Opublikowano online Sep 18, 2008. doi: 10.1016 / j.biopsych.2008.07.030
PEŁNE STUDIUM: Zmniejszona szara warstwa przyśrodkowego korpitu oczodołowo-czołowego u abstynentnych osób uzależnionych od substancji
Jody Tanabe,1,2 Jason R. Tregellas,2 Laetitia Thompson,2 Manish Dalwani,2 Elizabeth Owens,1 Thomas Crowley,2 i Marie Banich2,3
Ostateczna, zredagowana wersja tego artykułu jest dostępna pod adresem Biol Psychiatry
Zobacz inne artykuły w PMC, że cytować opublikowany artykuł.
Abstrakcyjny
Tło
Chroniczna ekspozycja na leki uzależniające indukuje adaptacje komórkowe w korze oczodołowo-czołowej (OFC) i związanych z nią ścieżkach limbiczno-przedczołowych, które mogą leżeć u podstaw zachowań związanych z nadużywaniem. Skłonność do podejmowania ryzykownych decyzji pomimo znacznych negatywnych konsekwencji może być mediowana przez medialną dysfunkcję OFC u osób uzależnionych od substancji (SDI). Przetestowaliśmy hipotezę, że objętość środkowej istoty szarej OFC (GM) będzie niższa w SDI w porównaniu z kontrolami.
Metody
Udział wzięło 20 kontroli SDI i 2 kontroli. SDI były uzależnione od 4.7 lub więcej substancji, najczęściej kokainy, amfetaminy i alkoholu, przy średnim czasie trwania abstynencji odpowiednio 2.4, 3.2 i 1 roku. Obrazy ważone T3 o wysokiej rozdzielczości uzyskano za pomocą systemu 5T MR. Przetwarzanie i analizy obrazu przeprowadzono za pomocą morfometrii opartej na wokselach (VBM) zaimplementowanej w SPM05. Różnice w regionalnej ilości GM zostały przetestowane przy użyciu analizy modelu kowariancji, zmieniających się jednocześnie dla globalnego GM i wieku. Mapy statystyczne ustalono na p <XNUMX, skorygowane o wielokrotne porównania. Wielkość medialnego OFC GM była skorelowana z wynikami behawioralnymi w zmodyfikowanym zadaniu hazardowym.
Efekt
W obustronnym przyśrodkowym OFC w SDI była niższa objętość GM w porównaniu z grupą kontrolną. Wystąpiła niewielka, ale znacząca korelacja między medialnym GM OFC a utrzymywaniem gry w talie wysokiego ryzyka na zmodyfikowanym zadaniu hazardowym.
wnioski
Jest to pierwszy artykuł wykorzystujący VBM z korekcją całego mózgu do wielokrotnych porównań w SDI po długiej abstynencji. Zredukowane medialne GMO OFC może odzwierciedlać długoterminowe adaptacje w ramach systemu uczenia się nagradzającego, leżące u podstaw patologicznego podejmowania decyzji w zależności od substancji.
Wprowadzenie
Uzależnienie od substancji charakteryzuje się anormalnym zachowaniem ukierunkowanym na cel i zostało pomyślane jako patologiczne uzurpowanie obwodów korowo-prążkowia-limbicznych pośredniczących w zachowaniu nagradzającym (1,2,3,4). Uważa się, że długoterminowe zmiany komórkowe w korze przedczołowej związane z powtarzaną ekspozycją na lek pośredniczą w dysfunkcjonalnym ukierunkowanym zachowaniu i zaburzają decyzje, które prowadzą do uzależnienia od stadium końcowego.
