się ekspozycja na egzogenne opiaty powoduje zmiany morfologiczne w VTA (Mazei-Robison i wsp., 2011; Mazei-Robison i Nestler, 2012), zmniejszona wielkość soma neuronów dopaminy VTA (Sklair-Tavron i wsp., 1996; Spiga i wsp., 2003; Chu i wsp., 2007; Russo i wsp., 2007; Mazei-Robison i wsp., 2011), zmniejszone poziomy białek neurofilamentowych (Beitner-Johnson i wsp., 1992), zwiększoną pobudliwość komórek dopaminowych i zmniejszony transport okoplazmatyczny i produkcję dopaminy do NAc (Beitner-Johnson i wsp., 1992; Mazei-Robison i wsp., 2011). Te zmiany neuronów dopaminy VTA powodują tolerancję na morfinę i są przejściowe, ponieważ rozpraszają się w ciągu miesiąca od abstynencji lekowej (Russo i wsp., 2007). Obecnie nie jest jasne, czy plastyczność w neuronach dopaminowych VTA jest unikalna dla działania opiatów, czy też są one wytwarzane przez uwalnianie EOP podczas naturalnych zachowań satysfakcjonujących.

Tutaj testujemy hipotezę, że naturalne doświadczenie nagrody powoduje neuroplastyczność podobną do tej powodowanej przez opiaty, a zatem, że opiaty zbiegają się na mechanizmie plastyczności, który jest krytyczny dla naturalnego zachowania nagrody i nagrody. Testujemy, czy doświadczenie seksualne u samców szczurów zmniejsza wielkość soma neuronów dopaminowych VTA poprzez proces zależny od działania EOP w VTA. Ponadto badamy, czy zmiany indukowane przez EOP w neuronach dopaminowych VTA są związane ze wzmocnieniem naturalnych zachowań nagradzających i przypisaniem zachęt do sygnałów związanych z naturalną nagrodą, a jednocześnie powodują tolerancję krzyżową na nagrodę morfiny.

Materiały i Metody

Zwierzęta

Dorosłe samce szczurów Sprague-Dawley (200-225 g) otrzymano od Charles River i umieszczono w parach w sztucznie oświetlonych pomieszczeniach w cyklu 12 h światło / ciemność we wszystkich doświadczeniach (światła wyłączone przy 10: 00 AM, z wyjątkiem eksperymentu z tolerancją na morfinę , zgaśnie przy 5: 00 PM). Jedzenie i woda były dostępne ad libitum z wyjątkiem testów behawioralnych. Samce Stimulus poddano owariektomii i wszczepiono podskórnie za pomocą kapsułek SILASTIC 5% 17-β-estradiol z benzoesanem (średnica wewnętrzna 1.98 mm, długość 0.5 cm, Dow-Corning). Wstrzyknięcia progesteronu (podskórnego, 500 μg w 0.1 ml oleju sezamowego) przed badaniem podano 3-6 hw celu wywołania otyłości seksualnej. Wszystkie procedury zostały zatwierdzone przez University of Western Ontario i University of Michigan Animal Care Committees i dostosowane do kanadyjskiej Rady na temat opieki nad zwierzętami i wytycznych National Institutes of Health dotyczących kręgowców w badaniach.

Przebieg czasowy zmian wielkości soma dopaminy VTA

Codzienne sesje godowe.

Aby zbadać przebieg zmian w wielkości soma w neuronie dopaminy w VTA, zwierzęta doświadczone seksualnie i naiwne zostały zabite przy 1, 7 lub 31 d (n = 5-8 na grupę) po ostatnim dniu krycia (doświadczonym) lub obsłudze (naiwny). Grupy doświadczające seksualności były dopasowane pod względem zachowań seksualnych podczas ostatniej sesji godowej, a także całkowita liczba wytrysków podczas pięciu sesji (średnia dla 5 dla każdej grupy) i nie różniły się żadnym parametrem zachowań seksualnych.

Sesje godowe.

Seksualnie naiwni mężczyźni zostali przydzieleni do jednego z dwóch warunków doświadczalnych: naiwny seksualnie lub doświadczony seksualnie. Zwierzętom doświadczonym seksualnie pozwolono pięciokrotnie wiązać się w kolejnych dniach z samicami receptywnymi w prostokątnych klatkach testowych (60 × 45 × 50 cm), aż do pojawienia się wytrysku lub do 1 godz. (W zależności od tego, co nastąpi wcześniej). Klatki dokładnie wyczyszczono roztworem etanolu 70% i dodano świeżą pościel pomiędzy sesjami kojarzenia. Zachowanie seksualne zostało wykonane podczas ciemnej fazy (2-6 godz. Po wystąpieniu ciemności). Tylko zwierzęta, które wytryskują podczas co najmniej czterech z pięciu sesji godowych, zostały uznane za doświadczane seksualnie i włączone w eksperymenty. Obserwowano wszystkie sesje godowe i rejestrowano zachowania seksualne. Liczba rozruchów (M), czas opóźnienia (ML, czas od wprowadzenia samicy do pierwszego montażu), opóźnienie wprowadzenia (IL, czas od wprowadzenia samicy do pierwszego wprowadzenia) i opóźnienie ejakulacji (EL; czas od pierwszego wprowadzenia do wytrysku) zostały zarejestrowane (Agmo, 1997). Zwierzęta naiwne umieszczono w czystej klatce testowej dla 1 h jednocześnie z seksualnie doświadczonymi samcami w tym samym pomieszczeniu, tak, że wystawiono je na działanie odległych kobiecych zapachów i podobnych poziomów zaburzeń i ekologicznej nowości, jak doświadczeni mężczyźni.

Oznaczanie immunofluorescencyjne.

Zwierzęta były głęboko znieczulane przy użyciu pentobarbitalu sodu (270 mg / kg, ip) i perfundowane dosercowo za pomocą 50 ml 0.9% soli fizjologicznej, a następnie 500 ml 4% paraformaldehydu w 0.1 m buforze fosforanu sodu (PB). Mózgi usunięto i utrwalono dla 1h w temperaturze pokojowej (RT) w tym samym środku utrwalającym, a następnie zanurzono w 20% sacharozy i 0.01% azydku sodu w 0.1 m PB do przechowywania w 4 ° C. Przekroje wieńcowe wycinano przy 35 μm na zamrożonym mikrotomie (H400R, Microm) i zbierano w czterech równoległych seriach w roztworze krioprotektanta (30% sacharoza, 30% glikol etylenowy w 0.1 m PB), a następnie przechowywano w 20 ° C. Wszystkie inkubacje przeprowadzono w RT z delikatnym mieszaniem i obficie płukano 0.1 m PBS, pH 7.35, pomiędzy inkubacjami. Skrawki wystawiono na działanie 1% H2O2 dla 10 min w celu zniszczenia endogennych peroksydaz, następnie zablokowano dla 1 h w roztworze inkubacyjnym (PBS +: PBS zawierającym 0.4% Triton X-100, Sigma-Aldrich) i 0.1% albuminy z surowicy bydlęcej (Jackson Immuno Research Laboratories). Następnie skrawki inkubowano przez noc w temperaturze pokojowej w mysiej hydroksylazie myszy (TH) z tyrozyną (TH) (1: 20 000; Millipore). Po inkubacji pierwotnego przeciwciała skrawki inkubowano w sprzężonym z AlexaFluor 555 kozim przeciwciele przeciw-mysim (1: 100, Invitrogen, Eugene, OR) dla 30 min. Na koniec wycinki przemyto 0.1 m PB, umieszczono na szklanych szkiełkach Superfrost Plus, wysuszono i przykryto szkiełkami żelatynowymi zawierającymi środek przeciw płowieniu 1,4-diazabicyklo (2,2) oktan (DABCO, 50 mg / ml, Sigma-Aldrich; Lennette, 1978).

Analiza danych: rozmiar neuroma-soma.

Obrazy neuronów TH-immunoreaktywnych (IR) w VTA zostały wykonane przy powiększeniu 40 × na trzech poziomach od jamy brzusznej do ogonowej (Balfour i wsp., 2004). Nie stwierdzono różnic między komórkami na różnych poziomach. Rozmiar neuronów TH-IR analizowano za pomocą ImageJ (National Institutes of Health). Średni obszar, obwód i kołowość zostały zmierzone w sposób opisany przez Sklair-Tavron i in. (1996). Średnią liczbę komórek 25 na zwierzę (połączono wszystkie poziomy VTA 3) analizowano i włączono tylko komórki z wyraźnie widocznym jądrem. Dla każdego zwierzęcia obliczono średni obszar, obwód i kołowość. Do analizy statystycznej użyto dwuczynnikowej ANOVA [czynniki: doświadczenie seksualne (doświadczony seks lub naiwność płciowa) i czas (1, 7 lub 31 d)], a następnie post hoc porównania przy użyciu metody Holm-Sidak z poziomem istotności 0.05.

VTA zmiany nie-dopaminy

Dwutygodniowe sesje godowe.

Aby przetestować, czy doświadczenie seksualne podczas codziennych sesji godowych jest wymagane dla zmniejszenia wymiaru soma neuronu TH-IR, analizowano neurony dopaminowe VTA zwierząt, które łączyły się podczas pięciu sesji dwutygodniowych. Sesje krycia były opisane powyżej, ale przez okres 2.5 tygodni. Mózgi zostały zebrane 7 d po ostatnim kryciu lub obsłudze.

Oznaczanie immunoperoksydazą.

Ponadto zbadano, czy zastosowanie czułych technik barwienia z immunoperoksydazą i wykrywaniem chromogenu umożliwiłoby wizualizację zmian wielkości soma TH-IR. Perfuzję i przetwarzanie tkanek prowadzono jak opisano powyżej. Po leczeniu 1% H2O2 i PBS +, skrawki inkubowano przez noc w temperaturze pokojowej w mysim poliklonalnym przeciwciale hydroksylazy tyrozynowej (TH) (1: 20 000; Millipore). Po inkubacji pierwotnego przeciwciała skrawki inkubowano ze skoniugowanym z biotyną kozim anty-króliczym IgG (1 h, 1: 500 w PBS +, Vector Laboratories), peroksydazą awidyny-biotyny-chrzanu (1 h, elitarną ABC; 1: 1 000 w PBS Vector Laboratories) i tetrahydrochlorek 3,3'-diaminobenzydyny (10 min, 0.02%, DAB, Sigma-Aldrich) wzbogacony siarczanem niklu w (0.02% w 0.1 m PB) z nadtlenkiem wodoru (0.015%). Skrawki dokładnie przemyto w 0.1 m PB, aby zakończyć reakcję i osadzono na zakodowanych Superfrost plus szklane szkiełka (Fisher) z 0.3% żelatyny w ddH2Po odwodnieniu wszystkie szkiełka nakrywano szkiełkiem do montowania DPX (ftalan dibutylowy, Sigma-Aldrich).

Analiza danych: rozmiar neuroma-soma.

Komórki TH-IR analizowano pod względem powierzchni, obwodu i kołowości, jak opisano powyżej. Ponadto analizowano komórki TH-IR w istocie czarnej (SN), w tych samych przekrojach, które były używane do analizy komórek VTA TH-IR. Wreszcie, po analizie komórek VTA i SN TH-IR, skrawki wybarwiono kontrastowo przy użyciu fioletu krezylowego, a komórki nie-TH-IR analizowano przy użyciu tych samych metod, jak opisano powyżej. Różnice między grupami naiwnymi i doświadczonymi porównano za pomocą dwustronnego studenta t testy z poziomem istotności 0.05.

