Wykrywanie zmian molekularnych w neuronach wyrażających Fos aktywowanych metamfetaminą z pojedynczego prążkowia grzbietowego szczura przy użyciu sortowania komórek aktywowanych fluorescencyjnie (FACS) (2013)

Metamfetamina i inne leki aktywują niewielką część wszystkich neuronów w mózgu. Wcześniej opracowaliśmy metodę opartą na fluorescencyjnym sortowaniu komórek (FACS) w celu scharakteryzowania zmian molekularnych indukowanych selektywnie w aktywowanych neuronach, które wyrażają marker aktywności neuronowej Fos. Jednak ta metoda wymaga łączenia próbek od wielu szczurów. Obecnie opisujemy zmodyfikowaną metodę opartą na FACS, aby scharakteryzować zmiany molekularne w ekspresjonujących Fos grzbietowych neuronach prążkowia od pojedynczego szczura, stosując strategię multipleksowania przed amplifikacją.

Immunohistochemia Fos i NeuN (marker neuronowy) wskazuje, że 5-6% neuronów prążkowia grzbietowego aktywowano 90 min po ostrych wstrzyknięciach metamfetaminy (5 mg / kg, ip), podczas gdy mniej niż 0.5% neuronów zostało aktywowanych przez zastrzyki z soli fizjologicznej.

Użyliśmy FACS do oddzielenia neuronów znakowanych NeuN na neurony Fos-dodatnie i Fos-ujemne i oceniliśmy ekspresję mRNA przy użyciu RT-qPCR z zaledwie pięciu neuronów Fos-dodatnich. Metamfetamina indukowała 3-20-krotny wzrost wczesnych wczesnych genów łuku, homeru-2, c-fos, fosB i jego izoform (OsfosB i nowa izoforma ffosB-2) w neuronach Fos-dodatnich, ale nie w Fos-ujemnych. Natychmiastowa wczesna indukcja mRNA genu była 10-krotnie niższa lub nieobecna przy ocenie w niesortowanych próbkach z pojedynczych homogenatów grzbietowego prążkowia. Nasza zmodyfikowana metoda umożliwia badanie unikalnych zmian molekularnych w neuronach aktywowanych przez leki lub sygnały związane z lekiem w złożonych modelach uzależnień.

Metamfetamina i inne leki aktywują niewielką część wszystkich neuronów w mózgu. Opisujemy tutaj ulepszoną metodę charakteryzowania zmian molekularnych indukowanych selektywnie w aktywowanych neuronach, które wyrażają marker aktywności neuronowej Fos. Zastosowaliśmy FACS wraz z ukierunkowaną wstępną amplifikacją PCR w celu oceny ostrej ekspresji genów indukowanej przez metamfetaminę z tak niewielu neuronów eksprymujących 5 Fos z pojedynczego prążkowia grzbietowego szczura. Metamfetamina indukowała 3-20-krotny wzrost wczesnych wczesnych genów (IEG) w neuronach Fos-dodatnich, ale nie Fos-ujemnych. Ukierunkowana amplifikacja PCR umożliwia badanie unikalnych zmian molekularnych w neuronach aktywowanych przez leki lub sygnały związane z lekiem w złożonych modelach uzależnień.

Opublikowano 2013. Ten artykuł jest dziełem rządu USA i jest własnością publiczną w USA.