Badania neuroobrazowe świadczą o funkcjonalności (5,6,7,8) i nieprawidłowości strukturalne w korze oczodołowo-czołowej (OFC) w uzależnieniu od substancji. Liu i in. w przypadku osób nadużywających wielu substancji stwierdzono mniejsze przedczołowe, ale nie kory skroniowe w porównaniu z grupą kontrolną (9). Badania z wykorzystaniem morfometrii opartej na wokselach (VBM) wykazały zmniejszenie przyśrodkowego OFC, przedniego zakrętu obręczy i szarej części wyspowej u osób uzależnionych od kokainy (10) i przedczołowa i skroniowa istota szara u osób uzależnionych od opiatów (11). W badaniu nad uzależnieniem od metamfetaminy i zakażeniem HIV metamfetamina była związana ze wzrostem objętości soczewkowatej istoty szarej, ale skomplikowana przez przeciwstawne działanie zakażenia HIV na objętość mózgu. Ograniczeniem tych badań jest okres używania nielegalnych narkotyków w porównaniu do czasu skanowania MR. Jest to ważne, ponieważ a) niektóre działania leku na substrat nerwowy mogą być odwracalne, jak wykazano w przypadku alkoholu (12,13,14) ib) substraty neuronalne zaangażowane w ostre efekty leku prawdopodobnie różnią się od tych leżących u podstaw uzależnienia od stadium końcowego (2). W związku z tym obecne badanie miało na celu określenie wzorca utraty istoty szarej u osób uzależnionych od substancji (SDI) po długotrwałej abstynencji.
Dane wykorzystane w tym badaniu zebrano w ramach badania, w którym opisaliśmy zmniejszoną aktywność mózgu przedczołowego w SDI w porównaniu z kontrolami podczas podejmowania decyzji (15). Zadanie polegało na zmodyfikowaniu zadania Iowa Gambling Task (IGT), które symuluje niepewność i nagrodę za podejmowanie decyzji w prawdziwym życiu, początkowo opracowanych w celu przetestowania zaburzonego podejmowania decyzji u pacjentów z brzusznymi przyśrodkowymi zmianami kory przedczołowej (16). Rozszerzamy te wyniki, określając, czy objętość środkowej istoty szarej OFC jest niższa w abstynentnym SDI w porównaniu z kontrolami
Metody
Tematy
W badaniu wzięło udział trzydziestu dziewięciu osób, w tym 20 control (14 women / 6men, 33 SD 11 yrs) i 19 uzależnione od substancji (SDI) (9 women / 10 men, 35 SD 7 lat). SDI zostało zatrudnionych w Uniwersyteckiej Szkole Badań nad Uzależnieniami od Medycyny i Leczenia (ARTS), długoterminowej służbie leczenia. Kryteria włączenia obejmowały uzależnienie od jednej lub większej liczby nielegalnych substancji przy użyciu kryteriów DSM-IV. Kryteriami włączenia do kontroli nie była diagnoza nadużywania lub uzależnienia. Kryteria wykluczenia dla wszystkich uczestników obejmowały chorobę neurologiczną, schizofrenię lub zaburzenie dwubiegunowe, wcześniejszy znaczący uraz głowy, dodatni status HIV, cukrzycę, wirusowe zapalenie wątroby typu C lub inne poważne choroby i IQ mniej niż 80. Wszyscy uczestnicy wyrazili pisemną świadomą zgodę zatwierdzoną przez Colorado Multiple Institutional Review Board.
Środki behawioralne
W SDI uzależnienie od leku mierzono za pomocą skomputeryzowanego modułu międzynarodowego wywiadu diagnostycznego (CIDI) - modułu nadużywania substancji (SAM) (CIDI-SAM) (17). CIDI-SAM to ustrukturyzowany wywiad przeznaczony dla wyszkolonych ankieterów świeckich. Wykazano, że ma on dobry test-retest i niezawodność internautów (18). Dla każdego leku rejestrowano liczbę objawów i datę ostatniego użycia. CIDI-SAM nie został przekazany do kontroli. Dane dotyczące wydajności zmodyfikowanego zadania hazardowego były dostępne dla 34 (kontrolki 15, 19 SDI) podmiotów 39. Wykorzystaliśmy modyfikację Iowa Gambling Task (IGT) dostosowaną do eksperymentu fMRI (16). Szczegóły zadania zostały wcześniej opisane (15). Były próby 80, dla których temat wybrał „Play or Pass” i podzielono je na bloki czasowe 2, wczesne i późne. Liczba przypadków, w których dana osoba zdecydowała się zagrać „złe” pokłady na początku w porównaniu z późnymi próbami, została zsumowana. Analizę wariancji powtarzanych pomiarów (rmANOVA) przy użyciu IQ, edukacji i wieku jako współzmiennych przeprowadzono w analizie SPSS pod kątem wpływu interakcji grup po czasie.
Iloraz inteligencji mierzono na podstawie dwuetapowej skróconej skali inteligencji Wechslera, w której podawano podtesty słownictwa i rozumowania macierzy.