Wpływ naloksonu na indukowaną przez doświadczenie redukcję wielkości soma-nu dopaminy

Aby ustalić, czy MORs odegrały rolę w wywołanych doświadczeniem seksualnym zmianach w wielkości soma w neuronie dopaminowym, MOR zostały zablokowane podczas zachowań seksualnych. Połowa zwierząt uzyskała doświadczenie seksualne, podczas gdy druga połowa została potraktowana, ale pozostała naiwna seksualnie. Zwierzętom doświadczonym seksualnie pozwolono krzyżować się w ciągu 5 kolejnych dni. W grupach doświadczonych seksualnie i naiwnych zwierzęta leczono nieselektywnym naloksonem antagonisty MOR (10 mg / kg, sc, Sigma-Aldrich, rozpuszczonym w soli fizjologicznej 0.9%) lub roztworem soli 30 min przed wprowadzeniem samicy (doświadczonej) lub przed podaniem (naiwny); tworząc w ten sposób cztery grupy eksperymentalne: naiwny nasen płciowo (Naive Sal), naiwnie seksualnie nalokson (Naive NLX), doświadczoną drogą pokarmową sól fizjologiczną (Exp Sal) i doświadczony seksualnie nalokson (Exp NLX; n = 5-8 na grupę). Leczenie naloksonem nie miało statystycznie znaczącego wpływu na żaden parametr zachowania seksualnego, na którymkolwiek z 5-u, a grupy leczone naloksonem i solą były identyczne pod względem doświadczenia seksualnego. Wszystkie zwierzęta zostały zabite przez perfuzję wewnątrzsercową 7 d po ostatniej sesji godowej. Przekrojenie, immunohistochemię i analizę danych (dwuczynnikowa ANOVA, czynniki: doświadczenie seksualne i leczenie lekiem) dla rozmiaru soma dopaminy przeprowadzono jak opisano powyżej.

Preferowana lokalizacja morfiny

Projekt eksperymentalny.

Poprzednio, Russo i in. (2007) wykazało, że przewlekła morfina indukuje tolerancję na nagrodę morfiny. Ponieważ doświadczenie seksualne i przewlekła morfina powodują podobne zmniejszenie wielkości neuronów dopaminowych w VTA, funkcjonalne znaczenie indukowanych przez płeć zmian morfologicznych testowano pod kątem nagrody morfinowej. Doświadczenia seksualne i naiwne zwierzęta podzielono na sześć różnych grup eksperymentalnych (n = 9-13 na grupę) w oparciu o zachowanie seksualne (naiwny lub doświadczony seksualnie) i dawkę morfiny (0.5, 5.0 lub 10.0 mg / kg, ip) i zostały przebadane pod kątem preferencji wywołanych przez morfinę (CPP).

Morfina-CPP.

Kondycja miała miejsce 1 d po ostatniej sesji krycia, a grupy zostały dopasowane pod względem sprawności seksualnej podczas ostatniej sesji krycia. Zastosowany paradygmat CPP składał się z wstępnego, warunkowego dnia i post-testu, a aparat był oparty na Tenk i in. (2009). Krótko mówiąc, aparat CPP (stowarzyszeni MED) składał się z trzech odrębnych komór. Pomiędzy każdą sesją aparat był dokładnie czyszczony 70% roztworem etanolu, aby zminimalizować utrzymujące się zapachy. W celu ustalenia indywidualnych preferencji przeprowadzono pretest, podczas którego zwierzęta miały swobodny dostęp do całej aparatury przez 15 min. Jako grupa, zwierzęta nie wykazywały znaczącej preferencji dla określonej komory, ale każde z osobna miało niewielkie początkowe preferencje. Z badania wykluczono szczury, które wykazywały znaczną preferencję dla jednej z komór (różnica> 200 s między czasem spędzonym w każdej z komór; <5% zwierząt) podczas testu wstępnego. Podczas kondycjonowania lek został sparowany z początkowo preferowaną lub niepreferowaną komorą przy użyciu obiektywnego paradygmatu (Tzschentke, 2007) i zwierzęta trzymano w komorach przez min. 30. Zwierzętom wstrzykiwano sól fizjologiczną (ip) rano (9: 00 AM do 12: 00 PM) i trzymano w komorze z solą fizjologiczną (kontrola). Po południu (1: 00-4: 00 PM) zwierzętom wstrzyknięto morfinę (ip, 0.5 mg / kg, 5.0 mg / kg lub 10.0 mg / kg, siarczan morfiny rozpuszczony w roztworze soli 0.9, Johnson Matthey) i zamknięto do komory sparowanej morfiną. Zwierzęta poddano dwóm warunkowym dniom. Następnego dnia (3 d po ostatnim dniu kojarzenia) przeprowadzono posttest, proceduralnie identyczny z pretestem. Do analizy statystycznej porównano czas spędzony w komorze sparowanej morfiną podczas post-testu z czasem spędzonym w komorze z solą fizjologiczną podczas post-testu dla płciowo nie naiwnych lub doświadczonych samców w każdej dawce przy użyciu pary. t test. p <0.05 uznano za istotne statystycznie. Dodatkowe grupy kontrolne zwierząt nieleczonych i doświadczonych seksualnie otrzymywały sól fizjologiczną zarówno w sparowanych, jak i niesparowanych komorach, aby służyć jako kontrola negatywna. Nie stwierdzono różnic w czasie spędzonym między komorami dla żadnej z grup.

Wpływ ogólnoustrojowego naloksonu na wywołane doświadczeniem ułatwienie zachowań seksualnych

Projekt eksperymentalny.

Doświadczenie seksualne powoduje ułatwienie zachowań seksualnych utrzymywanych przez co najmniej 1 miesiąc (Pitchers i wsp., 2012). Aby przeanalizować wpływ blokowania MOR na wywołane doświadczeniem ułatwienie zachowań seksualnych, doświadczone seksualnie zwierzęta otrzymały nalokson lub sól fizjologiczną przed pięcioma kolejnymi sesjami godowymi (n = 12 każdy), jak opisano powyżej. Tydzień po ostatniej sesji godowej przeprowadzano końcowy test godowy, podczas którego wszystkie zwierzęta mogły się kojarzyć, aż do wytrysku lub do 1 godz. Przed końcowym testowaniem nie podano naloksonu ani roztworu soli fizjologicznej. Porównywano parametry kojarzenia w celu określenia, czy nalokson wpływał na wywoływane przez doświadczenie seksualne ułatwianie krycia (dzień 1 vs dzień 5), czy utrzymanie tego ułatwienia (dzień 5 vs test) przy użyciu dwuczynnikowej ANOVA [czynniki: leczenie (roztwór soli w porównaniu z naloksonem ) i dzień (dzień 1, dzień 5 lub test)] i metoda Holm-Sidak dla post hoc porównania. Dla wszystkich testów statystycznych p <0.05 uznano za istotne statystycznie.

Dodatkowe eksperymenty kontrolne

Ogólny nalokson w dniu testu.

Aby pokazać, że zmienione zachowanie seksualne w ostatnim dniu testów godowych nie było spowodowane nieobecnością naloksonu, w ostatnim dniu testów godowych podawano nalokson lub sól fizjologiczną zwierzętom, które otrzymały parzenie w połączeniu z naloksonem, gdy doświadczyły one doświadczenia seksualnego. Konkretnie, wszystkie zwierzęta otrzymały iniekcję naloksonu (10 mg / kg, sc) 30 min przed kryciem do jednego wytrysku podczas 5 kolejnych dni. W dniu testu 7 d później około połowa zwierząt otrzymała iniekcję naloksonu (10 mg / kg, n = 7) lub soli fizjologicznej (n = 6) 30 min przed wprowadzeniem receptywnej samicy. Zachowanie seksualne zaobserwowano i zarejestrowano. Porównywano parametry kojarzenia w celu określenia, czy nalokson wpływał na wywoływane przez doświadczenie seksualne ułatwianie krycia (dzień 1 vs dzień 5), czy utrzymanie tego ułatwienia (dzień 5 vs test) przy użyciu dwuczynnikowej ANOVA [czynniki: leczenie (roztwór soli w porównaniu z naloksonem ) i dzień (dzień 1, dzień 5 lub test)] i metoda Holm-Sidak dla post hoc porównania. Dla wszystkich testów statystycznych p <5% uznano za istotne statystycznie.

Wpływ naloksonu na krótkoterminową ekspresję ułatwionych zachowań seksualnych.

Efekty leczenia naloksonem (10 mg / kg, sc) podczas krycia badano na późniejszych zachowaniach seksualnych podczas ostatniego dnia testowania godowego, w którym przeprowadzono tylko 1 d po ostatnim kryciu (sól fizjologiczna, n = 5; nalokson, n =

Systemowa wstępna obróbka naloksonu.

W celu ustalenia, czy powtórne leczenie samego naloksonu powoduje upośledzenie zachowania seksualnego 7 d po ostatnim leczeniu, zwierzęta naiwne seksualnie otrzymywały pięć razy dziennie nalokson (10 mg / kg, sc) lub iniekcje soli fizjologicznej na kolejne dni przed testem krycia 7 d po końcowym naloksonie lub wstrzyknięcie soli fizjologicznej. W tym końcowym dniu testu zwierzęta nie otrzymały żadnego zastrzyku. Zachowania seksualne obserwowano i rejestrowano w sposób opisany powyżej. Parametry kojarzenia porównano między grupami, używając niesparowanych t testy. Dla wszystkich testów statystycznych p <5% uznano za istotne statystycznie.

Systemowy nalokson i nagroda seksualna.

Jedną z możliwości osłabiającego wpływu naloksonu na przejawy utrzymywania ułatwionych zachowań seksualnych jest to, że nalokson blokuje satysfakcjonujące skutki zachowań seksualnych. Aby przetestować tę możliwość, paradygmat CPP został przeprowadzony dla zachowań seksualnych bezpośrednio po wstrzyknięciu naloksonu lub soli fizjologicznej u mężczyzn bez wcześniejszego doświadczenia seksualnego. Procedura CPP była podobna do opisanej powyżej dla morfiny-CPP, w tym przed testem, dniami kondycjonowania i po teście.

Zachowanie seksualne zostało sparowane z początkowo nie korzystną komorą. W sposób zrównowaŜony, kaŜde zwierzę otrzymało wstrzyknięcie naloksonu (n = 12) lub soli fizjologicznej (n = 11) 30 min przed uzyskaniem dostępu do receptywnej kobiety. Średni czas trwania sesji krycia wynosił ~ 13 min. Jedną minutę po wytrysku zwierzę umieszczono w sparowanej komorze na min 30. W drugim dniu kondycjonowania zwierzęta otrzymały iniekcję albo naloksonu albo soli fizjologicznej (w zależności od tego, co otrzymały przed kryciem) i zostały umieszczone w niesparowanej komorze przez min. 30. Następnie przeprowadzono posttest identyczny z pretestem. W celu określenia preferencji komory porównywano czas spędzony w sparowanej komorze podczas testu wstępnego i po teście. Do analizy statystycznej, sparowany t Testy zostały wykorzystane do porównania wyników preferencji i różnic oraz czasu w sparowanej komorze podczas testu wstępnego i po teście w celu ustalenia, czy znaczący CPP został utworzony dla zachowań seksualnych. p <0.05 uznano za znaczące.

Wpływ naloksonu wewnątrz-VTA na wywołane doświadczeniem ułatwianie zachowań seksualnych

Projekt eksperymentalny.

Aby ustalić, czy działanie EOP specyficznie w VTA, było odpowiedzialne za skutki wywołanych doświadczeniem seksualnym zmian w zachowaniach seksualnych, zwierzęta poddano miejscowemu wlewowi naloksonu lub soli fizjologicznej do VTA przed pięcioma codziennymi sesjami godowymi. Paradygmat behawioralny był podobny do ogólnoustrojowego eksperymentu z naloksonem. Zwierzętom doświadczonym seksualnie pozwolono krzyżować się podczas 5 kolejnych dni, aż do wytrysku lub do 1 godz. Piętnaście minut przed wprowadzeniem receptywnej samicy, samce szczurów otrzymały obustronne wlewy naloksonu (10 μg / μl na półkulę, objętość 0.5 μl, rozpuszczonego w roztworze soli 0.9%) lub soli fizjologicznej (0.5 μl na półkulę). Obustronne mikroiniekcje podawano przy szybkości przepływu 0.5 μl / min w odstępie 1 min, po którym następowało dodatkowe 1 min z kaniulą iniekcyjną pozostawioną na miejscu dla dyfuzji. Kaniulę wtryskową następnie zastąpiono kaniulą ślepą i pokrywką przeciwpyłową. Tydzień po ostatnim dniu krycia (dzień testu) wszystkie zwierzęta połączyły się ponownie w celu wytrysku bez infuzji naloksonu lub soli fizjologicznej. Rysunek 3A nakreśla eksperymentalny projekt. Analizę danych przeprowadzono jak opisano w ogólnoustrojowym eksperymencie naloksonowym.

Operacja kaniulacyjna.

Samce szczurów znieczulono iniekcją dootrzewnową (0.1 ml / kg) ketaminy (0.87 mg / ml) i ksylazyny (0.13 mg / ml) i umieszczono w aparacie stereotaktycznym (Kopf Instruments). Obustronne kaniule prowadzące wskaźnika 21 (Plastics One) zostały opuszczone przez małe otwory w czaszce do mózgu w kierunku VTA w -4.8 mm AP, ± 0.75 mm ML od bregma i -7.8 mm DV od wierzchołka czaszki zgodnie z Paxinos i Watson (2013). Kaniule zostały zabezpieczone akrylem dentystycznym, który przykleił się do trzech śrub osadzonych w czaszce. Zwierzętom podawano okres rekonwalescencji po tygodniu 2 i codziennie stosowano je w celu przyzwyczajenia do procedur postępowania i wstrzykiwania stosowanych podczas testów behawioralnych.

Weryfikacja położenia kaniuli.

Umieszczenie kaniuli było badane przy użyciu barwienia immunologicznego z TH, aby potwierdzić dokładne ukierunkowanie VTA. W analizach uwzględniono tylko zwierzęta z prawidłowym rozmieszczeniem (ostateczne wielkości grup: doświadczona sól fizjologiczna n = 8; doświadczony nalokson n = 6). Trzy dodatkowe zwierzęta, które otrzymały zastrzyki naloksonu wewnątrz VTA skierowane poza VTA zostały zgrupowane w "nieudanej" grupie iniekcyjnej. Przegrana grupa została przeanalizowana osobno, by służyć jako anatomiczne kontrole i Manna-Whitneya U Test został użyty do porównania zachowania w dniu końcowego testu z naloksonem i doświadczonymi samcami leczonymi solą fizjologiczną.

Powiązana z kontekstem cue wywołana ekspresją pERK

Projekt eksperymentalny.

Wykazano, że ekspozycja na klatkę, w której samce nabyły doświadczenie kojarzeń, powoduje aktywację MOR w VTA i aktywność neuronów w VTA i NAc (Balfour i wsp., 2004). W związku z tym środowisko krycia służy jako warunkowa wskazówka do nagrody seksualnej. W bieżącym badaniu sprawdzono, czy aktywacja MOR podczas doświadczenia seksualnego jest wymagana do późniejszej warunkowej aktywacji nerwowej wywołanej przez cue. Nalokson lub sól fizjologiczną podawano układowo (ip) 30 min przed umieszczeniem w miejscu krycia i wprowadzeniem receptywnej samicy do kojarzenia (doświadczonej) lub przed manipulacją kontrolną, która polegała na umieszczeniu w klatce do przenoszenia bez prezentacji samicy (neutralny). środowisko, naiwność). W ten sposób powstały cztery grupy eksperymentalne: Naive Sal, Naive NLX, Exp Sal ​​i Exp NLX. Tydzień po ostatniej sesji godowej, połowa zwierząt w każdej grupie była narażona na klatkę w klatce (samce: zależne od płci czynniki) lub klatka (naiwne samce: nieużyteczne / neutralne), podczas gdy druga połowa nie była narażona na wszelkie sygnały i zamiast tego pozostały w klatkach domowych (w celu określenia linii bazowej ekspresji pERK). Ten eksperymentalny paradygmat wygenerował grupy 8: Naive Sal-No Cue, Naive Sal + Cue, Naive NLX-No Cue, Naive NLX + Cue, Exp Sal-No Cue, Exp Sal ​​+ Cue, Exp NLX-No Cue, Exp NLX + Cue (n = 4 za wyjątkiem Naive NLX-No Cue, n = 3). Zwierzęta poddano perfuzji 10-15 min po naświetleniu wskazówką. Kontrolne zwierzęta zostały usunięte z ich klatek domowych i perfundowane jednocześnie.

Immunohistochemia.

Podział i immunohistochemię przeprowadzono jak opisano powyżej. Tutaj użyliśmy króliczego przeciwciała poliklonalnego przeciwko p42 i p44 MAP Kinases ERK1 i ERK2 (pERK; 1: 4 000; Cell Signaling Technology). Pierwotne przeciwciało zostało szeroko scharakteryzowane w literaturze (Roux i Blenis, 2004; Murphy i Blenis, 2006; Frohmader i wsp., 2010b). Co więcej, pominięcie pierwszorzędowego przeciwciała zapobiegło wszelkiej immunoreaktywności i analiza Western blot tkanki mózgowej szczura ujawniła dwa prążki o odpowiedniej masie cząsteczkowej.

Analiza danych.

Immunoreaktywne komórki pERK (-IR) zliczono w wielu obszarach mózgu za pomocą rurki do rysowania kamery lucida przymocowanej do Leica Mikroskop DMRD: NAc [rdzeń (C) i otoczka (S); 400 × 600 μm; przyśrodkowa kora przedczołowa; mPFC; przedni obszar obręczy (ACA); kora przedklimetryczna (PL); kora infralimbiczna (IL); 600 × 800 μm każdy], skorupa jądrowa ogoniasta (CP; 800 × 800 μm) i jądro migdałkowo-boczne (BLA; 900 × 1200 μm; Balfour i wsp., 2004; Frohmader i wsp., 2010b; Pitchers i wsp., 2010b). Zliczono dwie sekcje na region mózgu, a liczbę komórek w standardowych obszarach analizy obliczono jako liczbę komórek na mm2. Te dwie wartości uśredniono na zwierzę dla obliczenia średnich grup. Średnie grupowe w grupach doświadczonych seksualnie lub naiwnych porównywano za pomocą dwuczynnikowej ANOVA [czynniki: leczenie farmakologiczne (NLX lub Sal) i cue (sygnał lub brak sygnału)], a następnie post hoc porównania, w razie potrzeby z sumami wyników Holm-Sidak lub Mann-Whitney z poziomem istotności wynoszącym p <0.05. W skorupie NAc zwierząt doświadczonych seksualnie istniał silny trend w kierunku istotności czynników i dlatego przeprowadzono porównania parami, aby porównać tylko grupy soli fizjologicznej (Sal-No Cue) i soli fizjologicznej (Sal + Cue).

Obrazy.

Obrazy cyfrowe przechwycono za pomocą kamery CCD (Macrofire, Optronics) dołączonej do a Leica mikroskop (DM5000B) ze stałymi ustawieniami kamery. Obrazy zostały zaimportowane do oprogramowania Adobe Photoshop 9.0. Obrazy nie zostały w żaden sposób zmienione, z wyjątkiem zmiany jasności i kontrastu.

wyniki

Zmiany wywołane doświadczeniem seksualnym w komórkach dopaminy VTA

Doświadczenie seksualne spowodowało zmniejszenie wymiaru soma dopaminy VTA (Rys. 1A-C). Doświadczenia seksualne znacznie zmniejszają powierzchnię i obwód somy komórek VTA TH-IR (obszar: F(1,31) = 23.068, p <0.001; obwód, F(1,31) = 18.225, p <0.001). Istniał również główny znaczący wpływ czasu (obszar: F(2,31) = 6.377, p = 0.005; obwód, F(2,31) = 4.389, p = 0.021) i znacząca interakcja między doświadczeniem a czasem (obszar: F(2,31) = 5.284, p = 0.011; obwód, F(2,31) = 4.347, p = 0.022). Porównania parami wykazały, że powierzchnia i obwód komórek TH-IR znacznie zmniejszyły 1 i 7 d po ostatnim dniu zachowań seksualnych u zwierząt doświadczonych seksualnie w porównaniu z kontrolą naiwną na poziomie seksualnym [Rys. 1B, powierzchnia: p = 0.002 (1 d), p <0.001 (7 d); C, obwód: p = 0.009 (1 d), p <0.001 (7 dni)]. Efekt zachowań seksualnych zanikał, gdy następował okres abstynencji nagrody, gdy rozmiar somy neuronów TH-IR powrócił do poziomu wyjściowego 31 dni po ostatniej sesji godowej (Rys. 1B, powierzchnia: p = 0.798; C, obwód: p = 0.785). Zmiany wywołane doświadczeniem seksualnym nie zostały wykryte w cykliczności w żadnym z punktów czasowych (Rys. 1D). Redukcja wielkości soma w dopaminie VTA nie była zależna od codziennych sesji godowych, ponieważ doświadczenie w kryciu podczas pięciu sesji dwutygodniowych kojarzyło się również ze zmniejszoną wielkością soma dopaminy (Rys. 2A,B, E-H, powierzchnia: p = 0.004; obwód: p <0.001). Natomiast doświadczenie seksualne nie wpłynęło na wielkość somy TH-IR w istocie czarnej (Rys. 2C, I-J, powierzchnia: p = 0.13; obwód: p = 0.16), ani zmienionego wymiaru somy w pobliskich neuronach VTA nie-TH-IR (Rys. 2D, E-H, powierzchnia: p = 0.46; obwód: p =

Rysunek 1. 

Endogenne zmiany wielkości soma indukowane opioidami neuronów dopaminowych VTA. A, Reprezentatywne obrazy neuronów dopaminowych VTA z naiwnych seksualnie i doświadczonych zwierząt, pokazujące zmniejszenie wymiaru soma 7 d po końcowej sesji godowej. Pasek skali, 5 μm. Dane ilościowe pokazujące, że doświadczenie seksualne (Exp, czarne słupki) spowodowało znaczne zmniejszenie obszaru (B; w μm2) i obwodzie (C; w μm) komórek dopaminy VTA, 1 d (Naive, Exp; n = 6) i 7 d (Naiwny, n = 5; Exp, n = 6), ale nie 31 d (Naive, n = 6; Exp, n = 8) po końcowym kryciu, w porównaniu z nie naiwnymi kontrolami (Naive, białe słupki). Powierzchnia została zredukowana do 84% u doświadczonych mężczyzn w porównaniu z naiwnymi kontrolami w 1 lub 7 d. Obwód został zredukowany do 91.6 i 90% w doświadczonych grupach w porównaniu z kontrolą w 1 i 7 d resp. Nie było żadnego wpływu na cyrkulację (D). Ta plastyczność komórek dopaminy w obszarze (E) i obwodzie (F) został powstrzymany przez nalokson (NLX, n = 8), ale nie zasolenie (Sal, n = 7) traktowanie podczas krycia, 7 d po końcowej sesji godowej w porównaniu z naiwnymi kontrolami płciowymi (Sal, n = 5; NLX, n = 6). Dane oznaczają średnią ± SEM; * wskazuje na istotną różnicę w porównaniu z kontrolą naiwną na ten sam dzień (B, C) lub w porównaniu z leczonymi na podstawie soli fizjologicznie kontrolami i samymi doświadczonymi seksualnie mężczyznami leczonymi naloksonem (E, F).

Rysunek 2. 

Doświadczenie seksualne nie zmniejszyło wymiaru soma w neuronach dopaminowych istoty czarnej ani neuronach niedojadłowych VTA. VTA TH-IR neuron obszar soma (A; w μm2) i obwodzie (B; w μm) u zwierząt o nieświadomości seksualnej (białej) i doświadczonej (czarnej), które uzyskały doświadczenie przez krycie dwa razy w tygodniu, a nie w ciągu kolejnych dni. Substantia nigra TH-IR obszar soma (C) i obszar soma VTA non-TH-IR (D) na zwierzętach naiwnych seksualnie (białe) i doświadczonych (czarnych). Dane oznaczają średnią ± SEM; * wskazuje na znaczącą różnicę w porównaniu z kontrolą naiwną na poziomie seksualnym. Reprezentatywne obrazy przedstawiające neurony TH-IR (brązowe) w VTA naiwnych na tle seksualnym (E) i doświadczony (F) mężczyźni. G, H, Obraz o większym powiększeniu neuronu wskazany strzałką w E i F odpowiednio. Błony barwione Nisslem są pokazane na niebiesko na tych obrazach. Reprezentatywne obrazy przedstawiające neurony TH-IR w SN naiwnych na tle seksualnym (I) i doświadczony (J) mężczyźni. Paski skali: E-J, 20 μm.