MR Imaging
Obrazy uzyskano za pomocą skanera MR całego ciała 3.0T (General Electric, Milwaukee, WI) przy użyciu standardowej cewki głowicy kwadraturowej. Sekwencja SPGR-IR ważona 3D T1 o wysokiej rozdzielczości wykorzystywała następujące parametry: TR = 45, TE = 20, FA = 45, 2562 macierz, 240 mm2 FOV (.9 × .9 mm2 w płaszczyźnie), grubość przekroju 1.7 mm, płaszczyzna czołowa. Czas skanowania to 9 ′ 24 ″. Neuroradiolog (JT) ocenił obrazy anatomiczne pod kątem artefaktów ruchu i obrazów EPI T2 * pod kątem poważnych nieprawidłowości strukturalnych, w szczególności encefalomalacji. Żadne badania nie zostały wykluczone.
Przetwarzanie obrazu i statystyki
Przetwarzanie obrazu przeprowadzono za pomocą przybornika morfometrycznego opartego na Voxelu (VBM5.1) (http://dbm.neuro.uni-jena.de/vbm/) zaimplementowane w SPM5 działającym na Matlab 7.5. VBM w SPM5 łączy segmentację tkanek, korektę odchylenia i normalizację przestrzenną w jednolity model (19). Ukryte losowe pola Markowa zastosowano w celu poprawienia dokładności segmentacji tkanek (średni HMRF 0.3). W przeciwnym razie użyto parametrów domyślnych. Poszczególne mózgi znormalizowano do map prawdopodobieństwa tkanek dostarczonych przez International Consortium for Brain Mapping (ICBM). Jądro Gaussa 12 mm FWHM spowodowało końcowe wygładzenie 14 × 15 × 14 mm3. Na drugim poziomie dane całego mózgu modelowano w grupach, stosując analizę kowariancji (ANCOVA) z całkowitą objętością GM i wiekiem jako współzmiennymi. Skutki całkowitej ilości GMO zostały usunięte, aby umożliwić wnioskowanie o regionalnych różnicach w ilości GM. Zastosowano bezwzględną maskę progową 1. Mapy statystyczne ustalono przy progu poziomu klastra p <05, skorygowanym o wielokrotne porównania przy użyciu błędu rodzinnego (FWE) i progu poziomu woksela p <005. Aby zapewnić poprawność statystyk na poziomie klastra, zastosowano nieizotropową korektę gładkości (20).
Obszar zainteresowania medialnego OFC (ROI)
Aby potwierdzić analizy całego mózgu, zaimplementowano analizę ROI prawej i lewej środkowej OFC przy użyciu biblioteki ROI automatycznego etykietowania anatomicznego (AAL) w przyborniku Marsbar SPM (21,22).
Korelacja między wielkością GM a zachowaniem decyzyjnym
Objętość GM uzyskano z woksela odpowiadającego globalnym maksimom modelu różnic grupowych, które zlokalizowano w środkowym OFC (-5, 53, -5, MNI) (Rysunek 1). Częściową korelację między ilością GM a danymi behawioralnymi skorygowanymi o iloraz inteligencji, wykształcenie i całkowite GM uznano za istotną przy p <05, jednostronne. Zastosowano test jednostronny, ponieważ hipoteza była taka, że wyższy GM korelowałby z większym unikaniem „złych” kart.
Korelacja między objętością GM a liczbą objawów CIDI
Dla każdego leku CIDI-SAM wygenerował liczbę symptomów (suma 11, zależność 7 i objawy nadużywania 4). Przeprowadzono częściową korelację między liczbą objawów a środkową objętością OFCGM, skorygowaną o całkowity GM, IQ i wiek.
Wpływ płci na wielkość GM i zachowanie związane z podejmowaniem decyzji
Przeprowadzono analizę ANOVA 2 × 2 (płeć, grupa) ze zmiennymi wieku i całkowitą korektą GM i wielokrotną porównawczą, oceniając główny wpływ płci i płci poprzez interakcje grupowe na objętość GM i zachowania związane z podejmowaniem decyzji.