Indukowane przez doświadczenie seksualne zmniejszenie wymiarów soma w neuronach dopaminowych VTA zależy od aktywacji receptora opioidowego

Zmniejszenie wielkości somy neuronów dopaminy VTA spowodowane przez doświadczenie seksualne zostało zablokowane przez nieselektywny nalokson antagonisty MOR, podawany przed każdą sesją godową. Leczenie naloksonem przed sesjami godowymi miało znaczący wpływ na obszar (F(1,22) = 4.738, p = 0.041) i zmierzały w kierunku znaczącego wpływu na obwód (F(1,22) = 2.892, p = 0.052). Stwierdzono istotną interakcję między doświadczeniem a leczeniem naloksonem dla obszaru (F(1,22) = 5.578, p = 0.027) i obwód (F(1,22) = 8.167, p = 0.009). Porównania parami pokazały, że doświadczenia seksualne u zwierząt leczonych solą fizjologiczną znacznie zmniejszyły obszar i obwód neuronów dopaminowych VTA 7 d po ostatniej sesji godowej w porównaniu z mężczyznami, które nie leczono seksualnie, leczonymi solą fizjologiczną (Rys. 1E, powierzchnia: p = 0.018; F, obwód: p = 0.007). Natomiast doświadczone seksualnie zwierzęta leczone naloksonem nie różniły się od nieleczonych samców leczonych naloksonem (Rys. 1E, powierzchnia: p = 0.483; F, obwód: p = 0.330). Ponadto, wielkość soma doświadczonych zwierząt fizjologicznych była znacznie zmniejszona w porównaniu z doświadczonymi zwierzętami naloksonowymi (Rys. 1E, powierzchnia: p = 0.002; F, obwód: p = 0.002). Ten wpływ naloksonu był specyficzny dla doświadczenia seksualnego, ponieważ sam nalokson nie wpływał na wielkość komórek sutka TH-IR u płciowo naiwnych mężczyzn leczonych naloksonem w porównaniu z grupą kontrolną traktowaną solanką (Rys. 1E,F). Co więcej, ten wpływ naloksonu na indukowane przez doświadczenie zmniejszenie rozmiaru somy nie było spowodowane działaniem naloksonu na zachowania seksualne, ponieważ zachowanie godowe nie różniło się znacząco pomiędzy samcami leczonymi naloksonem i solą fizjologiczną, z wyjątkiem dłuższego czasu na rozpoczęcie krycia po wytrysku. (interwał po wytrysku) u samców leczonych naloksonem podczas pierwszej i piątej sesji godowej (p = 0.03 i p = 0.004, odpowiednio). Zarówno samce leczone solą fizjologiczną i naloksonem kopulowały do ​​wytrysku podczas każdej z pięciu sesji godowych.

Doświadczenie seksualne wywołane doświadczalną tolerancją na morfinę

Wpływ doświadczenia seksualnego na wielkość soma VTA dopaminy przez działanie EOP w VTA jest podobny do opisywanego dla egzogennych opiatów (Sklair-Tavron i wsp., 1996; Russo i wsp., 2007). W związku z tym zbadano, czy naturalna plastyczność komórek dopaminowych VTA wywołana nagrodą wpływa na nagrodę za opiate morfinę. W rzeczywistości doświadczenie seksualne powodowało tolerancję na nagrodę morfiny, podobną do efektów chronicznych opiatów (Russo i wsp., 2007). Doświadczeni seksualnie mężczyźni nie opracowali CPP dla dawki morfiny 0.5 mg / kg; mając na uwadze, że naiwni mężczyźni o orientacji seksualnej utworzyli CPP dla tej dawki, na co wskazuje spędzenie większej ilości czasu w komorze sparowanej morfiną w porównaniu z komorą połączoną z solą fizjologiczną podczas post-testu (Rys. 3; p = 0.039). Zarówno naiwne, jak i doświadczone grupy spędzały znacznie więcej czasu w komorze z parą morfiny w porównaniu z komorą z solą fizjologiczną i większymi dawkami morfiny: 5.0 mg / kg (Rys. 3; Naiwny: p = 0.029; Exp: p = 0.012) i 10.0 mg / kg (Rys. 3; Naiwny: p <0.001; Exp: p =

Rysunek 3. 

Wpływ doświadczenia seksualnego na nagrodę morfiny. Czas spędzony w salicynie (Sal) lub w parach morfiny (Mor; 0.5, 5 lub 10 mg / kg masy ciała) w trakcie posttestu na naiwnie seksualnej (Naive, n = 10-13) lub doświadczony (Exp, n = 9-13) mężczyźni. Dane przedstawione jako średnia ± SEM; * wskazuje na znaczącą różnicę w porównaniu z komorą Sal z tymi samymi zwierzętami. NS, Nie znaczący.

Wywołane doświadczeniem seksualnym ułatwianie zachowań godowych zależy od aktywacji receptora opioidowego

Dotychczasowe wyniki pokazują, że EOP działający w VTA podczas codziennych krótkich sesji godowych 5 powoduje plastyczność neuronów dopaminowych VTA, która jest podobna do efektów długotrwałego podawania morfiny lub heroiny (Russo i wsp., 2007; Mazei-Robison i wsp., 2011). Postawiliśmy hipotezę, że redukcja rozmiaru soma w rozmiarze dopaminy VTA ma kluczowe znaczenie dla uczenia się nagrody, a zwłaszcza dla wywoływanego doświadczeniem seksualnym ułatwiania zachowań seksualnych pod względem motywacji i wydajności. Ta hipoteza została przetestowana poprzez blokowanie MOR przy użyciu naloksonu podczas krycia i badanie wpływu na ułatwianie zachowań seksualnych wywołanych doświadczeniem seksualnym podczas pięciu codziennych sesji godowych. Dane są przedstawione w Rysunek 4 tylko dla pierwszej i piątej sesji godowej, ponieważ są to dane, które najlepiej ilustrują wywołane doświadczeniem ułatwianie zachowań godowych. Ponadto, długoterminowe skutki leczenia naloksonem podczas sesji godowych są testowane na utrzymaniu wywołanego doświadczeniem ułatwienia zachowania godowego, podczas końcowego testu godowego 1 tydzień później. Rysunek 4A pokazuje eksperymentalny projekt. Istniał znaczący główny efekt sesji godowej na wszystkie parametry zachowania płciowego (opóźnienie montowania: F(2,55) = 11.286, p <0.001; opóźnienie wprowadzenia: F(2,55) = 8.767, p <0.001; opóźnienie wytrysku: F(2,55) = 10.368, p <0.001) i leczenie naloksonem w przypadku opóźnień do wystąpienia (F(1,55) = 6.585, p = 0.013) i intromission (F(1,55) = 7.863, p = 0.007). Porównania parami wykazały, że leczenie naloksonem wpłynęło na zachowania seksualne podczas pierwszej sesji godowej, ponieważ zwierzęta naloksone miały znacznie dłuższe opóźnienia w pierwszym zamocowaniu (p = 0.002) i intromission (p = 0.002) w porównaniu z solą fizjologiczną pierwszego dnia krycia. Ten wpływ naloksonu na początkowe zachowania seksualne został osłabiony przez doświadczenia seksualne i nie zaobserwowano go podczas żadnej z kolejnych sesji godowych (Tabela 1). Ponadto podawanie naloksonu przed każdą z pięciu sesji godowych nie zapobiegło początkowemu ułatwieniu zachowań seksualnych z doświadczeniem seksualnym. Zgodnie ze wzmacniającymi efektami doświadczenia seksualnego, mężczyźni leczeni solą fizjologiczną wykazywali zmniejszone opóźnienia w montowaniu (Rys. 4B; p = 0.032) (Rys. 4C; p = 0.033) i wytrysk (Rys. 4D; p <0.001) podczas piątej sesji krycia w porównaniu z pierwszą sesją, co wskazywało na ułatwianie zachowań seksualnych. Podobnie, mężczyźni leczeni naloksonem wykazywali znacznie krótsze opóźnienia w dojrzewaniu (Rys. 4B; p <0.001), intromisja (Rys. 4C; p <0.001) i wytrysk (Rys. 4D; p = 0.017) na piątym miejscu w porównaniu z pierwszym dniem. Ponadto samce leczone naloksonem nie różniły się od kontrolnych soli fizjologicznych w żadnej z latencji podczas piątej sesji godowej.

Rysunek 4. 

Endogenne opioidy odgrywają kluczową rolę w wywołanym doświadczeniem ułatwieniu zachowań seksualnych. A, Projekt eksperymentalny. B-D, Parametry zachowania seksualnego dla mężczyzn leczonych solą fizjologiczną (Sal, białe słupki, n = 11) lub nalokson (NLX; czarne słupki, n = 12) z administrowaniem systemowym. Pokazane dane są opóźnieniem do zamontowania (B; sekund), wprowadzenie (C; sekund) i wytrysk (D; sekund) w dniach 1 i 5 pięciu kolejnych dni krycia. Ponadto dane są wyświetlane dla końcowego testu krycia, 7 d po piątej sesji krycia. Dane przedstawiono jako średnią ± SEM; + wskazuje na istotną różnicę między dniami 1 i 5 w trakcie leczenia; * wskazuje istotną różnicę pomiędzy dniem i dniem testu 5 w trakcie leczenia; # wskazuje na istotną różnicę między naloksonem i grupami soli fizjologicznej w ciągu dnia.

Wyświetl tę tabelę: 

Tabela 1. 

Podanie naloksonu przed kryciem zwiększało opóźnienia w celu zamontowania i wprowadzenia tylko w pierwszym dniu krycia

W przeciwieństwie do tego, leczenie naloksonem podczas sesji doświadczenia seksualnego zakłóciło utrzymywanie wywołanego doświadczeniem ułatwiania zachowań seksualnych w ostatnim dniu testów godowych. Dzień próby przeprowadzono 7 d po końcowej sesji godowej w nieobecności iniekcji naloksonu. Myszy kontrolne leczone solą fizjologiczną wykazały spodziewane doświadczane ułatwianie zachowań seksualnych. Konkretnie, opóźnienia do montażu, wprowadzenia i wytrysku nie różniły się między piątą sesją godową a końcowym dniem testu (Rys. 4B-D). Podczas gdy mężczyźni leczeni naloksonem wykazywali znaczny wzrost latencji do montowania (Rys. 4B; p = 0.033), intromission (Rys. 4C; p = 0.036) i wytrysk (Rys. 4D; p = 0.049) w dniu testu w porównaniu z piątą sesją krycia. Ponadto, w dniu testu stwierdzono, że zwierzęta naloksonowe są znacznie wolniejsze niż samce leczone solą fizjologiczną, ponieważ wykazują dłuższe opóźnienia w montowaniu (Rys. 4B; p = 0.017) i intromission (Rys. 4C; p = 0.043). Tak więc leczenie naloksonem blokowało utrzymanie, ale nie początkowe, rozwój wywołanego przez doświadczenie ułatwiania zachowań seksualnych. Odkrycia te wskazują na kluczową rolę indukowanej przez EOP plastyczności VTA dopaminy w długotrwałej ekspresji wzmocnienia naturalnego zachowania nagrody.

Przeprowadzono kilka dodatkowych eksperymentów kontrolnych, aby stwierdzić, że wpływ blokady receptorów opioidowych na utratę długotrwałego wzmocnienia zachowań seksualnych był niezależny od braku naloksonu w końcowym dniu testu godowego (Rys. 5A,B), były specyficzne dla utraty długoterminowego, ale nie krótkoterminowego utrzymania ułatwień kojarzenia (Rys. 5E,F) nie były spowodowane codzienną ekspozycją na sam nalokson (Rys. 5C,D) i nie były spowodowane utratą nagrody seksualnej u samców leczonych naloksonem (Rys. 5G,H). Po pierwsze, aby wykazać, że zmienione zachowanie seksualne w końcowym teście godowym nie było spowodowane brakiem naloksonu, w ostatnim dniu godowym podawano nalokson lub sól fizjologiczną zwierzętom, które otrzymały parzenie w połączeniu z naloksonem, podczas gdy uzyskiwały one doświadczenie seksualne (Rys. 5A). Istniał znaczący główny efekt dnia krycia na opóźnienia do zamontowania (Rys. 5B; F(2,27) = 30.031, p = 0.038) i intromission (Tabela 2; F(2,27) = 10.686, p = 0.048). Nie było żadnego głównego efektu dnia godowego na opóźnienie wytrysku (Tabela 2; F(2,27) = 2.388, p = 0.109) Podobnie jak opisano powyżej, leczenie naloksonem podczas krycia nie wpłynęło na ułatwienie zachowania seksualnego podczas pierwszych pięciu sesji doświadczenia seksualnego. Obie grupy (grupy leczone solanką i naloksonem, określone na podstawie leczenia otrzymanego podczas końcowego testu godowego, oba otrzymały nalokson w czasie krycia) wykazały ułatwione zachowania seksualne w dniu 5 w porównaniu do dnia 1 i wykazały znacznie krótsze opóźnienia w pierwszym zamocowaniu (Rys. 5B; solankowy: p = 0.033; nalokson: p = 0.014) i intromission (Tabela 2; solankowy: p = 0.034; nalokson: p = 0.026). Zwierzęta, które otrzymały nalokson lub sól fizjologiczną w ostatnim dniu testu godowego miały dłuższe latencje do zamontowania (Rys. 5B; solankowy: p = 0.018; nalokson: p = 0.029) i intromission (Tabela 2; solankowy: p = 0.019; nalokson: p = 0.020) w porównaniu z piątym dniem doświadczenia godowego. Dlatego podawanie naloksonu lub soli fizjologicznej w dniu testu bezpośrednio przed kryciem nie wpłynęło na efekt leczenia naloksonem podczas sesji doświadczalnych, a osłabienie długotrwałego ułatwiania zachowań seksualnych było identyczne jak w przypadku zwierząt, które nie otrzymały żadnego zastrzyku w ostatnim dniu testu godowego (Rys. 4).

Rysunek 5. 

Endogenne opioidy odgrywają ważną rolę w długoterminowym wyrażaniu wywołanego doświadczeniem ułatwiania zachowań seksualnych. A, Eksperymentalny projekt eksperymentu z efektem leczenia NLX w dniu testu. B, Zamieszaj w dniach 1 i 5 przez pięć kolejnych dni dnia kojarzenia i ostatecznego krycia (test) po wstrzyknięciu soli fizjologicznej (szary) lub naloksonu (czarny). Dane reprezentują średnią ± SEM. * wskazuje znaczącą różnicę między dniem 1 a dniem 5 w trakcie leczenia. # wskazuje znaczącą różnicę między dniem testu a dniem 5 w trakcie leczenia. C, Eksperymentalny projekt do eksperymentu, aby przetestować działanie samej terapii naloksonem bez doświadczenia seksualnego na zachowaniach godowych. D, Zamontuj opóźnienie w dniu ostatecznego krycia, 7 dni po 5 dniach iniekcji soli fizjologicznej lub naloksonu w przypadku braku krycia. Dane reprezentują średnią ± SEM. EEksperymentalny projekt eksperymentu mający na celu zbadanie, czy leczenie naloksonem wpłynęło na krótkotrwałe objawy ułatwionego zachowania seksualnego u zwierząt doświadczonych seksualnie. F, Zamontuj opóźnienie w dniu 1 i dzień 5 z pięciu kolejnych dni krycia i końcowego dnia testowania krycia, 1 dzień po dniu 5 w obecności iniekcji soli fizjologicznej (szary) lub naloksonu (czarny). Dane reprezentują średnią ± SEM. * wskazuje znaczącą różnicę między dniem 1 a dniem 5 w trakcie leczenia. G, Eksperymentalny projekt eksperymentu, aby sprawdzić, czy leczenie naloksonem blokuje satysfakcjonujące efekty zachowania seksualnego. H, Czas spędzony w parze w parze z komorą (w sekundach) podczas testu wstępnego (biały) i po teście (czarny) dla zwierząt otrzymujących nalokson lub sól fizjologiczną przed kryciem. Dane oznaczają średnią ± SEM; * wskazuje na znaczącą różnicę w porównaniu ze wstępnym testem.

Wyświetl tę tabelę: 

Tabela 2. 

Przedstawione dane są latencjami do wprowadzenia i wytrysku (sekundy) z eksperymentów kontrolnych przeprowadzonych w celu ustalenia, że ​​działanie blokady MOR na utratę długotrwałego wzmocnienia zachowań seksualnych nastąpiło niezależnie od braku podawania naloksonu w ostatecznym dniu testowym krycia

Aby ustalić, czy to było leczenie naloksonem w połączeniu z doświadczeniem seksualnym i nie było powtórzone dla naloksonu per se, które spowodowało upośledzenie zachowania seksualnego 7 d po ostatnim leczeniu, zwierzęta naiwne seksualnie otrzymywały albo pięciodniowe zastrzyki naloksonu albo wstrzyknięć soli fizjologicznej przed ostatecznym testem krycia 7 d później (Rys. 5C). Nie wykryto żadnych znaczących różnic pod względem parametru dopasowania między grupami otrzymującymi solankę i nalokson (Rys. 5D; zamontuj opóźnienie; opóźnienie intromission: roztwór soli 139.7 ± 40.3 vs nalokson 121.83 ± 42.55; opóźnienie wytrysku: roztwór soli 887.9 ± 70.0 vs nalokson 1050.8 ± 327.31). Wyniki te wskazują, że sam nalokson nie jest wystarczający do zmiany późniejszych zachowań seksualnych, podobnie jak brak działania samego naloksonu na plastyczność neuronów dopaminy VTA.

Postawimy hipotezę, że leczenie naloksonem podczas nabywania doświadczenia seksualnego zakłóca długoterminową ekspresję seksualnego zachowania wywołanego doświadczeniem seksualnym. Aby przetestować to dalej, wpływ leczenia naloksonem podczas krycia został przetestowany na późniejszym zachowaniu seksualnym podczas końcowego testu krycia, w którym przeprowadzono tylko 1 d po ostatnim kryciu (projekt eksperymentalny; Rys. 5E). Istniał znaczący główny efekt dnia godowego na górze (Rys. 5F; F(2,20) = 19.780, p <0.001) i opóźnienia intromisji (Tabela 2; F(2,20) = 19.041, p <0.001). Nie stwierdzono istotnego głównego wpływu dnia na opóźnienie wytrysku (Tabela 2; F(2,20) = 3.042, p = 0.070). Podobnie jak opisano powyżej, wszyscy mężczyźni (pomimo leczenia solą fizjologiczną lub naloksonem) wykazywali ułatwienie zachowań seksualnych podczas pięciu sesji doświadczeń seksualnych wskazanych przez znacznie krótsze opóźnienia w montażu (Rys. 5F; solankowy: p = 0.002; nalokson: p = 0.018) i intromission (Tabela 2; solankowy: p = 0.006; nalokson: p = 0.009) w dniu 5 w porównaniu z dniem 1. Podobnie, ułatwione zachowanie seksualne zostało zademonstrowane w dniu testu w porównaniu z dniem 1 wskazanym przez znacznie krótsze opóźnienia w montażu (Rys. 5F; solankowy: p = 0.001; nalokson: p = 0.020) i intromission (Tabela 2; solankowy: p = 0.004; nalokson: p = 0.009). Co ważniejsze, leczenie naloksonem podczas krycia nie wpłynęło znacząco na wywoływane doświadczeniem seksualnym ułatwianie zachowania seksualnego podczas testu 1 d po doświadczeniu seksualnym, niezależnie od leczenia naloksonem w ostatnim dniu testów godowych.

Wreszcie, zbadaliśmy możliwość, że łagodzący wpływ naloksonu na długoterminowe wyrażanie ułatwionych zachowań seksualnych jest spowodowany blokującym wpływem naloksonu na satysfakcjonujące właściwości zachowań seksualnych. Jednak nalokson podany bezpośrednio przed kryciem nie zmienił tworzenia CPP do krycia (Rys. 5G), co sugeruje, że leczenie naloksonem nie zmieniło nagrody seksualnej. Zarówno grupy otrzymujące sól fizjologiczną, jak i nalokson tworzyły znaczący CPP dla zachowań seksualnych, o czym świadczy znacznie wydłużony czas spędzony w komorze z parami płciowymi (Rys. 5H; solankowy: p = 0.038; nalokson: p = 0.002) podczas post-testu w porównaniu z pretestem. Dlatego nalokson nie wywiera szkodliwego wpływu na utrzymanie ułatwionego zachowania seksualnego poprzez blokowanie nagrody związanej z zachowaniami seksualnymi.

Ułatwienie zachowań seksualnych zależy od działania EOP w VTA

Aby potwierdzić, że EOP działa konkretnie w VTA w celu indukowania długotrwałego ułatwiania zachowań seksualnych, eksperymentalny projekt nakreślony w Rysunek 3A powtórzono z infuzjami naloksonu wewnątrz-VTA zamiast wstrzyknięć ogólnoustrojowych. Wyniki były identyczne jak w przypadku podawania ogólnoustrojowego opisanego powyżej. Istotny główny efekt dnia godowego na wszystkie parametry zachowania płciowego (Rys. 6A, zamontuj opóźnienie: F(2,33) = 4.494, p = 0.019; Bopóźnienie intromission: F(2,33) = 4.042, p = 0.027; C, opóźnienie wytrysku: F(2,33) = 5.309, p = 0.010) i naloksonu wewnątrz-VTA na opóźnienia do zamontowania (F(1,33) = 7.345, p = 0.011) i intromission (F(1,33) = 6.126, p = 0.019). Nalokson wewnątrz-VTA nie zapobiegał początkowemu wywołanemu doświadczeniu ułatwieniu zachowań seksualnych podczas 5-y krycia, ponieważ mężczyźni leczeni naloksonem wykazywali zmniejszone opóźnienia w montowaniu (Rys. 6A; p = 0.001), intromission (Rys. 6B; p <0.001) i wytrysk (Rys. 6C; p = 0.001) w dniu 5 w porównaniu z dniem 1. Mężczyźni leczeni za pomocą naloksonu nie różnili się od mężczyzn leczonych solą fizjologiczną w piątym dniu kojarzenia się z którymkolwiek z latencji. Leczenie naloksonem w ramach VTA, podobnie jak podawanie ogólnoustrojowe, powodowało znaczny wzrostRys. 6A; p <0.001) i opóźnienia intromisji (Rys. 6B; p <0.001) w pierwszym dniu krycia w porównaniu z samcami leczonymi solą fizjologiczną, czego nie obserwowano podczas kolejnych krycia (podczas których samce leczone naloksonem i solą fizjologiczną nie różniły się). Jedną nieoczekiwaną obserwacją było to, że w tym eksperymencie mężczyźni leczeni solą fizjologiczną nie wykazywali statystycznie istotnego ułatwienia utajenia lub latencji intromisji (jak pokazano we wszystkich eksperymentach opisanych powyżej), a jedynie opóźnienie wytrysku było zwarte piątego dnia w porównaniu z pierwszym dniem. (solankowy: p =

Rysunek 6. 

Endogenne opioidy w VTA pośredniczą w wywołanym doświadczeniem ułatwieniu zachowań seksualnych i ich długotrwałej pielęgnacji. Parametry zachowania seksualnego dla mężczyzn leczonych solą fizjologiczną (Sal, białe słupki, n = 8) lub NLX (czarne słupki, n = 6) z podawaniem intra-VTA. Pokazane dane są opóźnieniem do zamontowania (A), wprowadzenie (B) i wytrysk (C) w dniach 1 i 5 z pięciu kolejnych dni krycia. Ponadto, dane są pokazane dla końcowego dnia testowego krycia, 7 d następnego dnia 5 w nieobecności iniekcji soli fizjologicznej lub naloksonu. Dane oznaczają średnią ± SEM; + wskazuje na istotną różnicę między dniami 1 i 5 w trakcie leczenia; * wskazuje istotną różnicę pomiędzy dniem i dniem testu 5 w trakcie leczenia; # wskazuje na znaczącą różnicę między naloksonem i grupami Sal w ciągu dnia. Schematyczne rysunki koronalnych odcinków VTA (H, -4.60; I, -5.00; J, -5.25 z bregma) wskazujące miejsca iniekcji dożylnej VTA dla wszystkich zwierząt w Eksperymencie 5 (roztwór soli, biały, nalokson, czarny, brakujący, szary), za pomocą szablonów z map mózgu Swanson (Swanson, 2004). Kaniule były dwustronne, ale miejsca wstrzyknięcia są reprezentowane jednostronnie dla ułatwienia prezentacji. fr, Fasciculus retroflexus; ML, Medial lemniscus; SN, substantia nigra.