Efekt
Między grupami nie było różnicy wieku ani płci. Między grupami występowały różnice w wykształceniu i IQ. IQ i edukacja były skorelowane (p = .03). Tabela 1 pokazuje liczbę spełniających kryteria SDI zależności lub nadużyć. Występowało znaczne zróżnicowanie czasu trwania abstynencji w różnych lekach i wewnątrz nich. Średnia abstynencja od kokainy, alkoholu i amfetaminy wynosiła odpowiednio 4.7, 3.2 i 2.4.
Analiza całego mózgu
Sterowanie> SDI
Rysunek 1 to kolorowa nakładka i szklany mózg z analizy całego mózgu przy użyciu ANCOVA, dostosowującej się do znanych pomyłek związanych z wiekiem i globalnym GMO. W grupie kontrolnej było znacznie więcej GM, szczególnie w obustronnej środkowej części OFC w porównaniu z SDI. Najbardziej istotną różnicą była prawostronna OFC ([-5, 53, -3], p <004, skorygowana). Dodanie IQ jako współzmiennej nie zmieniło wyników. Ponieważ iloraz inteligencji i wykształcenie były istotnie skorelowane, nie powtórzyliśmy analizy dla obu zmiennych towarzyszących.
SDI> Sterowanie
W SDI nie było znaczących regionów o zwiększonym GM w porównaniu z kontrolami wykorzystującymi tę samą korekcję na poziomie całego klastra dla wielokrotnych porównań.
Analiza ROI
Przyśrodkowe lewe i prawe regiony oczodołowo-czołowe potwierdziły wyniki z analiz całego mózgu (kontrola> SDI, Frontal_Med_Orb_Left, t = 3.59, p = 001, Frontal_Med_Orb_Right, t = 2.9, p = 006).
Behawioralny
Nie było głównego efektu czasu lub grupy na wybór złych pokładów. Kontrole miały tendencję do unikania złych pokładów w większym stopniu niż SDI z czasem, ale ta interakcja nie była znacząca (Rysunek 2) (F = .88, p = .3).
Korelacja między wydajnością podejmowania decyzji a środkową objętością szarej masy OFC
Niewielka, znacząca ujemna korelacja między środkową objętością GM OFC a unikaniem złych pokładów zaobserwowano w grupach (r = -. 39, p = .01,1-tail). Po dostosowaniu pod względem wieku, wykształcenia i IQ korelacja pozostała istotna (r = -. 35, p = .03, 1-tail). Korelacja była wyższa w grupie kontrolnej (r = -. 37) niż SDI (r = -. 22), ale ze względu na małe liczby nie była istotna w grupie (Rysunek 3).
Korelacja między objętością GM a liczbą objawów CIDI
Wśród SDI nie było korelacji między medialną objętością GMO OFC a liczbą objawów nadużywania i uzależnienia (suma 11, zależność 7 i objawy nadużywania 4).
Wpływ płci na wielkość GM i zachowanie związane z podejmowaniem decyzji
Nie było znaczących głównych efektów płci lub płci poprzez interakcje grupowe w objętości GM w OFC. Nie było różnicy w płci w wydajności.
Dyskusja
Odkrycie zredukowanej przyśrodkowej kory czołowej (OFC) istoty szarej (GM) u osobnika zależnego od substancji (SDI) w porównaniu do kontroli jest zgodne z wcześniejszymi badaniami. Franklin i in. byli pierwszymi, którzy zgłosili niższe GM u osób uzależnionych od kokainy w porównaniu z kontrolami stosującymi metody morfometrii opartej na wokselu (VBM) (10). Zaobserwowali niższą gęstość GM w brzusznej środkowej OFC, przedniej obręczy i przedniej wyspie. Lyoo i in. stwierdzili niższy GM w obustronnym przyśrodkowym OFC u osób zależnych od opiatów w porównaniu z grupą kontrolną (11). Mniej GM znaleziono również w płatach czołowych górnych i środkowych oraz przednich płatach skroniowych. W obu tych badaniach pacjenci stosowali leki blisko lub w czasie skanowania MR. We Franklin i wsp. Średnią liczbą dni, kiedy kokaina była ostatnio stosowana przed obrazowaniem, była 15. W drugim artykule osoby uzależnione od opiatów były leczone metadonem. Zatem potencjalnie istotną różnicą w obecnym badaniu jest stosunkowo długotrwała abstynencja. W tej grupie abstynencji SDI uśredniono 2.4 lat dla amfetaminy i dłużej dla innych leków. Odwracalne działanie leków na strukturę mózgu zostało dobrze udokumentowane dla alkoholu. Odzyskiwanie objętości mózgu, oceniane za pomocą metod MRI u alkoholików, można zmierzyć w ciągu kilku tygodni i może trwać miesiące po trzeźwości (13,23,12). Wydaje się, że takie wyzdrowienie jest utrudnione przez nawrót choroby (13,14,23). Podczas gdy podobne badania odwracalnej utraty tkanki nie zostały przeprowadzone w odniesieniu do nielegalnych narkotyków, badania neuroobrazowania PET u osób nadużywających metamfetaminy wykazują zmniejszenie dostępności transportera dopaminy, które odwraca się wraz z przedłużającą się abstynencją (24). Te czasowe zmiany związane z ustaniem i nawrotem podkreślają znaczenie studiowania długoterminowych i krótkoterminowych zmian. Tak więc przedłużająca się abstynencja w naszej populacji może wyjaśniać względnie specyficzne zmiany w środkowym OFC i sugeruje możliwość, że różnice w środkowej OFC odzwierciedlają bardziej trwałe, trwałe zmiany w mózgu.