Leczenie naxolonem w ramach VTA blokowało utrzymanie ułatwionego zachowania seksualnego obserwowanego u samców doświadczonych seksualnie, podobnie jak w przypadku działania ogólnoustrojowego naloksonu. Konkretnie, w dniu ostatecznego testu mężczyźni leczeni naloksonem mieli dłuższe latencje do zamontowania (Rys. 6A; p = 0.011), intromission (Rys. 6B; p = 0.010) i wytrysk (Rys. 6C; p = 0.015) w porównaniu z ich piątą sesją godową i porównane z samcami leczonymi solą fizjologiczną w ostatnim dniu testu (Rys. 6A, p = 0.006; B, p = 0.008). W przeciwieństwie do tego, zwierzęta leczone solą fizjologiczną nie różniły się pod względem opóźnień w montowaniu i wprowadzaniu między końcowym dniem testowym i dniem 5 krycia. Efekty te były specyficzne dla dostarczania naloksonu do VTA, jak mężczyźni z miejscami kaniulacji w pobliżu, ale nie celujący w VTA (Rys. 6D; n = 3) wykazały długotrwałe ułatwianie zachowań seksualnych podobnych do kontrolnych potraktowanych solą fizjologiczną (ML, IL = 53 ± 6.245, EL = 389 ± 299.5 i znacząco różniły się od zwierząt naloksonu wewnątrz-VTA w ostatnim dniu testu godowego (ML, IL: p = 0.029; EL: p =

Działanie EOP jest wymagane dla aktywowanej neuronalnie aktywowanej aktywacji związanej z płcią

Opierając się na dotychczasowych ustaleniach, postawiliśmy hipotezę, że aktywacja EOP w VTA podczas doświadczenia godowego i następująca po nim redukcja wielkości soma dopaminy VTA mają kluczowe znaczenie dla przypisywania zachęt do pasujących do nagrody bodźców związanych z nagrodą iw konsekwencji do utrzymania ułatwionego zachowania seksualnego. Aby przetestować tę hipotezę, zbadano wpływ blokowania receptorów opioidowych podczas doświadczenia krycia na aktywność nerwową wywołaną późniejszą ekspozycją na uwarunkowane kontekstowe wskazówki przewidujące nagrodę seksualną (związane z seksem wskaźniki kontekstualne). Zwierzęta naiwne narządów płciowych były również narażone na sygnały środowiskowe, ale nie były one związane z wcześniejszym doświadczeniem godowym, stąd były neutralne. Ostatecznie ustalono wyjściowe poziomy pERK w grupach doświadczających doświadczenia seksualnego i naiwnych, które pozostawały w klatkach domowych i nie były narażone na żadne sygnały (-Nie Cue). Potwierdzanie i rozszerzanie poprzednich ustaleń (Balfour i wsp., 2004), ekspozycja na kontekstowe sygnały związane z poprzednią nagrodą za seks znacznie zwiększyła ekspresję pERK u doświadczonych seksualnie mężczyzn w NAc (Rys. 7) i mPFC (Rys. 8A-C), ale nie spowodowało aktywacji neuronów w BLA (Rys. 8D) lub CPu (dane nie pokazane). Wystąpiły główne efekty ekspozycji na cue w rdzeniu NAc (F(1,12) = 12.1941, p = 0.004), ACA (F(1,12) = 5.541, p = 0.038) i PL (F(1,12) = 5.241, p = 0.041) i leczenie naloksonem w rdzeniu NAc (F(1,12) = 6.511, p = 0.025), ACA (F(1,12) = 15.242, p = 0.002) i PL (F(1,12) = 7.336, p = 0.019). Istniała istotna interakcja w rdzeniu NAc (F(1,12) = 10.107, p = 0.008), ACA (F(1,12) = 16.060, p = 0.002), PL (F(1,12) = 8.235, p = 0.014) i IL ((F(1,12) = 6.965, p = 0.022). Po pierwsze, związana z kojarzeniem ekspozycja Cue znacząco zwiększyła pERK u zwierząt doświadczonych seksualnie leczonych solą fizjologiczną (Exp Sal ​​+ Cue) w porównaniu z grupami kontrolnymi, które nie były narażone na żadne sygnały i pobrane z klatki domowej (Exp Sal-No Cue) w rdzeniu NAc (Rys. 7A; p <0.001) i podregiony mPFC ACA (Rys. 8A; p = 0.001), PL (Rys. 8B; p = 0.003) i IL (Rys. 8C; p = 0.029). W przeciwieństwie do tego, u zwierząt naiwnych leczonych solą fizjologiczną, ekspozycja na sygnały kontekstualne, które nie były związane z nagrodą seksualną, nie indukuje pERK w żadnym z obszarów mózgu (Naive Sal + Cue w porównaniu z naiwnym Sal-No Cue; Ryc. 7, 8), wykazując, że indukcja pERK jest specyficzna dla ekspozycji związanych z doświadczeniem seksualnym. Co więcej, same doświadczenia seksualne nie zmieniają wyjściowej ekspresji pERK w żadnym z regionów mózgu, ponieważ nie było różnic między grupami, które zostały pobrane z klatek domowych, bez względu na to, czy były płciowo naiwne czy doświadczane i leczone solą fizjologiczną lub naloksonem.

Rysunek 7. 

Endogenne działanie opioidowe jest wymagane do aktywacji neuronów w NAc indukowanych przez związane z płcią uwarunkowane sygnały. Liczba komórek pERK-IR na mm2 w rdzeniu sedymentacyjnym accumbens (A) i powłoki (B) u zwierząt płciowo naiwnych (białych) i doświadczonych (eksp. czarnych), które były uprzednio leczone układowym NLX lub solanką (Sal) podczas sesji godowych (samce) lub sesji obsługi (naiwne samce). Grupy były albo eksponowane na sygnały kontekstowe (Cue), które były odpowiednikami kojarzenia u samców Exp i neutralnych sygnałów u zwierząt Naiwnych, albo pobrane z klatek domowych (No Cue, wskazane przez brak Cue-label). Dane przedstawiono jako średnią ± SEM; * wskazuje znaczącą różnicę w porównaniu z kontrolnymi poddanymi wstępnej obróbce solą bez ekspozycji na cue (Naive Sal-No Cue i Exp Sal-No Cue); # oznacza znaczącą różnicę w porównaniu z grupą eksponowaną na ekspozycję na Cue eksponowaną na Sal (Exp Sal ​​+ Cue). Reprezentatywne obrazy komórek pERK-IR na mm2 w rdzeniu NAc seksualnie doświadczonych mężczyzn z Sal (C, D) lub NLX (E, F), które zostały pobrane z klatki domowej (No Cue, C, E) lub wystawione na powiązane z kontekstem sygnały kontekstowe (Cue; D, F). N = 4 każda grupa z wyjątkiem Naive NLX (No Cue), n = 3. ac, Przedłużenie commissure. Pasek skali, 100 μm.

Rysunek 8. 

Wpływ naloksonu na wzbudzającą cue ekspresję pERK w innych docelowych regionach VTA. Liczba komórek pERK-IR na mm2 u zwierząt płciowo naiwnych (białych) i doświadczonych (eksp. czarnych), które były uprzednio leczone układową NLX lub solanką (Sal) podczas sesji godowych i były wystawione na kontekstowe sygnały (Cue) lub klatkę macierzystą (brak sygnałów) w ACA (A), PL (B), IL (C) i BLA (D). Dane reprezentują średnią ± SEM; * wskazuje znaczącą różnicę w porównaniu z kontrolnymi poddanymi wstępnej obróbce solą bez ekspozycji na cue (Naive Sal-No Cue i Exp Sal-No Cue); # wskazuje na znaczącą różnicę w porównaniu z leczonymi salami, poddanymi ekspozycji płciowej, nieinwazyjnym kontrolom kontrolnym (Naive Sal + Cue).

Na poparcie naszej hipotezy, leczenie naloksonem podczas doświadczenia seksualnego znacząco osłabiło indukcję pERK przez związane z płcią uwarunkowane sygnały. Ekspresja pERK u leczonych naloksonem doświadczonych samców (Exp NLX + Cue) nie różniła się od wyjściowej ekspresji pERK u żadnej z naiwnych płciowo lub doświadczonych grup kontrolnych pobranych z klatek domowych (Naive Sal-No Cue lub Naive NLX- Brak wskazówki). Co więcej, ekspresja pERK u leczonych naloksonem doświadczonych samców (Exp NLX + Cue) była znacząco niższa w porównaniu z doświadczonymi doświadczonymi zwierzętami dotkniętymi błoną (Exp Sal ​​+ Cue) w rdzeniu NAc (Rys. 7A; p = 0.002) i podregiony mPFC (Rys. 8A, ACA: p <0.001; B, PL: p = 0.002; C, IL: p =

W powłoce NAc dwukierunkowa analiza ANOVA nie przyniosła statystycznie istotnych efektów ekspozycji na czynniki mark i leczenia naloksonem. Jednak porównanie parami wykazało, że ekspozycja na cue spowodowała indukcję pERK w grupie doświadczonej seksualnie leczonej solą fizjologiczną (Exp SAL + Cue) w porównaniu z grupą kontrolną na nieotwieraną bez narażenia na działanie cue (Rys. 7B; Naive SAL-No Cue: p =

Dyskusja

Obecne badania pokazują, że EOP działający w VTA podczas zachowań seksualnych, naturalne zachowanie nagrody, spowodowało silne, ale przejściowe zmniejszenie wymiaru soma komórek dopaminy VTA. Zmniejszenie wymiaru soma nie było obserwowane w neuronach nie-dopaminowych VTA, ani w neuronach dopaminowych w pobliskiej istocie czarnej, co sugeruje, że ta zmiana była specyficzna dla komórek dopaminy VTA. Ta plastyczność dopaminy VTA wydaje się podobna do indukowanej przez przewlekłą ekspozycję na opiaty (Sklair-Tavron i wsp., 1996; Russo i wsp., 2007; Mazei-Robison i wsp., 2011) i powodował podobną tolerancję na egzogenną nagrodę opiatową (morfinę). Wykazaliśmy, że plastyczność dopaminy VTA ma kluczowe znaczenie dla długotrwałego (podtrzymywania), ale nie krótkoterminowego (rozwój), wzmocnienia zachowań seksualnych i związanej z nagrodą aktywności neuronów indukowanych (pERK) w regionach docelowych VTA: NAc i mPFC. Odkrycia te wskazują na rolę plastyczności dopaminy VTA w długoterminowym wyrażaniu bodźca zachęcającego do naturalnej zapowiedzi nagrody lub pamięci nagrody.

Zostało dobrze udokumentowane, że doświadczenie seksualne powoduje ułatwienie późniejszego zachowania seksualnego, w tym szybszy początek inicjacji krycia i większą wydajność (Balfour i wsp., 2004; Pitchers i wsp., 2010a,b, 2012). To ułatwianie lub wzmacnianie zachowań seksualnych utrzymuje się przez co najmniej 28 d po kryciu (Pitchers i wsp., 2012). Ponadto wykazano, że zachowania seksualne i warunkowane czynniki predykcyjne nagród seksualnych powodują internalizację MOR w VTA i indukują aktywację neuronalną w całym układzie mezolimbicznym, w tym w VTA (neurony dopaminowe i niedopaminowe), NAc, PFC i BLA (Balfour i wsp., 2004, 2006). Dobrze znane neurony dopaminowe VTA odgrywają kluczową rolę w uczeniu się i przypisywaniu bodźców stymulujących związanych z nagraniem bodźców (Berridge i Robinson, 1998; Berridge i wsp., 2009; Flagel i wsp., 2011) i są krytyczne dla przewidywania nagrody (Schultz, 2010). Aktualne odkrycia poszerzają naszą aktualną wiedzę, demonstrując, że wywołana przez nagrodę neuroplastyczność VTA jest kluczowa dla tych funkcji i zależy od aktywacji MOR przez EOP w VTA. Obecnie nie wiadomo, który EOP jest ligandem MOR, który działa w VTA podczas zachowań seksualnych mężczyzn. Chociaż zarówno β endorfina, jak i enkefalina są zaangażowane w motywację motywacyjną do wzmacniania żywności (Hayward i wsp., 2002), to należy ustalić dla męskich zachowań seksualnych. Wcześniej wykazaliśmy, że neurony β-endorfinowe nie są aktywowane podczas krycia, ani nie występują wzrosty w mRNA POMC; co sugeruje, że β endorfina może nie być krytycznym EOP działającym w VTA podczas krycia (Davis i wsp., 2007). Ta plastyczność dopaminy VTA była niezbędna dla aktywności neuronów w mPFC, NAc i VTA po ekspozycji na sygnały środowiskowe związane z przewidywaniem nagrody seksualnej. Ponadto plastyczność dopaminy VTA była krytyczna dla długotrwałego wyrażania zwiększonej inicjacji i wykonywania zachowań seksualnych. W przeciwieństwie do tego, neuroplastyczność VTA spowodowana doświadczeniem seksualnym nie była wymagana do odpowiedzi hedonicznej, ponieważ nagroda seksualna (określona przez CPP) i krótkoterminowe ułatwianie motywacji seksualnej i wydajności (podczas doświadczenia seksualnego lub 1 d później) pozostały nietknięte mimo blokady MOR podczas krycia (Mehrara i Baum, 1990). Zamiast tego dane sugerują, że neuroplastyczność dopaminy VTA pośredniczy w dłuższym okresie (7 d po doświadczeniu ostatniego seksu; Pitchers i wsp., 2012) wyrażanie "pragnienia" nagród seksualnych i wzmożonych motywowanych reakcji na sygnały krycia (Miller i Baum, 1987; Berridge i Robinson, 1998).