Kora oczodołowo-czołowa pojawiła się jako potencjalny substrat nerwowy dla upośledzonej zdolności do oceny oczekiwanych wyników prowadzących do złego podejmowania decyzji przez SDI (8,2,4) Poprzez swoje połączenia z układem limbicznym OFC integruje informacje asocjacyjne, aby uzyskać reprezentację oczekiwanych wyników. Przewlekłe zażywanie narkotyków prowadzi do adaptacji morfologii neuronów i sygnalizacji komórkowej, które, jak się uważa, zakłócają procesy poznawcze, takie jak podejmowanie decyzji (8). Szczury leczone kokainą wykazują deficyty w funkcjach zależnych od OFC, takich jak odwracanie uczenia się (4). U osób przewlekle zażywających kokainę nieprawidłowości metaboliczne są stosunkowo specyficzne dla płatów czołowych (7). Jak wspomniano powyżej, niektóre zmiany są przejściowe, ale inne mogą utrzymywać się długo po ekspozycji na lek (2,25,26)
Nasze odkrycia są zgodne z badaniami behawioralnymi pokazującymi deficyty decyzyjne w Iowa Gambling Task (IGT) u pacjentów z brzusznymi środkowymi zmianami OFC (16). Podobnie jak u pacjentów z brzusznymi przyśrodkowymi zmianami czołowymi, SDI są upośledzone na IGT (27,28,29,30), chociaż upośledzenia są mniej dotkliwe (30,28,31). Jest to zgodne z naszymi danymi sugerującymi, że kontrole unikają „złych” pokładów w czasie bardziej niż SDI, ale różnice nie były znaczące. Negatywna korelacja między medialną objętością OFC GM a decyzją o unikaniu złych kart jest zgodna z rolą OFC w ocenie oczekiwanych wyników. Korelacja zdawała się być napędzana głównie przez kontrole, a nie SDI. Następnie przeanalizowaliśmy, czy OFC GM koreluje z abstynencją, ponieważ taki związek może sugerować, że chroniczna ekspozycja na lek wpływała na odkrycie GM przez OFC. Nie było jednak związku między abstynencją a morfologią. Z drugiej strony, brak związku nie oznacza deficytu przed zachorowaniem, ponieważ wiele innych czynników, w tym nasilenie uzależnienia od narkotyków, liczba lub rodzaj substancji oraz czynniki środowiskowe mogą przyczynić się do wyników. Możliwości stanu przed-chorobowego, efektu post-narkotykowego lub kombinacji pozostają równie prawdopodobne.
Nie znaleźliśmy regionów o znacznie zwiększonym GM w SDI w porównaniu z kontrolami. W jednym badaniu z wykorzystaniem metod ROI stwierdzono wzrost GM w prążkowiu, półleżącym i korze ciemieniowej (32). Inni zgłaszali wzrost objętości prążkowia u osób nadużywających kokainy (33) oraz w wzgórzu i zakręcie przed centralnym u użytkowników marihuany (34) w porównaniu do kontroli.