Doświadczenia seksualne wykazały tolerancję krzyżową na nagrodę morfiny, podobną do działania kół poruszających się na myszach, inne naturalne zachowanie polegające na wynagradzaniu, efekt blokowany za pomocą naloksonu (Lett i wsp., 2001, 2002) i określono, że zależy od plastyczności komórek dopaminy VTA (wyniki bieżące). Podobnie jak w przypadku nagród naturalnych, powtarzana ekspozycja na opium morfiny lub heroiny powoduje przejściową redukcję wielkości soma dopaminy VTA (Sklair-Tavron i wsp., 1996; Spiga i wsp., 2003; Russo i wsp., 2007; Mazei-Robison i wsp., 2011). Co więcej, ekspozycja na opiaty z krótkimi okresami karencji powoduje tolerancję na nagrodę, co wynika z wyższych dawek leków wymaganych do tworzenia stowarzyszeń nagrody (Shippenberg i wsp., 1987; Russo i wsp., 2007) i powoduje samopodawanie zwierząt w celu zwiększenia spożycia narkotyków (Ahmed i wsp., 2000; Walker i wsp., 2003). W związku z tym, EOP i opiaty działają na wspólne substraty nerwowe, aby wywoływać tolerancję na nagrodę podczas wczesnego wycofywania, co może odzwierciedlać kompensacyjny mechanizm homeostatyczny w celu przeciwdziałania stymulacji przez wielokrotne narażenie (Koob i Le Moal, 2005). Natomiast podczas długotrwałej abstynencji opiatów tolerancja jest odwracana do wrażliwości na właściwości nagradzające leku (Harris i Aston-Jones, 2003; Aston-Jones i Harris, 2004; Harris i Gewirtz, 2004). Co ciekawe, doświadczenie seksualne, po którym nastąpił okres abstynencji seksualnej 7-28-d, powoduje reakcję uczulenia na psychostymulującą nagrodę (Pitchers i wsp., 2010a), który jest zależny od wywołanej przez krycie ekspresji deltaFosB i aktywacji 1 receptora dopaminy w NAc (Pitchers i wsp., 2013). Dlatego doświadczenie seksualnej nagrody powoduje równoczesną tolerancję nagrody opiatów i psychostymulujące uczulenie na nagrodę, chociaż należy przetestować dłuższy okres abstynencji seksualnej na tolerancję wynagrodzenia dla morfiny. Zakładamy, że te przeciwstawne działania na nagrodę za lek mogą być mediowane przez różne formy plastyczności neuronalnej w różnych obszarach układu mezolimbicznego: działanie VTA EOP i plastyczność dopaminy pośredniczą w tolerancji na opiaty nagrody (obecne badanie), podczas gdy ekspresja delta FosB NAc kontroluje uczulenie psychostymulujące (Pitchers i wsp., 2013). Oba te wydarzenia mogą przyczynić się do eskalacji zażywania narkotyków (Ahmed i Koob, 1998, 1999; Ahmed i wsp., 2000, 2002, 2003; Walker i wsp., 2003).

Mechanizmy molekularne, dzięki którym EOP wpływają na neurony dopaminy VTA podczas naturalnych zachowań nagród, pozostają nieznane. Szlak IRS2-Akt-mTORC2 jest głównym mediatorem zmniejszonej wielkości soma w VTA spowodowanej powtarzaniem morfiny (Jaworski i wsp., 2005; Russo i wsp., 2007; Mazei-Robison i wsp., 2011). Powtarzanym podawanym morfinie indukowanym zmianom w wielkości neuronów dopaminowych w VTA można zapobiegać przez wlew dożylny VTA neurotropowego czynnika pochodzenia mózgowego (BDNF; Sklair-Tavron i Nestler, 1995). BDNF aktywuje tę ścieżkę poprzez sygnalizację TrkB (Russo i wsp., 2007), kinaza receptora o wysokim powinowactwie do BDNF i części szlaku IRS2-Akt (Seroogy i Gall, 1993; Numan i Seroogy, 1999) i wyrażone w neuronach dopaminy i GABA w VTA. Regulacja w dół różnych składników szlaku IRS2-Akt przy użyciu wektorowej technologii transferu genu wirusowego naśladuje skutki przewlekłego narażenia na opiaty. Ponadto, efekty ekspozycji na opiaty można uratować poprzez przywrócenie tej ścieżki sygnalizacyjnej (Russo i wsp., 2007) i nadekspresja komponentu mTORC2 zapobiega indukowanej przez morfinę redukcji VTA dla dopaminy (Mazei-Robison i wsp., 2011). Dlatego też wcześniejsze badania nad wpływem przewlekłych opiatów na rozmiar soma dopaminy VTA pokazują, że indukowana przez morfinę regulacja w dół szlaku IRS2-Akt-mTOR jest zarówno wystarczająca, jak i niezbędna dla tego efektu (Mazei-Robison i Nestler, 2012). W związku z tym kuszące jest spekulowanie, że wpływ doświadczeń seksualnych na neuroplastyczność dopaminy VTA jest podobnie zależny od szlaku BDNF i IRS2-Akt-mTORC2.

Podsumowując, obecne badanie wykazało, że neuroplastyczność VTA jest spowodowana doświadczeniem z naturalnymi zachowaniami satysfakcjonującymi, w szczególności poprzez powtarzające się zachowania seksualne mężczyzn. Konkretnie, EOP działa w VTA, aby zmniejszyć rozmiar soma dopaminy, co jest hipotetycznie związane ze zwiększoną pobudliwością nerwową i mniejszą ilością dopaminy, skutkującą układem hipodopaminergicznym, i zmienia działanie układu mezolimbicznego w odpowiedzi na sygnały, które są predykcyjne dla seksualnego wynagrodzenia. Ponadto, neuroplastyczność VTA ma kluczowe znaczenie dla motywacji motywacji i pamięci nagrody, ale nie dla hedonicznego wpływu zachowań seksualnych. Wreszcie, neuroplastyczność VTA spowodowana naturalnym zachowaniem nagród, po którym następuje krótki okres abstynencji nagród, wpływa na nagrodę od opiatów, a zatem może wpływać na podatność na rozwój uzależnienia od narkotyków.

Przypisy

  • Otrzymano Styczeń 12, 2014.
  • Wersja otrzymana May 17, 2014.
  • Zaakceptowano May 20, 2014.
  • Badanie to zostało wsparte grantami od Kanadyjskiego Instytutu Badań nad Zdrowiem do LMC i Nauk Przyrodniczych oraz Badań Inżynieryjnych do KKP

  • Autorzy deklarują brak konkurencyjnych interesów finansowych.

  • Korespondencja powinna być kierowana do Dr Lique M. Coolen, University of Mississippi Medical Center, Department of Physiology and Biophysics, 2500 North State Street, Jackson, MS 39216-4505. [email chroniony]

Referencje

    1. Agmo A

    (1997) Męskie zachowanie seksualne szczura. Brain Res Brain Res Protoc 1: 203-209.

    1. Ahmed SH,
    2. Koob GF

    (1998) Przejście od umiarkowanego do nadmiernego spożycia leku: zmiana hedonicznej wartości zadanej. nauka 282: 298-300.

    1. Ahmed SH,
    2. Koob GF

    (1999) Długotrwałe zwiększenie wartości zadanej dla samopodawania kokainy po eskalacji u szczurów. Psychopharmacology 146: 303-312.

    1. Ahmed SH,
    2. Walker JR,
    3. Koob GF

    (2000) Trwały wzrost motywacji do zażywania heroiny u szczurów z historią eskalacji narkotyków. Neuropsychopharmacology 22: 413-421.

    1. Ahmed SH,
    2. Kenny PJ,
    3. Koob GF,
    4. Markou A

    (2002) Dowody neurobiologiczne na allostazę hedoniczną związaną z nasileniem używania kokainy. Nat Neurosci 5: 625-626.

    1. Ahmed SH,
    2. Lin D,
    3. Koob GF,
    4. Parsons LH

    (2003) Eskalacja samodzielnego podawania kokainy nie zależy od zmienionego poziomu kokainy wywołanego przez jądro w moczu. J. Neurochem 86: 102-113.

    1. Aston-Jones G,
    2. Harris GC

    (2004) Substraty mózgowe do zwiększonego poszukiwania narkotyków podczas przedłużającego się wycofywania. Neuropharmacology 47: 167-179.

    1. Balfour ME,
    2. Yu L,
    3. Coolen LM

    (2004) Zachowania seksualne i związane z płcią wskaźniki środowiskowe aktywują system mezolimbiczny u samców szczurów. Neuropsychopharmacology 29: 718-730.

    1. Balfour ME,
    2. Brown JL,
    3. Yu L,
    4. Coolen LM

    (2006) Potencjalny udział eferentii z przyśrodkowej kory przedczołowej do aktywacji neuronów po zachowaniach seksualnych u samca szczura. Neuroscience 137: 1259-1276.

    1. Beitner-Johnson D,
    2. Guitart X,
    3. Nestler EJ

    (1992) Białka nerwiamentowe i mezolimbiczny układ dopaminowy: powszechna regulacja przez przewlekłą morfinę i przewlekłą kokainę w szczurzej brzusznym obszarze nakrywkowym. J Neurosci 12: 2165-2176.

    1. Berridge KC,
    2. Robinson TE

    (1998) Jaka jest rola dopaminy w nagrodzie: wpływ hedoniczny, uczenie się nagrody lub motywacja? Brain Res Brain Res Rev 28: 309-369.

    1. Berridge KC,
    2. Robinson TE,
    3. Aldridge JW

    (2009) Rozróżnianie składników nagrody: "lubienie", "pragnienie" i uczenie się. Curr Opin Pharmacol 9: 65-73.

    1. Blum K,
    2. Werner T,
    3. Carnes S,
    4. Carnes P,
    5. Bowirrat A,
    6. Giordano J,
    7. Oscar-Berman M,
    8. Gold M

    (2012) Seks, narkotyki i rock and roll: hipoteza o powszechnej aktywacji mezolimbicznej w funkcji polimorfizmów genu nagrody. J Leki psychoaktywne 44: 38-55.

    1. Chu NN,
    2. Zuo YF,
    3. Meng L,
    4. Lee DY,
    5. Han JS,
    6. Cui CL

    (2007) Elektryczna stymulacja obwodowa odwróciła zmniejszenie wielkości komórek i zwiększyła poziom BDNF w brzusznym obszarze nakrywkowym u chronicznych szczurów leczonych morfiną. brain Res 1182: 90-98.

    1. Davis BA,
    2. Fitzgerald ME,
    3. Brown JL,
    4. Amstalden KA,
    5. Coolen LM

    (2007) Aktywacja neuronów POMC podczas ogólnego pobudzenia, ale nie zachowania seksualne u samców szczura. Behav Neurosci 121: 1012-1022.

    1. Fiorino DF,
    2. Coury A,
    3. Phillips AG

    (1997) Dynamiczne zmiany w jądrze półleżącym dopływie dopaminy podczas efektu Coolidge u samców szczura. J Neurosci 17: 4849-4855.

    1. Flagel SB,
    2. Clark JJ,
    3. Robinson TE,
    4. Mayo L,
    5. Czuj A,
    6. Willuhn I,
    7. Akers CA,
    8. Clinton SM,
    9. Phillips PE,
    10. Akil H

    (2011) Selektywna rola dla dopaminy w uczeniu się bodźca. Natura 469: 53-57.

    1. Frohmader KS,
    2. Dzbany KK,
    3. Balfour ME,
    4. Coolen LM

    (2010a) Mieszanie przyjemności: przegląd wpływu leków na zachowania seksualne u ludzi i modeli zwierzęcych. Horm Behav 58: 149-162.

    1. Frohmader KS,
    2. Wiskerke J,
    3. Mądry RA,
    4. Lehman MN,
    5. Coolen LM

    (2010b) Metamfetamina działa na subpopulacje neuronów regulujących zachowania seksualne u samców szczurów. Neuroscience 166: 771-784.

    1. Harris AC,
    2. Gewirtz JC

    (2004) Podniesiony przestój podczas wycofywania się z ostrej morfiny: model odstawienia opiatów i lęku. Psychopharmacology 171: 140-147.

    1. Harris GC,
    2. Aston-Jones G

    (2003) Zmieniona motywacja i uczenie się po odstawieniu opiatów: dowód na przedłużającą się deregulację przetwarzania nagrody. Neuropsychopharmacology 28: 865-871.

    1. Hayward MD,
    2. Pintar JE,
    3. Niski MJ

    (2002) Selektywny deficyt w zadawaniu u myszy bez beta-endorfiny i enkefaliny. J Neurosci 22: 8251-8258.

    1. Hoebel BG,
    2. Avena NM,
    3. Bocarsly ME,
    4. Rada P

    (2009) Naturalne uzależnienie: model behawioralny i obwodowy oparty na uzależnieniu od cukru u szczurów. J Addict Med 3: 33-41.

    1. Hyman SE,
    2. Malenka RC,
    3. Nestler EJ

    (2006) Neuronowe mechanizmy uzależnienia: rola uczenia i pamięci związanej z nagrodzeniem. Annu Rev Neurosci 29: 565-598.

    1. Ikemoto S,
    2. Kohl RR,
    3. McBride WJ

    (1997) Blokada receptora GABA (A) w przednim odcinku brzusznym zwiększa pozakomórkowy poziom dopaminy w jądrze półleżącym szczurów. J. Neurochem 69: 137-143.

    1. Jaworski J,
    2. Spangler S,
    3. Seeburg DP,
    4. Hoogenraad CC,
    5. Sheng M

    (2005) Kontrola dendrytycznego uwarstwienia przez cel szlaku rapamycyny fosfinoinositide-3'-kinaza-Akt. J Neurosci 25: 11300-11312.

    1. Johnson SW,
    2. Północny RA

    (1992) Opioidy pobudzają neurony dopaminowe poprzez hiperpolaryzację lokalnych interneuronów. J Neurosci 12: 483-488.

    1. Klitenick MA,
    2. DeWitte P,
    3. Kalivas PW

    (1992) Regulacja uwalniania dopaminy somatodendrytów w obszarze brzusznym nakrywki za pomocą opioidów i GABA: badanie mikrodializy in vivo. J Neurosci 12: 2623-2632.

    1. Koob GF,
    2. Le Moal M

    (2005) Plastyczność neurochirurgii nagrody i "ciemna strona" uzależnienia od narkotyków. Nat Neurosci 8: 1442-1444.

    1. Lennette DA

    (1978) Ulepszone medium montażowe do mikroskopii immunofluorescencyjnej. Am J Clin Pathol 69: 647-648.

    1. Lett BT,
    2. Grant VL,
    3. Koh MT

    (2001) Nalokson łagodzi preferencje preferowanego miejsca, wywołane bieganiem kół u szczurów. Physiol Behav 72: 355-358.

    1. Lett BT,
    2. Grant VL,
    3. Koh MT,
    4. Flynn G

    (2002) Wcześniejsze doświadczenia z prowadzeniem kół powodują tolerancję krzyżową na efekt nagradzania morfiny. Pharmacol Biochem Behav 72: 101-105.

    1. Matthews RT,
    2. Niemiecki DC

    (1984) Elektrofizjologiczne dowody na pobudzenie neuronów dopaminowych szczurzej brzusznej do nakłucia przez morfinę. Neuroscience 11: 617-625.

    1. Mazei-Robison MS,
    2. Koo JW,
    3. Friedman AK,
    4. Lansink CS,
    5. Robison AJ,
    6. Vinish M,
    7. Krishnan V,
    8. Kim S,
    9. Siuta MA,
    10. Galli A,
    11. Niswender KD,
    12. Appasani R,
    13. Horvath MC,
    14. Neve RL,
    15. Worley PF,
    16. Snyder SH,
    17. Hurd YL,
    18. Cheer JF,
    19. Han MH,
    20. Russo SJ,
    21. i in.

    (2011) Rola dla sygnalizacji mTOR i aktywności neuronalnej w wywołanych przez morfinę adaptacjach neuronów dopaminowych w okolicy nakrywkowej. Neuron 72: 977-990.

    1. Mazei-Robison MS,
    2. Nestler EJ

    (2012) Indukowana przez opiaty plastyczność molekularna i komórkowa brzusznego obszaru nakrywkowego i neuronów locus coeruleus katecholaminowych. Cold Spring Harb Perspect Med 2: a012070.

    1. Mehrara BJ,
    2. Baum MJ

    (1990) Nalokson zaburza ekspresję, ale nie jest pozyskiwaniem przez samce szczurów warunkowej reakcji preferencji miejsca dla kobiety o podwyższonej odporności. Psychopharmacology 101: 118-125.

    1. Meisel RL,
    2. Mullins AJ

    (2006) Doświadczenia seksualne u samic gryzoni: mechanizmy komórkowe i konsekwencje funkcjonalne. brain Res 1126: 56-65.

    1. Miller RL,
    2. Baum MJ

    (1987) Nalokson hamuje krycie i uwarunkowane preferencje miejsca u samców szczura u samców szczura wkrótce po kastracji. Pharmacol Biochem Behav 26: 781-789.

    1. Mitchell JB,
    2. Stewart J

    (1990) Ułatwienie zachowań seksualnych u samców szczurów związanych z iniekcjami opiatów wewnątrz VTA. Pharmacol Biochem Behav 35: 643-650.

    1. Murphy LO,
    2. Blenis J

    (2006) Specyficzność sygnału MAPK: właściwe miejsce we właściwym czasie. Trendy Biochem Sci 31: 268-275.

    1. Nestler EJ

    (2012) Mechanizmy transkrypcyjne uzależnienia od narkotyków. Clin Psychopharmacol Neurosci 10: 136-143.

    1. Paxinos G,
    2. Watson C

    (2013) Mózg szczura o współrzędnych stereotaktycznych (Academic, Boston), Ed 7.

    1. Dzbany KK,
    2. Balfour ME,
    3. Lehman MN,
    4. Richtand NM,
    5. Yu L,
    6. Coolen LM

    (2010a) Neuroplastyczność w układzie mezolimbicznym wywołana naturalną nagrodą i późniejszą abstynencją nagród. Biol Psychiatry 67: 872-879.

    1. Dzbany KK,
    2. Frohmader KS,
    3. Vialou V,
    4. Mouzon E,
    5. Nestler EJ,
    6. Lehman MN,
    7. Coolen LM

    (2010b) DeltaFosB w jądrze półleżącym ma kluczowe znaczenie dla wzmocnienia efektów seksualnego wynagrodzenia. Genes Brain Behav 9: 831-840.

    1. Dzbany KK,
    2. Schmid S,
    3. Di Sebastiano AR,
    4. Wang X,
    5. Laviolette SR,
    6. Lehman MN,
    7. Coolen LM

    (2012) Naturalne doświadczenie w nagradzaniu zmienia rozkład i funkcjonowanie receptorów AMPA i NMDA w jądrze półleżącym. PLoS ONE 7: e34700.

    1. Dzbany KK,
    2. Vialou V,
    3. Nestler EJ,
    4. Laviolette SR,
    5. Lehman MN,
    6. Coolen LM

    (2013) Nagrody naturalne i narkotykowe wpływają na powszechne mechanizmy plastyczności nerwowej, a DeltaFosB jest kluczowym mediatorem. J Neurosci 33: 3434-3442.

    1. Roux PP,
    2. Blenis J

    (2004) Kinazy białkowe aktywowane przez ERK i p38 MAPK: rodzina kinaz białkowych o różnych funkcjach biologicznych. Microbiol Mol Biol Rev 68: 320-344.

    1. Russo SJ,
    2. Bolanos CA,
    3. Theobald DE,
    4. DeCarolis NA,
    5. Renthal W,
    6. Kumar A,
    7. Winstanley CA,
    8. Renthal NE,
    9. Wiley MD,
    10. Self DW,
    11. Russell DS,
    12. Neve RL,
    13. Eisch AJ,
    14. Nestler EJ

    (2007) Szlak IRS2-Akt w śródmózgowiu neuronów dopaminowych reguluje behawioralne i komórkowe odpowiedzi na opiaty. Nat Neurosci 10: 93-99.

    1. Schultz W

    (2010) Wiele funkcji neuronów dopaminowych. F1000 Biol Rep 2: 2.

    1. Seroogy KB,
    2. Gall CM

    (1993) Ekspresja neurotrofin przez neurony dopaminergiczne śródmózgowia. Exp Neurol 124: 119-128.

    1. Shippenberg TS,
    2. Bals-Kubik R,
    3. Herz A

    (1987) Motywacyjne właściwości opioidów: dowód, że aktywacja receptorów delta pośredniczy w procesach wzmacniania. brain Res 436: 234-239.

    1. Sklair-Tavron L,
    2. Nestler EJ

    (1995) Przeciwdziałające działanie morfiny i neurotrofin, NT-3, NT-4 i BDNF, na neurony locus coeruleus in vitro. brain Res 702: 117-125.

    1. Sklair-Tavron L,
    2. Shi WX,
    3. Lane SB,
    4. Harris HW,
    5. Bunney BS,
    6. Nestler EJ

    (1996) Przewlekła morfina wywołuje widoczne zmiany w morfologii mezolimbicznych neuronów dopaminowych. Proc Natl Acad Sci USA 93: 11202-11207.

    1. Spiga S,
    2. Serra GP,
    3. Puddu MC,
    4. Foddai M,
    5. Diana M

    (2003) Nieprawidłowości indukowane wywołaniem morfiny w VTA: konfokalna laserowa mikroskopia skaningowa. Eur J Neurosci 17: 605-612.

    1. Swanson LW

    (2004) Mapy mózgu: struktura mózgu szczura (Academic, San Diego), Ed 3.

    1. Tenk CM,
    2. Wilson H,
    3. Zhang Q,
    4. Dzbany KK,
    5. Coolen LM

    (2009) Nagroda seksualna u samców szczurów: wpływ doświadczenia seksualnego na uwarunkowane preferencje miejsca związane z ejakulacją i intrygami. Horm Behav 55: 93-97.

    1. Tzschentke TM

    (2007) Pomiar nagrody za pomocą warunkowego paradygmatu preferencji miejsca (CPP): aktualizacja ostatniej dekady. Addict Biol 12: 227-462.

    1. van Furth WR,
    2. van Ree JM

    (1996) Motywacja seksualna: zaangażowanie endogennych opioidów w brzusznym obszarze nakrywkowym. brain Res 729: 20-28.

    1. van Furth WR,
    2. Wolterink G,
    3. van Ree JM

    (1995) Regulacja męskich zachowań seksualnych: zaangażowanie opioidów mózgu i dopaminy. Brain Res Brain Res Rev 21: 162-184.

    1. Walker JR,
    2. Chen SA,
    3. Moffitt H,
    4. Inturrisi CE,
    5. Koob GF

    (2003) Przewlekła ekspozycja na opioidy zwiększa samopoczucie heroiny u szczurów. Pharmacol Biochem Behav 75: 349-354.

    1. Młody KA,
    2. Gobrogge KL,
    3. Liu Y,
    4. Wang Z

    (2011) Neurobiologia wiązania par: wgląd od społecznie monogamicznego gryzonia. Przód Neuroendocrinol 32: 53-69.

  •