Główną różnicą metodologiczną między naszym badaniem a poprzednimi z wykorzystaniem VBM jest wykorzystanie zunifikowanego modelu, który integruje segmentację, korektę uprzedzeń i rejestrację (19). Inną różnicą techniczną jest to, że obrazy MR uzyskano w 3T w tym badaniu w porównaniu z poprzednimi badaniami w 1.5T (10,11,35,14). Chociaż nie oczekuje się, aby miało to znaczący wpływ na wyniki, warto zauważyć, że badania, które mają skwantyfikowany stosunek kontrastu szumu do substancji białej w stosunku do szumu (CNR), wykazały wyższy CNR w 3T w porównaniu z 1.5 T, gdy parametry są zoptymalizowane (36,37). Oczekiwano, że wyższa CNR istoty białej i istoty białej doprowadzi do lepszej segmentacji tkanek i dokładniejszych wyników VBM dla danej rozdzielczości przestrzennej i stosunku sygnału do szumu.
Istnieje kilka ograniczeń tego badania. Po pierwsze, wielkość próby była skromna (n = 39), chociaż w zakresie podobnych badań. Po drugie, badani byli uzależnieni od wielu substancji, co wykluczało wnioskowanie o specyficznym dla leku wpływie na strukturę mózgu. Po trzecie, abstynencja opierała się na samoopisie. SDI zostało aresztowanych przez sąd karny do leczenia w celach mieszkalnych, zarówno w związku z przekierowaniem (zamiast więzienia) lub po odbyciu kary pozbawienia wolności, a przed zwolnieniem do okresu próbnego. Wymagana była minimalna zgodność leczenia z 2 miesięcy, zanim mogli oni wziąć udział w tym badaniu. Tak więc czas w dywersji lub więzieniu plus miesiące 2 w ARTS spowodowały stosunkowo długą abstynencję. SDI były ściśle nadzorowane i poddawane częstym, obserwowanym testom na obecność moczu. Chociaż raport własny może być niewiarygodny, jest bardzo mało prawdopodobne, że wystąpiły ostre skutki leku. Po czwarte, odkrycia różnic między grupami i związku między zachowaniem a morfologią są niejednoznaczne co do przyczynowości lub predyspozycji. Wreszcie, chociaż diagnoza choroby afektywnej dwubiegunowej była wykluczająca, nie zbadaliśmy specjalnie poważnej depresji, która okazała się być związana ze zmniejszoną objętością OFC (38).
Podsumowując, stwierdziliśmy znaczne zmniejszenie objętości GMO ograniczone do obustronnego przyśrodkowego OFC u osób abstynentnych zależnych od substancji w porównaniu z grupą kontrolną. Jest to pierwszy artykuł opisujący mniejszą objętość GM w tej populacji specyficzny do medialnego OFC przy użyciu korekcji całego mózgu do wielokrotnych porównań. Ponieważ abstynencja była przedłużona, zmniejszone przyśrodkowe GM OFC może odzwierciedlać długoterminowe adaptacje w ramach systemu uczenia się nagrody, leżące u podstaw patologicznego zachowania decyzyjnego w zależności od substancji.
Podziękowanie
Publikacja ta została wsparta przez Grant Number K08DA1505 z NIH / NIDA i Institute for Research on Patological Gambling and Related Disorders, Harvard Medical School Division of Addictions (JT) i DA 009842 (MD, TC). Za jego treść odpowiadają wyłącznie autorzy i niekoniecznie odzwierciedlają oficjalne poglądy NIH. Dziękujemy Kenowi Gaipie i Julie Miller z Działu Leczenia Uzależnień i Badań za wsparcie.
Przypisy
Ujawnianie informacji finansowych: Autorzy nie zgłosili żadnych finansowych interesów biomedycznych ani potencjalnych konfliktów interesów.
Zastrzeżenie wydawcy: Jest to plik PDF z nieedytowanym manuskryptem, który został zaakceptowany do publikacji. Jako usługa dla naszych klientów dostarczamy tę wczesną wersję manuskryptu. Rękopis zostanie poddany kopiowaniu, składowi i przeglądowi wynikowego dowodu, zanim zostanie opublikowany w ostatecznej formie cytowania. Należy pamiętać, że podczas procesu produkcyjnego mogą zostać wykryte błędy, które mogą wpłynąć na treść, a wszystkie zastrzeżenia prawne, które odnoszą się do czasopisma, dotyczą.
List referencyjny
;
